इन्सुलिनले भोजन पछि तृप्ति संकेत गर्न इन्सुलिन रिसेप्टर्स (InsRs) सक्रिय गर्दछ। यद्यपि मोटोपनाको बढ्दो घटनाहरू, जसले इन्सुलिनको स्तर वृद्धि गर्दछ, यसले इन्सुलिनले मस्तिष्क केन्द्रहरूमा पनि काम गर्न सक्छ जसले प्रेरणा र इनामलाई नियमित गर्दछ। हामी यहाँ रिपोर्ट गर्दछौं कि इन्सुलिनले कार्य सम्भावित-निर्भर डोपामाइन (डीए) लाई न्यूक्लियस एक्म्बेंस (एनएसी) र पुडमेट-मा पुट्नेनको अप्रत्यक्ष संयन्त्रको माध्यमबाट विस्तार गर्न सक्छ जसले इन्टरसलाई अभिव्यक्त गर्ने स्ट्रिटियल कोलिनेर्जिक इन्टर्न्युरन्स समावेश गर्दछ। यसबाहेक, मुसा, खाना प्रतिबन्ध (FR) र एक obesogenic (OB) आहार मा दुई फरक पुरानो आहार हेरफेर, विपरीत क्रमशः FR मा बृद्धि प्रतिक्रिया संग, इंसुलिन गर्न स्ट्र्याटल डीए रिलीज को संवेदनशीलता बदल्छ, तर OB मा प्रतिक्रिया को हानि। व्यवहार अध्ययनले देखाए कि जोडी ग्लूकोज समाधानको स्वादको लागि प्राथमिकता प्राप्त गर्न एनएसी खोलमा अतुलनीय इन्सुलिन स्तर आवश्यक छ। एकसाथ, यी डाटाले सly्केत गर्दछ कि स्ट्र्याटल इन्सुलिन स sign्केतनले खाद्य छनौटहरूमा प्रभाव पार्न डीए रिलिजन बढाउँदछ।

यो राम्रोसँग स्थापित छ कि भोजनको बखत र पछि प्लाज्मा इन्सुलिनको निरन्तर वृद्धिले हाइपोथैलेमसमा इन्सुलिन रिसेप्टर्स (InsRs) सक्रिय गर्दछ, जसले भूक सर्किटहरूलाई नकारात्मक प्रतिक्रिया प्रदान गर्दछ जुन थप खानपान घट्छ।^{1, 2, 3}। ब्रेन इन्सुलिन मुख्यतया स्वादुपीय कोशिकाबाट उत्पन्न हुन्छ, रगतमा मस्तिष्कमा प्लाज्माबाट सक्रिय यातायातको साथ – मस्तिष्क बाधा^{4, 5, 6, 7, 8}, यद्यपि न्यूरोनल इन्सुलिन संश्लेषण र रिलीजको लागि बढ्दो प्रमाणहरू छन्, साथै^{1, 9}। विशेष रूपमा, InsRs को अभिव्यक्ति केवल हाइपोथैलेमसमा सीमित छैन, जबकि अतिरिक्त-हाइपोथैलेमिक InsRs को कार्य समाधान नगरिएको छ।^{1, 2, 3}। मोटापा र टाइप २ मधुमेहको बढ्दो घटनालाई देखते, जसमा इन्सुलिनको सर्कुलेट स्तर सँधै माथि बढ्छ र दिमा इन्सुलिन यातायात र रिसेप्टर संवेदनशीलता घटाइन्छ^{3, 8, 10, 11}, प्रेरणा र इनामलाई नियन्त्रण गर्ने मस्तिष्क क्षेत्रमा इन्सुलिनको कार्य बुझ्नको लागि यो महत्वपूर्ण छ। विशेष रुचिको मस्तिष्क क्षेत्रहरूमा न्यूक्लियस एक्युम्बन्स (एनएसी), जो दुबै खाना र औषधिहरूको पुरस्कृत प्रभावहरूको मध्यस्थता गर्दछ^{12, 13}, र caudate – putamen (CPu), जो बानीमा आधारित आचरण र लालसामा भूमिका निभाउँछ।¹³। InsR हरू यी क्षेत्रहरूमा अभिव्यक्त हुन्छन, सबै भन्दा धेरै घनत्व एनएएसीमा देखा पर्दछ^{3, 14}; इन्सआरहरू मध्यब्रिनमा डोपामाइन (डीए) न्युरोनहरू द्वारा अभिव्यक्त हुन्छन्, भेन्ट्रल टेमेन्टल एरिया (VTA) र substantia nigra pars कम्प्याक्ट्या (SNc) सहित¹⁵। मस्तिष्क इन्सुलिन स्तर प्लाज्मा इन्सुलिन सांद्रता र शरीर adiposity को आनुपातिक हो^{6, 7, 8}, इन्सुलिनले इन दिमागका क्षेत्रहरूमा InsRs मा काम गर्न सक्छ भन्ने परिकल्पनालाई अग्रणी रूपमा खाना इनामलाई प्रभावित गर्दछ^{3, 16, 17}.

स्ट्र्याटल synaptosomes, heterologous कोशिका, मस्तिष्क स्लाइसहरू र मा अघिल्लो अध्ययन vivo मा ईन्सआरको इन्सुलिन सक्रियताले डीए ट्रान्सपोर्टर (डीएटी) द्वारा डीए अपटेकमा वृद्धि हुन्छ भन्ने देखाइएको छ^{18, 19, 20, 21, 22, 23}। यो प्रक्रियामा PI3 किननेस स sign्केतक मार्ग समावेश गर्दछ^{19, 20}, र परिणाम DAT सम्मिलितको प्लाज्मा झिल्लीमा¹⁹। प्रसारण इन्सुलिन स्तर गतिशील रूपले स्ट्राइटल DAT क्रियाकलापलाई परिमार्जन गर्दछ, घटेको DA अपटेक र DAT सतह अभिव्यक्तिको साथ मधुमेहको जनावर मोडेलहरूमा देखा पर्दछ र खाना प्रतिबन्ध (FR) पछि^{20, 21}। DAT गतिविधिमा इन्सुलिन-निर्भर बृद्धि बढाइएको बाहिरी DA एकाग्रता ([DA] लाई कम गर्न देखाईएको छ)_o) VTA मा²³, DA रिलिज र अपटेक बीचको सन्तुलनमा परिवर्तन देखाउँदै। तृप्तिमा इन्सुलिनको स्थापित भूमिकासँग अनुरूप, VTA मा इन्सुलिनको तीव्र माइक्रोइन्जेक्शनले भोजन इनाम घटाउन सक्छ^{23, 24}जबकि, VTA र SNc DA न्यूरॉन्समा चूहोंले INR हरूको कमीले खाद्यान्नको सेवन बढाउँछन् र मोटो हुन्छन्।²⁵। यद्यपि इन्सुलिनले VTA DA न्यूरॉन्समा उत्तेजनात्मक इनपुटको दीर्घ-अवधि डिप्रेसन प्रेरित गर्न सक्दछ²⁴, फेरि तृप्तिमा भूमिका अनुरूप, इन्सुलिन एक्सपोजरले डीए न्युरोन फायरिंग दर पनि बढाउन सक्छ, संभवतः डीए रिलिजमेन्ट र अटोरेसेप्टर-मध्यस्थता निषेध घटाएर²⁵। स्ट्रिएटल डीए रिलिजमा इन्सुलिनको शुद्ध प्रभावको पूर्वानुमान गर्न गाह्रो छ। वास्तवमा स्ट्राइटल डीए मा इन्सुलिनको प्रभाव को अध्ययन को नतिजा पूर्व vivo स्लाइसहरू¹⁹ र खाद्य इनाममा एनएसीमा इन्सुलिनको स्थानीय माइक्रोइन्जेक्शनको प्रभाव²⁶ विरोधाभासपूर्ण देखिन्छ। यसलाई हल गर्नका लागि, हामीले अक्षांश डीए रिलिज र एनएसी र सीपीयू मा अक्षुण्ण सूक्ष्म वातावरणमा अपटेक मूल्यांकन गर्नुभयो। पूर्व vivo स्ट्रिटल स्लाइसहरू द्रुत-स्क्यान चक्रीय भोल्टमेट्री (FCV) को प्रयोग गरेर, र इन्सुलिन सिग्नलिंगको प्रभावहरू NAC मा इनाम व्यवहारमा निर्धारण गर्दछ। vivo मा.

हाम्रो अध्ययनले देखाए कि एनएसी र सीपीयूमा इन्सुलिनको प्राथमिक प्रभाव डीए रिटेल बढाउने हो, डीए अपटेकमा समवर्ती वृद्धि भए पनि। डीए रिलिजको यस गतिशील नियमनमा स्ट्राइटल कोलिनेर्जिक इन्टर्न्यूरन्स (सीआई) का उत्तेजनामा ​​इन्सुलिन-आश्रित बृद्धि समावेश छ, जसले निकोटीनिक एसिटिल्कोलीन (एसीएच) रिसेप्टर्स (एनएसीएचआर) को सक्रियता मार्फत वर्धित डीए रिलिजित गर्दछ। ChIs र DA रिलिजमा इन्सुलिनको प्रभाव InsRs द्वारा मध्यस्थता गर्दछ। विशेष रूपमा, डीए रिलिजमा इन्सुलिनको प्रभाव एफआर मुसाबाट स्लाइसहरूमा विस्तारित हुन्छ, तर ओब्सोजेनिक (ओबी) आहारमा मुसामा धुलो हुन्छ। यी डाटाले DA रिलीजको प्रवर्धन देखाउँदै पूर्व vivo इन्सुलिनको स्लाइसले पूर्वानुमान निम्त्याउँछ कि इन्सुलिनले इनाम संकेतको रूपमा काम गर्न सक्छ vivo मा। वास्तवमा, समानान्तर व्यवहार अध्ययन स्वाद-प्राथमिकता कन्डिशनिंगमा NAC खोलमा इन्सुलिनको लागि भूमिका प्रदर्शन गर्दछ। सँगै मिलेर यी खोजहरूले इन्सुलिनको लागि नयाँ भूमिकालाई स a्केत गर्दछ जुन इनाम संकेतको रूपमा खाना छनौटमा प्रभाव पार्न सक्छ

InsRs मा अभिनय गर्ने इन्सुलिनले स्ट्राइटल DA रिलिज बढाउछ

स्थानीय रूपमा प्रारंभ गरिएको प्रारम्भिक परीक्षा [DA]_o मा FCV संग निगरानी पूर्व vivo स्ट्रिटिटल स्लाइसहरू साथ मुसाबाट विज्ञापन लाइब्रेम (AL) खाना र पानीमा पहुँचले अप्रत्याशित फेला पर्‍यो कि शारीरिक अनुप्रयोग प्रासंगिक सांद्रताको दायरा भर इन्सुलिनको तीक्ष्ण अनुप्रयोग^{1, 4} बढेको एकल पल्स-पैदा भयो [DA]_o (चित्र। 1-c), ईन्सुलिन ईसीको साथ₅₀ मानहरू (एकाग्रता जसमा प्रभाव आधा अधिकतम थियो) 2 – 12 nM (चित्र। 1b)। बढाइएको छ [DA]_o विशेष गरी अचम्मको कुरा थियो, जुन यो अधिकतम दरमा उल्लेखनीय बृद्धिसँगै आएको थियो।V_{अधिकतम}) DAT- मध्यस्थता प्रत्येक उपक्षेत्र मा अपटेक को लागी (तालिका 1), जसले पैदा भयो [DA] मा प्रतिस्पर्धी घटाउने_o, पहिले रिपोर्ट गरिए अनुसार^{22, 23}। यसको सट्टा, हामीले फेला पारेका छौं [DA]_o 20 nM इन्सुलिन द्वारा अधिकतम विस्तार गरिएको 55 – 30% थियो; सबैभन्दा ठूलो आनुपातिक प्रभावको साथ क्षेत्र नै एनएसी शेल थियो जुन स्ट्रिटल सबग्रीगन हो जुन उच्चतम ईन्सआर अभिव्यक्ति हो^{1, 14}। समान अवस्था अन्तर्गत 30 nM इन्सुलिनमा पर्दा स्लाइसहरूले स्ट्र्याटल डीए सामग्रीमा कुनै परिवर्तन देखाएन।पूरक छवि। 1a), इन्सुलिनले डायनामिक रिलीज रेगुलेसनमा परिवर्तन ल्याउँदछ, केवल डीए संश्लेषण अपग्रेड गर्नुको सट्टा। विशेष रूपमा, ईन्सुलिनको प्रभाव उत्पन्न गरियो [DA]_o Supraphysiological सांद्रता मा हराएको थियो - 100 एनएम (चित्र। 1b)। यो बढेको DAT गतिविधि ओभरटेक रिलिजको परिणाम थिएन, ईन्सुलिनको प्रभावको रूपमा V_{अधिकतम} यी सांद्रतामा पनि हराएको थियो (तालिका 1)। समग्रमा, यी तथ्या show्कहरूले देखाउँदछ कि अक्षुण्ण स्ट्राइटल माइक्रोइन्वाइन्टरनमा, ईन्सुलिनको प्रबल प्रभाव ईभोक गरिएको [DA]_o DA अपटेकमा समवर्ती वृद्धि भए पनि रिलिज बढाउनु हो।

  

  

(a) औसत एकल नाडी पैदा भयो [DA]_o एनएसी शेलमा, एनएसी कोर र सीपीयू पहिले र पछाडि इन्सुलिन (Ins) 30 nM का लागि चित्रण गरिएको; त्रुटि पट्टिहरू हटाइयो, तर हेर्नुहोस् (b); एर्रोले उत्तेजकको समयलाई जनाउँछ। इन्सुलिन बढाइयो [DA]_o शेलमा (55 ± 10% द्वारा), कोर (37 ± 5% द्वारा) र CPU (20 ± 4% द्वारा) (***P<०.०१)। (b) इन्सुलिनको प्रभाव शेलमा XIUMX M 1 एनएम) शारीरिक शृंखला भर एकाग्रतामा निर्भर थियो।n= 22 – 24, F_5,133= 14.471, P<०.०१), कोर (n= 36 – 76, F_5,308= 16.318, P<०.०१) र सीपीयू (n= 30 – 62, F_5,253= 13.763, P<०.०१), तर ≥१० एनएममा हरायो। (c) पीक-ईभोक गरिएको [डीए] को प्रतिनिधित्व अभिलेख_o औषधि अनुप्रयोग (कोन) को अभावमा एनएसी कोरमा एकल साइटमा बनाम समय, इन्सुलिन (30 एनएम) को आवेदनको समयमा वा जब एक इन्सर अवरोधकर्ता HNMPA (5 μM) को उपस्थितिमा इन्सुलिन लागू गरियो। (d) औसत चोटी बनाइएको [DA]_o HNMPA, InsR विरोधी S30 (961 μM) र PI1K अवरोधकर्ता LY3 (294002 μM) द्वारा इन्सुलिन (1 nM) को प्रभावको रोकथाम देखाउँदै डेटा, तर IGF-1R अवरोधक पीपीपी (1 μM) द्वारा होईनn= 29 – 76; P> ०.0.9 बनाम मात्र इन्सुलिन)। को लागी चित्र। 1-D, n= 3 – 6 चियाबाट प्रत्येक औषधि वा इन्सुलिन एकाग्रता को लागी प्रति subregion साइटहरूको संख्या; एक-तर्फी ANOVA, Tukey ईमानदार महत्व परीक्षण (HSD)। हेर्नुहोस् पूरक छवि। 1b, c NAc शेल र CPu डाटा को लागी।

• पूर्ण आकार छवि (98 KB)

 

 

किनभने इन्सुलिनले इन्सुलिन-जस्तो बृद्धि कारक 1 रिसेप्टर्स (IGF-1Rs) मा पनि काम गर्न सक्छ, यद्यपि 100 nM (ref) भन्दा बढि सांद्रतामा। 1), हामी पुष्टि गर्न खोज्यौं कि ईन्सुलिनको बढाइएको प्रभाव पैदा भएको [DA] मा_o InsR आश्रित थियो। यो केस प्रमाणित भयो, किनकि यो प्रभाव एक इंट्रासेल्युलर InsR अवरोधकर्ता, हाइड्रोक्सी-एक्सएनयूएमएक्स-नेफ्थालेनिलमेथिल्फोस्फोनिक एसिड (HNMPA) द्वारा रोकिएको थियो, र एक InsR विरोधी, S2 द्वारा, तर IGF-961Rs, पिक्रोपोडिफिलको एक छनौट अवरोधकर्ता द्वारा होईन।²⁴ (पीपीपी; चित्र। 1c, डी र पूरक छवि। 1b, c)। हामीले त्यसपछि PI3 किननेसको संलग्नता जाँच्यौं, जसले DAT को इन्सुलिन-निर्भर नियमनको लागि जिम्मेदार सaling्केतक मार्ग सुरू गर्दछ।¹⁹। 1 μM को एकाग्रतामा, P13K अवरोधकर्ता LY249002 एक्लो पीक-ईभोक्ड [DA] मा कुनै प्रभाव भएन_o or V_{अधिकतम} (n= 29 – 76 साइटहरू (NAc कोर) प्रति औषधि, P> ०.०0.05, एकतर्फी विश्लेषण (एनोवा); डाटा देखाइएको छैन), अझै इन्स्कुलिन [DA] मा इन्सुलिनको प्रभाव रोकियो।_o सबै स्ट्र्याटल सबग्रीगन्समा (चित्र। 1d र पूरक छवि। 1b, c).

