Bidh galair gabhaltach ghrelin (GHS-R1A) a ’toirt buaidh air feartan luachmhor morphine agus ag àrdachadh ìrean peptide opioid ann an àitean duais ann an luchagan (2015)

Eur Neuropsychopharmacol. 2015 Oct 21. pii: S0924-977X (15) 00329-6. doi: 10.1016 / j.euroneuro.2015.10.004.

Engel JA1, Nylander I.2, Jerlhag E.3.

Abstract

Chaidh a ràdh o chionn ghoirid gu bheil àite aig hormonaichean eanchainn gut mar ghrelin ann an riaghladh dhuaisean. Bha fios gu traidiseanta aig Ghrelin a bhith a ’riaghladh toirt a-steach biadh agus homoeostasis cuideam bodhaig. A bharrachd air an sin, tha obair o chionn ghoirid air comharrachadh gu bheil àite ùr aig a ’pheptide seo ann an duais a tha air a bhrosnachadh le drogaichean, a’ toirt a-steach àrdachadh air a bhrosnachadh le morphine anns na h-ìrean extracellular de dopamine accumbal ann am radain. An seo chaidh sgrùdadh a dhèanamh air buaidh an gabhadair ghrelin receptor (GHS-R1A), JMV2959, air gnìomhachd morphine air a bhrosnachadh leis an t-siostam dopamine mesolimbic ann an luchagan. A bharrachd air an sin, chaidh sgrùdadh a dhèanamh air buaidhean rianachd JMV2959 air ìrean peptide opioid ann an raointean co-cheangailte ri duais. Anns an t-sreath de dheuchainnean a th ’ann an-dràsta sheall sinn gu bheil rianachd JMV2959 peripheral, aig dòs gun èifeachd per se, a’ lughdachadh comas morphine gus brosnachadh locomotor adhbhrachadh, àrdachadh ìrean extracellular de dopamine accumbal agus suidheachadh àite a shuidheachadh ann an luchagan. Mheudaich rianachd JMV2959 ìrean teann de Met-enkephalin-Arg6Phe7 anns an sgìre teasach ventral, dynorphin B ann an hippocampus agus Leu-enkephalin-Arg6 ann an striatum. Mar sin tha sinn a ’gabhail a-steach smaoineachadh gu bheil JMV2959 a’ cur casg air duais a tha air a bhrosnachadh le morphine tro bhith a ’brosnachadh peptidean gnìomhach gabhadair delta ann an raointean teactal striatum agus ventral. A bharrachd air an sin, faodaidh peptidean hippocampal a bhios a ’gnìomhachadh gabhadair kappa a bhith an sàs ann an comas JMV2959 gus riaghladh cuimhne duais a riaghladh. Leis gu bheil leasachadh tràilleachd dhrogaichean an urra, co-dhiù ann am pàirt, de bhuaidh dhrogaichean addictive air an t-siostam dopamine mesolimbic tha an dàta a th ’ann an-dràsta a’ moladh gu bheil antagonists GHS-R1A airidh air a bhith air an soilleireachadh mar ro-innleachdan làimhseachaidh nobhail de chur-ris opioid.

 

 

 

 
   

Abstract

Chaidh a ràdh o chionn ghoirid gu bheil àite aig hormonaichean eanchainn gut mar ghrelin ann an riaghladh dhuaisean. Bha fios gu traidiseanta aig Ghrelin a bhith a ’riaghladh toirt a-steach biadh agus homoeostasis cuideam bodhaig. A bharrachd air an sin, tha obair o chionn ghoirid air comharrachadh gu bheil àite ùr aig a ’pheptide seo ann an duais a tha air a bhrosnachadh le drogaichean, a’ toirt a-steach àrdachadh air a bhrosnachadh le morphine anns na h-ìrean extracellular de dopamine accumbal ann am radain. An seo chaidh sgrùdadh a dhèanamh air buaidh an gabhadair ghrelin receptor (GHS-R1A), JMV2959, air gnìomhachd morphine air a bhrosnachadh leis an t-siostam dopamine mesolimbic ann an luchagan. A bharrachd air an sin, chaidh sgrùdadh a dhèanamh air buaidhean rianachd JMV2959 air ìrean peptide opioid ann an raointean co-cheangailte ri duais. Anns an t-sreath de dheuchainnean a tha ann an-dràsta sheall sinn gu robh rianachd JMV2959 peripheral, aig dòs gun èifeachd per se, a ’lughdachadh comas morphine gus brosnachadh locomotor adhbhrachadh, àrdachadh ìrean extracellular de dopamine accumbal agus suidheachadh àite a shuidheachadh ann an luchagan. Mheudaich rianachd JMV2959 ìrean teann de Met-enkephalin-Arg6Phe7 anns an sgìre teasach ventral, dynorphin B ann an hippocampus agus Leu-enkephalin-Arg6 ann an striatum. Mar sin tha sinn a ’gabhail beachd gu bheil JMV2959 a’ cur casg air duais a tha air a bhrosnachadh le morphine via brosnachadh peptidean gnìomhach gabhadair delta ann an raointean teactal striatum agus ventral. A bharrachd air an sin, faodaidh peptidean hippocampal a bhios a ’gnìomhachadh gabhadair kappa a bhith an sàs ann an comas JMV2959 gus riaghladh cuimhne duais a riaghladh. Leis gu bheil leasachadh tràilleachd dhrogaichean an urra, co-dhiù ann am pàirt, de bhuaidh dhrogaichean addictive air an t-siostam dopamine mesolimbic tha an dàta a th ’ann an-dràsta a’ moladh gu bheil antagonists GHS-R1A airidh air a bhith air an soilleireachadh mar ro-innleachdan làimhseachaidh nobhail de chur-ris opioid.

 

 

 

 

1. Ro-ràdh

Bidh luathachadh a bharrachd air foillseachadh cronail de dhrogaichean addictive a ’toirt buaidh mhòr air an t-siostam dopamine mesolimbic, prìomh chuairt chudromach de na siostaman duais eanchainn (Nestler, 2005). Chaidh na buaidhean seo a mholadh mar bhunait, co-dhiù ann am pàirt, ri leasachadh tràilleachd dhrogaichean (Wise, 2004). Tha tràilleachd dhrugaichean ag adhbhrachadh raon farsaing de bhuaidhean cronail don neach fa leth a bharrachd air a ’chomann-shòisealta agus tha feum air eadar-theachdan lèigheasach ùr-nodha, a tha a’ làimhseachadh an duilgheadas mòr seo a thaobh slàinte a ’phobaill (Koob agus Le Moal, 2001). Le bhith a ’soilleireachadh nan siostaman comharran a tha a’ meadhanachadh comas dhrogaichean addictive gus an siostam dopamine mesolimbic a ghnìomhachadh, faodar ro-innleachdan làimhseachaidh sònraichte airson eas-òrdughan cleachdadh stuthan a chomharrachadh.

Tha rannsachadh air sealltainn gu bheil uidheaman neurobiologic cumanta a ’riaghladh toirt a-steach agus duais a tha air am brosnachadh le biadh agus drogaichean addictive (Morganstern et al., 2011), a’ moladh gum bi àite nam peptidean gut-eanchainn riaghlaidh bìdh mar ghrelin a ’toirt a-steach meadhanachadh duais. An toiseach, chaidh a shealltainn gu bheil ghrelin ag adhbhrachadh leigeil ma sgaoil hormona fàis (Kojima et al., 1999) agus a ’brosnachadh adiposity ann am radain (Tschop et al., 2000). Gu ruige seo tha fios gu bheil ghrelin a ’meudachadh toirt a-steach biadh, acras a bharrachd air a bhith a’ brosnachadh miann via cuairtean hypothalamic (airson ath-sgrùdadh faic Egecioglu et al. (2011)). A bharrachd air an hypothalamus, tha gabhadairean ghrelin (GHS-R1A) air an cur an cèill ann an raointean co-cheangailte ri duais leithid an amygdala, striatum, cortex prefrontal, sgìre teasach ventral (VTA) agus hippocampus (airson lèirmheas faic Engel and Jerlhag (2014)) a ’ciallachadh sin tha dreuchd eòlas-eòlasach ghrelin a ’leudachadh nas fhaide na riaghladh homoeostasis lùth. Gu dearbh, chaidh sealltainn gu robh an ghrelin orexigenic peptide mar ghnìomhaiche den t-siostam dopamine mesolimbic a bharrachd air riaghladair duais, brosnachadh agus toirt a-steach deoch làidir, nicotine, amphetamine agus cocaine ann an luchagan (airson lèirmheas faic Engel and Jerlhag (2014)).

