Ekspresija in distribucija dopaminskega receptorja se dinamično spreminjajo v podganah nukleusa accumbens po prenehanju jemanja kokaina. (2010)

Premreževanje beljakovin

Ta metoda je bila podrobno opisana prej (Boudreau in Wolf, 2005; Ferrario et al., 2010). Podgane so bile obglavljene, njihovi možgani so bili hitro odstranjeni in celotna NAc (ali jedrna in lupinska subregija) je bila secirana na ledu iz koronalnega odseka 2mm, dobljenega z uporabo možganske matrike. Celotno NAc tkivo je bilo takoj razrezano v 400μm rezine z uporabo McIllwainovega tkalskega sekirnika (Vibratome, St. Louis, MO), medtem ko so manjše jedro in lupine subregije zrezali ročno s skalpelom. Tkivo je bilo nato dodano Eppendorfovim epruvetam, ki so vsebovale ledeno hladno umetno CSF ​​z dodatkom 2 mM bis (sulfosukcinimidil) suberata (BS).³; Pierce Biotechnology, Rockford, IL). Reakcijo zamreženja smo pustili nadaljevati za 30 min pri 4 ° C z rahlim pretresanjem in nato zaključili z dodatkom 100mM glicina (10 min pri 4 ° C). Tkivo je bil peletiran s kratkim centrifugiranjem, ponovno suspendiran v ledeno hladnem liznem pufru, ki je vseboval inhibitorje proteaze in fosfataze, sonciiran za 5 sek, in ponovno centrifugiran. Alikvoti supernatanta shranimo pri -80 ° C, dokler jih ne analiziramo z Western blot-om.

Western blot analiza DAR-jev v navzkrižno povezanem tkivu

Vzorce (celokupni protein / lizat 20-30μg) smo elektroforezirali na gelih 4-15% Tris-HCl (Biorad, Hercules, CA). Proteine ​​smo prenesli na membrane poliviniliden fluorida za imunoblotiranje z uporabo stalnega toka (1.15mA) za 1.5 h. Za preprečevanje prekomernega segrevanja je bila uporabljena hladilna spirala. Popoln prenos agregatov z visoko molekulsko maso smo potrdili z barvnimi geli po prenosu z Coomassie modrim. Poleg tega smo preverili, da v gelu za zlaganje niso bili zaznani zamreženi proteini DAR (podatki niso prikazani). Po prenosu smo membrane oprali v ddH₂O, sušimo na zraku za 1 ure pri sobni temperaturi (RT), ponovno hidriramo z 100% MeOH, izperemo z 1x Tris puferirano slanico (TBS) in potopimo v 0.1M NaOH, pH 10 za 15 min pri RT. Nato jih speremo v TBS, blokiramo z 3% govejim serumskim albuminom (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) v TBS-Tween-20 (TBS-T), pH 7.4, za 1 h pri RT in inkubiramo čez noč pri 4 ° C s protitelesi, ki prepoznajo D1 DAR (1: 1000; Millipore; Cat # AB1765P), D2 DAR (1: 1000; Millipore, Billercia, CA; Cat # AB5084P) in D3 DAR (1: 1000; Millipore; Cat # AB1786P). D4 in D5 DAR nista bili analizirani zaradi pomanjkanja protiteles, ki bi prepoznali tako zamrežene kot znotrajcelične receptorje. Opozoriti je treba, da so množice DAR protiteles, uporabljene v teh poskusih, kupljene v 2005-06; trenutni loti teh protiteles (2009-10) kažejo različne vzorce vezanja, ki se v tkivu ne spreminjajo iz miši DAR (neobjavljena opazovanja). Po inkubaciji primarnega protitelesa so membrane oprane s TBS-T raztopino, inkubirane za 60 min z HRP-konjugiranim anti-kunčjim IgG ali anti-mišjim IgG (1: 10,000; Biotehnologija nadstropja, Lake Placid, NY), oprane s TBS- T, splaknemo z ddH₂O in potopljen v substrat za detekcijo kemiluminescence (Amersham GE, Piscataway, NJ). Ko smo razvili blotove slike, smo posneli s programsko opremo Versa Doc Imaging Software (Bio-Rad). Difuzne gostote površinskih in znotrajceličnih pasov smo določili z uporabo programske opreme Quantity One (Bio-Rad). Vrednosti za površinske, intracelularne in celotne (površinske + znotrajcelične) nivoje beljakovin so bile normalizirane na celotne beljakovine v pasu, določene z uporabo Ponceau S (Sigma-Aldrich) in analizirane z TotalLab (Nelinearna dinamika, Newcastle, UK). Površinsko / znotrajcelično razmerje ni zahtevalo normalizacije, ker sta obe vrednosti določeni v isti stezi. Za proučitev specifičnosti protiteles so bile izvedene študije preabsorpcije za protitelesa DAR s peptidom, uporabljenim za tvorbo vsakega protitelesa. D1, D2 ali D3 DAR protitelo je bilo kombinirano z 10-kratno presežno koncentracijo peptida v 500μl TBS, zmešano za 4 ur pri 4 ° C, razredčeno na končni volumen 20ml, dodano membrani, in inkubirano čez noč pri 4ml. XNUMX ° C.

