Sprememba gostote oksitocinskega receptorja v jedrnih obtokih ima diferencialne učinke na afilizacijske vede v monogamnih in poligamnih voljih (2009)

J Neurosci. Avtorski rokopis; na voljo v PMC Oct 27, 2009.

Objavljeno v končni obliki:

PMCID: PMC2768419

NIHMSID: NIHMS93410

Založnikova končno urejena različica tega članka je na voljo brezplačno na J Neurosci

Oglejte si druge članke v PMC quote objavljeni članek.

Pojdi na:

Minimalizem

Oksitocinski receptorji v nucleus accumbens so bili vpleteni v regulacijo aloparentalnega obnašanja in nastanek parnih vezi v socialno monogamni prerijski voluharici. Gostota receptorjev oksitocina v nucleus accumbens je pozitivno povezana z aloparantiranjem pri mladicah in odraslih prerijskih voluharjih, antagonist oksitocinskega receptorja, ki je infundiran v nucleus accumbens, blokira to vedenje. Poleg tega imajo prerijske voluharice v akumbensih višje gostote oksitocinskih receptorjev kot ne-monogamne vrste glodalcev, blokiranje receptorjev akkotocina pa preprečuje nastanek partnerskih preferenc. Pri tem smo uporabili prenos genov adeno-povezanega virusnega vektorja, da bi raziskali funkcionalno razmerje med gostoto akumulacijskega oksitocinskega receptorja in socialnim obnašanjem v prerijskih in travniških voluhah. Odrasle ženske prerijske voluharice, ki prekomerno izražajo oksitocinski receptor v nukleusu accumbens, so pokazale pospešeno oblikovanje partnerskih preferenc po sožitju z moškim, vendar niso pokazale večjega aloparentalnega vedenja. Vendar pa prednost partnerja ni bila olajšana pri ne-monogamnih travniških voluhah z uvedbo oksitocinskega receptorja v nucleus accumbens. Ti podatki potrjujejo vlogo oksitocinskega receptorja v akumbensih pri regulaciji partnerskih preferenc pri ženskih prerijskih voluharjih in kažejo, da izražanje oksitocinskih receptorjev v akumbensih ni dovolj za spodbujanje partnerskih preferenc pri ne-monogamnih vrstah. Ti podatki so prvi, ki dokazujejo neposredno povezavo med gostoto oksitocinskega receptorja v nucleus accumbens in variacijami v družbenih vedenjih. Tako lahko individualne razlike v izražanju oksitocinskega receptorja v striatumu prispevajo k naravni raznolikosti družbenega vedenja.

ključne besede: mater, virus, prednost, nevropeptid, kognicija, avtoradiografija

UVOD

Mikrotinski glodavci kažejo izjemno raznolikost v družbenem vedenju, ki sega od zelo agresivnih in socialno monogamnih, do relativno asocialnih in promiskuitetnih strategij parjenja (Gruderadams in Getz, 1985). Družbeno monogamna prerijska voluharica (Microtus ochrogaster) oblikuje trajne socialne vezanosti ali parske vezi z nasprotnim spolnim partnerjem po sožitju in parjenju, medtem ko ne-monogamni travniki (Microtus pennsylvanicus) običajno ne. Odrasli spolno naivni ženski prerijski voluharji kažejo precejšnjo raznolikost v svojem spontanem negovalnem vedenju ali aloparentalnem obnašanju, pri čemer približno polovica kaže, da je do mladičev podobno materinsko vedenje, medtem ko preostanek ignorira ali napada mladiče (Lonstein in De Vries, 1999; Bales in Carter, 2003; Olazabal in Young, 2005). Tako voluharice predstavljajo odlično priložnost za preučevanje nevrobioloških mehanizmov, ki so podlaga za socialno povezanost in aloparentalno skrb, kot tudi mehanizme, ki vodijo k raznolikosti teh obnašanj tako med vrstami kot med posamezniki.

Nonapeptid oksitocin (OT) je bil vpleten v regulacijo tako preferencialnega partnerstva kot aloparentalnega obnašanja v prarijskih voluharjih. Infuzija antagonista oksitocinskega receptorja (OTR) v nucleus accumbens (NAcc), ne pa tudi v sosednje kaudatne putamene bloke, ki povzročajo paritvene preference partnerjev, laboratorijski proxy za nastanek parnih vezi (Young et al., 2001). Podobne infuzije antagonistov OTR v NAcc prav tako blokirajo aloparentno obnašanje pri deviških samicah (Olazabal in Young, 2006b). Tako aktivacija OTR-jev v NAcc olajša tako preferenčno oblikovanje partnerjev kot tudi aloparentno vedenje pri ženskih prerijskih voluharjih.

Razlike v gostoti OTR v NAcc so predpostavljene, da prispevajo k različnim vrstam družbene organizacije in aloparentalnega vedenja. Prerijske voluharice imajo v NAcc visoko gostoto OTR, medtem ko nemonogamni travniški voluharji, miši in podgane ne (Insel in Shapiro, 1992; Olazabal in Young, 2006a). Prerijske voluharice kažejo tudi višje ravni aloparentnega vedenja kot pa travniške voluharice, miši ali podgane (Olazabal in Young, 2006a). Vzporedno s tem medvrstnim razmerjem med gostoto OTR v NAcc in starševskim obnašanjem je gostota OTR v NAcc pozitivno povezana z aloparentalnim obnašanjem pri mladičih in odraslih prerijskih voluharjih (Olazabal in Young, 2006b, a). V tej študiji smo uporabili prenos genov adeno-povezanega virusnega vektorja (AAV) za neposredno testiranje hipoteze, da lahko sprememba gostote NACC OTR prispeva k variacijam v socialni vezanosti in aloparentalnem vedenju. Odrasle ženske prerijske voluharice so bile dvostransko infundirane v NAcc z AAV kodiranjem gena OTR prairne voluharice, kar je imelo za posledico znatno povečanje OTR vezave. Živali so bile nato testirane na aloparentno obnašanje in oblikovanje partnerskih preferenc. Potem smo preizkusili hipotezo, da je ekspresija OTR v NAcc zadostovala za lažje oblikovanje preferenc partnerjev z infuzijo ženskih travnikov z istim vektorjem. Predvidevali smo, da bo v primerjavi s kontrolami prekomerno izražanje ženskih prerijskih volov OTR pokazalo povečano aloparentno vedenje in pospešeno oblikovanje prednostnih partnerjev. Poleg tega smo napovedali, da bodo ženske v travniški voluhi, ki izražajo OTR v NAcc, razvile partnerske preference do moških partnerjev.

