남성 성 행동에있어 hypocretin (orexin)의 역할 (2007)

J Neurosci. 2007 Mar 14;27(11):2837-45.

머샴 JW1, 도밍 게즈 JM, 사토 SM, 리, 선체 EM.

추상

각성 조절에있어서의 하이포크 레틴 (orexin; hcrt / orx) 뉴런의 역할은 잘 확립되어있다.

최근에 hcrt / orx는 식품 보상 및 약물 추구 행동에 관련되어 있습니다. 우리는 여기 남성 쥐에서 hcrt / orx 뉴런에 Fos immunoreactivity (ir) 교미하는 동안 현저 하 게 증가하는 반면 거세 hcrt / orx 뉴런 세포 수 및 단백질 수준 감소 후 행동에 postcastration 손상과 일치하는 시간 과정에서보고합니다.

이 효과는 estradiol 대체에 의해 역전되었습니다. 안드로겐 (AR) 및 에스트로겐 (ER 알파) 수용체에 대한 면역 표지화는 AR 및 ER 알파를 발현하는 hcrt / orx 뉴런이 거의없는 hcrt / orx의 colocalization을 나타내지 않았으며, 이는 hcrt / orx 발현의 호르몬 조절이 이러한 수용체를 포함하는 뉴런의 구 심성 (afferents)을 통해 이루어짐을 시사합니다. 우리는 또한 orexin-1 수용체 길항제 SB 334867 [N- (2-methyl-6-benzoxazolyl) -N”-1,5-naphthyridin-4-yl urea]의 전신 투여가 교합 행동을 손상 시킨다는 것을 보여줍니다. hcrt / orx의 프로 섹슈얼 효과에 대한 하나의 유전자좌는 복부 피부 영역 (VTA) 일 수 있습니다. 우리는 여기에 hcrt-1 / orx-A가 생체 내에서 VTA 도파민 (DA) 뉴런의 발사 속도 및 인구 활동의 용량 의존적 증가를 생성한다는 것을 보여줍니다. 교미하는 동안 hcrt / orx의 활성화, 그리고 차례로 hcrt / orx에 의한 VTA DA 뉴런의 여기는 남성 성행위 동안 이전에 관찰 된 핵 accumbens DA의 강력한 증가에 기여할 수 있습니다. 전방 VTA에서 후속 삼중 면역 표지는 hcrt / orx 섬유에 부착 된 티로신 하이드 록 실라 제 양성 뉴런에서 Fos-ir이 교미 중에 증가 함을 보여 주었다.

함께, 이들 데이터는 hcrt / orx 펩타이드가 중성 DA 시스템의 활성화를 통한 성별과 같은 자연적인 보상의 에너지 추구를 촉진하기 위해 스테로이드에 민감한 방식으로 작용할 수 있다는 견해를지지한다.

개요

1990에서 발견 된 이후 (De Lecea et al., 1998; Sakurai 등, 1998), 하이포크 레틴 (orexin; hcrt / orx) 시스템은 주로 각성 및 섭취 행동의 맥락에서 관찰되었습니다 (서 클리프와 레시아, 2002; 시겔, 2004). hcrt / orx 신호 전달 장애가있는 돌연변이 마우스는 수면과 각성 사이의 빈번한 전이로 인해 각성 패턴이 고르지 않게 나타납니다 (Mochizuki et al., 2004). hcrt / orx 펩타이드는 뇌간 (예를 들어, locus ceruleus, raphe)에서 깨어있는 활성 아 민성 세포 그룹에 대한 강력한 투영에 의해 중단되지 않은 각성을 촉진하는 것으로 여겨진다 (Peyron 등, 1998; Nambu 등, 1999; Saper 등, 2005). hcrt / orx 뉴런은 경계와 각성을 조절하는 부위에 대한 투영뿐만 아니라, 복부 Tegmental Area (VTA)에서 mesolimbic dopamine (DA) 경로의 기원으로 투영됩니다.Fadel과 Deutch, 2002). 이러한 연결 패턴은 많은 연구 그룹이 보상 관련 강화에서 hcrt / orx의 역할을 평가하도록 자극했습니다 (DiLeone 등, 2003; 해리스 (Harris) 등, 2005; 해리스와 애스턴 - 존스, 2006).

움직이는 동물 연구 광고 무제한 hcrt / orx 뉴런은 통전되고 탐구적인 행동의 기간 동안 발사 속도가 증가한다는 것을 보여줍니다.Mileykovskiy 등, 2005) 및 뇌 실내 hcrt / orx 주입 후의 향상된 운동량은 DA 수용체 봉쇄에 의해 약화된다 (Nakamura et al., 2000). 다른 연구는 DA 세포 활동 증가를 보여주었습니다 체외에서 hcrt / orx 제작 (Korotkova et al., 2003), 증강 된 핵 축적 (NAc) DA 방출 생체내에서 hcrt / orx를 VTA에 적용한 후 (나리타 (Narita) 등, 2006). 최근 행동 연구에 따르면 hcrt / orx 시스템의 활성화는 남용 약물에 대한 동기 부여에 필수적 일 수 있습니다.Boutrel et al., 2005; 해리스 (Harris) 등, 2005; Borgland 등 2006), 시상 하부 구조에 의해 항상성으로 강화 강도가 결정되는 자연 식품 보상 (호벨, 1969; 롤스 외, 1980; 풀톤 (Fulton) 등, 2000; 소프 외, 2005).

외인성 hcrt / orx가 수유 및 식량 추구를 향상시킬 수있는 것처럼코츠, 2006), hcrt / orx의 시상 하부 주입은 수컷 쥐의 성적 행동을 촉진합니다 (Gulia et al., 2003). hcrt / orx 뉴런을 포함하는 것으로 알려진 측면 시상 하부 영역 (LHA)의 부위의 전기적 자극에 의해 수유 또는 남성의 행동이 유도되는 고전적 연구에 비추어 볼 때본과 피셔, 1962; Caggiula and Hoebel, 1966; 스완슨 (Swanson) 등, 2005), 우리는 교미 중 hcrt / orx 뉴런의 활성화 및 오렉신 -1 수용체 (OX)에 의한 행동의 손상에 대한 증거를 찾았다1) 봉쇄. 또한 중앙 hcrt / orx 함량에 대한 거세 및 호르몬 대체 효과를 측정하고 hcrt / orx 및 스테로이드 호르몬 수용체에 대한 이중 면역 표지화를 통해 hcrt / orx 시스템의 신경 내분비 조절을 평가했습니다. 마지막으로, hcrt / orx에 의해 mesolimbic DA 시스템이 활성화 될 수있는 정도를 평가했습니다 생체내에서 및 hcrt / orx 입력을 수신하는 VTA의 DA 뉴런이 교미 동안 증가 된 Fos 면역 반응성 (ir)을 나타내는 지 여부.