D1 DAR

Na WD45 niso ugotovili pomembnih razlik med skupinami kokaina in slanice. Vendar so bili učinki samo-dajanja kokaina vidni na WD1. Analiza celotnega NAc je pokazala bistveno višje razmerje D1 DAR na površini / celici v skupini WD1-Coc v primerjavi s skupinami, ki so same aplicirale slanico (Slika 2a). To je bilo mogoče pripisati skromnemu povečanju površinske vrednosti D1 DAR v kombinaciji z zmernim zmanjšanjem intracelularnih D1 DAR (nobeden od teh dveh posledic ni bil statistično značilen), ker ni bilo nobene spremembe v skupni ravni D1 DAR (površina + znotrajcelična) (Slika 2a). V jedru NAc ni bil ugotovljen noben pomemben učinek za noben ukrep D1 DAR (Slika 2b). Vendar je lupina NAc prikazala spremembe, ki so bile podobne tistim, ki so jih opazili v celotnem NAc, vendar nekoliko bolj robustno (Slika 2c). Površinsko / znotrajcelično razmerje D1 DAR se je povečalo v skupini WD1-Coc zaradi znatnega povečanja ekspresije D1 DAR na površini. Intracelularne ravni so ostale nespremenjene, vendar se je trend povečal na skupno raven D1 DAR. Če povzamemo, je bil večji del D1 DAR proteina površinsko izražen v lupini NAc podgan WD1-Coc v primerjavi s podganami WD1-Sal. D1 DAR porazdelitev se je vrnila v kontrolno stanje po 45 dneh od prenehanja uporabe kokainske samouprave.

Slika 2

D1 DAR površinska ekspresija se je povečala v lupini NAc po 1 dnevu prenehanja zdravljenja s kokainom.

D2 DAR

V celotnem NAc-ju je bil glavni opaženi učinek zmanjšanje izražanja D2 DAR pri podganah, ki so jih sami uporabili v primerjavi s kontrolami s slanico (Slika 3a). To je bilo najbolj izrazito na WD45, ko so opazili zmanjšanje v površinskem pasu, vse tri znotrajcelične pasove (~ 55, 75 in 100kDa) in v skupni vrednosti D2 DAR v primerjavi s kontrolami s slanico. Razmerje med površino in znotrajcelično D2 DAR je bilo v skupini WD45-Coc nekoliko večje, vendar se je znatno povečalo, zaradi večjega zmanjšanja intracelularnih DAR glede na površino D2, kar morda kaže, da celice kompenzirajo zmanjšano izražanje D2 DAR z distribucijo večjega dela razpoložljivega D2 DAR izraza. D2 DAR na površino. Pomembno je vedeti, da povišano površinsko / znotrajcelično razmerje ne kaže na povečan prenos D2 DAR v tem posebnem primeru, ker je bila absolutna raven površinsko izraženih D1 DAR zmanjšana. V skupini WD2-Coc je bil edini pomemben učinek zmanjšanje intracelularnih ravni monomera D55 DAR (~ 45kDa) v primerjavi z obema skupinama WD1-Sal in WDXNUMX-Sal, čeprav se je zmanjšalo tudi nekaj drugih ukrepov (Slika 3a).

