(HUMAN) චර්යාත්මක කොකේන් වලට චර්යාත්මක හා ව්යුහමය ප්රතික්රියා සඳහා න්යෂ්ටික ඇකුම්බෙන් ෂෙල් (2013) තුල ΔFosB සහ කැල්සියම් / කැලමඩින්ඩින්-රඳා පවතින ප්රෝටීන් කිනාස් II සඳහා ඇතුළත් කර ඇති පෝෂක චලනය අවශ්ය වේ.

පිටපත් කිරීමේ සාධකය osFosB සහ මොළයෙන් පොහොසත් කැල්සියම් / කැල්මොඩුලින් මත යැපෙන ප්‍රෝටීන් කයිනාස් II (CaMKIIα) න්‍යෂ්ටික සමුච්චය (NAc) තුළ කොකේන් හෝ වෙනත් මනෝ උත්තේජක drugs ෂධ වලට නිදන්ගත නිරාවරණය වීමෙන් ප්‍රේරණය වන අතර එම ප්‍රෝටීන දෙක සංවේදී drug ෂධ ප්‍රතිචාර වලට මැදිහත් වේ. . ΔFosB සහ CaMKIIα යන දෙකම AMAC ග්ලූටමේට් ප්‍රතිග්‍රාහක ප්‍රකාශනය සහ NAc හි ක්‍රියාකාරිත්වය නියාමනය කළද, NAc මධ්‍යම ස්පයිනි නියුරෝන (MSN) මත ඩෙන්ඩ්‍රිටික් කොඳු ඇට පෙළ සෑදීම සහ කොකේන් සඳහා ලොකොමෝටර් සංවේදීකරණය යන කරුණු මේ දක්වා ගවේෂණය කර නොමැත. මෙහිදී අපි පෙන්නුම් කරන්නේ ප්‍රෝටීන්-ස්ථායීකරණ Ser27 හි CaMKIIα විසින් osFosB පොස්පරීකරණය කර ඇති බවත් CaMKII මීයන් NAc හි osFosB සමුච්චය කිරීම සඳහා අවශ්‍ය වේ.

ඊට ප්‍රතිවිරුද්ධව, ඩීඑම් සඳහා තෝරාගත් බලපෑමක් වන වයිවෝ හි CaMKIIα ජාන ප්‍රකාශනය කොකේන් ප්‍රේරණය සඳහා osFosB අවශ්‍ය සහ ප්‍රමාණවත් බව අපි පෙන්වමු.₁NAc shell උප කලාපයේ MSNs ටයිප් කරන්න.

තවද, NAc MSN මත ඩෙන්ඩ්‍රිටික් කොඳු ඇට පෙළ ප්‍රේරණය කිරීම සහ ocFosB හි NAc අධික ලෙස පීඩනය යෙදීමෙන් පසු කොකේන් සඳහා චර්යාත්මක ප්‍රතිචාර දැක්වීම වැඩි කිරීම CaMKII මත රඳා පවතී.

වැදගත් වන්නේ, අපි පළමු වරට NAc හි osFosB සහ CaMKII ප්‍රේරණය නිරූපණය කිරීමයි මිනිස් කොකේන් වලට ඇබ්බැහි වූවන්, අනාගත චිකිත්සක මැදිහත්වීම සඳහා විය හැකි ඉලක්ක යෝජනා කිරීම. නිදන්ගත කොකේන් වලට ප්‍රතිචාර වශයෙන් මොළයේ විපාක පරිපථය නියාමනය කිරීමේ ප්‍රධාන යාන්ත්‍රණයක් ලෙස osFosB සහ CaMKII සෛල වර්ගයේ සහ මොළයේ කලාපයට විශේෂිත ධනාත්මක පෝෂක ලූපයක නියැලී සිටින බව මෙම දත්ත මගින් තහවුරු වේ.

හැදින්වීම

සාක්ෂි වැඩි කිරීම ජාන ප්‍රකාශනයේ වෙනස්වීම් මත්ද්‍රව්‍යවලට ඇබ්බැහි වීමේ යාන්ත්‍රණයට දායක වේ යන මතයට සහාය වේ (රොබිසන් සහ නෙස්ලේටර්, 2011). මෙම වෙනස්කම් වල එක් වැදගත් මැදිහත්කරුවෙකු වන්නේ osFosB, ෆොස් පවුලේ පිටපත් කිරීමේ සාධකයයි (නෙස්ලේ, 2008). ඕනෑම අපයෝජන drug ෂධයක නිදන්ගත පරිපාලනය, විපාක චර්යා සඳහා අත්‍යවශ්‍ය ලිම්බික් කලාපයක් වන න්‍යෂ්ටික සමුච්චය (NAc) හි ΔFosB සමුච්චය වීමට හේතු වේ. එස්ux ප්‍රේරණය D1 ඩොපමයින් ප්‍රතිග්‍රාහක ප්‍රකාශ කරන NAc මධ්‍යම ස්පයිනි නියුරෝන (MSN) පන්තියට විශේෂිත වේ. මෙම D1 වර්ගයේ NAc MSN වල osFosB හි අනභිභවනීය පීඩනය, කොකේන් සහ මෝෆීන් සඳහා ලොකොමෝටරය සහ ප්‍රතිලාභදායක ප්‍රතිචාර වැඩි කරයි. (කෙල්ස් සහ ඇල්., 1999; Zachariou et al., 2006), කොකේන් ස්වයං පරිපාලනය වැඩි කිරීම ඇතුළුව (කොල්බි et al., 2003). තවද, osFosB පිටපත් කිරීමේ ක්‍රියාකාරකම් වල ජානමය හෝ වෛරස් අවහිර කිරීම මෙම drugs ෂධවල ප්‍රති effects ල අඩු කරයි (Zachariou et al., 2006), ΔFosB හි මෙම අඛණ්ඩ ප්‍රේරණය නිදන්ගත drug ෂධ පරිපාලනය විසින් NAc හි ඇති කරන ලද කල්පවත්නා වෙනස්කම් වල තීරණාත්මක මැදිහත්කරුවෙකු බව පෙන්නුම් කරයි..

ΔFosB හි අසාමාන්‍ය ස්ථායිතාව (අනෙකුත් සියලුම ෆොස් පවුලේ ප්‍රෝටීන වලට සාපේක්ෂව) අණුවේ සහජ දේපලකි, පූර්ණ-දිග FosB හි ඇති ඩිග්‍රොන් වසම් කප්පාදු කිරීම හේතුවෙන් (Carle et al., 2007), සහ නියාමනය කළ ක්‍රියාවලියකි. OsFosB පොස්පරීකරණය කර ඇත කෘතිම දී සහ ඉතින් Ser27 හි දී, මෙම ප්‍රතික්‍රියාව cellFosB, ~ 10- ගුණයකින්, සෛල සංස්කෘතියේ සහ NAc හි තවදුරටත් ස්ථාවර කරයි ඉතින් (උලරි-රේනෝල්ඩ් සහ අල්., 2009). Ser27-osFosB යනු කේසීන් කයිනාස්- 2 සඳහා උපස්ථරයක් බව පෙන්වා දී ඇතත් කෘතිම දී (උලරි සහ අල්., 2006), එහි යාන්ත්‍රණය ඉතින් පොස්පරීකරණය තවමත් නොදනී.

කැල්සියම් / කැල්මොඩුලින් මත යැපෙන ප්‍රෝටීන් කයිනාස් II (CaMKII) යනු ඉහළ ප්‍රකාශිත සෙරීන් / ත්‍රෙටොනීන් කයිනස් වන අතර එහි α සහ β සමස්ථානික ඩොඩෙකැමරික් හෝමෝ සහ හීටරෝ-හොලොඑන්සයිම සාදයි. ඉතින්, සහ විවිධාකාර ස්නායු ප්ලාස්ටික් සඳහා අත්‍යවශ්‍ය වේ (ලිස්මන් සහ වෙනත් අය, 2002; කොල්බ්රාන් සහ බ්රවුන්, 2004). CaMKIIα නිදන්ගත ඇම්ෆෙටමින් මගින් NAc කවචයේ වර්‍ගාත්මකව ප්‍රේරණය වේ (ලෝත් සහ අල්., 2010), සහ NAc කවචයේ CaMKII ක්‍රියාකාරකම් වල c ෂධ අවහිර කිරීම ඇම්ෆෙටමින් වලට චර්යාත්මක සංවේදීතාව අඩු කරයි (ලෝත් සහ අල්., 2008) සහ කොකේන් (පියස් සහ ඇල්., 1998), මෙම NAc උප කලාපය තුළ CaMKIIα හි වෛරස් අධික ලෙස පීඩනය යෙදීම, ඇම්ෆෙටමින් සඳහා ලොකොමෝටර් සංවේදීතාව සහ ස්වයං පරිපාලනය වැඩි කරයි (ලෝත් සහ අල්., 2010). CaMKIIα AMPA ග්ලූටමේට් ප්‍රතිග්‍රාහක අනු ඒකක මොඩියුලේටරය හරහා ප්‍රතිලාභ හැසිරීම් වලට බලපායි (පියස් සහ ඇල්., 1998), CaMKIIα ක්‍රියාකාරකම් දිගු කලක් AMPA ප්‍රතිග්‍රාහක ක්‍රියාකාරිත්වය හා ස්නායු-ප්ලාස්ටික් ආකාර කිහිපයක උපාගමික ඉලක්ක කිරීම සමඟ සම්බන්ධ වී ඇති හෙයින් (මැලිනෝව් සහ මැලෙන්කා, 2002).

මෙම සාහිත්‍යය ΔFosB සහ CaMKII අතර සමාන්තරයන් කිහිපයක් පෙන්නුම් කරයි: අපයෝජන drugs ෂධවල බහු චර්යාත්මක බලපෑම් සඳහා දෙකම අවශ්‍ය සහ ප්‍රමාණවත් වේ, දෙකම විවිධ ස්නායු සෛල වර්ගවල ඩෙන්ඩ්‍රිටික් කොඳු ඇට පෙළ නියාමනය කරයි. ඉතින් (ජෝර්ඩින් සහ වෙනත් අය, 2003; Maze et al., 2010), සහ දෙකම අවම වශයෙන් ඔවුන්ගේ චර්යාත්මක බලපෑම් සමහරක් AMPA ප්‍රතිග්‍රාහක මොඩියුලනය කිරීම මගින් සිදු කරයි (කෙල්ස් සහ ඇල්., 1999; මැලිනෝව් සහ මැලෙන්කා, 2002; Vialou et al., 2010). මෙම සමාන්තරයන් තිබියදීත්, osFosB සහ CaMKII අතර ක්‍රියාකාරී සම්බන්ධතාවයක් නොදනී. මෙන්න, අපි osFosB සහ CaMKII අතර පරස්පර නියාමනය ස්ථාපිත කරන අතර, ප්‍රෝටීන දෙක NAc කවචයේ D1 වර්ගයේ MSN- විශේෂිත ආහාර-ඉදිරි පුඩුවක් සාදන අතර එය කොකේන් මගින් ප්‍රේරණය වන අතර කොකේන් ප්‍රතිචාර පරාසයක් නියාමනය කරයි. ඉතින්.

යන්න:

ද්රව්ය සහ ක්රම

අත්හදා බැලීම 1: iTRAQ කොකේන් ප්‍රතිකාරයෙන් පසු NAc ෂෙල් සහ හරය පිළිබඳ ප්‍රෝටොමික් විශ්ලේෂණය (ෆිග් 1A)

වැඩිහිටි (8 සති) පිරිමි මීයන්ට දින හතකට දිනකට එක් වරක් 20 mg / kg කොකේන් හෝ සේලයින් වාහන IP ලබා දෙන ලදී. අවසන් එන්නතෙන් පසු 24 පැය, NAc කවචය සහ හරය ක්ෂුද්‍ර විභේදනය කරන ලදි (ෆිග් 1A) සහ ෆ්ලෑෂ් ශීත කළ. කලින් විස්තර කළ පරිදි iTRAQ විශ්ලේෂණයන් සිදු කරන ලදී (රොස් සහ වෙනත් අය, 2004; ඩවලෝස් සහ වෙනත් අය, 2010).

රූපය 1

කොකේන් මගින් NAc හි CaMKII හි ෂෙල්-විශේෂිත ප්‍රේරණය

අත්හදා බැලීම 2: කොකේන් ප්‍රතිකාරයෙන් පසු මීයන්ගේ NAc හරය හා ෂෙල් වල ප්‍රෝටීන් වෙනස්වීම් ප්‍රමාණ කිරීම (රූපය 1B-D)

වැඩිහිටි (8 සති) පිරිමි මීයන්ට දින හතකට ලොකොමෝටර් පටිගත කිරීමේ කුටිවල දිනකට එක් වරක් 10 mg / kg කොකේන් හෝ සේලයින් වාහන IP ලබා දෙන ලදී. කොකේන් එන්නත් කිරීම සඳහා ලොකොමෝටර් ප්‍රතිචාර (5 mg / kg IP) මීට පෙර කොකේන් සමඟ ප්‍රතිකාර කළ සතුන් තුළ (“නිදන්ගත” ලෙස හැඳින්වේ) සහ සේලයින් සමඟ ප්‍රතිකාර කළ අයගෙන් කොටසක් (“උග්‍ර” ලෙස හැඳින්වේ) සහ සේලයින් සඳහා ලොකොමෝටර් ප්‍රතිචාර දැක්විය. ඉතිරිව ඇති නිදන්ගත සේලයින් ප්‍රතිකාර කළ සතුන් තුළ පමණක් (“සේලයින්” ලෙස හැඳින්වේ) වාර්තා වී ඇත. විස්තර කර ඇති පරිදි දුම්රිය එන්ජින් ක්‍රියාකාරකම් ඇගයීම් සිදු කරන ලදී (Hiroi et al., 1997). කෙටියෙන් කිවහොත්, වැඩිහිටි පිරිමි මීයන් 18 මිනිත්තුව සඳහා 24 ”× 30” PAS විවෘත-ක්ෂේත්‍ර පටිගත කිරීමේ පෙට්ටිවල (සැන් ඩියාගෝ උපකරණ) තැන්පත් කර ඇති අතර, එක් IP එන්නතක් සේලයින් ලබා දී අතිරේක 30 මිනිත්තුවක් සඳහා නිරීක්ෂණය කරන ලද අතර, 5 mg / kg කොකේන් තනි IP එන්නත් කිරීම සහ 30 මිනිත්තුව සඳහා නිරීක්ෂණය කරනු ලැබේ.

මෙම අවසාන එන්නතෙන් පසු 24 පැය, නිර්වින්දනය මගින් ස්නායු ප්‍රෝටීන මට්ටම් සහ පොස්ෆෝ තත්වයන් කෙරෙහි නිර්වින්දනයෙහි බලපෑම වළක්වා ගැනීම සඳහා මීයන් නිර්වින්දනයකින් තොරව කසාය කරන ලදී. මොළය අනුක්‍රමිකව 1.2 mm න්‍යාසයකින් (බ්‍රෙන්ට්‍රී සයන්ටිෆික්) කපා ඇති අතර ප්‍රෝටීන් (රොචේ) සහ පොස්පේටේස් (සිග්මා ඇල්ඩ්‍රික්) නිෂේධක අඩංගු පොස්පේට් බෆර් කරන ලද සේලයින් වල ඉලක්කගත පටක ඉවත් කර ඇති අතර NAc හරය සඳහා 14 මිනුම් පන්ච් සහ ඉතිරි 12 මිනුම් පන්ච් භාවිතා කරයි. NAc shell සඳහා පටක (බලන්න ෆිග් 1A) සහ වහාම වියළි අයිස් මත ශීත කළ. නවීකරණය කරන ලද RIPA බෆරයේ සැහැල්ලු sonication මගින් සාම්පල සමජාතීයකරණය කරන ලදි: 10 mM Tris base, 150 mM සෝඩියම් ක්ලෝරයිඩ්, 1 mM EDTA, 0.1% සෝඩියම් ඩොඩෙසිල් සල්ෆේට්, 1% ට්‍රයිටන් X-100, 1% සෝඩියම් ඩයොක්සයිටේට්, pH 7.4% ඉහත පරිදි. ලැම්ලි බෆරය එකතු කිරීමෙන් පසුව, ප්‍රෝටීන 4-15% පොලිඇක්‍රයිලමයිඩ් ග්‍රේඩියන්ට් ජෙල් (නිර්ණායක පද්ධතිය, බයෝරාඩ්) මත වෙන් කරන ලද අතර නිෂ්පාදකයාගේ ප්‍රොටෝකෝලයන්ට අනුව ඔඩිසි ක්‍රමය (ලී-කෝර්) භාවිතා කරමින් බටහිර පිපිරුම් සිදු කරන ලදී.

අත්හදා බැලීම 3: කොකේන් ඉවත් කර ගැනීමෙන් පසු මීයන්ගේ NAc හරය හා ෂෙල් වල ප්‍රෝටීන් වෙනස්වීම් ප්‍රමාණ කිරීම (ස්ලයිඩර් 1E)

වැඩිහිටි (8 සති) පිරිමි මීයන්ට දින හතකට දිනකට එක් වරක් 10 mg / kg කොකේන් හෝ සේලයින් වාහන IP ලබා දෙන ලදී. අවසාන එන්නතෙන් දින 14 දිනකට පසු, සේලයින් සමඟ ප්‍රතිකාර කළ සතුන්ට තවත් සේලයින් එන්නතක් ලබා දෙන ලදි (“සේලයින්” ලෙස හැඳින්වේ), සහ කොකේන් සමඟ ප්‍රතිකාර කළ සතුන්ට තවත් සේලයින් එන්නතක් ලබා දෙන ලදි (14 දින ඉවත් කිරීම හෝ “14d WD” ලෙස හැඳින්වේ) හෝ කොකේන් එක් එන්නතක් ( අභියෝගය සඳහා “14d WD Chal” ලෙස හැඳින්වේ). අවසාන එන්නතෙන් පැයකට පසු සතුන් දිරාපත් වූ අතර බටහිර පිපිරුම් සිදු කරන ලදී අත්හදා බැලීම 2.

අත්හදා බැලීම 4: කොකේන් ස්වයං පරිපාලනයෙන් පසු මීයන්ගේ NAc හරය හා ෂෙල් වල ප්‍රෝටීන් වෙනස්වීම් ප්‍රමාණ කිරීම (රූපය 2A - C)

දින නවයක් සඳහා ස්ථාවර අනුපාතයකින් යුත් 0.5 කාලසටහනක් යටතේ එක් පැය සැසියකදී 1 mg / kg / කොකේන් මුදල් සම්භාරයක් වියදම් කිරීම සඳහා මීයන් පුහුණු කරන ලදී. මූලික සැසි නවයකට පසුව, මීයන් අවසාන සැසි දෙකේදී කොකේන් අනුභව කිරීමෙන් සමතුලිත කණ්ඩායම් දෙකකට බෙදා ඇත. එක් මීයන් කණ්ඩායමකට පැය-පැය සැසිවලදී (කෙටි ප්‍රවේශය, ෂීඒ) කොකේන් (0.5 mg / kg / infusion) ස්වයං-පරිපාලනය කිරීමට අවසර දී ඇති අතර අනෙක් මීයන් කණ්ඩායම පැය හයක සැසිවලදී කොකේන් ස්වයං-පරිපාලනය කරයි (දිගු ප්‍රවේශය, LgA ) අමතර දින දහයක් සඳහා (තීව්‍ර කිරීමේ සැසි).

