ระบบรับ CRF – CRF1 ในนิวเคลียสศูนย์กลางและศูนย์กลางของอะไมก์ดาลาเป็นสื่อกลางที่แตกต่างกันการกินที่มากเกินไปของอาหารอร่อย (2013)

. 2013 พ.ย. ; 38 (12): 2456 – 2466

เผยแพร่ออนไลน์ 2013 Jul 10 เตรียมเผยแพร่ 2013 ออนไลน์ Jun 10 ดอย:  10.1038 / npp.2013.147

PMCID: PMC3799065

นามธรรม

อาหารอร่อยและการอดอาหารเป็นปัจจัยสำคัญที่ทำให้เกิดการพัฒนาของการรับประทานอาหารที่ต้องปฏิบัติตามในโรคอ้วนและความผิดปกติของการรับประทานอาหาร ก่อนหน้านี้เราแสดงให้เห็นว่าการเข้าถึงอาหารที่อร่อยเป็นระยะ ๆ ทำให้เกิด corticotropin-releasing factor-1 (CRF)1) พฤติกรรมต่อต้านศัตรูซึ่งกลับใจได้ซึ่งรวมถึงการรับประทานอาหารที่มากเกินไปรสชาติผิดปกติของการกินอาหารเป็นประจำและพฤติกรรมที่คล้ายความวิตกกังวล อย่างไรก็ตามพื้นที่สมองที่ไกล่เกลี่ยผลกระทบเหล่านี้ยังไม่ทราบ หนูวิสตาร์เพศผู้ได้รับอาหารอย่างต่อเนื่องเป็นเวลา 7 วัน / สัปดาห์ (เชาเชา กลุ่ม) หรืออาหารเชาเชาเป็นระยะ ๆ 5 วัน / สัปดาห์ตามด้วยซูโครสอาหารอร่อย 2 วัน / สัปดาห์ (Chow / อร่อย กลุ่ม). ต่อไปนี้การสลับอาหารเรื้อรังผลของ microinfusing CRF1 ตัวรับปฏิกริยา R121919 (0, 0.5, 1.5 μg / ด้านข้าง) ในนิวเคลียสส่วนกลางของ amygdala (CeA), นิวเคลียส basolateral ของ amygdala (BNA) หรือประเมินนิวเคลียสของ stria terminalis (BNST) มากเกินไป ของอาหารที่กินอร่อย, hypophagia Chow และพฤติกรรมที่เหมือนความวิตกกังวล นอกจากนี้ยังได้ทำการประเมินการสร้างภูมิคุ้มกันด้วย CRF ในสมองของหนูที่ได้รับอาหาร Intra-CeA R121919 บล็อกทั้งการรับประทานอาหารที่น่ากินและพฤติกรรมที่น่าวิตก Chow / อร่อย หนูโดยไม่ส่งผลกระทบต่อ Chow hypophagia ในทางกลับกัน intra-BlA R121919 ช่วยลดการขาดออกซิเจนในสุนัข Chow / อร่อย หนูโดยไม่ส่งผลกระทบต่อการรับประทานอาหารที่มากเกินไปหรือพฤติกรรมที่คล้ายกับความวิตกกังวล การรักษาด้วยอินทรา - BNST ไม่มีผลใด ๆ การรักษาไม่ได้ปรับเปลี่ยนพฤติกรรมของ เชาเชา หนู Immunohistochemistry เปิดเผยจำนวนเซลล์ CRF-positive ที่เพิ่มขึ้นใน CeA แต่ไม่ใช่ใน BlA หรือ BNST Chow / อร่อย หนูในระหว่างการถอนและการเข้าถึงอาหารที่อร่อยเมื่อเทียบกับการควบคุม ผลลัพธ์เหล่านี้มีหลักฐานการใช้งานที่ CRF – CRF1 ระบบตัวรับใน CeA และ BlA มีบทบาทที่แตกต่างกันในการไกล่เกลี่ยพฤติกรรมที่ไม่เหมาะสมซึ่งเกิดจากการปั่นจักรยานอาหารที่น่ากิน

คำสำคัญ: ปัจจัยการหลั่ง corticotropin, BNST, การติด, ความวิตกกังวล, hypophagia, หนู

บทนำ

อาหารอร่อย (เช่นอาหารที่อุดมด้วยน้ำตาลและ / หรือไขมัน) เชื่อว่าเป็นปัจจัยสำคัญในการเกิดขึ้นของการรับประทานซึ่งต้องกระทำในรูปแบบของโรคอ้วนและความผิดปกติของการรับประทานอาหาร (; ) มีการเปรียบเทียบหลายประการระหว่างการติดยาเสพติดและการบริโภคอาหารที่มีรสชาติอร่อยมากเกินไปรวมถึงการสูญเสียการควบคุมยา / อาหารไม่สามารถยุติการใช้ / การกินมากเกินไปแม้จะมีผลกระทบด้านลบความทุกข์และ dysphoria เมื่อพยายามละเว้นจากยา / อาหาร; ) อาการที่พบบ่อยเหล่านี้ได้รับการเสนอให้เกิดขึ้นจากความผิดปกติของวงจรสมองซึ่งทับซ้อนกันในการติดยาเสพติดและการรับประทานอาหารซึ่งต้องกระทำ

Corticotropin ที่ปล่อยปัจจัยประเภท 1 (CRF1) ตัวรับผู้รับได้รับการเสนอชื่อเป็นเป้าหมายการรักษาใหม่สำหรับความผิดปกติของการเสพติดเพราะความสามารถในการลดผลกระทบที่สร้างแรงจูงใจของการถอน () CRF เป็นสื่อกลางที่สำคัญของการตอบสนองต่อมไร้ท่อความเห็นอกเห็นใจและพฤติกรรมต่อความเครียด (; ) CRF ในนิวเคลียส paraventricular ของมลรัฐควบคุมการตอบสนองต่อ hypothalamic - ต่อมใต้สมอง - ต่อมหมวกไต (HPA) กับความเครียดในขณะที่ผลกระทบพฤติกรรมของ CRF เป็น HPA อิสระและไกล่เกลี่ยโดยภูมิภาคสมอง extrahypothalamic () extrahypothalamic CRF – CRF1 ระบบรับคือการพึ่งพายาเสพติดทั้งหมดที่รู้จักกันในทางที่ผิดผ่านวงจรของมึนเมา / ถอนและการกระทำนี้ถือเป็นองค์ประกอบทั่วไปส่งเสริมการบริโภคยามากเกินไปผ่านกลไกการเสริมแรงทางลบ (เช่นการบริโภคยาเสพติดซึ่งผลิตโดยการถอนออก สภาพอารมณ์เชิงลบที่เหนี่ยวนำ ; ; ).

แม้ว่าความคล้ายคลึงกันระหว่างยาเสพติดและอาหารได้รับการศึกษาอย่างกว้างขวางด้วยความเคารพต่อคุณสมบัติเสริมแรงเชิงบวกของพวกเขา (เช่นการรับประทานอาหารมากเกินไปที่เกิดจากการได้รับผลที่น่าพอใจ; ; ; ; ; ) สมมติฐานที่ว่าการบริโภคอาหารมากเกินไปอาจส่งผลให้เป็นรูปแบบของ 'การใช้ยาด้วยตนเอง' เพื่อบรรเทาสภาวะทางอารมณ์เชิงลบที่เกี่ยวข้องกับการถอนตัวจากอาหารที่น่ารับประทานอย่างมากนั้นค่อนข้างไม่ได้รับการศึกษา (; ; ).

ก่อนหน้านี้เราได้แสดงให้เห็นว่าการถอนตัวจากการเข้าถึงอาหารที่ไม่อร่อยและเป็นระยะ ๆ ทำให้เกิดการสรรหาระบบซีอาร์เอฟที่มีความผิดปกติและการเกิดขึ้นของซีอาร์เอฟ1 พฤติกรรม maladaptive ที่ขึ้นอยู่กับตัวรับซึ่งรวมถึงการบริโภคอาหารที่มากเกินไปเมื่อมีการเข้าถึงอาหารที่น่ากินอย่างมาก, hypophagia ของอาหารเชาเชาที่ยอมรับได้เป็นอย่างอื่นและพฤติกรรมคล้ายความวิตกกังวลในระหว่างการเลิกบุหรี่ ().

อย่างไรก็ตามหลักฐานการทำงานโดยตรงเกี่ยวกับพื้นที่สมองที่รับผิดชอบ CRF1 การปรับตัวตามพฤติกรรมของตัวรับที่เกิดจากการปั่นจักรยานทานอาหารอร่อยหายไป การศึกษาครั้งนี้จึงมีวัตถุประสงค์เพื่อพิจารณาว่าการเป็นปรปักษ์กันเฉพาะในพื้นที่ของ CRF หรือไม่1 ตัวรับภายในนิวเคลียสกลางของ amygdala (CeA), นิวเคลียส basolateral ของ amygdala (BlA) หรือนิวเคลียสเตียงของ stria terminalis (BNST) สามารถยับยั้งการบริโภคอาหารที่มีความน่าพอใจสูง พฤติกรรมเชาเชาและความวิตกกังวล นอกจากนี้การศึกษาครั้งนี้มีวัตถุประสงค์เพื่อตรวจสอบว่าการแสดงออกของ CRF ใน CeA, BlA และ BNST เพิ่มขึ้นในหนูที่ได้รับอาหารเสริมเมื่อเทียบกับการควบคุมโดยใช้ immunohistochemistry แม้ว่าก่อนหน้านี้เราได้แสดงให้เห็นว่าการถอนตัวจากอาหารที่น่ากินมีส่วนเกี่ยวข้องกับการแสดงออกของ CRF ที่เพิ่มขึ้นใน CeA แต่ BlA และ BNST ได้รับผลกระทบจากการปั่นจักรยานด้วยอาหารอย่างไร