Slika 3

Intracelularne in površinske ravni D2 DAR v NAc so se zmanjšale po 45 dneh od prekinitve zdravljenja s kokainom \ t

Skupno zmanjšanje izražanja D2 DAR je bilo očitno tudi v jedrnih in lupinskih subregijah NAc (Slika 3b in 3c), čeprav so bili učinki v lupini bolj izraziti. Tako so se ravni D2 DAR v kokainskih podganah znižale samo na WD45 v jedru, vendar na WD1 in WD45 v lupini. Skupni D2 DAR se je bistveno zmanjšal le v lupini. Zmanjšanje znotrajceličnih pasov D2 DAR se je pojavilo na obeh odtegnitvenih dneh tako v jedru kot v lupini, čeprav so se pojavile razlike, ki so značilne za umik in regijo, pri katerih je intracelularni trak pokazal statistično pomemben učinek. Če povzamemo, so bile ravni D2 DAR in intracelularni proteini zmanjšane v NAc po samoupravljanju s kokainom. Nekatera zmanjšanja so bila že vidna pri WD1.

D1 DAR površinska ekspresija se po prekinitvi kokainske samouprave poveča v lupini NAc

Po samoupravljanju s kokainom se je površinska ekspresija D1 DAR povečala v lupini NAc na WD1, vendar je bila normalizirana z WD45, medtem ko v jedru niso opazili sprememb, kar kaže na prehodno povečanje, omejeno na lupino. Podobni rezultati so bili pridobljeni v predhodnih študijah z uporabo receptorske autoradiografije. Ben-Shahar et al. (2007) ugotovili povečano gostoto D1 DAR v lupini NAc podgan 20 min (vendar ne 14 ali 60 dni) po prekinitvi razširjenega dostopa (6 hr / dan) samo-dajanja kokaina, medtem ko ni bilo opaziti sprememb v jedru ali po kokainu s kratkim dostopom -uporaba (2 h / dan). Nader et al. (2002) Opazili so majhno povečanje gostote D1 DAR v lupini, ne pa tudi jedro rhesus opic, ubitih po zadnji seji kokaina 100. Opici, ki so ocenjevali 30 dni po prekinitvi istega režima, so pokazali povečano gostoto D1 DAR v rostralni NAc in v jedru in lupini na bolj kaudalnem nivoju, vendar se je gostota D1 DAR normalizirala za 90 dni (Beveridge et al., 2009). Vsi ti rezultati, kot je naš, kažejo na prehodno zvišanje ravni D1 DAR, zlasti v lupini, po prekinitvi kokainske samostojne uporabe. Vendar pa je prejšnja študija te skupine pokazala zmanjšanje gostote D1 DAR v NAc (najbolj robustni v lupini) opic rezusov, ki so imeli daljše časovno obdobje (18 mesecev; Moore et al., 1998a). Zmanjšano vezavo D1 DAR v NAc je bilo ugotovljeno tudi 18 h po prekinitvi podaljšanega režima dostopa pri podganah, čeprav je bil skupni vnos kokaina v tej študiji višji kot pri raziskavah, o katerih so govorili zgoraj (De Montis et al., 1998). Ti rezultati kažejo, da so prilagoditve D1 DAR odvisne od mnogih vidikov izpostavljenosti kokainu. Še en premislek je, da receptorska autoradiografija meri celične celične receptorje, medtem ko lahko naši poskusi zamreženja proteinov razlikujejo med površinskimi in znotrajceličnimi receptorji. Zanimivo je, da je imunoblotting študija pokazala trend povečanja ravni D1 DAR v NAc uporabnikov kokaina (Worsley et al., 2000).