재료 및 방법

Fos 면역 조직 화학, 행동 및 세포 수.

성인 (~ 325 g), 성적으로 경험이 많은 수컷 Long-Evans 쥐 (Harlan, Indianapolis, IN)를 국립 보건원 (National Institutes of Health)에 따라 보관하고 사용했습니다. 실험실 동물의 관리와 사용을위한 지침, 모든 절차는 대학의 기관 동물 관리 및 사용위원회의 승인을 받았습니다. 시험 전 주에, 모든 동물은 에스트라 디올 벤조 에이트 (1μg, sc) 및 10 시간 후에 프로게스테론 (48μg, sc; 400 시간 전에 주어짐)에 의해 발정 된 난소 절제된 암컷과 함께 매일 4 번의 2 시간 성적 경험 세션을 허용했습니다. 테스트; Sigma, St. Louis, MO). 모든 실험에서 행동 테스트는 단일 40W 적색 백열 전구의 빛 아래에서 가정 케이지에서 동물의 일반적인 야행성 기간으로 XNUMX 시간 동안 수행되었습니다. 교미 실험의 경우 한 그룹 (n = 6) 수컷의 집에서 발정 한 암컷과 교미하여 한 번의 사정을 한 후 암컷을 제거했습니다. 모든 동물은 거의 즉시 장착되어 4 분 이내에 도입되었습니다. 이 그룹의 평균 사정 지연 시간은 632.6 ± 169.64 초 (평균 ± SEM; n = 6). 대조군 (n = 6) 활동 수준을 제어하는 ​​데 사용되었습니다. 이 동물들은 실험 그룹의 교미 시험 기간에 해당하는 15 분 동안 깨어 있고 활동적인지 확인하기 위해 시각적으로 모니터링되었습니다. 이 15 분 기간의 시작과 끝에서 케이지 뚜껑을 열고 닫았지만, 그렇지 않으면 동물을 그대로 두었습니다. 이 기간 동안 정지 된 대조군 동물은 사용되지 않았습니다. 동물은 옆구리에 눕거나 머리를 숙인 자세 ( Espana 외, 2003). 교미 세션 또는 대조군 관찰의 시작 60 분 후, 동물을 나트륨 펜토 바르 비탈 (100 mg / kg)로 심하게 마취시키고 PBS에서 0.1 m PBS, pH 7.4 및 4 % 파라 포름 알데히드로 관류시켰다. 뇌를 20 % 수 크로스 -PBS에서 동결 보호하였고, 시상 하부 hcrt / orx 세포 집단 부근으로부터의 다른 모든 40 μm cryostat 섹션 (동물 당 30)을 프리프로 -HCRT / orx (1 : 100; 밀리 포아, Billerica, MA) 및 Fos (1 : 10,000; EMD Biosciences, San Diego, CA)와 3 ', 3'- 디아 미노 벤지딘 (DAB) 및 니켈 강화 DAB를 각각 전술 한 면역 조직 화학 절차에 따라 (Espana 외, 2003; 사토 (Sato) 등, 2005). 일관된 rostrocaudal 수준에서 단일 섹션에 올림푸스 (일본 도쿄) 현미경 및 카메라를 사용하여 고배율 하에서 세포 수를 수행 하였다 (참조 Fig. 1B,C) (브레 그마 뒤 2.45 mm) (스완 손, 2004). 각각의 반구에서, 2 개의 470 × 630 μm 카운팅 필드 내에 들어간 세포는 실험 조건에 대한 블라인드 검사관에 의해 디지털 이미지 분석 소프트웨어 (Image-Pro Plus; Media Cybernetics, Silver Spring, MD)를 사용하여 태깅되었다. 두 반구 모두에서, 측면 카운팅 필드는 포니 스를 중간 경계로 사용했습니다. 중간 계수 필드는 포니 스를 측면 경계로 사용했습니다. hcrt / orx 및 Fos-ir 둘 다를 갖는 Fos-only, hcrt / orx-only, 및 이중-표지 된 세포의 수를 기록 하였다.

그림 1. 

교미 중 hcrt / orx 뉴런의 Fos 면역 반응성이 증가했습니다. A, Fos-ir을 보여주는 Hcrt / orx 뉴런 (오른쪽). 스케일 바, 25 μm. B, 비 구리 대조 수컷의 좌반구에서 우측 계수 필드로부터의 대표적인 현미경 사진. 스케일 바 A), 200 μm. C, 교미하는 수컷의 현미경 사진. 스케일 바, 200 μm. 화살표는 Fos-ir을 나타내는 hcrt / orx 뉴런을 나타내고; 별표는 비 -HCrt / orx 세포에서 Fos-ir 핵을 나타내고; fx, 포 닉스.

거세 실험 및 면역 블 롯팅.

성인 수컷 (실험 시작시 ~ 325 g) 롱-에반스 쥐를 마취시키고 (75 mg / kg 케타민 HCl 및 10 mg / kg 자일 라진 HCl, ip) 거세 하였다. 동물은 마취되고 관류되기 전에 수술 후 생존 시간의 7, 14 또는 28 d가 허용되었고, 뇌는 상기와 같이 프리프로 -HCRT / orx에 대해 면역 표지되었다 (모든 그룹, n = 5). 이 동물들을 동일한 마취 하에서 음낭 절개를받은 가짜 수술 그룹과 비교했습니다 (n = 5). 28 d에서 샴도 죽었다. 더 낮은 확대 하에서 동일한 관상면에서 상기와 같이 세포 계수를 수행 하였다.

