ตัวรับ ghrelin (GHS-R1A) คู่อริลดทอนคุณสมบัติการให้รางวัลของมอร์ฟีนและเพิ่มระดับ opioid เปปไทด์ในพื้นที่ที่ได้รับรางวัลในหนู (2015)

Eur Neuropsychopharmacol 2015 21 ตุลาคม. pii: S0924-977X (15) 00329-6 ดอย: 10.1016 / j.euroneuro.2015.10.004

Engel JA1, Nylander I2, Jerlhag E3.

นามธรรม

ฮอร์โมนในสมองเช่น ghrelin ได้รับการแนะนำให้มีบทบาทในการควบคุมการให้รางวัล Ghrelin เป็นที่รู้จักกันในอดีตที่จะควบคุมการรับประทานอาหารและ homoeostasis น้ำหนักตัว นอกจากนี้ผลงานล่าสุดยังชี้ให้เห็นว่าเปปไทด์นี้มีบทบาทใหม่ในการให้รางวัลยากระตุ้นรวมถึงการเพิ่มขึ้นของมอร์ฟีนในระดับ extracellular ของโดปามีนในหนู ในที่นี้มีการศึกษาผลของตัวรับ ghrelin (GHS-R1A), JMV2959, ต่อการกระตุ้นการทำงานของมอร์ฟีนที่เกิดจากมอร์ฟีนในโดปามีนในหนู นอกจากนี้ยังได้ทำการศึกษาผลของการบริหาร JMV2959 ต่อระดับเปปไทด์ opioid ในพื้นที่ที่เกี่ยวข้องกับการให้รางวัล ในชุดการทดลองปัจจุบันเราแสดงให้เห็นว่าการบริหาร JMV2959 ต่อพ่วงในขนาดที่ไม่มีผลกระทบต่อความสามารถในการลดความสามารถของมอร์ฟีนที่จะทำให้เกิดการกระตุ้นของหัวรถจักรเพิ่มระดับ extracellular ของโดปามีน accumbal และเพื่อกำหนดสภาพสถานที่ในหนู การบริหาร JMV2959 เพิ่มระดับเนื้อเยื่อของ Met-enkephalin-Arg อย่างมีนัยสำคัญ6เพ7 ในพื้นที่หน้าท้องส่วนล่าง, dynorphin B ใน hippocampus และ Leu-enkephalin-Arg6 ใน striatum ดังนั้นเราจึงตั้งสมมติฐานว่า JMV2959 ป้องกันไม่ให้รางวัลที่เกิดจากมอร์ฟีนผ่านการกระตุ้นของเปปไทด์ที่ใช้งานของเดลต้าในพื้นที่ striatum และ ventral tegmental นอกจากนี้เปปไทด์ hippocampal ที่เปิดใช้งานตัวรับคัปปาอาจเกี่ยวข้องกับความสามารถของ JMV2959 ในการควบคุมการก่อตัวของหน่วยความจำของรางวัล เนื่องจากการพัฒนาของการติดยาเสพติดขึ้นอยู่กับผลกระทบของยาเสพติดที่มีต่อระบบโดปามีนอย่าง mesolimbic อย่างน้อยข้อมูลส่วนนี้ชี้ให้เห็นว่า GHS-R1A คู่อริสมควรได้รับการอธิบายว่าเป็นกลยุทธ์การรักษาแบบใหม่ของการติดยาเสพติด opioid

 

 

 

 
   

นามธรรม

ฮอร์โมนในสมองเช่น ghrelin ได้รับการแนะนำให้มีบทบาทในการควบคุมการให้รางวัล Ghrelin เป็นที่รู้จักกันในอดีตที่จะควบคุมการรับประทานอาหารและ homoeostasis น้ำหนักตัว นอกจากนี้ผลงานล่าสุดยังชี้ให้เห็นว่าเปปไทด์นี้มีบทบาทใหม่ในการให้รางวัลยากระตุ้นรวมถึงการเพิ่มขึ้นของมอร์ฟีนในระดับ extracellular ของโดปามีนในหนู ในที่นี้มีการศึกษาผลของตัวรับ ghrelin (GHS-R1A), JMV2959, ต่อการกระตุ้นการทำงานของมอร์ฟีนที่เกิดจากมอร์ฟีนในโดปามีนในหนู นอกจากนี้ยังได้ทำการศึกษาผลของการบริหาร JMV2959 ต่อระดับเปปไทด์ opioid ในพื้นที่ที่เกี่ยวข้องกับการให้รางวัล ในชุดการทดลองปัจจุบันเราแสดงให้เห็นว่าการบริหารต่อพ่วง JMV2959 ในขนาดที่ไม่มีผลกระทบ ต่อ seลดทอนความสามารถของมอร์ฟีนในการกระตุ้นหัวรถจักรเพิ่มระดับ extracellular ของโดปามีน accumbal และทำให้สภาพเป็นที่นิยมในหนู การบริหาร JMV2959 เพิ่มระดับเนื้อเยื่อของ Met-enkephalin-Arg อย่างมีนัยสำคัญ6เพ7 ในพื้นที่หน้าท้องส่วนล่าง, dynorphin B ใน hippocampus และ Leu-enkephalin-Arg6 ใน striatum ดังนั้นเราจึงตั้งสมมติฐานว่า JMV2959 ป้องกันรางวัลที่เกิดจากมอร์ฟีน ผ่านทาง การกระตุ้นของเปปไทด์ที่ใช้งานตัวรับเดลต้าในพื้นที่ striatum และ ventral tegmental นอกจากนี้เปปไทด์ hippocampal ที่เปิดใช้งานตัวรับคัปปาอาจเกี่ยวข้องกับความสามารถของ JMV2959 ในการควบคุมการก่อตัวของหน่วยความจำของรางวัล เนื่องจากการพัฒนาของการติดยาเสพติดขึ้นอยู่กับผลกระทบของยาเสพติดที่มีต่อระบบโดปามีนอย่าง mesolimbic อย่างน้อยข้อมูลส่วนนี้ชี้ให้เห็นว่า GHS-R1A คู่อริสมควรได้รับการอธิบายว่าเป็นกลยุทธ์การรักษาแบบใหม่ของการติดยาเสพติด opioid