วัสดุและวิธีการ

Subjects

หนูวิสตาร์ (n= 140, ซึ่ง 33 หนูสำหรับการทดลอง CeA, หนู 46 สำหรับการทดลอง BlA, หนู 39 สำหรับการทดลอง BNST และหนู 22 สำหรับการทดลองทางอิมมูโนวิทยา ตารางเสริม 1) ชั่งน้ำหนัก 180 – 230 g และ 41 – 47 วันเก่าเมื่อเดินทางมาถึง (ชาร์ลส์ริเวอร์วิลมิงตันแม่สหรัฐอเมริกา) ถูกนำมาบรรจุเดี่ยวในลวดท็อปปิ้งโครงพลาสติก (27 × 48 × 20 ซม.) บนไฟถอยหลัง รอบ (ไฟดับที่ 12 ชั่วโมง) ในความชื้นที่ได้รับอนุมัติจาก AAALAC- (1100%) และการควบคุมอุณหภูมิ (VNarium 60 ° C) อุณหภูมิ หนูได้ โฆษณาฟรี การเข้าถึงอาหารตามข้าวโพด (Harlan Teklad LM-485 อาหาร 7012; 65% kcal คาร์โบไฮเดรต, 13% ไขมัน, โปรตีน 21%, พลังงานที่เผาผลาญได้ 310 cal / 100 g; Harlan, Indianapolis, IN, USA) และน้ำ . ขั้นตอนที่ใช้ในการศึกษาครั้งนี้เป็นไปตามสถาบันสุขภาพแห่งชาติเพื่อการดูแลและการใช้สัตว์ทดลอง (หมายเลขประกาศ NIH 85-23, แก้ไข 1996) และหลักการดูแลสัตว์ในห้องปฏิบัติการและได้รับการอนุมัติจากสถาบันการแพทย์มหาวิทยาลัยบอสตัน คณะกรรมการดูแลและใช้สัตว์

ยาเสพติด

R121919 (3-[6-(dimethylamino)-4-methyl-pyrid-3-yl]-2,5-dimethyl-N,N-dipropyl-pyrazolo [2,3-a] pyrimidin-7-amine, NBI 30775) ถูกสังเคราะห์ตามที่อธิบายไว้ใน ) R121919 เป็น CRF ที่มีศักยภาพและไม่เปปไทด์มีความสัมพันธ์สูง1 ตัวรับศัตรู (Ki= 2 – 5 nM) ซึ่งแสดงกิจกรรม 1000-fold ที่อ่อนแอกว่าที่ CRF2 ตัวรับโปรตีนที่จับกับ CRF หรือตัวรับชนิดอื่นของ 70 () R121919 ถูกละลายโดยใช้ 18: 1: 1 ส่วนผสมของน้ำเกลือ: เอทานอล: cremophor

แบบทดสอบพฤติกรรม

การเข้าถึงการเปลี่ยนอาหารที่อร่อย

การเข้าถึง โฆษณาฟรี การสลับอาหารที่น่ากินได้ดำเนินการตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (, , ; ) คร่าวๆหลังจากการปรับตัวให้ชินกับสภาพเดิมหนูถูกแบ่งออกเป็นสองกลุ่มที่ตรงกับการรับประทานอาหารน้ำหนักตัวและประสิทธิภาพการให้อาหารของ 3 – 4 วันก่อนหน้า มีกลุ่มหนึ่งให้ โฆษณาฟรี เข้าถึงอาหาร Chow (Chow) สำหรับ 7 วันต่อสัปดาห์ (เชาเชากลุ่มควบคุมของการศึกษานี้) ในขณะที่กลุ่มที่สองจัดให้มีการเข้าถึงฟรีสำหรับ Chow สำหรับ 5 วันต่อสัปดาห์ตามด้วย 2 วันของ โฆษณาฟรี เพื่อให้เป็นที่พอใจอย่างสูง, รสช็อคโกแลต, อาหารที่มีน้ำตาลซูโครสสูง (อร่อย; Chow / อร่อย กลุ่ม). การทดสอบพฤติกรรมทั้งหมดดำเนินการในหนูที่ได้รับการควบคุมอาหารเป็นเวลาอย่างน้อย 7 สัปดาห์ อาหาร 'chow' เป็นอาหารที่ทำจากข้าวโพดจาก Harlan ที่อธิบายไว้ข้างต้นในขณะที่อาหารที่ถูกปากคืออาหารที่มีคุณค่าทางโภชนาการครบถ้วนรสช็อกโกแลตมีน้ำตาลซูโครสสูง (50% kcal) อาหารที่ใช้ AIN-76A ซึ่งเทียบได้กับธาตุอาหารหลัก สัดส่วนและความหนาแน่นของพลังงานต่ออาหาร Chow (สูตรรสช็อคโกแลต 5TUL: คาร์โบไฮเดรด 66.7% kcal ไขมัน 12.7% โปรตีน 20.6% พลังงานที่เผาผลาญได้ 344 kcal / 100 g (Test Diet, Richmond, IN, USA) สูตรความแม่นยำ 45 มก. อาหารเม็ดเพื่อเพิ่มความต้องการ) สำหรับความสั้น 5 วันแรก (เฉพาะ chow) และ 2 วันสุดท้าย (chow หรือถูกปากตามกลุ่มทดลอง) ของแต่ละสัปดาห์จะเรียกในการทดลองทั้งหมดว่า C และ P เฟส อาหารที่น่ารับประทานมีให้ใน GPF20 'J'-feeders (Ancare, Bellmore, NY, USA) ไม่เคยมีอาหารพร้อมกัน

การทดลองบริโภคอาหาร

หนูได้รับอาหารที่มีการชั่งน้ำหนักล่วงหน้าไว้ในกรงที่บ้านของพวกเขาในการโจมตีรอบที่มืด การรักษาได้รับในหนูที่ได้รับอาหารขี่จักรยานเป็นเวลาอย่างน้อย 7 สัปดาห์เมื่อต่ออายุการเข้าถึงอาหารที่อร่อยC→P ระยะ) หรืออาหารเชาเชา (P→C เฟส) R121919 เป็น microinfused ทั้งสองด้านภายใน CeA, BlA หรือ BNST (0, 0.5 และ 1.5 μg / ด้าน, 0.5 μl / ด้านเวลา 30-นาทีก่อนการรักษา) โดยใช้การสุ่มแบบภายในตารางเรื่องละติน

การทดสอบกล่องมืด - เบา

หนูถูกทดสอบสำหรับ 10 ขั้นต่ำในกล่องสี่เหลี่ยมแสงมืด (50 × 100 × 35 cm) ซึ่งช่องแสง aversive (50 × 70 × 35 ซม.) ส่องสว่างด้วยแสง 60 ลักซ์ ด้านมืด (50 × 30 × 35 cm) มีฝาครอบทึบแสงและ ∼0 แรงเทียนของแสง ช่องทั้งสองนั้นเชื่อมต่อกันด้วยประตูเปิดซึ่งอนุญาตให้ผู้เข้าร่วมการเคลื่อนไหวได้อย่างอิสระระหว่างคนทั้งสอง การทดสอบเกิดขึ้นหลังจากเปลี่ยนอาหารอย่างน้อย 7 สัปดาห์ 5 – 9 ชั่วโมงหลังจากเปลี่ยนจากอาหารที่อร่อยไปเป็นอาหารเชาเชา (P→C เฟส); จุดนี้ทำให้มั่นใจได้ว่าการเกิดพฤติกรรมที่คล้ายความวิตกกังวลเกิดจากการถอนตัวออกจากอาหารที่น่ากิน Chow / อร่อย หนู (, ) หนูถูกเก็บไว้ในห้องที่เงียบและมืดเป็นเวลาอย่างน้อย 2 ชั่วโมงก่อนการทดสอบ เสียงสีขาวปรากฏขึ้นตลอดการทำให้คุ้นเคยและการทดสอบ ในวันที่ทำการทดสอบหนูถูกฆ่าเชื้อด้วย microinfused ทั้งสองข้างด้วย R121919 ภายใน CeA, BlA หรือ BNST (0, 0.5 และ 1.5 μg / ด้าน, 0.5 μl / ด้านข้าง) 30 μl / ด้านข้าง และพฤติกรรมถูกบันทึกวิดีโอเพื่อให้คะแนนในภายหลัง การรักษาได้รับการใช้การออกแบบระหว่างเรื่อง เวลาที่ใช้ในช่องเปิดถูกวัดเป็นดัชนีที่มีพฤติกรรมคล้ายความวิตกกังวล เครื่องมือเช็ดทำความสะอาดด้วยน้ำและทำให้แห้งหลังจากแต่ละเรื่อง

การผ่าตัดในกะโหลกศีรษะ, กระบวนการ Microinfusion และตำแหน่ง Cannula

การผ่าตัดในกะโหลกศีรษะ

หนูถูกปลูกฝัง stereotaxically กับ cannulas ทวิภาคี intracranial ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (; ; ). ในช่วงสั้น ๆ เหล็กกล้าไร้สนิมไกด์ cannulas (24 gauge, Plastics One, Roanoke, VA, USA) ถูกลดระดับลงด้านข้าง 2.0 มม. ด้านบนของ CeA, BlA หรือ BNST สกรูของช่างทำอัญมณีสแตนเลสสี่ตัวถูกยึดเข้ากับกะโหลกของหนูรอบ ๆ cannula ใช้เรซินที่เติมบูรณะฟัน (Henry Schein, Melville, NY, USA) และปูนซีเมนต์อะคริลิกเพื่อสร้างฐานที่ยึด cannula ให้แน่น พิกัด cannula จาก bregma ที่ใช้สำหรับ CeA ได้แก่ : AP +0.2, ML ± 4.2, DV −7 (จากกะโหลกศีรษะ) โดยมีแถบฟันที่ตั้งไว้เหนือเส้นจำนวนเต็ม 5.0 มม. ตามแผนที่ของ ) พิกัด cannula ที่ใช้สำหรับ BlA คือ: AP −2.64, ML ± 4.8, DV −6.5 (จากกะโหลกศีรษะ) ที่มีหัวกะโหลกแบนตาม ) พิกัด cannula ที่ใช้สำหรับ BNST คือ: AP −0.6, ML ± 3.5, DV −4.8 (จากกะโหลกศีรษะ) ที่มีหัวกะโหลกแบนและมุมเอียงของ 14 ° สแตนเลสหุ่นจำลอง (กลุ่มพลาสติกหนึ่ง) ยังคงรักษา patency ของ cannula ได้ หลังการผ่าตัดหนูได้รับอนุญาตให้ใช้ระยะเวลาพักฟื้นระยะเวลา 7 วันซึ่งพวกเขาได้รับการดูแลทุกวัน