Bidh opioids, mar dhrogaichean addictive eile, a ’gnìomhachadh an t-siostam dopamine mesolimbic ag adhbhrachadh leigeil às dopamine accumbal via gnìomhachadh gabhadairean μ- agus / no δ-opioid anns na nucleus accumbens (NAc) (Hirose et al., 2005, Murakawa et al., 2004, Yoshida et al., 1999) agus anns an VTA, a rèir coltais le bhith a ’lughdachadh an GABA -deachd de neurons dopamine (Johnson agus North, 1992). A bharrachd air an sin, bidh gabhadairean κ-opioid accumbal a ’riaghladh gnìomhachd siostam dopamine mesolimbic (Chefer et al., 2005, Spanagel et al., 1992). Bidh nochdadh a-rithist air opioids a ’toirt a-mach atharrachaidhean atharrachail de ghrunn neurotransmitters, a’ toirt a-steach peptidean opioid, ann an raointean duais, a tha a ’cur ri leasachadh tràilleachd (De Vries agus Shippenberg, 2002). Ann am radain tha casg pharmacologach den GHS-R1A a ’lagachadh sgaoileadh dopamine accumbal morphine a bharrachd air giùlan stereotypic (Sustkova-Fiserova et al., 2014). B ’e amas a’ chiad phàirt den t-sreath de dheuchainnean a bh ’ann an-dràsta sgrùdadh a dhèanamh air a’ bhuaidh gheur a th ’aig antagonist GHS-R1A, JMV2959, air comas morphine a bhith ag adhbhrachadh brosnachadh locomotor, leigeil dopamine accumbal agus roghainn àite suidheachadh ann an luchagan. B ’e amas an dàrna pàirt den sgrùdadh seo measadh a dhèanamh air buaidh làimhseachadh JMV2959 a-rithist no làimhseachadh ghrelin air ìrean peptide opioid (Met-enkephalin-Arg6Phe7 (MEAP), dynorphin B (DynB) agus Leu-enkephalin-Arg6 (LeuArg)) ann an raointean co-cheangailte ri duais a ’toirt a-steach an amygdala, striatum, cortex prefrontal, VTA agus hippocampus.

 

 

2. Modhan deuchainneach

 

 

2.1. Ainmhidhean

Chaidh luchagan NMRI fireann iar-pubertal a bha a ’maidseadh aois (8 - 12 seachdainean a dh’aois agus cuideam bodhaig 25 - 40 g; Charles River, Sulzfeld, a’ Ghearmailt). Gu h-aithghearr, chaidh na luchagan uile a chumail ann am buidhnean agus air an cumail suas aig cearcall aotrom / dorcha 12 / 12 h (solais air aig seachd am). Chaidh uisge tap agus biadh (chow àbhaisteach; Harlan Teklad, Norfolk, Sasainn) a thoirt seachad ad libitum, ach a-mhàin rè na suidheachaidhean deuchainneach. Chaidh luchagan ùra a chleachdadh airson gach deuchainn giùlan singilte a bharrachd air airson mion-sgrùdadh peptide opioid. Chaidh na deuchainnean aontachadh le Comataidh Beusach na Suaine air Rannsachadh Bheathaichean ann an Gothenburg. Chaidh a h-uile oidhirp a dhèanamh gus fulangas bheathaichean a lughdachadh, agus an àireamh de bheathaichean a thathas a ’cleachdadh a lughdachadh. Bha cead aig a h-uile beathach gabhail a-steach co-dhiù seachdain mus do thòisich na deuchainnean.

 

 

2.2. Drogaichean

Chaidh morphine hydrochloride (Ospadal Apoteksbolaget Sahlgrenska; Gothenburg, an t-Suain) a sgaoileadh ann an carbad (fuasgladh 0.9% sodium chloride) agus chaidh a rianachd ip aig dòs de 20 mg / kg 10 min mus deach an deuchainn a thòiseachadh. Chaidh an dòs seo a thaghadh leis nach do dh ’adhbhraich dòs nas ìsle (10 mg / kg, ip) brosnachadh locomotor anns na luchagan againn (cha deach dàta a shealltainn). Chaidh an dòs taghte (6 mg / kg, ip) de JMV2959 (synthesized aig Institut des Biomolécules Max Mousseron (IBMM), Oilthighean UMR5247, CNRS, Montpellier 1 agus 2, An Fhraing), antagonist GHS-R1A. gun bhuaidh sam bith air gnìomhachd locomotor, leigeil dopamine accumbal agus roghainn àite suidheachadh ann an luchagan (Jerlhag et al., 2009). Chaidh JMV2959 a sgaoileadh ann an carbad (fuasgladh sodium chloride 0.9%) agus bha e an-còmhnaidh air a rianachd fichead mionaid mus do nochd morphine no decapitation airson mion-sgrùdadh air ìrean peptide opioid. Cha tug an dòs taghte de JMV2959 buaidh air giùlan làn luchainn ann an deuchainn sam bith. Airson na deuchainnean giùlain chaidh JMV2959 a rianachd gu cruaidh bhon a tha na sgrùdaidhean dòrainneach againn a ’sealltainn gu bheil aon in-stealladh de JMV2959 a’ lughdachadh duais a tha air a bhrosnachadh le drogaichean (airson lèirmheas faic Engel agus Jerlhag (2014)). Chaidh JMV2959 a rianachd gu fo-chronail airson còig latha às deidh sin airson an anailis peptide opioid gus an gabhadh buaidh làidir a lorg. A bharrachd air an sin, le in-stealladh a-rithist bidh thu a ’seachnadh a’ bhuaidh iongantach a dh ’fhaodadh a bhith aig cuideam in-stealladh air peptidean. Chaidh ratreut ghrelin rat (Bionuclear; Bromma, an t-Suain) a lagachadh ann an sodium chloride 0.9% agus chaidh sealltainn roimhe seo gu bheil an dòs taghte de ghrelin (0.33 mg / kg, ip) ag adhbhrachadh duais ann an luchagan (Jerlhag, 2008). Chaidh dealbhadh cothromach a chleachdadh airson gach dùbhlan dhrogaichean.

 

 

2.3. Deuchainnean gnìomhachd locomotor

Tha sgrùdaidhean roimhe air sealltainn gu bheil morphine ag adhbhrachadh brosnachadh locomotor ann an creimich (Wise and Bozarth, 1987). Chaidh gnìomhachd locomotor a chlàradh ann an ochd bogsaichean locomotor fuaim attenuated, ventilated and dim lit (420 × 420 × 200 mm, Kungsbacka mät- och reglerteknik AB; Fjärås, an t-Suain). Còig le còig sreathan de chnapan photocell, aig ìre làr a ’bhogsa, le bhith a’ cruthachadh lorg photocell leig le siostam stèidhichte air coimpiutair gnìomhachd nan luchagan a chlàradh. Chaidh gnìomhachd locomotor a mhìneachadh mar an àireamh cruinnichte de chnapan photocell ùra a chaidh a bhriseadh aig àm 60-min. Anns a h-uile deuchainn chaidh cead a thoirt dha na luchagan fuireach ann am bogsa gnìomhachd an locomotor uair a thìde ro dhùbhlain dhrogaichean. Cha robh eadar-dhealachadh sam bith eadar stèidheachadh ann an gin de na buidhnean làimhseachaidh (cha deach dàta a shealltainn).

Anns a ’chiad sreath de dheuchainnean chaidh sgrùdadh a dhèanamh air buaidhean JMV2959 (6 mg / kg, ip) air brosnachadh locomotor morphine (20 mg / kg, ip). Chaidh JMV2959 a thoirt seachad 20 min ro morphine agus thòisich an clàradh gnìomhachd deich mionaidean às deidh an in-stealladh mu dheireadh. Fhuair gach luchag aon mheasgachadh làimhseachaidh (carbad / carbad, JMV2959 / carbad, morphine / carbad no JMV2959 / morphine; n= 8 gach measgachadh làimhseachaidh) agus cha robh e fo smachd ach aon deuchainn deuchainneach.

 

 

2.4. Roghainn àite cumhaichte

Gus measadh a dhèanamh air buaidhean JMV2959 air buaidhean buannachdail morphine ann an luchagan ùra, chaidh deuchainnean roghainn àite cumhaichte a dhèanamh ann an luchagan mar a chaidh a mhìneachadh roimhe (Jerlhag, 2008). Gu h-aithghearr, chaidh uidheamachd CPP dà-sheòmrach, le soillseachadh 45 lx agus glaisean lèirsinneach is tactile sònraichte a chleachdadh. Bha aon roinn air a mhìneachadh le ballachan stiallach dubh is geal agus le làr dorcha lannaichte ach bha làr fiodha le peant geal agus ballachan de dh ’fhiodh anns an fhear eile. Bha an dòigh-obrach a ’gabhail a-steach ro-shuidheachadh (latha 1), fionnarachadh (làithean 2 - 5), agus post-condition (latha 6). Aig ro-shuidheachadh, chaidh luchagan a thoirt a-steach ip le carbad agus chaidh an cur san t-seòmar le ruigsinneachd an-asgaidh air an dà roinn rè 20 min gus faighinn a-mach dè an roghainn àite (no taobh) tùsail. Chaidh suidheachadh (20 min gach seisean) a dhèanamh a ’cleachdadh dòigh-obrach claon anns an deach morphine (20 mg / kg) a pharadh leis an roinn agus an carbad as fheàrr leotha leis an roinn as fheàrr leotha. Fhuair na luchagan uile aon stealladh de morphine a bharrachd air carbad gach latha agus chaidh na steallaidhean atharrachadh eadar madainn is feasgar ann an dealbhadh cothromachaidh. Aig iar-shuidheachadh na luchagan (nChaidh = 16) a stealladh le JMV2959 (6 mg / kg, ip) no tomhas co-ionann de fhuasgladh carbaid agus 20 min nas fhaide air adhart air a ’mheadhan-loidhne eadar an dà roinn le ruigsinneachd an-asgaidh air an dà roinn airson 20 min (a’ cruthachadh na buidhnean làimhseachaidh a leanas; Morph-Veh agus Morph-JMV2959).

