Bidh a 'chuibhreann shùbhrosach a' toirt a-steach malairt ghearain luchd-fàilteachaidh AMPA (2013)

J Neurosci. Làmh-sgrìobhainn ùghdar; ri fhaighinn ann am PMC Oct 3, 2013.
Air fhoillseachadh ann an cruth deasaichte deasaichte mar:
Gheibhear an dreach deasaichte deireannach den fhoillsichear den artaigil seo an-asgaidh aig J Neurosci
Faic artaigilean eile ann am PMC Dh'ainmich an artaigil foillsichte.

Abstract

Tha na dòighean anns am bi duaisean nàdurrach mar siùcar a ’toirt buaidh air sgaoileadh agus giùlan synaptic gu ìre mhòr gun sgrùdadh. An seo, bidh sinn a ’sgrùdadh riaghladh niuclas accumbens synapses le toirt a-steach sucrose. Tha sgrùdaidhean roimhe air sealltainn gu bheil malairt gabhadan AMPA na phrìomh inneal airson neart synaptic a riaghladh, agus sin ann vitro, bidh malairt gabhadairean AMPA anns a bheil an subunit GluA1 a ’tachairt le inneal dà-cheumach a’ toirt a-steach còmhdhail gabhadain extrasynaptic agus an uairsin synaptic. Tha sinn ag aithris, ann an radan, a bhith a ’toirt a-steach fuasgladh làitheil de fhuasgladh sucrose 25% gach latha le gluasad spontaneous àrdaichte agus synapses bunaiteach accumbens potent tro bhith a’ toirt a-steach Ca2+-permeable gabhadairean AMPA (CPARs), anns a bheil GluA1, gabhadairean AMPA le dìth GluA2. Sheall sgrùdaidhean microscopaidh dealan electrophysiologic, biochemical agus cainneachdail gun do bhrosnaich trèanadh sucrose (7 latha) sluagh GluA24 intraspinous seasmhach (> 1 hr), agus anns na radain sin chaidh aon bhrosnachadh sucrose gu luath (5 min) ach thar-ghluasadach (<24 hr) àrdachadh GluA1 aig làraich extrasynaptic. Bha feum air CPARs agus gabhadairean dopamine D1 in vivo airson locomotion àrdaichte às deidh ionnsaigh sucrose. Gu cudromach, tha protocol 7-latha de bhith a ’toirt a-steach fuasgladh làitheil de 3% de saccharin, milsearan neo-caloric, GluA1 synaptic brosnaichte coltach ri ionnsaigh 25% sucrose. T.tha na co-dhùnaidhean seo a ’comharrachadh malairt ioma-cheum GluA1, air a mhìneachadh roimhe seo ann vitro, mar dhòigh air riaghladh geur air sgaoileadh synaptic ann am vivo le duais nàdarra orosensory. Tha malairt dhaoine air a bhrosnachadh le slighe chemosensory nach eil an urra ri luach caloric sucrose.

Ro-ràdh

Tha cus caitheamh sucrose na dhuilgheadas mòr a thaobh slàinte a ’phobaill (Hu agus Malik, 2010), ach chan eil fios dè na dòighean anns am bi duaisean nàdurrach, orosensory leithid sucrose a ’riaghladh sgaoileadh synaptic gus buaidh a thoirt air giùlan. Plastachd synaptic anns na nucleus accumbens, pàirt riatanach de chuairteachadh duais eanchainn (Sesack and Grace, 2010), a ’cur ri iomadh seòrsa giùlan brosnachail, a’ toirt a-steach ionnsachadh duais (Latha agus Carelli, 2007), freagairtean do cuideam sòisealta (LaPlant et al., 2010), agus pathologies tràilleachd (Luscher agus Malenka, 2011). Bidh foillseachadh cocaine a-rithist ag adhbhrachadh plastachd synaptic ann an neurons de na accumbens agus an sgìre teasach ventral (VTA) (Brebner et al., 2005; Grueter et al., 2010; Mameli et al., 2009; Pascoli et al., 2012; Thomas et al., 2001; Ungless et al., 2001). Nuair a thèid fèin-rianachd cocaine leudaichte a leantainn le tarraing air ais fada, tha synapses air an neartachadh tro bhith a ’toirt a-steach Ca.2+-permeable, GluA2-dìth gabhadairean glutamate seòrsa AMPA (CPARs), aig a bheil an soidhneadh a ’meadhanachadh a’ toirt a-steach grèim air cocaine (Conrad et al., 2008; McCutcheon et al., 2011a). Coltach ri cocaine, tha duaisean orosensory leithid sucrose ag àrdachadh gu làidir accumbens dopamine (Smith, 2004), ach cha deach sgrùdadh a dhèanamh air inntrigeadh duais orosensory de plasticity accumbens.

Tha gabhadairean AMPA (AMPARs) nam prìomh eadar-mheadhanairean de sgaoileadh excitatory an t-siostam nearbhach, agus tha an malairt aca a ’cur ri pròiseasan neòil eadar-mheasgte, a’ toirt a-steach ionnsachadh agus cuimhne (Nedelescu et al., 2010; Rumpel et al., 2005; Whitlock et al., 2006). Tha AMPARs air an dèanamh suas de cheithir fo-sgrìobhaidhean eadar-dhealaichte, GluA1-4. Tha AMPARs anns a bheil GluA2 ann an Ca.2+-impermeable agus trafaic gu ìre mhòr gu synapses, fhad ‘s a tha gabhadairean le dìth GluA2 (CPARs), a tha sa mhòr-chuid homomers GluA1, a’ giùlan Ca2+ agus a ’taisbeanadh ceartachadh a-staigh. Bidh GluA1 a ’dol tro mhalairt synaptic a tha an urra ri gnìomhachd le slighe dà cheum anns a bheil Ser 845 phosphorylation le cAMP-dependent protein kinase (PKA) agus cGMP-dependent protein kinase II (cGKII) a’ brosnachadh cruinneachadh gabhadain aig làraichean extrasynaptic anns an membran plasma (Esteban et al., 2003; Serulle et al., 2007; Sun et al., 2008; Sun et al., 2005). Às deidh sgaoileadh taobhach don synapse, bidh fosphorylation de Ser 818 le PKC a ’bunailteachadh AMPARs taobh a-staigh an synapse (Boehm et al., 2006), air acair chun dùmhlachd postynaptic (Ehlers et al., 2007; Oh et al., 2006; Serulle et al., 2007). Ca.2+/ fosphorylation protein kinase II-eisimeil calmodulin (CaMKII) de Ser 567 agus Ser 831 cuideachd a ’cur ri toirt a-steach synaptic agus cuimseachadh extrasynaptic (Lu et al., 2010; Roche et al., 1996), fa leth. Ach, chan eil fios a bheil ann am vivo tha toirt a-steach CPARs a ’cleachdadh nan uidheamachdan luath, ioma-cheum sin a chaidh a mhìneachadh ann vitro.

Gus sgrùdadh a dhèanamh air na dòighean anns am bi duaisean orosensory leithid sucrose a ’riaghladh synapses excitatory accumbens, tha sinn air paradigm de shlugadh goirid sucrose a chleachdadh agus air atharrachaidhean a thomhas ann an sgaoileadh synaptic ann an neurons accumbens. Tha sinn a ’cumail a-mach gu bheil potentiates ingestion sucrose a’ dol thairis air synapses tro bhith a ’toirt a-steach CPARn, agus ann am beathach le trèanadh sucrose, tha aon bhrosnachadh sucrose gu leòr gus malairt luath GluA1 a bhrosnachadh gu làraich extrasynaptic. Leis gu bheil saccharin, milseir neo-caloric, a ’brosnachadh malairt synaptic coltach ri sucrose, tha malairt dhaoine mar fhreagairt do shlighean orosensory seach caloric. A bharrachd air an sin, chuir bacadh CPAR casg air àrdachaidhean gnìomhachd locomotor gun spionnadh ann am vivo, a ’comharrachadh tuilleadh CPARs accumbens mar riaghladairean cudromach de fhreagairtean do dhuaisean nàdurrach.

Stuthan agus Dòighean-obrach

Cuspairean agus modhan lannsaireachd

B ’e na cuspairean radain Sprague-Dawley fireann (Taconic; deuchainnean giùlain) le cuideaman gram 150 - 300 nuair a ràinig iad agus radain boireann E18 a bha trom le Sprague-Dawley (Taconic; deuchainnean cultar cealla). Fhuair na radain dachaigh 2 gach cèidse airson deuchainnean giùlain air cearcall dorcha-dorcha 12h / 12h (solais a-mach aig 18: 00) agus bha cothrom aca air biadh is uisge ad libitum an-còmhnaidh. Chaidh a h-uile modh deuchainneach aontachadh le Comataidh Cùram agus Cleachdadh Ainmhidhean Institiùd Sgoil Leigheas Oilthigh New York agus chaidh an coileanadh a rèir “Prionnsapalan Cùram Bheathaichean Saotharlann” (àireamh foillseachaidh NIH 85 - 23).

Trèanadh sucrose agus tomhas locomotor

Chaidh radain a ghiùlan chun t-seòmar deuchainn 3 làithean leantainneach airson 2 h / latha anns na cèidsichean dachaigh aca. Air a ’cheathramh latha chaidh botail anns an robh uisge no 25% sucrose a thoirt a-steach tron ​​mhullach cèidse airson 5 min. Bhite a ’tomhas botail an uairsin. Airson a h-uile deuchainn, chaidh iarraidh air radain òl co-dhiù 1 g de shiùcar rè ruigsinneachd min 5 taobh a-staigh 3 latha bho thòisich an trèanadh airson a bhith air a ghabhail a-steach san sgrùdadh; gu dearbh, choinnich a h-uile radan ris an slat-tomhais seo. An dèidh toirt air falbh botal, dh'fhuirich radain san t-seòmar deuchainn airson 30 min mus deach an toirt air ais chun ghoireas bheathaichean. Air latha na h-ìobairt, chaidh radain a thoirt seachad gun mhothachadh le CO2, air a dhì-chomasachadh le guillotine, agus chaidh sampallan clò a chruinneachadh air deigh. Airson deuchainnean locomotor, chaidh radain a chuir ann an seòmraichean tomhais locomotor (Accuscan, Columbus, OH) airson 35-min gu h-iomlan. Às deidh 15-min san t-seòmar, chaidh botal le stad bead a thoirt a-steach tro mhullach an t-seòmair agus chaidh a dhèanamh seasmhach. Chaidh am botal a thoirt a-mach à mullach an t-seòmair às deidh 5-min, agus dh ’fhuirich na radain san t-seòmar airson 15-min a bharrachd às deidh dhaibh am botal a thoirt air falbh. Chaidh an dòigh-obrach seo ath-aithris gu co-ionann airson làithean leantainneach 7. Chaidh an astar a chaidh a shiubhal a thomhas a ’cleachdadh an t-Siostam VersaMax (Accuscan, Columbus, OH), a bha a’ cumail sùil air gnìomhachd bheathaichean tro chliath de shoithichean solais fo-dhearg 16 × 16 a bhios a ’dol thairis air cèidse nam beathaichean (42 × 42 × 30 cm) aghaidh gu cùl agus clì gu deas. . Chaidh fiosrachadh mu inbhe beam, a chaidh a sganadh aig ìre 100 uair san diog, a stòradh gu diosg. Chaidh gnìomhachd a chuir an cèill mar astar gluasadach air a thomhas ann an cm aig àm bionaichean 12 eadar-dhealaichte 3-min ann an seisean min 35 (b ’e am bogsa mu dheireadh 2-min).