ขั้นตอนการฆ่าเชื้อโรค

ยาเสพติดถูก microinfused ในสมองของหนูตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้า (; ) สำหรับการฆ่าเชื้อในกะโหลกศีรษะอินทรียวัตถุรูปแบบหุ่นจะถูกลบออกจากคู่มือ cannula และถูกแทนที่ด้วย 31 - มาตรวัดสแตนเลสหัวฉีดยื่นออกมา 2 มิลลิเมตรเกินปลาย cannula คู่มือ; หัวฉีดถูกเชื่อมต่อผ่านท่อ PE 20 ไปยัง Hamilton microsyringe (Hamilton, Reno, Nevada) ที่ขับเคลื่อนด้วยเครื่องสูบน้ำแบบเข็มฉีดยาแบบหลายเข็ม (KD Scientific / Biological Instruments, Holliston, MA, USA) Microinfusions ถูกดำเนินการในปริมาตร 0.5 μlที่ส่งผ่าน 2 ขั้นต่ำ; หัวฉีดถูกทิ้งไว้ในสถานที่เป็นเวลา 1 นาทีเพิ่มเติมเพื่อลดการไหลกลับ

ตำแหน่ง Cannula

ตำแหน่ง Cannula ได้รับการตรวจสอบในตอนท้ายของการทดสอบทั้งหมด (ดู รูป 1) กลุ่มตัวอย่างถูกทำให้ดมยาสลบ (isoflurane, 2 – 3% ในออกซิเจน) และถูกทำให้เป็นของเหลวด้วย transcardially ด้วยน้ำแข็งเย็น 4% paraformaldehyde (PFA) ในน้ำ (pH 7.4) และ microinfused ด้วย Cresyl violet (0.5 μl / ด้านข้าง) สมองถูกตรึงในชั่วข้ามคืนใน 4% PFA และปรับสมดุลใน 30% ซูโครสใน PFA ส่วนชเวียนของ 40 μmถูกรวบรวมโดยใช้ cryostat (Thermo Scientific HM-525) และตรวจสอบตำแหน่งภายใต้กล้องจุลทรรศน์ วิชาสี่สิบ (14 สำหรับ CeA, 16 สำหรับ BlA และ 10 สำหรับ BNST) ถูกแยกออกจากการวิเคราะห์เนื่องจากการวาง cannula ไม่ถูกต้อง มีการวิเคราะห์ข้อมูลจากตำแหน่งที่ไม่ถูกต้องเพื่อช่วยตีความลักษณะเฉพาะของผลกระทบ

รูป 1 

การวาดชิ้นสมองของหนูโคโรนาล จุดแสดงตำแหน่งที่ฉีดในนิวเคลียสกลางของอะมิกดาลา (CeA) (a) นิวเคลียสเบสของอะมิกดาลา (BlA) (b) และนิวเคลียสเบดของ stria terminalis (BNST) (c) ที่รวมอยู่ในการวิเคราะห์ข้อมูล ...

อิมมูโนวิทยาเคมี CRF

ขั้นตอนเกี่ยวกับพฤติกรรม, น้ำหอมและอิมมูโนวิทยา

หนู (n= 22) ถูกลดความอ้วนเป็นเวลาหลายสัปดาห์ 7, วิสัญญีแพทย์, และ 2 – 4 ที่ถูกทำให้สมบูรณ์แบบหลังจากเปลี่ยนจากอาหารอร่อยไปเป็นอาหารเชาเชา (P→C ระยะ) หรือจากอาหารเชาเชาไปจนถึงอาหารที่อร่อยC→P เฟส) หนูถูกทำให้ดมยาสลบแล้วจึงนำไปผสมกับน้ำเกลือ + 2% (w / v) โซเดียมไนไตรท์ (pH = 7.4) ก่อนและในที่สุดจะมีบัฟเฟอร์ 4% paraformaldehyde ใน Borax (pH = 9.5) ต่อไป จากนั้นทำการแยกส่วนของหนูออกจากสมองและเก็บสมองไว้ใน placed20 ml ของ 4% PFA และเก็บไว้ใน 30% ซูโครสในสารละลาย 4% PFA ที่ 4 ° C จนกระทั่งอิ่มตัว

สำหรับการสร้างภาพ CRF สมองจะถูกตัดออกเป็นส่วนโคโรนา 40 μmโดยใช้ cryostat และเก็บไว้ใน cryoprotectant ที่อุณหภูมิ −20 ° C ทุกส่วนที่หก (ห่างกัน 240 ไมครอน) ของ CeA, BlA และ BNST ทั้งหมดได้รับการคัดเลือกในลักษณะสุ่มอย่างเป็นระบบและประมวลผลสำหรับภูมิคุ้มกันวิทยา ส่วนที่ลอยอิสระถูกล้างด้วยน้ำเกลือบัฟเฟอร์โพแทสเซียมฟอสเฟต (KPBS) หลังจากการล้างครั้งแรกส่วนต่างๆจะได้รับการบ่มในสารละลาย KPBS 0.3% ของไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์เป็นเวลา 30 นาทีเพื่อป้องกันเปอร์ออกซิเดสภายนอก จากนั้นล้างส่วนต่างๆอีกครั้งและวางไว้ในสารละลายปิดกั้น (ซีรั่มแพะปกติ 3%, ไตรตัน X0.25 100% และอัลบูมินซีรั่มจากวัว 0.1%) เป็นเวลา 2 ชั่วโมง จากนั้นส่วนต่างๆจะถูกถ่ายโอนไปยังแอนติบอดีหลัก (การเจือจาง 1: 100, การต่อต้าน CRF (sc-10718), เทคโนโลยีชีวภาพซานตาครูซ) ในสารละลายปิดกั้นและบ่มเป็นเวลา 72 ชั่วโมงที่ 4 ° C หลังจากการซักเพิ่มเติมส่วนต่างๆจะถูกบ่มเป็นแอนติบอดีทุติยภูมิ (การเจือจาง 1: 1000, ห้องปฏิบัติการเวกเตอร์แอนตี้กระต่ายไบโอตินิล (BA-1000), เบอร์ลินเกม, แคลิฟอร์เนีย) ในสารละลายปิดกั้นเป็นเวลา 2 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้อง ส่วนต่างๆถูกล้างแล้วนำไปบ่มในสารละลายเอบีดีน - ไบโอตินฮอร์ราดิชเปอร์ออกซิเดสเอบีซี (Vector Laboratories) ในสารละลายปิดกั้นเป็นเวลา 1 ชั่วโมง จากนั้นส่วนต่างๆจะถูกบ่มโดยใช้ชุดพื้นผิว diaminobenzidine (Vector Laboratories) ตามคำแนะนำของผู้ผลิตและเมื่อปฏิกิริยาเสร็จสมบูรณ์ส่วนต่างๆจะถูกล้างใน KPBS ติดตั้งบนสไลด์และปล่อยให้แห้งข้ามคืน ในวันรุ่งขึ้นสไลด์ถูกทำให้แห้งโดยใช้ความเข้มข้นของแอลกอฮอล์ที่ให้คะแนนและปิดฝาโดยใช้ DPX mountant (Electron Microscopy Sciences, Hatfield, PA, USA)

ปริมาณของเซลล์ร่างกาย CRF +

ปริมาณของเซลล์ร่างกาย CRF + ดำเนินการตามวิธี stereology เป็นกลาง วิเคราะห์ชุดของส่วนต่างๆสำหรับชุดการย้อมแต่ละชุด วิเคราะห์โดยใช้กล้องจุลทรรศน์โอลิมปัส (Center Valley, PA, สหรัฐอเมริกา) พร้อมกับกล้องวิดีโอสด Rotiga 51R (QImaging, Surrey, BC, แคนาดา), MAC2000 XYZ แบบเครื่องยนต์ 3 แกน (Ludl Electronics, Hawthorne, NY, USA) และเวิร์กสเตชันคอมพิวเตอร์ส่วนบุคคล จำนวนเซลล์ทั้งหมดถูกสร้างบนสไลด์ที่มีรหัสกำกับโดยผู้ตรวจการตาบอดต่อเงื่อนไขการรักษา แต่ละภูมิภาคได้รับการสรุปเกี่ยวกับภาพดิจิทัลของแต่ละส่วนที่เลือกแบบสุ่มโดยใช้โมดูลเวิร์กโฟลว์ตัวแบ่งแสงของซอฟต์แวร์สเตอริโอผู้ตรวจสอบ (MicroBrightField, Williston, VT, USA) รูปทรงทั้งหมดถูกวาดด้วยกำลังขยายต่ำโดยใช้วัตถุประสงค์ Olympus PlanApo N 6000X ที่มีรูรับแสงตัวเลข 2 และนับโดยใช้วัตถุประสงค์ Olympus UPlanFL N 0.08X กับรูรับแสงตัวเลข 40 เฟรมกริดและเฟรมนับถูกตั้งค่าเป็น 0.75 × 275 μm มีการใช้โซนป้องกันของ 160 μmและความสูงของตัวแยกข้อมูลที่เป็น 2 μm แต่เดิมส่วนที่ถูกแช่แข็งนั้นถูกตัดด้วยความหนาเพียง 20 μm การฉีดวัคซีนและผลการติดตั้งทำให้ความหนาของชิ้นส่วนเปลี่ยนแปลงซึ่งวัดได้ในแต่ละจุดนับ ซอฟต์แวร์คำนวณความหนาของส่วนเฉลี่ยและใช้ในการประมาณปริมาณรวมของขอบเขตตัวอย่างและจำนวนเซลล์ CRF + ทั้งหมด

การวิเคราะห์ทางสถิติ

ของนักเรียน t- การทดสอบใช้ในการวิเคราะห์ปัจจัยที่มีสองระดับ ทำการวิเคราะห์ความแปรปรวนของปัจจัยที่มีมากกว่าสองระดับ การติดตามผลของรถโดยสารอย่างมีนัยสำคัญของ ANOVAs (p<0.05), LSD ของฟิชเชอร์ โพสต์เฉพาะกิจ ใช้การทดสอบเปรียบเทียบ การทดสอบของ Dunnett ใช้เพื่อตรวจสอบว่า R121919 ไอดีปกติของ Chow / อร่อย หนูไปรับการรักษายานพาหนะ เชาเชาระดับ -fed แพคเกจซอฟต์แวร์ / กราฟิกที่ใช้คือ Systat 11.0, SigmaPlot 11.0 (ซอฟต์แวร์ Systat, Chicago, IL, USA), InStat 3.0 (GraphPad, San Diego, CA, USA), Statistica 7.0 (Statsoft, Tulsa, OK, USA) และ PASW สถิติ 18.0 (SPSS, Chicago, IL, USA)