විස්තර කර ඇති පරිදි ප්‍රතිශක්තීකරණ රසායන විද්‍යාව සඳහා මොළයේ කොටස් සකස් කරන ලදී (පර්රුටි සහ අල්., 2004). අවසන් වරට drug ෂධයට නිරාවරණය වීමෙන් පසු මොළය 18-24 පැයට විලවුන් කරන ලද අතර එහි ප්‍රති ing ලයක් ලෙස ඉතිරිව ඇති පූර්ණ-දිග FosB ප්‍රෝටීන පිරිහීමට ලක්විය. එමඟින් ඉතිරිව ඇති සියලුම ප්‍රතිශක්තිකරණ ක්‍රියාකාරිත්වය ΔFosB පිළිබිඹු වේ. මෙම පිරිහීම බටහිර පිපිරුම් මගින් සනාථ කරන ලද අතර, එය ෆෝස්බී (දත්ත පෙන්වා නැත) හඳුනා නොගන්නා පූර්ණ-දිග ෆොස්බී හි සී පර්යන්තයට එරෙහිව යොමු කරන ලද ප්‍රතිදේහයක් සමඟ සැලකිය යුතු පැල්ලම් නොපෙන්වයි. 35 µm කොටස් වලට කැපීමෙන් පසු, එක් එක් මීයාගේ NAc හරහා අංශ දෙකකින් අන්ධ නිරීක්ෂකයෙකු විසින් osFosB ප්‍රතිශක්තිකරණ සෛල ගණන ගණනය කරන ලද අතර එක් එක් සත්වයා සඳහා කලාපය අනුව 40 × ක්ෂේත්‍රයකට මධ්‍යන්‍ය අගයන් ගණනය කරන ලදී. සෑම සතෙකුම සංඛ්‍යානමය විශ්ලේෂණය සඳහා තනි නිරීක්ෂණයක් ලෙස සලකනු ලැබීය. පැක්සිනෝස් සහ වොට්සන් භාවිතා කරමින් උනන්දුවක් දක්වන ප්‍රදේශ හඳුනා ගන්නා ලදී (පැසිනෝස් සහ වොට්සන්, 2007).

විස්තර කර ඇති පරිදි ලයිකර් පද්ධතියක් භාවිතයෙන් CaMKIIα ප්‍රතිශක්ති ac ලදායීතාවය ප්‍රමාණ කිරීම සිදු කරන ලදී (Covington et al., 2009). CaMKII සහ GAPDH වල ඒකාබද්ධ තීව්‍රතාව ඔඩිසි මෘදුකාංගය සමඟ තීරණය විය. ප්‍රති mm ල මිලිමීටරයකට ඒකාබද්ධ තීව්‍රතා අගයන් ලෙස ඉදිරිපත් කෙරේ² ඒවා මාධ්‍ය ලෙස ඉදිරිපත් කෙරේ ± sem (n = එක් කණ්ඩායමකට 4 - 10). පෙති thickness ණකම සහ තත්වයන් සඳහා CaMKII තීව්‍රතාවය සාමාන්‍යකරණය කිරීම සඳහා GAPDH සඳහා අගයන් භාවිතා කරන ලදී.

රූපය 2

ස්වයං පරිපාලන මීයන් සහ මිනිස් කොකේන් වලට ඇබ්බැහි වූවන්ගේ NAc කවචයේ CaMKII ප්‍රේරණය කිරීම

5 අත්හදා බැලීම: කොකේන් මත යැපෙන මිනිසුන්ගේ ප්‍රෝටීන් මට්ටම ගණනය කිරීම (ස්ලයිඩර් 2D)

පටිපාටිය

පශ්චාත් මරණ පරීක්ෂණයේදී මිනිස් මොළයේ පටක ක්විබෙක් සියදිවි නසා ගැනීමේ මොළ බැංකුවෙන් ලබා ගන්නා ලදී (ඩග්ලස් මානසික සෞඛ්‍ය විශ්ව විද්‍යාල ආයතනය, මොන්ට්‍රියල්, ක්විබෙක්, කැනඩාව). පටක සංරක්ෂණය අත්‍යවශ්‍යයෙන්ම විස්තර කර ඇති පරිදි ඉදිරියට ගියේය (Quirion et al., 1987). කෙටියෙන් කිවහොත්, මොළය තෙත් අයිස් මත ස්ටයිරෝෆෝම් පෙට්ටියක තබා ක්විබෙක් සියදිවි නසාගැනීමේ මොළ බැංකු පහසුකම් වෙත ගෙන යනු ලැබේ. අර්ධගෝලය වහාම මොළයේ මැද කොටස, මොළයේ කඳ සහ මස්තිෂ්කයේ කැපීමකින් වෙන් කරනු ලැබේ. රුධිර වාහිනී, පයිනල් ග්‍රන්ථිය, චොරොයිඩ් ප්ලෙක්සස්, අර්ධ මස්තිෂ්ක හා අඩ මොළයේ කඳ සාමාන්‍යයෙන් වම් අර්ධගෝලයෙන් වි ected ටනය වන අතර එය කැටි කිරීමට පෙර 1 සෙ.මී. දෙවන භාගයේ මස්තිෂ්කය කැටි කිරීමට පෙර 1cm thick න පෙති වලට කපා ඇත. 2 තත්පරයට 40-methylbutane හි −60 at C දී පටක ෆ්ලෑෂ් ශීත කර ඇත. සියලුම ශීත කළ පටක දිගු කාලීනව ගබඩා කිරීම සඳහා ප්ලාස්ටික් බෑග්වල −80 at C දී වෙන වෙනම තබා ඇත. පරිසරයේ උෂ්ණත්වය පාලනය කිරීම සඳහා වියළි අයිස් සහිත මල නොබැඳෙන වානේ තහඩුවක ශීත කළ කිරීටක පෙති වලින් විශේෂිත මොළයේ කලාප විසුරුවා හරිනු ලැබේ. විස්තර කර ඇති පරිදි බටහිර පිපිරීම සිදු කරන ලදී අත්හදා බැලීම 2.

කොහොර්ට්

37 පිරිමි සහ 3 කාන්තා විෂයයන්ගෙන් සමන්විත වූ අතර, වයස අවුරුදු 15 - 66 අතර විය. සියලුම විෂයන් දිගු කාලීන වේදනාකාරී තත්වයක් හෝ දිග්ගැස්සුනු වෛද්‍ය රෝගයකින් තොරව හදිසියේ මිය ගියේය. සෑම අවස්ථාවකම, මරණයට හේතුව ක්විබෙක් හි හදිසි මරණ පරීක්ෂක කාර්යාලය විසින් සොයා ගන්නා ලද අතර, මරණ අවස්ථාවේ දී ation ෂධ සහ නීති විරෝධී ද්‍රව්‍ය භාවිතය පිළිබඳ තොරතුරු ලබා ගැනීම සඳහා පටක සාම්පල සමඟ විෂ විද්‍යාත්මක තිරයක් පවත්වන ලදී. විෂය කණ්ඩායම සමන්විත වූයේ කොකේන් යැපීම සඳහා වන SCID-I නිර්ණායක සපුරාලන 20 පුද්ගලයින්ගෙනි. පාලක කණ්ඩායම 20 විෂයයන්ගෙන් සමන්විත වූ අතර කොකේන් යැපීමේ ඉතිහාසයක් සහ ප්‍රධාන මනෝචිකිත්සක රෝග විනිශ්චය නොමැත. සියලුම විෂයයන් හදිසියේම මිය ගියේ මොළයේ පටක වලට සෘජු බලපෑමක් නොමැති හේතු නිසා ය. මධ්‍යන්‍ය විෂය වයස, ශීතකරණ ප්‍රමාදය සහ pH අගය සඳහා කණ්ඩායම් ගැලපේ. සියලුම විෂයයන් සඳහා, කලින් විස්තර කර ඇති පරිදි මනෝවිද්‍යාත්මක මරණ පරීක්ෂණ සිදු කරන ලදී (Dumais et al., 2005), මනෝචිකිත්සක හා වෛද්‍ය ඉතිහාසය පිළිබඳ සවිස්තරාත්මක තොරතුරු මෙන්ම වෙනත් අදාළ සායනික හා සමාජ-දත්ත දත්ත වෙත ප්‍රවේශ වීමට අපට ඉඩ සලසයි. කෙටියෙන් කිවහොත්, පුහුණු සම්මුඛ පරීක්‍ෂකවරයකු විසින් මෙහෙයවන ලදී DSM-IV සඳහා ව්‍යුහාත්මක සායනික සම්මුඛ පරීක්ෂණය මියගිය අය පිළිබඳ තොරතුරු සපයන්නන් එකක් හෝ වැඩි ගණනක් සමඟ මනෝචිකිත්සක ආබාධ (SCID-I). සම්මුති මනෝචිකිත්සක රෝග විනිශ්චය ලබා ගැනීම සඳහා සායනික මණ්ඩලයක් විසින් SCID-I තක්සේරු කිරීම්, සිද්ධි වාර්තා, මරණ පරීක්ෂකගේ සටහන් සහ වෛද්‍ය වාර්තා සමාලෝචනය කරන ලදී.

6 අත්හදා බැලීම: මීයන් NAc සඳහා ක්‍රෝමටින් ප්‍රතිශක්ති ප්‍රතිරෝධක (රූපය 3A - C)

වැඩිහිටි (8 සති) පිරිමි මීයන්ට දින හතකට දිනකට එක් වරක් 10 mg / kg කොකේන් හෝ සේලයින් වාහන IP ලබා දෙන ලදී. අවසන් එන්නතෙන් පසු 24 පැය, NAc කවචය සහ හරය ක්ෂුද්‍ර විභේදනය විය. 14 මුළු කාණ්ඩවල (98 සතුන් එකතුව, 7 කොකේන් තටාක, 7 සේලයින් තටාක) එක් කණ්ඩායමකට මීයන් හතකින් ෂෙල් හෝ හරයේ ද්විපාර්ශ්වික NAc පන්ච් එකතු කිරීම ක්‍රෝමැටින් ප්‍රතිශක්තීකරණ (ChIP) සිදු කරන ලදී. පටක හරස් සම්බන්ධ කර, සෝදා, sonication මගින් ක්‍රෝමටින් කැපීම තෙක් −80 at C හි ගබඩා කර ඇත. ෂියර්ඩ් ක්‍රෝමැටින් එක රැයකින් පුර්ව ලියාපදිංචි කර ඇත්තේ කලින් චුම්බක පබළු වලට බැඳී ඇති ප්‍රතිදේහ (ඩයිනබෙඩ්ස් එම්-එක්ස්එන්එම්එක්ස්, ඉන්විට්‍රජන්) ය. ප්‍රතිශක්තිකරණ නොවන IgG පාලනයක් ලෙස භාවිතා කරන ලදී. ප්‍රතිලෝම හරස් සම්බන්ධතා සහ ඩීඑන්ඒ පිරිසිදු කිරීමෙන් පසුව, CaMKIIα ප්‍රවර්ධක DNA මට්ටම මැනීමට qPCR භාවිතා කරන ලදී. පිටපත් කිරීමේ ආරම්භක අඩවියට පෙර ~ 280 bp පිහිටා ඇති AP-1 සම්මුති අනුක්‍රමයක් සහිත කලාපයක් විස්තාරණය කිරීම සඳහා ප්‍රයිමර් නිර්මාණය කර ඇත (ඉදිරියට: ACTGACTCAGGAAGAGGGATA; ආපසු හැරවීම: TGTGCTCCTCAGAATCCACAA).

රූපය 3

සෛල වර්ගය- සහ කලාපීය විශේෂිත CaFosB CaMKIIα ප්‍රේරණය ඉතින්

7 අත්හදා බැලීම: සෛල වර්ගය-විශේෂිත osFosB Overexpression සමඟ CaMKII පිටපත් කිරීම සහ ප්‍රෝටීන් ප්‍රකාශනය මැනීම (ස්ලයිඩර් 3D)

පිරිමි බිට්‍රාන්ස්ජනික් මීයන් NSE-tTA (පේළිය A) × TetOp-osfosB (පේළිය 11) සහ NSE-tTA (පේළිය B) × TetOp-FLAG-osfosB (පේළිය 11) මීයන් (චෙන් සහ අල්., 1998; කෙල්ස් සහ ඇල්., 1999; Werme et al., 2002; Zachariou et al., 2006) සංවර්ධනයේදී ΔFosB ප්‍රකාශනය මැඩපැවැත්වීම සඳහා 100 µg / ml ඩොක්සි සයික්ලයින් මත පිළිසිඳ ගන්නා ලදී. කිරි වැරීමේ දී පැටවුන් බෙදී ගියේය: අඩක් ඩොක්සි සයික්ලයින් මත රැඳී ඇති අතර අඩක් ජලයට මාරු කරන ලදී, සති කිහිපයකට පසු සතුන් 8 සිට 11 දක්වා භාවිතා කරන ලදී osFosB හි පිටපත් කිරීමේ බලපෑම් උපරිම වූ විට (කෙල්ස් සහ ඇල්., 1999; මැක්ලන්ග් සහ නෙස්ලේටර්, 2003). පිටපත් කිරීමේ විශ්ලේෂණයන් සඳහා, මීයන් වේගයෙන් දිරාපත් වූ අතර මොළ ඉවත් කර අයිස් මත තබන ලදී. NAc හි වි ections ටන 14- මිනුම් ඉඳිකටු පහරකින් ගෙන ආර්එන්ඒ නිස්සාරණය කරන තෙක් වියළි අයිස් මත ඉක්මනින් ශීත කළ. කලින් විස්තර කර ඇති පරිදි RNA හුදකලාව, qPCR සහ දත්ත විශ්ලේෂණය සිදු කරන ලදී (LaPlant et al., 2009). කෙටියෙන් කිවහොත්, ආර්එන්ඒ ට්‍රයිසෝල් ප්‍රතික්‍රියාකාරකය (ඉන්විට්‍රජන්) සමඟ හුදකලා වූ අතර, කියැගන් වෙතින් ආර්එන්ඒඒසී මයික්‍රෝ කට්ටලය සමඟ තවදුරටත් පිරිසිදු කර ඇජිලන්ට්හි ජෛව විශ්ලේෂකය සමඟ ගුණාත්මකභාවය පරීක්ෂා කරන ලදී. ප්‍රතිලෝම පිටපත් කිරීම iScript (BioRad) භාවිතයෙන් සිදු කරන ලදී. qPCR පහත සඳහන් චක්‍රීය පරාමිතීන් සමඟ ව්‍යවහාරික ජෛව පද්ධති 7900HT RT PCR පද්ධතියක් සමඟ සිදු කරන ලදී: 10 min C දී 95 min; 40 මිනිත්තුව සඳහා 95 of C, 1 තත්පරයට 60 ° C, 30 තත්පරයට 72; C; තනි PCR නිෂ්පාදන තහවුරු කිරීම සඳහා වි ociation ටන වක්‍ර ජනනය කිරීම සඳහා 30 ° C ට ශ්‍රේණිගත උණුසුම. විස්තර කර ඇති පරිදි ΔFosB සහ CaMKIIα ප්‍රෝටීන් ප්‍රකාශනයේ ප්‍රතිශක්තිකරණ රසායනික විශ්ලේෂණයන් සිදු කරන ලදී අත්හදා බැලීම 4.

අත්හදා බැලීම 8: කොකේන්-මධ්‍යස්ථ ප්‍රෝටීන් වෙනස්වීම් සඳහා Intra-NAc D1 සහ D2 ඩොපමයින් ප්‍රතිග්‍රාහක ප්‍රතිවිරෝධයන්ගේ බලපෑම් (රූපය 3H)

වැඩිහිටි (8 සති) පිරිමි මීයන්ට 10 mg / kg කොකේන් හෝ සේලයින් වාහනය (“වාහන” කාණ්ඩය) IP දිනකට එක් දිනක් දින හතක් සඳහා ලබා දෙන ලදී. එක් එක් කොකේන් එන්නතට මිනිත්තු 30 ට පෙර, මීයන් IP පාලනය කරනු ලැබුවේ D1 ප්‍රතිග්‍රාහක ප්‍රතිවිරෝධක SCH 23390 (0.5 mg / kg, “D1 Ant” කණ්ඩායම), හෝ D2 ප්‍රතිග්‍රාහක ප්‍රතිවිරෝධක එතික්ලොප්‍රයිඩ් (0.5 mg / kg, “D2 Ant” කාණ්ඩය) , හෝ සේලයින් පාලන එන්නතක් (“කොකේන්” කණ්ඩායම). අවසාන එන්නතෙන් පසු පැය 24, සතුන් දිරාපත් වූ අතර ප්‍රෝටීන ප්‍රමාණාත්මකව බටහිර පිපිරීමෙන් ගණනය කරන ලදී අත්හදා බැලීම 2.

9 අත්හදා බැලීම: ප්‍රෝටීන් ප්‍රකාශනයට AAV- මැදිහත් වූ osFosB Overexpression හි බලපෑම් (රූපය 4 A-C)

AAV-GFP (හරිත ප්‍රතිදීප්ත ප්‍රෝටීන්) හෝ AAV-GFP-osFosB (එන්නත් කිරීම සඳහා වැඩිහිටි පිරිමි මීයන් (8 සති) සඳහා ස්ටීරියෝටොක්සික් සැත්කම් සිදු කරන ලදී.Maze et al., 2010). සියළුම සැත්කම් සඳහා 33 මිනුම් ඉඳිකටු (හැමිල්ටන්) භාවිතා කරන ලද අතර, එම කාලය තුළ 0.5 purl පිරිසිදු කරන ලද අධි-ටයිටර වෛරසය ද්විපාර්ශවිකව 5 මිනිත්තු කාලයක් තුළ එන්නත් කරන ලද අතර ඉන් පසුව අතිරේක 5 මිනිත්තු පශ්චාත්-ඉන්ෆියුෂන් විවේක කාල සීමාවක් ඇත. බ්‍රෙග්මාට සාපේක්ෂව සියලුම දුර මනිනු ලැබේ: 10 ° කෝණය, AP = + 1.7 mm, Lat = 2.5 mm, DV = −6.7 mm. ශල්‍යකර්මයෙන් දින කිහිපයකට පසු, animalsFosB අධික ලෙස පීඩනයට ලක්වීමේ චර්යාත්මක බලපෑම් තක්සේරු කිරීම සඳහා සතුන්ට ලොකොමෝටර් අධීක්ෂණ කුටිවල 14 mg / kg කොකේන් එක් IP එන්නතක් ලබා දෙන ලදී. මෙම අවසාන එන්නතෙන් පසු පැය 10, මීයන්ට අනුව මීයන් දිරාපත් විය අත්හදා බැලීම 2, සහ පටක ක්ෂුද්‍ර විභේදනය GFP- ධනාත්මක NAc පටක ලබා ගැනීම සඳහා ප්‍රතිදීප්ත අන්වීක්ෂීය මග පෙන්වීම යටතේ සිදු කරන ලදී. බටහිර පිපිරුම් පසුව සිදු කරන ලදී අත්හදා බැලීම 2.

රූපය 4

NAc කවචයේ කොකේන්-මැදිහත් D1 ප්‍රතිග්‍රාහක මත යැපෙන CaMKIIα ප්‍රේරණය සඳහා osFosB අවශ්‍ය සහ ප්‍රමාණවත් වේ.

අත්හදා බැලීම 10: කොකේන් මත යැපෙන ප්‍රෝටීන් ප්‍රකාශනය කෙරෙහි AAV- මැදිහත් වූ un ජුන්ඩ් අධි පීඩනයේ බලපෑම (රූපය 4 D-F)

AAV-GFP හෝ AAV-GFP-unJunD හි ඒකාකෘති එන්නත් කිරීම සිදු කරන ලදී අත්හදා බැලීම 8. ශල්‍යකර්මයෙන් පසු දින 14 සතුන්ට දින හතකට ලොකොමෝටර් පටිගත කිරීමේ කුටිවල දිනකට එක් වරක් 10 mg / kg කොකේන් හෝ සේලයින් වාහන IP ලබා දෙන ලදී. කොකේන් (5 mg / kg IP) හෝ සේලයින් එන්නත් කිරීම සඳහා ලොකොමෝටර් ප්‍රතිචාර සටහන් විය. මෙම අවසාන එන්නතෙන් පසු පැය 24, මීයන් දිරාපත් වී, පටක අස්වැන්න නෙළා ගන්නා ලදී. අත්හදා බැලීම 9.