별도의 실험에서 28 d 거세 (n = 5) 및 가짜 처리 된 컨트롤 (n = 5) 펜토 바르 비탈 나트륨 (100mg / kg)으로 깊이 마취하고, 뇌를 제거하고 드라이 아이스로 식힌 2- 메틸 부탄에서 급속 냉동시켰다. 동결 된 시상 하부는 두 개의 관상 절개에 의해 차단되었는데, 하나는 전방 교합의 뾰루지 바로 앞쪽에있는 내측 전시 영역 (mPOA)을 통해, 다른 하나는 제 8.0 심실이 시상 하부로 분할 된 꼬리에있는 후방 시상 하부 핵을 통해 차단되었습니다. 유방 움푹 들어간 곳. 그런 다음 블록을 두 대뇌 꽃자루의 내측 끝에서 두 개의 시상 절단으로 자르고 세 번째 심실의 시상 하부 홈의 등쪽 끝에서 수평 절단을 사용했습니다. 그런 다음 조직 블록을 초음파 처리로 균질화하고 단백질을 프로테아제 억제제 (Roche Complete Mini protease 혼합물; Roche Diagnostics, Indianapolis, IN)와 함께 변형 된 방사 면역 침전 완충액 pH 40으로 추출하고, 원심 분리 후 추출물을 분취했습니다. 각 개체의 추출물에 대한 총 단백질 농도를 결정한 후, 각 동물의 단백질 15μg을 XNUMX % SDS-PAGE 겔의 별도 웰에로드했습니다. 전기 영동 분리, 폴리 비닐 리덴 디 플루오 라이드 막 (Bio-Rad, Hercules, CA)으로의 이전 및 면역 표지법은 Laemmli (클리블랜드 등, 1977), 이전에 언급 된 항 -prepro-hcrt / orx 항체의 1 : 1000 및 이후 1 : 2000 항 -β- 액틴 (Sigma) 및 1 : 5000 염소 항-토끼 IgG (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA) ) 트리스-버퍼 식염수 중 5 % 분유. 단백질 밴드는 강화 화학 발광 키트 (ECL; GE Healthcare, NJ, Piscataway, NY) 및 Kodak (Rochester, NY) BioMax 필름에 의해 가시화되었다. 필름을 40에 노출시키고 디지털 방식으로 스캔하고 공개적으로 사용 가능한 ImageJ 소프트웨어를 사용하여 광학 밀도를 측정했습니다. 각각의 동물에 대해, β- 액틴 로딩 대조군의 백분율로서 hcrt / orx에 대한 광학 밀도 값을 결정하고 통계 학적 분석을 수행 하였다.

세 번째 실험에서, 위에서 설명한 수컷 쥐에게 가짜 수술을 받았습니다 (n = 3) 또는 다이 하이드로 테스토스테론 (28 μg, sc; n = 4), 에스트라 디올 벤조 에이트 (20 μg, sc; n = 3) 또는 오일 비히클 (0.1 μl; n = 3). 두 호르몬 모두 시그마에서 구입했습니다. 이전 연구에서 거세를 유지하기 위해 호르몬 용량을 선택했습니다.Putnam 등 2005). 수술 후 28 번째 날에, 동물을 사멸시키고, 상기 기술 된 바와 같이 웨스턴 면역 블롯에 의한 프리프로 -HCRT / orx 함량의 측정을 위해 저 칼라 미아를 차단 하였다.

스테로이드 호르몬 수용체 및 hcrt / orx 이중 표지 면역 조직 화학.

온전한, 성적으로 순진한 성인 남성 (~ 350 g)의 LHA로부터의 뇌 절편 롱-에반스 래트를 안드로겐 수용체 (AR)에 대해 면역 표지 하였다 (1 : 750; n = 6; 산타 크루즈 바이오 테크놀로지 (Santa Cruz Biotechnology) 또는 에스트로겐 수용체 (ERα) (1 : 2500; n = 9; Santa Cruz Biotechnology)를 니켈 강화 DAB를 사용합니다. 이어서, AR- 표지 된 섹션은 (전과 같이) prepro-hcrt / orx에 대해 이중 표지되고, ERα- 표지 된 섹션은 prepro-hcrt / orx에 대해 이중 염색되었다 (n = 5). 장착 후, 아틀라스의 LHA의 4 개의 관상 층 중 하나와 밀접하게 일치하는 섹션 스완 손 (2004) 카메라 루시다 부착을 사용하여 현미경하에 손으로 그린 ​​후, 각각의 섹션에서 이중-및 단일-표지 세포를 태그 하였다. 도면은 Adobe (캘리포니아 산호세) 일러스트 레이터를 사용하여 아틀라스 레벨에서 디지털로 스캔 및 중첩되었으며, 각 세포 집단은 아틀라스 일러스트레이션 (스완 손, 2004). ERα- 플러스 -hcrt / orx- 표지 된 섹션의 경우, 이중-및 단일-표지 된 hcrt / orx 뉴런의 수를 세었다.

약리학 및 copulatory 행동.

성인 수컷 (실험 시작시 ~ 350 g) 장 -Evans 쥐 (n = 9) 행동 테스트 전 1 주일 동안 성적으로 수용하는 여성과 30 시간 동안 40 번의 성적 경험 세션을 받았습니다. 최종 테스트의 처음 2 분 동안 한 번 이상 사정하지 못한 동물은 실험에서 제외되었습니다. 경험 세션 및 행동 테스트는 동물의 야행성 기간으로 30 시간 동안 XNUMXW 적색 백열등 아래에서 수행되었습니다. 교합 행동 테스트는 수컷의 집 케이지에서 수행되었으며 XNUMX 분 동안 진행되었습니다. 남성 교미 행동 (즉, 탈것, 도입 및 사정)의 뚜렷한 특징은 각 행동 이벤트에 대한 빈도 및 대기 시간 데이터를 기록한 맞춤형 컴퓨터 소프트웨어를 사용하여 실험적 치료에 눈이 먼 관찰자에 의해 점수를 매겼습니다. 행동 테스트 XNUMX 분 전에 동물에게 OX를 주사했습니다.1 적대자 N-(2- 메틸 -6- 벤조 옥사 졸릴)-엔"-1,5- 나프티 리딘 -4- 일 우레아 (SB 334867) (20mg / kg, ip) 또는 DMSO 비히클 (0.5ml / kg). 실험은 첫날 테스트에서 48 마리의 동물이 약물 주사를 받고 나머지 XNUMX 마리는 비히클을 받도록 간단한 균형 잡힌 개체 내 설계를 따랐다. XNUMX 시간의 약물 세척 기간 후, 첫날 약물로 치료받은 동물에게 비히클을 제공하고 그 반대의 경우도 마찬가지입니다.

전기 생리학.