Trèanadh saccharin

Gus coimeas a dhèanamh eadar malairt sucrose air a bhrosnachadh le GluA1 le buaidhean ionnsaigh saccharin, chaidh radain fireann inbheach 12 (250 g) a chumail ann an goireas nam beathaichean air cearcall solais / dorcha 12 uairean. Chaidh na radain uile an uairsin a thoirt don t-seòmar deuchainn le bhith gan giùlan chun t-seòmar deuchainn, air am fàgail airson uairean 2, agus gan giùlan air ais chun ghoireas bheathaichean. Aon an 4th latha (às deidh 3 làithean de chòmhnaidh), chaidh botail inntrigidh a thoirt dha radain anns an robh, uisge, sucrose no saccharin. Fhuair radain 4 cothrom air botal anns an robh uisge na laighe air mullach a ’chèidse leis an spùt a’ dol a-steach don chèidse tron ​​mhullach. B ’e an ùine inntrigidh 5 mionaidean, an uairsin chaidh am botal a thoirt air falbh, agus às deidh 15 min mionaidean a bharrachd chaidh radain a ghiùlan air ais chun ghoireas beathach. Fhuair radain 4 cothrom air fuasgladh sucrose 25% agus fhuair radain 4 cothrom air fuasgladh 3% saccharin (Sweet'n Low). Chaidh an tomhas de lionn a chaidh a chaitheamh a thomhas. Chaidh am modh-obrach seo ath-aithris airson làithean 7. Air an 7th latha de dh ’òl, dìreach às deidh toirt air falbh botal, chaidh radain a ìobairt agus chaidh cridhe accumbens a bhuain agus chaidh ìrean GluA1 a dhearbhadh le blot an Iar.

Eòlas-eòlas

Chaidh radain a thrèanadh le sucrose mar a chaidh a mhìneachadh gu h-àrd ann an cèidsichean plastaig soilleir agus, às deidh toirt air falbh botal air latha 7, chaidh an toirt a-steach le ketamine (100 mg / kg ip) agus xylazine (10 mg / kg ip) agus air an gluasad gu transcardial le saline fuar (deuchainnean mEPSC) no decapitated sa bhad (deuchainnean ceartachaidh). Chaidh brains a thoirt air falbh gu sgiobalta a-steach do lionn cerebrospinal fuadain (ACSF) air a dhèanamh suas de na leanas (ann am mM): airson deuchainnean mEPSC: NaCl (118), KCl (2.5), CaCl2 (3), MgCl2 (1), NaHCO3 (26), NaH2PO4 (1), D-glucose (10), osmolarity air atharrachadh gu 325 mOsm agus air a fhuarachadh le 95% O2/ 5% CO2 (pH 7.4); airson deuchainnean ceartachaidh: 75 sucrose, 87 NaCl, 2.5 KCl, 1.25 NaH2PO4, 0.5 CaCl2, 7 MgCl2 6 H.2O, 25 NaHCO3, 10 dextrose, air a thionndadh le 95% O.2 / 5% CO2 (pH 7.4). Chaidh sliseagan coronal (300μm tiugh) anns a bheil na niuclas accumbens a ghearradh ann an ACSF fuar-deighe le bhith a ’cleachdadh vibrotome (Leica, VT1200S) agus air an cumail fon uisge ann an ACSF (ACSF, ann am mM: 124 NaCl, 2.5 KCl, 1.25 NaH2PO4, 2.5 CaCl2, 1.5 MgSO4 7H2O, 26 NaHCO3, agus 10 dextrose) airson <30 min; an uairsin air a chumail ann an ro-goireadair sliseag aig teòthachd an t-seòmair airson co-dhiù 1 uair gus am faigh thu seachad air. Airson deuchainnean mEPSC: chaidh aon sliseag a ghluasad gu seòmar clàraidh anns an deach a chumail fon uisge le lìon nylon aig 32 ° C le teasadair fuasgladh in-loidhne TC324B agus rianadair (Warner Instruments, CT). Chaidh an seòmar a thoirt a-steach gu leantainneach le ACSF aig ìre seasmhach de 2 ml / min. Chaidh neurons spìosrach meadhanach bho phrìomh sgìre niuclas accumbens a chomharrachadh fo stiùireadh lèirsinneach a ’cleachdadh miocroscop bhidio eadar-aghaidh infridhearg-eadar-dhealachadh (Hamamatsu C5405) le miocroscop dìreach Olympus BX50WI air a uidheamachadh le amas bogaidh uisge astar obrach 40x. Electrodes paiste (4–6 MΩ) air an lìonadh le fuasgladh pìobaireachd intracellular air a dhèanamh suas de (ann am mM): CsCl (145), HEPES (10), EGTA (0.5), agus MgATP (5). Chaidh osmolarity atharrachadh gu 290 mOsm le sucrose, agus chaidh pH atharrachadh gu 7.4 le CsOH. Chaidh sruthan iar-synaptic miniature excitatory (mEPSCs) a chlàradh an làthair bicuculline (10μM) agus tetrodotoxin (1μM) a ’cleachdadh amplifier Axopatch 200B (Innealan Molecular, CA) agus air an digiteachadh le Digidata 1322A (Innealan Molecular, CA). Airson deuchainnean ceartachaidh: chaidh claisean a ghluasad chun t-seòmar clàraidh agus an toirt seachad (2.0–2.5 ml min-1) le ACSF ogsaidean aig 33 - 35 ° C anns a bheil 50 μm picrotoxin gus EPSC a sgaradh. Chaidh clàran làn-cealla samhlachail a dhèanamh bho neurons spìosrach meadhanach sgìreil ann an bholt-clamp le amplifier Multiclamp 700B (Innealan Molecular) a ’cleachdadh miocroscop bhidio IR-DIC. Chaidh pìoban paiste (4 - 6 MΩ) a lìonadh le fuasgladh intracellular (ann am mM: 125 Cs-gluconate, 2 CsCl, 5 TEA-Cl, 4 Mg-ATP, 0.3 GTP, 10 phosphocreatine, 10 HEPES, 0.5 EXTA -3.5). Chaidh dàta a shìoladh aig 314 kHz, air a dhidsiotachadh aig 2 kHz, agus air a sgrùdadh le Clampfit 10 (Innealan Molecular). Chaidh brosnachadh extracellular (10 - 0.01 ms, 1 - 5 μA, 150 Hz) a chuir an sàs le dealan beag bipolar glainne 0.2 - 0.05 mm bhon electrod clàraidh. Às deidh ~ 0.5 min de chlàradh bun-loidhne, chaidh fuasgladh anns a bheil Naspm (10 μM) a thoirt a-steach don amar airson 200 min. Chaidh atharrachaidhean ann an leudachd EPSC a thomhas ro agus às deidh tagradh dhrogaichean aig a bhith a ’cumail comasan −10, −70, −50, 30, + 0, + 20 agus + 40 mV. An clàr-amais ceartachaidh (ir) air a thomhas le bhith a ’ceartachadh gluasadan sam bith a dh’ fhaodadh a bhith ann an comas tilleadh agus air a thomhas bhon cho-aontar a leanas: ir = (I-70 / 70) / (I+ 40 / 40), càite I-70 agus I+ 40 a bheil na amplitudes EPSC air an clàradh aig −70 mV agus + 40 mV, fa leth.

Briseadh sìos subcellular agus blotadh an Iar

Chaidh accumbens a chruinneachadh air deigh mar a chaidh a mhìneachadh gu h-àrd. Nuair a chaidh cridhe agus slige a sgaradh air leth, chaidh sgaradh a dhearbhadh le bhith a ’sgrùdadh bloighean synaptosome airson dopamine β-hydroxylase, enzyme a chaidh a lorg ann an crìochnachaidhean axons chun t-slige ach chan e an cridhe (Sesack and Grace, 2010). Chaidh bloighean cealla iomlan, synaptosome, agus PSD ullachadh mar a chaidh a mhìneachadh roimhe (Jordan et al., 2004). Chaidh peileagan synaptosomal ath-chaitheamh ann an 200 μl 25 mM Tris le 1% Triton X-100, air a chreagadh aig 4 ° C airson 30-min, agus air a centrifuged aig 13,800 × g airson 15-min ann am microcentrifuge gu PSDs pellet. Chaidh am pellet anns a bheil PSDs amh ath-chaitheamh ann an Tris 25 mM le 2% SDS. Chaidh bloighean a sgrùdadh le blot an Iar air gels SDS-PAGE mar a chaidh a mhìneachadh roimhe (Jordan et al., 2004). Chaidh na antibodies a leanas a chleachdadh: dopamine β-hydroxylase (1: 1,000, Abcam), GluA1 (1: 1,000, Millipore), phosphor-Ser 845 GluA1 (1: 1,000, Millipore), GluA2 (1: 1,000; (1: 10,000, Sigma).