11 අත්හදා බැලීම: Vitro හි ප්‍රෝටීන් කයිනාස් පරීක්ෂාව (රූපය 5A - D)

ප්‍රතිසංයෝජක CaMKIIα සහ osFosB කෘමි සෛල වලින් පිරිසිදු කර ඇත (බ්‍රික්කි සහ වෙනත් අය, 1990; ජෝරසන් සහ අල්., 2007), සහ ප්‍රෝටීන් කයිනාස් පරීක්ෂණ සිදු කරන ලදී (කොල්බ්රාන්, 1993), කලින් විස්තර කළ පරිදි. කෙටියෙන් කිවහොත්, CaMKII අයිස් මත පූර්ව පුර්ව ලියාපදිංචි කරන ලද්දේ 2.5 µM ​​(හෝ ඇඟවුම් සාන්ද්‍රණය) ΔFosB, 1 mM Ca²⁺, 40 mM Mg²⁺, 15 calM කැල්මොඩුලින්, සහ 200 mM HEPES pH 7.5. [Γ- සමඟ හෝ නැතිව 200 µM ​​ATP එකතු කිරීමෙන් පොස්පරීකරණය ආරම්භ කරන ලදී.³²P] ATP සහ කාමර උෂ්ණත්වයේ දී 10 මිනිත්තු සඳහා ඉදිරියට යාමට අවසර දී ඇත (රූපය 5 ඒ සහ බී) හෝ අයිස් මත 2 මිනිත්තුව (රූපය 5 සී සහ ඩී). නිෂ්පාදන බටහිර පිපිරීමෙන් විසඳනු ලැබීය (රූපය 5 ඒ සහ බී) හෝ ඔටෝරාඩියෝග්‍රෑම් සහ ස්කින්ටිලේෂන් ගණන් කිරීම මගින් (රූපය බී-ඩී).

රූපය 5

OsFosB යනු CaMKIIα සඳහා ප්‍රබල උපස්ථරයකි

12 අත්හදා බැලීම: Ser27 osFosB පොස්පරීකරණය හඳුනා ගැනීම (ස්ලයිඩර් 5E)

එන්නත් වේ kinase assays අනුව සිදු කරන ලදී අත්හදා බැලීම 11, ප්‍රෝටීන SDS-PAGE මගින් වෙන් කරන ලද අතර osFosB ට අනුරූප පටි කපා ඒවා ස්කන්ධ වර්ණාවලීක්ෂයට අනුකූල වේ. සියලුම පැනල්වල අනුරූප අයන කොටස්වල m / z පැවරුම් අයන කඳු මුදුනේ ලේබල් කර ඇත. අවකාශයේ සීමාවන් නිසා සියලුම කොටස් අයන ලේබල් නොකෙරේ. පොදුවේ ගත් කල, කොටස් අයන ලේබල් සඳහා වන පා black කළු පැහැයෙන් වර්ණ ගැන්වී ඇති අතර ඒවා පොස්පරස්කරණ ස්ථාන ඇති බවට සෘජුවම තහවුරු කරන විට හෝ සාක්ෂි එකතු කරන විට හැර, ඒවා රතු පැහැයෙන් සලකුණු කර ඇත. තනි ඇමයිනෝ අම්ල අක්ෂර නාමයක් සහිතව රතු පැහැයෙන් දක්වා ඇති පොස්පරීකරණය අපද්‍රව්‍ය සොයාගත් ස්ථානය සමඟ ෆොස්ෆොපෙප්ටයිඩයේ අනුක්‍රමික කියවීමේදී කොඳු නාරටිය ඛණ්ඩනය කිරීමේ නිෂ්පාදන සඳහා සාක්ෂි ඉදිරිපත් කෙරේ. නිරීක්ෂණය කරන ලද කොටස් අයනවල සංඛ්‍යාත්මක විස්තරය ද පෙප්ටයිඩ අනුක්‍රමය මත b සහ y අයන ලෙස සලකුණු කර ඇත. පහළ තීව්‍රතාවයෙන් යුත් කොටස් අයන පෙන්වීමට m / z අක්ෂයේ කොටස් සඳහා විශාලන සාධක එක් එක් කොටස් ස්කන්ධ වර්ණාවලියට ඉහළින් සලකුණු කර ඇත. H පුවරුවේ පෙන්වා ඇති කොටස් අයන මගින් Ser27 පොස්පරීකරණය කරන ලද සමස්ථානික ඇති බව සනාථ කරයි, කෙසේ වෙතත්, Ser28, Ser31, Ser34 සහ Thr37 අඩවි වල ඇති අනෙකුත් පොස්පරීකරණය කළ සමස්ථානිකවල මිශ්‍රණයක් තුළ. Pa5, pa5-P, pb5, සහ pb5-P අයන පැවතීම Ser27 අපද්‍රව්‍යයේ පොස්පරීකරණය අද්විතීය ලෙස සනාථ කරයි.

13 අත්හදා බැලීම: Ser27 ෆොස්ෆරයිලේෂන් ප්‍රමාණ කිරීම (රූපය 5F)

සම්මත පෙප්ටයිඩ නිර්මාණය කර ඇත්තේ Ser27 osFosB හි පොස්ෆෝ සහ පොස්ෆෝ නොවන ආකාර අනුකරණය කරමින්. සංස්ලේෂණය හා පිරිසිදු කිරීමෙන් පසුව, එක් එක් “බර” අයිඩියොටිපික් පෙප්ටයිඩය 50 / 50 ඇසිටොනයිට්‍රයිල් / ජල බෆරයක විසුරුවා හරින ලද අතර කෘතිම පෙප්ටයිඩ කොටස් ද්‍රාවණය කෙරෙහි නිරපේක්ෂ සාන්ද්‍රණය තීරණය කිරීම සඳහා ඇමයිනෝ අම්ල විශ්ලේෂණය සඳහා යවන ලදි. එම්එස් / එම්එස් ඛණ්ඩනය සඳහා හොඳම ision ට්ටන ශක්තිය සහ එම්ආර්එම් සංක්‍රාන්ති දෙකක් හෝ හතරක් තීරණය කිරීම සඳහා සෑම “බර” පෙප්ටයිඩයක්ම කෙලින්ම 4000 QTRAP ස්කන්ධ වර්ණාවලීක්ෂයට (MS) ඇතුල් කරන ලදී. ඊළඟට, පෙප්ටයිඩ වෙන් කිරීම සහතික කිරීම සඳහා 4000 QTRAP හි පිළිවෙලින් “බර” පෙප්ටයිඩ LCMS වලට යටත් කරන ලදී. උපකරණය ත්‍රිත්ව චතුරස්රාකාර ප්‍රකාරයේදී ක්‍රියාත්මක වූ අතර Q1 නිශ්චිත පූර්වගාමියා m / z අගය මත (Q1 පරිලෝකනය නොකෙරේ), සහ Q3 එම පෙප්ටයිඩයේ නිශ්චිත කැබැල්ලකට අනුරූපව නිශ්චිත m / z අගයට සකසා ඇත. එම්ආර්එම් මාදිලියේදී, තනි ප්‍රතික්‍රියා මාලාවක් (උනන්දුව දක්වන අයනවල තීව්‍රතාව ප්‍රශස්ත කිරීම සඳහා ision ට්ටන ශක්තිය සුසර කරන ලද පූර්වගාමී / කොටස් අයන සංක්‍රාන්ති) අනුක්‍රමිකව මනින ලද අතර චක්‍රය (සාමාන්‍යයෙන් 1-2 තත්පරය) HPLC වෙන්වීමේ මුළු කාලය. MRM සංක්‍රාන්ති තීරණය කරනු ලැබුවේ පවත්නා පෙප්ටයිඩ වල MS / MS වර්ණාවලියෙනි. ඉහළ තීව්‍රතාවයකින් යුත් කොටස් අයනවලට අනුරූපව පෙප්ටයිඩයකට සංක්‍රාන්ති දෙකක් තෝරා ගන්නා ලද අතර ස්වයංක්‍රීය මෘදුකාංග භාවිතා කරමින් එම්ආර්එම් සංක්‍රාන්තිවල සං signal ා ශක්තිය උපරිම කිරීම සඳහා ision ට්ටන ශක්තිය ප්‍රශස්ත කර ඇත. ප්‍රතික්‍රියා වල එක් එක් පෙප්ටයිඩ ස්වරූපයේ නිරපේක්ෂ බහුලතාවය තීරණය කිරීම සඳහා සම්මත පෙප්ටයිඩ හා CaMKII හෝ පාලනයට නිරාවරණය වූ osFosB සාම්පලවල ප්‍රති peak ල. LC-MRM දත්ත පිළිබඳ දත්ත විශ්ලේෂණය AB Multiquant 1.1 මෘදුකාංගය භාවිතයෙන් සිදු කෙරේ.

අත්හදා බැලීම 14: CaMKII Overexpressing මීයන් තුළ osFosB ප්‍රේරණය (රූපය 5 ජී සහ එච්)

පාරජම්බුල මීයන් අධික ලෙස මුද්‍රණය කිරීම T286D CaMKII (මේෆර්ඩ් සහ වෙනත් අය, 1996; කර්රිච් සහ අල්., 2012) සහ සංක්‍රාන්ති ප්‍රකාශනයට ඉඩ දීම සඳහා ඩොක්සි සයික්ලයින් නොමැති විට වල් වර්ගයේ පැටවුන් ඇති කරන ලදී. වැඩිහිටි මීයන්ට 20 දින සඳහා දිනකට එක් වරක් 14 mg / kg කොකේන් හෝ සේලයින් IP ලබා දෙන ලදී. අවසාන එන්නතෙන් පසු 24 පැය, සතුන් දිරාපත් වූ අතර ප්‍රතිශක්ති ist න රසායන විද්‍යාව සහ osFosB ප්‍රකාශනයේ ප්‍රමාණය ගණනය කිරීම සිදු කරන ලදී. අත්හදා බැලීම 4.

අත්හදා බැලීම 15: එච්එස්වී-මැදිහත් වූ osFosB අධි පීඩන හා CaMKII නිෂේධනය NAc ඩෙන්ඩ්‍රිටික් කොඳු ඇට පෙළේ බලපෑම් (රූපය 6A - E)

වැඩිහිටි පිරිමි මීයන් (8 සති) NAc හි HSV-GFP, HSV-GFP-osFosB (ඕලිසන් සහ අල්., 2006), HSV-GFPAC3I, හෝ HSV-GFPAC3I-osFosB. මෙම ඉදිකිරීම් වලදී, CaMKII ක්‍රියාකාරකම් වල පෙප්ටයිඩ පාදක නිෂේධනයක් වන AC3I, GFP හි C- පර්යන්තයට විලයනය වේ. GFPAC3I-F: GFPAC400I පහත සඳහන් මුල් ආලේප සමග ආකෘතියක් ලෙස GFPAC3I අඩංගු pMM3-දෛශික භාවිතා PCR විසින් සියල්ල ඉවත්කල විය 5 'CC GCTAGC GCCGCCACC ATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGT 3' (clampNheIKozakmet); GFP-AC3I-R: 5 'CC TCCGGA TTACAGGCAGTCCACGGCCT 3' (clampBspEIstop). එහි ප්‍රති ing ලයක් ලෙස PCR නිෂ්පාදනය NheI සහ BspEI අඩවි භාවිතා කරමින් p1005 + සහ p1005 + -Δ FosB දෛශික වලට ඇතුළත් කරන ලදී. ඉදිකිරීම් අනුපිළිවෙලින් වලංගු කරන ලදී. ස්ටීරියෝටොක්සික් ඛණ්ඩාංක: 10 ° කෝණය, AP = + 1.6 mm, Lat = + 1.5 mm, DV = −4.4 mm (බැරට් et al., 2002). සුවඳ විලවුන් හා මොළය කොටස් කිරීම අනුව සිදු කරන ලදී අත්හදා බැලීම 4.

විස්තර කර ඇති පරිදි කොඳු ඇට පෙළ විශ්ලේෂණය සිදු කරන ලදී (ක්‍රිස්ටොෆෙල් සහ වෙනත් අය, 2011). කෙටියෙන් කිවහොත්, සෝමා වෙතින් X තින් පිහිටි 50-150 ndm අහඹු ලෙස GFP ප්‍රකාශ කරන HSV ආසාදිත සෛල වලින් තෝරාගෙන ඇත. රේබස්ට් ඇල්ගොරිතම සමඟ නියුරෝන්ස්ටූඩියෝ භාවිතා කරමින් රූප විද්‍යාත්මක විශ්ලේෂණය සඳහා රූපමය එල්එස්එම් එක්ස්එන්එම්එක්ස් (කාල් සයිස්) මත ලබා ගන්නා ලදී. නියුරොන්ස්ටූඩියෝ පහත සඳහන් අගයන් මත පදනම්ව කොඳු ඇට පෙළ තුනී, බිම්මල් හෝ මුරණ්ඩු ලෙස වර්ග කරයි: (710) දර්ශන අනුපාතය, (1) හිස සිට බෙල්ල අනුපාතය සහ (2) හිස විෂ්කම්භය. බෙල්ලක් සහිත ක ines ්චුක තුනී හෝ බිම්මල් ලෙස වර්ග කළ හැකි අතර සැලකිය යුතු බෙල්ලක් නොමැති අය මුරණ්ඩු ලෙස වර්ගීකරණය කර ඇත. බෙල්ලේ කොඳු ඇට පෙළ හිස විෂ්කම්භය මත පදනම්ව තුනී හෝ බිම්මල් ලෙස ලේබල් කර ඇත.

රූපය 6

CaMKII ක්‍රියාකාරකම් අවහිර කිරීම NAc හි osFosB හි රූප විද්‍යාත්මක හා චර්යාත්මක බලපෑම් වළක්වයි

අත්හදා බැලීම 16: කොකේන් ප්‍රතිචාර සඳහා HSV- මැදිහත් වූ osFosB Overexpression සහ CaMKII නිෂේධනයේ බලපෑම් (රූපය 6F)

වැඩිහිටි පිරිමි මීයන්ට අනුව වෛරස් එන්නත් කරන ලදී අත්හදා බැලීම 15, සහ එක් 5 mg / kg කොකේන් එන්නත් කිරීම සඳහා ලොකොමෝටර් ප්‍රතිචාර අනුව මනිනු ලැබීය අත්හදා බැලීම 9. කොකේන් එන්නත් කිරීමෙන් පසු 30 මිනිත්තුව පුරා සම්පූර්ණ කදම්භය කැඩී යාම නිසා ලොකොමෝටර් දත්ත ප්‍රකාශ වේ.

අමතර තොරතුරු

සත්ව නිවාස

පිරිමි ස්ප්‍රැග් ඩව්ලි මීයන් (250-275 g; චාල්ස් රිවර් රසායනාගාර) යුගල වශයෙන් තබා ඇත. සති අටක් වයසැති C57BL / 6J පිරිමි මීයන් (ජැක්සන් රසායනාගාරය) කූඩුවකට උපරිම සතුන් පස් දෙනෙකු බැගින් කණ්ඩායම් වශයෙන් තබා ඇත. සියළුම සතුන් සත්ව පහසුකම සඳහා ≥1 සතියකට පෙර අත්හදා බැලීම් සිදු කරන ලද අතර දේශගුණික පාලිත කාමරවල (23-25 ° C) 12 hr ආලෝකය / අඳුරු චක්‍රයක් මත (7: 00 AM හි විදුලි පහන්) ආහාර සඳහා ප්‍රවේශය ඇත. හා ජල ලිබිටුම්. ස්නායු විද්‍යා සංගමයේ සහ සීනයි කන්දෙහි ආයතනික සත්ව රැකවරණය හා භාවිතය පිළිබඳ කමිටුවේ (IACUC) මාර්ගෝපදේශයන්ට අනුකූලව අත්හදා බැලීම් සිදු කරන ලදී.

ඖෂධ

අයිපී පරිපාලනය කරන ලද අතර කොකේන් (මීයන් සඳහා 5 µl ට 20-10 mg / kg, මීයන් සඳහා 1 මිලි, NIDA) සහ SCH 23390 හෝ එටික්ලොප්රයිඩ් හයිඩ්‍රොක්ලෝරයිඩ් (0.5 මිලි, 1 මිලි, ටොක්‍රිස්) . ඒකාකෘති සැත්කම් සඳහා, මීයන් නිර්වින්දනය කරනු ලැබුවේ විෂබීජහරණය කළ සේලයින් වල කැටමින් (100 mg / kg) සහ සයිලසීන් (10 mg / kg) (හෙන්රි ෂේන්) “කොක්ටේල්” ය.

ප්රතිජීවක

CaMKIIα (මුළු): Upstate 05 - 532, 1: 5,000

CaMKII phospho-Thr286: Promega V111A, 1: 1,000

OsFosB (එකතුව): සෛල සං Sign ා කිරීම 5G4, 1: 250

OsFosB phospho-Ser27: Phosphosolutions, 1: 500

GluA1 (එකතුව): Abcam, Ab31232, 1: 1,000

GluA1 phospho-Ser831: මිලිපෝර් N453, 1: 1,000

GluA1 phospho-Ser845: Chemicon Ab5849, 1: 2,000

GluA2: මිලිපෝර් 07 - 598, 1: 2,000

NR2A: සිග්මා HPA004692, 1: 2,500

NR2B: මිලිපෝර් Ab1557P, 1: 1,000

සංඛ්යාන විශ්ලේෂණය

සියලුම සංඛ්‍යාන විශ්ලේෂණ සිදු කරන ලද්දේ ප්‍රිස්ම් එක්ස්එන්එම්එක්ස් මෘදුකාංග පැකේජය (ග්‍රැෆැඩ් පෑඩ්) භාවිතා කරමිනි. සියලුම යුගල වශයෙන් සැසඳීම් සඳහා ශිෂ්‍යයාගේ ටී-පරීක්ෂණ භාවිතා කරන ලදි (ටී අගය ලබා දී ඇති ප්‍රති Results ලවල දක්වා ඇත), සහ සියලු බහුවිධ සැසඳීම් සඳහා එක්-මාර්ගයක් ANOVA භාවිතා කරන ලදී (F අගය ලබා දී ඇති ප්‍රති results ල කොටසේ දක්වා ඇත).

යන්න:

ප්රතිපල

නිදන්ගත කොකේන් NAc කවචයේ CaMKII ප්‍රේරණය කරයි

NAc කවචයේ සහ හරයේ ඇති MSN වලට අපයෝජන drugs ෂධවලට නිදන්ගතව නිරාවරණය වීම සම්බන්ධයෙන් විවිධ ජෛව රසායනික හා භෞතික විද්‍යාත්මක ප්‍රතිචාර ඇති බව බොහෝ අධ්‍යයනවලින් හෙළි වී තිබේ (කුරිච් සහ තෝමස්, 2009; ලෝත් සහ අල්., 2010) සහ උප කලාප දෙක drug ෂධ සෙවීමේ හැසිරීම් වෙනස් ලෙස නියාමනය කරන බවත් (ඉටෝ සහ අල්., 2004). NAc කවචයේ ප්‍රෝටීන් සං ents ටක වලට කොකේන්හි අවකල්‍ය බලපෑම් තීරණය කිරීම එදිරිව හරය, අපි බහුකාර්ය අයිසොබරික් ටැගින්ග් (iTRAQ) සහ ටැන්ඩම් ස්කන්ධ වර්ණාවලීක්ෂය (MS / MS) භාවිතා කළෙමු. වැඩිහිටි පිරිමි මීයන්ට 20 දින සඳහා දිනපතා කොකේන් (7 mg / kg) හෝ සේලයින් එන්නත් කරන ලදී; අවසන් එන්නතෙන් පසු 24 පැය, NAc කවචය සහ හරය ක්ෂුද්‍ර විභේදනය කරන ලදි (ෆිග් 1A) සහ ෆ්ලෑෂ් ශීත කළ. මෙම සාම්පලවල ඇති ප්‍රෝටීන පසුව iTRAQ භාවිතා කර ප්‍රමාණාත්මක කරන ලදී. CaMKII සමස්ථානික හතරම කොකේන් ප්‍රතිකාරයෙන් පසු ප්‍රකාශනයේ විශාල වැඩි වීමක් පෙන්නුම් කරන අතර එය හරයට සාපේක්ෂව NAc කවචයට විශේෂිත විය. PP1 උත්ප්‍රේරක සහ නියාමන අනු ඒකක සහ PP2A ඇතුළු ප්‍රෝටීන් පොස්පේටේස් කිහිපයක් මීට පෙර වෙනත් පද්ධතිවල විවිධ CaMKII උපස්ථර සමඟ සම්බන්ධ වී ඇත (කොල්බ්රාන්, 2004), සමාන රටාවක් අනුගමනය කළේය. මෙම සොයාගැනීම් මගින් CaMKII සං sign ා මාර්ගය NAc හි කොකේන් විසින් ෂෙල් විශේෂිත ආකාරයකින් නියාමනය කරනු ලබන බවට නව, අපක්ෂපාතී සාක්ෂි සපයයි.