MATERIALI IN METODE

živali

Prarijske in travniške voluharice so bile nastanjene v istih spolnih skupinah z 2-3 voluhami / kletko iz časa odstavitve v 21-23 dnevih. Ohišje je bilo sestavljeno iz prezračevalne kletke 36 × 18 × 19cm, napolnjene z nožem Bed-ocobbs Laboratory Animal pod 14: 10 hr svetlobni / temni cikel pri 22 ° C z dostopom do hrane (kunci LabDiet, Richmond, IN) in voda ad litumum . Prerijske voluharice so bile pridobljene iz laboratorijske kolonije za vzrejo, ki je bila prvotno pridobljena iz poljskih voluharjev v Illinoisu. Travniške voluharice so bile izpeljane iz staleža, pridobljenega iz plemenske kolonije na Floridi. Subjekti so bili mesec dni stare 2-5 nedotaknjene ženske volitve. Živali spodbud so bile spolno izkušene odrasle moške voluharice. Vsak moški je služil kot »partner« in »tujec« med partnerskim preferenčnim testom (glej spodaj). Letevci so bili razporejeni v različne tretirane skupine, da bi nadzorovali variabilnost znotraj legel in znotraj kletk. Vsi postopki so bili odobreni s strani Odbora za institucionalno oskrbo in uporabo živali Univerze Emory.

Adeno-povezani virusni vektorji

OTR kodirna sekvenca je bila ustvarjena s spenjanjem prvega eksona genomske klone prerejeve voluharice, ki kodira prvih pet transmembranskih domen (Genbank pristopna številka) AF079980) in 3 of koncu OTR pomnožena s cDNA prerije vole maternice. Kodirna sekvenca je bila ponovno oblikovana z uporabo PCR za odstranitev UTR in zagotovitev novih bočnih restrikcijskih mest za olajšanje kloniranja v AAV vektorski plazmid. Modificirani gen je bil nato kloniran v AAV2 vektorski plazmid med promotorjem 0.6 kb citomegalovirusa (CMV) in fragmentom DNA SV40 DNA, ki vsebuje SV40 majhen t intron in poliA signal. AAV2-OTR je bil v AAV9 navzkrižno pakiran s trojno plazmidno transfekcijo v celice AAV-293 (Stratagene, La Jolla, CA) z uporabo standardnega kalcijevega fosfata. Uporabljen ni bil noben pomožni virus. Plazmid AAV2-eGFP smo zapakirali vzporedno v AAV9 kot negativni kontrolni vektor. Na kratko, vsak AAV vektorski plazmid, AAV2 / 9 rep / pokrov plazmid, ki zagotavlja AAV2 replikazne in AAV9 kapsidne funkcije, in 3rd plazmid, ki kodira adenovirusne pomožne funkcije, pHelper (Stratagene), se so-transfektirajo v 293 celice pri molskem razmerju 1: 1: 1. Celice smo zbrali 48 ur po transfekciji. Celične pelete smo nato ponovno suspendirali v DMEM in intracelularni virusni delci sprostili s tremi zaporednimi krogi zamrznitve-odtaljevanja, čemur je sledilo centrifugiranje pri 13,000 rpm za 10 min na namizni centrifugi za odstranitev delcev. Staleži vektorja so bili shranjeni pri -80 C, in titerovani s PCR v realnem času z uporabo ABI Prism 7700 sistema za zaznavanje zaporedja iz Perkin-Elmer Applied Biosystems (Foster City, CA). Titri so bili po vrstnem redu 1012 DRP / ml. (DRP = delci, odporni proti dnazi).

Infuzija virusnih vektorjev

Stereotaksične infuzije so bile izvedene pod anestezijo izoflurana v Kopfovi stereotaksi, opremljeni z Ultra Micro Pump II (World Precision Instruments, Sarasota, FL) in 26 merilno Hamilton brizgo. Samice so bile injicirane dvostransko v lupino NAcc (prerijske voluharice: AP + 1.7mm, ML .9mm, DV − 4.5mm, travniška volja: AP + 1.6mm, ML .9mm, DV − 4.3mm) z 750nl ali AAV, ki vsebuje voluharico. oksitocinski receptor (CMV-OTR, N = 12) ali kontrolni eGFP ekspresijski vektor (CMV-GFP, N = 16). Virus je bil infundiran s hitrostjo 93.8nl / min. Injekcijska brizga ostane na mestu 5 min po infuziji, da se čim bolj zmanjša difuzija vektorja na igelni poti. Lažno operirane živali (N = 9) so bile anestezirane, lasišča pa so imela zarezan in zašiten. Po operaciji so bile živali nastanjene v skupini do časa testiranja partnerskega preferenčnega obnašanja. Predhodne študije so pokazale, da je bila ekspresija OTR na mestu injiciranja stabilna po 10 dneh.

Alloparental Behavior Testing

Mesec dni po injiciranju so prerijske voluharje testirali na aloparentalno vedenje. Testiranje je potekalo med 0800 in 1800. Testne živali so namestili v veliko čisto kletko (45.5 × 24 × 20 cm) in jim omogočili, da so se prilagodile 15 minut. Na en konec kletke sta bila nameščena dva mladiča (stara 2-5 dni). Zabeležena je bila latenca približevanja mladičev, število živali, ki so napadle mladiče, in čas, porabljen za nego, lebdenje in pridobivanje mladičev. Latenca 900 sekund je bila dodeljena živalim, ki se med 15-minutnim testom niso približale mladičem za namen statistične analize. Testiranje se je takoj ustavilo, če je samica napadla mladiče. Živali so bile kategorizirane kot aloparentalne, če so več kot 30 sekund lizale mladiče brez napada. Na podlagi rezultatov poskusa s prerijskimi voluharji na travniških voluharjih niso testirali aloparentalnega vedenja.

