그렐린 수용체 (GHS-R1A) 길항제는 모르핀의 보람있는 성질을 약화시키고 쥐 (2015)의 보상 영역에서 아편 양 제 펩티드 수준을 증가시킨다

중독성 약물의 급성 및 만성 노출은 뇌 보상 시스템 (Nestler, 2005)의 중요한 핵심 회로 인 중배엽 도파민 시스템에 크게 영향을 미칩니다. 이러한 효과는 적어도 부분적으로 약물 중독 (Wise, 2004)의 발달에 기초한 것으로 제안되었다. 약물 중독은 개인뿐만 아니라 사회에 광범위한 유해한 영향을 미치며,이 중요한 공중 보건 문제를 치료하는 새로운 약리학 적 개입이 필요하다 (Koob and Le Moal, 2001). 중독성 약물이 메 소림 빅 도파민 시스템을 활성화시키는 능력을 매개하는 신호 전달 시스템을 명확하게함으로써 물질 사용 장애에 대한 고유 한 치료 전략을 식별 할 수 있습니다.

연구에 따르면 일반적인 신경 생물학적 기전은 음식 및 중독성 약물 (Morganstern et al., 2011)에 의해 유발되는 섭취 및 보상을 조절하여 그렐린과 같은 식품 조절 장-뇌 펩티드의 역할에 보상 중재가 포함되어 있음을 보여줍니다. 초기에 그렐린이 성장 호르몬의 방출을 유발하고 (Kojima et al., 1999) 쥐에서 지방을 유도하는 것으로 나타났다 (Tschop et al., 2000). 현재까지 그렐린이 음식 섭취를 증가시키고, 굶주림뿐만 아니라 식욕을 자극하는 것으로 잘 알려져 있습니다. 를 통해 시상 하부 회로 (검토를 위해 Egecioglu et al. (2011) 참조). 시상 하부 외에도 그렐린 수용체 (GHS-R1A)는 편도체, 선조체, 전두엽 피질, 복부 피질 영역 (VTA) 및 해마 (검토를 위해 Engel and Jerlhag (2014) 참조)와 같은 보상 관련 영역에서 표현됩니다. 그렐린의 생리적 역할은 에너지 호모 스테 시스 조절을 넘어 확장됩니다. 실제로, 오 렉시 제닉 펩티드 그렐린은 중변 연계 도파민 시스템의 활성화 제일뿐만 아니라 보상, 동기 부여 및 마우스의 알코올, 니코틴, 암페타민 및 코카인 섭취의 조절자인 것으로 나타났습니다 (검토를 위해 Engel and Jerlhag (2014) 참조).

다른 중독성 약물과 마찬가지로, 오피오이드는 중성 도파민 시스템을 활성화시켜 축적 도파민 방출을 유발합니다 를 통해 핵 축적 (NAc) (Hirose 등, 2005, Murakawa 등, 2004, Yoshida 등, 1999) 및 VTA에서 μGA 및 / 또는 δ- 오피오이드 수용체의 활성화, 아마도 GABA를 감소시킴으로써 VTA에서 -도파민 뉴런의 억제 (Johnson and North, 1992). 또한, 축적 κ- 오피오이드 수용체는 메 소림 빅 도파민 시스템의 활성을 조절한다 (Chefer 등, 2005, Spanagel 등, 1992). 오피오이드에 반복 노출되면 보상 영역에서 오피오이드 펩티드를 포함한 여러 신경 전달 물질의 적응 적 변화가 발생하여 중독의 발달에 기여합니다 (De Vries and Shippenberg, 2002). 랫트에서 GHS-R1A의 약리학 적 억제는 모르핀-유도 된 축적 도파민 방출 및 고정 관념을 약화시킨다 (Sustkova-Fiserova et al., 2014). 본 일련의 실험의 첫 부분의 목적은 GHS-R1A 길항제 인 JMV2959가 모르 포르가 운동 자극, 누산 도파민 방출 및 마우스의 조건부 선호를 유발하는 능력에 미치는 급성 영향을 조사하는 것이었다. 이 연구의 두 번째 부분의 목적은 반복되는 JMV2959 또는 그렐린 처리가 오피오이드 펩티드 수준 (Met-enkephalin-Arg)에 미치는 영향을 평가하는 것이 었습니다.⁶페⁷ (MEAP), dynorphin B (DynB) 및 Leu-enkephalin-Arg⁶ (LeuArg)) 편도, 선조, 전전두엽 피질, VTA 및 해마를 포함한 보상 관련 영역에서.