මෙම සොයා ගැනීම වඩාත් ප්‍රමාණාත්මකව වලංගු කිරීම සඳහා, අපි මීයන්ට කොකේන් (විවිධ මාත්‍රාවලින්) හෝ සේලයින් සමඟ සැලකූ අතර කොකේන් (5 mg / kg) හෝ සේලයින් අභියෝගාත්මක මාත්‍රාවකට සේලයින් සහ ලොකොමෝටර් ප්‍රතිචාර මැනිය. 10 mg / kg කොකේන් නැවත නැවත නිරාවරණය වීමෙන් ලොකොමෝටර් සංවේදීකරණයේ සාමාන්‍ය රටාව ඇති විය (රූපය 1B). කොකේන් නැවත එන්නත් කිරීමෙන් පසු නැවත නැවතත් කොකේන් NAc shell 24 hr හි CaMKIIα තෝරා බේරා ගන්නා බව බටහිර පිපිරුම් භාවිතයෙන් මෙම මාත්‍රා පාලන තන්ත්‍රය සමඟ වැඩිදුර අධ්‍යයනයන්ගෙන් හෙළි විය.රූපය 1C සහ D.; p = 0.0019; F = 7.943; df = 29). ඊට අමතරව, AMPA ප්‍රතිග්‍රාහකයේ ග්ලූඒඑක්ස්එන්එම්එක්ස් අනු ඒකකයේ සර්ක්ස්එන්එම්එක්ස් කැනොනිකල් කැම්කේඅයි උපස්ථරයේ පොස්පරීකරණය සැලකිය යුතු ලෙස වැඩි කර ඇත්තේ එන්ඒසී කවචයේ මිස හරය නොවේ (p = 831; F = 1; df = 0.0261), CaMKIIα Thr4.208 ඔටෝෆොස්ෆරයිලේෂණය ප්‍රබල නමුත් කවචයේ පමණක් ප්‍රේරණය කෙරෙහි සැලකිය යුතු ප්‍රවණතාවක් (ස්ලයිඩර් 1D). තවත් ග්ලූටමේට් ප්‍රතිග්‍රාහක කිහිපයකට බලපෑමක් සිදු නොවීය. CaMKII හි මෙම පියවරයන්ට වෙනස්ව, එකම පටක සාම්පල මඟින් NAc හි shell (p = 0.0260; F = 4.189; df = 29) සහ හරය (p = 0.0350; F = 3.807; df = 29) යන දෙකෙහිම ΔFosB ප්‍රේරණය පෙන්නුම් කරයි. (රූපය 1C සහ D.), පෙර සොයා ගැනීම් වලට අනුකූල වේ (පර්රුටි සහ අල්., 2008).

AMPA ප්‍රතිග්‍රාහකවල කොකේන් නියාමනය පිළිබඳ පූර්ව අධ්‍යයනයන් කිහිපයක් නිදන්ගත කොකේන් වලින් ඉවත්වී දින 14 දිනකට පසුව සතුන් විශ්ලේෂණය කළ හෙයින් (සාකච්ඡාව බලන්න), අපි මෙම අවස්ථාවේදී මෙම ජෛව රසායනික විශ්ලේෂණයන් නැවත නැවතත් කළෙමු. කොකේන් අවසන් එන්නත් කිරීමෙන් දින කිහිපයකට පසු 14, ocFosB NAc (p = 0.0288; F = 4.258; df = 22) හි ඉහළ මට්ටමක පවතින බව අපට පෙනී ගිය අතර CaMKII හෝ ග්ලූඒඑක්ස්නූම්ස්හි පොස්පරීකරණය වැඩි වී නැත (Ser1)ස්ලයිඩර් 1E). කෙසේ වෙතත්, එක් 1 mg / kg අභියෝගාත්මක මාත්‍රාවකින් පසු 10 hr, මුළු CaMKII මට්ටම් (p = 0.0330; F = 3.947; df = 26) සහ GluA1 Ser831 (p = 0.0213; F = 4.509; df = 27). ආරම්භක නිදන්ගත කොකේන් නිරාවරණයෙන් පසුව සොයාගත් ප්‍රමාණයට සමාන මට්ටමකට පොස්පරීකරණය ඉහළ නංවනු ලැබේ (ස්ලයිඩර් 1E). මෙම දත්ත වලින් පෙනී යන්නේ දිගු කාලීනව වැළකී සිටීමේ කාලය තුළ NAc ෂෙල් නියුරෝන CaMKII ප්‍රේරණය සඳහා මූලික කර ඇති බවයි, සමහර විට CaMKII ජාන ප්‍රවර්ධකයාගේ සෘජු ප්‍රාථමිකකරණය හරහා (සාකච්ඡාව බලන්න). එපමණක් නොව, MFosB ප්‍රේරණය CaMKII ප්‍රේරණයට වඩා ස්ථීරව පැවතීමෙන් ඇඟවෙන්නේ ක්‍රෝමැටින් මත පදනම් වූ හෝ වෙනත් ආකාරයකින් වේවා, සාකච්ඡාවේ ආවරණය වන පරිදි CaMKII නියාමනයට “තිරිංගයක්” යෙදෙන අතිරේක යාන්ත්‍රණවල පැවැත්මයි.

මෙම නිරීක්ෂණ තවදුරටත් ශක්තිමත් කිරීම සඳහා, අපි කොකේන් ස්වයං පරිපාලනයේ ආකෘති ගවේෂණය කළෙමු. වැඩිහිටි පිරිමි මීයන්ට කොකේන් සඳහා කෙටි හෝ දිගු ප්‍රවේශයක් ලබා දෙන ලදි; බලාපොරොත්තු වූ පරිදි (අහමඩ් සහ කොබ්, 1998), access ෂධයේ ස්වයං පරිපාලනය තීව්‍ර කිරීමට හේතු වූයේ දිගු ප්‍රවේශ කොන්දේසි පමණි (ෆිග් 2A). Os ෆොස්බී වැඩි කාලයක් තිස්සේ ප්‍රේරණය විය එදිරිව NAc shell (p = 0.0011; F = 11.12; df = 17) සහ හරය (p = 0.0004; F = 13.86; df = 17) යන දෙකෙහිම කොකේන් සඳහා කෙටි ප්‍රවේශය. ඊට වෙනස්ව, CaMKIIα NAc කවචය තුළට ප්‍රේරණය කරනු ලැබුවේ කොකේන් සඳහා දිගු ප්‍රවේශයකින් පමණි (රූපය 2B සහ සී; p = 0.0236; F = 4.957; df = 16). කෙටි පිවිසුම් සතුන් (~ 12 mg / kg IV), දිගු පිවිසුම් සතුන් (~ 70 mg / kg IV), සහ අත්හදා බැලීම්-පරිපාලනය කරන සතුන් (10 mg / kg) සහ සාමාන්‍ය දෛනික කොකේන් ප්‍රමාණය සංසන්දනය කිරීම සිත්ගන්නා කරුණකි. කෙටිකාලීන ප්‍රවේශය නොලැබෙන අතර දෙවැන්න ΔFosB සහ CaMKII ශක්තිමත් ලෙස ප්‍රේරණය කරන්නේ මන්දැයි විමසන්න. මෙම විෂමතාවයට හේතුව උපරිම කොකේන් මට්ටම්වල වෙනස්කම් (අත්හදා බැලීම්-පරිපාලනය කරන ලද කොකේන් තනි බෝලස් අයිපී ලෙස ලබා දී ඇති අතර ස්වයං පාලිත කොකේන් බහු IV මාත්‍රාවලින් ලබා දෙනු ලැබේ), හෝ drug ෂධ නිරාවරණයේ දිගෙහි වෙනස (පර්යේෂකයාට 7 දින) පරිපාලනය, ස්වයං පරිපාලනය සඳහා 19 දින).

කොකේන් ක්‍රියාකාරිත්වයේ ΔFosB සහ CaMKII පිළිබඳ විශාල සාහිත්‍යයක් තිබියදීත්, මිනිස් කොකේන් භාවිතා කරන්නන් තුළ මෙම ප්‍රෝටීන පිළිබඳ අධ්‍යයන නොමැත. කොකේන් මත යැපෙන මිනිසුන්ගේ NAc හි ΔFosB (p = 0.0316; t = 1.921; df = 34) සහ CaMKII (p = 0.0444; t = 1.755; df = 32) යන මට්ටම් දෙකම ඉහළ යන බවට පළමු සාක්ෂි අපි මෙහි ඉදිරිපත් කරමු.ස්ලයිඩර් 2D, වගුව 1). මෙම දත්ත වලින් පෙනී යන්නේ මීයන් NAc හි කොකේන් විසින් ΔFosB සහ CaMKII ප්‍රේරණය පිළිබඳ අපගේ පරීක්ෂණය මානව කොකේන් වලට ඇබ්බැහි වීම සඳහා සායනිකව අදාළ වන බවයි.

වගුව 1

මිනිස් කොකේන් වලට ඇබ්බැහි වූවන් හා ගැලපෙන පාලන කණ්ඩායමෙන් සාම්පල වල ලක්ෂණ

Os ෆොස්බී විසින් NAC ෂෙල් හි D1 වර්ගයේ MSN වලින් තෝරාගෙන CaMKII පිටපත් කිරීම නියාමනය කරයි

එන්එම්ඒසී හි කොකේන් මගින් CaMKII සහ osFosB යන දෙකම නියාමනය කර ඇති බව සොයාගැනීමෙන් MFosB විසින් CaMKII ජානය සම්ප්‍රේෂණය කිරීම නියාමනය කළ හැකිද යන්න තීරණය කිරීමට අපට හැකි විය. NAc හි අපක්ෂපාතී ක්ෂුද්‍ර අරා විශ්ලේෂණයක දී osFosB සඳහා විය හැකි ඉලක්කයක් ලෙස අපි මීට පෙර CaMKIIα වාර්තා කළෙමු.මැක්ලන්ග් සහ නෙස්ලේටර්, 2003), නමුත් මෙම සොයා ගැනීම එම අධ්‍යයනයේදී තවදුරටත් වලංගු නොවීය. වැඩිහිටි පිරිමි මීයන්ගේ NAc හි CaMKIIα ජාන ප්‍රවර්ධකයා සමඟ osFosB බන්ධනය වන්නේද යන්න තීරණය කිරීම සඳහා අපි මුලින්ම ප්‍රමාණාත්මක ChIP (qChIP - ChIP හා පසුව ප්‍රමාණාත්මක PCR) භාවිතා කළ අතර, නිදන්ගත කොකේන් පරිපාලනය මගින් ෂෙල් තුළ මෙම බන්ධනය සැලකිය යුතු ලෙස වැඩි වී ඇති බව කැපී පෙනේ. p = 0.0133; t = 2.901; df = 12), නමුත් හරය නොවේ, උප කලාපය (ෆිග් 3A). CaMKIIα ප්‍රවර්ධකයා සමඟ osFosB බන්ධනයෙහි මෙම උප කලාපයට විශේෂිත වූ වෙනස හා සම්බන්ධ යාන්ත්‍රණයන් තවදුරටත් අවබෝධ කර ගැනීම සඳහා, අපි මෙම ප්‍රවේණික කලාපයේ හිස්ටෝන් වෙනස් කිරීම් වල තත්වය සංලක්ෂිත කිරීමට qChIP භාවිතා කළෙමු. පූර්ව අධ්‍යයනවලින් පෙන්නුම් කළේ සම්පූර්ණ මූසිකයේ NAc හි CaMKIIα ප්‍රවර්ධකයේ H3 ඇසිටිලේෂණය කොකේන් ප්‍රේරණය කර ඇති බවයි (Wang et al., 2010). ඊට හාත්පසින්ම වෙනස්ව, NAc core හි තෝරා බේරා ගත් CaMKIIα ප්‍රවර්ධකයේ කොකේන් H3 ඇසිටිලේෂණය අඩු කරන බව අපට පෙනී ගියේය (රූපය 3B; p = 0.0213; t = 2.726; df = 10), shellFosB බන්ධනයෙන් ඔබ්බට උප-කලාපීය-විශේෂිත ක්‍රෝමටින් වෙනස් කිරීම් වලට අනුකූලව, කවචයේ කිසිදු වෙනසක් නොපෙනේ. මර්දනකාරී සලකුණ සඳහා qChIP, ඩිමෙතිලයිටඩ් H3 ලයිසීන් 9 (H3K9me2), ෂෙල් සහ මධ්‍ය උප කලාප දෙකෙහිම අඩුවීමේ ප්‍රවණතා අනාවරණය කළේය (රූපය 3C).

ΔFosB විසින් CaMKIIα පිටපත් කිරීම නියාමනය කරන්නේද යන්න තීරණය කිරීම ඉතින්, අපි විශේෂයෙන් D1 හි osFosB අධික ලෙස මුද්‍රණය කරන බිට්‍රාන්ස්ජනික් මූසික රේඛා දෙකක් භාවිතා කළෙමු. එදිරිව පානීය ජලයේ ඩොක්සි සයික්ලයින් පරිපාලනය විසින් පාලනය වන ආකාරයට D2 වර්ගයේ MSNs (චෙන් සහ අල්., 1998; කෙල්ස් සහ ඇල්., 1999; Werme et al., 2002). වැඩිහිටි පිරිමි මීයන් අධික ලෙස මුද්‍රණය කිරීම DFosB තනිකරම D1 වර්ගයේ MSN වලින් NAc හි CaMKIIα mRNA මට්ටම සැලකිය යුතු ලෙස වැඩි කර ඇත (p = 0.0337; t = 1.996; df = 13), මෙය මීයන් අධික ලෙස මුද්‍රණය කිරීම DFosB හි ප්‍රධාන වශයෙන් D2 වර්ගයේ දක්නට නොලැබේ.ස්ලයිඩර් 3D). D1 වර්ගයේ MSN වල ΔFosB ප්‍රකාශනය මගින් ප්‍රේරණය කරන ලද CaMKIIα mRNA හි වැඩිවීම සමඟ NAc shell (p = 0.0030; t = 3.578; df = 14) සහ හරය (p = 0.0392; t) යන දෙකෙහිම CaMKIIα ප්‍රෝටීනවල අනුකූල වැඩි වීමක් සිදුවිය. = 2.275; df = 14; අත්තික්කා 3E සහ F.). මෙම දත්ත මගින් පෙන්නුම් කරන්නේ උප කලාප දෙකෙහිම D1 වර්ගයේ MSN වල CaMKIIα ජාන ප්‍රකාශනය ධාවනය කිරීමට osFosB සමත් බවයි. රූපය 3B CaMKIIα ප්‍රවර්ධකයේ කොකේන්-මැදිහත් වූ ක්‍රෝමටින් වෙනස්වීම් (උදා: ඇසිටිලේෂණය අඩු කිරීම) ocFosB කොකේන් පසු ප්‍රධාන උප කලාපයේ CaMKII නියාමනය කිරීමෙන් වළක්වයි.

අපගේ පාරම්පරික මූසික දත්ත මගින් පෙන්නුම් කර ඇත්තේ CaCMKII ජාන ප්‍රකාශනය NAc හි D1 වර්ගයේ MSN වලට විශේෂිත බවයි, අපි ඊළඟට උත්සාහ කළේ CaMKII හි කොකේන් මත යැපෙන නියාමනය සඳහා D1 ඩොපමයින් ප්‍රතිග්‍රාහකය සක්‍රිය කිරීම අවශ්‍යද යන්නයි. වැඩිහිටි පිරිමි මීයන්ට පෙර මෙන් නිදන්ගත කොකේන් හෝ සේලයින් ලබා දෙන ලදී, නමුත් සෑම එන්නතකටම මිනිත්තු 30 කට පෙර, කොකේන් කාණ්ඩයේ මීයන්ට සේලයින් එන්නත් කිරීම, ඩී 1 ප්‍රතිවිරෝධක SCH 23390 (0.5 mg / kg) හෝ D2 ප්‍රතිග්‍රාහක ප්‍රතිවිරෝධක එටික්ලොප්‍රයිඩ් (0.5 mg / kg). අවසන් වරට කොකේන් එන්නත් කිරීමෙන් පැය 24 කට පසුව සතුන් විශ්ලේෂණය කරන ලදී. කලින් වාර්තා කළ පරිදි, ඩී 1 නොව ඩී 2 නොව, ප්‍රතිවාදියා -FosB (p <0.0001; F = 18.96; df = 18) හි කොකේන් මැදිහත්වීම සම්පූර්ණයෙන්ම අවහිර කළ බව බටහිර පිපිරීමෙන් හෙළි විය.Nye et al., 1995), මෙන්ම CaMKII හි (p = 0.0005; F = 10.99; df = 18; රූපය 3G සහ H.). මෙම දත්ත කොකේන් විසින් NAC කවචයේ D1 වර්ගයේ MSN වල CaMKII ජාන ප්‍රකාශනයේ osFosB- මැදිහත් වැඩිවීමක් සිදු කරයි යන උපකල්පනයට සහාය වේ. මෙම මොළයේ කලාපය තුළ CaMKII ප්‍රකාශනයට කොකේන් වල මෙම සෛල වර්ගයේ නිශ්චිත බලපෑම කෙලින්ම නිරූපණය කිරීම අනාගත අධ්‍යයනයන්හි දී වැදගත් වේ.