Miocroscop eileagtronaigeach

Air latha buain clò (latha 7 de thrèanadh sucrose), chaidh radain bho bhuidhnean deuchainn 3 (Uisge, Sucrose / Uisge, Sucrose; radain 3 / buidheann deuchainn) a chuir ann an seòmraichean tomhais locomotor airson 15-min; aig 15-min chaidh botal a thoirt a-steach tro mhullach an t-seòmair. Fhuair radain sa bhuidheann Uisge uisge, fhuair radain anns a ’bhuidheann ucrose 25% sucrose, radain anns a’ bhuidheann Sucrose / Water, a bha air 25% sucrose ithe airson làithean 6, a ’faighinn uisge. Chaidh radain a thoirt a-steach gu domhainn le Nembutal (50 mg / kg ip) agus air an gluasad gu transcardial le bufair fosfáit 0.1 M (pH 7.4) anns a bheil 4% paraformaldehyde agus 0.1% glutaraldehyde aig ìre 50 ml / min rè a ’chiad 3-min, an uairsin aig ìre de 20 ml / min airson an 7-min a leanas. Chaidh fìneagan ullachadh airson bileagan immunogold postembed (PEG) agus chaidh ìomhaighean a ghlacadh mar a chaidh a mhìneachadh roimhe (Nedelescu et al., 2010). Bha immunolabels air an seòrsachadh a rèir an t-suidheachaidh aca an coimeas ris an PSD aig cinn-rathaid synaptic asymmetric mar “cleft,” “faisg air PSD” (taobh a-staigh leud 1 PSD bhon PSD), “aig PSD,” “intraspinous,” no “extrasynaptic membrane.” Bho bha gach beathach, synapses 93 nan sampaill bho chridhe nan accumbens. Chaidh samplachadh air thuaiream a dhèanamh cinnteach le bhith a ’dèanamh anailis air a h-uile gin de na synapses 93 a thachair air thuaiream fhad‘ s a bha sinn a ’sguabadh gu riaghailteach air feadh a’ ghriod, agus an uairsin a ’cruinneachadh an aon àireamh de synapses bho gach aon de na trì beathaichean a fhuair leigheasan ante mortem co-ionann. Chaidh dà sheòrsa tomhais a dhèanamh. B ’e aon dhiubh measadh a dhèanamh air ìre GluR1-immunoreactivity, le bhith a’ toirt cunntas air an àireamh de ghràinean PEG a thachair aig raointean gnìomh fa leth den spine. B ’e am fear eile measadh a dhèanamh air a’ chuibhreann de synapses a chaidh an comharrachadh aig an PSD a rèir àireamh sam bith de ghràinean PEG. Bhathar den bheachd gu robh eadhon synapses le bileagan dìreach 1 PEG air an ainmeachadh, stèidhichte air obair na bu thràithe a ’sealltainn sònrachas modh-obrach GluR1-PEG (Nedelescu et al., 2010). Chaidh buaidhean làimhseachaidh air a ’chuibhreann agus an ìre de GluR1-immunolabeling a sgrùdadh le ANOVA aon-shligheach le coimeasan post hoc dealbhaichte (Fisher's LSD). Gus cuir às do chlaonadh deuchainneach, chaidh an dàta dall-dall: rinn aon neach-deuchainn trèanadh sucrose agus chùm e clàran de na beathaichean anns na trì buidhnean deuchainn, chruthaich dàrna neach-deuchainn na micrographs electron agus shònraich e còd alphanumeric ùr do gach micrograph agus chùm e an còd seulaichte , agus rinn triùir luchd-deuchainn a bharrachd sgrùdadh air na micrographs agus tomhas de ghràinean PEG. Às deidh tomhas PEG a chrìochnachadh, ghairm an luchd-deuchainn gus dearbh-aithne gach micrograph a nochdadh.

Implantachadh cannula agus in-stealladh intracranial

Chaidh in-stealladh intracranial fhastadh gus Naspm agus APV a lìbhrigeadh gu cridhe accumbens. Airson implantachadh cannula, mar a chaidh a mhìneachadh roimhe (Carr et al., 2010), chaidh radain a thoirt a-steach gu mòr le ketamine (100 mg / kg ip) agus xylazine (10 mg / kg ip) agus air an stealladh gu post-obrachail leis an benamine analgesic (1 mg / kg subcutaneous). Chaidh radain a chuir a-steach gu stereotaxically le dà cannulae stiùireadh 26-trast-thomhas (PlasticsOne, Roanoke, VA) gu dà-thaobhach ann an cridhe accumbens le co-chomharran: 1.6 mm anterior gu bregma; 2.9 mm fadalach chun an t-sealladh sagittal, molaidhean ceàrnach 8 ° a dh ’ionnsaigh a’ mheadhan-loidhne, 5.6 mm ventral gu uachdar claigeann. Chaidh cannulae a chumail na àite le acrylic fiaclaireachd agus chaidh patency a chumail le stoidhle occlusion. Airson in-stealladh intracranial, chaidh fuasglaidhean Naspm agus APV a luchdachadh ann an dà fhad 30 cm de phìoban PE-50 ceangailte aig aon cheann ri criathran 25-μl Hamilton air an lìonadh le uisge grùide agus aig a ’cheann eile gu cannulae injector 31-gas, a leudaich 2.0 mm nas fhaide na na stiùiridhean a chaidh a chuir an sàs. Chaidh na criathragan a chuir suas air an luchd-gleidhidh càraid de phumpa syringe Harvard 2272 microliter a lìbhrig na tomhasan stealladh 0.5 μl thairis air ùine de 100 sec. Aon mhionaid às deidh crìoch a chuir air in-stealladh, chaidh cannulae injector a thoirt a-mach à iùil, chaidh stoidhlichean ùra a chur nan àite, agus chaidh beathaichean a chuir ann an seòmraichean deuchainn locomotor airson trèanadh sucrose. Às deidh ìobairt bheathaichean, chaidh earrannan eanchainn cryogenach a sgrùdadh airson sgìreachadh cannula; Chaidh 2 a-mach à beathaichean 15 a thoirmeasg bhon sgrùdadh air sgàth suidheachadh mì-fhreagarrach cannula.

Mion-sgrùdadh staitistigeil

Chaidh ANOVA aon-slighe air a leantainn le deuchainnean post hoc Fisher airson deuchainnean microscopaidh electron, immunocytochemistry agus biotinylation. Chaidh deuchainnean-deuchainn Oileanach dà-earbaill a chleachdadh airson electrophysiology. Airson deuchainnean trom-inntinn sucrose, chaidh ANOVA dà-thaobh a chleachdadh, air a leantainn le deuchainnean post hoc Fisher.

TORAIDHEAN

Caractar paradigm ionnsaigh sucrose

Bha sinn a ’cleachdadh paradigm ionnsaigh sucrose gus sgrùdadh a dhèanamh air buaidhean duais nàdurrach, orosensory air sgaoileadh synaptic (Figear 1A). Chaidh radain fhireann inbheach a ghiùlan gu seòmar deuchainn trì latha an dèidh a chèile. Air a ’cheathramh latha (a’ chiad latha de thrèanadh), chaidh na radain a chuir ann an seòmar tomhais locomotor. Às deidh 15 mionaidean de thomhas gnìomhachd locomotor san t-seòmar, chaidh botail anns an robh uisge (airson beathaichean uisge) no fuasgladh sucrose 25% (airson beathaichean Sucrose) a thoirt a-steach do na seòmraichean tomhais tro thuill ann an mullach an t-seòmair. Chaidh na botail a thoirt air falbh às deidh mionaidean 5 agus chaidh gnìomhachd locomotor a thomhas airson 15 mionaidean a bharrachd mus deach beathaichean a thilleadh gu cèidsichean dachaigh. Rinn sinn a-rithist am modh-obrach seo airson làithean leantainneach 7. Ann an cuid de dheuchainnean, chaidh trèanadh sucrose a leudachadh gu 8th latha. Thug an ruigsinneachd ghoirid, neo-tuiteamach seo air fuasgladh fìor palatable cothrom dhuinn sgrùdadh a dhèanamh air gach cuid buaidhean gruamach agus tionalach a thaobh toirt a-steach sucrose, leis gu robh beathaichean gu earbsach a ’brùthadh sucrose gu làidir tron ​​uinneig ruigsinneachd taobh a-staigh trì latha bho thrèanadh (Figear 1B). Leig na suidheachaidhean deuchainneach seo coimeas eadar buidhnean deuchainn dìreach às deidh stad a chuir air ionnsaigh. B ’e an slat-tomhais againn airson a bhith air a ghabhail a-steach san sgrùdadh gum bi radain a’ tòiseachadh ag ithe co-dhiù aon ghram de shiùcar rè na h-ùine ruigsinneachd taobh a-staigh trì latha bho thòisich an trèanadh; cha deach beathaichean sam bith a thoirmeasg bhon sgrùdadh air bunait an t-slat-tomhais seo.

Figear 1  

Bidh lionnachadh sucrose a-rithist ag adhbhrachadh àrdachaidhean gluasadach de locomotaibh gun spionnadh.

Chunnaic sinn, taobh a-staigh trì latha de thrèanadh, gu robh beathaichean sucrose ag ithe mòran a bharrachd de fhuasgladh sucrose na bha beathaichean uisge ag ithe uisge (Figear 1B). A bharrachd air an sin, ged nach deach eadar-dhealachadh mòr sam bith fhaicinn ann an gluasad gun spionnadh air làithean trèanaidh 1 - 6 (cha deach dàta a shealltainn), chunnaic sinn àrdachadh mòr den astar iomlan a chaidh a shiubhal ann am beathaichean Sucrose an coimeas ri beathaichean uisge anns na trì mionaidean às deidh toirt air falbh botal air latha 7 (Figear 1D), agus bha an eadar-dhealachadh seo an làthair cuideachd air latha 8 (Figear 1E). Cha deach eadar-dhealachadh sam bith fhaicinn anns an astar iomlan a chaidh a shiubhal eadar beathaichean Uisge agus Sucrose anns na trì mionaidean mus deach am botal a thoirt a-steach air gin de na làithean deuchainn (Figear 1C), a ’moladh gun robh locomotion àrdaichte na fhreagairt gheur do dh’ ionnsaigh sucrose a bha sònraichte don radan le trèanadh sucrose, seach freagairt le cumhachan don t-seòmar locomotor. A ’cumail ris a’ chomas seo, bha co-dhàimh adhartach mòr eadar an ìre de shiùcar a chaidh a chaitheamh agus an astar iomlan a chaidh a shiubhal (Figear 1F). Cha robh eadar-dhealachadh sam bith ann an cuideaman bheathaichean eadar na buidhnean Sucrose agus Water ro no às deidh na làithean trèanaidh 7 (cha deach dàta a shealltainn).

Bidh lionnachadh sucrose ag adhbhrachadh toirt a-steach CPAR

Mar thoradh air trèanadh sucrose chaidh àrdachadh gluasadach a dhèanamh air locomotion air an latha trèanaidh mu dheireadh. Gus faighinn a-mach an robh atharrachaidhean electrophysiologic anns na nucleus accumbens an cois a ’bhuil seo de shlugadh sucrose, sgìre a bhios a’ riaghladh giùlan duais, dh ’ullaich sinn sliseagan niuclas accumbens sa bhad às deidh toirt air falbh botal air latha 7 agus a chlàradh bho neurons de chridhe accumbens (Figear 2A). Tha am prìomh fho-ghnè air a bhith an sàs ann am freagairtean locomotor gu brosnachaidhean buannachdail (Sesack and Grace, 2010). Fhuair sinn a-mach gu robh an dà chuid meud agus tricead sruthan postynaptic excitatory miniature (mEPSCs) gu math nas motha ann an cridhe accumbens de bheathaichean Sucrose an coimeas ri beathaichean uisge (Figear 2B). Sheall seo gum faodadh caitheamh sucrose a-rithist riaghladh gu deimhinneach air sgaoileadh synaptic ann an cridhe niuclas accumbens. Gus faighinn a-mach an robh pàirt aig in-ghabhail CPAR ann am potentiation às deidh sucrose, cho-dhùin sinn clàran ceartachaidh airson prìomh neurons accumbens le bhith a ’tomhas EPSCs aig diofar chomasan membran ((Figearan 2C, 2D agus 2E). Tha CPARs a ’ceartachadh a-staigh aig comasan dubhach air sgàth bacadh polyamine endogenous. Chunnaic sinn ceartachadh mòr ann an clàraidhean bho neurons de bheathaichean Sucrose, mar a chaidh a nochdadh le neo-làthaireachd anns an dàimh I / V, an coimeas ri beathaichean uisge (Figear 2E), a bharrachd air àrdachadh mòr ann an clàr-amais ceartachaidh (Figear 2F).