 

 

 

 

1. บทนำ

การสัมผัสกับยาเสพติดแบบเฉียบพลันและเรื้อรังส่งผลกระทบอย่างลึกซึ้งต่อระบบโดปามีน mesolimbic ซึ่งเป็นวงจรสำคัญที่สำคัญของระบบการให้รางวัลสมอง (Nestler, 2005) ผลกระทบเหล่านี้ได้รับการเสนอเพื่อรองรับส่วนหนึ่งของการพัฒนาของการติดยาเสพติด (Wise, 2004) การติดยาทำให้เกิดผลกระทบที่เป็นอันตรายต่อบุคคลเช่นเดียวกับสังคมและการแทรกแซงทางเภสัชวิทยาใหม่ ๆ การรักษาปัญหาสาธารณสุขที่สำคัญนี้ได้รับการรับประกัน (Koob and Le Moal, 2001) โดยการทำให้ชัดเจนถึงระบบการส่งสัญญาณที่เป็นสื่อกลางถึงความสามารถของยาเสพติดเพื่อเปิดใช้งานระบบโดปามีน mesolimbic ทำให้สามารถระบุกลยุทธ์การรักษาเฉพาะสำหรับความผิดปกติในการใช้สารเสพติด

การวิจัยได้แสดงให้เห็นว่ากลไก neurobiological ทั่วไปควบคุมการบริโภคและรางวัลที่เกิดจากอาหารและยาเสพติด (Morganstern et al., 2011) เสนอว่าบทบาทของเปปไทด์ลำไส้กระเพาะอาหารและสมองกฎระเบียบเช่น ghrelin รวมถึงการให้รางวัลไกล่เกลี่ย เริ่มแรกพบว่า ghrelin ทำให้เกิดการปล่อยฮอร์โมนการเจริญเติบโต (Kojima et al., 1999) และก่อให้เกิดความอ้วนในหนู (Tschop et al., 2000) ในวันที่เป็นที่รู้จักกันดีว่า ghrelin เพิ่มการรับประทานอาหารความหิวและกระตุ้นความอยากอาหาร ผ่านทาง วงจร hypothalamic (สำหรับการทบทวนโปรดดู Egecioglu et al. (2011)) นอกจาก hypothalamus แล้ว ghrelin receptors (GHS-R1A) ยังแสดงในส่วนที่เกี่ยวข้องกับรางวัลเช่น amygdala, striatum, prefrontal cortex, ventral tegmental area (VTA) และ hippocampus (สำหรับการตรวจสอบใน Engel และ Jerlhag (2014)) ซึ่งหมายความว่า บทบาททางสรีรวิทยาของ ghrelin ขยายไปไกลกว่าการควบคุม homoeostasis พลังงาน อันที่จริงแล้ว peptide ghrelin ของ orexigenic ถูกแสดงให้เห็นว่าเป็นตัวกระตุ้นของระบบ mesolimbic dopamine รวมทั้งเป็นผู้ควบคุมการให้รางวัลแรงจูงใจและการดื่มแอลกอฮอล์นิโคตินแอมเฟตามีนและโคเคนในหนู (สำหรับการทบทวนโปรดดู Engel และ Jerlhag (2014))

Opioids เช่นเดียวกับยาเสพติดอื่น ๆ เปิดใช้งานระบบโดปามีน mesolimbic ทำให้เกิดการปล่อยโดปามีน accumbal ผ่านทาง การกระตุ้นของตัวรับμ-และ / หรือ op-opioid ในนิวเคลียส accumbens (NAc) (Hirose et al., 2005, Murakawa et al., 2004, Yoshida et al., 1999) และใน VTA สันนิษฐานว่าลดลงโดย GABA - ยับยั้งโดปามีนเซลล์ประสาท (Johnson and North, 1992) นอกจากนี้ผู้รับ umb-opioid จะควบคุมกิจกรรมของระบบโดปามีน mesolimbic (Chefer et al., 2005, Spanagel et al., 1992) การได้รับสาร opioids ซ้ำ ๆ ทำให้เกิดการปรับเปลี่ยนของสารสื่อประสาทหลายชนิดรวมถึง opioid peptides ในพื้นที่ที่ให้รางวัลซึ่งนำไปสู่การพัฒนาของการเสพติด (De Vries และ Shippenberg, 2002) ในการปราบปรามทางเภสัชวิทยาของหนูของ GHS-R1A ลดการปล่อยโดปามีนมอร์ฟีนที่เกิดจากมอร์ฟีนรวมทั้งพฤติกรรม stereotypic (Sustkova-Fiserova et al., 2014) จุดประสงค์ของส่วนแรกของชุดการทดลองปัจจุบันคือเพื่อตรวจสอบผลเฉียบพลันของการเป็นปรปักษ์กับ GHS-R1A, JMV2959 ต่อความสามารถของมอร์ฟีนในการกระตุ้นการเคลื่อนไหวของหัวรถจักร จุดมุ่งหมายของส่วนที่สองของการศึกษานี้เพื่อประเมินผลของการใช้ JMV2959 ซ้ำหรือการรักษา ghrelin ต่อระดับ opioid peptide (Met-enkephalin-Arg6เพ7 (MEAP), dynorphin B (DynB) และ Leu-enkephalin-Arg6 (LeuArg)) ในส่วนที่เกี่ยวข้องกับการให้รางวัล ได้แก่ amygdala, striatum, prefrontal cortex, VTA และฮิบโป