Ali je prehodno povečanje izražanja D1 DAR na površini, ki smo ga opazili v lupini NAc, pomembno za inkubacijo kokainskega hrepenenja? To je težko oceniti, ker nobena študija ni preizkusila učinka intra-NAc injekcije D1 DAR agonistov ali antagonistov na kokain, ki je bil usmerjen v iztočnico (ali umik kokaina po izumrtju). Vendar so receptorji D1 v medialnem NAc (lupini in srednjem jedru) vpleteni v ponovno vzpostavitev kokaina, ki išče kokain po izumrtju, očitno prek mehanizma, ki zahteva kooperativno aktivacijo D1 in D2 DAR (Anderson et al., 2003; 2008; Bachtell et al., 2005; Schmidt in Pierce, 2006; Schmidt et al., 2006). Skupaj z našimi rezultati lahko to nakazuje, da so nevroni v lupini NAc bolj odzivni na kokain, ki ga posreduje D1 DAR, v zgodnjem umiku zaradi prehodne regulacije D1R. Vendar pa je treba previdnost uporabiti pri ekstrapolaciji iz ponovne uvedbe v študije inkubacije, ker sta izumrtje in umik domače kletke povezana z različnimi nevroadaptacijami v NAc (Sutton et al., 2003; Ghasemzadeh et al., 2009; Wolf in Ferrario, 2010). Pomembno je omeniti, da sta D1 DAR v bazolateralnem amigdali in prefrontalnem korteksu pomembna tudi za ponovno vzpostavitev iskanja kokaina, ki je posledica napak (npr. Ciccocioppo et al., 2001; Alleweireldt et al., 2006; Berglind et al., 2006).

Na celičnem nivoju lahko presinaptični in postsinaptični DAR modulirajo modulacijo vzburjenosti srednjih živčnih nevronov, prevladujočega tipa celic in izhodnega nevrona NAc (Nicola et al., 2000; O'Donnell, 2003). Znano je, da ponavljajoča neuporabna uporaba kokaina povečuje nekatere učinke aktivacije D1 DAR v NAc. En dan po enem mesecu po prekinitvi zdravljenja s kokainom so v celotni NAc opazili povečano sposobnost agonistov D1 DAR, da zavirajo aktivnost srednjih kosti nevronov (ki jih poganja iontoforetski glutamat).Henry in White, 1991; 1995). Vendar pa povečano izražanje D1 DAR na površini, o katerem tukaj poročamo, verjetno ne bo pojasnilo teh predhodnih rezultatov, ker je omejeno na lupino in je bilo prikazano samo na WD1. En dan po izzivu kokaina, ki so ga dobili po 10-14 dneh po prekinitvi ponavljajočih se injekcij kokaina, Beurrier in Maleka (2002) opazili povečanje DA-posredovane inhibicije ekscitatornih sinaptičnih odzivov v NAc srednjih živčnih nevronih, ki so bili očitno posredovani s presinaptičnimi D1-podobnimi DAR-ji na terminalih glutamatnega živca. Vendar pa so možni učinki injekcije z izzivi (glej npr Boudreau et al., 2007 in Kourrich et al., 2007), skupaj z razlikami med vrstami in pomanjkanjem zapisov v jedru, je težko primerjati njihove ugotovitve z našimi. Prav tako je treba opozoriti, da se DAR agonisti in antagonisti uporabljajo Henry in White (1991; 1995) in Beurrier in Malenka (2002) ni razlikovala med D1 in D5 DAR.

D2 DAR ravni se zmanjšajo v NAc po prekinitvi uporabe kokaina

Glavni učinek, ki smo ga opazili v naši študiji, je bilo zmanjšanje količine beljakovin D2 DAR v jedru NAc in lupini po prenehanju jemanja kokaina v primerjavi z nadzorom slanice. To je bilo bolj izrazito v lupini, kjer so bili znotrajcelični, površinski in skupni pasovi zmanjšani na obeh WD1 in WD45. V jedru se je izražanje D2 DAR na površini zmanjšalo samo na WD45 in skupne ravni D2 DAR se niso bistveno zmanjšale. Več drugih študij je podobno odkrilo zmanjšano izražanje D2 DAR po prekinitvi kokainske samostojne uporabe. V opicah rezus z obsežno izkušnjo samo-dajanja kokaina je bila gostota D2 DAR, izmerjena s receptorsko autoradiografijo, zmanjšana v mnogih striatnih regijah, vključno z jedrom NAc in lupino, ko je bilo tkivo pridobljeno takoj po zadnji seji (Moore et al., 1998b; Nader et al., 2002). Z uporabo PET je bil ta učinek v bazalnih ganglijih odkrit v 1 tednu po začetku samo-dajanja kokaina (Nader et al., 2006). Hitrost obnove D2 DAR med ukinitvijo je lahko odvisna od celotnega uživanja kokaina. V avtoradiografski študiji so se vrednosti D2 DAR v NAc zbrale za kontrolo vrednosti po 30 ali 90 dnevih umika s semen kokaina samo s kokainom (100) (Beveridge et al., 2009). Vendar pa je v študiji PET o opicah z daljšo izpostavljenostjo (leto 1) in s tem večjim skupnim vnosom kokaina, 3 opic 5 pokazala povrnitev ravni D2 DAR po 90 dneh, medtem ko opice 2 niso imele okrevanja niti po 12 mesecih (Nader et al., 2006). Na splošno se ti rezultati dobro ujemajo z našimi ugotovitvami o zmanjšani ravni D2 DAR v času umika.