성체 수컷 스프 라그 다 울리 래트 (~ 350 g)를 염소 수화물 (400 mg / kg, 유도 ip; 100 mg · kg)로 마취시켰다.- 1 · h- 1 그 후 유지 보수를 위해) 및 스테레오 택시 기기에 장착된다. VTA를 함유하는 뇌간 영역 위의 두개골 및 경막이 제거되었다. 각 동물은 먼저 인공 CSF (aCSF) [0.5 μl / 5 min; 람다, 앞뒤, + 2.6 또는 + 3.4 mm; 중간면, ± 0.8 mm; dorsoventral, -7.0 mm; stereotaxic 아틀라스에 따라 평평한 두개골 (Paxinos와 Watson, 1998)], VTA 한쪽에 32 ga Hamilton 주사기 (0.5 μl / 5 min)가 있습니다. 그 후, 10 분 후, 트랙 당 셀 샘플링 절차가 VTA의 동측에서 수행되었다. 다음에 동물에게 hcrt-1 / orx-A (0.014 nmol, n = 4; 1.4 nmol, n = 5; 또는 140 nmol, n = aCSF에 용해 된 6; 트랙 당 세포 절차가 그 측면에서 반복되기 전에 대립 VTA 로의 미국 펩타이드 (미국 서니 베일, 캘리포니아). 주사는 반구 및 전방 또는 후방 주사 부위에 의해 균형을 잡았다. 1.5 m NaCl로 채워진 단일 배럴 유리 마이크로 피펫 (풀링 전 2 mm 외경; 플로리다 주 사라 소타 소재의 월드 정밀 기기)을 사용하여 세포 외 단일 유닛 기록을 수행 하였다. 전극 임피던스는 2 Hz에서 4에서 135 MΩ 범위입니다. DA 뉴런은 긍정적 인 부정적 세포 외 활동 전위로 식별되는데, 이는 종종 눈에 띄는 초기 세그먼트 / 생식 선종 (IS / SD) 파괴, 넓은 활동 전위 지속 시간, 느린 발사 속도 및 불규칙한 단일 스파이크 또는 버스트 발사 패턴을 갖는다 (그레이스 앤드 버니, 1983). 트랙 당 세포 실험을 수행하기 위해, 기록 전극을 VTA에서 입체적으로 정의 된 블록 (전방 람다에서 2.8-3.4 mm; 측면에서 중간 선으로 0.6-1.0 mm; 뇌 표면 아래 6.5-8.5 mm)으로 체계적으로 통과시켰다. 여섯 번. 식별 된 각 DA 뉴런은 차트 데이터 수집 시스템을 사용하여 2–5 분 동안 온라인으로 기록되었습니다 (광고 기기, 마운틴 뷰, CA). 각 동물 (트랙 당 세포)로부터 전극 트랙 당 발생하는 자발적으로 활성 인 DA 뉴런의 평균 수는 VTA DA 뉴런 집단 활동에 대한 지수였다. DA 뉴런의 평균 발사 속도는 각 그룹 내의 모든 동물로부터 샘플링 된 모든 DA 뉴런으로부터 결정되었다.

140 nmol hcrt / orx 그룹에서 탈분극 불 활성화를 테스트하기 위해, 아포 모르핀 HCl (20 μg / kg, ip; n = 4; 시그마)는 후 -hcrt-1 / orx-A 샘플링 완료 후 즉시 투여되었다. 아포 모르핀 주사 10 분 후, 이전에 hcrt-1 / orx-A를받은 VTA 측에서 6 개의 추가 전극 트랙을 샘플링 하였다.

행동, 삼중 라벨 면역 조직 화학 및 세포 수.

성인 (~ 300 g) 수컷 롱-에반스 (Long-Evans) 랫트는 상기와 같이 수용 여성과 4 번의 1 h 성 경험 세션이 제공되었다. 면역 표지 용 동물의 마취, 관류 및 조직의 준비 (1 h) 전, 동물 (n = 6)를 단일 사정에 결합시켰다. 위와 같이, 동물들은 거의 즉시 실장되고 반입되었으며,이 그룹에 대한 평균 사정 지연은 588.50 ± 85.03 (평균 ± SEM)입니다. 실험 그룹은 교미를 위해 발정적인 암컷에게 접근 할 수 없었던 성적 경험이있는 대조군과 비교되었다 (n = 6). 위와 같이 테스트는 적색 백열등 아래에서 동물의 일반적인 야행성 2 시간 동안 진행되었습니다. 동물을 죽이고, 고정하고, 차가운 마이크로톰 절편 (위와 같이) 한 후, VTA의 XNUMX 개의 로스트 로코 달 수준을 나타내는 각 동물의 XNUMX 개의 절편을 면역 조직 화학을 위해 선택했습니다. 과목 수 (n) 각 수준의 셀 수에 사용됩니다. 표 4. 섹션은 상기와 같이 DAB와 함께 Fos (1 : 7500; Santa Cruz Biotechnology)로 라벨링되었다. 이어서, 절편을 프리프로 -HCRT / orx (1 : 500) 및 티로신 하이드 록 실라 제 (TH; 1 : 2000; 밀리 포아)를 시아닌-접합 된 형광 이차 항체 (각각 1 : 200; Cy3 및 Cy2; Jackson ImmunoResearch, PA). 세포 카운트는 a에서 높은 (40x) 배율로 수행되었다 Leica (독일 Nusloch) DM 4000B 현미경 스테레오 조사자 치료 조건에 대해 맹인 실험자에 의한 소프트웨어 (MBF Bioscience, Williston, VT). 스테레오 조사자 소프트웨어를 사용하여 VTA의 각 수준 내의 모든 DA 셀을 포함하는 카운팅 필드를 정의했습니다. VTA의 4 가지 로스트로 세오 수준 각각에서 단일 초점 거리에서, 5 개의 세포 유형이 태깅되었다 : TH- 양성 뉴런, Fos-ir을 나타내는 TH- 양성 뉴런, hcrt /에 의한 직접 (체세포 적 혈장) 어프로치를 나타내는 TH- 양성 뉴런 orx 섬유, Fos-ir 및 hcrt / orx appositions를 보여주는 TH- 양성 뉴런, 마지막으로 TH 뉴런이 아닌 솔로 Fos- 양성 핵.

데이터 분석.

Fos 실험에서 세포 수에 대한 그룹 수단 및 최초의 이러한 실험으로부터의 웨스턴 블롯의 광학 밀도 측정치를 독립 샘플에 의해 비교 하였다. t 테스트. 일치 샘플 t 테스트는 OX의 수단으로 수행되었습니다.1 길항제 행동 실험. 거세, 삼중-라벨링 실험, 및 평균 발사 속도 및 트랙 당 세포 측정에서 세포 수를 ANOVA에 적용 하였다.

결과

hcrt / orx 신경 세포에서 Cosulation 증가 Fos 면역 반응

Fos-ir을 보여준 hcrt / orx-ir 세포의 비율은 hcrt / orx 세포에서 증가 된 Fos-ir을 보여주는, 교미 동물과 그룹 사이에서 유의하게 달랐다 (t(10) = 7.71; p <0.01) (표 1, Fig. 1). 이중 표지 된 hcrt / orx의 평균 수는 또한 그룹간에 유의하게 달랐다 (t(10) = 6.03; p <0.001). 놀랍게도, 교미 동물에서 내측 및 외측 계수 필드간에 Fos 양성 hcrt / orx 뉴런의 수에 차이가 발견되지 않았습니다 (데이터는 표시되지 않음) (해리스와 애스턴 - 존스, 2006). Fos-ir 핵 (Fos-only 및 이중-표지 된 hcrt / orx 뉴런)의 총 평균 수는 비접 종성 대조군보다 (보다) copulating 동물에서 유의하게 더 컸다 (t(10) = 16.97; p <0.001) (표 1).