사춘기 후 성냥 연령의 수컷 NMRI 마우스 (8-12 주령 및 25-40 g 체중; 찰스 리버, 독일 술츠 펠트)를 사용 하였다. 간단히 말해서, 모든 마우스를 그룹에 수용하고 12 / 12 h 명 / 암주기 (7시에 점등)로 유지시켰다. 수돗물과 음식 (일반 노하우; 영국 노퍽의 할란 테클 라드) 광고 libitum, 실험 설정을 제외하고. 각각의 단일 거동 시험 및 오피오이드 펩티드 분석에 새로운 마우스를 사용 하였다. 실험은 예테보리에있는 스웨덴 동물 연구 윤리위원회의 승인을 받았다. 동물의 고통을 최소화하고 사용되는 동물의 수를 줄이기 위해 모든 노력을 기울였습니다. 모든 동물은 실험 시작 1 주일 전에 적응시켰다.

모르핀 하이드로 클로라이드 (Apoteksbolaget Sahlgrenska Hospital; Gothenburg, Sweden)를 비히클 (0.9 % 염화나트륨 용액)에 용해시키고 실험을 시작하기 전에 20 mg / kg 10 분의 용량으로 ip를 투여 하였다. 이 용량은 저용량 (10 mg / kg, ip)이 마우스에서 운동 자극을 유발하지 않았기 때문에 선택되었습니다 (데이터는 표시되지 않음). GHS-R6A 길항제 인 JMV2959의 선택된 용량 (5247 mg / kg, ip) (Institut des Biomolécules Max Mousseron (IBMM), UMR1, CNRS, Montpellier 2 및 1 Universities, France)에서 합성 된 GHS-R2009A 길항제 마우스에서 운동 활성, 축적 도파민 방출 및 조절 된 장소 선호도에 영향을 미치지 않는다 (Jerlhag et al., 2959). JMV0.9를 비히클 (2959 % 염화나트륨 용액)에 용해시키고, 오피오이드 펩티드 수준의 분석을 위해 모르핀 노출 또는 탈포 전에 20 분 전에 항상 투여 하였다. 선택된 용량의 JMV2959는 어떠한 실험에서도 마우스의 총 거동에 영향을 미치지 않았다. 행동 테스트를 위해, JMV2959의 단일 주사가 약물 유발 보상을 약화시키는 것으로 밝혀 졌기 때문에 JMV2014가 급성으로 투여되었습니다 (검토를 위해 Engel and Jerlhag (2959) 참조). 강력한 효과를 검출 할 가능성을 증가시키기 위해, 오피오이드 펩티드 분석을 위해 JMV0.9를 5 일 동안 연속적으로 아 속성으로 투여 하였다. 또한 반복 주사를하면 펩티드에 대한 급성 주사 스트레스의 혼란스러운 영향을 피할 수 있습니다. 아 실화 된 래트 그렐린 (Bionuclear; Bromma, Sweden)을 0.33 % 염화나트륨으로 희석하고 그렐린의 선택된 용량 (2008 mg / kg, ip)은 이전에 마우스 (Jerlhag, XNUMX)에서 보상을 유발하는 것으로 나타났다. 균형 잡힌 디자인은 모든 약물 문제에 사용되었습니다.

이전 연구에 따르면 모르핀은 설치류에서 운동 자극을 유발하는 것으로 나타났습니다 (Wise and Bozarth, 1987). 운동 활동은 8 개의 소음 감쇠, 통풍 및 희미한 조명 기관 상자에 등록되었다 (420 × 420 × 200 mm, Kungsbacka mätoch reglerteknik AB; Fjärås, 스웨덴). 상자의 바닥 수준에서 5 ~ 5 행의 광전지 빔이 광전지 감지를 생성하여 컴퓨터 기반 시스템이 마우스의 활동을 등록 할 수있게했습니다. 운동 활동은 60- 분 기간 동안 중단 된 새로운 광전지 빔의 누적 수로 정의되었습니다. 모든 실험에서, 마우스는 약물 도전 1 시간 전에 운동 활성 상자에 익숙해 지도록 허용되었다. 임의의 처리 그룹에서 습관화간에 차이는 없었다 (데이터는 나타내지 않음).

제 1 일련의 실험에서, 모르핀-유도 된 (2959 mg / kg, ip) 운동 자극에 대한 JMV6 (20 mg / kg, ip)의 효과가 조사되었다. JMV2959는 모르핀 전에 20 분 투여되었고, 마지막 주사 후 10 분 후에 활동 등록이 시작되었다. 각각의 마우스는 하나의 치료 조합 (차량 / 차량, JMV2959 / 차량, 모르핀 / 차량 또는 JMV2959 / 모르핀); n= 치료 조합 당 8)) 오직 한 번의 실험 시험을 받았다.