 

 

2 ขั้นตอนการทดลอง

 

 

2.1 สัตว์

โพสต์ - pubertal จับคู่กับผู้ใหญ่หนูตัวเมีย NMRI (อายุ 8-12 สัปดาห์และน้ำหนักตัว 25-40 กรัม; Charles River, Sulzfeld, Germany) กล่าวโดยสรุปหนูทุกตัวถูกรวมตัวกันเป็นกลุ่มและดูแลรักษาที่ 12/12 ชั่วโมงแสง / ความมืดรอบ (ไฟเมื่อเจ็ดโมงเช้า) มีการจัดหาน้ำประปาและอาหาร (Chow ปกติ; Harlan Teklad, Norfolk, England) โฆษณาฟรี ยกเว้นในระหว่างการตั้งค่าการทดลอง หนูใหม่ถูกนำมาใช้สำหรับการทดสอบพฤติกรรมแต่ละเดียวเช่นเดียวกับการวิเคราะห์เปปไทด์ opioid การทดลองได้รับการอนุมัติจากคณะกรรมการจริยธรรมสวีเดนด้านการวิจัยสัตว์ในโกเธนเบิร์ก พยายามทุกวิถีทางเพื่อลดความทุกข์ทรมานจากสัตว์และลดจำนวนสัตว์ที่ใช้ สัตว์ทุกตัวได้รับอนุญาตให้ปรับสภาพอย่างน้อยหนึ่งสัปดาห์ก่อนเริ่มการทดลอง

 

 

2.2 ยาเสพติด

มอร์ฟีนไฮโดรคลอไรด์ (โรงพยาบาล Apoteksbolaget Sahlgrenska; โกเธนเบิร์ก, สวีเดน) ถูกละลายในยานพาหนะ (สารละลายโซเดียมคลอไรด์ 0.9%) และได้รับยาไอพีขนาด 20 มก. / กก. 10 นาทีก่อนเริ่มการทดลอง ขนาดนี้ถูกเลือกเนื่องจากขนาดที่ต่ำกว่า (10 มก. / กก., ip) ไม่ทำให้เกิดการเคลื่อนไหวของหัวรถจักรในหนูของเรา (ไม่แสดงข้อมูล) ขนาดที่เลือก (6 มก. / กก., ip) ของ JMV2959 (สังเคราะห์ที่ Institut des Biomolécules Max Mousseron (IBMM), UMR5247, CNRS, Montpellier 1 และ 2 มหาวิทยาลัย, ฝรั่งเศส), GHS-R1A ซึ่งเป็นตัวกำหนดก่อนหน้านี้ ไม่มีผลกระทบต่อกิจกรรมของหัวรถจักรการปล่อยโดปามีนแบบ accumbal และการเลือกสถานที่แบบมีเงื่อนไขในหนู (Jerlhag et al., 2009) JMV2959 ถูกละลายในยานพาหนะ (สารละลายโซเดียมคลอไรด์ 0.9%) และได้รับการจัดการตลอดยี่สิบนาทีก่อนที่จะมีการสัมผัสมอร์ฟีนหรือการสลายหัวสำหรับการวิเคราะห์ระดับ opioid เปปไทด์ ปริมาณที่เลือกของ JMV2959 ไม่ส่งผลกระทบต่อพฤติกรรมของหนูในการทดลองใด ๆ สำหรับการทดสอบพฤติกรรม JMV2959 ดำเนินการอย่างเข้มงวดตั้งแต่การศึกษาที่แพร่หลายของเราแสดงให้เห็นว่าการฉีดเพียงครั้งเดียวของ JMV2959 ลดทอนรางวัลยากระตุ้น (สำหรับรีวิวดู Engel และ Jerlhag (2014) JMV2959 ได้รับการย่อยแบบเรื้อรังเป็นเวลาห้าวันต่อมาสำหรับการวิเคราะห์ opioid peptide เพื่อเพิ่มความเป็นไปได้ในการตรวจจับผลที่มีประสิทธิภาพ นอกจากนี้ด้วยการฉีดซ้ำคุณหลีกเลี่ยงผลกระทบที่เป็นไปได้ของความเครียดจากการฉีดเฉียบพลันต่อเปปไทด์ Acylated rat ghrelin (Bionuclear; Bromma, Sweden) ถูกเจือจางในโซเดียมคลอไรด์ 0.9% และปริมาณ ghrelin ที่เลือก (0.33 mg / kg, ip) ก่อนหน้านี้แสดงให้เห็นว่าได้รับรางวัลในหนู (Jerlhag, 2008) การออกแบบที่สมดุลถูกนำมาใช้สำหรับความท้าทายยาเสพติดทั้งหมด