ผล

ผลของ Microinfusion ของ R121919 เข้าสู่ CeA

ปริมาณที่มากเกินไปของอาหารอร่อย

เพื่อตรวจสอบว่า CRF1 ผู้รับใน CeA ไกล่เกลี่ยการบริโภคที่มากเกินไปของอาหารที่น่าพอใจในหนูที่ได้รับอาหาร1 ตัวรับ R121919 ตัวรับศัตรูเข้าสู่บริเวณสมองและวัดปริมาณอาหารที่จุดเริ่มต้นของ P ระยะ ตามที่ปรากฏใน รูปที่ 2aปริมาณของอาหารที่เลี้ยงด้วยอาหารที่ได้รับการดูแลอย่างดี Chow / อร่อย หนูสูงกว่าการควบคุมแบบ chow-fed สองเท่า เชาเชา หนู การเป็นปรปักษ์กันของ CeA CRF1 ตัวรับอย่างเต็มที่ปิดกั้นการกินมากเกินไปของอาหารอร่อยใน Chow / อร่อย หนูโดยไม่ส่งผลกระทบต่อการบริโภคอาหารในหนูควบคุม (เชาเชา, F (2, 20) = 0.72, NS; Chow / อร่อย, F (2, 14) = 5.02, p โพสต์นี้ การเปรียบเทียบพบว่าปริมาณสูงสุดของ R121919 (1.5 μg / ด้าน) ลดการบริโภคอาหารที่น่าพอใจอย่างมากเมื่อเทียบกับยานพาหนะใน Chow / อร่อย หนู การบริโภคของ Chow / อร่อย หนูที่ติดตาม microinfusion ของ 1.5 μg / ขนาดยาไม่แตกต่างอย่างมีนัยสำคัญจากการบริโภคของยานพาหนะท เชาเชา หนู ยืนยันความจำเพาะของเอฟเฟกต์สำหรับ CRF1 ตัวรับใน CeA ไม่พบผลกระทบใด ๆ ในการรับประทานอาหารของอาสาสมัครที่มี cannulae ที่วางผิดตำแหน่ง (Chow / อร่อย, F (2, 2) = 4.32, NS)

รูป 2 

ผลของ microinfusion ของ corticotropin-releasing factor-1 ที่เลือก (CRF)1) ตัวรับตัวรับ R121919 (0, 0.5, 1.5 μg / ด้านข้าง) ในนิวเคลียสกลางของ amygdala (CeA) ในการกินอาหารที่น่ากินมากเกินไป, hypophagia ของปกติ ...

Hypophagia ของอาหารที่กินเป็นประจำ

เพื่อตรวจสอบว่า CRF1 ตัวรับสัญญาณใน CeA เป็นสื่อกลางในการกระตุ้นการขาดออกซิเจนของอาหารเชาเชตในหนูที่ได้รับอาหารเราใช้ไมโคร R121919 เข้าสู่บริเวณสมองนี้และวัดปริมาณอาหารที่จุดเริ่มต้นของ C ระยะ ตามที่ปรากฏใน รูปที่ 2bปริมาณของยานพาหนะท Chow / อร่อย หนูเป็น ∼1 / 3 ของปริมาณของยานพาหนะท เชาเชา หนู (hypophagia) การรักษาด้วย R121919 ไม่ส่งผลต่อการขาดเลือดของอาหารที่กินเข้าไป Chow / อร่อย หนู (Chow / อร่อย, F (2, 12) = 0.14, NS) ยืนยันผลลัพธ์ที่ได้รับใน P เฟส microinfusion R121919 ใน CeA ไม่ได้ส่งผลกระทบต่อการบริโภค chow ในการควบคุม เชาเชา หนู (เชาเชา, F (2, 20) = 0.01, NS)

พฤติกรรมที่คล้ายกับการถอนความวิตกกังวลแบบเฉียบพลัน

เพื่อตรวจสอบว่า CeA CRF1 ผู้รับไกล่เกลี่ยสภาวะอารมณ์เชิงลบที่เกิดจากการถอนอาหารอร่อยในหนูกรวดเราไซต์ microinfused โดยเฉพาะ R121919 ลงในพื้นที่สมองนี้และวัดพฤติกรรมเหมือนความวิตกกังวลโดยใช้การทดสอบกล่องแสงสีเข้ม 5 ชั่วโมงเข้าสู่ C ระยะ ตามที่ปรากฏใน รูปที่ 2cหนูถูกถอนออกจากการเข้าถึงอาหารที่น่ากินอย่างสม่ำเสมอเป็นระยะแสดงให้เห็นว่าการลดลงอย่างมีนัยสำคัญของเวลาที่ใช้ในช่องแสงของกล่องแสง - มืด ไมโครฟิวชั่นของ 1.5 μg / ด้านข้างของ R121919 ใน CeA ปริมาณที่ลดการกินอาหารที่มากเกินไปอย่างมีประสิทธิภาพบล็อกพฤติกรรมคล้ายความวิตกกังวลอย่างเต็มที่โดยการเพิ่มเวลาที่ใช้ในพื้นที่แสงของกล่องใน Chow / อร่อย หนูโดยไม่ส่งผลกระทบต่อพฤติกรรมใน เชาเชา หนู (DOSE: F (1, 24) = 4.40, p<0.05) การยืนยันความจำเพาะของผลกระทบสำหรับ CRF1 ตัวรับใน CeA ไม่พบผลกระทบใด ๆ ในการรับประทานอาหารของอาสาสมัครที่มี cannulae ที่วางผิดตำแหน่ง (DOSE: F (2, 2) = 4.32, NS)

ผลของ Microinfusion ของ R121919 สู่ BlA

ปริมาณที่มากเกินไปของอาหารอร่อย

เพื่อตรวจสอบว่า BlA CRF1 ผู้รับไกล่เกลี่ยกินมากเกินไปของอาหารอร่อยในอาหารขี่จักรยานหนูเราไซต์ microinfused โดยเฉพาะ R121919 ในพื้นที่สมองนี้และวัดปริมาณอาหารที่จุดเริ่มต้นของ P ระยะ แตกต่างจากสิ่งที่สังเกตเห็นหลังจากการบริหารงานของ R1219191 ลงใน CeA ดังที่แสดงใน รูปที่ 3a microinfusion ระดับทวิภาคีของ CRF เลือกสรร1 ตัวรับที่เป็นปฏิปักษ์ต่อ BlA ไม่มีผลต่อการบริโภคอาหารที่น่าพอใจ Chow / อร่อย หนู (Chow / อร่อย, F (2, 26) = 1.56, NS) ในทำนองเดียวกันการบริโภคปกติใน เชาเชา หนูไม่ได้รับผลกระทบจาก R121919 microinfusion (เชาเชา, F (2, 18) = 0.52, NS)

รูป 3 

ผลของ microinfusion ของ corticotropin-releasing factor-1 ที่เลือก (CRF)1) ตัวรับตัวรับ R121919 (0, 0.5, 1.5 μg / ด้านข้าง) ในนิวเคลียส basolateral ของ amygdala (BlA) ในการกินอาหารที่อร่อยมากเกินไป, hypophagia ของปกติ ...

Hypophagia ของอาหารที่กินเป็นประจำ

เพื่อตรวจสอบว่า CRF1 ตัวรับใน BlA ไกล่เกลี่ย hypophagia ของ chow ในหนูที่ถูกขี่จักรยานเรา microinfused R121919 เข้าไปในบริเวณสมองนี้และวัดปริมาณอาหารที่จุดเริ่มต้นของ C ระยะ ตามที่ปรากฏใน รูปที่ 3bเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญในการบริโภคอาหารสัตว์ประจำวันพบว่า microinfusion ของ CRF1 ตัวรับศัตรูใน BlA ของ Chow / อร่อย หนู (Chow / อร่อย, F (2, 26) = 4.46, p<0.05) อันที่จริงปริมาณสูงสุด (1.5 ไมโครกรัม) ของ R121919 microinfused ใน BlA ระหว่าง C ระยะที่เพิ่มการบริโภคอาหารเชาเชาปกติอย่างมีนัยสำคัญโดย 221.1 ± 33.1 (M ± SEM) เปอร์เซ็นต์เมื่อเปรียบเทียบกับการใช้ยานพาหนะ เชาเชา หนู R121919 ลดทอนลง แต่ไม่ได้ปิดกั้นอย่างสมบูรณ์ hypophagia ที่เกิดจากการถอนที่ขนาดสูงสุดของการฉีด การยืนยันข้อมูลที่ได้รับมา P เฟส microinfusion R121919 ไม่ได้ส่งผลกระทบต่อปริมาณการบริโภคใน Chow ปกติ เชาเชา หนู (เชาเชา, F (2, 20) = 0.25, NS) ยืนยันความจำเพาะของเอฟเฟกต์สำหรับ CRF1 ตัวรับใน BlA ไม่พบผลกระทบในการรับประทานอาหารของผู้ที่มี cannulae ที่วางผิดตำแหน่ง (Chow / อร่อย, F (2, 8) = 0.50, NS)

พฤติกรรมที่คล้ายกับการถอนความวิตกกังวลแบบเฉียบพลัน

เพื่อตรวจสอบว่า BlA CRF1 ผู้รับไกล่เกลี่ยสภาวะอารมณ์เชิงลบที่เกิดจากการถอนอาหารอร่อยในหนูกรวดเราไซต์ microinfused โดยเฉพาะ R121919 ลงในพื้นที่สมองนี้และวัดพฤติกรรมเหมือนความวิตกกังวล 5 ชั่วโมงเข้าไปใน C ระยะ ตามที่ปรากฏใน รูปที่ 3cถอนอาหารอร่อย Chow / อร่อย หนูใช้เวลาน้อยลงในช่องแสงเมื่อเทียบกับ เชาเชา หนู (DIET: F (1, 23) = 84.03, p<0.001) R121919, microinfused ใน BlA ไม่มีผลต่อเวลาที่ใช้ในพื้นที่แสงอย่างมีนัยสำคัญ (DOSE: F (1, 39) = 0.01, NS)

ผลของ Microinfusion ของ R121919 ใน BNST

ปริมาณที่มากเกินไปของอาหารอร่อย

เพื่อตรวจสอบว่า BNST CRF1 ผู้รับไกล่เกลี่ยกินมากเกินไปของอาหารอร่อยในอาหารขี่จักรยานหนู R121919 เป็นเว็บไซต์ microinfused โดยเฉพาะในพื้นที่สมองนี้และวัดปริมาณอาหารที่จุดเริ่มต้นของ P ระยะ ตามที่ปรากฏใน รูปที่ 4bmicroinfusion ระดับทวิภาคีของ CRF เลือกสรร1 ตัวรับศัตรูใน BNST ไม่ส่งผลกระทบต่อการบริโภคอาหารที่น่าพอใจ Chow / อร่อย หนู (Chow / อร่อย, F (2, 18) = 0.33, NS) ในทำนองเดียวกันการบริโภคปกติใน เชาเชา หนูไม่ได้รับผลกระทบจาก R121919 microinfusion (เชาเชา, F (2, 20) = 1.03, NS)

รูป 4 

ผลของ microinfusion ของ corticotropin-releasing factor-1 ที่เลือก (CRF)1) ตัวรับตัวรับ R121919 (0, 0.5, 1.5 μg / ด้านข้าง) ในนิวเคลียสเตียงของ stria terminalis (BNST) ในการกินอาหารที่น่ากินมากเกินไป, hypophagia ...