새로운 마우스에서 모르핀의 보상 효과에 대한 JMV2959의 효과를 평가하기 위해, 조건 된 장소 선호도 테스트를 이전에 기재된 바와 같이 마우스에서 수행 하였다 (Jerlhag, 2008). 간단히 말해서, 45 lx 조명과 뚜렷한 시각 및 촉각 신호를 가진 2 챔버 CPP 장치가 사용되었습니다. 한 구획은 검은 색과 흰색 줄무늬 벽과 어두운 라미네이트 바닥으로 정의 된 반면 다른 구획은 흰색 페인트 나무 바닥과 나무 질감의 벽으로 정의되었습니다. 절차는 사전 조정 (일 1), 조정 (일 2–5) 및 사후 조정 (6 일)으로 구성되었습니다. 전처리 조건에서, 마우스에 비히클을 ip로 주사하고 20 분 동안 두 구획에 자유롭게 접근하여 챔버에 배치하여 초기 장소 (또는 측면) 선호도를 결정 하였다. 컨디셔닝 (세션 당 20 분)은 모르핀 (20 mg / kg)이 가장 바람직한 구획과 짝을 이루는 편향 절차를 사용하여 수행되었으며, 바람직한 구획과 비히클이 있습니다. 모든 마우스는 매일 비히클뿐만 아니라 모르핀을 1 회 주사하였고, 균형 설계에서 아침과 오후 사이에 주사를 변경 하였다. 마우스를 컨디셔닝 할 때 (n= 16)에 JMV2959 (6 mg / kg, ip) 또는 동일한 부피의 비히클 용액을 주사하고, 20 분 후에 20 분 동안 두 구획 사이의 중간 선에 두어 2959 분 동안 (다음 처리 그룹을 생성 함); Morph-Veh 및 Morph-JMVXNUMX).

조건 장소 선호도는 약물 쌍에 소비 된 총 시간의 % 차이로 계산되었습니다 (즉. 사후 컨디셔닝 및 사전 컨디셔닝 세션 동안 격실.

JMV2959가 마우스에서 모르핀 유도-로코 모터 자극 및 조건부 환경 설정을 약화시키는 것을 고려하면, 모르핀-유도 (2959 mg / kg, ip)에 대한 JMV6 (20 mg / kg, ip)의 효과는 도파민 방출을 사용하여 조사되었다. 생체내에서 자유롭게 움직이는 마우스의 미세 투석. 세포 외 도파민 수준의 측정을 위해, 마우스는 핵 축적에 위치한 미세 투석 프로브로 일방적으로 이식되었다. 따라서, 생쥐를 이소 플루 란 (Isofluran Baxter; Univentor 400 Anesthesia Unit, Univentor Ldt., Zejtun, Malta)으로 마취시키고, 정위 틀 (David Kopf Instruments; 미국 캘리포니아 주 투 중가)에 위치시키고 가열 패드에 보관 하였다. 저체온증. Xylocain adrenalin (5 μg / ml; Pfizer Inic; New York, USA)을 국소 마취제로 사용했고 carprofen (Rimadyl, 5 mg / kg ip) (Astra Zeneca; Gothenburg, Sweden)을 사용하여 통증을 완화했습니다. 두개골 뼈가 노출되었고 탐침을위한 구멍과 고정 나사를위한 구멍이 하나 뚫렸다. 프로브는 뇌의 왼쪽 또는 오른쪽으로 무작위로 교대되었습니다. 브레 그마 전방의 1.5 mm 좌표, 중간 선에 대해 ± 0.7 측면 및 뇌 표면 표면 아래의 4.7 mm 좌표는 핵 축적에 사용되었다 (Franklin and Paxinos, 1997). 프로브의 노출 된 투석 막의 팁 (20,000 / 310 μm, HOSPAL, 스웨덴 룬드의 Gambro에 의해 절단 된 220 kDa)은 1 mm이었다. 모든 프로브는 실험 이틀 전에 외과 적으로 이식되었다. 수술 후 마우스를 시험일까지 개별 케이지에 유지시켰다 (매크로 론 III).

시험 당일 프로브를 미세 관류 펌프 (U-864 Syringe Pump; AgnThós AB)에 연결하고 1.5 μl / min의 속도로 링거 용액을 관류시켰다. 미세 투석 셋업에 대한 1 시간의 습관화 후, 관류 샘플을 매 20 분마다 수집 하였다. 기준선 도파민 수준은 제 1 약물 / 차량 챌린지 전의 3 개의 연속 샘플의 평균으로 정의되었고, 누적 도파민의 증가는 기준선으로부터의 백분율 증가로 계산되었다. 기준선 샘플 (-40 분에서 0 분까지) 후, 마우스에 JMV2959 또는 비히클 (0 분)을 주입 한 다음, 모르핀 또는 비히클 주입 (20 분)을 실시 하였다. 이들 약물 투여 후 추가 8 개의 20 분 샘플을 수집 하였다. 종합적으로 다음과 같은 치료군 (n= 각 그룹의 8) : 비히클-차량 (Veh-Veh), 비히클-모르핀 (Veh-Morph), JMV2959- 차량 (JMV2959-Veh) 및 JMV2959- 모르핀 (JMV2959-Morph)이 생성되었습니다.