डीए अक्ष र ChIs मा InsR को स्थानीयकरण

मा देखिएको वृद्धि V_{अधिकतम} इन्सुलिनको शारीरिक स्तरको साथ DA अपटेकको लागि DA axons मा InsRs को उपस्थितिलाई सlies्केत गर्दछ, जस्तो कि विभिन्न स्ट्राइटल तयारीहरूमा अघिल्लो परिणामहरू^{18, 19, 20, 21, 22}। यद्यपि मिडब्रेन डीए न्यूरन्समा InsRs को कार्यात्मक अभिव्यक्ति प्रदर्शन गरिएको छ^{15, 23, 24, 25}, स्ट्र्याटल डीए एक्सनमा InsR अभिव्यक्ति रिपोर्ट गरिएको छैन। हामीले यसलाई इम्युनो हिस्टोकेमिस्ट्री प्रयोग गरी सम्बोधन गरे। DA अक्षहरुमा InsR स्थानीयकरण को मात्र स्ट्रिमटम सीमित मात्रात्मक मात्रात्मक आकलन मा घन InsR इम्युनोरएक्टिविटी, जो DA- संश्लेषण एंजाइम, टायरोसिन हाइड्रोक्लाइसे (TH) को लागि प्रतिरक्षाको पहिचान गरिएको थियो। यसैले हामीले पहिले रिपोर्ट गरिएको प्रोटोकल अपनाएका छौं²⁷, जसमा इन्सआर पंक्टा गणना गरीरहेको छ जुन TH + प्रोफाइलको साथ ओभरल्याप गरियो सामान्य छवि दृश्यमा र फेरि गणना गर्दा InsR छवि मात्र घुमाइएको थियो 90 ° द्वारा। यदि InsR र TH + प्रोफाइल को स्पष्ट ओभरल्याप nonpecific थियो, यो प्रक्रिया सांख्यिकीय समान गणना दिन कि सामान्य वा 90 ° चरण बाहिर। यद्यपि यस विश्लेषणले 14 ± 9% को प्रोफाईलहरू सहित InsR पन्टाको ओभरल्यापमा कमी देखायो।n= 42 क्षेत्रहरू, P<००१, दुई-पुच्छे जोडीयो t-उत्तम डाटा देखाइएको छैन), DA axons मा InsR उपस्थिति पुष्टि गर्दै। यद्यपि अधिक चासोको कुरा, स्ट्रियाटमको इन्सआर इम्युनोलाबिलिंगले ठूलो कोशिका निकायहरूमा छुट्टै इन्सआर अभिव्यक्ति प्रकट गर्‍यो जुन एसीएच संश्लेषणको लागि आवश्यक एन्जाइम कोलोन एसिटाइलट्रान्सफेरेस (सीएटी) को को-इम्यूनोलाबेलिंग द्वारा स्ट्रिएटल सीआई भनेर चिनिन्थ्यो। इलेक्ट्रोफिजिकल मापदण्डको प्रयोग गर्दै²⁸ प्रारम्भिक सम्पूर्ण सेल-रेकर्डि studies अध्ययनहरूमा ChIs पहिचान गर्न, धेरै न्यूरनहरू बायोसाइटिनले भरिएका थिए र त्यसपछि इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्रीको लागि प्रशोधन गरिएको थियो; यी सबै (4 / 4) दुबै InsR र ChAT को लागि प्रतिरोधक थिएचित्र। 2a)। एनएसीमा इन्सआर र चाट को-स्थानीयकरणको अनुवर्ती मूल्यांकनले पुष्टि गर्यो कि लगभग सबै ChAT + न्युरोनहरूले InsR (96%; n= 27 / 28 दुईवटा मुसाबाट चार वर्गमा न्यूरन्स)।

  

  

(a) CHI बायोसाइटिनले भरियो, त्यसपछि ChAT को लागि इम्युनोबेलेबल, र InsR (4 / 4 बायोसाइटिनले भरिएको ChI को प्रतिनिधि); मर्ज गरिएको छविले सह-स्थानीयकरण देखाउँदछ; स्केल बार, 10 μm। (b-e) इन्टुलिन (3 nM) भन्दा पहिले र पछाडि (200-s अवधि; 300, 400 र 120 pA; 30-s अन्तराल) Depolariasing वर्तमान दाल श्रृंखला को एक श्रृंखला गर्न स्ट्र्याटल ChIs को प्रतिक्रिया। (b) ची (अपर) मा स्पाइक फ्रिक्वेन्सी अनुकूलन वर्तमान इन्जेक्शनको समयमा कार्य सम्भावित (एपी) डिस्चार्जको घाटामा देखिएको छ, जबकि स्पिकिंग इन्सुलिन (तल्लो) को वर्तमान नाडी भरि रहन्छ; पूरा डाटा सेटमा देखाइएको छ d। (c) एपी नम्बरमा इन्सुलिन प्रेरित बृद्धिको प्रतिनिधि समय पाठ्यक्रम ChI मा प्रत्येक वर्तमान चरणको साथ b। (d) वर्तमान दालहरू बखत एपी नम्बरको सारांश अघि र पछि इन्सुलिन जोखिमको शिखर प्रभावमा डेलिभर गरियो।n= 21 जोडी उत्तेजितहरू, 7 न्यूरन्स, 5 चूहों) (e) इन्सुलिनको प्रभाव देखाउँदै मिल्ने प्रतिक्रियाहरू (+ इन्स) नियन्त्रण सर्तहरू अन्तर्गत (Con; n= 21 जोडी उत्तेजितहरू, 7 न्यूरन्स, ***P<००१, दुई-पुच्छे जोडीयो tउच्चतम), HNMPA (5 μM) को उपस्थितिमा (n= 12 जोडी उत्तेजितहरू, 4 न्यूरन्स, 4 मुसा, P>0.05, जोडी दुई-पुच्छे tसबैभन्दा नयाँ), र पीपीपीको उपस्थितिमा (1 μM) (n= 18 जोडी उत्तेजितहरू, 6 न्यूरन्स, 6 चूहों, **P<0.01, Wilcoxon जोडा मिलेको जोडी साइन र्याक टेस्ट)। (f) औसत एकल नाडी पैदा भयो [DA]_o NAc कोरमा mecamylamine (Mec; 30 μM) वा DHβE (5 μM) लाई 1% चोटी नियन्त्रणमा सामान्य बनाइएको (100 MM) पहिले र पछि इंसुलिनn= 20 – 40 साइटहरू प्रति subregion प्रति शर्त 3 – 4 मुसा बाट, P> ०.०0.05 बनाम नियन्त्रण, अनपेयर गरिएको t-उत्तम)। (g) औसत एकल नाडी पैदा भयो [DA]_o हेटेरोजिगस कन्ट्रोल (हेट) बाट फोरब्रेन स्लाइसहरू र ChAT KO चूहों इन्सुलिन भन्दा पहिले र पछाडि (30 nM), 100% चोटी नियन्त्रणमा सामान्यीकृत। इन्सुलिन बढाइयो [DA]_o 190 ± 23% द्वारा NAC खोलमा, NNC कोरमा 140 ± 8% र CPu मा 137 ± 12% द्वारा heterozygous चूहोंमा (n= 15 – 25 साइटहरू प्रति subregion 3 – 4 चूहों प्रति जीनोटाइप, **P<००१, ***P<०.०१ बनाम नियन्त्रण बनाइएको tसबैभन्दा नयाँ), तर उत्पन्न [DA] मा कुनै प्रभाव भएन_o कुनै पनि स्ट्रिटल सबग्रीगनमा ChAT KO चूहों (P> ०.१)।

• पूर्ण आकार छवि (167 KB)

 

 

इन्सुलिनले ची उत्साहीता बढाउँदछ

स्ट्र्याटल ChIs मा InsRs को कार्यक्षमता जाँच्न, हामीले CHI उत्तेजनामा ​​इन्सुलिनको प्रभावको जाँच गर्‍यौं सेल-सेल वर्तमान-क्ल्याम्प रेकर्डि usingको प्रयोग गरेर। ची उत्तेजना 3-s depulariasing वर्तमान दाल को श्रृंखला को उपयोग गरेर आकलन क्षमता को एक ट्रेन emitted कि spike फ्रिक्वेन्सी अनुकूलन प्रदर्शन गरियोचित्र। 2b), प्रायः हालको नाडीको अन्त्यबाट स्पिकि of गुमाउनेसँग। हड्तालको रूपमा, इन्सुलिन (30 एनएम) attenuated स्पाइक फ्रिक्वेन्सी अनुकूलन, परिणामस्वरूप समयको साथ कार्य सम्भावित संख्यामा प्रगतिशील बृद्धि हुन्छ (चित्र। 2c), अधिकतम बृद्धि संग (छवि। 2d, e) सामान्यतया 20 र 50 मिनेट इन्सुलिन जोखिमको बीचमा देखियो। इन्सुलिनको अभावमा, नियन्त्रण ChIs पैदा भएको कार्य क्षमताको संख्यामा कुनै परिवर्तन देखाउँदैन (P> ०.०0.05, दुई-पुच्छे जोडीयो t-उत्तम डाटा देखाइएको छैन); जब नियन्त्रण न्युरोन्सको साथ एकै समय अन्तरालमा निगरानी गरियो, इन्सुलिनमा पर्दा न्युरोनहरूले उत्पन्न कार्य क्षमताको संख्यामा उल्लेखनीय ठूलो परिवर्तन देखायो (नियन्त्रण nचार न्यूरन्स, इन्सुलिनबाट = 12 प्रोत्साहन जोडी n= सात न्युरोन्सबाट 21 प्रोत्साहन जोडी, F_1,25= 5.63, P<००0.05, मिश्रित उपायहरू दुई तर्फी ANOVA; डाटा देखाइएको छैन)। कार्य क्षमताको बढ्दो संख्यामा इन्सुलिनको प्रभाव HNMPA द्वारा रोकिएको थियो तर IGF-1R चयनकर्ता अवरोधकर्ता पीपीपीले (चित्र। 2e), प्रदर्शन गर्दै कि इन्सुलिन द्वारा Chi उत्तेजना वृद्धि INSR मध्यस्थता थियो।

ईन्सुलिन बृद्धि बढाइएको [DA]_o nAChRs र ACh आवश्यक छ

अघिल्लो अध्ययनले देखायो कि ChIs र ACh सम्भवतः DA axons मा NAChRs मार्फत स्ट्रिटल डीए रिलीज नियमित^{29, 30, 31, 32, 33, 34}। सीआईमा प्रचुर मात्रामा इन्सआर अभिव्यक्ति र तीव्र इन्सुलिन एक्सपोजरको साथ देखिएको सीआई उत्तेजनाको बृद्धिले सुझाव दियो कि यी न्यूरन्सहरू इन्सुलिनको नयाँ लक्ष्य हुनसक्दछन् जसले विस्तारित डीए रिलिज गर्न सक्दछ। यसको परीक्षणको लागि, हामीले मेकामाइलामाइन, एक गैर-चुनिंदा एनएसीएचआर विरोधी, वा डायहाइड्रो-ry-एरिथ्रोइडिन (DHβE), β2 सबुनिट-युक्त (β2 *) NAChRs को लागि एक छनौट विरोधीको उपस्थितिमा इन्सुलिनको प्रभाव जाँच्यौं। DA axons³⁵। रद्द गरियो [DA]_o दुबै ड्रग्सले एकल नाडी पैदा भएको [DA] को परिमाण घटाए पनि यि विपक्षीहरूको उपस्थितिमा सजिलै पत्ता लाग्यो।_o (उदाहरण को लागी, 13 द्वारा – 26% NAC कोर मा), पहिले रिपोर्ट गरीएको छ^{29, 30, 31, 32}। एसीएच र एनएसीएचआरको लागि भूमिकाको समर्थनमा, ईन्सुलिनको प्रभावलाई उत्पन्न गरियो [DA]_o या त mecamylamine वा DHβE द्वारा रोकिएको थियो (चित्र। 2F)। इन्सुलिन-वर्धित डीए रिलिजमा स्ट्रिएटल एसीएच संकेतको संलग्नता पुष्टि गर्न, हामी भित्र इन्सुलिनको प्रभाव जाँच्यौं। पूर्व vivo चूहाहरूबाट स्ट्र्याटल स्लाइसहरू जसमा ChAT अभिव्यक्ति आनुवंशिक रूपमा फोरब्रेन संरचनाहरूमा फुलिएको थियो (फोरब्रेन ChAT KO चूहों), स्ट्रिएटम सहित³²। यद्यपि यी माउसहरूमा ChIs अक्षुण्ण छन्, ACh संश्लेषण समाप्त भयो, जसले कमी आएकोमा देखाउँछ, तर अझै सजिलै पत्ता लगाउन सकिने एकल पल्स-ईभोक गरिएको छ [DA]_o, पहिले वर्णन गरिए अनुसार³²। हेटेरोजिगस लिटरमेटहरूलाई नियन्त्रणमा, इन्सुलिन (30 एनएम) बढाइयो [DA]_o एनएसी शेल र कोरमा र सीपीयूमा 37 – 90% (चित्र। 2g), मुसा स्ट्रियाटममा देखिने प्रवर्धन भन्दा बढी (उदाहरणका लागि, चित्र। 1)। यद्यपि, ईन्सुलिनको प्रभावलाई हटाइएको [DA] मा_o फोरब्रेनमा स्ट्र्याटल जटिल भर अनुपस्थित थियो ChAT के माईस, प्रदर्शन गर्दै कि डीए रिलिजको इन्सुलिन-मध्यस्थता वृद्धिलाई स्ट्राइटल एसीएच चाहिन्छ, तर ग्लुटामेट जस्ता ChIs बाट सह-रिलीज गरिएको ट्रान्समिटर होइन।³⁶.

पैदा गरिएको [DA] मा इन्सुलिनको प्रभाव_o खाना निर्भर छ

प्लाज्मा र मस्तिष्क इन्सुलिन सांद्रता शरीर adiposity को आनुपातिक हो^{6, 7, 8}, र ईन्सुलिन प्रति मस्तिष्क संवेदनशीलता मा क्षतिपूर्ति परिवर्तन गर्न सक्छ। त्यसकारण हामीले परिकल्पनाको परीक्षण गर्‍यौं कि डाईटीले इन्टुलिनको क्षमतालाई डीए रिलिज बढाउने क्षमतामा प्रभाव पार्दछ, मुसाबाट स्ट्र्याटल स्लाइसहरू प्रयोग गरेर कि त पुरानो एफआर वा ओबी आहार बनाम AL नियन्त्रणमा राखिन्छ। अपेक्षित रूपमा, प्लाज्मा इन्सुलिनको स्तर शरीरको वजनसँग सम्बन्धित छ, AL वा OB मुसाको तुलनामा FR मा कम इन्सुलिनको साथ (चित्र। 3a र तालिका 2)। प्रसारण इन्सुलिनमा यी भिन्नताहरूको बावजुद, पीक-ईभोक गरिएको [DA]_o एनएसी शेल र कोरमा, र सीपीयू यसमा उल्लेखनीय रूपमा कम थियो पूर्व vivo दुबै समूह समूहले स्ट्रिटल स्लाइसहरू AL (सँग तुलना गरे)चित्र। 3b र पूरक छवि। 2 a, b), ईन्सुलिनको अतिरिक्त कारकहरू निस्क्रिय निरपेक्ष बनाउँदछ [DA]_o। Striatal DA सामग्री आहार समूहहरु बीच भिन्न थिएन, DA संश्लेषण भन्दा रिलीज नियमन मा परिवर्तन संकेत गरीन्छ (पूरक छवि। 2c)। गतिशील नियमनमा परिवर्तनको साथ अनुरूप, इन्टुलिनमा स्ट्र्याटल डीए रिलिजको संवेदनशीलता स्पष्ट आहारमा निर्भर थियो। एफआर मुसामा, इन्सुलिन सांद्रता ≤1 एनएम, जसको AL मा कुनै प्रभाव थिएन।चित्र। 1b), बढाइयो पैदा गरियो [DA]_o (चित्र। 3c), EC को साथ बढेको इन्सुलिन संवेदनशीलता प्रतिबिम्बित गर्दै₅₀ FR स्ट्र्याटममा मानहरू (0.4 – 0.6 nM) जुन लगभग परिमाणको अर्डर थियो AL मा तुलना गर्नुहोस् (तुलना गर्नुहोस्) अंजीर 1b र 3c)। उल्लेखनीय कन्ट्रास्टमा, इन्सुलिनको प्रभाव ओबी स्ट्र्याटममा हरायो; सम्म 30 nM इन्सुलिन, जसको AL स्ट्र्याटममा अधिकतम प्रभाव (चित्र। 1b), OB मा कुनै प्रभाव भएन (चित्र। 3c).