 

 

2.3 การทดลองกิจกรรมของหัวรถจักร

การศึกษาก่อนหน้านี้ได้แสดงให้เห็นว่ามอร์ฟีนทำให้เกิดการกระตุ้นในการเคลื่อนไหวของหนู (Wise and Bozarth, 1987) มีการลงทะเบียนกิจกรรมของ Locomotor ในกล่องเสียงที่ได้รับการลดทอนแปดช่องระบายความร้อนและแสงสลัว (420 × 420 × 200 มม., Kungsbacka mät- och reglerteknik AB; Fjärås, สวีเดน) ลำแสงตาแมวห้าถึงห้าแถวที่ระดับพื้นของกล่องการสร้างการตรวจจับตาแมวทำให้ระบบคอมพิวเตอร์ที่ใช้ในการลงทะเบียนการทำงานของหนู กิจกรรมของหัวรถจักรถูกกำหนดเป็นจำนวนตาแมวลำแสงใหม่ที่ถูกขัดจังหวะในช่วงระยะเวลา 60 นาที ในการทดลองทั้งหมดหนูจะได้รับอนุญาตให้คุ้นเคยกับกล่องกิจกรรมของหัวรถจักรหนึ่งชั่วโมงก่อนที่จะมีความท้าทายต่อยา ไม่มีความแตกต่างระหว่างการทำให้คุ้นเคยในกลุ่มการรักษาใด ๆ (ข้อมูลไม่แสดง)

ในการทดลองชุดแรกผลของ JMV2959 (6 มก. / กก., ip) ต่อการกระตุ้นมอร์ฟีนกระตุ้น (20 มก. / กก., ip) การเคลื่อนไหวของหัวรถจักร ยา JMV2959 ได้รับการจัดการ 20 นาทีก่อนมอร์ฟีนและการลงทะเบียนกิจกรรมเริ่มสิบนาทีหลังจากการฉีดครั้งสุดท้าย เมาส์แต่ละตัวได้รับการบำบัดหนึ่งครั้ง (ยานพาหนะ / ยานพาหนะ, JMV2959 / ยานพาหนะ, มอร์ฟีน / ยานพาหนะหรือ JMV2959 / มอร์ฟีน; n= 8 ต่อการรวมกันในการรักษา) และอยู่ภายใต้การทดลองทดลองเดียวเท่านั้น

 

 

2.4 การตั้งค่าสถานที่ที่มีเงื่อนไข

เพื่อประเมินผลของ JMV2959 ต่อผลตอบแทนของมอร์ฟีนในหนูใหม่ทำการทดสอบการตั้งค่าตามสถานที่แบบมีเงื่อนไขในหนูตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (Jerlhag, 2008) โดยย่อใช้เครื่องมือ CPP สองห้องที่มีไฟส่องสว่าง 45 lx และใช้ตัวชี้นำการมองเห็นและสัมผัสที่แตกต่างกัน ช่องหนึ่งถูกกำหนดโดยผนังลายสีดำและสีขาวและโดยพื้นลามิเนตที่มืดในขณะที่อื่น ๆ ที่มีพื้นไม้ทาสีขาวและผนังของพื้นผิวไม้ ขั้นตอนประกอบด้วยการปรับสภาพล่วงหน้า (วันที่ 1) การปรับสภาพ (วันที่ 2-5) และขั้นตอนการปรับอากาศ (วันที่ 6) ในการปรับสภาพล่วงหน้าหนูถูกฉีดยาไอพีกับยานพาหนะและวางไว้ในห้องที่สามารถเข้าถึงช่องทั้งสองได้อย่างอิสระในช่วง 20 นาทีเพื่อกำหนดสถานที่เริ่มต้น (หรือด้านข้าง) การปรับสภาพ (20 นาทีต่อการใช้งาน) ทำโดยใช้กระบวนการที่มีอคติซึ่งมอร์ฟีน (20 มก. / กก.) ถูกจับคู่กับช่องที่ต้องการและยานพาหนะที่มีช่องว่างที่ต้องการน้อยที่สุด หนูทุกคนได้รับการฉีดมอร์ฟีนหนึ่งครั้งและยานพาหนะทุกวันและการฉีดจะถูกเปลี่ยนระหว่างเช้าและบ่ายในการออกแบบที่สมดุล ที่โพสต์ปรับอากาศหนู (n= 16) ถูกฉีดด้วย JMV2959 (6 มก. / กก., ip) หรือปริมาตรที่เท่ากันของน้ำยาสำหรับรถยนต์และ 20 นาทีต่อมาวางบนกึ่งกลางระหว่างสองช่องพร้อมช่องฟรีทั้งสองช่องเป็นเวลา 20 นาที (สร้างกลุ่มการรักษาต่อไปนี้ Morph-Veh และ Morph-JMV2959)

การกำหนดสถานที่ตามเงื่อนไขถูกคำนวณเนื่องจากความแตกต่างใน% ของเวลาทั้งหมดที่ใช้ในคู่ยากล่าวคือ. ช่องที่ต้องการน้อยที่สุด) ระหว่างการโพสต์ปรับอากาศและเซสชั่นก่อนการปรับอากาศ