투석액 중의 도파민 수준은 전기 화학적 검출을 통한 HPLC에 의해 결정되었다. 펌프 (Gyncotec P580A; Kovalent AB; V. Frölunda, 스웨덴), 이온 교환 컬럼 (2.0 × 100 mm, Prodigy 3 μm SA; Skandinaviska GeneTec AB; 스웨덴 쿵스 바카) 및 검출기 (Antec Decade; Antec Leyden; Zoeterwoude) VT-03 플로우 셀 (Antec Leyden)이 장착 된 네덜란드)를 사용 하였다. 설 폰산 5.6 mM, 시트르산 10 mM, 시트르산 나트륨 200 mM, 200 % EDTA, 10 % MeOH로 이루어진 이동상 (pH 30)을 0.2 μm 막 필터 (GH Polypro; PALL Gelman Laboratory; 스웨덴 룬드). 이동상을 탈기 장치 (Kovalent AB)를 통과하는 0.2 ml / 분의 유속으로 전달하고, 분석 물을 + 0.4 V에서 산화시켰다.

미세 투석 실험이 완료된 후, 마우스를 탈락시키고, 프로브 위치 결정을 용이하게하기 위해 프로브에 폰 타민 스카이 블루 6BX를 관류시켰다. 뇌를 vibroslice 장치 (752 M Vibroslice; Campden Instruments Ltd., Loughborough, UK)에 장착하고 50 μm 섹션으로 절단 하였다. 프로브의 위치는 광학 현미경을 사용하여 철저한 관찰에 의해 결정되었다. 프로브의 정확한 위치가 확인되었고 (Franklin and Paxinos, 1997) 정확한 위치를 가진 마우스 만이 통계 분석에 사용되었습니다.

보상 관련 영역에서 MEAP, DynB 및 LeuArg의 수준에 대한 JMV2959 처리의 효과를 조사했습니다. 마우스에 JMV2959 (6 mg / kg, ip, n= 8) 또는 같은 양의 차량 (ip, n이후 5 일 동안 = 8). 마지막 주사 후 20 분에 마우스를 희생시키고 이들 마우스의 뇌를 수집 하였다. 별도의 마우스에 그렐린 (0.33 mg / kg, ip, n= 8) 또는 같은 양의 차량 (ip, n이후 5 일 동안 = 8). 마지막 주사 5 분 후에 마우스를 희생시키고 이들 마우스로부터 뇌를 수집 하였다. 편도, 선조체, 전두엽 피질, VTA 및 해마를 신속하게 해부하고 즉시 드라이 아이스에 넣은 후 추가 처리가있을 때까지 -80 ° C에 보관합니다.

균질화 및 펩티드 추출 절차는 앞서 상세히 설명 된 표준 절차를 따랐다 (Nylander et al., 1997). 요컨대, 고온 (95 ℃) 아세트산 (1 M)을 냉동 샘플에 첨가 하였다. 샘플을 수조 (95 ℃)에서 5 분 동안 가열하고, 얼음상에서 냉각시킨 후 브랜슨 소니 파이어 (Branson Sonifier) ​​(Danbury, CT, USA)로 균질화시켰다. 균질 물을 95 ℃에서 5 분 동안 재가열하고 얼음에서 냉각시킨 후 15 ℃ 및 4x에서 12,074 분 동안 원심 분리 하였다.g Beckman GS-15R 원심 분리기 (미국 캘리포니아 주 풀러 턴). 추출물은 이전에 기술 된 절차 (Nylander et al., 1997)에 따라 추가로 정제되었다. 2 개의 분획 : 분획 III (Leu-Arg 및 MEAP) 및 분획 V (DynB)를 수집 하였다. 샘플을 진공 원심 분리기 (Savant SpeedVac Plus SC210A; Thermo Scientific Inc., Waltham, MA USA)에서 건조시키고 펩티드 분석시까지 냉동고 (-20 ° C)에 저장 하였다.