  

  

(a) प्लाज्मा इन्सुलिन एकाग्रता पोष्टिंग समूहहरूमा शरीरको तौलसँग सकारात्मक सम्बन्धित छ (R= 0.76)। (b) औसत एकल नाडी पैदा भयो [DA]_o एनएसी कोरमा (हेर्नुहोस् पूरक छवि। 2a, बी NAc शेल र CPU का लागि FR (38 ± 4%) र OB (25 ± 4%) बनाम AL (कम बनाइएको थियो)n= 50 diet 60 साइटहरू 5 – 6 चूहों प्रति आहार समूह, F_2,156= 23.337, एकतर्फी ANOVA, Tukey HSD; ***P<०.०१); OB बनाम FR (P<0.08)। (c) पैदा गरिएको [DA] को संवेदनशीलता_o इन्सुलिन FR मा बढाइएको थियो, तर OB मा हरायो (n= 21 – 49 साइटहरू प्रति subregion प्रति 2 – 4 चूहों प्रति आहार समूह, एकतर्फी ANOVA, Tukey HSD) का साथै, सबै subregions मा FR बनाम AL ras मा बढी संवेदनशीलता सहित।P<0.001 प्रत्येक क्षेत्र को लागी; दुई-मार्ग ANOVA; सि.पी. यु: F_{(conc × आहार; 3,286)}= 10.253; कोर: F_{(conc × आहार; 3,353)}= 6.166; खोल: F_{(conc × आहार; 3,195)}= 10.735)।

• पूर्ण आकार छवि (124 KB)

 

 

यी डाटा स्ट्रिटल InsR संवेदनशीलता र शरीर adiposity बीच एक व्युत्क्रम सम्बन्ध संकेत। वैकल्पिक रूपमा, तथापि, यी आहार-निर्भर मतभेदहरू परिवर्तन गरिएको NAChR संवेदनशीलता प्रतिबिम्बित गर्न सक्छन्। त्यसकारण हामीले प्रत्येक आहार समूहबाट एनएसी कोरमा निकोटिनको एकाग्रता प्रतिक्रिया निर्धारण गर्‍यौं। निकोटीनले एनएसीएचआर डिसेन्सिटाइजेसनको कारण गर्दछ, जुन [DA] अनुपात तुलना गरेर मापन गर्न सकिन्छ_o 100 हर्ट्जमा पाँच दालहरूको छोटो रेल द्वारा सि single्ग-नाडीमा उत्पन्न गरियो [DA]_o (5 p: 1 p अनुपात) nAChR सक्रियता / डिसेन्सिटाइजेसनको अनुक्रमणिकाको रूपमा^{30, 31}। यस दृष्टिकोणको प्रयोग गरेर, हामीले एनएसी कोरमा एनएसीएचआर संवेदनशीलतामा आहार समूहहरू बीच कुनै फरक पाएनौं (पूरक छवि। 3-c)। यसबाहेक, 5 p नियन्त्रण गर्नुहोस्: NNC कोरमा 1 p अनुपात भोजन समूहहरू बीच फरक थिएन।पूरक छवि। 3d) वा सीपीयू (चित्रण गरिएको छैन) बाट संकेत गर्दै कि खानाले एनएसीएचआर-निर्भर डीए रिलिज नियमनलाई परिवर्तन गर्दैन। यस प्रकार, स्ट्रिएटल इन्सआर संवेदनशीलता एफआर बनाम ए एल मुसाको तुलनामा बढेको देखिन्छ, तर ओबी मुसामा अनुपस्थित हुन्छ, जसमा इन्सुलिनको शारीरिक सांद्रतामा स्ट्रिएटल डीए रिलिजनको नियमन गुमाउँदछ।

एनएसी शेल इन्सुलिन वातानुकूलित स्वाद वरीयता मॉड्युलेट गर्दछ

खाना प्राथमिकताहरू दुबै पूर्व- र पोस्ट-इन्जेस्टीभ कारकहरू द्वारा उत्पन्न गरिन्छ; प्रत्येकका लागि संयन्त्रहरू पूर्ण रूपमा समाधान हुँदैन, तर वर्तमान प्रमाणले दुबैमा एनएसी डीए संकेत गर्दछ^{37, 38}। दिईएको छ कि प्लाज्मा र सेरेब्रोस्पिनल फ्लुइड (CSF) इन्सुलिन स्तर परिधीय ग्लूकोज उचाइ पछि द्रुत रूपमा बढ्छ⁶, र त्यो स्ट्रिएटममा इन्सुलिनको वृद्धि प्लाज्मा इन्सुलिन उचाईको 5 मिनेट भित्र पत्ता लगाउन सकिन्छ।⁷, यो खाना को समयमा परिधीय इन्सुलिन रिलीज NAC DA रिलीज बढाउन र पोस्ट-इन्जेसिटिव इनाम संयन्त्रमा योगदान गर्न सक्छ कि परिकल्पना गर्न तार्किक छ। हामीले पहिले वर्णन गरिएको स्वाद-प्राथमिकता प्रोटोकल अनुकूलित गरेका छौं³⁷ चियामा स्याचारिन-मीठा ग्लूकोज समाधानको साथ मुसामा परीक्षण गर्न कि एनएसीमा इन्सुलिन एन्टिबडी (इन्साब) को स्थानीय अनुप्रयोग मार्फत अन्तर्जात इन्सुलिनको प्रभावलाई रोक्दा जोडीको स्वादको लागि प्राथमिकता कम हुनेछ। Insul को प्रभाव अवरुद्ध गर्न मा InsAb को प्रभावकारिता एक मा परीक्षण गरिएको थियो कृत्रिम परिवेशीय स्ट्राइटल synaptosomes मा DA को खण्ड। इन्सुलिन (30 एनएम) ले उल्लेखनीय वृद्धि ल्याएको छ V_{अधिकतम} NAc वा CPu बाट synaptosomes मा (पूरक छवि। 4), संग अनुरूप V_{अधिकतम} स्ट्र्याटल स्लाइसबाट डाटा (तालिका 1) र अघिल्लो अध्ययनको साथ^{18, 19, 20, 21, 22, 23}। इन्सुलिनको अभावमा, न InsAb न कन्ट्रोल एन्टिबडी इम्युनोग्लोबुलिन G (IgG) ले परिवर्तन गर्यो V_{अधिकतम} DA अपटेक विरूद्ध नियन्त्रण। आईजीजीको उपस्थितिमा, इन्सुलिनले अझै उल्लेखनीय बृद्धि गरेको छ V_{अधिकतम}; जे होस्, ईन्सुलिनको प्रभाव मा V_{अधिकतम} InsAb को उपस्थितिमा हरायो (पूरक छवि। 4).

टिश्यू क्षतिलाई कम गर्न र टिश्यू लक्ष्यको संवेदनशीलतालाई जोगाउन, विषयहरूको दुई समूहहरू परीक्षण गरियो जसमा हामीले एउटा नक्कल माइक्रोइन्जेसन प्रक्रियाको साथ इंट्रा-एनएसी माइक्रोइन्जेसनलाई वैकल्पिक बनायौं, बरु विषयहरूको एकल समूह प्रयोग गरेर इन्साबसँग अर्को स्वाद समाधान पेयर गर्नुभन्दा। गाडी फलस्वरूप, एक बोतल-कन्डिसन सत्रको बखत, प्रयोगात्मक समूहले InsAb माइक्रोइन्जेक्सनहरू दुई मध्ये एक स्वादको साथ जोडी प्राप्त गरे, र वैकल्पिक सत्रहरूमा, नक्कल माइक्रोइन्जेक्सनहरू अन्य स्वादको साथ जोडी (चित्र। 4a, बाँया)। नियन्त्रण समूहले नक्कली माइक्रोइन्जेक्सनहरू या त फास्फेट-बफर सलाईन (पीबीएस) वा आईजीजीको माइक्रोइन्जेक्सनको साथ प्राप्त गर्‍यो। दुबै स्वाद समाधानमा कन्डिसनको बेलामा ग्लूकोज हुन्छ। कन्ट्रोल-माइक्रोइंजेक्ट ग्रुपमा स्वादहरू बीच कुनै भिन्न प्राथमिकता अपेक्षित गरिएको थिएन, तर इन्साब-माइक्रोइन्जेक्टेड समूहमा मक माइक्रोइन्जेक्शन-जोडी स्वादतिर प्राथमिकता बदल्ने अपेक्षा गरिएको थियो।

  

  

(a) रेखाचित्र एक बोतल कन्डिशनिंग (बाँया) र दुई-बोतल परीक्षण (दाँया) चित्रण गर्दै। (b) भोल्युम एक बोतल कन्डिसन सत्रको समयमा खपत (मिली)। त्यहाँ जलसेक-कन्डिसन सत्र र माइक्रोइन्जेक्शन उपचार (बीच एक महत्वपूर्ण कुराकानी थियो।n= 19 – 20 प्रति समूह मुसा, F_(3,111)= 3.088, P<००0.05, २ × mixed मिश्रित ANOVA इन्फ्यूजन-कन्डिशनिंग सत्रमा दोहोरिने उपायहरूको साथ)। InsAb माइक्रोइन्जेक्शनले तेस्रो समयमा नियन्त्रणको तुलनामा उपभोगमा उल्लेखनीय कमी ल्यायो (t(40) = 3.026, **P<०.०१) र चौथो (t(40) = 3.052, **P<००१, एक पुच्छे सुरक्षित t-tests) infusions। नक्कली इंजेक्सनले कुनै पनि समूहमा उपभोगमा कुनै प्रभाव पार्दैन (F_3,111= 1.110, 2 × 4 मिश्रित ANOVA नक्कल कन्डिसन सत्रमा दोहोरिने उपायहरू सहित)। (c) भोल्युम दुई बोतल स्वाद-प्राथमिकता परीक्षणको दौरान खपत भयो। कन्डिसनको समयमा स्वाद र माइक्रोइन्जेक्शन उपचारको बिच एक महत्त्वपूर्ण कुराकानी भएको थियो (F_1,37= 5.36, P<००0.05, दुईतर्फी मिश्रित ANOVA स्वादमा दोहोरिने उपायहरू सहित)। InsAb समूहले नक्कली-जोडी स्वादको तुलनामा InsAb-paired स्वादको तुलनामा कम खपत गर्‍यो (t(18) = 2.82, ** पी<००१, एक पुच्छे सुरक्षित t-उत्तम); नियन्त्रण समूहले कुनै स्वाद प्राथमिकता देखाउँदैन (t(19) = 0.803, P> ०.०0.05, संरक्षित t-उत्तम)। समूहहरूको तुलना गर्दा, InsAb मुसाले इन्फ्यूजन-पेयर स्वादको उल्लेखनीय रूपमा कम पिउँदछन् (t(40) = 1.96, *P<०.०0.05) र उल्लेखनीय रूपमा नक्कल-जोडी स्वादको अधिक (t(40) = 1.77, *P<००१, एक पुच्छे सुरक्षित tनियन्त्रणबाट भन्दा)।

• पूर्ण आकार छवि (161 KB)

 

 

एक बोतल कन्डिसन सत्रको बखत, InsAb माइक्रोइन्जेक्शनले तेस्रो र चौथो इन्फ्युसनको समयमा गाडीको तुलनामा उपभोगमा उल्लेखनीय कमी ल्यायो (चित्र। 4b)। यसको विपरित, दुबै समूहहरूले सबै चारवटा नक्कल इंजेक्शन सत्रहरूमा समाधानको समान मात्रा खपत गरे (F_3,111= 0.127, P>0.05, मिश्रित दुई तर्फी ANOVA) (चित्र। 4b)। कुल आठ कन्डिसन सत्र पछि, स्वाद प्राथमिकता दुई बोतल परीक्षणमा मूल्याses्कन गरिएको थियो जसमा मुसाले सँगै दुबै स्वाद समाधानहरूमा पहुँच गरेका थिए (चित्र। 4a)। सांख्यिकीय विश्लेषणले कन्डिसनको समयमा प्राप्त स्वाद र माइक्रोइन्जेक्शन उपचारको बीचमा महत्त्वपूर्ण अन्तरक्रिया प्रकट गर्‍यो (चित्र। 4c)। InsAb समूहले नक्कली-जोडी स्वादको तुलनामा InsAb-paired स्वादको तुलनामा कम खपत गर्‍यो (चित्र। 4c) जबकि वाहन समूहले कुनै स्वाद प्राथमिकता देखाएन।चित्र। 4c), ईन्टुल इन्सुलिन सaling्केतको रूपमा मिठो मीठो क्यालोरिक समाधानको चयनमा योगदान गर्‍यो। गाडीको साथ तुलना गर्दा, InsAb-micininjected मुसा रक्सी पिएर स्वाद र मॉक-इंजेक्शन-पेयर स्वादको अधिक बढी पिए (चित्र। 4c)। आईजीजीको माइक्रोइन्जेक्शन (t(9) = 0.792। P>0.05, सुरक्षित t-tests) वा PBS (t(9) = 0.442। P>0.05, सुरक्षित t-tests) स्वाद वरीयतामा कुनै प्रभाव थिएन (डाटा देखाइएको छैन), InsAb माइक्रोइन्जेक्शनको एक nonspecific प्रभाव खपत वा स्वाद वरीयता कम भयो कि सम्भावनाको विरुद्ध बहस। यो पनि याद गर्नुपर्दछ कि परीक्षणमा InsAb समूहको प्राथमिकता कम उपन्यास स्वादको लागि प्राथमिकता होइन, किनकि त्यहाँ InsAb समूहको लागि सत्र र सत्र प्रकार (वास्तविक इन्फ्यूजन विरूद्ध मक इन्फ्यूजन) बीचमा कुनै अन्तरक्रिया थिएन।F_3,54= 1.584, P> ०.०0.05, दुईतर्फी ANOVA)। त्यो हो, InsAb समूहले मक-इन्फ्यूजन-पेयर स्वादको अधिक इन्साब इन्फ्यूजन-पेयर गरिएको स्वादको उपभोग गरेन; बरु, उपचार समूहहरू बीच मतभेद केवल जलसेवा कन्डिसन सत्रको समयमा देखा पर्‍यो। समग्रमा, यी डाटाले संकेत गर्दछ कि एनएसीमा इन्सुलिनले ग्लाइसेमिक लोडलाई संकेत गर्ने स्वादको लागि प्राथमिकताको सुदृढीकरणमा भूमिका खेल्दछ।

हामी यहाँ रिपोर्ट गर्दछौं कि इन्सुलिनले स्ट्र्याटल डीए रिलिजनलाई एनएसीएचआर-निर्भर तरीकामा इन्सआर मार्फत CHI एक्जिटिबिलिटीलाई परिमार्जन द्वारा विस्तार गर्दछ। हाम्रो नतीजाले संकेत गर्छ कि इन्सुलिनले इनाम संकेतको रूपमा काम गर्न सक्दछ, साथै यसको तृप्ति स sign्केतमा स्थापित भूमिका सहित। विशेष गरी, डीए रिलिजमा इन्सुलिनको प्रभावलाई डाएट द्वारा परिमार्जन गरिएको छ, एफआर पछि इन्सुलिनको लागि स्पष्ट संवेदनशीलताको साथ, तर ओबी आहारमा इन्सुलिन-वर्धित नियमनको पूर्ण क्षति। यी परिवर्तनहरूले InsR संवेदनशीलतामा परिवर्तन प्रतिबिम्बित गर्दछ जुन इन्टुलिन प्रसारित ईन्सुलिन स्तरसँग विपरित रूपमा सम्बन्धित छ, यसैले कि प्लाज्मा इन्सुलिनको स्तर आहारमा निर्भर रहेको पाए, तर एनएसीएचआर संवेदनशीलता थिएन। अन्त्यमा, हाम्रो स्वाद-प्राथमिकता जनावरहरू व्यवहार गर्ने अभ्यासले संकेत गर्छ कि एनएसी खोलमा इन्सुलिन स food्केतनले खाना प्राथमिकतामा असर पार्छ, जसले न केवल खानासँग सम्बन्धित शिक्षामा इन्सुलिनलाई प्रभाव पार्दछ तर साथै इनाम संकेतको रूपमा यसको भूमिका पुष्टि गर्दछ।

नेट [DA]_o DA मार्फत DA र DA अपटेक बीचको सन्तुलन प्रतिबिम्बित गर्दछ। अघिल्लो प्रमाणहरू देखाउँदै कि इन्सुलिनले DAT गतिविधि नियमित गर्न सक्दछ^{18, 19, 20, 21, 22, 23} पूर्वानुमानको नेतृत्व गर्‍यो कि इन्सुलिनको बृद्धिले पैदा भएको [डीए] मा खुद घट्नु पर्छ।_o बढेको DA अपटेक मार्फत। यद्यपि हामीले पत्ता लगायौं कि स्ट्रियाटममा इन्सुलिनको प्रभाव यस भन्दा बढी जटिल छ। यद्यपि इन्सुलिन जोखिम बढ्यो V_{अधिकतम} DAT को लागि, इन्सुलिनको प्राथमिक प्रभाव डीए रिलिजमा थियो, DA अपटेकमा थिएन, निरन्तर बढाइएको [DA] मा_o एनएसी खोल र कोर र सीपीयूमा इन्सुलिन सांद्रताको एक शारीरिक शृंखला भर। जे होस् बढाइयो [DA]_o 100 nM को एक सुप्राफिजियोलॉजिकल एकाग्रता मा स्तर नियन्त्रण नियन्त्रणमा फर्कायो, V_{अधिकतम} DAT मा एक प्रमुख प्रभाव एक स्पष्टीकरणको रूपमा हटाएर, नियन्त्रणबाट पनि अपरिवर्तित थियो। यसको सट्टामा, अपटेकमा प्रभावको हानी साथै रिलीजले ईन्सआरको डिसेन्सेटाइजेशन वा उच्च इन्सुलिन सांद्रतामा डाउनस्ट्रीम सिग्नलिंग मार्गहरूको डाउनग्रेगुलेसनलाई असर गर्दछ। वास्तवमा, InsRs परिधीय ऊतकों मा इन्सुलिन बाध्यकारी पछि तीव्र endocytosis र गिरावटको¹, इन्सुलिन वा उच्च-क्यालोरी आहारको उच्च स्तरको छोटो अवधिको जोखिम पछि न्युरोनल ईन्सआर संवेदनशीलता हराउनको लागि उभरते प्रमाणहरूको साथ।^{10, 11, 39}.