Preference preferenc partnerjev (Prairie Vole)

En mesec po testiranju aloparentnega obnašanja in dveh mesecih po infuziji AAV so ženske dobile 4 μg estradiol benzoata (EB; Fisher, Pittsburgh, PA), raztopljenega v 0.1ml IP sezamovega olja dnevno za 3 dni pred parjenjem, da bi inducirali spolno dovzetnost. . 16 ur po zadnjem injiciranju živali EB smo postavili v čisto kletko (28 × 17 × 12cm) z spolno izkušenim odraslim moškim za 6 ur in nato vrnili v skupinsko nastanitev. Spoznavanje parjenja je bilo zabeleženo med začetnim sočasnim bivanjem v 6 uri. Zaznali smo latenco do prvega vdora in število spopadov v prvi uri. Živalim, ki se niso pari v času 3600 ur, za statistično analizo, je bila dodeljena latenca 1 sekund. Naslednje jutro (14 ur po sobotnem življenju) so bile živali testirane na partnersko prednost. V testu partnerske preference se eksperimentalna samica postavi v nevtralno osrednjo komoro trikomornega aparata, v katerem je moški partner privezan v eni stranski komori in je v drugem privezan nov "moški neznanec" (Williams et al., 1992). Eksperimentalna žival se lahko prosto giblje po komorah in čas, porabljen v neposredni bližini vsakega samca, se zabeleži z uporabo avtomatiziranega sistema zlomov žarkov (Curtis in Wang, 2005b, a; Lim et al., 2007).

Dan kasneje so ženske ponovno sparjali z istim partnerjem za dodatnih 12 ur sobivanja. Ženske so bile nato ponovno preizkušene za prednost partnerja (18 ura skupnega časa). Ta dvostopenjska paradigma je bila uporabljena za maksimiranje našega odkrivanja poenostavitve testa preferenc partnerjev, saj je variabilnost praga časa, potrebnega za oblikovanje partnerske preference. Živali so imele prednost pri partnerjih, če so v primerjavi s partnerjem v neposredni bližini s partnerjem porabile dvakrat več časa.

Preverjanje preferenc partnerjev (travnik)

Običajno travniške volje iz naše kolonije ne bodo tvorile parne vezi po 24hs izpostavljenosti mate. Zato so bili za ta poskus izvedeni testi partnerskih preferenc po sožitju 24 in dodatnih 48 ur (72 hrs total). Vse druge metode obdelave in testiranja so enake kot zgoraj.

Zbiranje in obdelava tkiv

Po vedenjskih poskusih so bile živali globoko anestezirane z izofluoranom. Nato so zbrane in zamrznjene na suhem ledu v prahu. Možgani so bili razdeljeni skozi serijo NAcc v seriji 6 na 20μm, na kriostatu, na tobogane Fisher Frost-plus. Predenci so bili shranjeni pri -80C, dokler se niso uporabili v avtoradiografiji.

Avtoradiografija OTR

Avtoradiografija OTR receptorja je bila uporabljena za oceno OTR vezave v AAV injiciranih živalih. Avtoradiografija je bila izvedena, kot je opisano prej z rahlimi spremembami (Insel et al., 1991; Wang in Young, 1997). Odseke odstranimo iz shranjevalnika -80C, pustimo, da se zrak spusti, potopimo v 0.1% paraformaldehid v fiziološki raztopini s fosfatnim pufrom (pH 7.4) in speremo dvakrat v 50 mM Tris pufru (pH 7.4), da odstranimo endogeno OT. Nato smo tkivo inkubirali v 50 pM 125I-OVTA (NEX 254050UC PerkinElmer, Waltham, MA) eno uro. Nevezani radioligand smo odstranili s štirimi izpirki v 50mM Tris plus 2% MgCl2 (pH 7.4) in nato potopimo v dH20 in se posuši na zraku pod hladnim zrakom. Ko je bilo suho, so bili preparati izpostavljeni BioMax MR filmu (Kodak, Rochester, NY) za 72 ur. Dve CMV-OTR in ena CMV-GFP živali sta bili izključeni iz vedenjske analize zaradi izpustov injekcij.

GFP imunohistokemija

Podmnožico živali (N = 5), ki smo ji injicirali s CMV-GFP, smo perfundirali transkardialno z 50 ml PBS, čemur je sledila 50 ml 4% paraformaldehida v 0.1 M fosfatnem pufru, ki je vseboval 2.5% akrolein (Polysciences, Warrington, PA). Takoj po perfuziji smo odstranili možgane in jih shranili pri 4 ° C v raztopini 30% saharoze, dokler niso razdelili. Možgani so bili narezani na koronalne odseke 25μm z zamrzovalnim mikrotomom in shranjeni prosto plavajoči v raztopini krioprotektanta pri -20 ° C do imunohistokemične obdelave.

Serija 1: 6 skozi rostrokaudalno os vsakega možganov je bila obdelana za GFP. Na kratko, sekcije odstranimo iz raztopine krioprotektanta, obilno speremo v slanici s pufrom v kalijevem fosfatu (pH 7.4) in nato reagiramo 15 minut v 1% natrijevem borohidridu, da odstranimo presežek aldehidov. Odseke smo nato inkubirali v primarni raztopini protiteles, usmerjeni proti GFP v slanici s kalijevim fosfatom (KPBS), ki je vsebovala 0.1% Triton-X za 1 uro pri sobni temperaturi, čemur so sledili 48 ure pri 4 ° C. Celice, ki vsebujejo GFP, smo identificirali z uporabo poliklonskega kunčjega anti-GFP protitelesa (kat. Št. A6455, Invitrogen, Carlsbad, CA) pri koncentraciji 1: 100,000. Po inkubaciji primarnega protitelesa je bilo tkivo sprano v KPBS, inkubirano za 1 uro v biotiniliranem kozjem anti-kunčjem IgG (Jackson Immunoresearch, West Grove, PA) pri koncentraciji 1: 600 in splaknjeno v KPBS, ki mu je sledil 1- urna inkubacija v kompleksu avidin-biotin peroksidaze (ABC Elite Kit PK-6100 Vector, Burlingame, CA) pri koncentraciji 1: 200. Po spiranju v KPBS in Tris pufru (pH 7.2) je bil GFP vizualiziran kot rjav reakcijski produkt z uporabo 3,3-diaminobenzidina, ki vsebuje 0.08% vodikov peroksid v Tris pufru. Reakcijski produkt smo končali po približno 20 minutah s spiranjem v Tris pufru. Sekcije so bile nameščene iz fiziološke raztopine na stekelce iz želatine, posušene na zraku, dehidrirane v seriji razvrščenih alkoholov, očiščene v Histoclear (National Diagnostics, Atlanta, GA) in pokrite z uporabo Krystalona (EMD Chemicals, Gibbstown, NJ).