Figear 2  

Tha synapses bunaiteach Accumbens air an neartachadh às deidh ionnsaigh siùcair a-rithist.

Gus dearbhadh àrdachadh ìrean CPAR le dòigh eile, chlàraich sinn bho accumbens core neurons an dèidh a bhith a ’toirt a-steach an neach-bacadh CPAR sònraichte, 1-Naphthylacetyl spermine (Naspm) anns an amar. Fhuair sinn a-mach gun do lùghdaich Naspm meudachd EPSC gu mòr ann an clàraidhean bho neurons bho Sucrose ach chan e beathaichean uisge (Figearan 3A - C.). A bharrachd air an sin, às deidh làimhseachadh Naspm, thàinig an dàimh I / V ann an neurons bho bheathaichean Sucrose gu sreathach, a ’nochdadh casg CPAR ann an synapses bheathaichean Sucrose, fhad‘ s nach deach buaidh mhòr sam bith air an dàimh I / V a choimhead às deidh làimhseachadh Naspm ann an neurons bho bheathaichean uisge (Figearan 3D). Tha na co-dhùnaidhean sin a ’sealltainn gu bheil ath-fhilleadh sucrose a-rithist ag adhbhrachadh toirt a-steach CPAR ann an synapses de chridhe accumbens.

Figear 3  

Tha lionnachadh sucrose ag adhbhrachadh toirt a-steach gabhadairean Ca2 + -permeable AMPA.

Bidh lionnachadh sucrose ag adhbhrachadh malairt GluA1

Tha CPARn nan gabhadairean AMPA aig nach eil fo-ghoireas gabhadair GluA2 AMPA. Mar sin, bidh toirt a-steach synaptic de CPAR mar as trice a ’toirt a-steach malairt gnìomhachd synaptic a tha an urra ri fo-ionad GluA1 (He et al., 2009; Isaac et al., 2007; Liu agus Zukin, 2007; Lusan et al., 2006). Gus dearbhadh a dhèanamh air in-ghabhail synaptic CPAR às deidh trèanadh sucrose, rinn sinn sgrùdadh an robh àrdachadh sucrose a ’meudachadh faireachdainn synaptic de GluA1. Fhuair radain cothrom air sucrose mar a chaidh a mhìneachadh gu h-àrd airson 7 làithean leantainneach. Air làithean 1, 3, 5, agus 7, chuir sinn às do na bloighean cealla iomlan, synaptosome agus dùmhlachd postynaptic (PSD) bho thrì roinnean eanchainn: cridhe accumbens (cridhe), slige accumbens (slige) agus cortex somatosensory (cortex). Rinn sinn mion-sgrùdadh air na bloighean cealla agus PSD gu lèir le blot an Iar airson a bhith a ’cur an cèill GluA1 agus GluA2.

Cha do lorg sinn atharrachaidhean sam bith ann an GluA1 no GluA2 anns na bloighean cealla iomlan de lysates accumbens air na làithean deuchainn a chaidh a sgrùdadh, a ’moladh nach bi caitheamh sucrose a-rithist a’ riaghladh ìrean iomlan nam pròtanan sin (Figearan 4A - C.). Anns na bloighean accumbens PSD, ge-tà, mheudaich GluA1 gu mòr air latha 7 sa chridhe ach chan ann anns an t-slige fhad ‘s nach do dh’atharraich GluA2 gu mòr anns gach bloigh (Figearan 4D - 4F agus dàta nach eil air a shealltainn). Cha do choimhead sinn àrdachadh mòr sam bith ann an GluA1 anns na bloighean bunaiteach PSD accumbens air na làithean deuchainn roimhe (Figearan 4D - F.) agus cha do dh’atharraich GluA1 no GluA2 anns na bloighean PSD cortex air gin de na làithean deuchainn (cha deach dàta a shealltainn). Tha barrachd GluA1, gu sònraichte an taca ri GluA2, ann am prìomh PSDs accumbens às deidh a bhith a ’faighinn a-steach gu tric a rèir an ceartachadh nas motha a chaidh fhaicinn ann an cridheachan accumbens, mar a chaidh a mhìneachadh gu h-àrd.

Figear 4  

Tha dùmhlachd postynaptic GluA1, ach chan e GluA2, air a mheudachadh ann an cridhe niuclas accumbens às deidh ionnsaigh sucrose.

Thathar air sealltainn gu bheil malairt GluA1 a tha an urra ri gnìomhachd a ’cur ri plastachd synaptic ann vitro agus cuideachd ann am vivo (Lu agus Roche, 2011). Tha inneal luath, ioma-cheumach airson malairt GluA1 air a nochdadh ann vitro (Serulle et al., 2007; Sun et al., 2008; Sun et al., 2005). Gu ruige seo, ge-tà, tha an dòigh-obrach ioma-cheum seo a ’cur ri cruinneachadh synaptic GluA1 ann am vivo nach deach a dhearbhadh. Gus faighinn a-mach a bheil trèanadh sucrose a ’toirt a-steach malairt GluA1 gu cruaidh leis an uidheamachd multistep, lorg sinn GluA1 gu h-ionadail aig niuclas accumbens synapses de bheathaichean sucrose agus air an trèanadh le uisge le miocroscop eileagtronaigeach. Chaidh clò cridhe Accumbens a bhuain air an t-seachdamh latha de thrèanadh sucrose bho bhuidhnean deuchainn 3 de radain. B ’iad sin radain a bha: 1) ag òl uisge airson làithean 7 (Uisge), 2) ag ithe sucrose airson làithean 7 (Sucrose), agus 3) ag ithe sucrose airson làithean 6 agus uisge air latha 7 (Sucrose / Water). Chaidh radain a ìobairt air an 7th latha, 5 mionaidean às deidh caitheamh sucrose no uisge. Mar sin, le bhith a ’dèanamh coimeas eadar dhà de na buidhnean deuchainn, beathaichean Sucrose / Water agus Sucrose, ri chèile agus ri beathaichean Uisge nochd raon-ama atharrachaidhean postynaptic air an adhbhrachadh le caitheamh sucrose ann am radain le trèanadh sucrose. Thomhais sinn immunogold postembed (PEG) -labeled GluA1 ann an diofar roinnean postynaptic 5: cytosol spine dendritic (intraspinous), membran plasma extrasynaptic (membran), PSD, faisg air PSD, agus sgoltadh synaptic, leis na trì roinnean deireannach air an cruinneachadh còmhla mar ‘PSD '(Fig. 5A). Gus cuir às do chlaonadh deuchainnean, chaidh dearbh-aithne buidheann deuchainn electron micrograph dall-dall.

Figear 5  

Tha miocroscop eileagtronaigeach a ’nochdadh inntrigeadh de mhalairt ioma-cheum GluA1 le bhith a’ toirt a-steach sucrose.

Bha an dà chuid beathaichean Sucrose agus Sucrose / Water a ’taisbeanadh GluA1 intraspinous gu math àrd an coimeas ri beathaichean uisge (Fig. 5B agus 5C). Tha seo a ’moladh gum bi caitheamh sucrose cronail a’ meudachadh amar intracellular de gabhadairean AMPA anns a bheil GluA1 ri taobh làraich synaptic, gabhadairean a dh ’fhaodadh a bhith rim faighinn gu furasta airson malairt synaptic, agus, gu cudromach, gum faod an amar intracellular seo cumail a’ dol airson uairean 24 às deidh an caitheamh deireannach de shiùcar. . Rinn sinn sgrùdadh an uairsin air a ’cheist chudromach am faod brosnachadh brosnachail sucrose malairt luath GluA1 a bhrosnachadh. Chunnaic sinn gun deach àrdachadh mòr a dhèanamh air ball plasma extrasynaptic GluA1 ann am beathaichean Sucrose an taca ri gach cuid beathaichean Sucrose / Uisge agus Uisge (Figearan 5B agus 5D). Tha an amharc seo a ’sealltainn gum faod duais nàdurrach, orosensory air a thoirt seachad le aon bhrosnachadh sucrose gu luath (<5 min) ach thar-ghluasadach (ùine crìonaidh <24 h) àrdachadh a dhèanamh air an àireamh extrasynaptic de gabhadairean AMPA anns a bheil GluA1, a’ cruthachadh amar labile às am bi na gabhadairean faodaidh trafaic don synapse.

Gu cudromach, ann vitro tha sgrùdaidhean air moladh gum bi gabhail a-steach synaptic de gabhadairean AMPA a ’tachairt ann an ceumannan 2. Anns a ’chiad, tha fosphorylation Ser 845 a tha an urra ri glutamate- no dopamine ag àrdachadh ìrean gabhadan aig làraichean extrasynaptic anns an membran plasma (Esteban et al., 2003; Serulle et al., 2007; Sun et al., 2008; Sun et al., 2005), fhad ‘s a tha e san dàrna fear, tha fosphorylation Ser 818 a’ brosnachadh in-ghabhail synaptic (Boehm et al., 2006). Tha an coimeas microscopaidh dealanach againn de bheathaichean Sucrose le beathaichean Sucrose / Uisge is Uisge a ’sealltainn gun deach a’ chiad cheum de mhalairt GluA1 a choimhead ann vitro (Makino agus Malinow, 2009), bidh malairt luath chun an membran extrasynaptic, cuideachd a ’tachairt ann am vivo às deidh solarachadh de dhuais orosensory.