Hypophagia ของอาหารที่กินเป็นประจำ

เพื่อตรวจสอบว่า BNST CRF1 ผู้รับไกล่เกลี่ย hypophagia ของอาหารเชาในหนูกรวดเรา microinfused R121919 ในพื้นที่สมองนี้และวัดปริมาณอาหารที่จุดเริ่มต้นของ C ระยะ ตามที่ปรากฏใน รูปที่ 4amicroinfusion R121919 ไม่ได้ส่งผลกระทบต่อการรับประทานในอาหารประจำวัน เชาเชา หนู (เชาเชา, F (2, 14) = 0.03, NS) ในทำนองเดียวกันการรักษา R121919 ไม่ได้ส่งผลกระทบต่อการขาดเลือดของเชาเชาปกติ Chow / อร่อย หนู (Chow / อร่อย, F (2, 20) = 0.27, NS)

พฤติกรรมที่คล้ายกับการถอนความวิตกกังวลแบบเฉียบพลัน

เพื่อตรวจสอบว่า BNST CRF1 ผู้รับไกล่เกลี่ยสภาวะอารมณ์เชิงลบที่เกิดจากการถอนอาหารอร่อยในหนูกรวดเราไซต์ microinfused โดยเฉพาะ R121919 ลงในพื้นที่สมองนี้และวัดพฤติกรรมเหมือนความวิตกกังวล 5 ชั่วโมงหลังจากเปลี่ยนจาก P→C ระยะ ตามที่ปรากฏใน รูปที่ 4cถอนอาหารอร่อย Chow / อร่อย หนูใช้เวลาน้อยลงในช่องแสงเมื่อเทียบกับการควบคุม เชาเชา หนู (DIET: F (1, 17) = 17.11, p<0.01) R121919, microinfused ในขนาด 1.5 μg / ข้างใน BNST ไม่มีผลต่อเวลาที่ใช้ในพื้นที่แสงอย่างมีนัยสำคัญ (DOSE: F (1, 33) = 0.47, NS)

อิมมูโนวิทยาเคมี CRF

รูป 5 แสดงภาพไมโครกราฟิคที่เป็นตัวแทนของ CRF + เซลล์ใน CeA, BlA และ BNST ใน เชาเชา และ Chow / อร่อย หนูกำลังติดตาม โฆษณาฟรี ขั้นตอนการเปลี่ยนอาหารที่อร่อย การวิเคราะห์ immunoreactivity CRF ของ CeA พบว่ามีความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญระหว่าง Chow / อร่อย และ เชาเชา หนูในช่วงทั้ง C และ P เฟส (F (2, 19) = 4.19, p<0.05) ไม่พบความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติในกลุ่ม BlA (F (2, 17) = 1.13, NS) หรือ BNST (F (2, 19) = 1.16, NS)

รูป 5 

ตัวแทน micrographs ของ corticotropin - ปัจจัยการปลดปล่อย (CRF) immunoreactivity ในนิวเคลียสกลางของ amygdala (CeA) (a-d), basolateral nucleus ของ amygdala (e-h) และนิวเคลียสของ stria terminalis (BNA) ) (i – l) ...

อภิปราย

การศึกษาครั้งนี้ได้รับการออกแบบมาเพื่อระบุหน้าที่ของสมองที่มีหน้าที่รับผิดชอบต่อการบริโภค CRF-mediated ที่มากเกินไปของอาหารที่มีความอร่อยสูงในหนูภายใต้ระบบการเปลี่ยนอาหาร การค้นพบของเราพิสูจน์แล้วว่ามีบทบาทสำคัญสำหรับ CeA ในการเป็นสื่อกลางในการรับประทานอาหารที่มีรสชาติอร่อยมากเกินไป นอกจากนี้เราแสดงให้เห็นว่าระบบ CRF ใน BlA แตกต่างจาก CeA มีบทบาทในกระบวนการลดค่าเงินที่เกิดขึ้นเมื่อการลดระดับขนาดรางวัลอาหาร

ก่อนหน้านี้เราได้แสดงให้เห็นว่าการวนรอบการเข้าถึงและการถอนตัวจากอาหารที่มีรสหวานและมีความซ้ำซ้อนสูงนำไปสู่การรับประทานอาหารที่มีรสชาติอร่อยมากเกินไปรวมถึงอาการขาดอาหารที่ขึ้นอยู่กับการถอนแบบเฉียบพลัน; , ) การกินมากเกินไปที่สังเกตเห็นที่นี่เป็นสมมติฐานที่จะถูกขับเคลื่อนโดยสภาวะอารมณ์เชิงลบที่เกิดจากตอนซ้ำของการถอนเฉียบพลันจากอาหารที่น่าพอใจสูงผ่านทาง CRH - CRF extrahypothalamic1 กลไกที่เป็นสื่อกลางของระบบตัวรับซึ่งมีลักษณะคล้ายกับกระบวนการ 'จุดไฟ' ที่มีความผิดปกติของการเสพติด (; ; ; ).

ผลการศึกษาครั้งนี้แสดงให้เห็นว่า CRF1 ตัวรับของ CeA และ BlA เป็นสื่อกลางในการปรับตัวการให้อาหารที่แตกต่างกันและพฤติกรรมที่คล้ายความวิตกกังวลของหนูที่ได้รับอาหารเรื้อรัง การบริหารงานของ CRF เลือก1 คู่ปรับตัวรับภายใน CeA ปิดกั้นทั้งพฤติกรรมการกินมากเกินไปและความวิตกกังวลใน Chow / อร่อย หนูโดยไม่ส่งผลกระทบต่อ hypophagia ของอาหารที่ยอมรับไม่ได้ปกติ ที่น่าสนใจคือการบริหาร R121919 เข้าสู่ BlA ทำให้การลดลงของภาวะ hypophagia ในอาหาร Chow ที่น่ารับประทานน้อยลง (เช่นเพิ่มการบริโภค Chow ปกติ) ใน Chow / อร่อย หนูโดยไม่ส่งผลกระทบต่อการกินมากเกินไปหรือพฤติกรรมที่คล้ายความวิตกกังวล เมื่อ microinfused ใน BNST R121919 จะไม่ส่งผลต่อตัวแปรใด ๆ ที่วัดได้ Chow / อร่อย หนู (กินมากเกินไปของอาหารที่ถูกใจอย่างมาก, การบริโภคอาหารเชาเชาปกติและพฤติกรรมคล้ายความวิตกกังวลที่เกิดจากการถอนเฉียบพลัน) ผลทางเภสัชวิทยาที่สังเกตได้มีการคัดเลือก Chow / อร่อย หนูเนื่องจาก R121919, microinfused ภายใน CeA, BlA หรือ BNST ของ เชาเชา หนูควบคุมออกแรงไม่มีผล ดังนั้น CRF – CRF1 ระบบรับของ CeA และ BlA ดูเหมือนจะเป็นสื่อกลางที่แตกต่างจากผลลัพธ์พฤติกรรมที่เกิดจากการปั่นจักรยานอาหารอร่อย ในทางกลับกัน CRF – CRF1 ระบบรับของ BNST ดูเหมือนจะไม่เกี่ยวข้องกับการปรับพฤติกรรมที่เกิดจากการเปลี่ยนอาหารที่น่ากิน

การค้นพบพฤติกรรมและเภสัชวิทยาของเราได้รับการสนับสนุนโดยการสังเกตว่า immunoreactivity CRF ภายใน CeA ของ Chow / อร่อย หนูเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญเมื่อเทียบกับ เชาเชา ควบคุมหนูในระหว่างการถอนตัวออกจากและต่อไปนี้การเข้าถึงอาหารที่น่าพอใจอย่างมาก () น่าสังเกตว่าไม่มีความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญในปฏิกิริยาตอบโต้ของ CRF ระหว่างกลุ่มใน BlA หรือ BNST immunoreactivity CRF ที่เพิ่มขึ้นพบใน CeA ของ Chow / อร่อย หนูมีความสอดคล้องกับการค้นพบครั้งก่อน ๆ ของเราว่าการถอนอย่างรวดเร็วจากอาหารที่น่ากินมีส่วนเกี่ยวข้องกับการปล่อย CRF ที่เพิ่มขึ้นใน CeA () อย่างไรก็ตามตรงกันข้ามกับสิ่งที่แสดงไว้ก่อนหน้าการต่ออายุการเข้าถึงอาหารที่อร่อยไม่ทำให้การกลับมาของการแสดงออกของ CRF ใน CeA เพื่อควบคุมระดับ ความแตกต่างระหว่างผลลัพธ์ที่ได้รับที่นี่และการสังเกตก่อนหน้าอาจเกี่ยวข้องกับจุดเวลาที่แตกต่างกันของการรวบรวมสมองและความละเอียดทางกายวิภาคที่แตกต่างกันของเทคนิคที่นำมาใช้เพื่อวัดการแสดงออกของ CRF อย่างไรก็ตามการเพิ่มขึ้นของการแสดงออกใน CRF ใน CeA ในระหว่างการถอนตัวและการเข้าถึงอาหารที่อร่อยใหม่นั้นสอดคล้องกับผลการคัดเลือกของการปิดล้อมของพฤติกรรมที่คล้ายกับความวิตกกังวล (ในระหว่างการถอน) และการกินมากเกินไป Chow / อร่อย หนู ความไม่ลงรอยกันที่เห็นได้ชัดระหว่างสองการศึกษาสามารถตีความโดยรวมได้ดังนี้: ในระหว่างการถอนอาหารที่เป็นที่ชื่นชอบเฉียบพลันการแสดงออกของ CRF จะเพิ่มขึ้นใน CeA ของหนูที่ได้รับอาหารลดน้ำหนักเมื่อเปรียบเทียบกับการควบคุมและรับผิดชอบต่อการเกิด การแสดงออกของ CeA CRF ยังคงเปลี่ยนไปจนถึงชั่วโมงแรกของการเข้าถึงที่น่าพอใจอย่างมากทำให้เกิดการกินมากเกินไป อย่างไรก็ตามหลังจากการบริโภคอาหารที่อร่อยจนเกินไป CRF จะกลับสู่ระดับการควบคุม ().