Statistična analiza

Podatki so predstavljeni kot povprečje ± standardna napaka povprečja (SEM). Dvosmerno zdravljenje RM ANOVA je potekalo z uporabo časa, porabljenega za vsako dražilno žival kot odvisno spremenljivko, pri čemer je bil dejavnik znotraj subjekta partner ali tujec, in skupina zdravljenja kot dejavnik med osebami. Test Holm-Sidak je bil uporabljen za post hoc parne primerjave, ko je bil zaznan pomemben učinek interakcije. Enosmerni ANOVA so se izvajali na aloparentalnem in paritvenem vedenju za prerijske voluharje. Tista vedenja, ki niso izpolnjevala meril za normalnost, so bila analizirana z uporabo enosmerne analize variance na lestvici Kruskal-Wallis. Za določitev skupinskih razlik v deležu živali, ki kažejo aloparentalno vedenje, je bil uporabljen Fisherjev natančen test. Obnašanje parjenja travniške voluharice je bilo analizirano s pomočjo t-testa in Mann-Whitneyevega uvrstitvenega testa, kadar test normalnosti ni uspel.

REZULTATI

Alloparental Behavior in Prairie Voles

Delež vnešenih CMV-OTR samic prerijskih voluharjev, ki kažejo aloparentalno vedenje (3/9), se ni razlikoval od kontrolnih (4/15) ali navideznih voluharjev (3/10) (p> 0.5; Slika 1A). Dve CMV-OTR, štiri CMV-GFP kontrole in dve laični samici, ki sta bili kategorizirani kot nealoparentni, sta napadli mladiče. Zakasnitev do mladičkov (Slika 1B) in čas, porabljen za lizanje / nego, se med skupinami tudi ni bistveno razlikoval (H = 0.31, P> 0.8 za zakasnitev, H = 0.40, P> 0.8 za negovanje). Ko so primerjali le živali, ki so dosegle kriterije aloparentalnosti, se latenca približevanja mladičem za samice CMV-OTR (140.2 ± 65.2 sekunde) ni razlikovala od CMV-GFP (62.5 ± 39.3 sekunde) ali lažne (169.4 ± 51.7 sekunde) ) samice (F (2,7) = 1.27, p> 0.3). Prav tako ni bilo razlike v času, ko so samice aloparentalnih CMV-OTR porabile lizanje mladičev v primerjavi z aloparentalnimi CMV-GFP ali navideznimi samicami (F (2,7) = 1.94, p> 0.2; Slika 1C). Skupni čas, ki ga je vsaka skupina porabila za lizanje / nego, lebdenje in nošenje mladičev, se prav tako ni razlikoval med aloparentalnim CMV-OTR (695.2 ± 77.1 sekunde) CMV-GFP (387.5 ± 132.7 sekunde) ali lažnim (503.8 ± 82.8 sekunde) ) živali (F (2,7) = 1.98, p> 0.2).

Slika 1  

Alloparentalno obnašanje pri lahki, CMV-GFP in CMV-OTR ženski prerijski voluharici. A) Ni bilo učinka zdravljenja na delež žensk v vsaki zdravljeni skupini, ki je pokazala aloparentno vedenje. Temne črte predstavljajo odstotek živali ...

Vedenje parjenja v Prairie Voles

Pred kirurškim zdravljenjem samic na parjenje ni bistveno vplivalo. Latenca do prvega posega ni bila bistveno drugačna pri samcih, seznanjenih s samicami CMV-OTR, v primerjavi s samci, parjenimi s CMV-GFP ali navideznimi samicami (H = 5.043, p = .08; Slika 2A). Čeprav se je skupina CMV-OTR navadno parila prej kot druge skupine, se niso parile pogosteje. Število paritev v prvi uri se ni razlikovalo pri parih, ki so vsebovali samice CMV-OTR, od parov, ki so vsebovali CMV-GFP ali navidezne samice (F (2,31) = 0.46, p> 0.6; Slika 2B).

Slika 2  

Parjenje in preference partnerjev pri navideznih prerijskih voluhah CMV-GFP in CMV-OTR. Latenca do prvega vdora (A) in število paritev (B) se med skupinami ni bistveno razlikovala. C) Po skupnem času 6 ure, ...

Ponašanje partnerjevih preferenc v prerijskih voljih

Po izteku obdobja skupnega življenja 6 hr nobena od skupin ni pokazala pomembne partnerske preference (Slika 2C). Glavnega učinka zdravljenja (F (2,31) = 0.56, p> 0.5) ali časa, preživetega s partnerjem, ni bilo v primerjavi z neznancem (F (1,31) = 0.46, p> 0.5). Po dodatnih 12 urah sobivanja ni bilo glavnega učinka zdravljenja (F (2,29) = .78, p = 0.5) ali količine časa, preživetega s partnerjem v primerjavi z neznancem (F (1,29) = 3.71 p = 0.06). Vendar pa je bil pomemben učinek interakcije (F (2,29) = 5.56, p = 0.009). Post-hoc test je pokazal, da so ženske CMV-OTR preživele bistveno več časa v neposredni bližini partnerja kot neznanca (p <0.001; Slika 2D). Vendar ženske CMV-GFP in lažne ženske po tem obdobju niso pokazale partnerskih želja (p> 0.05; Slika 2D). Poleg tega je 80% vbrizganih volov s CMV-OTR doseglo kriterije za partnersko prednost, tj. Porabo dvakrat več časa s partnerjem kot tujec, v primerjavi s samo 31% vbrizganih CMV-GFP in 44% lahkih živali (Slika 2E, F).

Izraz OTR in GFP v NAcc Prairie Voles

Avtoradiografijo smo določili za določitev namestitve injekcije AAV in preverili, ali je CMV-OTR vektor povzročil povečano vezavo OTR v primerjavi s kontrolami. Kot smo že poročali, je bilo značilno individualno odstopanje v vezavi OTR v NAcc kontrolne volovske prelice CMV-GFP (Slika 3A, B). V NAcc CMV-OTR vbrizganih prarijskih volovcih so odkrili izrazita zvišanja vezave OTRSlika 3C). Poleg tega smo izvedli GFP imunohistokemijo na možganskih odsekih CMV-GFP živali, da smo določili obseg izražanja v nevronih NAcc. Ugotovljeno je bilo jasno označevanje celic z nevronskimi značilnostmi, kar potrjuje, da vektorji CMV AAV poganjajo ekspresijo v nevronih (Slika 3E, F).

Slika 3  

Analiza izražanja OTR in GFP v CMV-OTR in CMV-GFP ženskih prerijskih voluharjih. Gostota OTR je bila določena z uporabo receptorske autoradiografije. A, B) V NAcc ženskah CMV-GFP je prišlo do znatnih variacij v gostoti vezave OTR. To je v nasprotju ...