Chaidh roghainn àite suidheachadh a thomhas mar an eadar-dhealachadh ann an% den ùine iomlan a chaidh a chaitheamh anns a ’chàraid dhrogaichean (ie. cuibhreann as fheàrr leotha) rè an t-suidheachaidh iar-shuidheachaidh agus an t-seisean ro-shuidheachaidh.

2.5. Ann am vivo microdialysis agus tomhasan sgaoilidh dopamine

Leis gu bheil JMV2959 a ’lagachadh brosnachadh morphine brosnaichte-locomotor agus roghainn àite cumhaichte ann an luchagan, chaidh buaidh JMV2959 (6 mg / kg, ip) air sgaoileadh dopamine brosnaichte le morphine (20 mg / kg, ip) a sgrùdadh le bhith a’ cleachdadh ann am vivo microdialysis ann an luchagan a tha a ’gluasad gu saor. Airson tomhas de ìrean dopamine extracellular, chaidh luchagan a chuir a-steach gu aon-thaobhach le probe microdialysis suidhichte anns na nucleus accumbens. Mar sin, chaidh na luchagan anesthetized le isofluran (Isofluran Baxter; Aonad Anesthesia Univentor 400, Univentor Ldt., Zejtun, Malta), air an cur ann am frèam stereotaxic (David Kopf Instruments; Tujunga, CA, USA) agus air an cumail air ceap teasachaidh gus casg a chuir air hypothermia. Chaidh Xylocain adrenalin (5 μg / ml; Pfizer Inic; New York, na SA) a chleachdadh mar anesthetics ionadail agus carprofen (Rimadyl, 5 mg / kg ip) (Astra Zeneca; Gothenburg, an t-Suain) gus faochadh a thoirt do pian sam bith a dh ’fhaodadh a bhith ann. Bha cnàimh a ’chlaigeann fosgailte agus chaidh aon tholl airson an probe agus aon airson an sgriubha acair a drileadh. Chaidh an probe atharrachadh air thuaiream gu taobh clì no taobh deas an eanchainn. Chaidh na co-chomharran 1.5 mm anterior ris a ’bregma, ± 0.7 fadalach chun a’ mheadhan-loidhne agus 4.7 mm fo uachdar uachdar na h-eanchainn a chleachdadh airson na niuclas accumbens (Franklin agus Paxinos, 1997). B ’e tip fosgailte an membran dialysis (20,000 kDa air a ghearradh dheth le od / id de 310 / 220 μm, HOSPAL, Gambro, Lund, an t-Suain) 1 mm. Chaidh a h-uile probes a chuir a-steach gu dòigheil dà latha ron deuchainn. Às deidh lannsaireachd chaidh na luchagan a chumail ann an cèidsichean fa leth gu latha an deuchainn (Macrolon III).

Air latha an deuchainn bha an probe ceangailte ri pumpa microperfusion (Pumpa Syringe U-864; AgnThós AB) agus air a tholladh le fuasgladh Ringer aig ìre 1.5 μl / min. Às deidh uair a thìde de stèidheachadh chun stèidheachadh microdialysis, chaidh sampaill perfusion a chruinneachadh gach 20 min. Chaidh an ìre dopamine bun-loidhne a mhìneachadh mar a ’chuibheasachd de thrì sampaill leantainneach ron chiad dùbhlan dhrogaichean / carbaid, agus chaidh an àrdachadh ann an dopamine accumbal a thomhas mar an àrdachadh sa cheud bhon bhun-loidhne. Às deidh na sampallan bun-loidhne (−40 min gu 0 min), chaidh luchagan a thoirt a-steach le JMV2959 no carbad (aig 0 min), a chaidh a leantainn le morphine no in-stealladh carbaid (aig 20 min). Às deidh na rianachdan dhrogaichean sin chaidh ochd sampaill 20 min a bharrachd a chruinneachadh. Còmhla na buidhnean làimhseachaidh a leanas (nChaidh = 8 anns gach buidheann) a chruthachadh: carbad-carbaid (Veh - Veh), carbad-morphine (Veh - Morph), JMV2959-carbad (JMV2959-Veh) agus JMV2959-morphine (JMV2959-Morph).

Chaidh na h-ìrean dopamine anns na dialysates a dhearbhadh le HPLC le lorg electrochemical. Pumpa (Gyncotec P580A; Kovalent AB; V. Frölunda, an t-Suain), colbh iomlaid ian (2.0 × 100 mm, Prodigy 3 μm SA; Skandinaviska GeneTec AB; Kungsbacka, an t-Suain) agus lorgaire (Antec Decade; Antec Leyden; Zoeterwoude; , An Òlaind) air an cleachdadh le cealla sruthadh VT-03 (Antec Leyden). Chaidh an ìre gluasadach (pH 5.6), a ’toirt a-steach searbhag sulphonic 10 mM, searbhag citrach 200 mM, sodium citrate 200 mM, 10% EDTA, 30% MeOH, a shìoladh gu falamh le bhith a’ cleachdadh sìoltachan membran 0.2 μm (GH Polypro; PALL Gelman Laboratory; Lund, an t-Suain). Chaidh an ìre gluasadach a lìbhrigeadh aig ìre sruth de 0.2 ml / min a ’dol seachad air degasser (Kovalent AB), agus chaidh an anailisiche a oxidachadh aig + 0.4 V.

Às deidh na deuchainnean microdialysis a chrìochnachadh, chaidh na luchagan a dhì-chomasachadh, agus chaidh probes a thoirt a-mach le sky gorm pontamine 6BX gus sgìreachadh probe a dhèanamh comasach. Chaidh na h-eanchainnean a chuir suas air inneal vibroslice (752 M Vibroslice; Campden Instruments Ltd., Loughborough, RA) agus chaidh an gearradh ann an earrannan 50 μm. Chaidh suidheachadh an probe a dhearbhadh le amharc làn le bhith a ’cleachdadh miocroscop aotrom. Chaidh dearbh shuidheachadh an probe a dhearbhadh (Franklin agus Paxinos, 1997) agus cha deach ach luchagan le àiteachan ceart a chleachdadh anns an anailis staitistigeil.

 

 

2.6. Làimhseachadh agus sgaradh

Chaidh sgrùdadh a dhèanamh air buaidhean làimhseachadh JMV2959 air ìrean MEAP, DynB agus LeuArg ann an raointean co-cheangailte ri duais. Chaidh luchagan a thoirt a-steach an dàrna cuid le JMV2959 (6 mg / kg, ip, n= 8) no tomhas co-ionann de charbad (ip, n= 8) airson còig latha às deidh sin. 20 min às deidh an in-stealladh mu dheireadh chaidh na luchagan ìobairt agus chaidh na brains bho na luchagan sin a chruinneachadh. Chaidh luchagan air leth a thoirt a-steach le aon chuid ghrelin (0.33 mg / kg, ip, n= 8) no tomhas co-ionann de charbad (ip, n= 8) airson còig latha às deidh sin. Còig mionaidean às deidh an in-stealladh mu dheireadh chaidh na luchagan ìobairt agus chaidh na brains bho na luchagan sin a chruinneachadh. Chaidh an amygdala, striatum, cortex prefrontal, VTA agus hippocampus a sgaoileadh gu sgiobalta agus a chuir air deigh tioram sa bhad agus an uairsin a stòradh aig −80 ° C gus an tèid tuilleadh giollachd a dhèanamh.

 

 

2.7. Mion-sgrùdadh ìrean peptide opioid

Bha na modhan homogenisation agus às-tharraing peptide a ’leantainn modh-obrach àbhaisteach, a chaidh a mhìneachadh gu mionaideach roimhe seo (Nylander et al., 1997). Ann an ùine ghoirid, chaidh searbhag acetic teth (95 ° C) (1 M) a chur ris na sampallan reòta. Chaidh na sampallan a theasachadh ann an amar uisge (95 ° C) airson 5 min, air fhuarachadh air deigh agus an uairsin air a homogenachadh le Sonifier Branson (Danbury, CT, na SA). Chaidh an homogenate ath-theasachadh aig 95 ° C airson 5 min agus air a fhuarachadh air deigh mus centrifugation airson 15 min aig 4 ° C agus 12,074 ×g ann an centrifuge Beckman GS-15R (Fullerton, CA, USA). Chaidh na h-earrannan a ghlanadh tuilleadh a rèir dòigh-obrach a chaidh a mhìneachadh roimhe (Nylander et al., 1997). Chaidh dà bhloigh a chruinneachadh: bloigh III (Leu-Arg agus MEAP) agus bloigh V (DynB). Chaidh na samples a thiormachadh ann an centrifuge falamh (Savant SpeedVac Plus SC210A; Thermo Scientific Inc., Waltham, MA na SA) agus air an stòradh san reothadair (−20 ° C) gus an tèid mion-sgrùdadh peptide a dhèanamh.