यहाँ रिपोर्ट गरिएको स्ट्राइटल डीए रिलिज बढाउन इन्सुलिनको प्रभावशाली प्रभाव दुई अन्य भर्खरको परिणामसँग विवादास्पद छ पूर्व vivo टुक्रा अध्ययन। पहिलोमा, इन्सुलिनले विद्युतीय रूपमा उत्पन्न गरिएको ओभरफ्लो [³H] स्ट्र्याटल स्लाइसबाट DA, यद्यपि वृद्धि भयो [³H] DA ओभरफ्लो पत्ता लाग्यो जब DAT निषेध गरिएको थियो²²। जारी गरियो कि [³H] DA सुपरफ्यूजिंग समाधानमा पत्ता लगाउनका लागि DAT- मध्यस्थता अप्टेकबाट उम्कनु पर्छ, यो प्रोटोकल विशेष गरी DAT नियमनको लागि संवेदनशील छ। हाम्रो परिणामहरूले देखाउँदछ कि इन्सुलिनले ChIs र NAChR सक्रियताको माध्यमबाट डीए रिलिजनलाई बढाउँदछ, DAT- मध्यस्थता अपटेक बढाउनुको साथसाथै, इन्सुलिन-वर्धित देखिन्छ विरोधाभासी वृद्धि [³H] DA अतिप्रवाह देखीन्छ जब DAT मा प्रतिस्पर्धी प्रभावहरू अवरुद्ध गरियो²²। दोस्रो अध्ययनले भिएटीएमा सोमाटोडेन्ड्रिटिक डीए रिलिजको प्रत्यक्ष पत्ता लगाउन एफसीभी प्रयोग गर्‍यो, तर डीए अप्टेकमा इन्सुलिनको प्रबल प्रभाव पनि फेला पारे, घटिएको [DA] लाई प्रतिबिम्बित_o (ref) 23)। स्थानीय microcircuitry बाट somatodendritic बनाम axonal DA रिलिज मेकानिजमको लागी धेरै कारकहरूमा भिन्नता।⁴⁰, यस क्षेत्रीय भिन्नतामा योगदान गर्न सक्छ। तल छलफल गरिएको रूपमा, तथापि, ईन्सुलिनको क्षेत्रीय रूपमा निर्भर भूमिका विरोधाभासी नभई पूरक हुन सक्छ।

यसभन्दा पहिले, डीए सिग्नलिंगको इन्सुलिन-निर्भर नियमनको कुनै पनि भूमिकालाई डीए न्यूरन्समा इन्सआरको प्रत्यक्ष सक्रियताले मध्यस्थतामा लिएको थियो। यहाँ हामी देखाउँदछौं कि InsR हरू स्ट्रिटल ChIs मा पनि अभिव्यक्त हुन्छन्, र त्यो इन्सुलिनले Chi उत्तेजनालाई स्ट्राइटल डीए रिलिजि to्ग विस्तार गर्दछ, जसले आहारमा इन्सुलिनको प्रभावमा निर्णायक भूमिका खेल्न सक्छ। Striatal ChIs थालामस को इंट्रालामिनार नाभिकको न्यूरोनहरु बाट अनुमानहरु प्राप्त गर्दछ, जसले प्रमुख संवेदी उत्तेजनाको जवाफमा फायर फायरिंग प्रदर्शन गर्दछ र ChIs मा बर्स पज स्पिकिंग बान्की चलाउन मद्दत गर्दछ जुन ध्यान, सुदृढीकरण र सहयोगी शिक्षाको दिशा निर्देशन गर्न महत्वपूर्ण छ।⁴¹। तसर्थ, स्ट्र्याटल ChIs मा InsRs मा इन्सुलिनको कार्यले थालमिक फायरिंगको लागि स्ट्रिटल प्रतिक्रियाशीलतामा संवेदी खाद्य संकेतको प्रभावलाई बढाउन सक्छ, इन्जेस्टेड खानाको इनाम मूल्यको बढि धारणालाई योगदान पुर्‍याउँछ। Chi सक्रियता द्वारा स्ट्राइटल डीए रिलिजको सीधा पदोन्नतिले गर्दा CHI लाई उत्प्रेरित गर्ने कारकहरू DA रिलीजको ट्रिगरको रूपमा विशेषाधिकार प्राप्त हुनेछ भन्ने सुझावको लागि नेतृत्व गरेको छ।³³। हाम्रो डाटाले यसको लागि पहिलो समर्थन प्रमाण प्रदान गर्दछ, ईन्सुलिन-वर्धित ChI उत्तेजना र एसी सिग्नलिंग ड्राइभि dyn्ग गतिशील वृद्धि डीए रिलिजको साथ।

इन्सुलिनको उपस्थितिमा एलिभेटेड डीए रिलिजिट पनि एसीए सिग्नलमा बढेको बिरूद्ध तर्क गर्दछ जसले एनएसीएचआर डिसेन्सिटाइजेसन वा मस्करीनिक एसीएच रिसेप्टर (एमएसीएचआर) सक्रियतालाई निम्त्याउँछ, जस मध्ये कुनै एकल नाडी उत्पन्न भएको [DA] लाई दबाउन सक्छ।_o (refs) 29, 30, 31, 42)। यसैले, यहाँ रिपोर्ट गरिएका संयन्त्रहरू MAChRs को AC सक्रियता भन्दा फरक छन्, जुन घृणा र तृप्तिको साथ सम्बन्धित छ।⁴³.

एकल नाडी पैदा गरियो [DA]_o दुबै एफआर र OB मुसा AL मा भन्दा कम थियो; यद्यपि यी परिणामहरू अघिल्ला रिपोर्टहरूसँग मिल्दोजुल्दो छ^{44, 45, 46}, हाम्रो अध्ययनले एक स्थिर समयावधिमा दुई आहार समूहमा तीन स्ट्राइटल सबग्रीगन्सको पहिलो व्यवस्थित तुलना प्रदान गर्दछ। डीए रिलिजमा डाइट-निर्भर परिवर्तनहरूको अन्तर्निहित संयन्त्रहरूलाई स्पष्ट गरिएको छैन, र हालको अध्ययनको दायरा बाहिर छ। जहाँसम्म, प्लाज्मा इन्सुलिन स्तर FR र OB आहार द्वारा विपरित रूपमा परिवर्तन गरिएको छ, यो कम हुने सम्भावना कम छ [DA]_o दुबै समूहहरूमा आहार-निर्भर इन्सुलिन स्तरको परिणाम हो।

अर्कोतर्फ, आहार र परिणामस्वरूप आहारमा निर्भर प्लाज्मा इन्सुलिनको स्तरको साथ इन्सआर संवेदनशीलतामा परिवर्तनले एफआरमा इन्सुलिनको बढि संवेदनशीलता र ओबीमा इन्सुलिनप्रति प्रतिक्रियाको ह्रासको लागि सम्भावित स्पष्टीकरण प्रदान गर्दछ। AL या बनाम FR वा OB मुसामा परिवर्तन गरिएको NAChR संवेदनशीलताको वैकल्पिक विवरणको लागि कुनै प्रमाण थिएन। जे होस् हाम्रो अन्वेषणहरू पहिलो एफआरको साथ बढाइएको स्ट्रिएटल InsR संवेदनशीलता दर्साउने बीच हुन्¹⁸, CSF मा इन्सुलिनको मात्रा कम भएमा वजन घटाउन सकिन्छ⁷, जसले एफआरमा इन्सुलिनमा डीए रिलिजको संवेदनशीलतालाई बृद्धि गर्दछ। यसको विपरित, OB मुसामा इन्सुलिन उत्तरदायित्व गुमाउनु अघिल्लो प्रमाणसँग मिल्दोजुल्दो मस्तिष्क InsR संवेदनशीलता वजनको लागि वा OB आहार द्वारा प्रेरित^{3, 10, 11}.

हाम्रो पूर्व vivo स्लाइस डाटा इन्सुलिन इनामको साथसाथै तृप्ति पनि संकेत गर्न सक्ने परिकल्पनालाई समर्थन गर्दछ। हामीले यस परिकल्पनाको परीक्षण स्वाद-प्राथमिकता कन्डिशनिंगको बेला NAC खोलमा द्विपक्षीय InsAb माइक्रोइन्जेक्शनको साथ अन्तर्जात इन्सुलिनको प्रभावलाई अवरुद्ध गरेर गर्नुभयो। इनाममा भूमिकाको साथ अनुरूप, ईन्सुलिनको प्रभावलाई रोक्नाले अक्षयता ईन्सुलिन सaling्केतको साथ सम्बन्धित स्वादको विरूद्ध जोडी ग्लुकोज युक्त समाधानको स्वादको लागि प्राथमिकता घट्यो। एनएसी खोलमा इन्सुलिन रोक्नाले पनि एक बोतल कन्डिशनिंगको बेला जोडी समाधानको खपत कम गर्‍यो, जबकि नक्कल वा नियन्त्रण माइक्रोइन्जेक्सनले उपभोगमा कुनै प्रभाव पार्दैन। यी डाटाले सुझाव दिन्छ कि एनएसी खोलमा इन्सुलिनले खाना प्राथमिकतामा भूमिका खेल्दछ। अघिल्लो अध्ययनहरूले देखाए कि स्वाद कन्डिशनिंगको अधिग्रहणको लागि NAC मा अक्षुण्ण DA संकेत आवश्यक छ^{37, 38}, पौष्टिक समाधानको प्रबलित प्रभावहरूको मध्यस्थतामा NAc DA का लागि भूमिका पुष्टि गर्दै। यस प्रकाशमा, ग्लुकोज समाधानको लागि पेयर गरिएको ईन्टुलिन उपलब्धताको साथ एनएसी खोलमा डीएटी-मध्यस्थता डीए अपटेकमा इन्सुलिनको प्राथमिक प्रभावको बिरूद्ध तर्क गर्दछ, किनकि यो घट्ने आशा गरिन्छ [DA]_o र त्यसकारण नियन्त्रण जोडी स्वाद को खपत। हाम्रो नतिजा अघिल्लो अध्ययनका अनुरूप पनि छन् जसमा एनएसी खोलमा इन्सुलिनको माइक्रोइन्जेक्शनले जनावरहरू मौखिक सुक्रोज स्वयं-प्रशासनमा संलग्न भएको समय बढायो, सुक्रोज खपतमा सीमा रेखा बढाउँदै²⁶, जुन वृद्धि गरिएको DA अपटेकको अपेक्षित परिणाम भन्दा विपरीत थियो। समग्रमा, यी ब्यवहारिक डेटा स्ट्रिएटल ChIs र वर्धित डीए रिलिजमा इन्सुलिनको पूर्वानुमानित प्रभावसँग अनुरूप छ। जे होस्, यी परिणामहरूले मोनिटर गरिएको व्यवहारमा स्ट्रिटल माइक्रोक्रसक्रिटरीका अन्य तत्वहरूको संलग्नतालाई समावेश गर्दैन, स्ट्रियाटम भरमा व्यापक INR अभिव्यक्ति दिए।^{1, 14}.

यहाँ रिपोर्ट गरिएको अध्ययनले इन्सुलिनले क्यालोरिक मूल्य संचार गर्न भूमिका खेल्छ भन्ने पहिलो प्रमाण प्रदान गर्दछ, र त्यसकारण खानाको इनामदायी प्रभावहरू, जुन दुवै कम वजन र मोटा विषयहरूमा इन्सुलिनको प्रभावको लागि महत्वपूर्ण प्रभाव पार्दछ। धेरै अध्ययनहरूले संकेत गरे कि खानाको पोस्ट-इन्जेसेक्टिभ प्रभावहरू, स्वाद ट्रान्जिड्शन मार्ग अटुट छन् कि भनेर पर्वाह नगरी⁴⁷, NAC DA रिलिज र व्यवहारको सकारात्मक सुदृढीकरण वृद्धि^{37, 47}। यसैले, पोस्ट-अवशोषक इन्सुलिन प्रतिक्रियाले खानाको ग्लाइसेमिक उत्पादनलाई ईन्कोड गर्न सक्दछ र खानपानलाई सक्षम पार्ने खाद्य प्राथमिकता र व्यवहारको सुदृढीकरणमा योगदान पुर्‍याउँछ। जहाँसम्म, इन्सुलिन स्तर र केन्द्रिय InsR संवेदनशीलता परिसंचरण मा चरम परिवर्तन असामान्य, र अनुकूलन व्यवहार मा एक भूमिका हुन सक्छ। उदाहरण को लागी, hypoinsulinaemia र FR विषयहरुमा InsR संवेदनशीलता को भरपाई upregulation द्वि घातुमान को लागी उनीहरुको स्वभाव को एक कारक हुन सक्छ⁴⁸। यसको विपरीत, टाइप २ मधुमेह वा मोटापामा केन्द्रीय इन्सुलिन असंवेदनशीलता, यहाँ OB मुसाको रूपमा दर्साइएको, अन्तर्ग्रहण पछि इनामको घट्ने भावनामा योगदान पुर्‍याउन सक्छ, उच्च ग्लाइसेमिक सूचकांकको साथ खानाको सेवन ड्राइभलाई मुआवजाको रूपमा।^{49, 50}। त्यसकारण, या त स्ट्र्याटल इन्सुलिन संवेदनशीलतामा वृद्धि वा कमीले पैथोलॉजिकल खानपानमा योगदान पुर्‍याउन सक्छ, द्वि घातुमान खाने र / वा मोटोपनाको परिणामस्वरूप।

समग्रमा, हाम्रो खोजहरूले इन्सुलिनको लागि इनाम संकेतको रूपमा नयाँ भूमिका प्रकट गर्दछ। यस्तो भूमिका तृप्ति स as्केतको रूपमा यसको ज्ञात कार्यसँग विवादास्पद छ, भर्खरको खोजहरू लगायत VTA मा इन्सुलिन माइक्रोइंजेक्टले हेडोनिक फीडिंग र खाद्य इनामसँग सम्बन्धित संकेतहरूको लागि प्राथमिकता घटाउन सक्छ।^{23, 24}। यसले प्रश्न खडा गर्छ कि यी डीए-आश्रित कार्यहरूमा इन्सुलिनको लागि जस्तो देखिने विपक्षको भूमिकालाई कसरी मिलाप गर्न सकिन्छ। उत्तर यो हुन सक्छ कि यी प्रभावहरू विरोधाभासी भन्दा पूरक हो। हालको नतिजाले संकेत गर्दछ कि स्ट्राइटममा इन्सुलिनले इन्जेस्टेड खानाको इनाम मूल्य संचार गर्दछ। तृप्तिको स A्केतमा दोहोरो भूमिकाले इन्सुलिनलाई खाना समाप्त गर्ने महत्त्वपूर्ण उद्देश्य पूरा गर्न अनुमति दिन सक्छ, साथसाथै यसको पोषणको स्मृति स्थापना गर्दछ र यसरी इनामात्मक गुणहरू हुन्छन्, जसले अन्तर्क्रियात्मक व्यवहारको पुनरावृत्तिलाई बल दिन्छ।

पशु संभाल

पशु प्रक्रियाहरू NIH दिशानिर्देशहरू अनुसार थिए र NYU स्कूल अफ मेडिसिन एनिमल एनिमल केयर एंड यूज कमेटीले अनुमोदन गरेको थियो। सबै जनावरहरू 12 h प्रकाशमा थिए: अँध्यारो चक्र, बत्तीहरू सहित 06: 00 बाट 18: 00; पूर्व vivo XSUMX: 08 र 00: 12 को बिचमा स्लाइसहरू तयार पारिएका थिए। AL चूहों र चूहोंमा यांत्रिकी अध्ययनहरू सञ्चालन गरिएको थियो पूर्व vivo जनावरहरूको टुक्रा जोडीमा राखिएको थियो, जबकि मुसा एकल रूपमा सबै आहार समूह तुलना र व्यवहारिक अध्ययनको लागि राखिएको थियो।

मुसा आहार आहार

वयस्क पुरुष स्प्रेग – डाउली मुसा (टैकनिक) 8 – 10 हप्ता पुरानो आहार रेजिमेन्सको शुरुवातमा 21 – 30 दिन सम्म चल्यो। मुसा अर्ध-अनियमित रूपमा आहार समूहमा तोकिएको थियो: विषयहरू प्रारम्भिक तौल द्वारा क्रमबद्ध गरिएको थियो, तब प्रत्येक दुईवटा क्रुद्ध चराहरू आहार समूहहरूमा जथाभावी वितरण गरियो। AL मुसासँग एफआर वा ओबी डाइटमा पेयर गरिएको मुसा जस्तो समान अवधिको लागि मुसा चाउमा नि: शुल्क पहुँच थियो। सबै मुसासँग पानीमा निःशुल्क पहुँच थियो। खाना प्रतिबन्ध पहिलेको रूपमा लागू गरिएको थियो⁵¹; संक्षिप्तमा, मुसाले 40 प्राप्त गर्‍यो 50% मानक ईन्टा चाउको ALN दैनिक सेवन दैनिक शरीरको तौल 20% द्वारा घटाए सम्म, जस पछि खानालाई यो तौल कायम राख्नको लागि शीर्षक दिइएको थियो। OB मुसासँग मुसा चाउ र चकलेटमा नि: शुल्क पहुँच थियो, मध्यम उच्च फ्याट र चिनीको साथ एक अत्यधिक स्वादिष्ट तरल पदार्थ।⁵².