PET študije o ljudeh, odvisnih od kokaina, so prav tako odkrile zmanjšano raven D2 DAR v mnogih striatnih regijah, vključno z ventralnim striatumom, ki so se pokazale v zgodnjem umiku, kot tudi po 3-4 mesecih razstrupljanja (Volkow et al., 1990, 1993, 1997). Vendar je pomen za vedenje nejasen, saj razpoložljivost D2 DAR ni bila v korelaciji s pozitivnimi subjektivnimi učinki kokaina ali odločitvijo, da se vzame več kokaina po osnovnem odmerku (Martinez et al., 2004). Pomembno je omeniti, da kljub temu, da je kokainska hrepenenje, ki ga povzroča cue, kaže časovno odvisno povečanje med umikom (»inkubacija«), se to ne dogaja pri iskanju kokaina s kokainom (Lu et al., 2004a). Zato so rezultati Martinez et al. (2004) pustite odprto možnost, da bi razpoložljivost D2 DAR lahko korelirala z iskanjem kokaina, ki ga povzroča cue, pri čemer je poudarek inkubacijskega modela, ki smo ga raziskali. Nizka razpoložljivost D2 DAR pri uporabnikih kokaina pri ljudeh korelira z zmanjšano frontalno presnovoVolkow et al., 1993). Skupaj z drugimi spremembami lahko to prispeva k izgubi nadzora, ki se pojavi, ko so odvisniki izpostavljeni drogam ali parom, povezanim z drogami, in večji izpostavljenosti drog v primerjavi z nagradami brez drog (Volkow et al., 2007; Volkow et al., 2009). Upoštevati je treba, da lahko zmanjšana raven D2 DAR v raziskavi PET kaže na povečano sproščanje DA, ne pa na znižanje ravni D2 DAR, vendar nedavni rezultati nasprotujejo tej razlagi v primeru bolnikov, odvisnih od kokaina (Martinez et al., 2009). Poleg tega so postmortemsko študijo uporabnikov kokaina pri ljudeh ugotovili trend zmanjšanja ravni D2 DAR v NAc z uporabo imunoblotinga (Worsley et al., 2000).

Študije pri ljudeh, odvisnih od kokaina, ne morejo ugotoviti, ali je zmanjšana razpoložljivost D2 DAR predispozicijska lastnost ali posledica izpostavljenosti kokainu, drugi rezultati pa kažejo, da sta obe resnični. Po eni strani so eksperimenti z ljudmi, ki ne zlorabljajo droge, odkrili inverzno korelacijo med razpoložljivostjo D2 DAR in poročili o "uživanju zdravil", kadar je bil uporabljen metilfenidat (Volkow et al., 1999; 2002). Te ugotovitve kažejo, da lahko nizka D2 DAR razpoložljivost poveča ranljivost za zasvojenost. Podoben zaključek podpirajo študije na opicah rezusov. Pri opicah, ki so nastanjene v socialnem okolju, doseganje družbenega prevladujočega položaja povečuje razpoložljivost D2 DAR v striatumu in to je povezano z manjšo občutljivostjo na okrepitvene učinke kokaina v primerjavi s podrejenimi opicami (Morgan et al., 2002). Socialni status je povezan tudi s striatno razpoložljivostjo D2 DAR v človeških prostovoljcih brez drog (Martinez et al., 2010). Po drugi strani pa študije PET in receptorske avtoradiografije kažejo, da dolgotrajno samo-dajanje kokaina zmanjšuje razpoložljivost receptorjev D2 DAR pri striatnih bolnikih, kot so obravnavali zgoraj (Moore et al., 1998b; Nader et al., 2002; Nader et al., 2006). Zdi se, da samo-dajanje kroničnega kokaina zmanjšuje razpoložljivost D2 DAR v dominantnih družbeno nastanjenih opicah (Czoty et al., 2004). Tako po dolgotrajni samouporabi kokaina ni bilo več pomembnih razlik v razpoložljivosti D2 receptorjev ali okrepitvi učinkov kokaina med prevladujočimi in podrejenimi opicami (Czoty et al., 2004). Vendar se je povišana raven D2 DAR v prevladujočih opicah med abstinenco zmanjšala, kar je bilo povezano z daljšo zakasnitvijo kot reakcijo na novost, ki je lastnost napovedovanja zmanjšane občutljivosti na ojačevalne učinke kokaina (Czoty et al., 2010).