2.5. ในร่างกาย microdialysis และ dopamine ปล่อยการวัด

เนื่องจาก JMV2959 ลดการกระตุ้นมอร์ฟีนจากการชักนำให้เกิดการเคลื่อนไหวของมอร์ฟีนและการกำหนดสถานที่แบบมีเงื่อนไขในหนู, ผลของ JMV2959 (6 มก. / กก., ip) ต่อการปลดปล่อยโดปามีนมอร์ฟีน (20 มก. / กก., ip) ในร่างกาย microdialysis ในหนูที่เคลื่อนไหวได้อย่างอิสระ สำหรับการตรวจวัดระดับโดปามีนนอกเซลล์หนูถูกฝังข้างเดียวด้วยหัววัดแบบ microdialysis ที่อยู่ในนิวเคลียส accumbens ดังนั้นหนูจึงได้รับการดมยาสลบด้วย isofluran (Isofluran Baxter; Univentor 400 Anesthesia Unit, Univentor Ldt., Zejtun, Malta) วางอยู่ในกรอบ stereotaxic (David Kopf Instruments; Tujunga, CA, USA) และเก็บไว้ในแผ่นความร้อนเพื่อป้องกัน อุณหภูมิ Xylocain adrenalin (5 μg / ml; Pfizer Inic; New York, USA) ใช้เป็นยาชาเฉพาะที่และ carprofen (Rimadyl, 5 mg / kg ip) (Astra Zeneca; Gothenburg, Sweden) ถูกนำมาใช้เพื่อบรรเทาอาการปวดที่อาจเกิดขึ้น กระดูกกะโหลกศีรษะถูกเปิดออกและมีรูหนึ่งรูสำหรับการสอบสวนและอีกอันสำหรับสกรูยึดถูกเจาะ การสอบสวนถูกสุ่มสลับไปทางด้านซ้ายหรือด้านขวาของสมอง พิกัด 1.5 มม. ล่วงหน้าไปจนถึง bregma, ± 0.7 ด้านข้างถึงกึ่งกลางและ 4.7 มม. ใต้พื้นผิวสมองใช้สำหรับนิวเคลียส accumbens (Franklin และ Paxinos, 1997) ปลายที่สัมผัสของเยื่อฟอกไต (20,000 kDa ถูกตัดด้วย od / id 310/220 μm, HOSPAL, Gambro, Lund, สวีเดน) ของหัววัดที่ 1 มม. โพรบทั้งหมดได้รับการปลูกฝังการผ่าตัดสองวันก่อนการทดลอง หลังการผ่าตัดหนูจะถูกเก็บไว้ในกรงเดี่ยวจนกว่าจะถึงวันทดสอบ (Macrolon III)

ในวันทดสอบโพรบได้เชื่อมต่อกับปั๊มไมโครเพอร์ฟิวชั่น (U-864 Syringe Pump; AgnThós AB) และใช้สารละลาย Ringer ในอัตรา 1.5 μl / นาที หลังจากหนึ่งชั่วโมงของความเคยชินกับการตั้งค่า microdialysis เก็บตัวอย่างเลือดไปทุก ๆ 20 นาที ระดับโดพามีนพื้นฐานถูกกำหนดให้เป็นค่าเฉลี่ยของสามตัวอย่างติดต่อกันก่อนการท้าทายยา / ยานพาหนะครั้งแรกและการเพิ่มขึ้นของโดปามีน accumbal คำนวณเมื่อเปอร์เซ็นต์การเพิ่มขึ้นจากพื้นฐาน หลังจากตัวอย่างพื้นฐาน (−40 นาทีจนถึง 0 นาที) หนูถูกฉีดด้วย JMV2959 หรือยานพาหนะ (ที่ 0 นาที) ซึ่งตามด้วยมอร์ฟีนหรือฉีดยา (ที่ 20 นาที) จากการติดตามการใช้ยาเหล่านี้ได้เก็บตัวอย่างอีก 20 นาทีจำนวน XNUMX นาที กลุ่มการรักษาต่อไปนี้รวมกัน (n= 8 ในแต่ละกลุ่ม) ถูกสร้างขึ้น: ยานพาหนะ - ยานพาหนะ (Veh – Veh), ยานพาหนะ - มอร์ฟีน (Veh – Morph), JMV2959- ยานพาหนะ (JMV2959-Veh) และ JMV2959-morphine (JMV2959-Morph)

ระดับโดปามีนใน dialysates ถูกกำหนดโดย HPLC พร้อมการตรวจจับทางเคมีไฟฟ้า ปั๊ม (Gyncotec P580A; Kovalent AB; V. Frölunda, สวีเดน), คอลัมน์แลกเปลี่ยนไอออน (2.0 × 100 มม., อัจฉริยะ 3 μm SA; Skandinaviska GeneTec AB; Kungsbacka, สวีเดน) และเครื่องตรวจจับ (Antec Leyden; Zoeterwoude , เนเธอร์แลนด์) พร้อมกับเซลล์ไหล VT-03 (Antec Leyden) ถูกนำมาใช้ เฟสเคลื่อนที่ (pH 5.6) ประกอบด้วยกรด sulphonic 10 mM, กรดซิตริก 200 mM, โซเดียมซิเตรต 200 mM, 10% EDTA, 30% MeOH ถูกกรองสูญญากาศโดยใช้เมมเบรนกรอง 0.2 μm (GH Polypro; PALL Gelman ห้องปฏิบัติการ; ลุนด์, สวีเดน) เฟสเคลื่อนที่ถูกส่งที่อัตราการไหล 0.2 มล. / นาทีผ่าน degasser (Kovalent AB) และ analyte ถูกออกซิไดซ์ที่ +0.4 V.