फोरब्रेन ChAT नकआउट चूहों

ससर्त फ्लोसेड एलीलेको साथ चूहों ChAT (ChAT^{फ्लोक्स}) को साथ पार गरियो Nkx2.1^Cre ट्रान्सजेनिक लाइन चूहों उत्पादन गर्न जसमा एसीएच संश्लेषणको एबुलेसन फोरब्रेनमा प्रतिबन्धित छ³²। गैर-उत्परिवर्तित ट्रांसजेनिक लिटरमेटहरू नियन्त्रणहरू थिए; तिनीहरूको जीनोटाइप क्र⁺;ChAT^{flox / +} र Cre^-;ChAT^{फ्लोक्स / फ्लोक्स} 'heterozygotes' को रूपमा संदर्भित छन्। स्लाइस अध्ययनका लागि प्रयोग गरिएको वयस्क पुरुष चूहों विज्ञापन लाइब्रेम चाउ र पानीमा पहुँच।

पूर्व vivo टुक्रा तयारी र शारीरिक समाधान

मुसा र चूहों 50 मिलीग्राम किलोग्रामको साथ गहिरो anaesthetized थिए^-1 पेंटोबार्बिटल (इंट्रापेरिटोनियल (आईपी)) र डिक्पेटेड। भोल्टमेट्रीको लागि, कोरोनल फोरब्रेन स्लाइसहरू (300 – 400-thickm मोटाई) लाईका VT1200S भाइब्रेट ब्लेड माइक्रोटोम (लाइका माइक्रोसिस्टम; बानकबर्न, IL) मा बरफ चिसो HEPES- बफर कृत्रिम CSF (aMS मा) समावेश गरी काटियो: NaC (120); NaHCO₃ (20); ग्लूकोज (10); HEPES एसिड (6.7); KCl (5); HEPES सोडियम नुन (3.3); CaCl₂ (2); र MgSO₄ (2), 95% O सँग सन्तुलित₂/ 5% CO₂। स्लाइसहरू त्यसपछि 1 h को लागि प्रयोग हुनु अघि कोठाको तापमानमा यस समाधानमा राखिएको थियो^{30, 32, 53}। इलेक्ट्रोफिजियोलजीको लागि, एनेस्थेटीकरण पछि, मुसाहरू ट्रान्सकार्डियलीली रूपमा आइस-चिसो समाधान (एमएममा) सहित सुकुज गरिएको थियो: सुक्रोज (एक्सएनयूएमएक्स); KCl (225); CaCl₂ (0.5); MgCl₂ (7); NaHCO₃ (28); NaH₂PO₄ (1.25); ग्लूकोज (7); ascorbate (1); र pyruvate (3), र 95% O सँग सन्तुलित₂/ 5% CO₂। यस समाधानमा स्लाइसहरू काटियो, त्यसपछि परिमार्जित aCSF मा रहेको रिकभरी कक्षमा हस्तान्तरण गरियो (एमएममा): NaCl (125); KCl (2.5); NaH₂PO₄ (1.25); NaHCO₃ (25); MgCl₂(1); CaCl₂ (2); ग्लूकोज (25); ascorbate (1); pyruvate (3); र myo-inositol (4), 95% O सँग सन्तुलित₂/ 5% CO₂; यो समाधान सुरुमा 34 ° C मा थियो, त्यसपछि कोठाको तापमानमा बिस्तारै चिसो हुन अनुमति दिइयो⁵⁴। सबै भोल्टमेट्री र शरीर विज्ञान प्रयोग एक्सएनयूएमएक्स ° C मा एक पनडुब्बी रेकर्डिंग कक्षमा सञ्चालन गरियो जुन 32 मिलिमिटरमा सुपरफ्यूज भएको थियो।^-1 aMSF सहित (एमएममा): NaCl (124); KCl (3.7); NaHCO₃ (26); CaCl₂ (2.4); MgSO₄ (1.3); KH₂PO₄ (1.3); र ग्लूकोज (10), र बोवाइन सीरम एल्बमिन (BSA, 0.05 – 0.1 मिलीग्राम मिली^-1) 95% O सँग सन्तुलित₂/ 5% CO₂; स्लाइसहरू 30 मिनेट प्रयोग भन्दा पहिले यो वातावरणमा सन्तुलन गर्न अनुमति थियो।

फास्ट-स्क्यान चक्रीय ज्वालामुखी

रद्द गरिएको डीए रिलिज अध्ययनहरू मस्तिष्कका स्लाइसहरूमा FCV प्रयोग गरेर सञ्चालन गरिएको थियो^{32, 53} नर मुसाबाट वा तयार गरिएको ChAT फोरब्रेन नकआउट माउस र हेटरोजीगोट नियन्त्रणहरू (5 – 8 हप्ता)। मा अध्ययन ChAT नकआउट चूहोंलाई अन्धा बनाइन्थ्यो, तर मुसा खाना समूहमा स्पष्ट फिनोटाइप थियो जसले अन्धालाई छोडिदिन्छ। भोल्टमेट्रिक मापन मिलर भोल्टेमिटर (सेन्ट बार्थोलोमाइजमा डा जूलियन मिलरको विशेष अनुरोध र रोयल लन्डन स्कूल अफ मेडिसिन एण्ड डेंटिस्ट्री, लन्डन विश्वविद्यालय) द्वारा गरिएको थियो। परम्परागत त्रिकोण त्रिकोण WCV का लागि प्रयोग गरिएको थियो, 0.7 बाट + 1.3 V (बनाम Ag / AgCl) को स्क्यान दायराको साथ, 800 V को स्क्यान दर^-1, र 100 एमएसको नमूना अन्तराल^{30, 32, 53}। डाटा DigiData 1200B A / D बोर्ड प्रयोग गरेर प्राप्त गरिएको थियो क्लेम्पपेक्स 7.0 सफ्टवेयर (आणविक उपकरणहरू) द्वारा नियन्त्रित। डीए रिलिज एक गाढा उत्तेजक इलेक्ट्रोड को उपयोग गरीएको थियो; उत्तेजक नाडी आयाम 0.4 – 0.6 एमए थियो र अवधि 100 wass थियो^{30, 32, 53}। स्थानीय एकल नाडी उत्तेजना एनएसी कोर र सीपीयूमा प्रयोग गरिएको थियो; यद्यपि, संक्षिप्त उच्च आवृत्ति पल्स ट्रेन (100 हर्ट्जमा पाँच नाडी) पैदा गरिएको [DA] विस्तार गर्नको लागि प्रयोग गरिएको थियो।_o NAc खोलमा। दुबै उत्तेजना प्रतिमानहरूले डीए रिलिजलाई जगाउँदछ जुन कार्य सम्भावित र Ca हो²⁺ आश्रित, एकै साथ जारी ग्लूटामेट र GABA द्वारा अप्रभावित^{42, 55}, र एक साथ जारी एसीएच द्वारा सुविधाजनक^{29, 30, 31, 32, 33, 34}। प्रमाणित गर्न को लागी [DA]_o, इलेक्ट्रोडहरू 32 D C मा DA को ज्ञात सांद्रतासँग क्यालिब्रेट गरिएको थियो ACSF मा प्रत्येक प्रयोग पछि र एक प्रयोग प्रयोगको समयमा प्रयोग गरिएको प्रत्येक औषधिको उपस्थितिमा⁵³.

भोल्टमेट्री प्रयोगहरू ईन्सुलिनको प्रभाव मूल्यांकन गर्न [DA]_o दुई मध्ये कुनै एक प्रयोग गरेर प्राप्त गरिएको थियो। इन्सुलिन (सिग्मा, I5523) को प्रभाव को लागी समय कोर्स निर्धारण गर्न प्रारम्भिक प्रयोगहरू निगरानी द्वारा गरिएको थियो [DA]_o प्रत्येक 5 मिनेट एकल साइटमा। इन्सुलिन लागू गरिए पछि लगातार हटाइयो [DA]_o प्राप्त गरियो (सामान्यतया 4 – 5 मापन); 50 – 60 मिनेट पछि इन्सुलिनको प्रभाव अधिकतम थियो, र त्यसपछि [DA] पैदा गरियो_o प्रयोगको अवधिको लागि यस स्तरमा रह्यो (सामान्यतया 90 मिनेट कुल इन्सुलिन एक्सपोजर; चित्र। 1c)। त्यस पछि, इन्सुलिनको प्रभावलाई रेकर्ड गरीएको थियो [DA]_o 4 – 5 अलग साइटहरूमा स्लाइसहरू (+ BNGMA बाट 1.5 मिलिमिटर) प्रत्येक कन्ट्र्याट सर्तहरू अन्तर्गत तीन स्ट्रिटल उप-क्षेत्रहरू (aCSF वा aCSF प्लस औषधि) र फेरि अधिकतम इन्सुलिन प्रभावको समय (60 – 80 मिनेटमा नमूना), यी नमूनाहरु प्रत्येक subregion को लागि औसत थियो। टुक्राको तयारी पछि इन्सुलिनको प्रभाव कम भयो; समय न्यूनतम गर्न पूर्व vivo र जनावरहरूको प्रयोगलाई अनुकूलन गर्न, सामान्यतया, दिइएको पशुबाट दुई स्लाइसहरू एकै समयमा रेकर्डि cha कक्षमा परीक्षण गरियो। इन्सुलिनको प्रभावलाई चुनौती दिन मिल्ने औषधीहरू 15 मिनेट पहिले इंफुलिनको माध्यमबाट सुपरफ्यूजिंग एसीएसएफ मार्फत लागू गरियो, HNMPA trisacetoxymethyl एस्टर सहित (HNMPA-AM_3; एन्जो लाइफ साइंसेज), S961 (नोवो नर्डिस्क), LY294002 (सिग्मा), पिक्रोपोडोफिलोटोक्सिन (पीपीपी; टोक्रिस), मेकामाइलामाइन (टोक्रिस) र DHβE (टोक्रिस)। परिणामहरूमा वर्णन गरिएझैं, आहार समूहहरू माझ निकोटिनिक एसीएच रिसेप्टर्सको सम्भावित बदलिएको संवेदनशीलता चोटी [डीए] को अनुपात तुलना गरेर परीक्षण गरियो।_o 5 पी (100 हर्ट्ज) द्वारा बनाइएको 1 p द्वारा पैदा गरिएको साथ पैदा भयो (5 p: 1 p अनुपात)^{30, 31} 0 – 500 nM निकोटीन (सिग्मा) को उपस्थितिमा NAC कोरमा।

को निर्धारण V _{अधिकतम} पैदा गरियो [DA] बाट_o स्ट्र्याटल स्लाइसमा ट्रान्जियन्टहरू

DAT- मध्यस्थता DA अपटेकमा ईन्सुलिन-प्रेरित परिवर्तनहरूको मूल्या To्कन गर्न, खाली गरिएको चरणको शुरुवातको भाग [DA]_o कर्भहरू माइकलिस – मेन्टेन समीकरणमा फिट गरिएको थियो V_{अधिकतम} (अधिकतम अपटेक दर स्थिर)⁵⁶. K_m (जुन विपरित DA का लागि DAT को सम्बन्धसँग सम्बन्धित छ) 0.2 μM मा निश्चित गरिएको थियो र स्ट्र्याटल सबग्रीगन्स भर उस्तै भनेर चिनिन्छ।⁵⁷ र ईन्सुलिन द्वारा अप्रभावित (हेर्नुहोस् पूरक छवि। 4 क्याप्शन)

सम्पूर्ण सेल रेकर्डि।

ब्रेन स्लाइसहरू 29- बाट 35- दिन पुरानो पुरुष मुसा तयार गरियो; रेकर्डि conditions सर्तहरू डीए रिलिज अध्ययनमा प्रयोग हुनेहरूमा समान थिए। सम्पूर्ण सेल वर्तमान-क्ल्याम्प रेकर्डि conventionहरू परम्परागत विधिहरू प्रयोग गर्थे⁵⁴। Striatal ChIs एक ओलम्पस BX51WI माइक्रोस्कोप (ओलम्पस अमेरिका, सेन्टर भ्याली, पीए) को साथ अवरक्त विभेद-हस्तक्षेप कन्ट्रास्ट ऑप्टिक्स र × 40 पानी-विसर्जन उद्देश्यको साथ कल्पना गरियो। पिपेट समाधान (एमएममा) समावेश: K-gluconate (129); KCl (11); HEPES (10); MgCl₂ (2); EGTA (1); ना₂-ATP (2); ना₃-GTP (0.3); र पीएच 7.2 – 7.3 KOH को साथ समायोजित। रेकर्ड न्युरोनहरूलाई CHAT इम्युनोरएक्टिविटीका लागि मूल्या be्कन गर्नका लागि, एक्सएनयूएमएक्स% बायोसाइटिन पिपेट समाधानमा समावेश गरिएको थियो र न्यूरन्सहरू संक्षिप्त रूपमा रेकर्ड गरियो (~ 0.3 मिनेट) इंट्रासेल्युलर सामग्रीको कमजोर पार्न कम गर्न। पिपेट प्रतिरोध ~ 5 – 3 MΩ थियो। रेकर्डिहरू Axopatch 5B एम्पलीफायर (आणविक उपकरणहरू, सनीवाले CA) र कम-पास फिल्टर 200 kHz प्रयोग गरेर प्राप्त गरियो। ChIs स्थापित इलेक्ट्रोफिजिकल मापदण्ड द्वारा पहिचान गरिएको थियो²⁸; धेरैजसो सुरुमा टोनिकली सक्रिय थिए, तर प्याचिंग पछाडि गतिविधि परिवर्तन भइरहेको छ। यद्यपि, वर्तमान इन्जेक्सनको लागि प्रतिक्रिया सामान्यतया कडा र सामयिक थियो, र त्यसैले ची इनिटिलिटीमा इन्सुलिनको प्रभाव अनुसन्धान गर्न प्रयोग गरियो (परिणाम हेर्नुहोस्)। यस प्रतिक्रियामा InsR र IGF-1Rs को भूमिका परीक्षण गर्न प्रयोगहरूमा, HIMPA वा पीपीपी कम से कम 20 मिनेट को लागी CHI प्याच हुनु अघि लागू गरिएको थियो। इन्सुलिनको अधिकतम प्रभाव एक्लोपोजर ~ 16 मिनेट पछि अवलोकन गरियो, यद्यपि केही कक्षहरूमा, 50 मिनेट वा अधिक लामो सम्म अधिकतम थिएन। यसबाहेक, पीपीपीमा रेकर्ड गरिएका छवटा न्युरोनमध्ये चारमा, इन्सुलिनले स्पाइक संख्यामा प्रारम्भिक ह्रास ल्यायो र पुन: प्राप्ति हुनुभन्दा अघि स्पाइक संख्या भन्दा बढी भयो। फलस्वरूप, सबै प्रयोगहरूमा, इन्सुलिनको प्रभावलाई स्पाइक संख्यामा अधिकतम प्रभाव तुलना गरेर स्पाइक संख्याको साथ तुरून्त प्रमाणित गरिएको थियो जसलाई इंसुलिन अनुप्रयोग अघि तुरून्त पैदा गरियो। शिखर प्रभावमा पुग्नको लागि स्पष्ट फरकले स्लासमा रेकर्ड गरिएको सेलको गहिराइ सहित, धेरै कारकहरू प्रतिबिम्बित गर्न सक्दछ। तुलनीय समय बिन्दुमा इन्सुलिनको अभावमा CHI मा पनि कार्यवाही सम्भावित घटनाहरू रेकर्ड गरियो।

उच्च प्रदर्शन तरल क्रोमोग्राफी

मुसा स्ट्रियाटल स्लाइसहरूको DA सामग्री (400-μm मोटाई) इलेक्ट्रोकेमिकल डिटेक्शनको साथ उच्च प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफी प्रयोग गरेर निर्धारित गरिएको थियो⁵⁸। स्लाइस जोडीहरू 30 मिनेट को लागि ACSF मा 32 ° C मा सन्तुलित गरिएको थियो, र त्यसपछि एक जोडी प्रति स्लाइस अतिरिक्त 60 मिनेट को लागि ACSF मा 32 ° C मा लगाइएको थियो भने अर्को 10 वा 30 nM इन्सुलिनको साथ एसीएसएफमा incubated गरिएको थियो। आहार समूह तुलनाको लागि, स्ट्रिएटल टिश्यू 30 – 60 मिनेट पोस्ट-रिकभरी बीच भेला गरिएको थियो। इनक्युबेशन पछि, थप एसीएसएफ ध्यानपूर्वक स्लाइसहरूबाट हटाइयो, स्ट्राइटल टिश्यूको नमूना (7 – 10 मिलीग्राम) तौल गरिएको थियो, सुक्खा बरफमा जमेको थियो र त्यसपछि भण्डार गरिएको थियो −80। C मा भण्डारण गरिएको थियो। विश्लेषणको दिन, नमूनाहरू आइस-चिसो, इलियन्ट, आर्गनको साथ डिओक्सिजेनेटमा सोनिकेट गरिएको थियो⁵⁸, 2 मिनेट को लागी एक माइक्रोसेन्ट्रफ्यूजमा काता, र सतह सतह परिक्षणकर्ता HPLC स्तम्भ (BAS, वेस्ट Lafayette, IN) मा सीधा इंजेक्शन; डिटेक्टर 0.7 V बनाम Ag / AgCl मा सेट गिलास कार्बन इलेक्ट्रोड थियो।