Kot pri ljudeh in opicah so študije na podganah pokazale, da je nizka razpoložljivost D2 DAR dejavnik tveganja za ranljivost kokaina. Tako so študije PET pri podganah z visoko impulzivnostjo (lastnost, povezano s povečano samouporabo kokaina) pokazale zmanjšano razpoložljivost D2 / D3 DAR v ventralnem striatumu (Dalley et al., 2007). Ravni D2 DAR v NAc so tudi zmanjšane pri podganah, ki kažejo visok lokomotorni odziv na novost, drugo lastnost, povezano z ranljivostjo odvisnosti (Hooks et al., 1994). Naši rezultati pri podganah kažejo, da so lahko zmanjšane ravni D2 DAR v NAc tudi posledica ponavljajoče se izpostavljenosti kokainu, skladne s študijami pri opicah in ljudeh (zgoraj). Vendar pa sta dve receptorski avtoradiografski študiji pri podganah našli rezultate, ki se razlikujejo od naših. Ben-Shahar et al. (2007) niso opazili zmanjšane ravni D2 DAR v NAc po prekinitvi (20 min, 14 dni 60 dni) od režima samo-dajanja kokaina s podaljšanim dostopom, podobnega naši (6 h / dan), čeprav so opazili zmanjšanje v lupini NAc po omejenem dostopu (2 hr / dan) in 14 dneh od preklica (Ben-Shahar et al., 2007). Stéfanski et al. (2007) po prekinitvi omejenega dostopa do kokaina (2 hr / dan) ni ugotovila nobenih sprememb ravni D24 DAR v jedru ali lupini 2 h, čeprav so se ravni D2 DAR znižale pri kontrolah z vgrajenim kokainom. Kot je navedeno zgoraj, receptorska autoradiografija meri celične celične receptorje, medtem ko študije PET in navzkrižno povezovanje proteinov merijo celične površinske receptorje.

Na splošno študije o razmerju med ravnijo D2 DAR in kokainsko samoupravo podpirajo model, v katerem D2 DAR normalno omejujejo samo-dajanje kokaina. Zato predlagamo, da lahko zmanjšane ravni D2 DAR, ki so jih opazili v naših poskusih, prispevajo k kokainu, ki ga išče po kokainu. Zlasti dejstvo, da je bila površinska ekspresija D2 DAR v jedru NAc zmanjšana na WD45, ne pa tudi na WD1, skupaj s ključno vlogo za jedro NAc v iskanju kokaina, ki povzroča izločanje, kaže, da lahko časovno odvisna D2 DAR regulacija v NAc jedru prispeva k časovno odvisni okrepitvi iskanja kokaina, ki je posledica kokaina. To bi predvidevalo, da bi intra-NAc infuzija D2 agonista med umikom zmanjšala iskanje kokaina, ki ga povzročajo napadi. Na žalost nobena študija ni preučevala učinkov zdravil znotraj NAC D2 DAR v inkubacijskem modelu. Po drugi strani pa študije o ponovni vzpostavitvi kokaina kažejo, da D1 in D2 DAR v lupini in srednjem delu sodelujeta pri spodbujanju iskanja kokaina (Anderson et al., 2003; Bachtell et al., 2005; Schmidt in Pierce, 2006; Schmidt et al., 2006). Na podlagi teh ugotovitev bi lahko napovedano zmanjšanje izražanja D2 DAR, opaženo v naših poskusih, zmanjšalo iskanje kokaina, kar pomeni, da povzroči učinek, ki je nasproten zaostritvi, odvisni od odtegnitve, ki se dejansko opazi. Razlika lahko odraža težave, ki so nastale s posploševanjem ponovne vzpostavitve kokaina po izumrtju, da bi kokain, ki je bil po umiku prekinjen, sprožil odziv.