หลังจากเสร็จสิ้นการทดลอง microdialysis หนูถูก decapitated และ probes ถูก perfused ด้วย pontamine ฟ้า 6BX เพื่ออำนวยความสะดวกการแปลโพรบ สมองถูกติดตั้งบนอุปกรณ์ vibroslice (752 M Vibroslice; Campden Instruments Ltd. , Loughborough, UK) และตัดส่วนที่ 50 μm ตำแหน่งของโพรบถูกกำหนดโดยการสังเกตรวมด้วยกล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสง ตรวจสอบตำแหน่งที่แน่นอนของโพรบแล้ว (Franklin และ Paxinos, 1997) และมีการใช้หนูที่มีตำแหน่งที่ถูกต้องเท่านั้นในการวิเคราะห์ทางสถิติ

 

 

2.6 การรักษาและการผ่า

การศึกษาผลกระทบของการรักษาด้วย JMV2959 ต่อระดับของ MEAP, DynB และ LeuArg ในด้านที่เกี่ยวข้องกับการให้รางวัล หนูถูกฉีดด้วย JMV2959 (6 mg / kg, ip, n= 8) หรือปริมาณรถยนต์ที่เท่ากัน (ip, n= 8) เป็นเวลาห้าวันต่อมา 20 นาทีหลังจากฉีดครั้งสุดท้ายหนูจะเสียสละและเก็บสมองจากหนูเหล่านี้ หนูแยกจากกันถูกฉีดด้วย ghrelin (0.33 mg / kg, ip, n= 8) หรือปริมาณรถยนต์ที่เท่ากัน (ip, n= 8) เป็นเวลาห้าวันต่อมา ห้านาทีหลังจากการฉีดครั้งสุดท้ายหนูจะเสียสละและสมองจากหนูเหล่านี้ถูกรวบรวม amygdala, striatum, prefrontal cortex, VTA และ hippocampus ถูกผ่าอย่างรวดเร็วและวางบนน้ำแข็งแห้งทันทีและเก็บไว้ที่อุณหภูมิ -80 ° C จนกว่าจะผ่านกระบวนการต่อไป

 

 

2.7 การวิเคราะห์ระดับเปปไทด์ Opioid

ขั้นตอนการสกัดแบบ homogenisation และเปปไทด์นั้นเป็นไปตามขั้นตอนมาตรฐานซึ่งได้อธิบายไว้ในรายละเอียดก่อนหน้านี้ (Nylander et al., 1997) ในระยะสั้นกรดอะซิติกร้อน (95 ° C) ถูกเพิ่มเข้าไปในตัวอย่างแช่แข็ง ตัวอย่างถูกทำให้ร้อนในอ่างน้ำ (1 ° C) เป็นเวลา 95 นาทีทำให้เย็นลงบนน้ำแข็งแล้วผสมกับ Branson Sonifier (Danbury, CT, USA) homogenate ถูก reheated ที่ 5 ° C เป็นเวลา 95 นาทีและเย็นลงบนน้ำแข็งก่อนที่จะหมุนเหวี่ยงเป็นเวลา 5 นาทีที่ 15 ° C และ 4 ×g ในเครื่องปั่นเหวี่ยง Beckman GS-15R (Fullerton, CA, USA) สารสกัดถูกทำให้บริสุทธิ์ต่อไปตามขั้นตอนที่อธิบายไว้ก่อนหน้า (Nylander et al., 1997) มีการรวบรวมสองส่วน: ส่วนที่สาม (Leu-Arg และ MEAP) และส่วนที่ V (DynB) ตัวอย่างถูกทำให้แห้งในเครื่องปั่นแยกสุญญากาศ (Savant SpeedVac Plus SC210A; Thermo Scientific Inc. , Waltham, MA USA) และเก็บไว้ในตู้แช่แข็ง (-20 ° C) จนกระทั่งการวิเคราะห์เปปไทด์

ระดับอิมมูโนเรทีฟ (ir) ของ DynB, LeuArg และ MEAP ได้รับการวิเคราะห์ด้วยเรดิโออิมมูโนมิเตอร์ที่ได้รับการยอมรับเป็นอย่างดีและมีการอธิบายโปรโตคอลในรายละเอียดที่อื่น ๆ (Nylander et al., 1997) ในการทดสอบ DynB แพะต่อต้านกระต่าย IgG (GARGG; Bachem, Bubendorf, สวิสเซอร์แลนด์) ถูกนำมาใช้เพื่อแยกเปปไทด์อิสระและแอนติบอดีที่ถูกผูกไว้ Antiserum Dyn (113+) ถูกใช้ในการเจือจางขั้นสุดท้ายที่ 1: 600000 การทำปฏิกิริยาข้ามกับ Dyn ขนาดใหญ่คือ 100% และด้วย DynB (1–29) 1% ไม่พบปฏิกิริยาข้ามกับเปปไทด์ opioid อื่น ๆ ในการทดสอบ LeuArg และ MEAP จะใช้การระงับถ่านเพื่อแยกเปปไทด์ที่มีอิสระและแอนติบอดี้ สำหรับ LeuArg antiserum (91: 6D +, การเจือจางสุดท้าย 1: 60000), ปฏิกิริยาครอสปฏิกิริยาน้อยกว่า 0.01% สำหรับ Leu-enkephalin และ MEAP, 0.02% สำหรับ DynB, 0.04% สำหรับ DynA, และ 0.08% สำหรับ alpha-neoendorphin MEAP antiserum 90: 3D (II) ถูกใช้ในการเจือจางครั้งสุดท้ายที่ 1: 160 000 ปฏิกิริยาข้ามกับ Met-enkephalin, Met-enkephalin-Arg6, เมท - เอนเคอฟาลิน - Arg6Gly7ลื้อ8, Leu-enkephalin และ Leu-enkephalin-Arg6 เป็น <0.1%