Immunohistochemistry

इम्युनोहिस्टोकेमिकल लेबलिंगका लागि, मुसालाई सोडियम पेन्टोबार्बिटल (50 मिलीग्राम किलोग्राम) द्वारा एनेस्थेटिमा गरिएको थियो^-1, ip), त्यसपछि PBS (154 mM NaCl मा 10 mM फॉस्फेट बफर, pH 7.2) का साथ transcardially perfused यस पीबीएसमा 4% प्याराफर्मल्डिहाइड; मस्तिष्क हटाइयो र कोरोनल सेक्सन (20 μm) काटियो र पारंपरिक रूपमा प्रशोधन गरियो^{27, 59}। इम्यूनोफ्लोरोसेन्स छविहरू निकोन पीएम 800 कन्फोकल माइक्रोस्कोपको साथ स्पट सफ्टवेयर (डायग्नोस्टिक इन्स्ट्रुमेन्ट इंक) द्वारा नियन्त्रण गरिएको डिजिटल क्यामेरा र UM 100 उद्देश्य (संख्यात्मक एपर्चर = 1.4) प्रयोग गरेर वा एक Zeiss LSM 510 कन्फोकल माइक्रोस्कोमको साथ obtained उद्देश्य (संख्यात्मक एपर्चर = 63)। लेजरहरू आर्गन (1.2 nm), He / Ne (488 nm) र He / Ne (543 nm) थिए। कन्फोकल माइक्रोस्कोप सफ्टवेयर द्वारा प्रत्येक लेजरको लागि उपयुक्त फिल्टरहरू चयन गरिएको थियो। पिनहोल आकार प्रयोग गरिएको उद्देश्य र सेक्सन मोटाईको साथमा भिन्न छ zस्ट्याक जेनरेशन; हामीले सफ्टवेयर (सामान्यतया 30 μm) द्वारा संकेत गरिएको इष्टतम पिनहोल मान छनौट गर्‍यौं। डिजिटल फाइलहरू डेकोन्भोलुसन सफ्टवेयर (AutoQuant इमेजिंग) को साथ विश्लेषण गरिएको थियो, अन्तिम छविहरू Adobe Photoshop 7.0 प्रयोग गरेर प्रशोधन गरिएको। सबै छविहरू चमक र कन्ट्रास्टको लागि समायोजित गरिएका थिए; त्यस्ता समायोजन तस्विरको सबै भागहरूमा समानरूपमा गरिएको थियो। Striatal DA axon दुई TH एंटीबॉडीहरू प्रयोग गरेर पहिचान गरिएको थियो: पॉलीक्लोनल AB152 खरगोश एन्टी- TH (1: 800) र मोनोक्लोनल MAB318 माउस एन्टी-टीएच (1: 500) (दुबै केमिकोनबाट)। तीन InsR एन्टिबडीहरू प्रयोग गरियो: sc-57342 र sc-09 (1: 100; सान्ता क्रुज), र PP5 (फाइजरबाट एक उपहार)। प्रत्येकको विशिष्टता पहिले प्रदर्शन गरिएको छ^{60, 61}, र वर्तमान ब्लग पेप्टाइडको उपस्थितिमा एन्टिबडीज sc-57342 वा PP5 का साथ इम्युनोलाबेलिंगको अभावले हालको अध्ययनहरूमा पुष्टि भयो। चाट एन्टिबडी AB144 (1: 200; मिलीपोर), र बायोटिन भेक्टरबाट (1: 200) थियो। माध्यमिक एन्टिबडीहरू प्रयोग गरिएको गधा एन्टी-खरगोश एलेक्सा 488 (इनविट्रोजन), वा गधा एन्टी-खरगोश Cy2 (जैक्सन प्रयोगशाला, बार हार्बर, ME), गधा एन्टी-बोकरी Cy3 (जैक्सन) र गधा एन्टी-माउस साइएक्सएनयूएमएक्स (जैक्सन)।

TH + axons मा InsRs को सह-स्थानीयकरण मूल्यांकन गर्न, हामी Kir6.2 को उपस्थिति पहिचान गर्न पहिले वर्णन विधिहरू प्रयोग गर्‍यौं, ATP- संवेदनशील K को pore-forming subunit⁺ DA axons मा च्यानलहरू²⁷। Inscts प्रतिनिधित्व गर्ने Puncta समायोजित छविहरु को मा वितरित गरियो, TH इम्युनोरएक्टिविटी संग सुपरइम्पिसन संयोगले केही डिग्री हुन सक्छ भनेर संकेत गर्दै। यस धारणाको परीक्षण गर्न, हामीले दुईवटा मुसाबाट तीन एनएसी इम्युनोलाबेल्ड सेक्सनमा एक्सएनयूएमएक्स स्वतन्त्र क्षेत्रहरूमा InsR / TH सुपरिम्पेसनहरू गणना ग .्यौं। InsR डिजिटल फाइलहरू त्यसपछि 42 rot घडीको दिशामा घुमाइयो र गणनाहरू दोहोर्याइयो; रोटेशनले InsR प pun्कटाको संख्या घटायो जुन अधिकांश क्षेत्रहरूमा TH सँग सह-स्थानीयकृत गरियो (परिणाम हेर्नुहोस्)। रोटेशनको साथ सुपरइम्पोजीसनहरूको संख्यामा कमी²⁷ प्रत्येक स्ट्र्याटल फाँटमा DA अक्षहरूसँग सम्बन्धित InsR puncta को अनुपात संकेत गर्दछ।

रक्त ग्लूकोज र इन्सुलिन ELISA

स्लाइस अध्ययनका लागि अलंकारको समयमा ट्रंक रगत स .्कलन गरियो। रगत ग्लुकोज तत्काल मानक रक्त ग्लूकोज मोनिटरको साथ निर्धारित गरिएको थियो। इन्सुलिनको लागि, EDTA युक्त ट्यूबहरूमा अतिरिक्त रगत स was्कलन गरियो र 1,500 मा केन्द्रीकृत गरियोg 15 मिनेट को लागी; सुपरनाट्यान्ट (प्लाज्मा) ALPCO रट इन्सुलिन ELISA किटको साथ प्रक्रिया नगरेसम्म −80 ° C मा संकलन गरी भण्डार गरिएको थियो।

क्यान्युला प्लेसमेन्ट र हिस्टोलजिकल प्रमाणिकरण

चालीस एक वयस्क पुरुष स्प्रेग – डावली चूहा (ट्याकनिक र चार्ल्स नदी) सुरुमा तौल 350 – 425 g वजनको केटामाइनद्वारा anaesthetized थिए (100 मिलीग्राम किलो^-1, आईपी) र xylazine (10 मिलीग्राम किलोग्राम^-1, ip) र stereotaxically दुई क्रोनिक indwelling गाईड cannulae (26 गेज) संग द्विपक्षीय 2.0 मिमी पृष्ठीय NAc मध्यवर्ती शेल मा निषेध साइटहरु राखिएको संग प्रत्यारोपित⁶² (ब्रेग्माको 1.6 मिमी पूर्ववर्ती; 2.1 मिलिमिटर पार्श्व sagittal सिवन, सुझावहरू कोण कोण 8 the मध्यरेखा तिर, 5.8 मिमी भेंट्रल खोपडी सतह)। मुसालाई ब्यासिन दिइयो (2.0 मिलीग्राम किलोग्राम)^-1, subcutaneous) एनेस्थेसिया र बिहान पछि रिकभरी निम्न शल्यक्रिया एनाल्जेसिक रूपमा। शल्यक्रिया पछि एक हप्ता, मुसा एफआरमा राखियो (माथि वर्णन गरिएको) र 80% मा राखिएको छ अनुसन्धानको बाँकीको लागि तिनीहरूको पोस्ट शल्य चिकित्सा पुनःप्राप्ति वजन। व्यवहारिक परीक्षण पूरा भएपछि क्यान्युला प्लेसमेन्ट हिस्टोलजिकल रूपमा निर्धारित गरिएको थियो। प्रत्येक मुसा CO साथ मारिए₂, डिक्पेटेड र मस्तिष्क हटाइयो र> 10 48 h को लागी १०% बफर्ड फर्मिनलमा तय गरियो। फ्रोजन कोरोनल सेक्सन (-०-μm मोटाई) एक रिशर्ट-जंग क्रायोस्ट्याटमा काटिएको थियो, जिलेटिन-लेपित गिलास स्लाइडहरूमा घुम्ने पिसाब, र क्रेसिल भ्वाइटले दाग। दिईएको मुसाबाट डाटा मात्र प्रयोग गरिएको थियो यदि दुबै cannulae मध्यस्थ NAc शेल भित्र थियो⁶² (शेल / कोर वा शेल / घ्राणो ट्यूबरकल बोर्डर सहित) (पूरक छवि। 5); यी मापदण्डको आधारमा, दुईवटा मुसा अन्तिम विश्लेषणबाट हटाइयो।

स्वाद-प्राथमिकता कन्डिसन पूर्व एक्सपोजर

मुसाले एक राति (गृह पिंजरामा) र छ एक्सएनयूएमएक्स-मिनेट-प्रति-दिन सत्रहरू बीच 30% सोडियम स्याकारिन (सिग्मा) लाई 0.2-h अन्तरालको साथ पानीमा X-UMX-min-min-per-day सत्र प्राप्त गरे। मुसाले त्यसपछि 48% सोडियम स्याचारिनमा 5% अनवेट नभएको अंगूर वा चेरी कूल-एड (क्राफ्ट फूड्स) मा पानीमा 0.2% सोडियम स्याचारिनको लागि एक्सपोजरको दुई 0.05- मिनेट-प्रति दिन सत्रहरू प्राप्त गर्‍यो। पहिलो कूल-एड पूर्व एक्सपोजर सत्रको लागि, आधा मुसाले चेरी-स्वाद समाधान प्राप्त गरे, र अरू आधाले अंगूर-स्वाद समाधान प्राप्त गरे। स्वादहरू दोस्रो कूल-एड पूर्व एक्सपोजर सत्रमा उल्टाइयो कि सबै चूहोंले प्रत्येक स्वाद नमूना छन् भनेर निश्चित गर्न। सेवन सबै पूर्व एक्सपोजर सत्रहरूका लागि मापन गरिएको थियो। परीक्षण कक्षहरू ताजा ओछ्यानसहित स्पष्ट प्लास्टिकको पिँजाहरू थिए। सबै पूर्व एक्सपोजर सत्रहरूका लागि, मुसाको चेंबरको दुबै छेउमा समान समाधानमा पहुँच थियो। राति प्रि-एक्सपोजर सत्र बाहेक, सबै सत्रहरू व्यवहार प्रक्रिया कोठामा आयोजित गरियो, कुनै प्रशिक्षण वा परीक्षण अघि 30-min बसाई अवधि सहित।

एक बोतल कन्डिसन

अघिल्लो अध्ययनहरूले देखाए कि इन्साबको भेंट्रोमिडियल हाइपोथैलेमसमा माइक्रोइन्जेक्शनले भोजन व्यवहार र ग्लुकागन स्रावमा इन्सुलिनको असर रोक्न सक्छ^{63, 64}। यहाँ हामीले खानाको छनौटको सुदृढीकरणमा इन्सुलिनको सम्भावित भूमिकाको आकलन गर्न यो दृष्टिकोण प्रयोग गर्‍यौं। मुसा अर्ध अनियमित रूपमा दुई समूह, नियन्त्रण वा प्रयोगात्मक (InsAb) मा पूर्व पूर्व एक्सपोजर सेवन भोल्यूमको आधारमा तोकिएको थियो। नियन्त्रण समूहमा, मुसाले वाहन (माइक्रोइन्जेक्शन PBS; 137 mM NaCl र 2.7 mM KCl 10 mM फॉस्फेट बफरमा) वा IgG (Abcam ab81032; 0.5 μg μl^-1 पीबीएसमा, प्राप्त भएको रूपमा) दुई स्वाद समाधानहरू मध्ये एक खान्नु अघि एनएसी शेलमा माइक्रोइन्जेक्शन, र अन्य स्वाद समाधान खपत गर्नु अघि मक माइक्रोइन्जेक्शन। प्रयोगात्मक समूहमा, मुसाले InsAb को NAc खोल माइक्रोइन्जेक्शन प्राप्त गरे (Abcam ab46707; 0.5 μl को 1 μl^-1 PBS मा, प्राप्त भएको रूपमा) एउटा स्वादयुक्त समाधानको एक्स्पोजर अघि, र अर्कोमा एक्सपोजर माइक्रोइन्जेक्शन पहिले। तरल माइक्रोइन्जेक्शन र नक्कल माइक्रोइन्जेक्शन बीचको अल्टरनेसनका साथ दुई विषयका विषयहरू प्रयोग गरिएको थियो, जसले गर्दा माइक्रोइन्जेक्सनको कुल संख्या चारमा सीमित थियो, जसले गर्दा सम्भावित ऊतक क्षति र माइक्रोइन्जेसन साइटमा संवेदनशीलता गुम्न न्यून पार्दै।⁶⁵। तरल माइक्रोइन्जेक्शनको लागि, नियन्त्रण समाधान वा InsAb दुई 30-सेमी लम्बाइमा लोड गरिएको थियो PE-50 ट्यूबिंगको एक छेउमा 5 Haml ह्यामिल्टन सिरिन्जमा आसुत पानीले भरिएको छ र अर्को छेउमा 31-गेज इंजेक्टर क्यान्युलामा विस्तार गरिएको छ, जुन 2.0 मिमी विस्तारित छ। रोपण मार्गनिर्देशनहरु पछाडि। 0.5 infl इन्फ्यूजन खण्डहरू 90 overl को दरमा 0.005 s भन्दा बढी वितरित गरियो^-1; इंजेक्टर प्रसारको लागि समय अनुमति दिन ~ 60 s को लागी छोडियो, त्यसपछि इन्जेक्टर स्टाइललेटको साथ बदलियो।

मुसाहरू माइक्रोइन्जेक्शन वा नक्कल माइक्रोइन्जेक्शन पूरा भएको 2 मिनेट भित्र व्यवहार कोठामा सिधा सारियो। कन्डिसि solutions समाधानमा 0.2% सोडियम स्याकारिन, 0.05% unsweetened Grape वा Cherry Kool-Aid, र 0.8% ग्लूकोज हुन्छ। समाधान पहुँच प्रति सत्र 30 मिनेटमा सीमित थियो। पेय गरिएको स्वाद र पिउने पहुँचको साथ कक्षको किनारा अर्ध-अनियमित रूपमा खटाइएको थियो र प्रत्येक समूहमा काउन्टरब्यालेन्स गरिएको थियो। माइक्रोइन्जेक्सन बीच अन्तराल कम्तिमा 72 एच थियो, कुल आठ कन्डिसन सत्रहरूको लागि इन्फ्यूजन र नक्कल सत्रहरूको बीचमा।

दुई बोतल प्राथमिकता परीक्षण

पछिल्लो कन्डिसन सत्र पछि Fort Fort घण्टा, मुसा परीक्षण केन्द्रहरूमा राखिएको थियो दुबै कन्डिसन स्वादहरूमा एक साथ पहुँचका साथ; समाधानहरू 0.2% सोडियम स्याकारिन 0.05% अंगूर वा चेरी कूल-एड, बिना ग्लुकोजको थियो। 2 दिन (60 मिनेट प्रति दिन) मा परीक्षण भयो। नक्कली जोडी वा निलय पेयर गरिएको समाधान सहित पिउने ट्यूबको स्थिति बिरालो भयो कि यो निश्चित गर्न प्रत्येक चूरा पिंजराको दुबै पक्षहरूमा प्रत्येक समाधानको उपभोगको लागि परीक्षण गरिएको थियो। प्राथमिकता निर्धारण गर्न प्रत्येक स्वाद समाधानको सेवन दुई परीक्षण दिनहरूको लागि औसत थियो।