Chaidh na h-ìrean immunoreactive (ir) de DynB, LeuArg agus MEAP a sgrùdadh le radioimmunoassays stèidhichte agus chaidh na protocalan a mhìneachadh gu mionaideach ann an àiteachan eile (Nylander et al., 1997). Ann an assay DynB, chaidh IgG an-aghaidh coineanach gobhar (GARGG; Bachem, Bubendorf, an Eilbheis) a chleachdadh gus peptide an-asgaidh agus ceangailte ri antibody a sgaradh. Chaidh an Dyn antiserum (113 +) a chleachdadh ann an caolachadh deireannach de 1: 600000. B ’e an tar-reactivity le Dyn mòr 100% agus le DynB (1 - 29) 1%. Cha deach amharc air tar-reactivity le peptidean opioid eile. Anns na measaidhean LeuArg agus MEAP, chaidh casg guala a chleachdadh gus peptide an-asgaidh agus ceangailte ri antibody a sgaradh. Airson an LeuArg antiserum (91: 6D +, dilution deireannach 1: 60000), bha tar-reactivity nas lugha na 0.01% airson Leu-enkephalin agus MEAP, 0.02% airson DynB, 0.04% airson DynA, agus 0.08% airson alpha-neoendorphin. Chaidh an MEAP antiserum 90: 3D (II) a chleachdadh ann an caolachadh deireannach de 1: 160 000. Tar-reactivity le Met-enkephalin, Met-enkephalin-Arg6, Met-enkephalin-Arg6Gly7Leu8, Leu-enkephalin agus Leu-enkephalin-Arg6 bha <0.1%

 

 

 

2.8. Mion-sgrùdadh staitistigeil

Chaidh dàta gnìomhachd locomotor a mheasadh le ANOVA aon-shligheach agus an uairsin deuchainnean post-hoc Bonferroni. Chaidh an dàta roghainn àite suidheachadh a mheasadh le neach gun chàradh t-test. Chaidh na deuchainnean microdialysis a mheasadh le ANOVA dà-thaobh agus an uairsin deuchainn post-hoc Bonferroni airson coimeasan eadar diofar leigheasan agus gu sònraichte aig amannan sònraichte. Chaidh na h-ìrean peptide a sgrùdadh le neo-ullaichte t-test. Tha dàta air a thaisbeanadh mar mheadhan ± SEM. Luach coltachd de PBha <0.05 air a mheas cudromach gu staitistigeil.

 

 

 

3. Toraidhean

 

 

3.1. Buaidhean JMV2959 air brosnachadh locomotor air a bhrosnachadh le morphine, leigeil dopamine accumbal agus roghainn àite suidheachadh ann an luchagan

Chaidh prìomh bhuaidh làimhseachaidh iomlan a lorg air gnìomhachd locomotor ann an luchagan às deidh rianachd siostamach morphine (20 mg / kg) agus JMV2959 (6 mg / kg) (F (3,27) = 7.409, P= 0.0009; n= 8 airson carbad - carbad, JMV2959-Veh, JMV2959-Morph agus n= 7 airson Carbad-Morph). Mar a chithear ann an Figear 1A, sheall sgrùdadh posthoc gun deach ro-làimhseachadh le aon in-stealladh de JMV2959 (PRinn <0.001) lùghdachadh mòr air brosnachadh locomotor morphine (morphine) (P<0.01 Carbad - Carbad vs Carbad - Morph). Cha robh buaidh sam bith aig an dòs taghte de JMV2959 air gnìomhachd locomotor an coimeas ri làimhseachadh carbaid (P> 0.05). Cha robh eadar-dhealachadh sam bith ann am freagairt gnìomhachd locomotor ann an luchagan le làimhseachadh carbaid agus luchagan le làimhseachadh JMV2959-morhpine (P> 0.05).

Fig. 1. A ’fosgladh ìomhaigh mhòr  

Figear 1

Tha an t-antagonist GHS-R1A JMV2959 a ’lagachadh brosnachadh locomotor air a bhrosnachadh le morphine, leigeil dopamine accumbal agus roghainn àite cumhaichte ann an luchagan. (A) Chaidh brosnachadh locomotor morphine (20 mg / kg ip) a lughdachadh le aon in-stealladh de JMV2959 (6 mg / kg ip) (n= 7 - 8 anns gach buidheann; **P<0.01, ***P<0.001 ANOVA aon-shligheach air a leantainn le deuchainn post-hoc Bonferroni). (B) Chaidh an roghainn àite suidheachadh morphine (20 mg / kg ip) (CPP) a lughdachadh le in-stealladh singilte de JMV2959 (6 mg / kg ip) ann an luchagan (n= 8 anns gach buidheann, *P<0.05, deuchainn-t gun ullachadh). (C) An toiseach sheall sinn buaidh chudromach de morphine (20 mg / kg ip) gus àrdachadh dopamine a mheudachadh an coimeas ri làimhseachadh carbaid (eadar-ama 40-180 min (P<0.001), Carbad - Carbad vs Carbad - Morph). Mar a chithear ann an (C) ro-làimhseachadh le JMV2959 (6 mg / kg ip) lughdaich an àrdachadh morphine ann an sgaoileadh dopamine an coimeas ri ro-làimhseachadh carbaid aig amannan eadar-ama 40 - 100 agus 140 - 180 min (##P<0.01, ###P <0.001, JMV2959-Morph an coimeas ri làimhseachadh Carbaid-Morph). Cha robh buaidh mhòr aig an dòs taghte de JMV2959 air leigeil a-mach dopamine accumbal an coimeas ri làimhseachadh carbaid aig àm sam bith (P> 0.05, Carbad - Carbad vs JMV2959-Veh). Lùghdaich JMV2959, ach cha do chuir e bacadh gu tur, an sgaoileadh dopamine accumbal morphine aig àm eadar-ama 60-140 (*P<0.05, **P<0.01, ***P <0.001, JMV2959-Morph an coimeas ri làimhseachadh Carbaid-Morph). Bidh saigheadan a ’riochdachadh puingean ùine de in-stealladh JMV2959, carbad agus morphine. Dàta air a sgrùdadh le ANOVA dà-thaobh agus an uairsin deuchainn post-hoc Bonferroni (n= 8 anns gach buidheann). Carbad-carbad (Ceàrnag), Carbad - Morph (rhomb), JMV2959-Veh (Triantan), JMV2959-Morph (cearcall). Tha na luachan uile a ’riochdachadh a’ ciallachadh ± SEM.

Chaidh an roghainn àite cumhaichte morphine (20 mg / kg) (Morph - Veh) a lughdachadh gu mòr le aon in-stealladh singilte de JMV2959 (6 mg / kg) (Morph-JMV2959) air an latha an dèidh suidheachadh (P= 0.025, n= 8 anns gach buidheann; Figear 1B).

Nochd tomhasan microdialysis cronail de dopamine ann an luchagan prìomh bhuaidh làimhseachaidh san fharsaingeachd (F(3,33) = 24.15, P<0.0001), ùine F(11,308) = 7.05, P<0.0001) agus làimhseachadh × eadar-obrachadh ùine (F(11,308) = 8.63, P<0.0001) (Figear 1C; n= 8 anns gach buidheann). Mheudaich morphine sgaoileadh dopamine accumbal an coimeas ri làimhseachadh carbaid aig amannan eadar-ama 40 - 180 min (P<0.001). Mar a chithear ann an Figear 1C chaidh a ’bhuaidh seo a lughdachadh le ro-làimhseachadh le JMV2959 aig amannan eadar-ama 40 - 80 (P<0.01), 100 (P<0.001), 140 (P<0.01) agus 160–180 mion (P<0.001). Lùghdaich JMV2959, ach cha do chuir e bacadh gu tur air, sgaoileadh dopamine accumbal morphine leis gu robh eadar-dhealachadh eadar làimhseachadh carbaid agus làimhseachadh JMV2959-morphine aig amannan eadar 60-80 (P<0.01), 100 (P<0.001), 140 (P<0.01) agus 160 min (P<0.05). Cha robh buaidh mhòr aig an dòs taghte de JMV2959 air leigeil a-mach dopamine accumbal an coimeas ri làimhseachadh carbaid aig àm sam bith (P> 0.05).

 

 

 

3.2. Buaidhean làimhseachadh JMV2959 fo-chron no làimhseachadh ghrelin air ìrean peptide opioid

Gheibhear na h-ìrean immunoreactive (ir) de na trì peptidean anns na raointean eanchainn a chaidh a thomhas Clàr 1, Clàr 2. Mheudaich làimhseachadh JMV2959 fo-chronach ìrean MEAP gu mòr anns an VTA, DynB ann an hippocampus agus LeuArg ann an striatum (Clàr 1). Cha robh eadar-dhealachaidhean sam bith ann an raointean sam bith eile a chaidh a sgrùdadh, is e sin amygdala agus cortex prefrontal. Cha do dh ’atharraich làimhseachadh ghrelin fo-chronach gu mòr ìrean MEAP, DynB no LeuArg (Clàr 2).