Os ෆොස්බී යනු NAc ෂෙල් හි CaMKII හි කොකේන් ප්‍රේරණය සඳහා අත්‍යවශ්‍ය සහ ප්‍රමාණවත් වේ

බිට්රාන්ස්ජනික් මීයන්ගේ භාවිතය සපුරාලීම සඳහා, මීයන් තුළ වෛරස්-මැදිහත් ජාන හුවමාරුව භාවිතා කරමින් CaMKIIα හි කොකේන් ප්‍රේරණය සඳහා මැදිහත් වීමේ දී ΔFosB හි කාර්යභාරය අපි අධ්‍යයනය කළෙමු. වැඩිහිටි පිරිමි මීයන්ගේ NAc කවචයට (ෂෙල් තෝරා ගත හැකි ඉලක්ක ගත කළ හැකි) ඇඩෙනෝ ආශ්‍රිත වෛරස් (AAV) අංශු ද්වි පාර්ශ්විකව එන්නත් කළෙමු osFosB ප්ලස් GFP හෝ GFP පමණක් අධික ලෙස මුද්‍රණය කිරීම සඳහා. පසුව සතුන්ට 10 mg / kg කොකේන් එක් IP එන්නතක් ලබා දෙන ලදී. ΔFosB / GFP සතුන් අධික ලෙස මුද්‍රණය කිරීම GFP පමණක් ඉක්මවා යන සතුන් හා සසඳන විට වැඩි දුම්රිය එන්ජින් ප්‍රතිචාරයක් පෙන්නුම් කරයි (ෆිග් 4A). තනි කොකේන් එන්නත් කිරීමෙන් පසු 24 hr, ප්‍රතිදීප්ත ආලෝක ප්‍රභවයක් යටතේ වි ection ටනය කිරීමෙන් GFP- ධනාත්මක NAc පටක මෙම සතුන්ගෙන් ඉවත් කරන ලදී. මෙම පටකයේ බටහිර පිපිරීම (රූපය 4B සහ සී) නිදන්ගත කොකේන් පරිපාලනය සමඟ ඇති ප්‍රේරණයට සමාන ප්‍රබල ΔFosB අධික ලෙස පීඩනය මෙන්ම GFP සතුන් හා සසඳන විට සමස්ත CaMKIIα ප්‍රෝටීනවල සැලකිය යුතු වැඩි වීමක් (p = 0.0070; t = 2.894; df = 30) අනාවරණය කළේය. ඊට අමතරව, Thr286 හි CaMKIIα ඔටෝෆොස්ෆරයිලේෂන් (එන්සයිම සක්‍රීය කිරීම පෙන්නුම් කරයි) ΔFosB overexpression (p = 0.0330; t = 2.243; df = 28) මගින් වැඩි කරන ලදී. 831; df = 1), නැවත නිදන්ගත කොකේන් වල ක්‍රියා අනුකරණය කරයි (රූපය 1C සහ D.). ටීඑකට ගත් කල, මෙම දත්ත කොකේන් සඳහා ලොකොමෝටර් සංවේදීකරණයට සහ මෙම උප කලාපය තුළ CaMKII ප්‍රේරණය සහ සක්‍රීය කිරීම සඳහා NAc shell හි ඇති FosB ප්‍රකාශනය ප්‍රමාණවත් බවට තවත් සාක්ෂි සපයයි.

NAc කවචයේ CaMKIIα හි කොකේන්-මැදිහත් ප්‍රේරණය සඳහා osFosB ද අවශ්‍ය දැයි තීරණය කිරීමට අපි සමාන ප්‍රවේශයක් භාවිතා කළෙමු. AAV භාවිතා කරන ලද්දේ ΔFosB පිටපත් කිරීමේ සක්‍රියතාවයේ negative ණ නියාමකයෙකු වන un ජුන්ඩ් ලෙස හැඳින්වෙන, කප්පාදු කරන ලද JunD ප්‍රෝටීනයක් අධික ලෙස මුද්‍රණය කිරීමට ය.වින්ස්ටාලි සහ අල්., 2007) ප්ලස් GFP හෝ GFP පමණක්. සති දෙකකට පසුව, පාරදෘශ්‍ය ප්‍රකාශනය උපරිම වන විට, සතුන්ට දිනපතා 10 දින සඳහා කොකේන් (7 mg / kg) හෝ සේලයින් ලබා දුන් අතර, කොකේන් අභියෝගයකට (5 mg / kg) ලොකොමෝටර් ප්‍රතිචාර සඳහා පරීක්ෂා කරන ලදී.ස්ලයිඩර් 4D). Un ජුන්ඩ් අධික ලෙස පීඩනය යෙදීමෙන් කොකේන් වලට ලොකොමෝටර් සංවේදීතාව වළක්වා ඇති අතර CaMKIIα NAc shell හි ප්‍රේරණය සහ සක්‍රිය වීම වළක්වන ලදි (රූපය 4E සහ F.; p = 0.0437; F = 2.997; මුළු df = 38), මෙම උප කලාපය තුළ CaMKIIα හි කොකේන්-මැදිහත් ප්‍රේරණය සඳහා osFosB පිටපත් කිරීමේ ක්‍රියාකාරකම් අවශ්‍ය බව පෙන්නුම් කරයි. සිත්ගන්නාසුලු කරුණක් නම්, un ජුන්ඩ් විසින් සේලයින් සහ කොකේන් ප්‍රතිකාර කළ කොන්දේසි යටතේ (p = 0.0004; F = 8.110; df = 35) ΔFosB මට්ටම අඩු කර ඇති අතර, osFosB එහි ප්‍රකාශන මට්ටම් සඳහා AP-1 ක්‍රියාකාරකම් මත රඳා පවතී.

Ser27 හි CaMKII Phosphorylates ΔFosB

භාවිතා කරමින් කෘතිම දී ප්‍රෝටීන් kinase assays, පිරිසිදු කරන ලද osFosB යනු CaMKIIα සඳහා ශක්තිමත් උපස්ථරයක් බව අපි තීරණය කළෙමු. උන්වහන්සේගේ පුර්ව ලියාපදිංචි තක්සේරු කිරීම₆-Δ ෆොස්බී CaMKIIα සහ ATP සමඟ ΔFosB හි විද්‍යුත් විච්ඡේදක සංචලනයේ ඉහළ වෙනසක් ඇති කළේය (ෆිග් 5A); එහි ප්‍රති ing ලයක් ලෙස ඇති වූ පටි කිහිපයක් පොස්පරීකරණය කිරීමේ අඩවි කිහිපයක් යෝජනා කළේය. සමාන කෘතිම දී [γ- භාවිතා කරමින් kinase assays³²විස්ථාපනය කරන ලද osFosB පටිවලට රේඩියෝ ලේබල් කරන ලද පොස්පේට් ඇතුළත් කර ඇති බව ATP පෙන්වා ඇත (රූපය 5B), ප්‍රෝටීන වල සෘජු පොස්පරීකරණය පෙන්නුම් කරයි. CharacterizedFosB හි කලින් සංලක්ෂිත Ser27 වෙත අපි පොස්ෆෝ විශේෂිත ප්‍රතිදේහයක් ජනනය කළෙමු (උලරි සහ අල්., 2006). මෙම ප්‍රතිදේහය මගින් Ser27-phosphorylated latedFosB (දත්ත පෙන්වා නැත) අඩංගු මොළයේ නිස්සාරණයට එරෙහිව සං signal ාවක් නිපදවන්නේ නැත, නමුත් අපට Ser27 පොස්පරීකරණය හඳුනා ගැනීමට හැකි විය. කෘතිම දී CaMKII භාවිතා කරමින් kinase assay (රූපය 5B). ΔFosB හි CaMKII පොස්පරීකරණය පිළිබඳ චාලක විශ්ලේෂණයන් පෙන්නුම් කරන්නේ එය කයිනාස් සඳහා ප්‍රබල උපස්ථරයක් බවයි (රූපය 5C), පෙනෙන කේ සමඟ_M 5.7 ± 2.0µM සහ K._CAT 2.3 ± 0.3min හි^-1. මෙම ප්‍රති results ල බොහෝ හොඳින් සංලක්ෂිත වේ ඉතින් CaMKII හි උපස්ථර (කොල්බ්රාන් සහ බ්රවුන්, 2004). ඊට අමතරව, 2.27 ± 0.07 mol / mol (ස්ටයිචියෝමිතිකයක් සහිත CaMKII ෆොස්ෆරයිලෙට්ස් osFosB) අපි තීරණය කළෙමු.ස්ලයිඩර් 5D), අවම වශයෙන් CaMKII ෆොස්ෆරයිලේෂන් අඩවි තුනක් වත් උන්වහන්සේ තුළ ඇති බව පෙන්නුම් කරයි₆-Δ ෆොස්බී ප්‍රෝටීන්, එකඟයි ෆිග් 5A.

පොස්පරීකරණය පිළිබඳ එක් එක් වෙබ් අඩවි විමර්ශනය කිරීම සඳහා, අප විසින් සාම්පල පිළිබඳ MS විශ්ලේෂණයන් භාවිතා කරන ලදී කෘතිම දී kinase assays. ස්ලයිඩර් 5E කලින් සංලක්ෂිත Ser27 සහ අතිරේක අඩවි කිහිපයකදී dataFosB පොස්පරීකරණය පෙන්නුම් කරයි (දත්ත පෙන්වා නැත). Ser27 හි පූර්ව ක්‍රියාකාරී ගුනාංගීකරනය සැලකිල්ලට ගෙන, අපි මෙම වෙබ් අඩවිය කෙරෙහි අවධානය යොමු කළේ Ser27 හි ෆොස්ෆෝ හා නො-පොස්ෆෝ-තත්වයන් අනුකරණය කරමින් ලේබල් කරන ලද කෘතිම පෙප්ටයිඩ ජනනය කිරීමෙනි, පසුව ΔFosB හි MRM විශ්ලේෂණයන්හි ප්‍රමිති ලෙස මෙම පෙප්ටයිඩවල දන්නා ප්‍රමාණ භාවිතා කළෙමු. කෘතිම දී CaMKII විසින් පොස්පරීකරණය. පසු ප්‍රමාණකරණය (රූපය 5F) Ser27 යනු CaMKII සඳහා ප්‍රබල උපස්ථරයක් බව සනාථ කරයි. මෙම ප්‍රති results ලවලින් පෙනී යන්නේ, osFosB තුළ ඇති බහු පොස්පරීකරණය කළ අපද්‍රව්‍ය අතර, Ser27 යනු CaMKII සඳහා විශේෂයෙන් effective ලදායී උපස්ථරයක් බවයි.

CaMKII NAc කවචයේ osFosB හි කොකේන් සමුච්චනය මැදිහත් කරයි

CaMKII හට osFosB පොස්පරීකරණය කළ හැකි බැවින් කෘතිම දී එහි ස්ථායිතාව නාටකාකාර ලෙස වැඩි කරන වෙබ් අඩවියක කෘතිම දී සහ ඉතින් (උලරි සහ අල්., 2006; උලරි-රේනෝල්ඩ් සහ අල්., 2009), අපි තීරණය කළේ CaMKII ක්‍රියාකාරකම් NAc හි osFosB මට්ටම් පාලනය කරන්නේද යන්නයි ඉතින්. මෙම ප්‍රශ්නයට විසඳුම් සෙවීම සඳහා අපි මුලින්ම භාවිතා කළේ NAc (ඇතුළු මොළයේ කලාප කිහිපයක CaMKIIα (T286D) හි කැල්සියම් ස්වාධීන විකෘතියක් ඉක්මවා යන මූසික රේඛාවක්.මේෆර්ඩ් සහ වෙනත් අය, 1996; කර්රිච් සහ අල්., 2012). අපි වයසට ගැළපෙන වැඩිහිටි පිරිමි විකෘති හා වල් ටයිප් පැටවුන් 20 දිනකට එක් වරක් 14 mg / kg කොකේන් හෝ සේලයින් එන්නත් කර, අවසාන එන්නතෙන් දිනකට පසු සතුන් විශ්ලේෂණය කළෙමු. NAc shell (p = 0.0001; F = 9.207; df = 37) හි විකෘති සතුන් තුළ osFosB හි බාසල් මට්ටම් වැඩි වී ඇති බව අපට පෙනී ගියේය, නමුත් හරය නොවේ (රූපය 5G සහ H.). පුදුමයට කරුණක් නම්, ෂෙල් සහ හරය යන දෙවර්ගයේම විකෘති සතුන් තුළ ocFosB හි කොකේන් මත යැපීම අවහිර කර ඇති අතර, යෝජනා කරන්නේ CaMKII විසින් NAc කවචයේ osFosB ස්ථායිතාව කෙලින්ම නියාමනය කළ හැකි වුවද, එය NAc උප කලාප දෙකෙහිම කොකේන්-සක්‍රීය මාර්ගවල osFosB හි ඉහළට වන්නට ඇති බවයි. .

OMFosB- මැදිහත් වූ ව්‍යුහාත්මක හා චර්යාත්මක ප්ලාස්ටික් සඳහා CaMKII ක්‍රියාකාරකම් අවශ්‍ය වේ

NAc MSNs මත ඩෙන්ඩ්‍රිටික් කොඳු ඇට පෙළේ කොකේන් ප්‍රේරණය මෙම මොළයේ කලාපයේ ඇති හොඳම ස්ථාපිත drug ෂධ අනුවර්තනයන්ගෙන් එකක් වන අතර එවැනි කොඳු ඇට පෙළේ ප්‍රේරණය drug ෂධයට සංවේදී චර්යාත්මක ප්‍රතිචාර සමඟ සම්බන්ධ වී ඇත (රොබින්සන් සහ කොල්බ්, 2004; රුසෝස් සහ අල්., 2010) සහ D1 වර්ගයේ MSN සඳහා තෝරාගත් බව වාර්තා වේ (ලී සහ අල්., 2006). NAc හි ඩෙන්ඩ්‍රිටික් කොඳු ඇට පෙළේ කොකේන් ප්‍රේරණය osFosB සහ එහි පහළ පිටපත් කිරීමේ වැඩසටහන මත රඳා පවතින බව අපි මෑතකදී ඔප්පු කර ඇත්තෙමු.Maze et al., 2010). ඩෙන්ඩ්‍රිටික් කොඳු ඇට පෙළේ රූප විද්‍යාව හා අනෙකුත් මොළයේ කලාපවල සහ පර්යේෂණාත්මක පද්ධතිවල ප්‍රේරණය සඳහා CaMKII සම්බන්ධ වීම පිළිබඳ පුළුල් සාහිත්‍යයක් තිබුණද (ජෝර්ඩින් සහ වෙනත් අය, 2003; පෙන්ස් සහ වෙනත්., 2008; ඔකමොටෝ සහ වෙනත් අය, 2009), NAc MSN කොඳු ඇට පෙළ සෑදීමේදී එහි භූමිකාව අධ්‍යයනය කර නොමැත. එබැවින්, එම්එස්එන් ඩෙන්ඩ්‍රිටික් කොඳු ඇට පෙළේ ෆොස්බී-මැදිහත් ප්‍රේරණය සඳහා CaMKII ක්‍රියාකාරීත්වය අවශ්‍ය දැයි අපි තීරණය කළෙමු. CaMKII නිෂේධක පෙප්ටයිඩ AC3I හි ජීඑස්පී සමඟ සම්මිශ්‍රණය කරන ලද HSV- මැදිහත් වූ අධික ලෙස පීඩනය භාවිතා කිරීම මගින් CaMKII ක්‍රියාකාරකම් වලක්වනු ඇත. ඉතින් (ෂැං සහ ඇල්., 2005; ක්ලග් සහ වෙනත්., 2012). වැඩිහිටි මීයන්ගේ NAc කවචයේ osFosB හි වෛරස් අධික ලෙස පීඩනය යෙදීමෙන් MSN ඩෙන්ඩ්‍රිටික් කොඳු ඇට පෙළේ ity නත්වය සැලකිය යුතු ලෙස වැඩි විය (p <0.0001; F = 8.558; df = 59; රූපය 6A සහ B.) කලින් වාර්තා කළ පරිදි (Maze et al., 2010), සහ මෙම වැඩිවීම මූලික වශයෙන් තුනී (p = 0.0027; F = 5.319; df = 59) සහ මුරණ්ඩු (p = 0.0378; F = 2.988; df = 59) කොඳු ඇට පෙළ (දෙකම නොමේරූ කොඳු ඇට පෙළ යැයි සිතනු ලැබේ) (රූපය 6C - E). වඩා පරිණත, බිම්මල් හැඩැති කොඳු ඇට පෙළට කිසිදු බලපෑමක් දක්නට නොලැබුණි. කෙසේ වෙතත්, GFP-AC3I සමපාත වූ විට, spFosB කොඳු ඇට පෙළ සම්පූර්ණයෙන්ම අවලංගු කරන ලදි (රූපය 6A - E), NAc කවචයේ ndFosB ඩෙන්ඩ්‍රිටික් ක ines ්චුක ප්‍රේරණය සඳහා CaMKII ක්‍රියාකාරකම් අවශ්‍ය බව පෙන්නුම් කරයි.

කොකේන් සඳහා චර්යාත්මක සංවේදීතාවයට osFosB හි බලපෑම සඳහා CaMKII ක්‍රියාකාරකම් අවශ්‍ය දැයි තීරණය කිරීම සඳහා අපි ඊළඟට එකම වෛරස් මෙවලම් භාවිතා කළෙමු. NAc කවචයට වෛරස් එන්නත් කිරීමෙන් පසු 72 පැය, සතුන්ට 5 mg / kg කොකේන් එක් එන්නතක් ලබා දුන් අතර ඒවායේ ලොකොමෝටර් ක්‍රියාකාරිත්වය සටහන් විය. මීට පෙර පෙන්වා ඇති පරිදි extendedFosB හි වඩා දිගු AAV අධික ලෙස පීඩනය යෙදීම (ෆිග් 4A), ΔFosB හි HSV- මැදිහත් වූ අධික ලෙස පීඩනය කොකේන් වලට ලොකොමෝටර් සංවේදීතාව වැඩි කරයි (p = 0.0002; F = 8.823; df = 37; රූපය 6F). ඩෙන්ඩ්‍රිටික් ක ines ්චුක ප්‍රේරණය මෙන්ම, ජීඑෆ්පී-ඒසීඑක්ස්නූම්ක්ස් හි සමෝච්ඡය මගින් CaMKII ක්‍රියාකාරිත්වය නිෂේධනය කිරීම කොකේන් සංවේදීතාවයේ osFosB- මැදිහත් වීම වැඩි කිරීම සම්පූර්ණයෙන්ම අවහිර කළේය, එයින් පෙන්නුම් කරන්නේ කොකේන් හි චර්යාත්මක බලපෑම්වල osFosB ප්‍රේරිත වෙනස් කිරීම් සඳහා CaMKII ක්‍රියාකාරකම් අවශ්‍ය බවයි.

යන්න:

සාකච්ඡා

වර්තමාන අධ්‍යයනය මගින් කොකේන් NAc හි osFosB ප්‍රේරණය කරන නව පෝෂක-ඉදිරි යාන්ත්‍රණයක් නිරූපණය කරයි, එමඟින් CaMKIIα ජානය NAc shell හි තෝරා බේරා පිටපත් කිරීම නියාමනය කරයි.. CaMKIIα පසුව පොස්පරීකරණය කර ස්ථාවර කරයි ΔFosB වැඩි osFosB සමුච්චය වීමට සහ තවදුරටත් CaMKIIα ප්‍රේරණයට මග පාදයි (රූපය 6G). නිදන්ගතව කොකේන් නිරාවරණය වන විට ප්‍රෝටීන දෙකෙහි සම-තීව්‍රතා මට්ටම් පසුව .ෂධයට චර්යාත්මක ප්‍රතිචාර සංවේදී කිරීම සඳහා අත්‍යවශ්‍ය ක්‍රමවලට දායක වේ. මෙය විශේෂයෙන් සිත්ගන්නාසුලු උපකල්පනයක් වන අතර කොකේන් සඳහා චර්යාත්මක ප්‍රතිචාර වැඩි කිරීම සඳහා අවශ්‍ය බව toFosB සහ CaMKII යන දෙකම කලින් ඔප්පු කර ඇත. (පියස් සහ ඇල්., 1998; පියමන් සහ ඇල්., 2003), සහ අපි මෙම සොයාගැනීම NAc කවචයේ osFosB සඳහා විශේෂයෙන් වෛරස් ප්‍රවේශයක් භාවිතා කරමු (අත්තික්කා 4 සහ සහ විෂන්).