DynB, LeuArg 및 MEAP의 면역 반응성 (ir) 수준은 잘 확립 된 방사선 면역 분석법으로 분석되었고, 프로토콜은 다른 곳에서 상세하게 설명되어있다 (Nylander et al., 1997). DynB 분석에서, 염소 항-토끼 IgG (GARGG; Bachem, Bubendorf, Switzerland)를 사용하여 유리 및 항체 결합 펩티드를 분리 하였다. Dyn 항혈청 (113 +)은 1 : 600000의 최종 희석에 사용되었습니다. 큰 Dyn과의 교차 반응성은 100 %이고 DynB (1–29) 1 %와의 교차 반응입니다. 다른 오피오이드 펩티드와의 교차 반응성은 관찰되지 않았다. LeuArg 및 MEAP 분석에서, 숯 현탁액을 사용하여 유리 및 항체-결합 펩티드를 분리 하였다. LeuArg 항혈청 (91 : 6D +, 최종 희석 1 : 60000)의 경우 교차 반응은 Leu-enkephalin 및 MEAP의 경우 0.01 %, DynB의 경우 0.02 %, DynA의 경우 0.04 %, 알파 뇌내 피질의 경우 0.08 % 미만이었습니다. MEAP 항혈청 90 : 3D (II)는 1 : 160 000의 최종 희석에 사용되었습니다. Met-enkephalin, Met-enkephalin-Arg와의 교차 반응성⁶Met-enkephalin-Arg⁶의 Gly⁷류⁸, Leu-enkephalin 및 Leu-enkephalin-Arg⁶ 0.1 % 미만

치료의 전체 주요 효과는 모르핀 (20 mg / kg) 및 JMV2959 (6 mg / kg) (F (3,27) = 7.409, P= 0.0009; nVeh–Veh, JMV8-Veh, JMV2959-Morph의 경우 2959 nVeh-Morph의 경우 7). 그림과 같이 그림 1A, 사후 분석에 따르면 JMV2959를 한 번 주사하여 전처리 한 것으로 나타났습니다 (P<0.001) 모르핀 유도 운동 자극을 상당히 약화시켰다 (P<0.01 Veh–Veh vs Veh–Morph). 선택된 용량의 JMV2959는 비히클 처리와 비교하여 운동 활성에 영향을 미치지 않았다 (P> 0.05). 비히클 처리 된 마우스와 JMV2959- 모르핀 처리 된 마우스에서 운동 활성 반응에는 차이가 없었다 (P> 0.05).

  

그림 1

GHS-R1A 길항제 JMV2959는 마우스에서 모르핀-유도 된 운동 자극, 누산 도파민 방출 및 조절 된 장소 선호도를 약화시킨다. (A) 모르핀-유도 (20 mg / kg ip) 운동 자극은 JMV2959 (6 mg / kg ip)의 단일 주사에 의해 약화되었다 (n각 그룹에서 = 7–8; **P<0.01, ***P<0.001 일원 분산 분석에 이어 Bonferroni 사후 테스트). (B) 모르핀-유도 (20 mg / kg ip) 조건 장소 선호도 (CPP)는 마우스에서 JMV2959 (6 mg / kg ip)의 급성 단일 주사에 의해 약화되었다 (n각 그룹에서 = 8, *P<0.05, 짝이없는 t- 검정). (C) 먼저 비히클 처리 (시간 간격 20 ~ 40 분 (시간 간격)P<0.001), Veh–Veh vs Veh–Morph). (C) JMV2959 (6 mg / kg ip)를 사용한 전처리는 시간 간격 40-100 및 140-180 min에서 비히클 전처리와 비교하여 도파민 방출의 모르핀-유도 증가를 약화시켰다 (^##P<0.01, ^{# # #}P <0.001, JMV2959-Morph와 Veh-Morph 치료 비교). JMV2959의 선택된 용량은 임의의 시간 간격에서 비히클 치료와 비교하여 accumbal 도파민 방출에 유의 한 영향을 미치지 않았습니다 (P> 0.05, Veh–Veh vs JMV2959-Veh). JMV2959는 시간 간격 60-140에서 모르핀으로 인한 축적 된 도파민 방출을 감소 시켰으나 완전히 차단하지는 않았다 (*P<0.05, **P<0.01, ***P <0.001, JMV2959-Morph와 Veh-Morph 처리 비교). 화살표는 JMV2959, 비히클 및 모르핀의 주입 시점을 나타냅니다. Two-way ANOVA와 Bonferroni post-hoc test (n각 그룹에서 = 8). Veh–veh (사각), Veh-Morph (마름모), JMV2959-Veh (삼각형), JMV2959-Morph (원). 모든 값은 평균 ± SEM을 나타낸다.

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모핑-유도 된 (20 mg / kg) 조건부 환경 설정은 컨디셔닝 당일에 JMV2959 (6 mg / kg) (Morph-JMV2959)의 급성 단일 주사에 의해 현저히 약화되었습니다 (P= 0.025, n각 그룹에서 = 8; 그림 1B).