Mheudaich làimhseachadh Clàr 1Sub-chronic JMV2959 gu mòr na h-ìrean ir Met5-enkephalin-Arg6Phe7 (MEAP) anns an sgìre teasach ventral (VTA), na h-ìrean ir de Dynorphin B (DynB) ann an hippocampus (HC) a bharrachd air ìrean ir agus Leu-enkephalin-Arg6 (LeuArg) ann an striatum (STR) an coimeas ri làimhseachadh carbaid. Cha robh eadar-dhealachadh sam bith ann an raointean sam bith eile a chaidh a sgrùdadh. Tha na luachan uile a ’riochdachadh a’ ciallachadh ± SEM. (amygdala (AMY), agus cortex prefrontal (PFC)).
 JMV2959Vehiclep-Value
 Ir ìrean MEAP
AMY14.52 ± 3.9115.61 ± 4.370.838
STR43.47 ± 5.5447.60 ± 7.940.754
PFC3.61 ± 0.902.94 ± 0.410.450
VTA8.69 ± 0.754.63 ± 0.420.003
HC4.52 ± 0.802.56 ± 0.230.170
 Ìrean Ir DynB
AMY2.56 ± 0.411.90 ± 0.250.759
STR8.69 ± 0.8910.17 ± 0.910.547
PFC2.24 ± 0.361.60 ± 0.200.169
VTA8.89 ± 0.555.98 ± 0.210.079
HC3.70 ± 0.412.36 ± 0.190.042
 Ìrean Ir LeuArg
AMY13.46 ± 1.6911.07 ± 1.450.270
STR14.50 ± 0.8912.12 ± 0.930.046
PFC11.21 ± 1.3210.80 ± 1.440.776
VTA12.96 ± 1.6310.96 ± 1.390.245
HC5.29 ± 0.755.67 ± 0.720.663
 
Cha do dh ’atharraich làimhseachadh ghrelin Clàr 2Sub-chronic na h-ìrean ir de Met5-enkephalin-Arg6Phe7 (MEAP), dynorphin B (DynB) no Leu-enkephalin-Arg6 (LeuArg) ann an gin de na raointean co-cheangailte ri duais a chaidh a sgrùdadh, ie. an sgìre teasach ventral (VTA), amygdala (AMY), striatum (STR), cortex prefrontal (PFC) agus hippocampus (HC). Tha na luachan uile a ’riochdachadh a’ ciallachadh ± SEM.
 GhreinnVehiclep-Value
 Ir ìrean MEAP
AMY12.00 ± 3.9115.46 ± 3.020.517
STR43.59 ± 7.2461.15 ± 12.460.176
PFC3.75 ± 0.463.17 ± 0.640.550
VTA11.96 ± 1.0310.60 ± 0.910.249
HC6.75 ± 1.885.20 ± 1.010.314
 Ìrean Ir DynB
AMY3.97 ± 1.095.42 ± 2.270.488
STR11.15 ± 0.8913.03 ± 2.410.434
PFC3.23 ± 0.502.38 ± 0.180.072
VTA5.11 ± 0.158.25 ± 1.590.070
HC4.32 ± 0.873.19 ± 0.290.095
 Ìrean Ir LeuArg
AMY9.67 ± 1.539.47 ± 1.290.928
STR8.69 ± 0.878.87 ± 0.440.875
PFC4.61 ± 0.474.47 ± 0.390.921
VTA8.35 ± 1.046.99 ± 0.420.407
HC4.97 ± 0.503.47 ± 0.410.086
 

 

 

 

4. Deasbad

Tha an sgrùdadh a tha ann an-dràsta a ’toirt tuilleadh taic don bheachd gu bheil dreuchd eòlas-eòlas na peptide orexigenic a’ toirt a-steach riaghladh dhuais. Gu dearbh, sheall sinn gu bheil rianachd iomaill de antagonist GHS-R1A a ’lughdachadh comas morphine gus brosnachadh locomotor adhbhrachadh, àrdachadh ìrean dopamine ann an NAc agus a bhith a’ brosnachadh roghainn àite suidheachadh ann an luchagan. Lorg sinn cuideachd gum faodadh làimhseachadh JMV2959 fo-chronach, ach chan e ghrelin, àrdachadh ann an ìrean teannachaidh MEAP anns an VTA, DynB ann an hippocampus agus LeuArg ann an striatum, a ’toirt seachad a’ chiad fhianais gum faodadh peptidean opioid a bhith a ’toirt a-steach comas ath-neartachadh ghrelin gus daingneachadh a riaghladh. .

Tha an dàta a tha air a thaisbeanadh an seo a ’sealltainn gu bheil antagonism GHS-R1A a’ toirt buaidh air comas morphine gus an siostam dopamine mesolimbic a ghnìomhachadh ann an luchagan. Ann an co-rèir tha na co-dhùnaidhean a ’sealltainn gu bheil JMV2959 a’ cur bacadh air comas morphine àrdachadh ìrean extracellular de dopamine accumbal agus giùlan stereotyped adhbhrachadh ann am radain (Sustkova-Fiserova et al., 2014). Gu taiceil, tha rianachd meadhan ghrelin a ’cur ris a’ phuing briseadh, ach chan e an àireamh de phreasaichean luamhan gnìomhach, anns a ’chlàr ath-neartachaidh co-mheas adhartach ann am radain fèin-rianachd heroin, (Maric et al., 2012). Tha an co-dhùnadh gu bheil soidhneadh ghrelin mar thoradh air tràilleachd dhrogaichean a ’faighinn tuilleadh taic bho na co-dhùnaidhean a’ sealltainn gu bheil JMV2959 a ’lughdachadh an in-ghabhail a bharrachd air a’ bhrosnachadh airson deoch làidir a ghabhail ann am radain agus gu bheil duais brosnachaidh amphetamine, cocaine agus nicotine air a bhacadh leis an antagonism GHS-R1A ann an creimich ( airson ath-sgrùdadh faic Engel and Jerlhag (2014) agus gu bheil polymorphisms ann an ginean co-cheangailte ri ghrelin ceangailte ri toirt a-steach deoch làidir, smocadh agus amphetamine (airson lèirmheas faic Engel and Jerlhag (2014)).

Tha na co-dhùnaidhean a th ’ann an-dràsta le ìrean nas àirde de pheptidean opioid anns an striatum, VTA agus hippocampus às deidh làimhseachadh JMV2959 fo-chronail a’ moladh airson a ’chiad uair eadar-obrachadh eadar peptidean opioid agus comharran ghrelin. Tha na opioids endogenous an sàs ann am buaidhean buannachdail, chan ann a-mhàin air an adhbhrachadh le opioids ach cuideachd drogaichean eile de dhroch dhìol agus dhuaisean nàdurrach, agus ann am pròiseasan atharrachail a chithear às deidh nochdadh dhrogaichean a-rithist (Trigo et al., 2010, Van Ree et al., 2000). Gu dearbh tha gnìomhachd an t-siostam dopamine mesolimbic air a riaghladh le opioids endogenous aig gach cuid ìre an VTA agus an NAc (Hirose et al., 2005, Spanagel et al., 1992) agus thathas air sealltainn gu bheil na gnìomhan dìreach no neo-dhìreach. tro mhodaladh tar-chuirichean eile (Charbogne et al., 2014).

Lorg sinn an seo gun do mheudaich làimhseachadh JMV2959 fo-chronail ìrean MEAP anns an VTA. Tha MEAP a ’tighinn a-mhàin bho proenkephalin agus chaidh a chleachdadh mar chomharradh air peptidean proenkephalin a bhios gu ìre mhòr a’ gnìomhachadh gabhadairean δ-opioid. Tha sinn a ’gabhail a-steach gum faodadh na h-ìrean nas àirde de MEAP endogenous anns an VTA às deidh làimhseachadh JMV2959 casg a chuir air comas morphine lughdachadh GABA-inhibition de neurons dopamine mesoaccumbal (Johnson and North, 1992), a dh’ fhaodadh cur ris na buaidhean lùghdaichte morphine a chithear às deidh sin JMV2959. Gu taiceil, tha GHS-R1A suidhichte air interneurons GABAergic anns an VTA (Abizaid et al., 2006). A bharrachd air an sin, tha sgrùdaidhean roimhe air sealltainn gu bheil in-fhilleadh VTA de JMV2959, via tha uidheaman neo-aithnichte, a ’daingneachadh duais a tha air a bhrosnachadh le ghrelin (Jerlhag et al., 2011) a bharrachd air toirt a-steach sucrose meadhan-ghrelin ann an creimich (Skibicka et al., 2011), a’ moladh gu bheil GHS-R1A tegmental ventral cudromach airson riaghladh duais. A ’toirt taic dha a leithid de chonnspaid tha na co-dhùnaidhean a’ sealltainn gu bheil an t-acras eile a bhios a ’riaghladh peptidean, leithid galanin agus orexin, a’ tomhas feartan buannachdail morphine via uidheamachdan ionadail taobh a-staigh an VTA (Narita et al., 2006, Richardson agus Aston-Jones, 2012).