ඩී.එස්.එන්.එම්.එම්.එක්ස් වර්ගයේ එම්.එස්.එන්. හි පාරම්පරික os ෆොස්බී අධික ලෙස පීඩනය යෙදීමෙන් කොකේන් සන්දර්භය තුළ එන්.ඒ.සී. . මෙම වෙනස අපගේ බිට්‍රාන්ස්ජනික් ආකෘතියේ ඉහළ මට්ටමක ඇති ΔFosB සමඟ සම්බන්ධ විය හැකිය, කෙසේ වෙතත්, එය ෂෙල් තුළ CaMKIIα ප්‍රවර්ධකය වෙනස් ලෙස වෙනස් කිරීමට කොකේන් සතු හැකියාව පිළිබිඹු කරයි. එදිරිව MSFosB බන්ධනය කලින් ඇති ආකාරයට ප්‍රවර්ධනය කිරීම හෝ දෙවන උප කලාපයේ එය බැහැර කිරීම සඳහා මූලික MSNs. ඇත්ත වශයෙන්ම, අපගේ චිප් දත්ත, NAc හරයේ පමණක් CaMKIIα ජාන ප්‍රවර්ධකයෙහි ඇති කොකේන්-මැදිහත් වූ හිස්ටෝන නිෂ්ක්‍රීය කිරීම හෙළි කරයි, ක්‍රෝමටින් යාන්ත්‍රණයකට සම්බන්ධ වීමට සහාය වේ. මෙම උපකල්පිතයට අනුකූලව, කොකේන් නොමැති විට NAX හරය තුළ CaMKIIα ප්‍රේරණය ධාවනය කිරීමට D1 වර්ගයේ MSNs හි osFosB අධි පීඩනයට හැකි විය.රූපය 3F), නිදන්ගත කොකේන් නිරාවරණයේදී මෙම ප්‍රේරණය වළක්වන CaMKIIα ප්‍රවර්ධකයේ ක්‍රියාකාරී වෙනස් කිරීම් ඇති බව යෝජනා කරයි. CaMKII ප්‍රවර්ධකයාගේ ක්‍රෝමටින් භූ දර්ශනය නියාමනය කිරීමෙන් නිදන්ගත කොකේන් ඉවත් කර ගන්නා මීයන්ගේ NAc කවචයේ ඇති කොකේන් අභියෝගාත්මක මාත්‍රාවක් මගින් CaMKII ප්‍රේරණය වන්නේ ඇයිද යන්න පැහැදිලි කළ හැකිය (ස්ලයිඩර් 1E) නමුත් මත්ද්‍රව්‍ය-අහිංසක සතුන්ගෙන් නොවේ (ස්ලයිඩර් 1D). මෙය osFosB () හි එපජෙනෙටික් “ජාන ප්‍රාථමික” බලපෑමක් නිරූපණය කළ හැකිය.රොබිසන් සහ නෙස්ලේටර්, 2011), සහ මේ අනුව කොකේන් තෘෂ්ණාව පුර්ව ලියාපදිංචි කිරීමේ එක් අණුක යාන්ත්‍රණයක් විය හැකිය (පිකන්ස් සහ වෙනත්., 2011). කෙසේ වෙතත්, මෙම ක්‍රෝමටින් වෙනස තෘෂ්ණාව පුර්ව ලියාපදිංචි තක්සේරු කිරීම සමඟ සම්බන්ධ වීමට නම්, කාලයත් සමඟ එය වැඩි විය යුතුය. මෙය එසේ දැයි තීරණය කිරීම සහ වෙනත් ජාන කොකේන් මගින් osFosB- රඳා පවතින, උප කලාපයට විශේෂිත වූ නියාමනයක් පෙන්වන්නේ දැයි අධ්‍යයනය කිරීම සිත්ගන්නා සුළු වනු ඇත. අප විස්තර කරන පෝෂක-ඉදිරි ලූපය CaMKII හෝ osFosB (නිමක් නැතිව) සමුච්චය වීමට හේතු නොවන බව සැලකිල්ලට ගැනීම වැදගත්ය.ස්ලයිඩර් 1E); මේ සඳහා වගකිව යුතු අණුක “තිරිංගය” අනාවරණය කර ගැනීම අනාගත අධ්‍යයනවල වැදගත් ඉලක්කයකි.

පර්යේෂණාත්මක පද්ධති සහ මොළයේ කලාප කිහිපයක osFosB සහ CaMKII හි දන්නා කාර්යයන් බොහෝ මට්ටම්වල අභිසාරී වේ (රූපය 6F). අණු දෙකම ඩෙන්ඩ්‍රිටික් කොඳු ඇට පෙළේ වර්ධනය සමඟ සමීපව බැඳී ඇත: CaMKII ඇක්ටින් සයිටොස්කෙලිටන් සමඟ අන්තර්ක්‍රියා කරයි (ඔකමොටෝ සහ වෙනත් අය, 2009), කොඳු ඇට පෙළේ ප්‍රමාණය නියාමනය කරයි (Matsuzaki et al., 2004), සහ හයිපොකැම්පල් කාබනික ස්ලයිස් සංස්කෘතීන්හි ෆිලෝපෝඩියා සහ උපාගම සංඛ්‍යාවේ ප්ලාස්ටික් බව වැඩි කිරීම සඳහා අවශ්‍ය සහ ප්‍රමාණවත් වේ (ජෝර්ඩින් සහ වෙනත් අය, 2003), while osFosB යනු NAc MSN වල කොකේන් මගින් ඇති කරන ලද ඩෙන්ඩ්‍රිටික් කොඳු ඇට පෙළ සෑදීම සඳහා අවශ්‍ය සහ ප්‍රමාණවත් වේ (Maze et al., 2010). මීට අමතරව, අණු දෙකම AMPA ග්ලූටමේට් ප්‍රතිග්‍රාහක නියාමනය සමඟ සම්බන්ධ වී ඇත. CaMKII විසින් AMPA ප්‍රතිග්‍රාහක අනු ඒකකවල සමස්ත මට්ටම් නියාමනය නොකරයි, නමුත් AMPA ප්‍රතිග්‍රාහක උපාගමයන් තුළට ඇතුළු කිරීම සහ සංස්කෘතියේ හා හිපොකම්පල් පිරමිඩල් නියුරෝන වල Ser1 හි ග්ලූඑක්ස්නූම්ස් පොස්පරීකරණය කිරීමෙන් AMPA නාලිකා සන්නායකතාව වැඩි කරයි. ඉතින් (සමාලෝචනය)මැලිනෝව් සහ මැලෙන්කා, 2002; කොල්බ්රාන් සහ බ්රවුන්, 2004)). ග්ලූඒඑක්ස්එන්එම්එක්ස් උපාගමයට වැඩි වශයෙන් ප්‍රවාහනය කිරීම නිදන්ගත කොකේන් ක්‍රියාකාරිත්වයට ද සම්බන්ධ වේ (බෝඩ්රෝ සහ වුල්ෆ්, 2005). එපමණක් නොව, NAc හි AMPA ප්‍රතිග්‍රාහක සක්‍රිය කිරීම සඳහා වන චර්යාත්මක ප්‍රතිචාර CaMKIIα අධික ලෙස පීඩනය මගින් D1 ඩොපමයින් ප්‍රතිග්‍රාහක මත රඳා පවතින ආකාරයකින් වැඩි දියුණු කරයි (සිංගර් et al., 2010). ΔFosB හි දිගුකාලීන D1 විශේෂිත අධි පීඩනය NAc හි ග්ලූඒඑක්ස්එන්එම්එක්ස් පිටපත් කිරීමට පොළඹවන බව පෙන්වා දී ඇත (කෙල්ස් සහ ඇල්., 1999), ග්ලූඒඑක්ස්එන්එම්එක්ස් හරහා මැදිහත් වූ AMPA ප්‍රතිචාර අඩපණ කරන අතර, කෙටි කාලීන ΔFosB අධික ලෙස පීඩනය මෙන්ම කෙටි කාලීන කොකේන් නිරාවරණයද මෙම අනු ඒකකයට කිසිදු බලපෑමක් නොකරන බව අපි මෙහි පෙන්වමු.රූපය 1). එසේ වුවද, කෙටිකාලීන osFosB අධි පීඩන කෙසේ වෙතත් NAc හි D1 වර්ගයේ MSN වල AMPA ප්‍රතිචාර අඩු කරන බව මෑතකදී අපට හමු විය (Grueter et al., 2013). මෙම දත්ත යෝජනා කරන්නේ ඇබ්බැහි වීමේ ප්‍රගතියේ විවිධ පැතිකඩයන් තවමත් හොඳින් වටහාගෙන නොමැති කොකේන් සඳහා කාලය මත රඳා පවතින ස්නායු වෙනස්වීම් මාලාවක් විය හැකි තාවකාලිකව වෙනස් යාන්ත්‍රණයන් ය. චර්යාත්මක මට්ටමින්, කොකේන් සඳහා ලොකොමෝටර් සංවේදීකරණය සඳහා CaMKII සහ osFosB යන දෙකම අවශ්‍ය වේ (ඉහත බලන්න), සහ දෙකම මීයන් තුළ කොකේන් ස්වයං පරිපාලනය සඳහා අවශ්‍ය වේ (දෙකම).කොල්බි et al., 2003; Wang et al., 2010), ප්‍රෝටීන දෙක drug ෂධ නිරාවරණයට කෙටිකාලීන හා දිගු කාලීන චර්යාත්මක අනුවර්තනයන් සඳහා වැදගත් බව යෝජනා කිරීම, අර්ධ වශයෙන් වෙනස් යටින් පවතින යාන්ත්‍රණ හරහා වුවද. අනුමාන වශයෙන්, osFosB සහ CaMKII, NAc උපාගමික ක්‍රියාකාරිත්වයේ වෙනස්වීම් හරහා එවැනි සංකීර්ණ චර්යාත්මක අනුවර්තනයන් නියාමනය කරයි, නමුත් උපාගමික සංසිද්ධි චර්යාත්මක වෙනසට සෘජුවම සම්බන්ධ කිරීම සඳහා තවත් බොහෝ කාර්යයන් අවශ්‍ය වේ.

CaMKII holoenzyme එකවර විවිධ උපාගම හා සම්බන්ධ ප්‍රෝටීන සමඟ අන්තර්ක්‍රියා කරයි (රොබිසන් et al., 2005) පෝස්ට්නැප්ටික් dens නත්වය (පීඑස්ඩී) වෙත එහි ඉලක්කය නියාමනය කරනු ඇතැයි සිතන අතර එය උපාගමික ප්ලාස්ටික් සඳහා වැදගත් යැයි යෝජනා කරන ලද සංසිද්ධියකි. විශේෂයෙන්, එන්එම්ඩීඒ වර්ගයේ ග්ලූටමේට් ප්‍රතිග්‍රාහකයේ ග්ලූඑන්එක්ස්එන්එම්එක්ස්බී අනු ඒකකය සමඟ CaMKII හි අන්තර්ක්‍රියාකාරිත්වය මෑතකදී පෙන්වූයේ උපාගමික ප්ලාස්ටික් බව සහ ඉගෙනීම යන දෙකම නියාමනය කිරීම සඳහා ය (හැල්ට් et al., 2012). AC3I පෙප්ටයිඩය CaMKII හි ස්වයංක්‍රීය නිෂේධන වසම අනුකරණය කරන අතර එමඟින් එන්සයිම උත්ප්‍රේරක ක්‍රියාකාරිත්වය වළක්වයි, එය බහු ප්‍රෝටීන-ප්‍රෝටීන අන්තර්ක්‍රියා ද අවහිර කරයි (ස්ට්රැක් සහ වෙනත්., 2000; රොබිසන් et al., 2005). මේ අනුව, මෙහි වාර්තා වී ඇති HSV-GFP-AC3I හි චර්යාත්මක හා රූප විද්‍යාත්මක බලපෑම් සිදුවිය හැක්කේ CaMKII ඉලක්කගත ප්‍රෝටීන වල පොස්පරීකරණය අඩුවීම, CaMKII ඉලක්කයේ වෙනස්වීම් හෝ උපාගමයන්හි CaMKII හි යෝජිත ව්‍යුහාත්මක භූමිකාව වෙනස් කිරීමෙනි.ලිස්මන් සහ වෙනත් අය, 2002).

කොකේන් පරිපාලනයට ප්‍රතිචාර වශයෙන් NAc කවචය සහ හරය අතර භෞතික විද්‍යාත්මක වෙනස්කම් කිහිපයක් මෑත කාලීන වැඩවලින් පෙන්නුම් කර ඇති හෙයින්, අපගේ අපක්ෂපාතී iTRAQ (වගුව S1) දත්ත මගින් සනාථ කරන ලද සංකල්පයක් වන NAc කවචයට යෝජිත osFosB-CaMKII ලූපය සීමා කිරීම විශේෂ අවධානයට ලක් වේ. . NAc කවචයේ ඇති MSNs සති ගණනක් තිස්සේ පවත්වා ගෙන යන නිදන්ගත කොකේන් පසු වෙඩි තැබීමේ ධාරිතාවයේ අවපාතයක් පෙන්නුම් කරන අතර, එකම සතුන්ගේ මූලික MSNs 1 සති තුළ බාසල් මට්ටම් කරා ආපසු යන වෙඩි තැබීමේ ධාරිතාවයේ අස්ථිර (3-2 දිනය) වැඩි වීමක් පෙන්නුම් කරයි.කුරිච් සහ තෝමස්, 2009). ඊට අමතරව, NAc කවචයේ බොහෝ උපාගමික ප්‍රෝටීන වෙනස් ලෙස නියාමනය කරනු ලැබේ එදිරිව ග්ලූඇක්ස්නූම්ස් (නිදන්ගත කොකේන්) වලට නිරාවරණය වන සතුන්ගේ හරය (Knackstedt et al., 2010). නිදන්ගත ඇම්ෆෙටමින් CaMKIIα විශේෂයෙන් NAc කවචයේ ප්‍රේරණය කරන පරිදි (ලෝත් සහ අල්., 2010), අපි කොකේන් සමඟ සමාන බලපෑමක් සොයා ගැනීම පුදුමයක් නොවේ. කෙසේ වෙතත්, නිදන්ගත කොකේන් මගින් ocFosB NAc කවචය සහ හරය යන දෙකෙහිම ප්‍රේරණය වන බැවින් (පර්රුටි සහ අල්., 2008), සහ ෂෙල් තුළ CaMKIIα ප්‍රේරණය osFosB මත රඳා පවතින බව අප පෙන්වන හෙයින්, අපගේ සොයාගැනීම් CaMKIIα ප්‍රවර්ධකයේ මෙම උප කලාප දෙක අතර විශේෂිත පිටපත් කිරීමේ යාන්ත්‍රණයන් සඳහා නව සාක්ෂි සපයයි, ඒවා ෂෙල් තුළ CaMKIIα තෝරා බේරා ගැනීමට හේතු වේ.

මෑත කාලීන වැඩවලින් විශාල ප්‍රමාණයක් D1- සහ D2 වර්ගයේ NAc MSN අතර වෙනස්කම් නිරූපණය කිරීම කෙරෙහි අවධානය යොමු කර ඇත. D1 සහ D2 ප්‍රතිග්‍රාහක දෙකම කොකේන් වල ප්‍රති ing ලදායක බලපෑම් වලට සම්බන්ධ වුවද (ස්වයං, 2010), මෑත වැඩවලින් පෙන්නුම් කරන්නේ D1 වර්ගයේ MSN වල දෘෂ්‍යජනක සක්‍රීය කිරීම කොකේන් සඳහා චර්යාත්මක ප්‍රතිචාර වැඩි කරන අතර D2 වර්ගයේ MSN සක්‍රීය කිරීම ප්‍රතිවිරුද්ධ බලපෑමක් ඇති කරයි (Lobo et al., 2010). මෙම සොයාගැනීම් වලට අනුකූලව, කොකේන් ස්වයං පරිපාලනය අත්පත් කර ගැනීමේදී D1- ප්‍රතිග්‍රාහක පිළිමළුන් පිටුදැකීමේ මීයන් ient න වේ (කේයින් සහ අල්., 2007), D2 පිළිමළුන් පිටුදැකීම නොවේ (කේයින් සහ අල්., 2002). D1 කෘෂි පරිපාලනය NAc වෙත කෙලින්ම නැවත ස්ථාපනය කිරීමේ පරාමිතීන් තුළ කොකේන් සෙවීමේ හැසිරීම අවුලුවයි (ස්වයං, 2010). සිත්ගන්නා කරුණ නම්, NAc කවචයේ CaMKII ක්‍රියාකාරකම් වල D1- ප්‍රතිග්‍රාහක මත යැපෙන වැඩි වීමක් අවශ්‍ය වන නමුත් හරය නොවේ (ඇන්ඩර්සන් සහ වෙනත් අය, 2008), මෙහි යෝජනා කර ඇති D1- සහ ෂෙල්-විශේෂිත osFosB-CaMKII ලූපය සමඟ හොඳින් සම්බන්ධ වේ.

ΔFosB හි ඇති Ser27, කේසීන් කයිනාස්- 2 මගින් පොස්පරීකරණය කළ හැකි බව අපි මීට පෙර වාර්තා කළෙමු.උලරි සහ අල්., 2006), කෙසේ වෙතත්, මෙහි දී අපි තහවුරු කරන්නේ CaMKII ෆොස්ෆරයිලෙට්ස් ΔFosB සහ වෙනත් වෙබ් අඩවි වලට වඩා විශාල චාලක හා ස්ටොයිකියෝමිතිකයක් ඇති අතර ඉහළ පෙනෙන එම්_r osFosB සඳහා නිරීක්ෂණය කරන ලදී (ෆිග් 5A) කොකේන් නිරාවරණය සමඟ ඉතින් (නෙස්ලේ, 2008). Ser27 ෆොස්ෆරයිලේෂන් osFosB ස්ථායිතාව සහ පිටපත් කිරීමේ ක්‍රියාකාරකම් වැඩි කරන බව අපි දැනටමත් දනිමු (උලරි සහ අල්., 2006; උලරි සහ නෙස්ලර්, 2007; උලරි-රේනෝල්ඩ් සහ අල්., 2009). වර්තමාන අධ්යයනය මගින් පෙන්නුම් කරන ΔFosB ෆොස්ෆරයිලේෂන් හි නව අඩවි හඳුනා ගැනීම සහ ක්රියාකාරී ප්රතිවිපාක කෙරෙහි අනාගත වැඩ කටයුතු දැන් අවධානය යොමු කරනු ඇත.

මෙහි විස්තර කර ඇති පෝෂක-ඉදිරි ලූපය කොකේන් නැවත නැවත පරිපාලනය කිරීම මගින් NAc හි ප්‍රගතිශීලී අසාමාන්‍යතා ඇති කරන නව යාන්ත්‍රණයක් සපයයි. එනිසා, මෙම ජෛව රසායනික මාර්ගය ඇබ්බැහි වීමේ ආබාධ සඳහා අනාගත චිකිත්සක මැදිහත්වීම සඳහා වැදගත් ඉලක්කයක් සපයනු ඇත. CaMKII සර්වසම්පූර්ණ වන අතර බොහෝ බාසල් නියුරෝන හා චර්යාත්මක කාර්යයන් සඳහා අවශ්‍ය වන හෙයින්, ඇබ්බැහි වීමේ ප්‍රතිකාරයක් ලෙස CaMKII නිෂේධක සෘජුවම භාවිතා කිරීම වළක්වා ඇත. අපගේ දත්ත වලට අනුව, තනි සෛල වර්ගයකට සහ මොළයේ විපාක පරිපථයට යටත් වන CaMKII ප්‍රේරණයේ යාන්ත්‍රණය වඩාත් සියුම් ඉලක්ක කිරීම මඟින් පද්ධතිමය CaMKII නිෂේධනයේ සංකූලතා වළක්වා ගත හැකි චිකිත්සක ඉලක්කයක් සැපයිය හැකිය.

යන්න:

ස්තූතියි

මත්ද්‍රව්‍ය නිවාරණය පිළිබඳ ජාතික ආයතනය (ඊ.ජේ.එන්), එන්.ඩී.ඒ-යේල් ප්‍රෝටොමික්ස් සෙන්ටර් ඩැක්ස්නූක්ස් (ඒ.ජේ.ආර්. සහ ඊ.ජේ.එන්) සහ හාර්ට්වෙල් පදනමේ (ඒ.ජේ.ආර්. පිරිසිදු කරන ලද CaMKIIα හි ත්‍යාගශීලී ත්‍යාගය වෙනුවෙන් පිරිසිදු කරන ලද ΔFosB සහ රොජර් කොල්බ්‍රන්ගේ ත්‍යාගශීලී ත්‍යාගය පිළිබඳව කතුවරුන් ගැබි රුන්ඩෙන්කෝට ස්තූතිවන්ත වෙති.