[³H] स्ट्रिएटल synaptosomes मा डीए upaake InsAb प्रभावकारिता मूल्यांकन गर्न

Striatal synaptosomes^{21, 66} AL मुसा (पुरुष, 350 – 400 g) बाट तयार गरिएको थियो, NAc (शेल र कोर) संग र CPU विच्छेदन गरियो र छुट्टै तयार पारियो। प्रत्येक क्षेत्रबाट टिशू एक आइस-चिसो 15 M सुक्रोज घोलको 0.32 खण्डमा समरूप गरिएको थियो मोटर मोटर चालित Teflon मूसलको साथ गिलास होमोजिनाइजरमा; Rinsing र Centrifugation पछि, अन्तिम गोली बरफ चिसो 0.32 M सुक्रोजमा पुनः स्थगित गरियो^{21, 66}। पहल गर्नु अघि [³H] DA uptake परख⁶⁶, अपटेक बफरको 180 μl को कुल भोल्युममा synaptosomal एलिकोट्स 15 for C मा 30 for C मा 30 मिनेट इन्सुलिनको उपस्थिति वा अनुपस्थितिमा, गाडीमा (PBS) वा InsAb मा (अन्तिम पातलो 1: 500) मा शेकरमा ऊँचाइन्थ्यो। , IgG मा (अन्तिम कमजोरियता 1: 500) वा गाडीमा। Uptake बफर (एमएम मा) निहित: NaCl (122); ना₂HPO₄ (3); NaH₂PO₄ (15); KCl (5); MgSO₄ (1.2); ग्लुकोज (10), CaCl₂ (1); नाइलामाइड (0.01); tropolone (0.1); र ascorbic एसिड (0.001), पीएच 7.4। को Uptake [³H] DA 20-well प्लेटहरूमा डीए (96 – 0.003 μM) को फरक सांद्रताको साथ प्रत्येक synaptosomal निलम्बनको 1.0 rapidlyl द्रुत रूपमा वितरण गरेर शुरू गरिएको थियो।³H] DA (5 nM); 5 मिनेट पछि 25 ° C मा प्लेट-शेकरमा, अपटेक शीत, द्रुत भ्याकुम फिल्टरेशन द्वारा समाप्त गरियो⁶⁶। प्रति राम्रो गणनाहरू pmoles मा रूपान्तरण गरियो, त्यसपछि प्रति मिनेट कुल प्रोटिनको मिलीग्राममा सुधार गरियो। सबै एसेज तीन पटकमा प्रदर्शन गरियो र कम्तिमा चार पटक दोहोर्याइएको; V_{अधिकतम} र K_m बायोसफ्ट केल रड्लिग सफ्टवेयर (क्याम्ब्रिज, युके) को उपयोग गरेर गणना गरिएको थियो।

तथ्याङ्कगत मूल्याङ्कन

डाटाको अर्थ ± sem को रूपमा दिइन्छ; महत्व जोडी वा जोडी नगरेको विद्यार्थीको प्रयोग गरी मूल्या as्कन गरिएको थियो t-tests वा ANOVA, अन्यथा संकेत नगरेसम्म। भोल्टमेट्री डाटाका लागि, n रेकर्डि sites साइटहरूको संख्या हो, जुन स्ट्रिटल सबगियन्स भित्र साइट-देखि-साइट परिवर्तनशीलता इन्टर-एनिमल वा इन्टर-स्लाइस भेरियबिलिटी भन्दा ठूलो हुन्छ।^{30, 32, 55, 56}; पशु संख्या प्रत्येक डेटा सेट को लागी नोट गरीन्छ। EC₅₀ पीक-ईभोक गरिएको [DA] मा इन्सुलिन र निकोटीनको प्रभावको लागि।_o प्रिज्म 6.0 (ग्राफप्याड सफ्टवेयर इंक, ला जोला, CA) को उपयोग गरेर गणना गरिएको थियो। इलेक्ट्रोफिजियोलोजिकल डाटाका लागि, सांख्यिकीय महत्त्व जोडी प्रयोग गरेर मूल्यांकन गरिएको थियो t-tests वा Wilcoxon प्रिज्म 6.0 मा परीक्षण, वा SAS 9.3 (SAS संस्थान इंक।, क्यारी, NC) मा मिश्रित दुई तर्फ ANOVA। स्वाद-प्राथमिकता कन्डिसनमा इन्सुलिन संलग्नताको मूल्यांकनको लागि, प्रोटोकल प्रयोग गरेर दुई पूर्ण अध्ययनहरू पूरा भए जुन प्रयोग गरिएको सवारी उपचारको अपवादसँग मिल्दोजुल्दो थियो। पहिलो अध्ययनमा, 10 मुसाले PBS र 9 को वाहन इन्फ्युसन प्राप्त गर्यो तर इंसाबको इन्फ्युसन प्राप्त भयो। दोस्रो अध्ययनमा, 10 मुसाले IgG र 10 को सवारी सवारी प्राप्त गर्‍यो भने InsAb को इन्फ्युसन प्राप्त भयो। त्यहाँ दुई वाहन समूह (PBS वा IgG) बीच ईन्फ्युसन कन्डिसन सत्रको बखत कुनै खास भिन्नता थिएन।F₁₉= 0.619, दुई तर्फी ANOVA मिश्रित दोहोरिने उपायहरू साथ आसव-कन्डिसन सत्र) वा परीक्षणमा (F₁₉= 0.012, दुई-तर्फ मिश्रित ANOVA स्वादमा दोहोरिने उपायहरू सहित)। फलस्वरूप, दुई प्रयोगहरू विश्लेषणको लागि संयुक्त थिए। यस विश्लेषणको लागि, 2 × 4 मिश्रित एनोवा (इन्फ्यूजन-कन्डिसनको दिनमा दोहोरिने उपायहरू) कन्डिसनको समयमा माइक्रोइन्जेक्शन उपचारको प्रभाव निर्धारण गर्न प्रयोग गरियो, त्यसपछि सुरक्षित गरियो t-tests (एकमा निर्धारित गरीएको छ जसमा कन्डिसन सत्र माइक्रोइन्जेक्शन उपचारले सेवन मात्रा घटायो)। उही विश्लेषण मक कन्डिसन सत्रहरूको लागि पूर्ण भयो। दुई बोतल स्वाद-प्राथमिकता परीक्षणको समयमा कन्डिसन उपचारको प्रभाव निर्धारण गर्न, डाटालाई मिश्रित दुई तर्फी ANOVA (स्वादमा दोहोरिने उपायहरू) प्रयोग गरेर विश्लेषण गरिएको थियो, त्यसपछि सुरक्षित गरिएको थियो t-tests (एक काल्पनिक परीक्षण गर्न पुच्छर जसले InsAb प्राथमिकता घटाउँछ)।

यो लेख कसरी उद्धृत गर्ने: Stouffer, MA एट अल। इन्सुलिन स्ट्रिनल डोपामाइन रिलीजलाई cholinergic इन्टर्न्यूरन सक्रिय गरेर इनाम संकेत दिन्छ। नेट कम्युन। 6: 8543 डोई: 10.1038 / ncomms9543 (2015)।