Anns an striatum, lorg sinn gun do mheudaich JMV2959 fo-chronail ìrean ir LeuArg, a ’moladh gu bheil comas JMV2959 a bhith a’ lughdachadh roghainn àite cumhaichte le morphine, leigeil às dopamine agus brosnachadh locomotor an urra, co-dhiù ann am pàirt, air accumbal leasaichte δ- gnìomhachd gabhadair opioid. Dh ’fhaodadh ìrean LeuArg àrdachadh mar thoradh air barrachd tionndadh enzymatic de pheptidean dynorphin gu enkephalins no bho sgaoileadh Dyn leasaichte anns an NAc mar fhreagairt do bharrachd dopamine, agus an uairsin air a lughdachadh gu LeuArg. Ged a tha sgrùdaidhean roimhe air sealltainn gu bheil gnìomhachd an t-siostam dopamine mesolimbic air a riaghladh via Tha gabhadairean κ-opioid anns na gabhadairean NAc (Spanagel et al., 1992) agus endogenous κ-opioid a ’toirt seachad casg tonic de neurotransmission dopamine mesoaccumbal agus a’ daingneachadh sgaoileadh dopamine air adhbhrachadh le cocaine ann an NAc (Chefer et al., 2005), cha do rinn sinn sin. sealltainn gu bheil JMV2959 ag atharrachadh ìrean ir DynB san striatum. Mar sin, tha feum air tuilleadh sgrùdaidhean air peptidean prodynorphin gus soilleireachadh a dhèanamh air na h-eadar-obrachaidhean eadar antagonism GHS-R1A agus dynorphins.

Anns an sgrùdadh làithreach sheall sinn cuideachd gu bheil làimhseachadh JMV2959 a ’meudachadh ìrean DynB hippocampal gu mòr. Bidh Ghrelin a ’meudachadh daingneachadh cuimhne a bharrachd air cruthachadh spine dendritic, a’ gineadh potentiation fad-ùine agus a ’brosnachadh comas cuimhne via hippocampal GHS-R1A ann an creimich (Carlini et al., 2010, Diano et al., 2006). A bharrachd air an sin, tha luchagan cnagadh GHS-R1A a ’taisbeanadh cuimhne spàsail leasaichte ann an deuchainn cuairt-uisge Morris agus cuimhne co-theacsail aimhreit anns a’ phàtran suidheachadh eagalach an coimeas ri luchagan seòrsa fiadhaich (Albarran-Zeckler et al., 2012). Tha peptidean Dynorphin, a ’toirt a-steach DynB, pailt ann an hippocampus agus bidh iad a’ lagachadh potentiation fad-ùine (Chavkin et al., 1985, Wagner et al., 1993) a bharrachd air a bhith a ’lagachadh ionnsachadh spàsail ann am radain (Sandin et al., 1998). Mar sin tha sinn a ’gabhail a-steach gum faodadh an antagonist GHR-R1A cuimhne a dhuaiseachadh le bhith a’ cur bacadh air potentiation hippocampal san fhad-ùine via gnìomhachadh DynB. Còmhla, tha an dàta seo a ’toirt seachad uidheamachd ùr a dh’ fhaodadh a bhith ann le JMV2959 via faodaidh peptidean opioid ath-neartachadh atharrachadh. Ach, tha gabhadairean opioid air an sgaoileadh gu farsaing san eanchainn, a ’moladh gum faodadh raointean eile, nach eil air an toirt a-steach don sgrùdadh làithreach, a bhith an sàs ann an duais air a bhrosnachadh le morphine riaghlaichte GHS-R1A. Mar eisimpleir, tha in-ghabhail bìdh air a bhrosnachadh le ghrelin a bharrachd air luamhan a ’brùthadh airson sucrose air a lughdachadh le rianachd meadhanach no taobh a-staigh hypothalamic de antagonist gabhadair κ-opioid (Romero-Pico et al., 2013). Ach, feumar àite nam peptidean opioid ann an raointean eile a mhìneachadh ann an sgrùdaidhean a tha ri thighinn.

Cha deach na ligandan μ-receptor endogenous, endomorphins agus beta-endorphin, a sgrùdadh an seo gus nach urrainn dhuinn buaidh a dh ’fhaodadh a bhith aig JMV2959 air na peptidean sin. Gu dearbh, tha na feartan buannachdail de morphine a ’toirt a-steach gabhadairean μ-opioid anns an VTA a bharrachd air NAc (Hirose et al., 2005, Johnson agus North, 1992, Murakawa et al., 2004, Yoshida et al., 1999). Ach, chan eil antagonist μ-receptor a ’lughdachadh toirt a-steach biadh a tha air a bhrosnachadh le ghrelin (Naleid et al., 2005) no brosnachadh locomotor air a bhrosnachadh le ghrelin agus leigeil dopamine accumbal (Jerlhag et al., 2011), a’ ciallachadh gu bheil comas an GHSR- Chan eil antagonist 1A gus daingneachadh a riaghladh a ’toirt a-steach μ-gabhadairean. Air an làimh eile, thug JMV2959 buaidh air peptidean opioid a thàinig bho proenkephalin agus prodynorphin a ’sealltainn gum faodadh iad a bhith an sàs anns na buaidhean a dh’ adhbhraicheas antagonists GHSR-1A.

Ged a tha sgrùdaidhean roimhe air sealltainn gu bheil rianachd siostamach ghrelin ag adhbhrachadh duais (Jerlhag, 2008) a bharrachd air a bhith ag àrdachadh feartan buannachdail dhrogaichean addictive (airson ath-sgrùdadh faic Engel agus Jerlhag (2014)), tha sinn an seo a ’sealltainn nach do dh’ atharraich làimhseachadh ghrelin fo-chronach na h-ìrean teannachaidh de pheptidean opioids ann an gin de na raointean co-cheangailte ri duais. Tha rianachd siostamach ghrelin a ’gnìomhachadh abairt c-fos ann an sgìrean hypothalamic, ach chan ann ann an sgìrean mesolimbic agus hippocampal (Pirnik et al., 2011) agus tha ceangal ghrelin le bile fluorescent air a chuingealachadh ri neurons riaghlaidh bìdh den hypothalamus (Schaeffer et al., 2013 ). Air an toirt còmhla ris na co-dhùnaidhean a ’sealltainn nach urrainnear ghrelin, a chaidh a lorg bho lorg meudan den hypothalamus, a lorg ann an ceàrnaidhean eanchainn nas doimhne às deidh rianachd ghrelin peripheral (Furness et al., 2011, Grouselle et al., 2008, Sakata et al., 2009 ), a ’togail a’ chothruim gu bheil ghrelin siostamach a ’gnìomhachadh an t-siostam duais via uidheamachdan neo-dhìreach a tha neo-eisimeileach bho opioids endogenous. Gu taiceil, tha sgaoileadh dopamine accumbal air a bhrosnachadh le ghrelin a ’feumachdainn soidhneadh hypothalamic orexigenic suas an abhainn (Cone et al., 2014), chan eil rianachd ghrelin peripheral ag atharrachadh deoch làidir ann an luchagan (Lyons et al., 2008) agus nach eil neodachadh ghrelin peripheral a’ lughdachadh deoch làidir. duais -induced ann an luchainn no deoch làidir ann am radain (Jerlhag et al., ann an clò). Bu chòir beachdachadh air a ’chomas gum bi rianachd fo-chronail de ghrelin a’ meudachadh ìrean teannachaidh peptidean opioids ach feumar sgrùdadh mionaideach a dhèanamh air seo ann an sgrùdaidhean a tha ri thighinn.

Tha comas dhrogaichean addictive a bhith ag adhbhrachadh brosnachadh, leigeil às dopamine agus a bhith a ’brosnachadh roghainn àite le suidheachadh ceangailte gu dlùth ri feartan neartachaidh dhrogaichean addictive agus thathas den bheachd gu bheil na paramadairean sin mar phàirt den phròiseas tràilleachd (Wise, 2004). Leis gun do lorg sinn an seo gu bheil JMV2959 a ’lughdachadh nam paramadairean duais sin ann an luchagan tha sinn a’ gabhail a-steach gum faodadh pàirt cudromach a bhith aig GHS-R1A ann am pròiseasan tràilleachd, agus gu bheil opioids endogenous an sàs anns na pròiseasan sin. Còmhla tha an dàta seo a ’nochdadh gum bu chòir antagonists GHS-R1A a bhith air an soilleireachadh mar làimhseachadh eisimeileachd dhrogaichean.

Dreuchd stòr maoineachaidh

Tha JE agus EJ a ’faighinn taic bho thabhartasan bho Chomhairle Rannsachaidh na Suaine (Tabhartas àireamh. 2011-4646, 2009-2782 agus 2011-4819), bunait eanchainn na Suaine, LUA / ALF (Tabhartas àireamh. 148251) bho Ospadal Oilthigh Sahlgrenska, Deoch-làidir. comhairle rannsachaidh monopolaidh reic deoch-làidir na Suaine agus bunaitean Adlerbertska, Fredrik agus Ingrid Thuring, Tore Nilsson, Längmanska, Torsten agus Ragnar Söderberg, Wilhelm agus Martina Lundgren, NovoNordisk, Knut agus Alice Wallenberg, Magnus Bergvall, Anérs, Jeansons, Åke. , Comann Leigheas na Suaine, Comann Suaineach airson Rannsachadh Meidigeach agus Stèidheachd Rannsachaidh Eòlas-inntinn Gothenburg. Thug Comhairle Rannsachaidh Deoch Làidir Monopoly Mion-reic Deoch-làidir na Suaine agus Comhairle Rannsachaidh na Suaine (K2012-61X-22090-01-3) taic IN. Cha robh pàirt sam bith aig na stòran maoineachaidh ann an dealbhadh an sgrùdaidh, ann an cruinneachadh, anailis agus mìneachadh an dàta, ann an sgrìobhadh na h-aithisg, agus ann an co-dhùnadh an dàta fhoillseachadh

 

 

 

Fiosraichean

Dhealbhaich JAE an sgrùdadh agus sgrìobh e an làmh-sgrìobhainn. Rinn IN pàirt den obair làimhe, rinn e mion-sgrùdadh air dàta, sgrìobh e an làmh-sgrìobhainn. Dhealbhaich EJ an sgrùdadh, sgrìobh e am protocol, stiùir e sgrùdadh litreachais, rinn e mion-sgrùdadh staitistigeil agus rinn e a ’chiad dreach den làmh-sgrìobhainn. Chuir na h-ùghdaran ris an làmh-sgrìobhainn dheireannach agus tha iad air aontachadh ris.