Časovno odvisno povečanje izražanja D3 DAR na površini se pojavi v jedru NAc po prekinitvi kokainske samouprave.

Študije zdravil, ki dajejo prednost zdravilu D3 DAR v kokainski samopreskusni in ponovni vzpostavitvi, kažejo, da so antagonisti D3 DAR lahko koristni pri zdravljenju odvisnosti od kokaina, zlasti pri zmanjševanju reaktivnosti na znake, povezane s kokainom (Heidbreder et al., 2005; 2008; Le Foll et al., 2005; Xi in Gardner, 2007). Ti rezultati kažejo, da lahko aktivacija D3 DAR s strani endogenega DA sodeluje pri posredovanju kokaina, ki ga povzročajo. Naši rezultati kažejo, da je površinska ekspresija D3 DAR v jedru NAc nespremenjena na WD1 iz samodejne uporabe kokaina s podaljšanim dostopom, vendar se je povečala pri WD45 v povezavi z inkubacijo hrepenenja po kokainu. D3 DAR površinska ekspresija se v lupini ni bistveno povečala, čeprav je prišlo do majhnega, a pomembnega povečanja površinskega / znotrajceličnega razmerja. Glede na vlogo prenosa D3 DAR pri odzivanju na znake, povezane s kokainom, in pomena jedra za iskanje kokaina, ki ga povzročajo napadi, je skušnjava domnevati, da je povečana ekspresija D3 DAR v jedru NAc prispevala k inkubaciji kokaina hrepenenje, ki ga opazimo na WD45. Vendar nevralno mesto, na katerem antagonisti D3 DAR delujejo za zmanjšanje iskanja kokaina, še ni bilo ugotovljeno. Natančneje, nobena študija ni preučila učinka intra-NAc injekcije D3 DAR, ki daje prednost zdravilom za iskanje kokaina. V drugem modelu, Schmidt et al. (2006) Ugotovili so, da injiciranje agonista PD 3, ki daje prednost D128,907, v jedro ali lupino, ni povzročilo ponovne vzpostavitve kokaina, ki išče po izumrtju.

Naši rezultati so na splošno skladni s študijami receptorskega avtoradiografije, ki so merili skupne vrednosti D3 DAR v NAc po izpostavljenosti kokainu. Staley in Mash (1996) so poročali, da je bila vezava D3 DAR višja v NAc žrtev prevelikih odmerkov kokaina v primerjavi s kontrolami, primerljivimi s starostjo. Po izpostavljenosti kokainu v pogojeni klimatski preferencialni lokaciji in treh dneh odtegnitve so miši pokazali povečano vezavo D3 DAR v jedru NAc in lupini (Le Foll et al., 2002). Neisewander et al. (2004) izmerili vezavo D3 DAR pri podganah z obsežnimi izkušnjami s kokainom, ki so jih po različnih karencih testirali na ponovno vzpostavitev kokaina, nato pa kasneje ubili 24 h. D3 DAR vezava v NAc je ostala nespremenjena na WD1, vendar se je povečala po daljšem času (WD31-32), skladno z našim opazovanjem časovno odvisnega povečanja. Poleg tega zdravljenje z drogami med umikom, ki je zmanjšalo iskanje kokaina, tudi oslabilo povečanje vezave D3 DAR, kar kaže, da je regulacija D3 DAR funkcionalno povezana z iskanjem kokaina. Opozoriti je treba, da se D3 DAR povečuje Neisewander et al. (2004) v jedru so bile pomembne, opazili pa so le trende v lupini, vendar so bile podregije analizirane v rostralnem delu NAc, kjer sta jedro in lupina manj izrazita. Naša analiza je bila izvedena na jedru in lupini iz rostralnega in kaudalnega dela NAc.

To delo so podprli DA009621, DA00453 in nagrado NARSAD Distinguished Investigator za raziskovalca MEW, DA020654 za MM, in predodborno nagrado National Research Service DA021488 za KLC