1. शुलिंगक्याम्प, आरजे, प्यागनो, टीसी, ह ,्ग, डी। रफा, आरबी इन्सुलिन रिसेप्टर्स र मस्तिष्कमा इन्सुलिन कार्य: समीक्षा र क्लिनिकल प्रभाव। न्यूरोसी। बायोभाभ। Rev. २,, – 24–-–855२ (२०००)
   • कैस
   • आईएसआई
   • पबमेड
   • लेख
   • सन्दर्भ देखाउनुहोस्
2. Gerozissis, K. ब्रेन इन्सुलिन, ऊर्जा र ग्लूकोज होमोस्टेसिस; जीन, वातावरण र चयापचय विकृति। युरो। जे। फार्माकोल। 585, 38 – 49 (2008)।
3. कैस
4. पबमेड
5. लेख
6. सन्दर्भ देखाउनुहोस्
7. कैस
8. पबमेड
9. लेख
10. सन्दर्भ देखाउनुहोस्
11. कैस
12. पबमेड
13. लेख
14. सन्दर्भ देखाउनुहोस्
15. कैस
16. पबमेड
17. लेख
18. सन्दर्भ देखाउनुहोस्
19. कैस
20. आईएसआई
21. पबमेड
22. लेख
23. सन्दर्भ देखाउनुहोस्
24. आईएसआई
25. पबमेड
26. लेख
27. सन्दर्भ देखाउनुहोस्
28. कैस
29. पबमेड
30. लेख
31. सन्दर्भ देखाउनुहोस्
32. सन्दर्भ देखाउनुहोस्
33. कैस
34. आईएसआई
35. पबमेड
36. लेख
37. सन्दर्भ देखाउनुहोस्
38. कैस
39. आईएसआई
40. पबमेड
41. लेख
42. सन्दर्भ देखाउनुहोस्
43. कैस
44. आईएसआई
45. पबमेड
46. सन्दर्भ देखाउनुहोस्
47. आईएसआई
48. पबमेड
49. लेख
50. सन्दर्भ देखाउनुहोस्
51. कैस
52. आईएसआई
53. पबमेड
54. लेख
55. सन्दर्भ देखाउनुहोस्
56. कैस
57. आईएसआई
58. पबमेड
59. लेख
60. सन्दर्भ देखाउनुहोस्
61. सन्दर्भ देखाउनुहोस्
62. कैस
63. आईएसआई
64. पबमेड
65. लेख
66. सन्दर्भ देखाउनुहोस्
67. कैस
68. आईएसआई
69. पबमेड
70. लेख
71. सन्दर्भ देखाउनुहोस्
72. कैस
73. आईएसआई
74. पबमेड
75. लेख
76. सन्दर्भ देखाउनुहोस्
77. पबमेड
78. लेख
79. सन्दर्भ देखाउनुहोस्
80. सन्दर्भ देखाउनुहोस्
81. कैस
82. पबमेड
83. लेख
84. सन्दर्भ देखाउनुहोस्
85. आईएसआई
86. पबमेड
87. लेख
88. सन्दर्भ देखाउनुहोस्
89. कैस
90. आईएसआई
91. पबमेड
92. लेख
93. सन्दर्भ देखाउनुहोस्
94. कैस
95. आईएसआई
96. पबमेड
97. लेख
98. सन्दर्भ देखाउनुहोस्
99. कैस
100. पबमेड
101. लेख
102. सन्दर्भ देखाउनुहोस्
103. सन्दर्भ देखाउनुहोस्
104. कैस
105. आईएसआई
106. पबमेड
107. लेख
108. सन्दर्भ देखाउनुहोस्
109. कैस
110. आईएसआई
111. पबमेड
112. लेख
113. सन्दर्भ देखाउनुहोस्
114. कैस
115. आईएसआई
116. पबमेड
117. लेख
118. सन्दर्भ देखाउनुहोस्
119. कैस
120. आईएसआई
121. पबमेड
122. लेख
123. सन्दर्भ देखाउनुहोस्
124. पबमेड
125. लेख
126. सन्दर्भ देखाउनुहोस्
127. कैस
128. आईएसआई
129. पबमेड
130. लेख
131. सन्दर्भ देखाउनुहोस्
132. कैस
133. पबमेड
134. लेख
135. सन्दर्भ देखाउनुहोस्
136. कैस
137. आईएसआई
138. पबमेड
139. लेख
140. सन्दर्भ देखाउनुहोस्
141. कैस
142. पबमेड
143. लेख
144. सन्दर्भ देखाउनुहोस्
145. आईएसआई
146. पबमेड
147. लेख
148. सन्दर्भ देखाउनुहोस्
149. सन्दर्भ देखाउनुहोस्
150. सन्दर्भ देखाउनुहोस्
151. कैस
152. आईएसआई
153. पबमेड
154. लेख
155. सन्दर्भ देखाउनुहोस्
156. कैस
157. आईएसआई
158. पबमेड
159. लेख
160. सन्दर्भ देखाउनुहोस्
161. कैस
162. आईएसआई
163. पबमेड
164. लेख
165. सन्दर्भ देखाउनुहोस्
166. कैस
167. आईएसआई
168. पबमेड
169. लेख
170. सन्दर्भ देखाउनुहोस्
171. कैस
172. आईएसआई
173. पबमेड
174. सन्दर्भ देखाउनुहोस्
175. कैस
176. आईएसआई
177. पबमेड
178. लेख
179. सन्दर्भ देखाउनुहोस्
180. पबमेड
181. लेख
182. सन्दर्भ देखाउनुहोस्
183. कैस
184. आईएसआई
185. पबमेड
186. लेख
187. सन्दर्भ देखाउनुहोस्
188. कैस
189. आईएसआई
190. पबमेड
191. लेख
192. सन्दर्भ देखाउनुहोस्
193. कैस
194. आईएसआई
195. पबमेड
196. लेख
197. सन्दर्भ देखाउनुहोस्
198. कैस
199. आईएसआई
200. पबमेड
201. लेख
202. सन्दर्भ देखाउनुहोस्
203. सन्दर्भ देखाउनुहोस्
204. कैस
205. आईएसआई
206. पबमेड
207. सन्दर्भ देखाउनुहोस्
208. सन्दर्भ देखाउनुहोस्
209. सन्दर्भ देखाउनुहोस्
210. सन्दर्भ देखाउनुहोस्
211. कैस
212. आईएसआई
213. पबमेड
214. लेख
215. सन्दर्भ देखाउनुहोस्
216. कैस
217. पबमेड
218. लेख
219. सन्दर्भ देखाउनुहोस्
220. कैस
221. आईएसआई
222. पबमेड
223. सन्दर्भ देखाउनुहोस्
224. सन्दर्भ देखाउनुहोस्
225. कैस
226. पबमेड
227. लेख
228. सन्दर्भ देखाउनुहोस्
229. आईएसआई
230. पबमेड
231. लेख
232. सन्दर्भ देखाउनुहोस्
233. सन्दर्भ देखाउनुहोस्
234. आईएसआई
235. पबमेड
236. लेख
237. सन्दर्भ देखाउनुहोस्
238. सन्दर्भ देखाउनुहोस्
239. कैस
240. आईएसआई
241. पबमेड
242. लेख
243. सन्दर्भ देखाउनुहोस्
244. सन्दर्भ देखाउनुहोस्
245. Vogt, MC & Bruning, JC CNS insulin Signal in Energy homeostasis and glucose metabolism control भ्रुणदेखि बुढेसकाल सम्म। ट्रेन्ड्स एंडोक्रिनोल। मेटाब। २,, ––-–– (२०१ 24)
246. हाभ्रानकोभा, जे।, स्मेचेल, डी।, रोथ, जे। र ब्राउनस्टेन, एम। मुसा दिमागमा इन्सुलिनको पहिचान। प्रोक। नेटल एकड। विज्ञान अमेरिका, 75, 5737–-–5741१ (१ 1978 XNUMX)
247. किंग, GL र जोनसन, एस रिसेप्टर-मध्यस्थता ईन्डोथेलियल सेलहरू मार्फत ईन्सुलिनको यातायात। विज्ञान २२227, १–––-१–1583 ((१ 1586 1985)।
248. Strubbe, JH, Porte, D. Jr And Woods, SC Insulin प्रतिक्रियाहरू र ग्लुकोजको स्तर प्लाज्मा र सेरेब्रोस्पाइनल तरल पदार्थमा उपवास र चूहमा पिलाउँदा। फिजियोल। व्यवहार। , 44, २०–-२०205 (१ 208 1988)
249. बैंकहरू, डब्ल्यूए र ​​कास्टिन, एजे रगत दिमागको अवरोधको विभेदक पारगम्यता दुई अग्नाशय पेप्टाइड्समा: इन्सुलीन र अमाइलिन। पेप्टाइडस् १,, – 19–-–883 ((१ 889 1998))
250. बैंकहरू, डब्ल्यूए सेरेब्रल इन्सुलिनको स्रोत। युरो। जे। फार्माकोल। 490, 5 – 12 (2004)।
251. नेमोटो, टि। एट अल। इन्सुलिन संश्लेषण र चूहा हिप्पोकैम्पस र सेरेब्रल कॉर्टेक्समा यसको स्रावको बारेमा नयाँ अन्तर्दृष्टि: ग्लाइकोजेन सिंथेसे किनेस-एक्सएनयूएमएक्स via को माध्यमबाट प्रोइनसुलिनको स्तरमा एमिलाइड-एक्सएनएमएक्स-एक्सएनयूएमएक्स-प्रेरित कटौती। सेल संकेत। 1, 42 – 3 (26)।
252. डि सूजा, सीटी एट अल। फ्याट युक्त आहारको सेवनले प्रोइन्फ्लेमेटरी प्रतिक्रिया सक्रिय गर्दछ र हाइपोथैलेमसमा इन्सुलिन प्रतिरोधलाई प्रेरित गर्दछ। एन्डोक्रिनोलजी 146, 4192 – 4199 (2005)।
253. एन्थोनी, K. एट अल। मस्तिष्क नेटवर्कमा भोक र इन्सुलिन प्रतिरोध प्रतिरोध नियन्त्रण मा इन्सुलिन पैदा प्रतिक्रिया को ध्यान: मेटाबोलिक सिन्ड्रोम मा खाना सेवन को बिग्रेको नियन्त्रण को मस्तिष्क आधार? मधुमेह 55, 2986 – 2992 (2006)।
254. Kelley, AE & Berridge, KC प्राकृतिक पुरस्कारको न्यूरोसाइन्स: लत लाग्ने औषधिहरूको लागि प्रासंगिकता। जे न्यूरोसी। २२, 22०–––3306११ (२००२)
255. Koob, GF & Volkow, ND नशाको न्यूरोसर्किट्री। न्युरोप्सीचोर्मोलोजी 35 217, २१–-२238 (२०१०)।
256. वर्थर, GA एट अल। स्थानीयकरण र चूहा दिमाग र पिट्युटरी ग्रंथि प्रयोग ईन्सुलिन रिसेप्टर्स को चरित्र वर्णन कृत्रिम परिवेशीय autoradiography र कम्प्यूटरीकृत densitometry। एन्डोक्रिनोलजी 121, 1562 – 1570 (1987)।
257. फिग्लिच, डीपी, इभान्स, एसबी, मर्फी, जे।, होन, एम। बास्किन, डीजी इन्टुलिन र लेप्टिनको लागि रिसेप्टर्सको अभिव्यक्ति भेन्ट्रल टेमेन्टल क्षेत्र / सब्स्टान्टिया निग्रा (VTA / SN) मा। मस्तिष्क Res 964 .107, १०–-११115 (२००))।
258. Daws, LC एट अल। इन्सुलिन संकेत र लत। न्यूरोफार्माकोलोजी 61, 1123 – 1128 (2011)।
259. फिगलविच, DP र Sipols, AJ ऊर्जा नियामक संकेत र खाद्य पुरस्कार। फार्माकोल। बायोकेम। व्यवहार। ,,, १–-२ ((२०१०)
260. प्याटरसन, TA एट अल। खाना अभाव mRNA र मुसा डोपामाइन ट्रान्सपोर्टरको गतिविधि घट्छ। न्यूरोएन्डोक्राइनोलजी एक्सएनयूएमएक्स, एक्सएनयूएमएक्स – एक्सएनयूएमएक्स (एक्सएनयूएमएक्स)
261. Carvelli, L. एट अल। PI 3 - डोपामाइन अपटेकको किनेस नियमन। जे न्यूरोचेम। 81, 859 – 869 (2002)।
262. विलियम्स, जेएम एट अल। Hypoinsulinemia डोपामाइनको एम्फेटॅमिन-प्रेरित रिभर्स ट्रान्सपोर्टको नियमन गर्दछ। PLoS बायोल। 5, e274 (2007)।
263. Zhen, J., Reith, MEA & Carr, KD क्रोनिक फूड रोकावट र डोपामाइन ट्रान्सपोर्टर ईन्फिट चूरा स्ट्रियाटममा। मस्तिष्क Res 1082, 98–101 (2006)।
264. Schoffelmeer, एएन एट अल। इन्सुलिन कोकेन-संवेदनशील मोनोमाइन ट्रांसपोर्टर प्रकार्य र आवेगपूर्ण व्यवहार परिमार्जन गर्दछ। जे न्यूरोसी। 31, 1284 – 1291 (2011)।
265. मेबल, डीएम, वong्ग, जेसी, डो,, वाईजे र बोर्गल्यान्ड, एसएल इन्सुलिन भेन्ट्रल टेग्मेन्टल क्षेत्रमा हेडोनिक फिडि reduces घटाउँछ र बढाइएको पुनःअपटेक मार्फत डोपामाइन एकाग्रता दबाउँछ। युरो। जे न्यूरोसी। , 36, २––––२2336 (२०१२)
266. Labouebe, G. एट अल। इन्सुलिन अन्तर्ग्राही टेबन्टल एरिया डोपामाइन न्यूरन्सको एन्डोकानाबिनोइड्स मार्फत दीर्घकालीन डिप्रेसन प्रेरित गर्दछ। नेट न्यूरोसी। 16, 300 – 308 (2013)।
267. कोन्नर, AC एट अल। ऊर्जा homeostasis को नियन्त्रणमा catecholaminergic न्यूरॉन्समा इन्सुलिन संकेतको लागि भूमिका। सेल मेटाब। 13, 720 – 728 (2011)।
268. फिगलविच, डीपी, बेनेट, जेएल, अलीकबारी, एस, जावोश, ए र सिपुल्स, एजे इन्सुलिनले विभिन्न सीएनएस साइटहरूमा तीव्र सुक्रोज सेवन घटाउने र चूहामा सुक्रोज आत्म-प्रशासन घटाउन कार्य गर्दछ। म जे फिजियोल। नियमित Integr। कम्पास फिजियोल। २ 295,, R388 – R394 (२००))।
269. पटेल, जे.सी., विट्कोभस्की, पी।, कोइत्जी, डब्ल्यूए र ​​राइस, ME सबसिकण्ड रेगुलेसन प्रि-सिन्याप्टिक के द्वारा स्ट्राइटल डोपामाइन रिलीज_{एटीपी} च्यानलहरू। जे न्यूरोचेम। 118, 721 – 736 (2011)।
270. टेपर, जेएम र बोलाम, जेपी कार्यात्मक विविधता र नवजात्रीय इन्टरन्यूरनहरूको विशिष्टता। Curr ओपिन न्युरोबियोल। १,, – 14–-–685२ (२००))
271. झोउ, एफएम, लिiang्ग, वाई र डानी, जेए एन्डोजेनस निकोटिनिक कोलिनेर्जिक गतिविधि स्ट्रियाटममा डोपामाइन रिलीजलाई नियमित गर्दछ। नेट न्यूरोसी। ,, १२२––२२4 (२००१)
272. चावल, ME र Cragg, SJ निकोटीन स्ट्रिमटममा इनाम-सम्बन्धित डोपामाइन संकेतहरू बृद्धि गर्दछ। नेट न्यूरोसी। ,, – 7–-–583। (२००))
273. Zhang, H. & Sulzer, D. निकोटाइन द्वारा डोपामाइन जारी को आवृत्ति-निर्भर मोडुलन। नेट न्यूरोसी। ,, – 7१-–581२ (२००))
274. पटेल, JC, Rossignol, E., चावल, ME & Machold, RP स्ट्रियाटल डोपामाइन विमोचनको नियमनको बिरूद्ध र फोरब्रेन र ब्रेन्सटेम cholinergic आदानहरू द्वारा खोजी मोटरको व्यवहार। नेट कम्युन ,, ११3२ (२०१२)
275. थ्रेफल, एस एट अल। स्ट्रियाटल डोपामाइन रिलिज कोलोनर्जिक इन्टर्न्यूरन्समा सिंक्रोनस गतिविधिबाट सुरु हुन्छ। न्युरोन 75, 58 – 64 (2012)।
276. क्याचोप, आर। एट अल। कोलिनेर्जिक इन्टर्न्यूरन्सको छनौट सक्रियताले इम्बुअल फ्यासिक डोपामाइन रिलीज बढाउँदछ: पुरस्कार प्रसंस्करणको लागि टोन सेटिंग। सेल रिप। 2, 1 – 9 (2012)।
277. जोन्स, आईडब्ल्यू, बोलाम, जेपी र वोननाकोट, एस मुनिको निग्रोस्ट्रियटल डोपामिनर्जिक न्यूरोनमा निकोटीन एसिटाइलकोलीन रिसेप्टर बीटा २ सब्यूनिट इम्युनोरिएक्टिभिटीको प्रेसनेप्टिक स्थानीयकरण। J. Comp। न्युरोल। 2 439,, २––-२235 ((२००१)
278. हिग्ली, MJ एट अल। Cholinergic interneurons मध्यस्थता द्रुत VGluT3- निर्भर ग्लूटामेटर्जिक प्रसारणको मध्यस्थता गर्दछ। प्लस एक 6, e19155 (2011)।
279. Touzani, K., Bodnar, R. & Sclafani, A. न्यूक्लियस एम्ब्याम्बन्समा डोपामाइन D1 - जस्तो रिसेप्टर्सको सक्रियता अधिग्रहणको लागि महत्वपूर्ण छ, तर अभिव्यक्ति होइन, मुसामा पोषक-वातानुकूलित स्वाद प्राथमिकताहरूको। युरो। जे न्यूरोसी। २,, १–२–-१–27 (२०० 1525)
280. Sclafani, ए, Touzani, K. & Bodnar, आरजे डोपामाइन र खाना प्राथमिकताहरू सिके। फिजियोल। व्यवहार। १०104, ––-– ((२०११)
281. मेयर, सीएम र बेलशम, डीडी केन्द्रीय इन्सुलिन सिग्नलिंग ईन्सुलिन रिसेप्टर सब्सट्रेट -१ सेरीन फास्फोरिलेसन, प्रोटीसोमल गिरावट, र लाइसोसोमल इन्सुलिन रिसेप्टर गिरावट को माध्यम द्वारा दीर्घकालीन ईन्सुलिन एक्सपोजर द्वारा attenuated छ। एंडोक्रिनोलजी १1१, ––-–– (२०१०)।
282. चावल, ME, पटेल, JC र Cragg, SJ डोपामाइन बेसल ganglia मा जारी। न्यूरोसाइन्स १ 198,, ११२-१–112 (२०११)।
283. स्मिथ, वाई।, सुरमेयर, डीजे, रेडग्राभ, पी। र किमुरा, एम। थालामिक बेसल ग्यांग्लिया सम्बन्धित व्यवहार स्विचिंग र सुदृढीकरणमा योगदान गर्दछ। जे न्यूरोसी। ,१, १31१०२–१16102१०16106 (२०११)
284. थ्रेफल, एस एट अल। स्ट्रियटल मस्करीनिक रिसेप्टर्सले डोपामाइन ट्रान्समिशनको गतिविधि निर्भरतालाई प्रवर्द्धन गर्दछ भेन्ट्रल बनाम डोर्सल स्ट्राइटममा कोलिनेर्जिक इन्टर्न्यूरन्समा भिन्न रिसेप्टर उपप्रकारहरू मार्फत। जे न्यूरोसी। 30, 3398 – 3408 (2010)।
285. Hoebel, BG, Avena, NM र Rada, पी। एक्क्म्बन्स डोपामाइन- acetylcholine सन्तुलन दृष्टिकोण र बचाव मा। Curr ओपिन फार्माकोल। ,, –१–-–7 (२००))
286. पोथोस, ईएन, क्रीस, आई। र होबल, बीजी वजन घटाईको साथ प्रतिबन्धित खानाले छनौटपूर्वक न्यूक्लियस एक्म्बेंसमा एक्स्ट्रासेल्युलर डोपामाइन घटाउँछ र एम्फेटामिन, मोर्फिन, र खानपानको डोपामाइन प्रतिक्रियामा परिवर्तन गर्दछ। जे न्यूरोसी। १,, – 15–०-–6640०० (१ 6650 1995))
287. गिइजर, बीएम एट अल। मुसा आहार मोटाईमा मेसोल्लिम्बिक डोपामाइन न्यूरोट्रान्समिशनको घाटा। न्यूरोसाइंस 159, 1193 – 1199 (2009)।
288. मोरिस, जेके एट अल। इन्सुलिन प्रतिरोध निग्रोस्ट्रियल डोपामाइन प्रकार्य बिगार्छ। म्याद समाप्त न्युरोल 231, 171 – 180 (2011)।
289. डी अराउजो, आईई एट अल। स्वाद रिसेप्टर संकेतको अभावमा खाना पुरस्कार। न्युरोन 57, 930 – 941 (2008)।
290. स्टाइस, ई।, स्पूर, एस, बोहोन, सी। सानो र डीएम मोटापा र खानेकुराको लागि कुप्रलो स्ट्रिटल प्रतिक्रियाको बीच सम्बन्ध ताकीआ ए १ एलेलेद्वारा मध्यस्थता गर्दछ। विज्ञान 1, – 322 – 449–२ (२००))
291. वाang्ग, GJ एट अल। ब्रेन डोपामाइन र मोटाई। ल्यान्सेट 357, 354 – 357 (2001)।
292. जॉनसन, प्रधानमन्त्री र केनी, पीजे डोपामाइन डी २ रिसेप्टर्स व्यसन जस्तै इनाम डिसफंक्शन र मोटो मुसामा बाध्यकारी खानु। नेट न्यूरोसी। १,, –––-–2१ (२०१०)
293. Carr, KD, Kim, G.-Y. & Cabeza de Vaca, S. Rewardsing र लोपोमटर-सक्रिय प्रभावहरू प्रत्यक्ष डोपामाइन रिसेप्टर एगोनिस्टहरूको मुसामा पुरानो खाद्य प्रतिबन्ध द्वारा बढाइएको छ। साइकोफार्माकोलजी (बर्ल) १154, –२०-–२420 (२००१)।
294. लेभिन, बीई र केसी, आरई आहार-प्रेरित मोटाई र प्रतिरोधी मुसामा विभिन्न शरीर वजन सेट पोइन्टहरूको रक्षा। म जे फिजियोल। 274, R412 – R419 (1998)।
295. पटेल, जेसी र राइस, एमई निगरानी axonal र somatodendritic डोपामाइन रिलीज मस्तिष्क स्लाइसहरूमा द्रुत-स्क्यान चक्रीय भोल्टमेट्रीको प्रयोग गरेर। विधि Mol। बायोल। ,,, २–––२96 ((२०१))।
296. ली, सीआर, विटकोभस्की, पी। रईस, ME रेगुलेसन सब्सन्टिया निग्रा पार्स reticulata GABAergic न्यूरॉन गतिविधि एच द्वारा₂O₂ फ्लुफेनमिक एसिड-संवेदनशील च्यानलहरू र के मार्फत_{एटीपी} च्यानलहरू। अगाडि Syst न्यूरोसी। 5, 14 (2011)।
297. चेन, बीटी, मोरान, केए, अवश्लुमोभ, MV र चावल, ME सीमित विनियमन somatodendritic डोपामाइन रिलीज भोल्टेन्ट-संवेदनशील Ca द्वारा²⁺ च्यानलहरू axonal dopamine विमोचनको कडा नियमनको साथ विपरीत छ। जे न्यूरोचेम। 96, 645 – 655 (2006)।
298. ली, एक्स। एट अल। चूहोंमा LRRK2 ओभररेक्सनको साथ विस्तारित स्ट्र्याटल डोपामाइन ट्रान्समिशन र मोटर प्रदर्शनलाई पारिवारिक पार्किन्सन रोग म्यूटेशन G2019S द्वारा हटाईन्छ। जे न्यूरोसी। 30, 1788 – 1797 (2010)।
299. Wu, Q., Reith, MEA, Wightman, RM, Kawagoe, KT & Garris, PA रिलीजको निर्धारण र वास्तविक समय भोल्टमेट्रीद्वारा मापन गरिएको इलेक्ट्रोलीली ढoked्गले डोपामाइन डायनेमिक्सबाट अपटेक प्यारामिटरहरू। जे न्यूरोसी। विधि ११२, ११ – -१–112 (२००१)।
300. चेन, BT, अवश्लुमोभ, MV र चावल, ME H₂O₂ सिन्याप्टिक डोपामाइन रिलिजको एक उपन्यास, अन्तर्जात मोडुलर हो। जे न्यूरोफिजियोल। 85, 2468 – 2476 (2001)।
301. विटकोभस्की, पी। पटेल, जेसी, ली, सीआर र राइस, एमई इम्यूनोसाइटोकेमिकल पहिचान डोपामाइन निग्राल डोपामिनर्जिक न्यूरन्सको सोमाटोडेंड्रिटिक डिब्बेबाट रिलीज हुने प्रोटीनको पहिचान। न्युरो साइंस १164, – 488–-–496 (२००))
302. सुगिमोटो, के। एट अल। मुसा परिधीय स्नायुमा इन्सुलिन रिसेप्टर: यसको स्थान र वैकल्पिक रूपमा काटिएको isoforms। मधुमेह मेटाब। Res Rev. 16, 354 – 363 (2000)।
303. सान्चेज-अलाभज, एम एट अल। इन्सुलिनले न्यानो संवेदनशील न्युरोनको प्रत्यक्ष निषेध द्वारा हाइपरथर्मिया निम्त्याउँछ। मधुमेह 59, 43 – 50 (2010)।
304. प्याक्सिनोस, जी। र वाटसन, सी। स्टीरियोटाक्सिक कोर्डिनेट्समा र्‍याट ब्रेन 6th औं एड एकेडमिक (२००))।
305. Strubbe, JH & Mein, CG VMH मा इन्सुलिन एन्टिबडीहरूको द्विपक्षीय इन्जेक्शनको प्रतिक्रियामा खुवाइयो बढायो। फिजियोल व्यवहार। १,, –० – 19१ ((१ 309 313)
306. परांजपे, SA एट अल। पन्क्रिएटिक ग्लूकागन स्रावमा भेंट्रोमिडियल हाइपोथैलेमसमा इन्सुलिनको प्रभाव vivo मा। मधुमेह 59, 1521 – 1527 (2010)।
307. बुद्धिमत्ता, आरए र हॉफम्यान, डीसी स्थानीय इन्ट्राक्रानियल ईन्जेक्सन द्वारा औषधि पुरस्कार संयन्त्रको स्थानीयकरण। Synapse १०, २–––२10 ((१ 247 263 २)।
308. जेन, जे।, मैती, एस, चेन, एन।, दत्ता, एके र रीथ, MEA अन्तर्क्रिया 4- (2-benzhydryloxy-ethyl) -1- (4-फ्लोरोबेंजाइल) piperidine र aspartate 68 को एक हाइड्रोक्साइपरिडिन एनालग मानव डोपामाइन ट्रान्सपोर्टर। युरो। जे फार्माकोल। 506०17, १–-२ ((२००))

सन्दर्भहरू डाउनलोड गर्नुहोस्

यी अध्ययनहरूलाई एनआईएच अनुदान DA033811 (MER, KDC and MEAR), NS036362 (MER), DA03956 (KDC) र एक NARSAD स्वतन्त्र अन्वेषक पुरस्कार (KDC) द्वारा समर्थित थियो। एसएक्सएनयूएमएक्स डा लाज शेफर, नोवो नर्डिस्कको उदार उपहार हो। PP961 एंटीबॉडी फाइजर द्वारा एक उदार उपहार थियो। हामी डा। चार्ल्स निकोलसन, NYU स्कूल अफ मेडिसिन सफ्टवेयर को लागि निकाल्न को लागी धन्यवाद दिन्छौं V_{अधिकतम} FCV डाटा बाट मानहरू।