 

 

 

 

Strì eadar com-pàirt

Tha EJ air taic ionmhais fhaighinn bho Bhunait Novo Nordisk. Chan eil seo ag atharrachadh gu bheil na h-ùghdaran a ’cumail ri gin de na poileasaidhean irisean air roinneadh dàta agus stuthan. Chan eil na h-ùghdaran a tha air fhàgail ag ainmeachadh strì eadar com-pàirtean.

 

 

Buidheachas

Tha sinn taingeil airson Britt-Mari Larsson, Kenn Johannessen, Qin Zhou agus Lova Segerström airson taic theicnigeach eòlach agus luachmhor. Chaidh an antagonist GHS-R1A JMV2959 a thoirt seachad le Æterna Zentaris. Tha an t-Àrd Ollamh Jean Martinez agus an Dr. Jean-Alain Fehrentz air an aithneachadh airson synthesis JMV2959

 

iomraidhean

  1. Abizaid, A., Liu, ZW, Andrews, ZB, Shanabrough, M., Borok, E., Elsworth, JD, Roth, RH, Sleeman, MW, Picciotto, MR, Tschop, MH, Gao, XB, agus Horvath, TL Bidh Ghrelin ag atharrachadh gnìomhachd agus eagrachadh cur-a-steach synaptic de neurons dopamine midbrain fhad ‘s a tha iad a’ brosnachadh miann. J. Clin. Dèan sgrùdadh. 2006; 116: 3229 - 3239
  2. Albarran-Zeckler, RG, Brantley, AF, agus Smith, RG Tha luchagan bualadh hormona fàis hormona fàis (GHS-R1a) a ’taisbeanadh cuimhne spàsail nas fheàrr agus easbhaidhean ann an cuimhne co-theacsail. Giùlan. Brain Res. 2012; 232: 13 - 19
  3. Seall ann an artaigil 
  4. Seall ann an artaigil 
  5. Seall ann an artaigil 
  6. Seall ann an artaigil 
  7. Seall ann an artaigil 
  8. Seall ann an artaigil 
  9. Seall ann an artaigil 
  10. Seall ann an artaigil 
  11. Seall ann an artaigil 
  12. Seall ann an artaigil 
  13. Seall ann an artaigil 
  14. Seall ann an artaigil 
  15. Seall ann an artaigil 
  16. Seall ann an artaigil 
  17. Seall ann an artaigil 
  18. Seall ann an artaigil 
  19. Seall ann an artaigil 
  20. Seall ann an artaigil 
  21. Seall ann an artaigil 
  22. Seall ann an artaigil 
  23. Seall ann an artaigil 
  24. Seall ann an artaigil 
  25. Seall ann an artaigil 
  26. Seall ann an artaigil 
  27. Seall ann an artaigil 
  28. Seall ann an artaigil 
  29. Seall ann an artaigil 
  30. Seall ann an artaigil 
  31. Seall ann an artaigil 
  32. Seall ann an artaigil 
  33. Seall ann an artaigil 
  34. Seall ann an artaigil 
  35. Seall ann an artaigil 
  36. Seall ann an artaigil 
  37. Seall ann an artaigil 
  38. Seall ann an artaigil 
  39. Seall ann an artaigil 
  40. Seall ann an artaigil 
  41. Seall ann an artaigil 
  42. Seall ann an artaigil 
  43. Seall ann an artaigil 
  44. Seall ann an artaigil 
  45. Seall ann an artaigil 
  46. Seall ann an artaigil 
  47. Seall ann an artaigil 
  48. Carlini, VP, Perez, MF, Salde, E., Schioth, HB, Ramirez, OA, agus de Barioglio, SR Tha cuideachadh cuimhne brosnaichte Ghrelin a ’ciallachadh gnìomhachd synthase nitric oxide agus lùghdachadh anns an stairsnich gus LTP adhartachadh ann an gyrus dentate hippocampal. Physiol. Giùlan. 2010; 101: 117 - 123
  49. Charbogne, P., Kieffer, BL, agus Befort, K. Bliadhnaichean 15 de dhòighean-obrach ginteil in vivo airson rannsachadh tràilleachd: Gabhadair opioid agus bualadh gine peptide ann am modalan lucha de mhì-ghnàthachadh dhrugaichean. Neuropharmacology. 2014; 76: 204 - 217
  50. Chavkin, C., greusaiche, WJ, McGinty, JF, Bayon, A., agus Bloom, FE Caractar nan siostaman prodynorphin agus proenkephalin neuropeptide ann an rat hippocampus .. J. Neurosci. 1985; 5: 808 - 816
  51. Chefer, VI, Czyzyk, T., Bolan, EA, Moron, J., Pintar, JE, agus Shippenberg, TS Bidh siostaman gabhadain kappa-opioid endogenous a ’riaghladh daineamaigs dopamine mesoaccumbal agus so-leòntachd do chocaine. J. Neurosci. 2005; 25: 5029 - 5037
  52. Cone, JJ, McCutcheon, JE, agus Roitman, MF Tha Ghrelin ag obair mar eadar-aghaidh eadar stàite fios-eòlasach agus comharran dopamine mean air mhean. J. Neurosci. 2014; 34: 4905 - 4913
  53. De Vries, TJ agus Shippenberg, TS Siostaman nàdurrach a tha mar bhun-stèidh cuir-ris codlaid. J. Neurosci. 2002; 22: 3321 - 3325
  54. Diano, S., Farr, SA, Benoit, SC, McNay, EC, da Silva, I., Horvath, B., Gaskin, FS, Nonaka, N., Jaeger, LB, Banks, WA, Morley, JE, Pinto , S., Sherwin, RS, Xu, L., Yamada, KA, Sleeman, MW, Tschop, MH, agus Horvath, TL Bidh Ghrelin a ’cumail smachd air dùmhlachd synapse spine hippocampal agus coileanadh cuimhne. Nat. Neurosci. 2006; 9: 381 - 388
  55. Egecioglu, E., Skibicka, KP, Hansson, C., Alvarez-Crespo, M., Friberg, PA, Jerlhag, E., Engel, JA, agus Dickson, SL Comharran Hedonic agus brosnachaidh airson smachd cuideam corp. An t-Urr Endocr. Metab. Eas-òrdugh. 2011; 12: 141 - 151
  56. Engel, JA agus Jerlhag, E. Dleastanas hormonaichean eanchainn gut ann am pathophysiology deoch-làidir: buaidh air pharmacotherapy. Drogaichean CNS. 2014; 28: 875 - 886
  57. Franklin, KBJ agus Paxinos, G. Brain na luchaige ann an co-chomharran stereotaxic. Clò Acadaimigeach, San Diego; 1997
  58. Furness, JB, Hunne, B., Matsuda, N., Yin, L., Russo, D., Kato, I., Fujimiya, M., Patterson, M., McLeod, J., Andrews, ZB, agus Bron , R. Sgrùdadh air làthaireachd ghrelin ann am prìomh shiostam nèamhach an radan agus an luchag. Neo-eòlas. 2011; 193: 1 - 9
  59. Grouselle, D., Chaillou, E., Caraty, A., Bluet-Pajot, MT, Zizzari, P., Tillet, Y., agus Epelbaum, J. Lionn cerebrospinal pulsatile agus ghrelin plasma a thaobh secretion hormona fàis agus toirt a-steach biadh anns na caoraich. J. Neuroendocrinol. 2008; 20: 1138 - 1146
  60. Hirose, N., Murakawa, K., Takada, K., Oi, Y., Suzuki, T., Nagase, H., Cools, AR, agus Koshikawa, N. Bidh eadar-obrachaidhean am measg gabhadairean mu- agus delta-opioid, gu sònraichte gabhadairean delta1- agus delta2-opioid putative, a ’brosnachadh sgaoileadh dopamine anns na nucleus accumbens. Neo-eòlas. 2005; 135: 213 - 225
  61. Jerlhag, E. Bidh rianachd siostamach de ghrelin a ’brosnachadh roghainn àite cumhaichte agus a’ brosnachadh dopamine accumbal. Addict. Biol. 2008; 13: 358 - 363
  62. Jerlhag, E., Egecioglu, E., Dickson, SL, agus Engel, JA Riaghladh glutamatergic de ghnìomhachadh ghrelin air a bhrosnachadh leis an t-siostam dopamine mesolimbic. Addict. Biol. 2011; 16: 82 - 91
  63. Jerlhag, E., Egecioglu, E., Landgren, S., Salome, N., Heilig, M., Moechars, D., Datta, R., Perrissoud, D., Dickson, SL, agus Engel, JA Riatanas airson soidhneadh ghrelin sa mheadhan airson duais deoch làidir. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2009; 106: 11318 - 11323
  64. Jerlhag, E., Ivanoff, L., Vater, A., agus Engel, JA Cha bhith ghrelin a tha a ’cuairteachadh le iomall a’ toirt buaidh air duais a tha air a bhrosnachadh le deoch-làidir agus deoch làidir ann an creimich. Deoch làidir. Clin. Exp. Res. 2014; 38: 959 - 968