යන්න:

ආශ්රිත

1. අහමී එච්, කොබොෆ් ජී. මධ්යස්ථ හා අධික මත්ද්රව්ය භාවිතයෙන් මාරුවීම: හඩෝනීය සැකසුම් ලක්ෂ්යයේ වෙනසක්. විද්යාව. 1998; 282: 298-300. [PubMed]
2. ඇන්ඩර්සන් එස්.එම්., ප්‍රසිද්ධ කේ.ආර්., සද්රි-වාකිලි ජී, කුමාරසන් වී, ෂ්මිට් එච්.ඩී., බාස් සීඊ, ටර්විල්ලිගර් ඊඑෆ්, චා ජේඑච්, පියර්ස් ආර්සී. CaMKII: කොකේන් සෙවීමේදී ඇකියුම්බන්ස් ඩොපමයින් සහ ග්ලූටමේට් පද්ධති සම්බන්ධ කරන ජෛව රසායනික පාලමක්. Nat Neurosci. 2008; 11: 344 - 353. [PubMed]
3. බෝඩ්රෝ ඒසී, වුල්ෆ් එම්ඊ. කොකේන් සඳහා චර්යාත්මක සංවේදීතාව න්‍යෂ්ටිය සමුච්චයේ AMPA ප්‍රතිග්‍රාහක මතුපිට ප්‍රකාශනය සමඟ සම්බන්ධ වේ. ජේ නියුරෝසි. 2005; 25: 9144 - 9151. [PubMed]
4. බ්‍රික්කි ඩීඒ, කොල්බ්‍රන් ආර්ජේ, ෆොන්ග් වයිඑල්, සොඩර්ලිං ටී.ආර්. Baculovirus ප්‍රකාශන පද්ධතිය භාවිතා කරමින් Ca2 + / calmodulin- යැපෙන ප්‍රෝටීන් kinase II හි ඇල්ෆා-අනු ඒකකයේ ප්‍රකාශනය සහ ලක්ෂණ කිරීම. Biochem Biophys Res Comm. 1990; 173: 578 - 584. [PubMed]
5. කේන් එස්බී, නෙගස් එස්එස්, මෙලෝ එන්කේ, පටෙල් එස්, බ්‍රිස්ටෝ එල්, කුලගොව්ස්කි ජේ, වැලෝන් ඩී, සයාර්ඩි ඒ, බොරෙලි ඊ. කොකේන් ස්වයං පරිපාලනයේ ඩොපමයින් ඩීඑක්ස්එන්එම්එක්ස් වැනි ප්‍රතිග්‍රාහකවල කාර්යභාරය: ඩීඑක්ස්එන්එම්එක්ස් ප්‍රතිග්‍රාහක විකෘති මීයන් සහ නව ඩීඑක්ස්එන්එම්එක්ස් ප්‍රතිග්‍රාහක විරුද්ධවාදීන්. ජේ නියුරෝසි. 2; 2: 2 - 2002. [PubMed]
6. කේයින් එස්බී, තොම්සන් එම්, ගේබ්‍රියෙල් කේඅයි, බර්කොවිට්ස් ජේඑස්, ගෝල්ඩ් එල්එච්, කූබ් ජීඑෆ්, ටොනෙගාවා එස්, ෂැං ජේ, ෂු එම්. ඩොපමයින් ඩීඑක්ස්එන්එම්එක්ස් ප්‍රතිග්‍රාහක පිළිමළුන් පිටුදැකීමේ මීයන් තුළ කොකේන් ස්වයං පරිපාලනය නොමැති වීම. ජේ නියුරෝසි. 1; 2007: 27 - 13140. [PMC නිදහස් ලිපිය] [PubMed]
7. කාලේ ටීඑල්, ​​ඔනිෂි වයිඑන්, ඔනිෂි වයිඑච්, අලිබායි අයිඑන්, විල්කින්සන් එම්බී, කුමාර් ඒ, නෙස්ලර් ඊජේ. FosB අස්ථායීකරනය සඳහා ප්‍රෝටිසෝම් මත යැපෙන සහ රඳා පවතින යාන්ත්‍රණ: FosB degron වසම් හඳුනා ගැනීම සහ ඩෙල්ටා ෆොස්බී ස්ථායිතාව සඳහා ඇඟවුම්. යුරේ ජේ නියුරෝසි. 2007; 25: 3009 - 3019. [PubMed]
8. චෙන් ජේ, කෙල්ස් එම්බී, සෙන්ග් ජී, සකායි එන්, ස්ටෙෆන් සී, ෂොකට් පීඊ, පිකියෝටෝ එම්ආර්, ඩුමන් ආර්එස්, නෙස්ලර් ඊජේ. මොළයේ ප්‍රේරණය කළ හැකි, ඉලක්කගත ජාන ප්‍රකාශනයක් සහිත පාරම්පරික සතුන්. මෝල් ෆාමකොල්. 1998; 54: 495 - 503. [PubMed]
9. ක්‍රිස්ටොෆෙල් ඩීජේ, ගෝල්ඩන් එස්ඒ, ඩුමිට්‍රියු ඩී, රොබිසන් ඒජේ, ජැන්සන් ඩබ්ලිව්ජී, අහ්න් එච්එෆ්, ක්‍රිෂ්ණන් වී, රීස් සීඑම්, හැන් එම්එච්, ඒබල්ස් ජේඑල්, අයිෂ් ඒජේ, ඩීට්ස් ඩීඑම්, ෆර්ගියුසන් ඩී, නෙව් ආර්එල්, ග්‍රීන්ගාඩ් පී, කිම් වයි, මොරිසන් ජේඑච් , රුසෝ එස්.ජේ. IkappaB kinase විසින් සමාජ පරාජයන් ආතතියෙන් පෙලෙන උපාගම සහ චර්යාත්මක ප්ලාස්ටික් බව නියාමනය කරයි. ජේ නියුරෝසි. 2011; 31: 314 - 321. [PMC නිදහස් ලිපිය] [PubMed]
10. කොල්බ්රාන් ආර්.ජේ. බාසල් ඔටෝෆොස්ෆරයිලේෂන් මගින් Ca2 + / කැල්මොඩුලින් මත යැපෙන ප්‍රෝටීන් කයිනාස් II අක්‍රිය කිරීම. ජේ බයෝල් කෙම්. 1993; 268: 7163 - 7170. [PubMed]
11. කොල්බ්රාන් ආර්.ජේ. ප්‍රෝටීන් පොස්පේටේස් සහ කැල්සියම් / කැල්මොඩුලින් මත යැපෙන ප්‍රෝටීන් කයිනාස් II මත යැපෙන උපාගමික ප්ලාස්ටික් බව. ජේ නියුරෝසි. 2004; 24: 8404 - 8409. [PubMed]
12. කොල්බ්‍රන් ආර්.ජේ, බ්‍රවුන් ඒ.එම්. කැල්සියම් / කැල්මොඩුලින් මත යැපෙන ප්‍රෝටීන් කයිනාස් II සහ උපාගමික ප්ලාස්ටික් බව. කර්ර් ඔපින් නියුරෝබියෝල්. 2004; 14: 318 - 327. [PubMed]
13. කොල්බි සීආර්, විස්ලර් කේ, ස්ටෙෆන් සී, නෙස්ලර් ඊජේ, සෙල්ෆ් ඩීඩබ්ලිව්. ඩෙල්ටා ෆොස්බී හි ස්ට්‍රයිටල් සෛල වර්ගයට විශේෂිත වූ අධික ලෙස පීඩනය යෙදීම කොකේන් සඳහා දිරිගැන්වීම වැඩි කරයි. ජේ නියුරෝසි. 2003; 23: 2488 - 2493. [PubMed]
14. කොවිංටන් එච්ඊ, එක්ස්එන්එම්එක්ස්ඩ්, මේස් අයි, ලා ප්ලාන්ට් කියුසී, වියාලෝ වීඑෆ්, ඔනිෂි වයිඑන්, බර්ටන් ඕ, ෆාස් ඩීඑම්, රෙන්ටාල් ඩබ්ලිව්, රෂ් ඒජේ, එක්ස්එන්එම්එක්එක්ස්, වු ඊවයි, ගොස් එස්, ක්‍රිෂ්ණන් වී, රුසෝ එස් ජේ, ටම්මින්ගා සී, හග්ගාර්ටි එස් ජේ ඊ.ජේ. හිස්ටෝන් ඩීසැටිලේස් නිෂේධක වල විෂ නාශක ක්‍රියා. ජේ නියුරෝසි. 3; 3: 2009 - 29. [PMC නිදහස් ලිපිය] [PubMed]
15. ඩවලෝස් ඒ, ප්‍රනාන්දු-හර්නාන්ඩෝ සී, සෝවා ජී, ඩෙරක්ෂන් බී, ලින් එම්අයි, ලී ජේවයි, ෂාඕ එච්, ලූඕ ආර්, කොලන්ජෙලෝ සී, සේසා ඩබ්ලිව්සී. කැෙවොලින්-එක්ස්එන්එම්එක්ස්-නියාමනය කරන ලද ප්‍රෝටීන වල ප්‍රමාණාත්මක ප්‍රෝටීන විද්‍යාව: පොලිමරේස් අයි හා ට්‍රාන්ස්ක්‍රිප්ට් මුදා හැරීමේ සාධකය / කැවින්-එක්ස්එන්එම්එක්ස් එන්ඩොතලියම් සෛල වල ලක්ෂණ. මෝල් සෛල ප්‍රෝටොමික්ස්. 1; 1: 2010 - 9. [PMC නිදහස් ලිපිය] [PubMed]
16. ඩුමයිස් ඒ, ලෙසේජ් ඒඩී, ඇල්ඩා එම්, රූලියෝ ජී, ඩුමොන්ට් එම්, චව්කි එන්, රෝයි එම්, මෑන් ජේජේ, බෙන්කෙල්ෆැට් සී, ටුරෙක්කි ජී. ප්‍රධාන මානසික අවපීඩනයෙන් සියදිවි නසා ගැනීම සඳහා අවදානම් සාධක: ආවේගශීලී හා ආක්‍රමණශීලී හැසිරීම් පිළිබඳ සිද්ධි පාලන අධ්‍යයනයක් මිනිසුන්. ඇම් ජේ මනෝ චිකිත්සාව. 2005; 162: 2116 - 2124. [PubMed]
17. ග ru ටර් බීඒ, රොබිසන් ඒජේ, නෙව් ආර්එල්, නෙස්ලර් ඊජේ, මාලෙන්කා ආර්සී. Os ෆොස්බී න්යෂ්ටික සමුච්චය සෘජු හා වක්‍ර මාර්ග ක්‍රියාකාරිත්වය වෙනස් කරයි. Proc Natl Acad Sci USA. 2013 මුද්‍රණ යන්ත්‍රයේ. [PMC නිදහස් ලිපිය] [PubMed]
18. හැල්ට් ඒආර්, ඩලපියාසා ආර්එෆ්, ෂෝ වයි, ස්ටේන් අයිඑස්, ක්වාන් එච්, ජුන්ටි එස්, වොජ්සික් එස්, බ්‍රෝස් එන්, සිල්වා ඒජේ, හෙල් ජේ. මතක ශක්තිය ශක්තිමත් කිරීමේදී CaMKII GluN2B සමඟ බැඳීම ඉතා වැදගත් වේ. EMBO J. 2012; 31: 1203 - 1216. [PMC නිදහස් ලිපිය] [PubMed]
19. හිරෝයි එන්, බ්‍රවුන් ජේආර්, හේයිල් සීඑන්, යේ එච්, ග්‍රීන්බර්ග් එම්ඊ, නෙස්ලර් ඊ.ජේ. FosB විකෘති මීයන්: ෆොස් ආශ්‍රිත ප්‍රෝටීන වල නිදන්ගත කොකේන් ප්‍රේරණය නැතිවීම සහ කොකේන්හි මනෝමානෝටරයට ඉහළ සංවේදීතාවයක් සහ ප්‍රතිලාභදායක ප්‍රති .ල. Proc Natl Acad Sci US A. 1997; 94: 10397-10402. [PMC නිදහස් ලිපිය] [PubMed]
20. ඉටෝ ආර්, රොබින්ස් ටීඩබ්ලිව්, එවරිට් බීජේ. න්යෂ්ටිය මගින් කොකේන් සෙවීමේ හැසිරීම මත ආන්තර පාලනය සහ හරය සහ කවචය. Nat Neurosci. 2004; 7: 389 - 397. [PubMed]
21. ජොරිසන් HJ, උලරි පී.ජී., හෙන්රි එල්, ගර්නේනි එස්, නෙස්ලේලර් ඊ.ජේ, රුඩෙන්කෝ ජී ඩීරරිකරණය සහ ඩී.එෆ්.සී.-බන්ධන සාධක ඩෙටුලෆොස්බැ. ජෛව රසායනය. 2007; 46: 8360-8372. [PubMed]
22. ජෝර්ඩේන් පී, ෆුකුනාගා කේ, මුලර් ඩී. කැල්සියම් / කැල්මොඩුලින් මත යැපෙන ප්‍රෝටීන් කයිනාස් II ක්‍රියාකාරකම් මත රඳා පවතින ෆිලෝපෝඩියා වර්ධනයට සහ කොඳු ඇට පෙළ සෑදීමට දායක වේ. ජේ නියුරෝසි. 2003; 23: 10645 - 10649. [PubMed]
23. කෙල්ස් එම්බී, චෙන් ජේ, කාලෙල්සන් ඩබ්ලිව්ඒ, ජේ. ආර්., විස්ලර් කේ, ගිල්ඩන් එල්, බෙක්මන් ඒඑම්, ස්ටෙෆන් සී, ෂැං වයි ජේ, මාරෝටි එල්, සෙල්ෆ් ඩීඩබ්ලිව්, ටකාච් ටී, බරනාස්කාස් ජී, සර්මියර් ඩීජේ, නෙව් ආර්එල්, ඩුමන් ආර්එස්, පික්චියෝ එම්ආර්, නෙස්ලර් ඊ.ජේ. මොළයේ ඇති ඩෙල්ටා ෆොස්බී නම් පිටපත් කිරීමේ සාධකය ප්‍රකාශ කිරීම කොකේන් වලට සංවේදීතාව පාලනය කරයි. සොබාදහම. 1999; 401: 272 - 276. [PubMed]
24. ක්ලග් ජේආර්, මාතූර් බීඑන්, කාෂ් ටීඑල්, ​​වැන්ග් එච්ඩී, මැතිව්ස් ආර්ටී, රොබිසන් ඒජේ, ඇන්ඩර්සන් එම්ඊ, ඩියුච් ඒවයි, ලුවින්ජර් ඩීඑම්, කොල්බ්‍රන් ආර්ජේ, වින්ඩර් ඩීජී. ඩෝසල් ස්ට්‍රයිටල් මධ්යන්ය ස්පයිනි නියුරෝන වල CaMKII හි ජානමය නිෂේධනය ක්රියාකාරී උද්දීපනය වන උපාගම අඩු කරන අතර සහජ උද්දීපනය වැඩි කරයි. PLoS One. 2012; 7: e45323. [PMC නිදහස් ලිපිය] [PubMed]
25. නැක්ස්ටෙඩ් එල්ඒ, මවුසාවි කේ, ලලුමියර් ආර්, ෂ්වේන්ඩ් එම්, ක්ලග්මන් එම්, කාලිවාස් පීඩබ්ලිව්. කොකේන් ස්වයං පරිපාලනයෙන් පසු වඳවී යාමේ පුහුණුව කොකේන් සෙවීම වැළැක්වීම සඳහා ග්ලූටමැටර්ජික් ප්ලාස්ටික් බව ඇති කරයි. ජේ නියුරෝසි. 2010; 30: 7984 - 7992. [PMC නිදහස් ලිපිය] [PubMed]
26. කුරිච් එස්, තෝමස් එම්. සමාන නියුරෝන, ප්‍රතිවිරුද්ධ අනුවර්තනයන්: මනෝ-උත්තේජක අත්දැකීම්, සමුච්චිත හරය හා ෂෙල් එකෙහි වෙඩි තැබීමේ ගුණාංග වෙනස් ලෙස වෙනස් කරයි. ජේ නියුරෝසි. 2009; 29: 12275 - 12283. [PMC නිදහස් ලිපිය] [PubMed]
27. කුරිච් එස්, ක්ලග් ජේආර්, මේෆර්ඩ් එම්, තෝමස් එම්. AMPAR-Striatal alphaCaMKII හි ස්වාධීන බලපෑම කොකේන් විපාකය සංවේදී කිරීම ප්‍රවර්ධනය කරයි. ජේ නියුරෝසි. 2012; 32: 6578 - 6586. [PMC නිදහස් ලිපිය] [PubMed]
28. ලා ප්ලාන්ට් කියු, චක්‍රවර්ති එස්, වියාලූ වී, මුකර්ජි එස්, කූ ජේඩබ්ලිව්, කලහාස්ති ජී, බ්‍රැඩ්බරි කේආර්, ටේලර් එස්වී, මේස් අයි, කුමාර් ඒ, ග්‍රැහැම් ඒ, බර්න්බෝම් එස්ජී, ක්‍රිෂ්ණන් වී, ට ru ං එච්ටී, නෙව් ආර්එල්, නෙස්ලර් ඊජේ, රුසෝ එස් ජේ . ඩිම්බකෝෂ හෝමෝනයක න්‍යෂ්ටික සාධකය kappaB හි කාර්යභාරය ගැහැණු මීයන් තුළ ආතතිය අධි සංවේදීතාව. Biol මනෝ චිකිත්සාව. 2009; 65: 874 - 880. [PMC නිදහස් ලිපිය] [PubMed]
29. ලී කේ.ඩබ්ලිව්, කිම් වයි, කිම් ඒඑම්, හෙල්මින් කේ, නයිරන් ඒසී, ග්‍රීන්ගාර්ඩ් පී. කොකේන් විසින් ප්‍රේරණය කරන ලද ඩෙන්ඩ්‍රිටික් කොඳු ඇට පෙළ D1 සහ D2 ඩොපමයින් ප්‍රතිග්‍රාහක අඩංගු න්‍යෂ්ටික සමුච්චයේ මධ්‍ය ස්පයිනි නියුරෝන අඩංගු වේ. Proc Natl Acad Sci US A. 2006; 103: 3399 - 3404. [PMC නිදහස් ලිපිය] [PubMed]
30. ලිස්මන් ජේ, ෂුල්මන් එච්, ක්ලයින් එච්. CaMKII හි අණුක පදනම උපාගමික හා චර්යාත්මක මතකයේ ක්‍රියා කරයි. Nat Rev Neurosci. 2002; 3: 175 - 190. [PubMed]
31. ලොබෝ එම්කේ, කොවිංටන් එච්ඊ, එක්ස්එන්එම්එක්ස්, චෞද්රි ඩී, ෆ්‍රීඩ්මන් ඒකේ, සන් එච්, ඩමෙස්-වර්නෝ ඩී, ඩීට්ස් ඩීඑම්, සමන් එස්, කූ ජේඩබ්ලිව්, කෙනඩි පීජේ, මවුසන් ඊ, මොග්‍රි එම්, නෙව් ආර්එල්, ඩීසෙරොත් කේ, හැන් එම්එච්, නෙස්ලර් ඊ.ජේ. සෛල වර්ගයට විශේෂිත වූ බීඩීඑන්එෆ් සං sign ා අහිමි වීම කොකේන් විපාකයේ දෘෂ්ටි ජනක පාලනය අනුකරණය කරයි. විද්යාව. 3; 2010: 330 - 385. [PMC නිදහස් ලිපිය] [PubMed]
32. ලෝවෙත් ජේඒ, බේකර් එල්කේ, ගුප්තා ටී, ගිලරි ඒඑම්, වීසිනා පී. න්‍යෂ්ටිය ඇකියුම්බන්ස් කවචයේ CaMKII නිෂේධනය කිරීම සංවේදී මීයන් තුළ වැඩි දියුණු කරන ලද ඇම්ෆෙටමින් ප්‍රමාණය අඩු කරයි. නියුරෝසි ලෙට්. 2008; 444: 157 - 160. [PMC නිදහස් ලිපිය] [PubMed]