A ’cumail ri toraidhean electrophysiology agus bith-cheimiceach a chaidh a mhìneachadh gu h-àrd, sheall PEG EM gu robh toirt a-steach sucrose cuideachd a’ toirt a-steach an dàrna ceum ann an malairt gabhadair GluA1 GluA1 don synapse leis gu robh an ìre de GluA1-immunoreactivity aig an PSD gu math nas motha airson Sucrose an coimeas ri radain uisge, agus bha gluasad a dh ’ionnsaigh barrachd GluA1 ann an Sucrose / Uisge an coimeas ri radain uisge (Figearan 5B agus 5E). Tha an àrdachadh ann am beathaichean Sucrose / Water co-chòrdail ri bhith a ’toirt a-steach GluA1 gu luath a bhios a’ lobhadh le leth-beatha synaptic de ~ 24 hr ,, no a ’toirt a-steach GluA1 gu luath agus a’ dol an àite GluA1 / 2 synaptic thairis air an aon ùine. Bha an àireamh sa cheud de synapses a bha a ’cur an cèill GluA1 anns an PSD cuideachd mòran nas motha ann am radain Sucrose an coimeas ri radain uisge (Figear 5F), a ’moladh gun do rinn GluA1 malairt air synapses aig nach robh GluA1 roimhe. Tha seo cuideachd a ’moladh gum bi an àrdachadh ann am meud mEPSC a chaidh fhaicinn ann an radain Sucrose mar thoradh air àrdachadh ann an GluA1 synaptic, agus gum faodadh an àrdachadh ann am tricead mEPSC a bhith mar thoradh air fastadh GluA1 gu synapses accumbens a bha roimhe sàmhach, ged nach urrainnear potentiation de sgaoileadh glutamate a chuir às. Thomhais sinn cuideachd an àireamh de synapses anns gach aon de na trì buidhnean deuchainn gus faighinn a-mach an do bhrosnaich ionnsaigh sucrose synaptogenesis; cha robh eadar-dhealachaidhean sam bith am measg nan trì buidhnean deuchainn (cha deach dàta a shealltainn). Tha sinn a ’co-dhùnadh gu bheil lionnachadh sucrose a-rithist ag àrdachadh amar intraspinous seasmhach (> 24 uairean) de GluA1, agus gu bheil aon bhrosnachadh sucrose gu radan air a thrèanadh (6 latha) gu leòr gus GluA5 àrdachadh gu luath (1 min) anns an membran plasma extrasynaptic, is dòcha. a ’tarraing gabhadan bhon amar intraspinous. Tha sinn a ’moladh gum bi cuibhreann de na gabhadairean extrasynaptic sin air an toirt a-steach don PSD, a’ leantainn gu clàr-amais ceartachaidh a chaidh fhaicinn agus atharrachaidhean PSD GluA1, mus till an amar extrasynaptic chun bhun-loidhne aig 24 h às deidh brosnachadh. Tha na co-dhùnaidhean sin a ’toirt a-mach gum faod duais nàdarra a bhith ag adhbhrachadh malairt luath GluA1 ann am beathach le trèanadh.

Tha feum air gnìomhachd CPAR airson locomotion àrdaichte às deidh ionnsaigh sucrose

Bidh neurons spìosrach meadhanach a ’faighinn an dà chuid cuir a-steach dopaminergic agus glutamatergic (Calabresi, et al., 1992). Gus measadh a dhèanamh air com-pàirteachadh chomharran glutamate anns an locomotion spontaneous àrdaichte a chunnaic sinn às deidh ionnsaigh sucrose ann am radain le trèanadh sucrose, chuir sinn cannulas a-steach do chridhe accumbens radain, agus thrèanadh sinn beathaichean ann an seòmraichean tomhais locomotor mar a chaidh a mhìneachadh gu h-àrd. Air latha 8 de thrèanadh sucrose, chuir sinn Micropm a-steach don chridhe mus deach a chuir a-steach don t-seòmar deuchainn locomotor. Lughdaich an stealladh an astar iomlan a chaidh a shiubhal bho na beathaichean Sucrose agus chuir e às don eadar-dhealachadh eadar beathaichean Sucrose agus Water a chithear dìreach às deidh toirt air falbh botal (Figear 6A). Gus dearbhadh nach tug cuideam a dh ’adhbhraich làimhseachadh nam beathaichean buaidh air freagairt sucrose, chuir sinn saline a-steach don chridhe an ath latha (latha 9 de thrèanadh sucrose); a-rithist chaidh mothachadh mòr-èigneachaidh fhaicinn anns na beathaichean Sucrose dìreach às deidh toirt air falbh botal (Figear 6B). Tha seo a ’sealltainn gun robh Naspm gu sònraichte air bacadh a chuir air locomotaibhean le sucrose. Le bhith a ’stealladh an antagonist NMDAR, APV, a-steach don chridhe air na làithean a leanas cuideachd chuir e às don eadar-dhealachadh eadar beathaichean Sucrose agus Water (Figear 6C), a ’sealltainn gu bheil feum air NMDARs cuideachd airson àrdachadh locomotion spontaneous às deidh ionnsaigh sucrose. Gus faighinn a-mach an robh pàirt aig freagairt le cumhachan don t-seòmar deuchainn ann an inntrigeadh trom-inntinn, chaidh beathaichean a chuir anns an t-seòmar airson 35 min gun ro-ràdh botal; cha robh eadar-dhealachadh sam bith san astar a chaidh a shiubhal eadar beathaichean Sucrose agus uisge (Figear 6D). Cha tug Naspm agus APV buaidh air caitheamh sucrose (Figear 6E), a ’sealltainn nach eil feum air prìomh CPARn agus NMDARs airson sucrose a thoirt a-steach gu làidir. Beathaichean far nach deach cannulas a chur ann an cridhe accumbens (2 a-mach à beathaichean 15), mar a chaidh a mheasadh às deidh ìobairt (Figear 6F), cha deach an toirt a-steach don sgrùdadh. Gu crìch, tha an dàta seo còmhla a ’sealltainn gu bheil caitheamh sucrose le radan air a thrèanadh le sucrose ag adhbhrachadh malairt synaptic de GluA1 ann an 5 mionaidean, agus gu bheil bacadh de dh’ innealan comharrachaidh a bhios a ’cumail smachd air a’ mhalairt seo a ’cur casg air àrdachadh gnìomhachd locomotor spontaneous às deidh sucrose.

Figear 6  

Tha feum air CPARs agus NMDARs airson gluasad gun spionnadh àrd an dèidh ionnsaigh sucrose.

Tha dùil gum bi dà shlighe ann airson soidhneadh sucrose. Tha aon, slighe teann chemosensory no orosensory, air a thòiseachadh le ceangal sucrose ris an gabhadair blas milis, a tha a ’freagairt ris an fhillte gabhadair pròtain G heteromeric, T1R2 / T2R3 (Kitagawa et al., 2001; Max et al., 2001; Nelson et al., 2001; Sainz et al., 2001). Faodaidh beathachadh làn calor a bhith a ’riaghladh gnìomh eanchainn le slighean metabolail a tha neo-eisimeileach bho bhlas, ged nach eil na h-innleachdan air an tuigsinn gu math (de Araujo et al., 2008). Gus eadar-dhealachadh a dhèanamh eadar an dà roghainn eile sin airson slighe malairt GluA1 air a bhrosnachadh le sucrose, rinn sinn a-rithist am protocol trèanaidh le trì buidhnean de radain (radain / buidheann 4) a fhuair cothrom airson 5 mionaidean gu botail anns a bheil, uisge, fuasgladh sucrose 25% , no 3% saccharin (Sweet and Low). Chaidh na botail a thoirt air falbh agus dh'fhuirich na radain airson 15 mionaidean nas fhaide anns a ’chèidse trèanaidh. Chaidh trèanadh a-rithist airson làithean 7. Cha robh na meudan de leaghan a bha na buidhnean deuchainn sucrose agus saccharin gu math eadar-dhealaichte bho chèile agus bha an dà chuid nas motha na a ’bhuidheann uisge a’ caitheamh, a rèir duais leis an dà stuth milis (Figear 7A). Air an latha 7th de bhith ag òl, dìreach às deidh toirt air falbh botal, chaidh radain a ìobairt, chaidh prìomh stuth accumbens a bhuain agus a thoirt còmhla airson gach buidheann deuchainn, am bloigh PSD iomallach agus ìrean GluA1 a chaidh a dhearbhadh le blot an Iar (Figear 7B). Mar a bha e roimhe, sheall beathaichean a bha ag ithe sucrose GluA1 àrdaichte anns a ’chuibhreann PSD an coimeas ris a’ bhuidheann uisge (Figear 7C). Gu cudromach, chaidh GluA1 àrdachadh cuideachd anns a ’chuibhreann PSD de bheathaichean a bha ag ithe saccharin. Cha robh eadar-dhealachadh mòr sam bith anns na h-ìrean de GluA1 anns na bloighean cealla gu lèir bho accumbens core uisge, sucrose agus saccharin, a ’moladh gun robh an àrdachadh GluA1 sònraichte don bhloigh synaptic (Figear 7D). Leis gu bheil saccharin a ’brosnachadh an aon iom-fhillteachd gabhadair blas G pròtain heteromeric le sucrose (Masuda et al., 2012; Nelson et al., 2001), ach aig nach eil luach caloric, tha sinn a ’co-dhùnadh gu bheil brosnachadh an gabhadair blas milis gu leòr gus comharran a thòiseachadh a dh’ àrdaicheas ìrean GluA1 aig bun-synapses niuclas accumbens.

Figear 7  

Bidh Trèanadh Saccharin a ’toirt a-steach àrdachadh ann an GluA1 Synaptic coltach ri Trèanadh Sucrose.

Deasbaireachd

Tha sinn air sealltainn gum faod duais orosensory, caitheamh siùcar a-rithist, brosnachadh mòr a thoirt a-steach GluA1 synaptic tro inneal malairt ioma-cheum a chaidh a mhìneachadh roimhe ann vitro. Bidh caitheamh sucrose a-rithist thairis air làithean 6 - 7 potentiated accumbens prìomh synapses electrophysiologically tro bhith a ’cuir a-steach CPARs. An cois a ’bhuaidh seo bha cruinneachadh de GluA1 ach chan e GluA2 ann am PSD a’ chridhe, agus bha e sònraichte gu roinneil agus gu sealach, oir cha deach atharrachaidhean sam bith fhaicinn ron latha trèanaidh 7 sa chridhe, agus cha deach atharrachadh sam bith fhaicinn anns an t-slige accumbens no ann an cortex somatosensory. Nochd mion-sgrùdadh microscopach dealanach gun do dh ’èirich a-rithist sucrose gu ìre mhath seasmhach (t1/2 > 24 uair) àireamh-sluaigh de gabhadairean intraspinous GluA1. Sucrose cuideachd gu luath (5 min) agus gu neo-ghluasadach (t1/2 <24 uair) ìrean àrda de ghabhadan anns a bheil GluA1 aig làraichean extrasynaptic ann am beathaichean le trèanadh sucrose, a ’meudachadh àireamh-sluaigh AMPAR a tha comasach air eadar-dhealachadh gu taobhach a-steach don synapse. Chaidh Synaptic GluA1, an dà chuid mar a tha e air a riochdachadh leis a ’chuibhreann PSD agus mar a chaidh a dhearbhadh le PEG-EM, àrdachadh gu mòr ann an Sucrose an coimeas ri beathaichean uisge. Bho na toraidhean sin tha sinn a ’moladh gum bu chòir an uidheamachd dà-cheum de exocytosis extrasynaptic a leantainn le malairt synaptic airson cuir a-steach synaptic AMPAR a chaidh a mhìneachadh roimhe seo ann vitro (Boehm et al., 2006; Makino agus Malinow, 2009; Oh et al., 2006; Serulle et al., 2007; Sun et al., 2005) a thòiseachadh gu sgiobalta ann am vivo le duais nàdarra, orosensory.