  65. MacIain, SW agus Tuath, RA Bidh opioids a ’dùsgadh neurons dopamine le bhith a’ dèanamh hyperpolarization de interneurons ionadail. J. Neurosci. 1992; 12: 483 - 488
  66. Kojima, M., Hosoda, H., Date, Y., Nakazato, M., Matsuo, H., agus Kangawa, K. Tha Ghrelin na peptide acylated a tha a ’leigeil ma sgaoil le hormona bhon stamag. Nàdar. 1999; 402: 656 - 660
  67. Koob, GF agus Le Moal, M. Tràilleachd dhrugaichean, dysregulation duais, agus allostasis. Neuropsychopharmacol. Air falbh. Publ. Am. Colla. Neuropsychopharmacol. 2001; 24: 97 - 129
  68. Lyons, AM, Lowery, EG, Sparta, DR, agus Thiele, TE Buaidhean cothrom air biadh agus rianachd riochdairean orexigenic agus anorectic air òl ethanol àrdaichte co-cheangailte ri bhith ag òl anns na modhan dorcha. Deoch làidir. Clin. Exp. Res. 2008; 32: 1962 - 1968
  69. Maric, T., Sedki, F., Ronfard, B., Chafetz, D., agus Shalev, U. Dreuchd cuibhrichte airson ghrelin ann am fèin-rianachd heroin agus ath-shuidheachadh heroin a tha ag iarraidh bochdainn ann am radain. Addict. Biol. 2012; 17: 613 - 622
  70. Morganstern, I., Barson, JR, agus Leibowitz, SF Riaghladh cus dhrogaichean agus biadh palatable le siostaman peptide coltach. Curr. Mì-ghnàthachadh dhrugaichean. An t-Urr 2011; 4: 163 - 173
  71. Murakawa, K., Hirose, N., Takada, K., Suzuki, T., Nagase, H., Cools, AR, agus Koshikawa, N. Bidh Deltorphin II a ’neartachadh ìrean extracellular de dopamine anns na nucleus accumbens tro uidheamachdan opioid receptor-eisimeileach. Eur. J. Pharmacol. 2004; 491: 31 - 36
  72. Naleid, AM, Grace, MK, Cummings, DE, agus Levine, AS Bidh Ghrelin a ’toirt a-steach biadhadh anns an t-slighe duais mesolimbic eadar an sgìre teasach ventral agus an niuclas accumbens. Peptides. 2005; 26: 2274 - 2279
  73. Narita, M., Nagumo, Y., Hashimoto, S., Narita, M., Khotib, J., Miyatake, M., Sakurai, T., Yanagisawa, M., Nakamachi, T., Shioda, S., agus Suzuki, T. Com-pàirt dhìreach de shiostaman orexinergic ann an gnìomhachadh an t-slighe dopamine mesolimbic agus giùlan co-cheangailte air adhbhrachadh le morphine. J. Neurosci. 2006; 26: 398 - 405
  74. Nestler, EJ A bheil slighe molecol cumanta ann airson tràilleachd ?. Nat. Neurosci. 2005; 8: 1445 - 1449
  75. Nylander, I., Stenfors, C., Tan-No, K., Mathe, AA, agus Terenius, L. Coimeas eadar irradachadh microwave agus decapitation: ìrean basal de dynorphin agus enkephalin agus buaidh làimhseachadh morphine cronach air peptidean dynorphin. Neuropeptides. 1997; 31: 357 - 365
  76. Pirnik, Z., Bundzikova, J., Holubova, M., Pychova, M., Fehrentz, JA, Martinez, J., Zelezna, B., Maletinska, L., agus Kiss, A. Bidh agonists ghrelin a ’toirt buaidh air faireachdainn pròtain Fos ann an raointean eanchainn co-cheangailte ri riaghladh in-ghabhail bìdh ann an luchagan fireann C57BL / 6. Neurochem. Int. 2011; 59: 889 - 895
  77. Richardson, KA agus Aston-Jones, G. Tha neurons orexin / hypocretin hypothalamic lateral a tha a ’pròiseachadh gu sgìre teasach ventral air an cur an gnìomh gu eadar-dhealaichte le roghainn morphine. J. Neurosci. 2012; 32: 3809 - 3817
  78. Romero-Pico, A., Vazquez, MJ, Gonzalez-Touceda, D., Folgueira, C., Skibicka, KP, Alvarez-Crespo, M., Van Gestel, MA, Velasquez, DA, Schwarzer, C., Herzog, H., Lopez, M., Adan, RA, Dickson, SL, Dieguez, C., agus Nogueiras, R. Bidh gabhadair hypothalamic kappa-opioid ag atharrachadh buaidh orexigenic ghrelin. NeuropsychopHarmacol. Air falbh. Publ. Am. Colla. Neuropsychopharmacol. 2013; 38: 1296 - 1307
  79. Sakata, I., Nakano, Y., Osborne-Lawrence, S., Rovinsky, SA, Lee, CE, Perello, M., Anderson, JG, Coppari, R., Xiao, G., Lowell, BB, Elmquist, JK, agus Zigman, JM Caractar luch neach-aithris cealla nobhail ghrelin. Regul. Pept. 2009; 155: 91 - 98
  80. Sandin, J., Nylander, I., Georgieva, J., Schott, PA, Ogren, SO, agus Terenius, L. Bidh in-stealladh dynocampin B hippocampal a ’toirt droch bhuaidh air ionnsachadh spàsail ann am radain: buaidh kappa-opioid receptor-mediated. Neo-eòlas. 1998; 85: 375 - 382
  81. Schaeffer, M., Langlet, F., Lafont, C., Molino, F., Hodson, DJ, Roux, T., Lamarque, L., Verdie, P., Bourrier, E., Dehouck, B., Baneres , JL, Martinez, J., Mery, PF, Marie, J., Trinquet, E., Fehrentz, JA, Prevot, V., agus Mollard, P. A ’faireachdainn gu sgiobalta mu bhith a’ cuairteachadh ghrelin le bhith a ’mion-atharrachadh hypothalamic appetite-modifying neurons. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2013; 110: 1512 - 1517
  82. Skibicka, KP, Hansson, C., Alvarez-Crespo, M., Friberg, PA, agus Dickson, SL Bidh Ghrelin a ’cuimseachadh gu dìreach air an sgìre teasach ventral gus àrdachadh bìdh a mheudachadh. Neo-eòlas. 2011; 180: 129 - 137
  83. Spanagel, R., Herz, A., agus Shippenberg, TS Bidh cur an aghaidh siostaman opioid endogenous gnìomhach tonally ag atharrachadh slighe dopaminergic mesolimbic. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1992; 89: 2046 - 2050
  84. Sustkova-Fiserova, M., Jerabek, P., Havlickova, T., Kacer, P., agus Krsiak, M. Antagonism gabhadair ghrelin de sgaoileadh dopamine accumbens morphine agus brosnachadh giùlan ann am radain. Psychopharmacology. 2014; 231: 2899 - 2908
  85. Trigo, JM, Martin-Garcia, E., Berrendero, F., Robledo, P., agus Maldonado, R. An siostam opioid endogenous: substrate cumanta ann an cuir dhrogaichean. Deoch làidir deoch làidir. 2010; 108: 183 - 194
  86. Tschop, M., Smiley, DL, agus Heiman, ML Bidh Ghrelin a ’brosnachadh adiposity ann an creimich. Nàdar. 2000; 407: 908 - 913
  87. Van Ree, JM, Niesink, RJ, Van Wolfswinkel, L., Ramsey, NF, Kornet, MM, Van Furth, WR, Vanderschuren, LJ, Gerrits, MA, agus Van den Berg, CL Opioids endogenous agus duais. Eur. J. Pharmacol. 2000; 405: 89 - 101
  88. Wagner, JJ, Terman, GW, agus Chavkin, C. Tha dynorphins endogenous a ’cur bacadh air neurotransmission excitatory agus a’ cur bacadh air inntrigeadh LTP anns an hippocampus. Nàdar. 1993; 363: 451 - 454
  89. Glice, RA Dopamine, ionnsachadh agus brosnachadh. Nat. An t-Urr Neurosci. 2004; 5: 483 - 494
  90. Wise, RA agus Bozarth, MA Teòiridh brosnachaidh psychomotor air cuir-ris. Psychol. An t-Urr 1987; 94: 469 - 492
  91. Yoshida, Y., Koide, S., Hirose, N., Takada, K., Tomiyama, K., Koshikawa, N., agus Cools, AR Bidh Fentanyl a ’meudachadh sgaoileadh dopamine ann an radan nucleus accumbens: com-pàirteachadh gabhadairean mesolimbic mu- agus delta-2-opioid. Neo-eòlas. 1999; 92: 1357 - 1365