33. ලෝවෙත් ජේඒ, සිංගර් බීඑෆ්, බේකර් එල්කේ, විල්කේ ජී, ඉනාමයින් එච්, බුබුලා එන්, ඇලෙක්සැන්ඩර් ජේකේ, කාලෙල්සන් ඩබ්ලිව්ඒ, ජේ. ආර්., නෙව් ආර්එල්, වීසිනා පී. න්යෂ්ටියේ ඇම්බම්බන්ස් ෂෙල් හි ඇල්ෆා-කැක්ස්නූම්ස් + / කැල්මොඩුලින් මත යැපෙන ප්‍රෝටීන් කයිනාස් II හි අස්ථිර අධික ලෙස පීඩනය යෙදීම. ඇම්ෆෙටමින් වලට ප්‍රතිචාර දැක්වීම චර්යාත්මක කරයි. ජේ නියුරෝසි. 2; 2010: 30 - 939. [PMC නිදහස් ලිපිය] [PubMed]
34. මැලිනෝව් ආර්, මැලෙන්කා ආර්.සී. AMPA ප්‍රතිග්‍රාහක ජාවාරම සහ උපාගමික ප්ලාස්ටික් බව. Annu Rev Neurosci. 2002; 25: 103 - 126. [PubMed]
35. මැට්සුසාකි එම්, හොන්කුරා එන්, එලිස්-ඩේවිස් ජීසී, කසායි එච්. තනි ඩෙන්ඩ්‍රිටික් කොඳු ඇට පෙළේ දිගුකාලීන විභවතාවයේ ව්‍යුහාත්මක පදනම. සොබාදහම. 2004; 429: 761 - 766. [PubMed]
36. මේෆර්ඩ් එම්, බැච් එම්ඊ, හුවාං වයි, වැන්ග් එල්, හෝකින්ස් ආර්ඩී, කන්ඩෙල් ඊආර්. CaMKII සංක්‍රාන්තියක නියාමනය කළ ප්‍රකාශනය හරහා මතක ගොඩනැගීම පාලනය කිරීම. විද්යාව. 1996; 274: 1678 - 1683. [PubMed]
37. Maze I, Covington HE, 3rd, Dietz DM, LaPlant Q, Renthal W, Russo SJ, Mechanic M, Mouzon E, Neve RL, Haggarty SJ, Ren Y, Sampath SC, Hurd YL, Greengard P, Tarakhovsky A, Schaefer A, නෙස්ලර් ඊ.ජේ. කොකේන් ප්‍රේරිත ප්ලාස්ටික් වල හිස්ටෝන් මෙතිල්ට්‍රාන්ස්ෆරස් G9a හි අත්‍යවශ්‍ය භූමිකාව. විද්යාව. 2010; 327: 213 - 216. [PMC නිදහස් ලිපිය] [PubMed]
38. මැක්ලන්ග් සීඒ, නෙස්ලර් ඊ.ජේ. CREB සහ DeltaFosB විසින් ජාන ප්‍රකාශනය සහ කොකේන් විපාකය නියාමනය කිරීම. Nat Neurosci. 2003; 6: 1208 - 1215. [PubMed]
39. නෙස්ලර් ඊ.ජේ. සමාලෝචනය. ඇබ්බැහි වීමේ පිටපත් කිරීමේ යාන්ත්‍රණ: ඩෙල්ටා ෆොස්බී හි භූමිකාව. ෆිලෝස් ට්‍රාන්ස් ආර් සොක් ලොන්ඩ් බී බයෝල් ස්කී. 2008; 363: 3245 - 3255. [PMC නිදහස් ලිපිය] [PubMed]
40. නයි එච්, හෝප් බීටී, කෙල්ස් එම්, ඉඩාලිලා එම්, නෙස්ලේ ඊ. ස්ට්රෝමැටම් සහ න්යෂ්ටියේ ඇකුම්බන් වල කොකේන් විසින් නිදන්ගත FOS-ආශ්රිත ප්රතිදේහ ක්රියාකාරීත්වය නියාමනය කිරීමේ ඖෂධීය අධ්යයනය. පී. 1995; 275: 1671-1680. [PubMed]
41. ඔකමොටෝ කේ, බොෂ් ​​එම්, හයාෂි වයි. ඩෙන්ඩ්‍රිටික් කොඳු ඇට පෙළේ ව්‍යුහාත්මක ප්ලාස්ටික් බවෙහි කේඑම්කේඅයි සහ එෆ්-ඇක්ටින්ගේ භූමිකාවන්: උපාගමික ටැගයක විභව අණුක අනන්‍යතාවය? කායික විද්‍යාව (බෙතෙස්ඩා) 2009; 24: 357 - 366. [PubMed]
42. ඕලූසන් පී, ජෙන්ට්ස් ජේ ඩී, ට්රොන්සන් එන්, නොව් රී, නෙස්ලේලර් ඊ.ජේ, ටේලර් ජේ. න්යෂ්ටික ඇබම්බන්ස්වල ඩෙල්ටා ෆොස්බෙට් ආහාරවල සවිමත් ආයතනික හැසිරීම් සහ අභිප්රේරණය පාලනය කරයි. ජේ නුරෝෂි. 2006; 26: 9196-9204. [PubMed]
43. පැක්සිනෝස් ජී, වොට්සන් සී. ඒකාකෘති ඛණ්ඩාංකවල මීයන්ගේ මොළය. 6th සංස්කරණය. ඇම්ස්ටර්ඩෑම්; බොස්ටන්: ඇකඩමික් ප්‍රෙස් / එල්සිවියර්; 2007.
44. පීක්මන් එම්.සී., කොල්බි සී, පෙරෝටි එල් අයි, ටකුමල්ලා පී, කාලේ ටී, උලරි පී, චාවෝ ජේ, ඩුමන් සී, ස්ටෙෆන් සී, මොන්ටෙගියා එල්, ඇලන් එම්ආර්, ස්ටොක් ජේඑල්, ඩුමන් ආර්එස්, මැක්නීෂ් ජේඩී, බැරට් එම්, සෙල්ෆ් ඩීඩබ්ලිව්, නෙස්ලර් ඊජේ , ෂේෆර් ඊ. පාරදෘශ්‍ය මීයන් තුළ සී-ජුන් හි ප්‍රබල negative ණාත්මක විකෘතියක මොළයේ කලාපයට විශේෂිත වූ ප්‍රකාශනය කොකේන් වලට සංවේදීතාව අඩු කරයි. මොළයේ රෙස්. 2003; 970: 73 - 86. [PubMed]
45. පෙන්ස් පී, කාහිල් එම්ඊ, ජෝන්ස් කේඒ, ශ්‍රීවස්තවා ඩීපී. අභිසාරී CaMK සහ RacGEF සං als ා මඟින් ඩෙන්ඩ්‍රිටික් ව්‍යුහය සහ ක්‍රියාකාරිත්වය පාලනය කරයි. ප්‍රවණතා සෛල බයෝල්. 2008; 18: 405 - 413. [PubMed]
46. පෙරෝටි එල් අයි, හදීෂි වයි, උලරි පීජී, බැරට් එම්, මොන්ටෙගියා එල්, ඩුමන් ආර්එස්, නෙස්ලර් ඊජේ. නිදන්ගත ආතතියෙන් පසු විපාක ආශ්‍රිත මොළයේ ව්‍යුහයන් සඳහා ඩෙල්ටා ෆොස්බී ප්‍රේරණය කිරීම. ජේ නියුරෝසි. 2004; 24: 10594 - 10602. [PubMed]
47. පෙරෝටි එල් අයි, වීවර් ආර් ආර්, රොබිසන් බී, රෙන්ටාල් ඩබ්ලිව්, මේස් අයි, යස්දානි එස්, එල්මෝර් ආර්ජී, නැප් ඩීජේ, සෙලී ඩී, මාටින් බීආර්, සිම්-සෙලි එල්, බැච්ටෙල් ආර්කේ, සෙල්ෆ් ඩීඩබ්ලිව්, නෙස්ලර් ඊජේ. අපයෝජන drugs ෂධ මගින් මොළයේ ඩෙල්ටා ෆොස්බී ප්‍රේරණයේ වෙනස් රටාවන්. උපාගම. 2008; 62: 358 - 369. [PMC නිදහස් ලිපිය] [PubMed]
48. පිකන්ස් සීඑල්, ​​අයිරවරා එම්, තීබර්ජ් එෆ්, ෆැනස් එස්, හෝප් බීටී, ෂහාම් වයි. Drug ෂධ තෘෂ්ණාව පුර්ව ලියාපදිංචි කිරීමේ ස්නායු ජීව විද්‍යාව. ප්‍රවණතා නියුරෝසි. 2011; 34: 411 - 420. [PMC නිදහස් ලිපිය] [PubMed]
49. පියර්ස් ආර්සී, ක්වික් ඊඒ, රීඩර් ඩීසී, මෝගන් ඉසෙඩ්ආර්, කාලිවාස් පීඩබ්ලිව්. කැල්සියම්-මැදිහත් වූ දෙවන පණිවිඩකරුවන් කොකේන් වෙත චර්යාත්මක සංවේදීතාවයේ ප්‍රකාශනය වෙනස් කරයි. ජේ ෆාමකොල් එක්ස්පර්. 1998; 286: 1171 - 1176. [PubMed]
50. Quirion R, Robitaille Y, Martial J, Chabot JG, Lemoine P, Pilapil C, Dalpe M. මුළු අර්ධගෝල කොටස් භාවිතා කරමින් මානව මොළයේ ප්‍රතිග්‍රාහක ස්වයංක්‍රීය රූප සටහන: පටක කෞතුක වස්තු අවම කරන පොදු ක්‍රමයක්. උපාගම. 1987; 1: 446 - 454. [PubMed]
51. රොබින්සන් ටී, කොල්බ් බී. මත්ද්රව්යවලට නිරාවරණය වීම සම්බන්ධව ව්යුහාත්මක ප්ලාස්ටික් බව. ස්නායු ආබාධ 2004; 47 (Suppl 1): 33-46. [PubMed]
52. රොබිසන් ඒ.ජේ, නෙස්ලර් ඊ.ජේ. ඇබ්බැහි වීමේ පිටපත් හා එපිටජන්ටික් යාන්ත්‍රණ. Nat Rev Neurosci. 2011; 12: 623 - 637. [PMC නිදහස් ලිපිය] [PubMed]
53. රොබිසන් ඒ.ජේ, බාස් එම්.ඒ., ජියාඕ වයි, මැක්මිලන් එල්.බී., කාර්මෝඩි එල්.සී., බාට්ලට් ආර්.කේ., කොල්බ්‍රන් ආර්.ජේ. පෝස්ට්නැප්ටික් dens නත්ව ප්‍රෝටීන NR2B, ඩෙන්සින්-එක්ස්එන්එම්එක්ස් සහ ඇල්ෆා-ඇක්ටිනින්-එක්ස්එන්එම්එක්ස් සමඟ කැල්සියම් / කැල්මොඩුලින් මත යැපෙන ප්‍රෝටීන් කයිනාස් II හි බහුකාර්ය අන්තර්ක්‍රියා. ජේ බයෝල් කෙම්. 180; 2: 2005 - 280. [PubMed]
54. රොස් පීඑල්, ​​හුවාං වයිඑන්, මාර්චීස් ජේඑන්, විලියම්සන් බී, පාකර් කේ, හැටන් එස්, කයිනොව්ස්කි එන්, පිල්ලෙයි එස්, ඩේ එස්, ඩැනියෙල්ස් එස්, පුර්කයාස්තා එස්, ජුහාස් පී, මාටින් එස්, බාර්ට්ලට්-ජෝන්ස් එම්, හේ එෆ්, ජේකොබ්සන් ඒ, පැපින් ඩී.ජේ. ඇමයින-ප්‍රතික්‍රියාශීලී සමස්ථානික ටැගින් කිරීමේ ප්‍රතික්‍රියාකාරක භාවිතා කරමින් සැචරෝමයිසස් සෙර්විසියා හි බහුකාර්ය ප්‍රෝටීන් ප්‍රමාණය. මෝල් සෛල ප්‍රෝටොමික්ස්. 2004; 3: 1154 - 1169. [PubMed]
55. රුසෝ එස්.ජේ., ඩීට්ස් ඩීඑම්, ඩුමිත්රිවි ඩී, මොරිසන් ජේ. එච්., මැලිකා ආර්., නෙස්ලේ ඊ. ඇබ්බැහි වූ උපායන්: න්යෂ්ටිය නිරුපද්රතාවයේ sinaptic හා ව්යුහාත්මක ප්ලාස්ටික් යාන්ත්රණ යාන්ත්රණයන්. නුවර්ස්කි නැඹුරු. 2010; 33: 267-276. [PMC නිදහස් ලිපිය] [PubMed]
56. ස්වයං ඩී.ඩබ්ලිව්. තුළ: ඩොපමයින් ප්‍රතිග්‍රාහක. නෙව් කේඒ, කර්තෘ. නිව් යෝර්ක්: හියුමනා ප්‍රෙස්; 2010. පි. 479 - 524.
57. සිංගර් බීඑෆ්, ලෝවේත් ජේඒ, නෙව් ආර්එල්, වීසිනා පී. න්‍යෂ්ටිය ඇකියුම්බන්ස් කවචයේ ඇල්ෆා-කැල්සියම් / කැල්මොඩුලින් මත යැපෙන ප්‍රෝටීන් කයිනාස් II හි තාවකාලික වෛරස්-මධ්‍යගත අධික ලෙස පීඩනය යෙදීම ඇල්ෆා-ඇමයිනෝ-එක්ස්එන්එම්එක්ස්-හයිඩ්‍රොක්සයිල්-එක්ස්එන්එම්එම්එක්ස් හි දිගුකාලීන ක්‍රියාකාරී නියාමනයකට මග පාදයි. -methyl-3-isoxazole-propionate receptor: ඩොපමයින් වර්ගය-5 ප්‍රතිග්‍රාහකය සහ ප්‍රෝටීන් කයිනාස් යැපීම. යුරේ ජේ නියුරෝසි. 4; 1: 2010 - 31. [PMC නිදහස් ලිපිය] [PubMed]
58. ස්ට්‍රැක් එස්, මැක්නෙල් ආර්බී, කොල්බ්‍රන් ආර්.ජේ. එන්-මෙතිල්-ඩී-ඇස්පාර්ටේට් ප්‍රතිග්‍රාහකයේ NR2B අනු ඒකකයට ඉලක්ක කර ගනිමින් කැල්සියම් / කැල්මොඩුලින් මත යැපෙන ප්‍රෝටීන් කයිනාස් II යාන්ත්‍රණය සහ නියාමනය. ජේ බයෝල් කෙම්. 2000; 275: 23798 - 23806. [PubMed]
59. උලරි-රෙනෝල්ඩ්ස් පී.ජී., කැස්ටිලෝ එම්.ඒ., වියාලූ වී, රුසෝ එස්.ජේ, නෙස්ලර් ඊ.ජේ. ඩෙල්ටා ෆොස්බී හි පොස්පරීකරණය මගින් වීවෝ හි ස්ථායිතාව සමථයකට පත් කරයි. ස්නායු විද්යාව. 2009; 158: 369 - 372. [PMC නිදහස් ලිපිය] [PubMed]
60. උලරි පී.ජී., නෙස්ලර් ඊ.ජේ. Ser27 පොස්පරීකරණය මගින් ඩෙල්ටා ෆොස්බී පිටපත් කිරීමේ ක්‍රියාකාරකම් නියාමනය කිරීම. යුරේ ජේ නියුරෝසි. 2007; 25: 224 - 230. [PubMed]
61. උලරි පී.ජී., රුඩෙන්කෝ ජී, නෙස්ලර් ඊ.ජේ. පොස්පරීකරණය මගින් ඩෙල්ටා ෆොස්බී ස්ථායිතාව නියාමනය කිරීම. ජේ නියුරෝසි. 2006; 26: 5131 - 5142. [PubMed]
62. Vialou V, et al. මොළයේ විපාක පරිපථවල ඇති ඩෙල්ටා ෆොස්බී ආතතියට ඔරොත්තු දීමේ හැකියාව සහ විෂාදනාශක ප්‍රතිචාර දක්වයි. Nat Neurosci. 2010; 13: 745 - 752. [PMC නිදහස් ලිපිය] [PubMed]
63. වැන්ග් එල්, එල්වී ඉසෙඩ්, හූ ඉසෙඩ්, ෂෙන්ග් ජේ, හුයි බී, සන් ජේ, මා එල්. නිදන්ගත කොකේන් මගින් ඇති කරන ලද එච්එක්ස්එන්එම්එක්ස් ඇසිටිලේෂණය සහ න්‍යෂ්ටික සමුච්චය තුළ CaMKIIalpha සක්‍රීය කිරීම සක්‍රීය කිරීම drug ෂධ ශක්තිමත් කිරීම සඳහා පෙළඹවීම සඳහා ඉතා වැදගත් වේ. ස්නායු මනෝචිකිත්සක විද්‍යාව. 3; 2010: 35 - 913. [PMC නිදහස් ලිපිය] [PubMed]
64. වර්ම් එම්, මෙසර් සී, ඕල්සන් එල්, ගිල්ඩන් එල්, තෝරන් පී, නෙස්ලර් ඊජේ, බ්‍රීන් එස්. ඩෙල්ටා ෆොස්බී රෝද ධාවනය නියාමනය කරයි. ජේ නියුරෝසි. 2002; 22: 8133 - 8138. [PubMed]
65. වින්ස්ටැන්ලි සීඒ, ලා ප්ලාන්ට් කියු, තියෝබෝල්ඩ් ඩීඊ, ග්‍රීන් ටීඒ, බැච්ටෙල් ආර්කේ, පෙරෝටි එල් අයි, ඩිලෝන් ආර්ජේ, රුසෝ එස් ජේ, ගාර්ත් ඩබ්ලිව් ජේ, සෙල්ෆ් ඩීඩබ්ලිව්, නෙස්ලර් ඊජේ. කක්ෂීය පෙරමුනු බාහිකයේ ඩෙල්ටා ෆොස්බී ප්‍රේරණය කොකේන් ප්‍රේරිත සංජානන දුර්වලතාවයට ඉවසීම මැදිහත් කරයි. ජේ නියුරෝසි. 2007; 27: 10497 - 10507. [PubMed]
66. සැකරියෝ වී, බොලනෝස් සීඒ, සෙලී ඩී, තියෝබෝල්ඩ් ඩී, කැසිඩි එම්පී, කෙල්ස් එම්බී, ෂෝ-ලච්මන් ටී, බර්ටන් ඕ, සිම්-සෙලි එල්ජේ, ඩිලියොන් ආර්ජේ, කුමාර් ඒ, නෙස්ලර් ඊජේ. න්‍යෂ්ටිය තුළ ඩෙල්ටා ෆොස්බී සඳහා අත්‍යවශ්‍ය කාර්යභාරයක් මෝෆීන් ක්‍රියාකාරිත්වයේ සමුච්චය වේ. Nat Neurosci. 2006; 9: 205 - 211. [PubMed]
67. ෂැං ආර්, කූ එම්එස්, වු වයි, යැං වයි, ග ru ටර් සීඊ, නි ජී, ප්‍රයිස් ඊඊ, ජේ. ආර්. ලෙඩරර් ඩබ්ලිව්.ජේ, කොල්බ්‍රන් ආර්.ජේ, ඇන්ඩර්සන් එම්.ඊ. කැල්මොඩුලින් කයිනාස් II නිෂේධනය ව්‍යුහාත්මක හෘද රෝග වලින් ආරක්ෂා කරයි. Nat Med. 2005; 11: 409 - 417. [PubMed]