이 테이블보기 : 

테이블 1. 

수컷 쥐의 hcrt / orx 뉴런에서 교미 중 Fos-ir 증가

거세는 시상 하부의 hcrt / orx 면역 반응성과 단백질을 감소시킵니다

모의 처리 된 대조군과 비교할 때, hcrt / orx-ir 뉴런의 수는 거세 후 세포 수 28 d에서 유의미한 감소를 나타냈다 (Fig. 2A()F(3,16) = 7.60; p <0.005). 이것은 관찰 된 집단에서 세포 수의 31.8 % 감소를 나타냅니다. 사후 특별 (터키) 시험은 가짜 처리 된 쥐 또는 7 또는 14 d 거세의 수 사이에 유의 한 차이가없는 것으로 밝혀졌다. 시상 하부 prepro-hcrt / orx의 후속 Western immunoblot 분석은 가짜 처리 된 대조군과 비교할 때 28 d castrates에서 hcrt / orx 밴드의 평균 광학 밀도가 크게 감소 함을 발견했습니다.Fig. 2B()t(8) = 2.99; p <0.05.).

그림 2. 

거세는 수컷 쥐 시상 하부에서 hcrt / orx-ir을 감소시킵니다. A, 하나의 반구에서 hcrt / orx- 표지 된 뉴런의 대표적인 현미경 사진은 거세 후 28 d만큼 세포 수의 유의 한 감소를 보여줍니다. 삽입 된 값은 반구 ± SEM 둘 다에 대한 평균 세포 계수이고; **p <0.005. 스케일 바, 200 μm; FX, 포 닉스. B웨스턴 면역 블롯은 28 d 거세의 시상 하부 프리프로 -HCRT / orx의 현저한 감소를 나타낸다. 각 밴드는 각 그룹에서 한 동물의 신호를 나타냅니다. 값은 β- 액틴에 대한 hcrt / orx에 대한 평균 ± SEM 광학 밀도 (od) 단위이며; *p <0.05. C, 28 d 거세에서 prepro-hcrt / orx에 대한 면역 블롯은 E를 보여줍니다2 오일 처리 된 대조군과 비교할 때 시상 하부 hcrt / orx 함량을 샴의 그것과 동등하게 유지합니다. 소문자가 같은 그룹은 크게 다르지 않습니다 (p <0.05).

에스트라 디올은 시상 하부 hcrt / orx 단백질 수준을 회복시킵니다

거세 또는 가짜 수술 후 28 d에서, 기름으로 처리 된 동물의 prepro-hcrt / orx 수치는 가짜 및 에스트라 디올 (E)보다 유의하게 낮았습니다 (E2)-처리 된 그룹 (F(3,9) = 8.47; p <0.005) (Fig. 2C). 일원 분산 분석 사후 (Tukey) 테스트 결과 프리프로 HCRT / ORX 수준이 가짜 및 E로 측정되었습니다.2처리 된 동물은 서로 다르지 않았고2 그룹은 DHT- 처리 된 동물과 다르지 않았다.

ERα는 hcrt / orx와 공 팽창성이 있으며 해부학 적으로 별개의 hcrt / orx 뉴런 집단에서 공 발현됩니다

핵 AR은 주요 hcrt / orx 뉴런 집단에서 복부로 제거되어 아치형 핵에서 시신경으로 중간 방향으로 퍼졌습니다. 동일한 뉴런에서 핵 AR 및 hcrt / orx가 발견 된 경우는 없었습니다 (데이터는 표시되지 않음). ERα는 시상 하부의 복부 범위에서 유사한 분포 패턴을 보였지만, ERα 표지는 복부 핵에서 더 광범위했다. 더 등쪽으로, ERα 표지는 zona incerta 아래의 내부 캡슐에서 dorsomedial hypothalamus (DMH)까지 중앙으로 확장되는 세포의 테이퍼 밴드에서 발견되었습니다. ERα에 대한 라벨은 hcrt / orx 뉴런에서 거의 발견되지 않았습니다 (조사 대상 인구의 1 % 미만). ERα가 hcrt / orx와 공존하는 것으로 나타 났을 때, 일반적으로 DMH (Fig. 3). 따라서, 시상 하부에서 hcrt / orx 뉴런은 ERα를 거의 나타내지 않지만 DMH 내에 또는 DMH 근처에있는 것의 높은 비율 (~ 65 %)은Fig. 3).

그림 3. 

ERα는 hcrt / orx와 공 팽창성이다. ERα 핵은 닫힌 원으로 표시되고, hcrt / orx 뉴런은 열린 원으로 표시되며, 이중 표지 된 ERα + hcrt / orx 세포는 별표로 표시됩니다. 숫자는 밀리미터 단위이며 브레 그마에 꼬리가 있습니다. AHN, 전방 시상 하부 핵; fx, 포 닉스; ot, 시신경; PVN, 뇌실 핵; VMH, 심실 시상 하부; 3v, 세번째 심실.

HCRT / ORX 수용체 차단은 교미를 손상시킵니다

차량과 비교하여 OX로 전처리1 길항제 SB 334867는 평균 지연 시간을 증가시켜 도입 및 평균 사정 빈도를 감소시켰다 (표 2). 페어 샘플 t 테스트 결과 SB 334867가 도입 대기 시간에 미치는 상당한 영향이 밝혀졌습니다 (t(8) = 3.31; p <0.05) 및 사정 빈도 (t(8) = 2.40; p <0.05). 약물 치료는 또한 마운트 및 사정에 대한 평균 지연 시간이 유의미하지 않게 증가하고 평균 도입 횟수를 감소시키는 것으로 나타났습니다.표 2).

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테이블 2. 

OX1 길항제 SB 334867가 남성의 행동을 손상시킵니다.

Hcrt-1 / orx-A는 VTA DA 뉴런 발사 속도와 인구 활동을 증가시키고 탈분극 비활성화를 유도합니다

hcrt-1 / orx-A (0.014 nmol)의 최저 용량은 비히클-처리 된 대조군과 비교하여 평균 VTA DA 뉴런 발사 속도를 증가시켰다 (Fig. 4B,C) (쌍별 비교; F(1,18) = 13.83, p <0.01; 혼합 된 2 × 3 ANOVA 후, F(1,10) = 13.67, p <0.005), 그러나 다른 용량의 hcrt-1 / orx-A는이 효과가 없었다. 이 용량은 2 × 3 ANOVA에서 검출 된 발화 속도에 대한 hcrt / orx의 중요한 주요 효과를 담당하는 것으로 보입니다. ㅏ 사후 (터키) 시험은 용량에 걸쳐 aCSF- 처리 된 대조군 사이의 비율에서 유의미한 차이를 나타내지 않았다. hcrt-1.4 / orx-A의 1 nmol 용량은 VTA DA 뉴런 집단 활동 (각 전극 트랙에서 자발적으로 활성화 된 뉴런의 수)을 유의하게 증가시켰다 (Fig. 4D) (쌍별 비교, F(1,24) = 6.42, p <0.05; 2 × 3 혼합 ANOVA에서 상당한 상호 작용 후, F(2,10) = 16.71, p <.001). 테스트 된 hcrt-1 / orx-A의 최고 용량 (140 nmol)은 DA 뉴런의 집단 활동 (트랙 당 세포)을 크게 감소 시켰습니다 (Fig. 4D) (140 nmol 용량에 대한 일회성 반복 측정 ANOVA, F(2,6) = 12.20; p <0.01). 이 감소는 전신 아포 모르핀 주사 (Tukey 's 사후 테스트).