Vedenje parjenja v travniških voljih

Med tretiranimi skupinami pri travniških voluharjih niso opazili pomembnih razlik v vedenju pri parjenju. Latenca do prvega posega ni bila drugačna pri moških, seznanjenih s samicami CMV-OTR (1245.1 ± 1465.9 sekunde), v primerjavi z moškimi, parjenimi za nadzor samic CMV-GFP (566.6 ± 989.8 sekunde) (T = 128.0, p> 0.2). Število napadov parjenja v prvi uri se prav tako ni razlikovalo pri parih, ki vsebujejo samice CMV-OTR (6.8 ± 5.1), in od parov, ki vsebujejo samice CMV-GFP (9.5 ± 4.4) (t = 1.42, p> 0.1).

Prednost partnerja v Meadow Voles

Po izteku obdobja skupnega bivanja (24hr) nobena od skupin ni pokazala pomembne partnerske nastavitve (Slika 4A). Ni bilo glavnega učinka zdravljenja (F (1,20) = 0.19, p> 0.6) ali časa, preživetega s partnerjem v primerjavi z neznancem (F (1,20) = 0.09, p> 0.7). Po dodatnih 48 urah sožitja spet ni bilo pomembnega glavnega učinka zdravljenja (F (1,19) =. 65, p> 0.4) ali časa, preživetega z nobeno žensko (F (1,19) = 0.62, p> .4; Slika 4B).

Slika 4  

Prednostno obnašanje partnerjev ženskih travniških voluharjev po sočasnem življenjskem času 24 (A) in po kumulativnem sočasnem nastanku 72 (B). Samice CMV-OTR in CMV-GFP, ki so bile vbrizgane, niso pokazale prednosti partnerja. Z partnerjem so porabili enako količino časa ...

Izraz OTR v NAcc Meadow Voles

CMV-GFP vbrizgani travniški voluharji so imeli malo ali nič vezave OTR v NAcc (Slika5A). Nasprotno pa so CMV-OTR injicirani travniški voluhi imeli pomembno vezavo OTR v NAcc, primerljivo s prašnimi voluhami (Slika 5B).

Slika 5  

Avtoradiografija receptorjev, ki ponazarja gostoto vezave OTR v NAcc CMV-OTR (A) in CMV-GFP (B) travniških volov. Opomba: CMV-GFP ženske travniške voluharice so imele malo ali nič OTR vezave v NAcc. Vendar pa je bila OTR vezava v NAcc dramatično povišana ...

DISKUSIJA

Razlike v gostoti OTR v NAcc so povezane z različnimi vrstami v strategiji parjenja (socialna monogamija vs poligamija) in aloparentalnim obnašanjem, kar kaže na to, da lahko razlike v izražanju receptorjev OTR temeljijo na razlikah v družbeni ureditvi in ​​vedenju (Insel et al., 1991; Young in Wang, 2004; Olazabal in Young, 2006b). Družbeno monogamne prerijske voluharice imajo v NAcc večjo gostoto OTR kot ne-monogamne travne in montanske voluharice, farmakološka blokada teh receptorjev pa preprečuje nastanek partnerskih preferenc pri parjenju (Young et al., 2001; Olazabal in Young, 2006b). Obstajajo tudi pomembne individualne razlike v gostoti OTR v NAcc znotraj prerijskih voles (Slika 3A, B). Gostota OTR v tej regiji je pozitivno povezana s posameznimi variacijami v aloparentalnem obnašanju odraslih žensk v prerijski volji (Young, 1999; Olazabal 2006) in dajanje OTR antagonistov v NAcc to odpravlja (\ tOlazabal in Young, 2006a). Zato smo v tej študiji skušali neposredno preskusiti razmerje med gostoto receptorjev v NAcc in pripadajočem vedenju volov, z uporabo prenosa genov AAV.

Naši rezultati kažejo, da ženske prerijske voluharice z zvišanimi stopnjami OTR v NAcc prikazujejo pospešeno oblikovanje prednostnih partnerjev v primerjavi s samicami z nižjo gostoto OTR (CMV-GFP ali shams). CV zvezi z našo napovedjo ni bilo razlike v aloparentalnem obnašanju med skupinami, kar kaže na diferencialne mehanizme, s katerimi prisegalno OTR uravnava oblikovanje partnerskih preferenc in aloparentalnega vedenja. Naši rezultati podpirajo hipotezo, da posamezne razlike v izražanju OTR prispevajo k variacijam znotraj vrst v nekaterih vidikih partnerskega vedenja. Vendar pa povečanje izražanja OTR v NAcc ni bilo zadostno, da bi spodbudilo nastanek partnerskih preferenc v travniških volkah, tudi po 72 urah sobivanja, kar kaže, da razlike v vrstah v akumalnem OTR same po sebi ne zadostujejo za razlago razlik v sposobnosti za oblikovanje partnerja. preferencialov. Pomembno je omeniti, da ni bilo nobenih skupinskih razlik v vedenju pri parjenju pri katerem koli izmed preučenih parametrov. Zato se večja prednost partnerjev pri eksperimentalnih prarijskih voluhah ne more pripisati povečani spolni aktivnosti med začetnim obdobjem sobivanja.

Odrasle ženske prerijske voluharice kažejo izjemne individualne razlike pri prikazu aloparentalne oskrbe. Približno 50% spolno naivnih žensk bo spontano vzelo, lizalo / negovalo in lebdelo nad mladiči, ki so jim bile predstavljene (Lonstein in De Vries, 1999; Bales in Carter, 2003; Olazabal in Young, 2005). Obstajajo tudi pomembne individualne razlike v gostoti OTR v NAcc med prerijskimi volovci (Young, 1999). Ženske z večjo gostoto OTR v NAcc imajo večjo verjetnost, da pokažejo aloparentno odzivnost kot živali z nižjim OTR na tem področju. Zato je bilo presenetljivo, da zvišanje gostote OTR v NAcc prairijih voluharjev ni povečalo aloparentalnega vedenja. Dejstvo, da so te živali pokazale pospešeno oblikovanje prednostnih partnerjev, kažejo, da je bila OTR, izvedena iz transgenskega viralnega vektorja, funkcionalno povezana s signalnimi transdukcijskimi potmi v NAcc.