마우스에서 도파민의 누적 미세 투석 측정은 치료의 전반적인 주요 효과를 나타냈다 (F(3,33) = 24.15, P<0.0001), 시간 F(11,308) = 7.05, P<0.0001) 및 처리 × 시간 상호 작용 (F(11,308) = 8.63, P<0.0001) (그림 1C; n각 그룹에서 = 8). 모르핀은 시간 간격 40-180 분에서 비히클 처리에 비해 축적 된 도파민 방출을 증가시켰다 (P<0.001). 과 같이 그림 1C 시간 간격 2959–40에서 JMV80를 사용한 전처리로이 효과가 감소되었습니다 (P<0.01), 100 (P<0.001), 140 (P<0.01) 및 160 ~ 180 분 (P<0.001). JMV2959는 2959-60 시간 간격에서 비히클 처리와 JMV80- 모르핀 처리 사이에 차이가 있었기 때문에 모르핀 유도 축적 도파민 방출을 감소 시켰지만 완전히 차단하지는 않았습니다.P<0.01), 100 (P<0.001), 140 (P<0.01) 및 160 분 (P<0.05). JMV2959의 선택된 용량은 임의의 시간 간격에서 비히클 치료와 비교하여 accumbal 도파민 방출에 유의 한 영향을 미치지 않았습니다 (P> 0.05).

본 연구는 오레오 제닉 펩티드의 생리 학적 역할이 보상 조절을 포함한다는 가설을 추가로지지한다. 실제로, 본 발명자들은 GHS-R1A 길항제의 말초 투여가 모르 폴린이 기관지 자극을 유발하고 NAc에서 도파민 수준을 증가시키고 마우스에서 조건부 선호도를 유도하는 능력을 약화 시킨다는 것을 보여 주었다. 우리는 또한 ghrelin이 아닌 sub-chronic JMV2959 치료가 VTA에서 MEAP의 ir 조직 수준, 해마의 DynB 및 striatum의 LeuArg를 증가시켜 그렐린 신호 전달의 강화를 조절하는 능력이 오피오이드 펩티드를 포함 할 수 있다는 첫 번째 증거를 제공함을 발견 .

여기에 제시된 데이터는 GHS-R1A 길항 작용이 생쥐에서 중변 연계 도파민 시스템을 활성화하는 모르핀의 능력에 영향을 미친다는 것을 보여줍니다. 이에 따라 JMV2959가 모르핀이 세포 외 축적 도파민 수준을 증가시키고 쥐의 고정 관념을 유발하는 능력을 차단한다는 사실을 보여주는 결과가 있습니다 (Sustkova-Fiserova et al., 2014). 지지 적으로, 중앙 그렐린 투여는 헤로인을자가 투여하는 쥐의 점진적 비율 강화 일정에서 활성 레버 프레스의 수가 아니라 중단 점을 증가시킵니다 (Maric et al., 2012). 그렐린 신호가 약물 중독의 기초가된다는 주장은 JMV2959가 쥐의 음주와 음주 동기를 감소시키고 암페타민, 코카인 및 니코틴에 의한 보상이 설치류의 GHS-R1A 길항 작용에 의해 차단된다는 사실을 보여주는 연구 결과에 의해 더욱 뒷받침됩니다. 검토를 위해 Engel 및 Jerlhag (2014) 참조), 그렐린 관련 유전자의 다형성은 알코올, 흡연 및 암페타민 섭취와 관련이 있음 (검토를 위해 Engel 및 Jerlhag (2014) 참조).

서브-계시 적 JMV2959 처리 후 선조체, VTA 및 해마에서 증가 된 수준의 오피오이드 펩티드를 갖는 본 발견은 오피오이드 펩티드와 그렐린 신호 전달 사이의 최초 상호 작용을 시사한다. 내인성 오피오이드는 오피오이드뿐만 아니라 다른 약물 남용 및 자연적인 보상에 의해 유발되는 보상 효과, 및 반복 된 약물 노출 후 보이는 적응 과정에 관련이있다 (Trigo et al., 2010, Van Ree et al., 2000). 실제로 메 소림 빅 도파민 시스템의 활성은 VTA 및 NAc 수준에서 내인성 오피오이드에 의해 조절되고 (Hirose et al., 2005, Spanagel et al., 1992), 그 작용은 직간접적인 것으로 나타났다 다른 송신기의 변조를 통해 (Charbogne et al., 2014).