ผลการทดลองทางเภสัชวิทยาและโมเลกุลแสดงการสนับสนุนสมมติฐานที่ว่า CRF-CRF1 ระบบรับใน CeA มีบทบาทสำคัญในการไกล่เกลี่ยสภาพอารมณ์เชิงลบและการรับประทานอาหารที่มีรสชาติอร่อยในหนูถีบจักรอาหารที่มากเกินไปเช่นเดียวกับสิ่งที่แสดงให้เห็นอย่างกว้างขวางสำหรับการพึ่งพาแอลกอฮอล์และยาเสพติด () ในความเป็นจริงแล้วหนูที่ขึ้นกับเอธานอลแสดงการปลดปล่อย CRF ในเซลล์นอกเซลล์ในระหว่างการถอนตัวและการจัดการกับตัวรับ CRF ในซีเอเอนั้นสามารถป้องกันการจัดการตนเองของเอทานอลที่เพิ่มขึ้นในระหว่างการถอนตัว; ) สัตว์ที่พึ่งพายาเสพติดแสดงการแสดงออกของ CRF ที่เพิ่มขึ้นใน CeA ระหว่างการถอน () และการปิดกั้นตัวรับ CRF ใน CeA แต่ไม่ใช่ BNST จะช่วยลดสัญญาณพฤติกรรมการถอน (; ) บทบาทสำคัญสำหรับ CRF – CRF1 ระบบใน CeA ยังได้รับการพิสูจน์ในการพึ่งพานิโคติน อันที่จริงการถอนนิโคติน mecamylamine ที่ตกตะกอนมีความเกี่ยวข้องกับการกระทำที่มากเกินไปของ CRF – CRF1 ระบบรับใน CeA () และ intra-CeA แต่ไม่ใช่ intra-BlA, microinfusion ของ CRF1 ตัวรับผู้รับลดนิโคตินขึ้นอยู่กับการถอนในเกณฑ์รางวัลสมอง () ในหนูที่ขึ้นอยู่กับ cannabinoid การถอนตัวที่ตกตะกอนนั้นสัมพันธ์กับระดับความสูงที่ทำเครื่องหมายไว้ในความเข้มข้น CRF นอกเซลล์ใน CeA () หลักฐานนี้สนับสนุนสมมติฐานที่ว่า CRF – CRF อย่างยิ่ง1 ระบบรับใน CeA เป็นสื่อกลางที่สำคัญของผลกระทบเชิงลบที่เกิดจากการถอนอย่างฉับพลันพร้อมกับปริมาณยาและแอลกอฮอล์ที่มากเกินไประหว่างการพึ่งพา ผลลัพธ์ของเราขยายความรู้นี้ไปสู่การรับประทานอาหารที่มีรสชาติอร่อยมากเกินไปซึ่งบ่งชี้ว่า

ผลของการศึกษาครั้งนี้แสดงให้เห็นว่าภาวะกลืนไม่เข้าคายไม่ออกของอาหารที่ขึ้นอยู่กับการถอนตัวของอาหาร Chow ที่มีความอยากอาหารน้อยนั้นได้รับการลดทอนโดย microinfusion ภายใน BlA ของ CRF ที่เลือก1 ตัวรับตัวรับในขณะที่พฤติกรรมการกินมากเกินไปและความวิตกกังวลเหมือนไม่ได้รับผลกระทบจากการรักษาด้วยยาภายใน -BA การมีส่วนร่วมที่แตกต่างกันของ BlA CRF – CRF1 ระบบตัวรับในผลลัพธ์ของการปั่นจักรยานควบคุมอาหารแสดงให้เห็นว่าภาวะที่กลืนไม่เข้าคายไม่ออกของเชาเชาอาจแสดงถึงกระบวนการเชิงพฤติกรรมที่เป็นอิสระจากพฤติกรรมวิตกกังวล ค่อนข้างการค้นพบเหล่านี้สอดคล้องกับสมมติฐานที่ BlA ไกล่เกลี่ยทางประสาทสัมผัสและแรงจูงใจของเหตุการณ์สำคัญสำคัญแรงจูงใจ แท้จริงแล้วมีหลักฐานมากมายที่แสดงว่า BlA มีความสำคัญอย่างยิ่งในกระบวนการไกล่เกลี่ยการลดค่าเงินและการตอบสนองแบบ aversive เพื่อลดการให้รางวัล (เช่นผลกระทบ Crespi ผลตรงกันข้ามเชิงลบต่อเนื่องการลดค่าเงินรางวัลและอื่น ๆ ; ; ; ) และดังนั้น hypophagia ที่เกิดจากการเปลี่ยนจากอาหารที่น่ากินมากไปเป็นอาหาร chow ที่น่ารับประทานน้อยอาจเป็นกระบวนการลดค่า hedonic แทนที่จะเป็นกลไกที่ขึ้นอยู่กับสภาวะสมดุลของพลังงาน (เช่นเป็นอิสระจากการบริโภคพลังงานก่อนหน้าหรือน้ำหนักตัวที่เพิ่มขึ้น ; , ) การปิดล้อมของ CRF1 ตัวรับภายใน BlA จึงตั้งสมมติฐานเพื่อลดการเกิด Chow hypophagia (เช่นเพื่อเพิ่มการกิน Chow) โดยการลดทอนกระบวนการลดค่าที่เกิดขึ้นเมื่อเปลี่ยนจากอาหารที่มีความน่ากินสูงไปเป็น Chow ที่มีความอยากอาหารน้อย ที่เกี่ยวข้องกับบริบทนี้ก็เป็นความไม่สอดคล้องกันอย่างชัดเจนระหว่างโมเลกุลและผลพฤติกรรม / เภสัชวิทยาที่ได้รับใน BlA แม้ว่า CRF1 ตัวรับตัวรับสามารถลดขนาดของสุนัขพันธุ์โชว hypophagia เมื่อถูกฉีดเข้าไปใน BlA ไม่พบความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญใน immunoreactivity CRF ในพื้นที่นี้เมื่อเปรียบเทียบกับกลุ่มควบคุมและหนูที่ได้รับอาหาร ความคลาดเคลื่อนที่ชัดเจนนี้สามารถอธิบายได้โดยพิจารณาว่ากระบวนการลดค่าเงินขึ้นอยู่กับ BlA ขึ้นอยู่กับการให้รางวัลทางเลือกเกิดขึ้นทางสรีรวิทยาและมีความสำคัญทางวิวัฒนาการที่สำคัญในการเลือกอาหารที่ให้ผลตอบแทนสูงที่สุด / พลังงานตามตัวอักษร) ดังนั้นจึงเป็นที่ถกเถียงกันอยู่ว่าการไกล่เกลี่ยของกระบวนการเหล่านี้ใน BlA ไม่ต้องการ neuroadaptations ในระบบ CRF (คล้ายกับที่พบใน CeA) ในการสนับสนุนของสมมติฐานนี้ในขณะที่การกินมากเกินไปต้องใช้การปั่นจักรยานอาหารเรื้อรังเพื่อพัฒนา, hypophagia ของ chow ทางเลือกที่ต้องการน้อยเกิดขึ้นหลังจากการเปลี่ยนครั้งแรกจากอาหารที่อร่อยมากกลับไปที่อาหารปกติ) นอกจากนี้สิ่งสำคัญคือต้องเน้นว่าตามผลที่ได้รับโดยการฉีดตัวรับ CRF1 ลงใน BlA และ CeA, CRF1 hypophagia ตัวรับขึ้นอยู่กับการสังเกตที่นี่ดูเหมือนจะเป็นกระบวนการพฤติกรรมที่แตกต่างกว่า Anhedonia ที่เห็นในการถอนยาเสพติด อย่างไรก็ตามการถอนอย่างกะทันหันจากการเข้าถึงอาหารที่อร่อยเป็นระยะ ๆ ได้แสดงให้เห็นถึงการกระตุ้นการตอบสนองที่คล้ายกับ hypohedonic อื่น ๆ เช่นการไม่สามารถขยับเขยื้อนได้มากขึ้นในการทดสอบว่ายน้ำแบบบังคับและลดการตอบสนองในตารางอัตราส่วนการเสริมแรง; ).