Predvidevamo, da lahko posamezne spremembe aktivacije OTR v NAcc med razvojem igrajo pomembnejšo vlogo pri ustvarjanju razlik v aloparentalnem vedenju znotraj vrst. Pozitivna korelacija v gostoti OTR v NAcc in aloparentalnem obnašanju je bila dokazana pri juvenilnih prerijskih voluharjih kot tudi pri odraslih (Olazabal in Young, 2006b, a). Zdi se, da je aloparentalno obnašanje v prerijskih voluharjih še posebej občutljivo na motnje med razvojem. Na primer, perinatalna izpostavljenost OT spremeni aloparentno vedenje pri ženskih prerijskih voluharjih (Bales in sod., 2007). Zato se lahko posamezniki z višjo gostoto OTR med razvojem v NAcc pojavijo v povečani OTR signalizaciji, kar ima za posledico dolgotrajne nevrokemične spremembe, ki povečujejo verjetnost prikazovanja aloparentalnega vedenja, ko postanejo odrasli. Če je ta hipoteza pravilna, bi napovedali, da bi povečanje izražanja OTR v NAcc neonatalno povečalo pogostost aloparentalnega vedenja.

Druga razlaga za neuspeh povečanja ekspresije OTR v NAcc za povečanje aloparentalnega obnašanja je, da je lahko sprememba ekspresije OTR v več regijah možganov potrebna za ustvarjanje pričakovane raznolikosti obnašanja. Izraz OTR v lateralnem septumu je na primer negativno povezan z aloparentnim obnašanjem (Olazabal in Young, 2006a). Končno je možno tudi, da spremembe v izpostavljenosti hormonom ali družbene izkušnje vplivajo na gostoto OTR v NAcc poleg spreminjanja aloparentalnega vedenja. Na primer, prisotnost ali odsotnost očeta med razvojem ali perinatalna manipulacija s steroidnimi hormoni lahko vpliva na prikaz aloparentalne odzivnosti pri ženskih prerijskih voluharjih (Roberts et al., 1996; Roberts et al., 1998; Lonstein in De Vries, 2000).

Pri moških prerijskih voluharjih ima vazopresin ključno vlogo pri prikazu očetovskega obnašanja in oblikovanju partnerskih preferenc, pri čemer vzporedno z vlogo oksitocina pri ženskah (Winslow et al., 1993; Wang et al., 1994). Specifične farmakološke študije kažejo, da je V1aR v ventralnem pallidumu, ki je glavni rezultat NAcc, kritična za nastanek parne vezi (Lim in Young, 2004). Povečanje V1aR v ventralnem pallidumu z uporabo prenosa genov z virusnim vektorjem pospešuje oblikovanje preferenc partnerjev moških prerijskih voles (Pitkow in sod., 2001), ugotovitev, ki je primerljiva s trenutno študijo. Čeprav prekomerno izražanje V1aR v ventralnem pallidumu moških travnikov voluharjev ni bilo zadostno, da bi povzročilo očetovsko vedenje, je spodbujalo prednost partnerja (Lim et al., 2004); v nasprotju s tem pa v tej študiji prekomerna ekspresija OTR v NaCC ni spodbudila oblikovanja partnerskih preferenc pri ženskih travniških voluhah.

Obstaja več možnih razlag za neuspeh ženskih travnikov s povišanim OTR v NAcc za oblikovanje partnerskih preferenc. Prvič, razlike med različnimi vrstami OT znotraj NAcc med parjenjem se lahko razlikujejo med ženskimi prerijskimi voluharji in travniškimi voluharji. Čeprav je lokalizacija OTR med vrstami različna, imata tako prerijski voluharji kot travniška voluha OT imunoreaktivna vlakna v NAcc (Ross in Young, neobjavljeni podatki). In vivo eksperimenti z mikrodializo so pokazali, da parjenje spodbuja sproščanje OT v NAcc ženskih prerijskih voluharjev, vendar paralelne študije niso bile izvedene na travniških voljih (CD Cole in Young, neobjavljeni podatki). Možno je, da bi infuzija OT v živali, zdravljenih s CMV-OTR, olajšala oblikovanje prednostnih partnerjev v travniških voluhah. Vendar je treba opozoriti, da pri podganah in ovcah stimulacija vaginocervika poveča centralno sproščanje OT (Kendrick in sod., 1986; Sansone in sod., 2002). Zato je verjetno, da travniške voluharice že doživljajo porast akumulacijskega OT s parjenjem. Druga razlaga za neuspeh ekspresije NAcc OTR, da bi spodbudili nastanek partnerskih preferenc pri ženskih travnikih, je, da so razlike v izražanju OTR v drugih regijah možganov potrebne tudi za vezavo parov. Na primer, gostota OTR je višja tudi v prefrontalni skorji in bočni amigdali v prerijskih voluhah v primerjavi z vrstami neonogamske voluharice (Insel et al., 1991; Young et al., 1996; Smeltzer in sod., 2006). Zato je povišanje izraza OTR na več mestih lahko nujno za spodbujanje partnerskih preferenc pri parjenju v travniških voluhah. Končno je možno, da so številne nevrokemične razlike med vrstami odgovorne za razlike v vedenju vrst (npr. Dopamin, faktor sproščanja kortikotropina) (Gingrich et al., 2000; Liu in Wang, 2003; Smeltzer in sod., 2006; Lim et al., 2007).

Obstaja več pomembnih zadržkov našega eksperimentalnega pristopa, ki upravičuje razpravo. Prvič, CMV-OTR je verjetno povečal izražanje OTR v vseh tipih celic v injiciranem območju, vključno z nevronskimi populacijami, ki se običajno ne odzivajo na OT. Vendar je možno, da transgeni OTR povzroči večje signaliziranje v nevronih, ki normalno izražajo endogeno OTR zaradi povečane senzibilizacije na OT, ki se sprosti na te nevrone, ali prisotnost ustreznih signalnih molekul. Drugič, območje transgenske ekspresije, proizvedene z infuzijo virusnega vektorja, ni bilo enakomerno izraženo po celotnem rostralno-kaudalnem ali medio-lateralnem obsegu NAcc. V CMV-OTR ženskah je bila ekspresija OTR v lupini in sosednjih osrednjih regijah NAcc stalno povišana. Vendar je treba opozoriti, da je bila lupina NAcc najbolj vpletena v regulacijo oblikovanja partnerskih preferenc in da je gostota OTR v tej isti regiji bolj korelirana z aloparentalnim vedenjem kot jedro regije.