본 명세서에서 서브-만성 JMV2959 처리는 VTA에서 MEAP의 수준을 증가 시킴을 발견 하였다. MEAP는 독점적으로 proenkephalin에서 파생되었으며 주로 δ- 오피오이드 수용체를 활성화시키는 proenkephalin 펩티드의 마커로 사용되었습니다. JMV2959 치료 후 VTA에서 내인성 MEAP 수준의 증가는 mesoaccumbal dopamine 뉴런 (Johnson and North, 1992)의 GABA 억제를 감소시키는 모르핀의 능력을 방해 할 수 있으며, 이는 이후에 볼 수있는 모르핀 유발 효과의 감소에 기여할 수 있다고 가정합니다. JMV2959. 지원 적으로 GHS-R1A는 VTA의 GABAergic interneuron에 있습니다 (Abizaid et al., 2006). 또한, 이전 연구는 JMV2959의 VTA 내 주입, 를 통해 알려지지 않은 메커니즘, 설치류에서 그렐린 매개 보상 (Jerlhag et al., 2011) 및 그렐린 매개 자당 섭취량 (Skibicka et al., 2011)을 약화시켜, 복부 Tegmental GHS-R1A가 보상 조절에 중요 ​​함을 시사합니다. 갈등과 오렉신과 같은 다른 굶주림 조절 펩티드가 모르핀의 보전 적 성질을 매개한다는 것을 보여주는 결과가 그러한 논쟁을 뒷받침한다 를 통해 VTA 내 로컬 메커니즘 (Narita et al., 2006, Richardson and Aston-Jones, 2012).

선조체에서, 우리는 하위 시간 JMV2959가 LeuArg의 ir 수준을 증가 시켰음을 발견했다. 이는 JMV2959가 모르핀-유도 조건부 선호도, 도파민 방출 및 운동 자극을 약화시키는 능력이 적어도 부분적으로는 강화 된 δ-에 의존한다는 것을 시사한다. 오피오이드 수용체 활성. 증가 된 LeuArg 수준은 증가 된 도파민에 대한 반응으로서 다이 노르 핀 펩티드의 엔케팔린으로의 증가 된 효소 전환 또는 NAc에서의 향상된 Dyn 방출에 기인 한 후, LeuArg 로의 분해에 의해 야기 될 수있다. 이전 연구에도 불구하고 mesolimbic dopamine 시스템의 활성이 조절되는 것으로 나타났습니다 를 통해 NAc에서의 κ- 오피오이드 수용체 (Spanagel et al., 1992) 및 내인성 κ- 오피오이드 수용체는 메 소포 쿰발 도파민 신경 전달의 강장제 억제를 제공하고 NAc에서 도파민의 코카인 유도 방출을 약화시킨다 (Chefer et al., 2005). JMV2959가 선조에서 ir DynB 레벨을 변경 함을 보여줍니다. 따라서, GHS-R1A 길항 작용과 디노 르핀 사이의 상호 작용을 설명하기 위해 프로디 노르 핀 펩티드에 대한 추가 연구가 필요하다.

현재의 연구에서 우리는 JMV2959 치료가 해마 DynB의 수준을 상당히 증가 시킨다는 것을 보여 주었다. Ghrelin은 수지상 척추 형성뿐만 아니라 기억 강화를 증가시키고, 장기 강화를 생성하며 기억 촉진을 유도합니다 를 통해 설치류에서 해마 GHS-R1A (Carlini 등, 2010, Diano 등, 2006). 더욱이, GHS-R1A 녹아웃 마우스는 모리스 물 미로 시험에서 개선 된 공간 기억 및 야생형 마우스와 비교하여 공포 조절 패러다임에서 교란 된 맥락 기억을 나타낸다 (Albarran-Zeckler et al., 2012). DynB를 포함하는 디노 르핀 펩티드는 해마가 풍부하고, 장기 강화 (Chavkin et al., 1985, Wagner et al., 1993)를 약화시킬뿐만 아니라 쥐의 공간 학습 장애 (Sandin et al., 1998)를 약화시킨다. 따라서 우리는 GHR-R1A 길항제가 해마의 장기 강화를 억제함으로써 보상의 기억을 약화시킬 수 있다는 가설을 세웠다 를 통해 DynB의 활성화. 종합적으로,이 데이터는 JMV2959의 새로운 잠재적 메커니즘을 제공합니다. 를 통해 오피오이드 펩티드는 강화를 변경할 수있다. 그러나, 오피오이드 수용체는 뇌에 널리 분포되어 있으며, 본 연구에 포함되지 않은 다른 영역이 GHS-R1A 조절 모르핀-유도 보상에 관여 할 수 있음을 시사한다. 예를 들어, 수 크로스를위한 레버 프레싱뿐만 아니라 그렐린-유도 된 음식 섭취는 κ- 오피오이드 수용체 길항제의 중앙 또는 시상 하부 투여에 의해 감소된다 (Romero-Pico et al., 2013). 그러나, 다른 분야에서 오피오이드 펩티드의 역할은 다음 연구에서 밝혀 져야합니다.