그림 4. 

Hcrt / orx는 VTA DA 뉴런 활동을 조절합니다 생체내에서. A, 특징적인 넓은 활동 전위 및 IS / SD 파괴를 나타내는 전형적인 VTA DA 뉴런의 파형. B전형적인 파열 활성을 나타내는 동일한 비히클-처리 된 뉴런의, 상부, 발사 속도 및 패턴; 바닥, hcrt 0.014 / orx A의 1 nmol의 국소 주입 후 빠른 소성 뉴런이 관찰 됨 (n = 4). C, D, VTA DA 뉴런의 발사 속도 및 집단 활동에 대한 국소 적으로 주입 된 hcrt-1 / orx-A의 용량 관계. Hcrt-1 / orx-A (1.4 nmol; n = 5)는 인구 활동을 증가시킵니다. hcrt 140 / orx A의 1 nmol 후 인구 활동 감소 (n = 4)는 전신 아포 모르핀 (20 μg / kg)에 의해 역전되었다. 각 막대 안의 숫자는 기록 된 뉴런의 수를 나타냅니다. 평균 ± SEM이 도시되어있다. *p <0.05; **p <0.01.

hcrt / orx appositions와 TH 양성 VTA 뉴런 교미 후 Fos-ir 증가 보여

비 -TH 양성 뉴런에서 Fos-ir 핵의 평균 수에 대한 양방향 분석은 치료의 상당한 영향을 나타냈다 (F(1,38) = 38.88; p <0.001) 및 해부학 적 수준 (F(7,38) = 12.59; p <0.001),이 두 요소 간의 중요한 상호 작용 (F(7,38) = 7.45; p <0.001), 교미 중에 유도 된 Fos가 전방 계수 수준에서 우선적으로 나타남을 시사합니다. 이는 후속 일원 분산 분석에 의해 확인되었으며 사후 (Tukey) 테스트는 두 개의 가장 앞쪽 레벨 (“rostral”과“middle 1”)이 Fos-positive nuclei (F(3,24) = 9.48; p <0.001). 기본 Fos-ir가 수준에 따라 다르지 않은 비교 합 대조군의 경우는 동일하지 않았습니다.표 3). hcrt / orx 배열을 갖는 TH- 표지 된 뉴런의 백분율은 실험 처리에 의해 다르지 않았다; 그러나이 척도는 현저한 주음 경사 구배를 보였으며, 대부분의 주둥이 수준은 두 그룹에서 이들 뉴런의 비율이 상당히 높았습니다 (표 4()F(3,38) = 133.57; p <0.001). 이 발견은 우리가 전방 VTA에서 관찰 한 hcrt / orx 섬유의 더 높은 밀도와 일치합니다. Fos-ir을 나타내는 TH- 표지 된 뉴런의 백분율 (그러나 hcrt / orx 부착이 없음)은 치료 또는 로스트 로코 달 수준에 따라 다르지 않았습니다. Fos 및 hcrt / orx 배치를 모두 나타내는 TH 뉴런의 백분율은 치료의 상당한 효과를 나타냅니다 (F(1,38) = 8.62; p <0.01), 레벨 (F(3,38) = 4.53; p <0.01) 및 상호 작용 (F(3,38) = 4.53; p <0.01). 실험 그룹의 평균에 대한 단방향 ANOVA는 hcrt / orx 어 포지션이있는 TH 뉴런에서 교미 유도 Fos-ir이 로스트 랄 VTA에 위치한 세포 내에서 가장 두드러지게 발생 함을 시사합니다 (F(3,24) = 4.85; p <0.05).

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테이블 3. 

4 개의 연쇄 상승 수준에서 VTA의 비 TH- 양성 세포에서 Fos-ir 핵의 수

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테이블 4. 

HCRT / ORX 적응, Fos 또는 둘 다를 표시하는 TH 뉴런의 백분율

토론

교미 후 LHA에서 hcrt / orx 뉴런의 Fos-ir 증가는이 세포들의 활성화가 남성 생식 행동을 동반한다는 것을 시사한다.Morgan과 Curran, 1991). 이러한 데이터는 발랄한 여성 냄새에 노출 된 후 LHA에서 증가 된 대사 활동을보고하는 초기 2- 데 옥시 글루코스 연구와 일치합니다 (Orsini 등, 1985). 이 효과는 mPOA와 같은 hcrt / orx 뉴런 터미널 영역에서 향상된 hcrt / orx 전송을 반영 할 수 있으며, 여기서 hcrt / orx는 남성 copulatory 행동을 촉진하는 것으로 나타났습니다.Gulia et al., 2003). hcrt / orx 뉴런에서 성 관련 Fos 유도는 hcrt / orx 뉴런이 자연 강화제에 민감하다는 개념과 일치합니다. 최근 연구에 따르면 Fos-ir는 음식 보상을 기대하도록 조절 된 쥐의 hcrt / orx 뉴런에서 증가했으며 이러한 Fos-ir의 증가는 조절 된 장소 선호 패러다임에서 동물의 선호 점수와 상관 관계가 있음을 보여줍니다.해리스 (Harris) 등, 2005). hcrt / orx 뉴런의 활성화는 보상 관련 현상 일 수있다. 상기 연구는 새로운 물체 자극에 노출 된 동물에서 Fos-ir hcrt / orx 세포의 강력한 증가의 부족을 보여 주었기 때문이다. 이 저자들은 또한 우리가 여기에보고 한 것과 호환되는 기저 (15 %), 참신 유발 (18 %), 음식 조절 (50 %) Fos-ir을 표현하는 hcrt / orx 뉴런의 백분율을보고합니다 (12 % 기본 대 40) % 유발 유도). 이러한 관찰은 hcrt / orx 뉴런이 음식 및 섹스와 같은 자연적인 보상에 의해 활성화됨을 시사합니다.