To je prva študija, ki dokončno dokaže, da lahko razlike v izražanju OTR v možganih prispevajo k različnim družbenim vedenjem. OT je bil v veliki meri vključen v ureditev več vedenjskih vzorcev, vključno z obdelavo socialnih informacij in spominom, izbiro partnerjev, vzgojo mater in navezanostjo (Dantzer et al., 1987; Kendrick, 2000; Ferguson et al., 2001; Kavaliers in sod., 2003). Zdaj je jasno dokazano, da OT modulira tudi človeško socialno spoznanje, vključno z medosebnim zaupanjem, očesnim pogledom, spominom na obrazu in zaznavanjem čustev (Kosfeld in sod., 2005; Domes in sod., 2007; Guastella in sod., 2008; Savaskan in sod., 2008). Zdravljenje podkožne oskrbe povečuje zadrževanje socialne kognicije pri nalogi glasovne intonacije pri osebah z avtizmom (Hollander et al., 2007), in več genetskih študij je poročalo o skromnih povezavah med nekodirajočimi polimorfizmi gena OTR in motnjami avtističnega spektra (Wu et al., 2005; Jacob et al., 2007; Lerer in sod., 2007; Yrigollen in sod., 2008). Podatki o porazdelitvi OTR so omejeni, o posamezni variaciji gostote OTR v človeških možganih pa ni znano. Naši rezultati kažejo, da lahko razlike v gostoti OTR v določenih regijah možganov prispevajo k individualnim razlikam v socialni kognitivni funkciji pri ljudeh.

Priznanja

Avtorji se želijo zahvaliti Lorri Mathews za odlično opravljeno delo v koloniji. Ta študija je bila podprta z NIH donacijami MH064692 za LJY, RR00165 za Yerkes National Primates Research Center in NSF STC IBN-9876754.