 

 

 

2.8 การวิเคราะห์ทางสถิติ

ข้อมูลกิจกรรมของหัวรถจักรได้รับการประเมินโดยการวิเคราะห์ความแปรปรวนแบบทางเดียวตามด้วยการทดสอบหลังทำ Bonferroni ข้อมูลการกำหนดค่าตามความชอบของเงื่อนไขถูกประเมินโดย unpaired t-ทดสอบ. การทดลอง microdialysis ประเมินโดยการวิเคราะห์ความแปรปรวนสองทางตามด้วย Bonferroni post-hoc test เพื่อเปรียบเทียบระหว่างการรักษาที่แตกต่างกันและโดยเฉพาะตามเวลาที่กำหนด วิเคราะห์ระดับเปปไทด์ด้วย unpaired t-ทดสอบ. ข้อมูลถูกนำเสนอเป็นค่าเฉลี่ย± SEM ค่าความน่าจะเป็น P<0.05 ถือว่ามีนัยสำคัญทางสถิติ

 

 

 

3 ผล

 

 

3.1 ผลของ JMV2959 ต่อการกระตุ้นของหัวรถจักรมอร์ฟีน, การปล่อยโดปามีนแบบ accumbal และการตั้งค่าตามที่กำหนดในหนู

พบว่าผลกระทบหลักของการรักษาโดยรวมต่อการเคลื่อนไหวของขมิ้นอ้อยในหนูหลังการบริหารระบบมอร์ฟีน (20 มก. / กก.) และ JMV2959 (6 มก. / กก.) (F (3,27) = 7.409, P= 0.0009; n= 8 สำหรับ Veh – Veh, JMV2959-Veh, JMV2959-Morph และ n= 7 สำหรับ Veh-Morph) ตามที่ปรากฏใน รูป 1A, การวิเคราะห์ทาง posthoc เปิดเผยว่าการรักษาก่อนด้วยการฉีดเพียงครั้งเดียวของ JMV2959 (P<0.001) ลดทอนอย่างมีนัยสำคัญของมอร์ฟีนที่กระตุ้นให้เกิดขมิ้นอ้อย (P<0.01 Veh - Veh vs Veh-Morph) ปริมาณที่เลือกของ JMV2959 ไม่มีผลต่อกิจกรรมของหัวรถจักรเมื่อเทียบกับการบำบัดด้วยยานพาหนะ (P> 0.05) ไม่มีความแตกต่างในการตอบสนองของขมิ้นอ้อยในหนูที่ได้รับการรักษาด้วยยานพาหนะและหนูที่ได้รับการรักษาด้วย JMV2959-morhpine (P> 0.05)

รูปที่ 1. เปิดภาพขนาดใหญ่  

รูป 1

ศัตรู GHS-R1A JMV2959 ลดการกระตุ้นจากการเคลื่อนไหวของมอร์ฟีนที่เกิดจากการเคลื่อนไหวของมอร์ฟีนการปล่อยโดปามีนตามธรรมชาติและการตั้งค่าในหนู (A) มอร์ฟีนกระตุ้น (20 มก. / กก. ip) การเคลื่อนไหวของหัวรถจักรถูกลดทอนโดยการฉีดเพียงครั้งเดียวของ JMV2959 (6 มก. / กก. ip) (n= 7-8 ในแต่ละกลุ่ม; **P<0.01, ***P<0.001 one-way ANOVA ตามด้วย Bonferroni post-hoc test) (B) การกำหนดเงื่อนไขที่เกิดจากมอร์ฟีน (20 มก. / กก. ip) (CPP) ถูกลดทอนลงโดยการฉีด JMV2959 (6 มก. / กก. ip) ในหนู (n= 8 ในแต่ละกลุ่ม *P<0.05, t-test ที่ไม่ได้จับคู่) (C) ก่อนอื่นเราแสดงให้เห็นถึงผลอย่างมีนัยสำคัญของมอร์ฟีน (20 มก. / กก.P<0.001), Veh - Veh vs Veh-Morph) ดังที่แสดงไว้ใน (C) การบำบัดล่วงหน้าด้วย JMV2959 (6 มก. / กก. ip) ทำให้มอร์ฟีนที่เกิดจากการเพิ่มขึ้นของการปล่อยโดปามีนเมื่อเปรียบเทียบกับการรักษาด้วยยานพาหนะล่วงหน้าในช่วงเวลา 40–100 และ 140–180 นาที (##P<0.01, # # #P <0.001, JMV2959-Morph เทียบกับ Veh – Morph treatment) ขนาดยาที่เลือกของ JMV2959 ไม่มีผลอย่างมีนัยสำคัญต่อการปลดปล่อยโดพามีนเมื่อเทียบกับการรักษาด้วยรถยนต์ในช่วงเวลาใด ๆ (P> 0.05, Veh - Veh vs JMV2959-Veh) JMV2959 ลดลง, แต่ไม่ได้ปิดกั้นอย่างสมบูรณ์, มอร์ฟีนกระตุ้นการหลั่งโดปามีน accumbal ในช่วงเวลา 60-140 (*)P<0.05, **P<0.01, ***P <0.001, JMV2959-Morph เทียบกับ Veh – Morph treatment) ลูกศรแสดงจุดเวลาของการฉีด JMV2959 ยานพาหนะและมอร์ฟีน วิเคราะห์ข้อมูลด้วย Two-way ANOVA ตามด้วย Bonferroni post-hoc test (n= 8 ในแต่ละกลุ่ม) Veh – พาหนะ (สแควร์), Veh – Morph (รูปสี่เหลี่ยม), JMV2959-Veh (สามเหลี่ยม), JMV2959-Morph (วงกลม) ค่าทั้งหมดแสดงถึงค่าเฉลี่ย± SEM