내인성 μ- 수용체 리간드, 엔도 모르핀 및 베타-엔돌핀은 본원에서 분석되지 않았기 때문에 이러한 펩티드에 대한 JMV2959의 가능한 효과를 배제 할 수는 없다. 실제로, 모르핀의 보상 특성은 NAc뿐만 아니라 VTA에서의 μ- 오피오이드 수용체를 포함한다 (Hirose et al., 2005, Johnson and North, 1992, Murakawa et al., 2004, Yoshida et al., 1999). 그러나, μ- 수용체 길항제는 그렐린-유도 음식 섭취량 (Naleid et al., 2005) 또는 그렐린-유도 된 운동 자극 및 누진 도파민 방출 (Jerlhag et al., 2011)을 약화시키지 않아 GHSR-의 능력을 암시합니다. 강화를 조절하기위한 1A 길항제는 μ- 수용체를 포함하지 않는다. 한편, JMV2959는 프로 엔케팔린 및 프로디 노르 핀 유래의 오피오이드 펩티드에 영향을 미쳐 GHSR-1A 길항제에 의해 유발 된 효과에 관여 할 수 있음을 보여 주었다.

이전 연구에서 전신 그렐린 투여가 보상 (Jerlhag, 2008)을 유발할뿐만 아니라 중독성 약물의 보상 특성을 향상시키는 것으로 나타 났지만 (Engel and Jerlhag (2014) 참조), 하위 만성 그렐린 치료는 변하지 않았 음을 보여줍니다 임의의 연구 된 보상 관련 영역에서의 오피오이드 펩티드의 ir 조직 수준. 전신 그렐린 투여는 시상 하부 영역에서 c-fos 발현을 활성화 시키지만, 중배엽 및 해마 영역에서는 그렇지 않다 (Pirnik et al., 2011). 및 형광 표지 된 그렐린의 결합은 시상 하부의 식품 조절 뉴런으로 제한된다 (Schaeffer et al., 2013) ). 시상 하부에서 미량으로 실행 된 그렐린이 말초 그렐린 투여 후 더 깊은 뇌 영역에서 검출 될 수 없음을 보여주는 연구 결과와 함께 (Furness et al., 2011, Grouselle et al., 2008, Sakata et al., 2009 ), 시스템 그렐린이 보상 시스템을 활성화 할 가능성을 높입니다. 를 통해 내인성 오피오이드와 무관 한 간접 메커니즘. 지지 적으로, 그렐린-유도 된 어큐 뮬라 도파민 방출은 상류 또는 이종성 시상 하부 신호 전달 (Cone et al., 2014)을 필요로하고, 말초 그렐린 투여는 마우스에서 알코올 섭취를 변경시키지 않으며 (Lyons et al., 2008) 말초 그렐린의 중화는 알코올을 약화시키지 않는다 -쥐에서 알코올 또는 알코올 섭취에 의한 보상 (Jerlhag et al., press). 그렐린의 서브-시간적 투여가 오피오이드 펩티드의 ir 조직 수준을 증가시킬 가능성이 고려되어야하지만, 이는 향후 연구에서 상세하게 조사 될 필요가있다.

중독성 약물이 자극, 도파민 방출을 유발하고 조건부 환경 설정을 유도하는 능력은 중독성 약물의 강화 특성과 밀접한 관련이 있으며 이러한 매개 변수는 중독 과정의 일부를 구성하는 것으로 간주됩니다 (Wise, 2004). 여기서 우리는 JMV2959가 마우스에서 이러한 보상 매개 변수를 약화 시킨다는 것을 알았을 때 우리는 GHS-R1A가 중독 과정에서 중요한 역할을 할 수 있으며 내인성 오피오이드가 이러한 과정에 관여한다고 가정합니다. 종합적으로 이러한 데이터는 GHS-R1A 길항제가 약물 의존성 치료로 설명되어야 함을 나타냅니다.

JE와 EJ는 스웨덴 연구위원회 (Grant no. 2011-4646, 2009-2782 및 2011-4819), 스웨덴 뇌 재단, Sahlgrenska University Hospital의 LUA / ALF (Grant no. 148251)로부터의 보조금으로 지원됩니다. 스웨덴 알코올 소매 독점 독점 연구소 및 Adlerbertska, Fredrik 및 Ingrid Thuring, Tore Nilsson, Längmanska, Torsten 및 Ragnar Söderberg, Wilhelm and Martina Lundgren, NovoNordisk, Knut and Alice Wallenberg, Magnus Bergvall, Anérs, Jeansons, Åke Wiberg 스웨덴 의학 학회, 스웨덴 의학 연구 협회 및 예테보리 정신과 연구 재단. 스웨덴 알코올 소매 독점의 알코올 연구위원회와 스웨덴 연구위원회 (K2012-61X-22090-01-3)는 IN을 지원했습니다. 자금 출처는 연구 설계, 데이터 수집, 분석 및 해석, 보고서 작성 및 데이터 공개 결정에 아무런 역할을하지 않았습니다.