มันเป็นเรื่องสำคัญที่จะพูดถึงว่าแม้ว่า Chow / อร่อย หนูได้รับอาหารขี่จักรยานเรื้อรังการเปลี่ยนแปลงพฤติกรรมและ neurochemical แสดงที่นี่เกิดขึ้นในช่วงเฉียบพลันมากกว่าการเรื้อรังถอนตัวออกจากอาหารอร่อย การเน้นด้านนี้มีความเกี่ยวข้องโดยเฉพาะอย่างยิ่งในการวิจัยการเสพติดความแตกต่างอย่างลึกซึ้งในพฤติกรรม, เภสัชวิทยา, และ neurochemical ผลของเฉียบพลัน vs งดเว้นยืดเยื้อได้รับการปฏิบัติ (; ) การศึกษาในอนาคตจะเป็นประโยชน์ต่อการพิจารณาว่าการถอนตัวที่ยืดเยื้ออาจส่งผลต่อผลลัพธ์ของการปั่นจักรยาน

ประเด็นของการอภิปรายที่เกี่ยวข้องคือพฤติกรรมการบริโภคอาหารที่น่ารับประทานมากเกินไปที่เราสังเกตเห็นในบริบทของแบบจำลองสัตว์ชนิดนี้อาจถือได้ว่าเป็น 'การบังคับ' ในการวิจัยการเสพติดพรีคลินิกคำว่า 'บังคับ' ถูกใช้อย่างกว้างขวางเพื่ออธิบายการบริโภคยาที่มากเกินไปในระหว่างการถอนซึ่งเกิดจากสภาวะอารมณ์เชิงลบและได้รับการบรรเทาเมื่อต่ออายุการเข้าถึงยา (; ). การยอมรับคำว่า 'บีบบังคับ' นี้ตั้งอยู่บนกรอบแนวคิดที่ว่าความผิดปกติของการบีบบังคับนั้นมีลักษณะของความวิตกกังวลและความเครียดก่อนที่จะกระทำพฤติกรรมบีบบังคับและการบรรเทาความเครียดโดยการแสดงพฤติกรรมบีบบังคับ (; ). ในบริบทของแบบจำลองสัตว์ที่ใช้ในที่นี้พฤติกรรมการกินที่มากเกินไปสามารถตีความได้ว่าเป็นรูปแบบของพฤติกรรม 'บีบบังคับ' จากหลักฐานที่เผยแพร่ก่อนหน้านี้ว่าหนูที่มีการเข้าถึงอาหารที่ถูกปากเป็นระยะ ๆ แสดงถึงสภาวะทางอารมณ์เชิงลบในระหว่างการถอนอาหารที่น่ารับประทาน โดยพฤติกรรมที่คล้ายความวิตกกังวลและอาการซึมเศร้าซึ่งบรรเทาลงเมื่อต่ออายุการเข้าถึง (, ; ).

โดยสรุปแล้วผลการศึกษาครั้งนี้ให้หลักฐานเชิงหน้าที่ที่สำคัญว่า CRF – CRF1 ระบบรับของ CeA และ BlA มีบทบาทที่แตกต่างกันในการไกล่เกลี่ยพฤติกรรมที่ไม่เหมาะสมซึ่งเป็นผลมาจากการเข้าถึงอย่างต่อเนื่องของอาหารที่อร่อย ใน CeA, CRF – CRF1 ระบบตัวรับเป็นสื่อกลางที่สำคัญของการกินอาหารที่ถูกปากมากเกินไปและผลกระทบเชิงลบที่ขึ้นอยู่กับการถอนตัวในขณะที่ BlA จะเป็นสื่อกลางในการตอบสนองที่ไม่พึงประสงค์ของอาสาสมัครโดยการลดรางวัล

การระดมทุนและการเปิดเผยข้อมูล

ผู้เขียนรายงานว่าไม่มีความขัดแย้งทางผลประโยชน์

กิตติกรรมประกาศ

เราขอขอบคุณ Duncan Momaney, Aditi R Narayan, Jina Kwak สำหรับความช่วยเหลือด้านเทคนิคและ Tamara Zeric สำหรับความช่วยเหลือด้านเทคนิคและบรรณาธิการ นอกจากนี้เราขอขอบคุณ Elena F Crawford สำหรับคำแนะนำที่เป็นประโยชน์เกี่ยวกับภูมิคุ้มกันวิทยา CRF เอกสารฉบับนี้จัดทำขึ้นโดยให้หมายเลข DA023680, DA030425, MH091945, MH093650 และ AA016731 ​​จาก National Institute on Drug Abuse (NIDA), National Institute of Mental Health (NIMH) และ National Institute on Alcohol Abuse and Alcoholism ( NIAAA) โดย Peter Paul Career Development Professorship (PC) และโดยโครงการโอกาสในการวิจัยระดับปริญญาตรี (UROP) ของมหาวิทยาลัยบอสตัน งานวิจัยนี้ยังได้รับการสนับสนุนโดย NIH Intramural Research Programs ของ National Institute on Drug Abuse และ National Institute of Alcohol Abuse and Alcoholism, NIH, DHHS เนื้อหาเป็นความรับผิดชอบของผู้เขียน แต่เพียงผู้เดียวและไม่จำเป็นต้องแสดงถึงมุมมองอย่างเป็นทางการของสถาบันสุขภาพแห่งชาติ

เชิงอรรถ

 

ข้อมูลเสริม มาพร้อมกับเอกสารในเว็บไซต์ Neuropsychopharmacology (http://www.nature.com/npp)

 