여기에 기술 된 hcrt / orx의 에스트로겐 조절은 남성의 성 행동에 대한 저 크레오 틴 조절에 대한 추가 증거를 제공합니다. 여기에보고 된 hcrt / orx loss의 시간 경과는 거세 후에 남성의 성 행동이 몇 주가 걸리는 것을 보여주는 고전적인 행동 데이터와 호환되며, 또한 E2 행동의 회복에 필요한 DHT보다는 (헐 (Hull) 등, 2006). 더 이상의 실험없이, 우리는 E가없는 상태에서 hcrt / orx가 지속적으로 존재하는 메커니즘에 대해서만 추측 할 수있다2. 가장 간단한 설명은 감소 된 hcrt / orx 레벨까지의 지연 시간이 송신기의 소포 저장소에서 쉽게 정량화 할 수있는 고갈에 대한 레이턴시를 반영한다는 것이다. 아래에 논의 된 바와 같이, hcrt / orx 뉴런에 ER의 부재는 그러한 수용체를 함유하는 뉴런으로부터의 입력에 의한 hcrt / orx 발현의 조절을 시사한다. 신경 펩티드 합성 때문에Enyeart et al., 1987), 운동성 (Shakiryanova et al., 2005) 및 방출은 활동에 따른 현상 (Fulop et al., 2005), hcrt / orx 신경 흥분성에서 postcastration 감소스미스 (Smith) 등, 2002)는 이러한 과정에 부정적인 영향을 미쳐 펩티드 방출 속도를 느리게하여 합성 수준의 감소가 한동안 명백해지지 않을 수있다. 어떤 메커니즘이든, 스테로이드의 작용은 펩티드의 기본 수준을 유지하는 복잡한 캐스케이드의 첫 번째 요소 인 것 같습니다.

hcrt / orx 뉴런이 에너지 균형과 관련된 체액 인자에 반응하여 음식 섭취를 조절하는 것처럼 (Olszewski 등, 2003; Burdakov 등, 2006), hcrt / orx 뉴런은 또한 호르몬 환경에 민감한 것으로 보이고 유사한 방식으로 생식 행동을 촉진 할 수있다. 여기에 제시된 자료는 기저 hcrt / orx 발현이 E에 의해 유지됨을 시사2. hcrt / orx의 완전한 보완을 표현하는 생식선 손상이없는 동물에서,이 송신기는 남성의 성적인 행동과 보상에 중요한 구조에서의 처리를 촉진 할 것입니다. hcrt / orx 뉴런은 mPOA, stria terminalis (BNST)의 베드 핵, VTA (Peyron 등, 1998; Sakurai 등, 2005) (남성 성적 행동 표현에 중요한 것으로 알려져 있음) 헐 (Hull) 등, 2006). 거세 후 hcrt / orx의 감소는 이러한 구조에 대한 중요한 흥분성 투입 원을 감소시켜 행동을 방해 할 것으로 예상된다.

ER 활성화가 기저 hcrt / orx 발현을 유지하는 방식은 추가적인 연구를 기다리고있다; 그러나, 그것은 LHA로 투사되는 ERα- 발현 뇌 영역의 구 심성에 의해 유도 될 가능성이있다.Simerly et al., 1990; 요시다 (Yoshida) 등의 2006), 특히 일부 흥분성 돌기 (예 : BNST 및 mPOA (2002, 조지와 애스턴 존스; 헤니와 존스, 2006)]. 우리는 hcrt / orx와 AR의 colocalization을보고하지 않으며, 일부 hcrt / orx 뉴런이 ERα- 면역 양성 임에도 불구하고, 이들 세포는 거세의 현저한 효과를 설명하기에 충분히 많지 않으며, 그것들이 거세 후 hcrt / orx 내용 (도 2 2A, 3). 우리는 또한 ERα-ir 핵 및 hcrt / orx 뉴런이 종종 병치되어 인접 ERα 함유 세포에 의해 hcrt / orx 뉴런 및 유전자 발현 활성의 국소 조절 가능성을 증가 시킨다고보고한다. 이 유형의 흥분성 국소 회로 활동의 중요성은 hcrt / orx 시스템 (Li 등, 2002). 그러나, 필수 해부학 적 실험이 hcrt / orx 뉴런 상에 ERα- 함유 세포에 의해 생성 된 흥분성 시냅스를 보일 때까지, hcrt / orx의 호르몬-의존성, 구 심성-구동 발현은 가정 될 수 없다. Hcrt 표현은 일주일에 변동 (Taheri et al., 2000), 임신 중 (Kanenishi 등, 2004) 및 다양한식이 조작 (Cai 등, 1999; Griffond et al., 1999). 역학을 조절하는 분자 메커니즘 hcrt 발현은 특성화되지 않았으므로, 핵에서 막까지의 경로를 추적하고, 현재 hcrt / orx 발현에 영향을 줄 수있는 후보 신호 전달 분자를 명명하는 것은 어렵다.

hcrt / orx 신호가 성과 같은 행동을 강화하는 데 관여한다는 개념은 OX 치료 후 성행위의 장애를 보여주는 데이터에 의해 뒷받침됩니다1 길항제 SB 334867 (표 2). 코카인자가 투여의 스트레스로 인한 복직을 차단하는 데 사용 된 것과 유사한 용량Boutrel et al., 2005), SB 334867는 도입 대기 시간을 크게 증가시키고 사정 횟수를 줄임으로써 hcrt / orx 전송 차단이 발정 암컷의 인센티브 특성에 영향을 줄 수 있음을 시사합니다.

DA는 보상, 인센티브 동기 부여 및 적응 행동에 중요한 신경 전달 물질입니다 (Berridge and Robinson, 1998; 이케 모토와 판세 프, 1999; 와이즈, 2004). 우리는 VTA DA 뉴런 활동에 hcrt / orx의 강력한 복용량 의존 흥분 효과를 관찰. 이 발견 강화에서 hcrt / orx의 역할을 지원 하 고 mesolimbic DA 시스템 hcrt / orx 프로젝션 남성 성적인 행동을 향상시키는 mPOA 외부 궤적을 제안합니다. 시험 된 최저 용량 (0.014 nmol)에서 hcrt / orx는 집단 활동 (세포 / 트랙)에 영향을 미치지 않으면 서 발사 속도를 높였습니다 (Fig. 4C). 중간 용량 (1.4 nmol)에서 DA 뉴런의 집단 활동이 증가하여 이전에 정지 된 과분극 뉴런이 활성화되었음을 나타냅니다 (Fig. 4D). 최고 용량 (140 nmol)에서 VTA DA 뉴런의 집단 활동이 감소했습니다. 흥미롭게도, VTA DA 뉴런 집단 활성의 hcrt / orx- 유도 감소는 DA 작용제 아포 모르핀의 급성 투여에 의해 역전되었다 (Fig. 4D). 정상적인 동물에서, 아포 모르핀은자가 수용체를 활성화시킴으로써 DA 뉴런을 과분극 화시키고 그들의 발사 속도 및 집단 활성을 감소시킨다. 그러나 만성 항 정신병 약 치료 또는 남용 약물로 반복 치료 한 후 아포 모르핀은 약물로 인한 인구 감소를 역전시킬 수 있습니다.그레이스 (Grace) 등, 1997; NUM 앤 청, 2006). 아포 모르핀은 과다 여기 된 세포를 재분극하여 발사를 재개함으로써 탈분극 불 활성화를 역전시키는 것으로 생각된다. 함께, 이들 데이터는 hcrt / orx가 VTA DA 뉴런에 대해 용량 의존적 흥분 효과를 발휘하며, 이는 이전과 일치 함을 시사한다 체외에서 일 (Korotkova et al., 2003).