VIRI

  1. Bales KL, Carter CS. Spolne razlike in razvojni učinki oksitocina na agresivnost in družbeno vedenje v prerijskih volovcih (Microtus ochrogaster) Horm Behav. 2003, 44: 178 – 184. [PubMed]
  2. Bales KL, van Westerhuyzen JA, Lewis-Reese AD, Grotte ND, Lanter JA, Carter CS. Oksitocin ima od odmerka odvisne razvojne učinke na vezavo para in alloparentalno oskrbo pri ženskih prerijskih voluhah. Horm Behav. 2007, 52: 274 – 279. [PMC brez članka] [PubMed]
  3. Curtis JT, Wang Z. Vključitev ventralnega tegmentalnega območja v vezavo parov pri moških prerijskih voluharjih. Physiol Behav. 2005a, 86: 338 – 346. [PubMed]
  4. Curtis JT, Wang Z. Vključevanje glukokortikoidnih receptorjev v vezavo parov pri ženskih prerijskih volovcih: učinki akutne blokade in interakcije s centralnimi sistemi dopaminskega nagrajevanja. Nevroznanost. 2005b, 134: 369 – 376. [PubMed]
  5. Dantzer R, Bluthe RM, Koob GF, Le Moal M. Modulacija socialnega spomina pri podganjih samcih z nevrohipofiznimi peptidi. Psihofarmakologija (Berl) 1987; 91: 363 – 368. [PubMed]
  6. Domes G, Heinrichs M, Michel A, Berger C, Herpertz SC. Oksitocin izboljša »prebiranje misli« pri ljudeh. Biol Psychiatry. 2007, 61: 731 – 733. [PubMed]
  7. Ferguson JN, Aldag JM, Insel TR, Young LJ. Oksitocin v medialni amigdali je bistven za družbeno prepoznavnost pri miših. J Neurosci. 2001, 21: 8278 – 8285. [PubMed]
  8. Gingrich B, Liu Y, Cascio C, Wang Z, Insel TR. Receptorji dopamina D2 v nucleus accumbens so pomembni za družbeno vezanost pri ženskih prerijskih voluharjih (Microtus ochrogaster) Behav Neurosci. 2000, 114: 173 – 183. [PubMed]
  9. Gruderadams S, Getz LL. Primerjava paritvenega sistema in očetovskega vedenja v. \ T Microtus ochrogaster in Microtus pennsylvanicus. Journal of Mammalogy. 1985, 66: 165 – 167.
  10. Guastella AJ, Mitchell PB, Dadds MR. Oksitocin poveča pogled na očesno področje človeških obrazov. Biol Psychiatry. 2008, 63: 3 – 5. [PubMed]
  11. Hollander E, Bartz J, Chaplin W, Phillips A, Sumner J, Soorya L, Anagnostou E, Wasserman S. Oksitocin povečuje zadrževanje socialne kognicije pri avtizmu. Biol Psychiatry. 2007, 61: 498 – 503. [PubMed]
  12. Insel TR, Shapiro LE. Distribucija receptorjev oksitocina odraža družbeno organizacijo v monogamnih in poligamnih voluhah. Proc Natl Acad Sci US A. 1992, 89: 5981-5985. [PMC brez članka] [PubMed]
  13. Insel TR, Gelhard R, Shapiro LE. Primerjalna porazdelitev receptorjev za možganske peptide v monogamnih in poligamnih miših. Nevroznanost. 1991, 43: 623 – 630. [PubMed]
  14. Jacob S, Brune CW, Carter CS, Leventhal BL, Lord C, Cook EH., Jr združenje oksitocinskega receptorskega gena (OXTR) pri belih otrocih in mladostnikih z avtizmom. Neurosci Lett. 2007, 417: 6 – 9. [PMC brez članka] [PubMed]
  15. Kavaliers M, Colwell DD, Choleris E, Agmo A, Muglia LJ, Ogawa S, Pfaff DW. Okrnjena diskriminacija in odpor do parazitiranih moških vonjav ženskih oksitocinskih nokautnih miši. Geni Brain Behav. 2003, 2: 220 – 230. [PubMed]
  16. Kendrick KM. Oksitocin, materinstvo in vezanje. Exp Physiol. 2000; 85 (specifik. Št.): 111S – 124S. [PubMed]
  17. Kendrick KM, Keverne EB, Baldwin BA, Sharman DF. Cerebrospinalna koncentracija acetilholinesteraze, monoaminov in oksitocina med porodom, porodom, vaginocervikalno stimulacijo, ločitvijo jagnjetine in sesanjem ovac. Neuroendokrinologija. 1986, 44: 149 – 156. [PubMed]
  18. Kosfeld M, Heinrichs M, Zak PJ, Fischbacher U, Fehr E. Oksitocin poveča zaupanje v ljudi. Narava. 2005, 435: 673 – 676. [PubMed]
  19. Lerer E, Levi S, Salomon S, Darvasi A, Yirmiya N, Ebstein RP. Povezava med genom za oksitocinski receptor (OXTR) in avtizmom: odnos do lestvice adaptivnega vedenja Vineland in kognicija. Mol psihiatrija. 2007 [PubMed]
  20. Lim MM, Young LJ. Nevronski krogi, odvisni od vazopresina, ki so osnovni vzrok za nastanek vezi v monogamni volovski prerije. Nevroznanost. 2004, 125: 35 – 45. [PubMed]
  21. Lim MM, Wang Z, Olazabal DE, Ren X, Terwilliger EF, Young LJ. Okrepljena prednost partnerjev pri nespecifičnih vrstah z manipulacijo izražanja posameznega gena. Narava. 2004, 429: 754 – 757. [PubMed]
  22. Lim MM, Liu Y, Ryabinin AE, Bai Y, Wang Z, Young LJ. CRF receptorji v jedru accumbens modulirajo partnersko prednost pri prerijskih voluhah. Horm Behav. 2007, 51: 508 – 515. [PMC brez članka] [PubMed]
  23. Liu Y, Wang ZX. Nucleus accumbens oksitocin in dopamin medsebojno delujeta, da uravnavata nastanek vezave paric v ženskih prerijskih voluhah. Nevroznanost. 2003, 121: 537 – 544. [PubMed]
  24. Lonstein JS, De Vries GJ. Razlike v spolnosti v starševskem obnašanju odraslih prarijev: neodvisnost od hormonov gonad in vazopresina. J Neuroendocrinol. 1999, 11: 441 – 449. [PubMed]
  25. Lonstein JS, De Vries GJ. Vpliv gonadnih hormonov na razvoj starševskega obnašanja pri odraslih prahi volkah \ tMicrotus ochrogaster) Behav Brain Res. 2000, 114: 79 – 87. [PubMed]
  26. Olazabal DE, Young LJ. Različnost "spontanega" obnašanja mater je povezana z anksiozno podobnim obnašanjem in pripadnostjo preživetim mladicam in odraslim ženskam v prerijski populaciji (Microtus ochrogaster) Dev Psychobiol. 2005, 47: 166 – 178. [PubMed]
  27. Olazabal DE, Young LJ. Vrste in individualne razlike v juvenilni ženski aloparentalni oskrbi so povezane s gostoto oksitocinskega receptorja v striatumu in lateralnem septumu. Horm Behav. 2006a, 49: 681 – 687. [PubMed]
  28. Olazabal DE, Young LJ. Oksitocinski receptorji v nucleus accumbens omogočajo "spontano" materinsko vedenje pri odraslih prerijskih voluhah. Nevroznanost. 2006b, 141: 559 – 568. [PubMed]
  29. Paxinos G, Watson C. V možganih podgan v stereotaksičnih koordinatah. četrta izdaja Academic Press; San Diego, CA: 1998.
  30. Pitkow LJ, delničar CA, Ren X, Insel TR, Terwilliger EF, Young LJ. Olajšanje povezovanja in tvorbe vezave parov s prenosom genov receptorja vazopresina v ventralni prednji mož monogamske voluharice. J Neurosci. 2001, 21: 7392 – 7396. [PubMed]
  31. Roberts RL, Zullo A, Gustafson EA, Carter CS. Perinatalno zdravljenje s steroidi spreminja alloparental in affiliative vedenje v prerijskih voluharjev. Horm Behav. 1996, 30: 576 – 582. [PubMed]
  32. Roberts RL, Williams JR, Wang AK, Carter CS. Zadružna vzreja in monogamija v prerijskih volovcih: Vplivi velikosti in geografske razlike. Anim Behav. 1998, 55: 1131 – 1140. [PubMed]
  33. Sansone GR, Gerdes CA, Steinman JL, Winslow JT, Ottenweller JE, Komisaruk BR, Insel TR. Vaginocervikalna stimulacija sprosti oksitocin v hrbtenjači pri podganah. Neuroendokrinologija. 2002, 75: 306 – 315. [PubMed]
  34. Savaskan E, Ehrhardt R, Schulz A, Walter M, Schachinger H. Post-učni intranazalni oksitocin modulira človeški spomin za identiteto obraza. Psihoneuroendokrinologija. 2008, 33: 368 – 374. [PubMed]
  35. Smeltzer MD, Curtis JT, Aragona BJ, Wang Z. Vezava receptorjev dopamina, oksitocina in vazopresina v medialnem prefrontalnem korteksu monogamnih in promiskuitetnih voluharjev. Neurosci Lett. 2006, 394: 146 – 151. [PubMed]
  36. Wang Z, Young LJ. Ontogenija vezave oksitocina in receptorja za vazopresin v lateralnem septumu v prerijskih in montanskih volesih. Brain Res Dev Brain Res. 1997, 104: 191 – 195. [PubMed]
  37. Wang Z, Ferris CF, De Vries GJ. Vloga inervacije septalnega vazopresina pri očetovskem obnašanju v prerijskih volovcih (Microtus ochrogasterNac. Ac Ac Sci US A. 1994, 91: 400-404. [PMC brez članka] [PubMed]
  38. Williams JR, Catania KC, Carter CS. Razvoj partnerskih preferenc pri ženskih prerijskih voluharjih (Microtus ochrogaster): vloga socialne in spolne izkušnje. Horm Behav. 1992, 26: 339 – 349. [PubMed]
  39. Winslow JT, Hastings N, Carter CS, Harbaugh CR, Insel TR. Vloga centralnega vazopresina v vezavi parov v monogamnih prerijskih voluharjih. Narava. 1993, 365: 545 – 548. [PubMed]
  40. Wu S, Jia M, Ruan Y, Liu J, Guo Y, Shuang M, Gong X, Zhang Y, Yang X, Zhang D. Biol Psychiatry. 2005, 58: 74 – 77. [PubMed]
  41. Mladi LJ. Nagrada Frank A. Beach. Receptorji oksitocina in vazopresina ter tipično družbeno vedenje. Horm Behav. 1999, 36: 212 – 221. [PubMed]
  42. Young LJ, Wang Z. Nevrobiologija vezave parov. Nat Neurosci. 2004, 7: 1048 – 1054. [PubMed]
  43. Young LJ, Lim MM, Gingrich B, Insel TR. Celični mehanizmi družbene navezanosti. Horm Behav. 2001, 40: 133 – 138. [PubMed]
  44. Young LJ, Huot B, Nilsen R, Wang Z, Insel TR. Razlike v ekspresiji genov osrednjega oksitocinskega receptorja: primerjalna analiza promotorskih sekvenc. J Neuroendocrinol. 1996, 8: 777 – 783. [PubMed]
  45. Yrigollen CM, Han SS, Kochetkova A, Babitz T, Chang JT, Volkmar FR, Leckman JF, Grigorenko EL. Geni, ki kontrolirajo partnersko vedenje kot kandidatni geni za avtizem. Biol Psychiatry. 2008, 63: 911 – 916. [PMC brez članka] [PubMed]