อ้างอิง

  • Ahmed SH, Koob GF การเปลี่ยนไปสู่การติดยาเสพติด: แบบจำลองการเสริมแรงเชิงลบโดยยึดตามการลดลงของอุณหภูมิในฟังก์ชันการให้รางวัล Psychopharmacology (Berl) 2005; 180: 473 – 490 [PubMed]
  • Avena NM, Bocarsly ME, Hoebel BG แบบจำลองสัตว์ของน้ำตาลและการดื่มสุราไขมัน: ความสัมพันธ์กับการติดอาหารและน้ำหนักตัวที่เพิ่มขึ้น วิธีการ Mol Biol 2012; 829: 351 365- [PubMed]
  • Bakshi VP, Kalin NH Corticotropin- ปล่อยฮอร์โมนและแบบจำลองสัตว์ของความวิตกกังวล: ปฏิสัมพันธ์ของสภาพแวดล้อมของยีน จิตเวช Biol 2000; 48: 1175 1198- [PubMed]
  • Bale TL ความไวต่อความเครียด: dysregulation ของเส้นทาง CRF และการพัฒนาโรค Behav Horm 2005; 48: 1 10- [PubMed]
  • Blasio A, Iemolo A, Sabino V, Petrosino S, Steardo L, Rice KC 2013aRimonabant ตกตะกอนความวิตกกังวลในหนูที่ถอนออกจากอาหารอร่อย: บทบาทของ amygdala ส่วนกลาง Neuropsychopharmacologydoi: 10.1038 / npp.2013.153 [บทความฟรี PMC] [PubMed] [ข้ามอ้างอิง]
  • Blasio A, Steardo L, Sabino V, Cottone P. 2013bOpioid ระบบในเยื่อหุ้มสมอง prefrontal เยื่อหุ้มสมองอยู่ตรงกลางไกล่เกลี่ยกินการดื่มสุราการติดยาเสพติด Bioldoi: 10.1111 / adb.12033 [บทความฟรี PMC] [PubMed] [ข้ามอ้างอิง]
  • Breese GR, Overstreet DH, Knapp DJ. กรอบแนวคิดสำหรับสาเหตุของโรคพิษสุราเรื้อรัง: สมมติฐาน 'จุดไฟ' / ความเครียด Psychopharmacology (Berl) 2005; 178: 367–380 [บทความฟรี PMC] [PubMed]
  • Bruijnzeel AW, ฟอร์ด J, Rogers JA, Scheick S, Ji Y, Bishnoi M, และคณะ การปิดล้อมของตัวรับ CRF1 ในนิวเคลียสส่วนกลางของอะไมก์ดาลานั้นจะลดทอนความผิดปกติที่เกี่ยวข้องกับการถอนนิโคตินในหนู Pharmacol Biochem Behav 2012; 101: 62 68- [บทความฟรี PMC] [PubMed]
  • Chen C, Wilcoxen KM, Huang CQ, Xie YF, McCarthy JR, เวบบ์ TR, และคณะ การออกแบบ 2,5-dimethyl-3- (6-dimethyl-4-methylpyridin-3-yl) -7-dipropylaminopyrazolo [1,5-a] py rimidine (NBI 30775 / R121919) corticotropin ที่ใช้งานปัจจัยการเปิดรับคู่อริ J Med Chem 2004; 47: 4787 4798- [PubMed]
  • RL Corwin หนูดื่มสุรา: รูปแบบของพฤติกรรมที่มากเกินไปเป็นระยะ ๆ ความกระหาย. 2006; 46: 11 15- [บทความฟรี PMC] [PubMed]
  • Corwin RL, Grigson PS ภาพรวมของการประชุมสัมมนาเรื่องการติดอาหาร: ความจริงหรือเรื่องแต่ง J Nutr 2009; 139: 617 619- [บทความฟรี PMC] [PubMed]
  • Cottone P, Sabino V, Nagy TR, Coscina DV, Zorrilla EP การให้อาหารจุลโครงสร้างในโรคอ้วนที่เกิดจากอาหารที่ไวต่อการสัมผัสกับหนูทน: ผลกลางของ urocortin 2 J Physiol 2007; 583 (Pt 2: 487 – 504 [บทความฟรี PMC] [PubMed]
  • Cottone P, Sabino V, Roberto M, Bajo M, Pockros L, Frihauf JB, และคณะ การรับสมัครระบบ CRF ไกล่เกลี่ยด้านมืดของการรับประทานอาหารซึ่งต้องกระทำ Proc Natl Acad Sci สหรัฐอเมริกา 2009a; 106: 20016 20020- [บทความฟรี PMC] [PubMed]
  • Cottone P, Sabino V, Steardo L, Zorrilla EP การเข้าถึงอาหารที่ต้องการเป็นระยะ ๆ ช่วยลดประสิทธิภาพของอาหารในหนู Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol 2008; 295: R1066-R1076 [บทความฟรี PMC] [PubMed]
  • Cottone P, Sabino V, Steardo L, Zorrilla EP การปรับตัวที่เกี่ยวข้องกับความวิตกกังวลและการเผาผลาญในหนูตัวเมียพร้อมการเข้าถึงอาหารที่ต้องการ Psychoneuroendocrinology 2009b; 34: 38 49- [บทความฟรี PMC] [PubMed]
  • Cottone P, วัง X, Park JW, Valenza M, Blasio A, Kwak J, et al. การเป็นปรปักษ์กันของตัวรับ sigma-1 บล็อกการกินเหมือนบังคับ Neuropsychopharmacology 2012; 37: 2593 2604- [บทความฟรี PMC] [PubMed]
  • Dore R, Iemolo A, Smith KL, วัง X, Cottone P, Sabino V. 2013CRF เป็นสื่อกลางในการ anxiogenic และต่อต้านการให้รางวัล แต่ไม่ได้ผลกระทบทางทวารหนักของ PACAP Neuropsychopharmacologydoi: 10.1038 / npp.2013.113 [บทความฟรี PMC] [PubMed] [ข้ามอ้างอิง]
  • ฟังก์ CK, O'Dell LE, Crawford EF, Koob GF Corticotropin- ปล่อยปัจจัยภายในนิวเคลียสกลางของ amygdala ไกล่เกลี่ยเพิ่มการจัดการตนเองเอทานอลในเอทานอลในหนูถอนตัวขึ้นอยู่กับเอทานอล J Neurosci 2006; 26: 11324 11332- [PubMed]
  • George O, Ghozland S, Azar MR, Cottone P, Zorrilla EP, พาร์สันส์ LH, และคณะ การเปิดใช้งานระบบ CRF-CRF1 เป็นสื่อกลางในการเพิ่มขึ้นของการถอนนิโคตินในการควบคุมตนเองในหนูที่ขึ้นอยู่กับนิโคติน Proc Natl Acad Sci สหรัฐอเมริกา 2007; 104: 17198 17203- [บทความฟรี PMC] [PubMed]
  • Grigoriadis DE, Chen C, Wilcoxen K, Chen T, Lorang MT, Bozigion H, et al. ในหลอดทดลอง การศึกษาลักษณะของ R121919: ตัวรับที่ไม่ใช่เพปไทด์ corticotropin-releasing factor1 (CRF1) ตัวรับสำหรับการรักษาโรคซึมเศร้าและความวิตกกังวลที่เกี่ยวข้อง สังคมเพื่อประสาทวิทยาศาสตร์ 2000; บทคัดย่อ 807: 4 – 9
  • Hagan MM, Chandler PC, Wauford PK, Rybak RJ, Oswald KD บทบาทของอาหารที่อร่อยและความหิวโหยเป็นปัจจัยกระตุ้นในรูปแบบสัตว์ที่ทำให้เกิดความเครียด Int J Eat Disord 2003; 34: 183 197- [PubMed]
  • Hatfield T, Han JS, Conley M, Gallagher M, ฮอลแลนด์ P. รอยโรคทางระบบประสาทของ basolateral, แต่ไม่ใช่ภาคกลาง, amygdala แทรกแซงการปรับอากาศแบบอันดับสองของ Pavlovian และเสริมผลการลดค่าเงิน J Neurosci 1996; 16: 5256 5265- [PubMed]
  • Heilig M, Egli M, Crabbe JC, Becker HC การถอนแบบเฉียบพลันการเลิกบุหรี่ที่ยืดเยื้อและผลกระทบด้านลบในโรคพิษสุราเรื้อรัง: พวกมันเชื่อมโยงกันหรือไม่ ติดยาเสพติด Biol 2010; 15: 169 184- [บทความฟรี PMC] [PubMed]
  • Heilig M, Koob GF บทบาทสำคัญของการใช้สาร corticotropin ในการติดเหล้า เทรนด์ Neurosci 2007; 30: 399 406- [บทความฟรี PMC] [PubMed]
  • Heinrichs SC, Menzaghi F, Schulteis G, Koob GF, Stinus L. การยับยั้งการหลั่ง corticotropin-factor ใน amygdala ช่วยลดผลกระทบจากการถอนมอร์ฟีน Behav Pharmacol 1995; 6: 74 80- [PubMed]
  • Iemolo A, Valenza M, Tozier L, Knapp CM, Kornetsky C, Steardo L, et al การถอนตัวออกจากอาหารที่ไม่ต่อเนื่องและต่อเนื่องในการเข้าถึงอาหารที่มีรสชาติอร่อยทำให้เกิดพฤติกรรมซึมเศร้าในหนูที่กินอาหารเป็นอาหาร Behav Pharmacol 2012; 23: 593 602- [บทความฟรี PMC] [PubMed]
  • Koob GF บทบาทของระบบความเครียดสมองในการเสพติด เซลล์ประสาท 2008; 59: 11 34- [บทความฟรี PMC] [PubMed]
  • Koob GF พื้นผิว Neurobiological สำหรับด้านมืดของการบีบบังคับในการติดยาเสพติด Neuropharmacology 2009; 56 (Suppl 1: 18 – 31 [บทความฟรี PMC] [PubMed]
  • Koob GF บทบาทของเปปไทด์ที่เกี่ยวข้องกับ CRF และ CRF ในด้านมืดของการเสพติด ความต้านทานของสมอง 2010; 1314: 3 14- [บทความฟรี PMC] [PubMed]
  • Koob GF, Heinrichs SC บทบาทของ corticotropin ในการปลดปล่อยปัจจัยและ urocortin ในการตอบสนองเชิงพฤติกรรมต่อแรงกดดัน ความต้านทานของสมอง 1999; 848: 141 152- [PubMed]
  • Koob GF, Le Moal M. Plasticity ของรางวัล neurocircuitry และ 'ด้านมืด' ของการติดยาเสพติด Nat Neurosci 2005; 8: 1442 1444- [PubMed]
  • Koob GF รีวิว Le Moal M. กลไกทางระบบประสาทสำหรับกระบวนการสร้างแรงบันดาลใจของคู่ต่อสู้ในการเสพติด Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci 2008; 363: 3113 3123- [บทความฟรี PMC] [PubMed]
  • Koob GF, Volkow ND วงจรประสาทการติดยาเสพติด Neuropsychopharmacology 2010; 35: 217 238- [บทความฟรี PMC] [PubMed]
  • Logrip ML, Koob GF, Zorrilla EP บทบาทของการใช้ยา corticotropin ในการติดยา: ศักยภาพในการแทรกแซงทางเภสัชวิทยา ระบบประสาทส่วนกลางของยาเสพติด 2011; 25: 271 287- [บทความฟรี PMC] [PubMed]
  • Maj M, Turchan J, Smialowska M, Przewlocka B. Morphine และโคเคนมีอิทธิพลต่อการสังเคราะห์ CRF ในนิวเคลียสส่วนกลางของหนูใน amygdala neuropeptides 2003; 37: 105 110- [PubMed]
  • McNally GP, Akil H. บทบาทของ corticotropin - ปล่อยฮอร์โมนใน amygdala และนิวเคลียสเตียงของ stria terminalis ในพฤติกรรม, modulatory ความเจ็บปวดและผลกระทบต่อมไร้ท่อจากการถอนยาเสพติด ประสาท 2002; 112: 605 617- [PubMed]
  • Merlo Pich E, Lorang M, Yeganeh M, Rodriguez de Fonseca F, Raber J, Koob GF, และคณะ การเพิ่มขึ้นของระดับ corticotropin ที่ปล่อยระดับอิมมูโนเรติอิแอคทีเรียลในเซลล์ของ amygdala ของหนูที่ตื่นตัวในขณะที่ความเครียดจากการยับยั้งความเครียดและการถอนตัวของเอธานอล J Neurosci 1995; 15: 5439 5447- [PubMed]
  • Murray E, Wise S, Rhodes S. 2011 สมองแตกต่างกันอย่างไรกับรางวัล In กอทท์ฟรีด JA (บรรณาธิการ). ชีววิทยาแห่งความรู้สึกและรางวัลบทที่ 4 ซีอาร์ซีกด: โบคาเรตัน, ฟลอริดา, สหรัฐอเมริกา [PubMed]
  • Parylak SL, Koob GF, Zorrilla EP ด้านมืดของการติดอาหาร Behiol Behav 2011; 104: 149 156- [บทความฟรี PMC] [PubMed]
  • Paxinos G, Watson C. 2007 หนูสมองใน Stereotaxic พิกัด 6th edn.Academic Press
  • Pellegrino A. แผนที่ Stereotaxic ของสมองหนู Plenum: นิวยอร์ก; 1979
  • Rodriguez de Fonseca F, Carrera MR, Navarro M, Koob GF, Weiss F. การกระตุ้นการทำงานของ corticotropin - การปลดปล่อยปัจจัยในระบบ limbic ระหว่างการถอน cannabinoid วิทยาศาสตร์. 1997; 276: 2050 2054- [PubMed]
  • Sabino V, Cottone P, Steardo L, Schmidhammer H, Zorrilla EP 14-Methoxymetopon, agonist mu opioid ที่มีศักยภาพสูง, ส่งผลกระทบต่อการบริโภคเอทานอลใน biphasically ในหนูที่ชอบแอลกอฮอล์ของซาร์ดิเนีย Psychopharmacology (Berl) 2007; 192: 537 – 546 [PubMed]
  • ซาลินาส JA, MB ผู้ปกครอง, McGaugh JL รอยโรคกรด Ibotenic ของ amygdala basolateral complex หรือ nucleus ส่วนกลางมีผลต่อการตอบสนองต่อการลดลงของรางวัลที่แตกต่างกัน ความต้านทานของสมอง 1996; 742: 283 293- [PubMed]
  • Shalev U, Erb S, Shaham Y. บทบาทของ CRF และนิวโรเป็ปไทด์อื่น ๆ ในการคืนสถานะความเครียดจากการแสวงหายาเสพติด ความต้านทานของสมอง 2010; 1314: 15 28- [บทความฟรี PMC] [PubMed]
  • Vale W, Spiess J, Rivier C, Rivier J. การศึกษาลักษณะของเปปไทด์ 41-residue ovine เปปไทด์ 1981-ตกค้างที่กระตุ้นการหลั่ง corticotropin และ beta-endorphin วิทยาศาสตร์. 213; 1394: 1397 XNUMX- [PubMed]
  • Volkow ND, O'Brien CP. ประเด็นสำหรับ DSM-V: โรคอ้วนควรรวมอยู่ในความผิดปกติของสมอง จิตเวช. 2007; 164: 708–710 [PubMed]
  • Wellman LL, Gale K, Malkova L. การยับยั้ง GABAA-mediated ของ amygdala basolateral บล็อกการลดค่าเงินรางวัลในลิง J Neurosci 2005; 25: 4577 4586- [PubMed]
  • Yach D, Stuckler D, Brownell KD ผลกระทบทางระบาดวิทยาและเศรษฐกิจของการระบาดทั่วโลกของโรคอ้วนและโรคเบาหวาน ชัยนาทเมธา 2006; 12: 62 66- [PubMed]