Cha deach atharrachaidhean ann an ìrean GluA1 synaptic a choimhead ach às deidh seiseanan trèanaidh 7, a ’moladh gu bheil feum air pròiseas grunn latha airson potentiation. Ann an deuchainnean bith-cheimiceach ann am vivo, cha do choimhead sinn àrdachadh mòr ann an ìrean accumbens cridhe PSD GluA1 air làithean 1, 3, agus 5 de thrèanadh sucrose; dìreach às deidh 7 latha de thrèanadh sucrose chaidh GluA1 anns an PSD àrdachadh gu mòr. Ann an deuchainnean microscopaidh dealanach, chunnaic sinn gu robh beathaichean Sucrose / Water, a bha air an trèanadh le sucrose airson làithean 6 ach nach d ’fhuair brosnachadh sucrose ann an uairean 24, a’ nochdadh gluasad a dh ’ionnsaigh barrachd PSD GluA1. Bha na beathaichean sin cuideachd a ’taisbeanadh GluA1 intraspinous àrdaichte an coimeas ri beathaichean uisge, ach cha deach atharrachadh sam bith fhaicinn ann an membran extrasynaptic GluA1. Bho na toraidhean sin tha sinn a ’tighinn trì co-dhùnaidhean. An toiseach, bidh gabhadairean AMPA anns a bheil GluA1 a ’cruinneachadh gu intraspinously le brosnachadh sucrose leantainneach. Leis gu bheil sgrùdaidhean roimhe air sealltainn gu bheil lionnachadh sucrose ag adhbhrachadh leigeil às dopamine anns na accumbens (Cacciapaglia et al., 2012; McCutcheon et al., 2012; Rada et al., 2005), agus gum faod D1Rs eadar-theangachadh ionadail GluA1 a dhràibheadh ​​ann an dendrites (Smith et al., 2005), dh ’fhaodadh leigeil ma sgaoil dopamine às deidh ionnsaigh sucrose synthesis GluA1 ionadail a bhrosnachadh a thig gu cruinneachadh GluA1 intraspinous. Air neo, dh ’fhaodadh gum bi an àrdachadh intraspinous a’ nochdadh malairt GluA1 bho làraich distal. Tha coltas ann gu bheil malairt exocytotic bhon amar intraspinous àrdaichte seo a ’cur ris an amar extrasynaptic anns an membran plasma. San dàrna àite, tha a bhith a ’faicinn àrdachadh ann am buill-bodhaig extrasynaptic GluA1 ann an Sucrose, ach chan ann ann am beathaichean Sucrose / Uisge no Uisge a’ moladh gu bheil na gabhadairean extrasynaptic an dàrna cuid a ’gluasad tro dhàrna ceum a-steach don synapse no gu bheil iad endocytosed taobh a-staigh an 24 hr às deidh caitheamh sucrose, a’ dèanamh an gluasadach extrasynaptic pool. San treas àite, tha àrdachadh beathach Sucrose PSD GluA1 an coimeas ri beathaichean uisge, ach chan e beathaichean Sucrose / Water cuideachd a ’moladh, às deidh gach brosnachadh sucrose, gum bi gabhadairean a’ gluasad gu taobhach a-steach don synapse bhon amar de gabhadan a chaidh a mhalairt gu sgiobalta chun an membran plasma extrasynaptic. Chan urrainn dhuinn a leigeil a-mach gu bheil GluA1 a ’malairt gu dìreach bhon amar intraspinous chun synapse. Tha coltas ann nach eil a leithid de shlighe coltach ris na sgrùdaidhean a tha a ’sealltainn gu bheil GluA1 air a chuir a-steach gu extrasynaptically (Boehm et al., 2006; Makino agus Malinow, 2009; Oh et al., 2006; Serulle et al., 2007; Sun et al., 2005). Tha na co-dhùnaidhean sin a ’riochdachadh a’ chiad taisbeanadh a chaidh an cùrsa ùine airson malairt GluA1 (<5 mion) agus an t-slighe a chaidh fhaicinn ann vitro air an toirt fa-near cuideachd ann am vivo. A bharrachd air an sin, tha na co-dhùnaidhean againn a ’moladh gum bi brosnachaidhean buannachdail a-rithist ag atharrachadh comas airson neartachadh synapse le bhith ag àrdachadh an amar de gabhadan intraspinous a tha comasach a bhith air am malairt.

Leis gu bheil malairt GluA1 air a bhrosnachadh le saccharin coltach ri sucrose, chan eil feum air susbaint caloric sucrose. Bidh Saccharin a ’brosnachadh an aon gabhadair blas milis, T1R2 / T2R3, mar sucrose (Masuda et al., 2012; Nelson et al., 2001), abidh gnìomhachd uggesting an gabhadair seo a ’tòiseachadh a’ toirt a-steach GluA1 a-steach do synapses MSN. Bidh sucrose ag àrdachadh sgaoileadh dopamine anns na accumbens bho neurons VTA (Cacciapaglia et al., 2012; McCutcheon et al., 2012; Rada et al., 2005) leading gu malairt uachdar GluA1. Mar sin tha e coltach gum bi an t-slighe a tha a ’ceangal an gabhadair blas milis ris an VTA aig cridhe a’ phlastaig a chaidh a sgrùdadh an seo.

Tha e coltach gu bheil pàirt aig malairt luath GluA1 às deidh ionnsaigh sucrose ann a bhith a ’riaghladh gluasad gun spionnadh. Gu dearbh, ann am beathaichean le trèanadh sucrose, chuir casg air CPAR casg air gnìomhachd locomotor gun spionnadh dìreach às deidh ionnsaigh sucrose. Chaidh an astar iomlan a shiubhail radain às deidh caitheamh sucrose air a thomhas air làithean leantainneach àrdachadh gu mòr a-mhàin airson na h-ùine 3 min dìreach às deidh caitheamh sucrose air an t-seachdamh latha de thrèanadh. Chaidh barrachd gnìomhachd fhaicinn dìreach às deidh sucrose a bhith a ’tòiseachadh ann an latha 3 de thrèanadh, ach cha do dh’ fhàs e gu math eadar-dhealaichte gu latha 7. Tha an cùrsa ùine seo de ghnìomhachd a ’buntainn ris a’ chùrsa ùine de chruinneachadh de GluA1 ann an dendrites cridhe accumbens. Bha an àrdachadh locomotion mar thoradh gnìomh de mhalairt CPAR gu synapses MSN ann an cridhe accumbens bho chuir stealladh Naspm a-steach don chridhe bacadh air àrdachadh ann an gnìomhachd. Sheall casg air locomotion àrdaichte le inhibitor gabhadair NMDA gu robh feum air soidhneadh glutamate tro gabhadairean NMDA a bharrachd air CPARs gus gnìomhachd locomotor àrdachadh. Cha deach buaidh a thoirt air ionnsaigh sucrose, ge-tà, le bacadh air comharran glutamate, a rèir sgrùdaidhean roimhe a ’sealltainn gu bheil cridhe accumbens an sàs ann an orchestration de fhreagairtean motair co-cheangailte ri duais orosensory ach chan e caitheamh fhèin (Smith, 2004). Chaidh aithris air cùrsa ùine den aon seòrsa airson leasachadh hyperlocomotion airson a bhith a ’leasachadh trom-inntinn suidheachadh ann am beathaichean a’ biadhadh am biadh làitheil ann an àrainneachd shònraichte (Matthews et al., 1996). Nam biodh an fhreagairt a th ’ann an-dràsta trom-inntinn cumhaichte ag èirigh bho bhith a’ càradh co-theacsa agus sucrose, ge-tà, bhiodh e air a bhith air thoiseach air lìbhrigeadh sucrose, nach deach a choimhead. Tha e comasach gu bheil na cuspairean a ’nochdadh dùsgadh sgrùdaidh. Bhiodh feum air tuilleadh dheuchainnean gus eadar-dhealachadh a dhèanamh an robh locomotion àrdaichte an dèidh ionnsaigh sucrose na bhrosnachadh airson sgrùdadh an àite seòrsa de mhothachadh motair no giùlan eile. Ann an suidheachadh sam bith, bha àrdachadh locomotion spontaneous ag iarraidh soidhneadh glutamate, agus thàinig e, gu ìre co-dhiù, bho bhith a ’toirt a-steach CPARs ann an cridhe accumbens.

Dh ’fhaodadh gum bi barrachd gnìomhachd locomotor às deidh ionnsaigh sucrose a’ tighinn gu dìreach bhon chumhachd a thathas a ’faicinn de phrìomh synapses accumbens, leis gu bheil barrachd toradh bhon t-slighe ganglia basal dìreach a’ brosnachadh gluasad tro bhith a ’cuir casg air thalamus motair (Sesack and Grace, 2010). Tbidh e a ’neartachadh synapses as coltaiche a bhith a’ fuireach air slighe dhìreach accumbens neurons, a tha a ’cur an cèill D1Rs. Thigeadh neartachadh synapses neurons slighe dhìreach ma bhrosnaicheadh ​​gnìomhachd D1R malairt dhaoine ann an GluA1 anns a bheil AMPARs gu synapses anns na neurons sin às deidh leigeil às dopamine làidir. Bhiodh an potentiation a tha mar thoradh air sin a ’meudachadh gnìomhachd ann an ro-mheasaidhean bacaidh de neurons slighe dìreach gu niuclasan toradh ganglia basal, mar sin a’ cur casg air thalamus motair agus a ’brosnachadh gnìomhachd cortex motair (Gerfen agus Surmeier, 2011; Kravitz et al., 2010; Sesack and Grace, 2010). Tha an potentiation synaptic a chaidh a choimhead às deidh a bhith a ’faighinn a-steach gu tric sucrose a’ tachairt gu sònraichte ann an neurons slighe dhìreach oir faodaidh dopamine ag obair tron ​​gabhadair D1 fosphorylation GluA1 S845 a thoirt air adhart, a ’leantainn gu malairt uachdar.