LHA에서 VTA로 내려가는 경로의 중요성은 많은 실험에서 탐구되었습니다 (Bielajew와 Shizgal, 1986; Shizgal, 1989; 당신 외, 2001). 이러한 데이터는 시술과 같은 시상 하부 매개 된 동기 행동 동안 NAc DA의 증가를 시사한다.Pfaus 등, 1990; Wenkstern et al., 1993) 또는 수유 (Hernandez and Hoebel, 1988; 라다 (Rada) 등, 2005)는 이러한 내림차순 예측에 의존 할 수 있습니다. 이러한 돌기가 hcrt / orx를 함유하는 것은 hcrt / orx의 VTA 내 주사 후 NAc DA 유출이 증가하는 것으로 보이는 실험에 의해 뒷받침된다 (나리타 (Narita) 등, 2006). 시상 하부 내에서 세로토닌 [5- 하이드 록시 트립 타민 (5-HT)]은 LHA에서 hcrt / orx 뉴런을 강력하게 과분극시킬 수 있습니다.Li 등, 2002). 선택적 세로토닌 재 흡수 억제제 또는 5-HT 자체는 hcrt / orx- 발현 세포의 주요 집단 근처의 LHA로 역 투석되어 기저 및 암 유발 NAc DA 방출을 줄이고 교미를 손상시킵니다 (Lorrain et al., 1997, 1999). 교미 중 hcrt / orx 뉴런의 활성화와 hcrt / orx에 의한 VTA DA 뉴런의 활성화를 보여주는 위에 제시된 데이터에 비추어 볼 때, VTA에 대한 hcrt / orx 투영의 하강은 성 관련 NAc DA 방출을 중재 할 수 있다고 주장합니다. 또한, LHA 5-HT에 의한 이들 돌기의 억제는 NAc DA 방출 및 성적 행동에 대한 5-HT의 억제 효과를 설명 할 수있다.

hcrt / orx-DA 상호 작용에 대한 해부학 적 기질은 TH-positive VTA 뉴런이 hcrt / orx 시스템에 의해 innervated되고 copulation과 같은 보상 자극에 노출 될 때 증가 된 Fos-ir을 보여줍니다.Fig. 5, 표 4). hcrt / orx에 의해 영향을받은 TH 뉴런에서 Fos 유도가 교미 동물의 전방 VTA에서만 검출 되었기 때문에이 효과는 행동 관련성과 공간 특이성을 모두 보여 주었다. DA 세포가 hcrt / orx 뉴런의 주요 집단에 꼬리가 있기 때문에 VTA 의이 부분 에이 활성화 패턴이 나타나는 것은 아마도 주목할 만하지 않습니다. 하행 섬유는 뇌간에서 더 원거리 대상으로 분배하기 전에이 영역을 통과합니다 (Peyron 등, 1998).

그림 5. 

Copulation은 hcrt / orx에 의해 영향을받는 VTA DA 뉴런에서 Fos-ir을 유도합니다. A, VTA에서 TH, hcrt / orx 및 Fos 표지를 보여주는 현미경 사진. 화살표는 hcrt / orx 배치를 갖는 Fos- 양성 TH 뉴런을 나타내고; 별표는 배치없이 이중 표지 뉴런을 표시합니다. 스케일 바, 45 μm. B, apposition에서 hcrt / orx bouton의 사이트를 나타내는 화살표가있는 Fos-positive TH 뉴런의 세부 사항. C, 카운팅에 사용 된 VTA의 로스트로 세컬 레벨을 나타내는 코로 날 섹션 (어두운 음영). 각 섹션의 왼쪽 상단에있는 숫자는 브레 그마에서 밀리미터 단위입니다. 오른쪽 상단의 숫자는 해당 수준에서 셀 밀도의 평균 ± SEM 추정치입니다. 상자는 현미경 사진의 영역을 나타냅니다 A.

이 데이터는 생식선 스테로이드가 동기 행동에 연루된 DA 시스템에 대한 시상 하부 입력에 영향을 줄 수있는 새로운 경로를 제안합니다.Fig. 6). 그들은 또한 흥분, 섭취 행동 및 약물 탐색을 포함하여 hcrt / orx에 의해 규제되는 행동 목록에 성적 행동을 추가합니다.

그림 6. 

생식선 스테로이드에 의한 hcrt / orx 조절 및 hcrt / orx에 의한 VTA DA 조절 모델. 아로마 타제에 의해 생식선 테스토스테론으로부터 합성 된 에스트라 디올은 BNST, mPOA 및 LHA에서 ERα- 함유 뉴런에 작용한다. 이러한 구조는 시상 하부 hcrt / orx 뉴런으로 투영됩니다. 이들 구조로부터의 흥분성 투영은 스테로이드-민감성 방식으로 hcrt / orx 뉴런 및 유전자 발현 활성에 영향을 미칠 수있다. VTA 로의 Hcrt / orx 투영은 남성의 성 행동 동안 중뇌 DA 뉴런 활동을 향상시킨다. 이 효과는 hcrt / orx 활동을 억제하는 성행위 및 NAc DA 방출을 방해하는 5-HT의 LHA 내 주입에 의해 차단 될 수 있습니다.

각주

  • 4 월 21, 2006 수신
  • 개정판에 1 월 23, 2007이 (가) 접수되었습니다.
  • 수락 한 2 월 8, 2007.

  • 이 작업은 미국 공중 보건 서비스 보조금 MH073314 (JWM), MH40826 및 MH01714 (EMH) 및 AA12435 (R.-YS)에 의해 지원되었습니다. 도움을 주신 Samir Haj-Dahmane 박사와 현미경 장비 공급에 대한 Zuoxin Wang 박사에게 감사드립니다.

  • FL 32306-1270, Tallahassee, Florida State University의 심리학과 John Muschamp에게 해당 내용을 설명해야합니다. [이메일 보호]

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