Tha grunn sgrùdaidhean air sgrùdadh a dhèanamh air buaidhean brosnachaidh leantainneach le cocaine agus an uairsin air a tharraing air ais, làimhseachadh a bheir buaidh mhòr air obair siostam duais agus mu dheireadh a ’leantainn gu mothachadh cocaine, a tha air a chomharrachadh le freagairt motair àrdaichte gu cocaine, craving dhrogaichean agus ath-sgaoileadh (Kalivas et al., 1998). Le in-stealladh IP a-rithist le cocaine airson làithean 5 - 10 agus an uairsin air a tharraing air ais thàinig àrdachadh mean air mhean thairis air làithean 14 ann an gabhadairean AMPA anns a bheil GluA2. (Boudreau et al., 2007; Kourrich et al., 2007). Ach, aig làithean 45 de tharraing air ais às deidh 10 d de fhèin-rianachd, chaidh àrdachadh mòr ann an clàr-amais ceartachaidh fhaicinn ann an MSNs radan (McCutcheon et al., 2011b) a ’comharrachadh àrdachadh ann an CPARn. Mar sin, chaidh malairt CPAR a choimhead às deidh an dà chuid ionnsaigh sucrose, san obair a tha ann an-dràsta, agus fèin-rianachd cocaine, ged a tha e fo chumhachan làimhseachaidh gu math eadar-dhealaichte. Leis nach eil fios dè a ’bhuaidh a th’ aig fèin-rianachd no in-stealladh cocaine (me, aig post 5 mionaid), chan urrainnear gnìomh cocaine a choimeas gu dìreach ris an obair sucrose a th ’ann an-dràsta. Mar an ceudna, chan eil fios a bheil CPARs a ’leantainn air adhart ann an synapses MSN de bheathaichean le trèanadh sucrose às deidh dhaibh stad a chur air trèanadh sucrose no ma tha na beathaichean sin a’ nochdadh mothachadh sucrose às deidh dhaibh a bhith air an toirt air falbh fada.

Tha a bhith a ’tuigsinn mar a bhios brosnachaidhean buannachdail a’ riaghladh plastachd agus giùlan accumbens deatamach airson dèiligeadh ri tràilleachd, hyperphagia, gambling pathological, agus eas-òrdughan giùlain eile (Basar et al., 2010; Berridge, 2009; Luscher agus Malenka, 2011). Tha cus siùcar a ’cur ris an tinneas reamhrachd (Hu agus Malik, 2010), agus ged a dh ’fhaodadh e a bhith coltach ri ana-cleachdadh dhrugaichean (Avena et al., 2008), cha deach sgrùdadh farsaing a dhèanamh air an dòigh-obrach aige. Tha na co-dhùnaidhean làithreach a ’stèidheachadh eileamaidean bunaiteach de plasticity air a bhrosnachadh le duais bhon urrainn do sgrùdaidhean san àm ri teachd dèiligeadh ri riaghladh giùlan iom-fhillte, a dh’ fhaodadh a bhith a ’toirt seachad slighean ùra gus aghaidh a thoirt air pathologies co-cheangailte ri duais.

Acknowledgments

Tha sinn a ’toirt taing do bhuill Saotharlann Ziff, an-dè agus an-diugh, airson taic theicnigeach agus còmhraidhean feumail, nam measg H. Girma, L. Lee agus Drs. B. Fernholz, B. Jordan, W. Lu, G. Rameau, S. Restituito & Y. Serulle. Fhuair an obair seo taic bho Caidreachas Predoctoral Institiud Nàiseanta Slàinte Inntinn F31MH76617-01 agus Tabhartas Trèanaidh NIH 5T32DC000063 gu Prògram Trèanaidh Oilthigh New York anns na Neo-eòlasan (DST), R01NS061920 bho Institiud Nàiseanta Eas-òrdughan Neuro-eòlach agus Stròc (EBZ), 1R21MH091445- 01 bhon Institiud Nàiseanta Slàinte Inntinn agus Oifis Sgrùdaidh air Slàinte Bhoireannaich, Prògram Tabhartasan Bunait Teaghlaich Klarman ann an Rannsachadh Eas-òrdughan Ithe, Maoin Dùbhlan Rannsachaidh NYU agus P30EY13079 (CA), Institiud Nàiseanta air Mì-chleachdadh Dhrugaichean DA003956 agus Duais Neach-sgrùdaidh Neo-eisimeileach bho NARSAD (KDC), Institiud Nàiseanta Bodhar agus Eas-òrdughan Conaltraidh eile a ’toirt DC009635 gu RCF, agus le tabhartas sìl san Ionad Sàr-mhathais air Tràilleachd bho Ionad Meidigeach Langone Oilthigh New York.

Footnotes

Strì eadar com-pàirtean: Chan eil na h-ùghdaran a ’foillseachadh com-pàirtean ionmhasail farpaiseach.

iomraidhean

  1. Avena NM, Rada P, Hoebel BG. Fianais air tràilleachd siùcair: buaidhean giùlain agus neurochemical aig toirt a-steach sùgh mòr, siùcair. Neurosci Biobehav An t-Urr. 2008; 32: 20 – 39. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
  2. Basar K, Sesia T, Groenewegen H, Steinbusch HW, Visser-Vandewalle V, Temel Y. Nucleus accumbens agus impulsivity. Prog Neurobiol. 2010; 92: 533 - 557. [Sgaoileadh]
  3. Berridge KC. Duaisean bìdh 'dèidheil' agus 'ag iarraidh': substrathan eanchainn agus dreuchdan ann an eas-òrdughan ithe. Eòlas-cuirp & giùlan. 2009; 97: 537–550. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
  4. Boehm J, Kang MG, Johnson RC, Esteban J, Huganir RL, Malinow R. Tha toirt a-steach synaptic de gabhadairean AMPA rè LTP fo smachd làrach fosphorylation PKC air GluR1. Neuron. 2006; 51: 213 - 225. [Sgaoileadh]
  5. Boudreau AC, Reimers JM, Milovanovic M, Wolf ME. Bidh gabhadairean uachdar cealla AMPA anns na radan niuclas accumbens a ’meudachadh nuair a thèid cocaine a thoirt air falbh ach a-staigh às deidh dùbhlan cocaine ann an co-bhonn ri atharrachadh ann an gnìomh kinases pròtain mitogen-activated. J Neurosci. 2007; 27: 10621 - 10635. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
  6. Brebner K, Wong TP, Liu L, Liu Y, Campsall P, Grey S, Phelps L, Phillips AG, Wang YT. Tha niuclas a ’lughdachadh trom-inntinn fad-ùine agus a bhith a’ cur an cèill mothachadh giùlain. Saidheans. 2005; 310: 1340 - 1343. [Sgaoileadh]
  7. Cacciapaglia F, Saddoris BP, Wightman RM, Carelli RM. Bidh daineamaigs sgaoilidh dopamine eadar-dhealaichte anns a ’chrann niùclasach accumbens cridhe agus slige a’ cumail sùil air taobhan sònraichte de ghiùlan air a stiùireadh le amasan airson sucrose. Neuropharmacology 2012 [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
  8. Calabresi P, Maj R, Pisani A, Mercuri NB, Bernardi G. Ìsleachadh synaptic fad-ùine anns an striatum: caractar fios-eòlasach agus cungaidh-leigheis. J Neurosci. 1992; 12: 4224 - 4233. [Sgaoileadh]
  9. Carr KD, Chau LS, Cabeza de Vaca S, Gustafson K, Stouffer M, Tukey DS, Restituito S, Ziff EB. Thug fo-ghabhadain gabhadair AMPA GluR1 sìos an abhainn de bhrosnachadh gabhadair dopamine D-1 ann am meadhanan slige niuclas accumbens àrdachadh meud duais dhrogaichean ann am radain cuibhrichte le biadh. Neo-eòlas. 2010; 165: 1074 - 1086. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
  10. Conrad KL, Tseng KY, Uejima JL, Reimers JM, Heng LJ, Shaham Y, Marinelli M, Wolf ME. Cruthachadh accumbens GluR2-dìth gabhadairean AMPA a ’meadhanachadh brùthadh cocaine. Nàdar. 2008; 454: 118 - 121. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
  11. Latha JJ, Carelli RM. Bidh an niuclas accumbens agus Pavlovian a ’toirt duais do ionnsachadh. Neuroscientist. 2007; 13: 148 - 159. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
  12. de Araujo IE, Oliveira-Maia AJ, Sotnikova TD, Gainetdinov RR, Caron MG, Nicolelis MA, Simon SA. Duais bìdh às aonais comharran gabhadair blas. Neuron. 2008; 57: 930 - 941. [Sgaoileadh]
  13. Ehlers MD, Heine M, Groc L, Lee MC, Choquet D. Trapping diffusional de gabhadairean GluR1 AMPA le gnìomhachd synaptic sònraichte a-steach. Neuron. 2007; 54: 447 - 460. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
  14. Bidh Esteban JA, Shi SH, Wilson C, Nuriya M, Huganir RL, Malinow R. PKA fosphorylation de subunits gabhadair AMPA a ’cumail smachd air malairt synaptic fo phlastaig. Nat Neurosci. 2003; 6: 136 - 143. [Sgaoileadh]
  15. Gerfen CR, Surmeier DJ. Mion-atharrachadh siostaman teilgeadh striatal le dopamine. Ath-sgrùdadh bliadhnail air neur-eòlas. 2011; 34: 441 - 466. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
  16. Grueter BA, Brasnjo G, Malenka RC. Bidh postynaptic TRPV1 a ’piobrachadh trom-inntinn fad-ùine sònraichte cealla anns na nucleus accumbens. Neo-eòlas nàdair. 2010; 13: 1519 - 1525. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
  17. He K, Òran L, Cummings LW, Goldman J, Huganir RL, Lee HK. A ’bunailteachadh gabhadairean Ca2 + -permeable AMPA aig làraich perisynaptic le fosphorylation GluR1-S845. Proc Natl Acad Sci US A. 2009; 106: 20033 - 20038. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
  18. Hu FB, Malik VS. Deochan milis-siùcair agus cunnart reamhrachd agus tinneas an t-siùcair seòrsa 2: fianais epidemiologic. Eòlas-cuirp & giùlan. 2010; 100: 47–54. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
  19. Isaac JT, Ashby MC, McBain CJ. Dreuchd an fho-ionad GluR2 ann an gnìomh gabhadair AMPA agus plastachd synaptic. Neuron. 2007; 54: 859 - 871. [Sgaoileadh]
  20. Jordan BA, Fernholz BD, Boussac M, Xu C, Grigorean G, Ziff EB, Neubert TA. Comharrachadh agus dearbhadh pròtanan dùmhlachd postynaptic creimich nobhail. Proteomics Mol Cell. 2004; 3: 857 - 871. [Sgaoileadh]
  21. Kalivas PW, Pierce RC, Còrnais J, Sorg BA. Dreuchd airson mothachadh ann an sgàineadh agus ath-sgaoileadh ann an tràilleachd cocaine. J Pharmacol. 1998; 12: 49 - 53. [Sgaoileadh]
  22. Kitagawa M, Kusakabe Y, Miura H, Ninomiya Y, Hino A. Comharrachadh ginteil moileciuil de ghine gabhadair tagraiche airson blas milis. Conaltradh rannsachaidh bith-cheimiceach agus bith-cheimigeach. 2001; 283: 236 - 242. [Sgaoileadh]
  23. Kourrich S, Rothwell PE, Klug JR, Thomas MJ. Bidh eòlas cocaine a ’cumail smachd air plastachd synaptic bidirectional anns na nucleus accumbens. J Neurosci. 2007; 27: 7921 - 7928. [Sgaoileadh]
  24. Kravitz AV, Freeze BS, Parker PR, Kay K, Thwin MT, Deisseroth K, Kreitzer AC. Riaghladh giùlan motair parkinsonian le smachd optogenetic air circuitry ganglia basal. Nàdar. 2010; 466: 622 - 626. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
  25. LaPlant Q, Vialou V, Covington HE, 3rd, Dumitriu D, Feng J, Warren BL, Maze I, Dietz DM, Watts EL, Iniguez SD, et al. Bidh Dnmt3a a ’riaghladh giùlan tòcail agus plastachd an spine anns na nucleus accumbens. Nat Neurosci. 2010; 13: 1137 - 1143. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
  26. Liu SJ, Zukin RS. Gabhadairean Ca2 + -permeable AMPA ann am plastachd synaptic agus bàs neuronal. Gluasadan ann an neur-saidheans. 2007; 30: 126 - 134. [Sgaoileadh]
  27. Lu W, Isozaki K, Roche KW, Nicoll RA. Tha cuimseachadh synaptic de gabhadairean AMPA air a riaghladh le làrach CaMKII anns a ’chiad lùb intracellular de GluA1. Proc Natl Acad Sci US A. 2010; 107: 22266 - 22271. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
  28. Lu W, Roche KW. Riaghladh posttranslational de mhalairt gabhadan AMPA agus gnìomh. Beachd gnàthach ann an neurobiology 2011 [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
  29. Luscher C, Malenka RC. Plastachd synaptic air a bhrosnachadh le drogaichean ann an tràilleachd: bho atharrachaidhean moileciuil gu ath-dhealbhadh cuairteachaidh. Neuron. 2011; 69: 650 - 663. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
  30. Makino H, Malinow R. Gabhail a-steach gabhadair AMPA a-steach do synapses rè LTP: àite gluasad taobhach agus exocytosis. Neuron. 2009; 64: 381 - 390. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
  31. Mameli M, Halbout B, Creton C, Engblom D, Parkitna JR, Spanagel R, Luscher C. Plastachd synaptic air a bhrosnachadh le cocaine: tha seasmhachd anns an VTA a ’piobrachadh atharrachaidhean anns an NAc. Nat Neurosci. 2009; 12: 1036 - 1041. [Sgaoileadh]
  32. Masuda K, Koizumi A, Nakajima K, Tanaka T, Abe K, Misaka T, Ishiguro M. Caractar nam modhan ceangail eadar gabhadair blas milis daonna agus todhar milis le cuideam ìosal molecular. PloS aon. 2012; 7: e35380. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
  33. Matthews K, Wilkinson LS, Robbins TW. Bidh dealachadh màthaireil de radain preweanling a-rithist a ’lughdachadh freagairtean giùlain do bhrosnachaidhean bun-sgoile agus cumhaichte ann an ìre inbheach. Giùlan Physiol. 1996; 59: 99 - 107. [Sgaoileadh]
  34. Max M, Shanker YG, Huang L, Rong M, Liu Z, Campagne F, Weinstein H, Damak S, Margolskee RF. Tha Tas1r3, a ’còdachadh gabhadair blas tagraiche ùr, a rèir an locus freagairteachd milis Sac. Gintinneachd nàdur. 2001; 28: 58 - 63. [Sgaoileadh]
  35. McCutcheon JE, Beeler JA, Roitman MF. Bidh glacaidhean ro-innseach sucrose a ’dùsgadh barrachd sgaoileadh dopamine ìre na cuisean ro-innse saccharin. Synapse. 2012; 66: 346 - 351. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
  36. Tha gabhadairean McCutcheon JE, Wang X, Tseng KY, Wolf ME, Marinelli M. Calcium-permeable AMPA an làthair ann an synapses niuclas accumbens às deidh dhaibh a bhith air an toirt air falbh bho fhèin-rianachd cocaine ach chan eil cocaine air a rianachd le deuchainnean. The Journal of neuroscience: iris oifigeil Comann Neuroscience. 2011a; 31: 5737 - 5743. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
  37. McCutcheon JE, Loweth JA, Ford KA, Marinelli M, Wolf ME, Tseng KY. Tha gnìomhachadh Buidheann I mGluR a ’cur cùl ri cruinneachadh de gabhadairean AMPA calcium-permeable ann an niuclas accumbenssynapses tro inneal C-protein protein kinase. J Neurosci. 2011b; 31: 14536 - 14541. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
  38. Bidh gabhadairean NPAlescu H, Kelso CM, Lazaro-Munoz G, Purpura M, Cain CK, Ledoux JE, Aoki C. Endogenous GluR1 anns a bheil gabhadairean AMPA a ’gluasad gu synapses asymmetric anns an amygdala fadalach aig ìre thràth de chruthachadh cuimhne eagal: electron microscopic immunocytochemical sgrùdadh. An Iris de neurology coimeasach. 2010; 518: 4723 - 4739. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
  39. Nelson G, Hoon MA, Chandrashekar J, Zhang Y, Ryba NJ, Zuker CS. Gabhadairean blas milis mamaire. Cell. 2001; 106: 381 - 390. [Sgaoileadh]
  40. Oh MC, Derkach VA, Guire ES, Soderling TR. Bidh malairt membran extrasynaptic air a riaghladh le GluR1 serine 845 phosphorylation a ’prìomhadh gabhadairean AMPA airson potentiation fad-ùine. J Biol Chem. 2006; 281: 752 - 758. [Sgaoileadh]
  41. Pascoli V, Turiault M, Luscher C. Tha tionndadh air ais de chumhachdachadh synaptic le cocaine ag ath-shuidheachadh giùlan atharrachail a tha air a bhrosnachadh le drogaichean. Nàdar. 2012; 481: 71 - 75. [Sgaoileadh]
  42. Lusan K, Pelkey ​​KA, Bortolotto ZA, Morita D, Terashima A, McBain CJ, Collingridge GL, Isaac JT. Gabhail a-steach gluasadach de gabhadairean AMPA dùthchasach GluR2-dìth rè potentiation fad-ùine hippocampal. Nat Neurosci. 2006; 9: 602 - 604. [Sgaoileadh]
  43. Rada P, Avena NM, Hoebel BG. Bidh biadhadh làitheil air siùcar a-rithist a ’leigeil a-mach dopamine anns an t-slige accumbens. Neo-eòlas. 2005; 134: 737 - 744. [Sgaoileadh]
  44. Roche KW, O'Brien RJ, Mammen AL, Bernhardt J, Huganir RL. Caractar grunn làraich fosphorylation air fo-ionad gabhadair AMPA GluR1. Neuron. 1996; 16: 1179 - 1188. [Sgaoileadh]
  45. Rumpel S, LeDoux J, Zador A, Malinow R. Malairt gabhadan postynaptic mar bhunait air seòrsa de ionnsachadh ceangail. Saidheans. 2005; 308: 83 - 88. [Sgaoileadh]
  46. Sainz E, Korley JN, Battey JF, Sullivan SL. Comharrachadh ball nobhail de theaghlach T1R de gabhadairean blas putative. Iris de neurochemistry. 2001; 77: 896 - 903. [Sgaoileadh]
  47. Serulle Y, Zhang S, Ninan I, Puzzo D, McCarthy M, Khatri L, Arancio O, Ziff EB. Bidh eadar-obrachadh GluR1-cGKII a ’riaghladh malairt gabhadan AMPA. Neuron. 2007; 56: 670 - 688. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
  48. Sesack SR, Grace AA. Lìonra duais Cortico-Basal Ganglia: microcircuitry. Neuropsychopharmacology: foillseachadh oifigeil Colaiste Ameireagaidh Neuropsychopharmacology. 2010; 35: 27 - 47. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
  49. Dotair Mac a ’Ghobhainn. Bidh Accumbens dopamine a ’meadhanachadh buaidh buannachdail brosnachadh orosensory le sucrose. Blas. 2004; 43: 11 - 13. [Sgaoileadh]
  50. Smith WB, Starck SR, Roberts RW, Schuman EM. Bidh brosnachadh dopaminergic de synthesis pròtain ionadail a ’neartachadh faireachdainn uachdar de GluR1 agus sgaoileadh synaptic ann an neurons hippocampal. Neuron. 2005; 45: 765 - 779. [Sgaoileadh]
  51. Sun X, Milovanovic M, Zhao Y, Wolf ME. Bidh brosnachadh gabhadair dopamine géar agus cronach ag atharrachadh malairt gabhadan AMPA ann an niuclas accumbens neurons a tha air an co-luachadh le neurons cortex prefrontal. The Journal of neuroscience: iris oifigeil Comann Neuroscience. 2008; 28: 4216 - 4230. [Artaigil saor PMC] [Sgaoileadh]
  52. Sun X, Zhao Y, Wolf ME. Bidh brosnachadh gabhadair dopamine ag atharrachadh cuir a-steach synaptic gabhadair AMPA ann an neurons cortex prefrontal. J Neurosci. 2005; 25: 7342 - 7351. [Sgaoileadh]
  53. Tòmas MJ, Beurrier C, Bonci A, Malenka RC. Luaidh fad-ùine anns an niùclas accumbens: co-cheangal niùclach de mhothachadh giùlain ri cocaine. Nat Neurosci. 2001; 4: 1217 – 1223. [Sgaoileadh]
  54. MA Ungless, Whistler JL, Malenka RC, Bonci A. Bidh foillseachadh singilte cocaine ann an vivo a ’brosnachadh potentiation fad-ùine ann an neurons dopamine. Nàdar. 2001; 411: 583 - 587. [Sgaoileadh]
  55. Whitlock JR, Heynen AJ, Shuler MG, Bear MF. Bidh ionnsachadh ag adhbhrachadh neartachadh fad-ùine anns an hippocampus. Saidheans. 2006; 313: 1093 - 1097. [Sgaoileadh]