มอร์ฟีนที่เกิดขึ้น (20 มก. / กก.) (Morph-Veh) การตั้งค่าสถานที่ได้รับการลดทอนอย่างมีนัยสำคัญโดยการฉีดเดี่ยวเดียวของ JMV2959 (6 มก. / กก.) (Morph-JMV2959) ในวันหลังปรับอากาศ (P= 0.025, n= 8 ในแต่ละกลุ่ม; รูป 1B)

การตรวจวัดโดปามีนแบบ microdialysis ของหนูในหนูทดลองแสดงให้เห็นถึงผลกระทบหลักของการรักษาโดยรวม (F(3,33) = 24.15, P<0.0001), เวลา F(11,308) = 7.05, P<0.0001) และการรักษา×ปฏิสัมพันธ์เวลา (F(11,308) = 8.63, P<0.0001) (รูป 1C; n= 8 ในแต่ละกลุ่ม) มอร์ฟีนเพิ่มปริมาณการปลดปล่อยโดปามีนที่สัมพันธ์กับการรักษายานพาหนะในช่วงเวลา 40–180 นาที (P<0.001) ดังที่แสดงใน รูป 1C เอฟเฟกต์นี้จะลดลงเมื่อทำการรักษาด้วย JMV2959 ในช่วงเวลา 40–80 (P<0.01), 100 (P<0.001), 140 (P<0.01) และ 160–180 นาที (P<0.001) JMV2959 ลดลง แต่ไม่ได้ปิดกั้นอย่างสมบูรณ์มอร์ฟีนทำให้เกิดการปลดปล่อยโดพามีนแอคคัมบัลเนื่องจากมีความแตกต่างระหว่างการรักษาด้วยรถและการรักษาด้วยมอร์ฟีน JMV2959 ในช่วงเวลา 60–80 (P<0.01), 100 (P<0.001), 140 (P<0.01) และ 160 นาที (P<0.05) ขนาดยาที่เลือกของ JMV2959 ไม่มีผลอย่างมีนัยสำคัญต่อการปลดปล่อยโดพามีนเมื่อเทียบกับการรักษาด้วยรถยนต์ในช่วงเวลาใด ๆ (P> 0.05)

 

 

 

3.2 ผลของการใช้ JMV2959 หรือการรักษา ghrelin แบบเรื้อรังต่อระดับ opioid peptide

ระดับภูมิคุ้มกัน (ir) ของเปปไทด์ทั้งสามในพื้นที่สมองที่วัดสามารถพบได้ 1 ตาราง, 2 ตาราง. การรักษา JMV2959 แบบเรื้อรังช่วยเพิ่มระดับ MEAP ใน VTA, DynB ใน hippocampus และ LeuArg ใน striatum อย่างมีนัยสำคัญ (1 ตาราง) ไม่มีความแตกต่างในด้านอื่น ๆ ที่ตรวจสอบคือ amygdala และ prefrontal cortex การรักษา ghrelin ย่อยเรื้อรังไม่ได้เปลี่ยนระดับของ MEAP, DynB หรือ LeuArg อย่างมีนัยสำคัญ (2 ตาราง).

ตารางที่ 1 การรักษา JMV2959 แบบเรื้อรังช่วยเพิ่มระดับ ir ของ Met5- เอนเกภาลิน - คลัง6เพ7 (MEAP) ในพื้นที่หน้าท้อง (VTA) ระดับ ir ของ Dynorphin B (DynB) ในฮิบโปแคมปัส (HC) เช่นเดียวกับระดับ ir ของและ Leu-enkephalin-Arg6 (LeuArg) ใน striatum (STR) เมื่อเทียบกับการดูแลรถยนต์ ไม่มีความแตกต่างในการตรวจสอบพื้นที่อื่น ๆ ค่าทั้งหมดแสดงถึงค่าเฉลี่ย± SEM (amygdala (AMY) และเยื่อหุ้มสมองส่วนหน้า (PFC))
 เจเอ็มวี2959พาหนะp-ราคา
 ระดับ Ir MEAP
AMY14.52 3.91 ±15.61 4.37 ±0.838
STR43.47 5.54 ±47.60 7.94 ±0.754
ฉิบหาย3.61 0.90 ±2.94 0.41 ±0.450
VTA8.69 0.75 ±4.63 0.42 ±0.003
HC4.52 0.80 ±2.56 0.23 ±0.170
 ระดับ Ir DynB
AMY2.56 0.41 ±1.90 0.25 ±0.759
STR8.69 0.89 ±10.17 0.91 ±0.547
ฉิบหาย2.24 0.36 ±1.60 0.20 ±0.169
VTA8.89 0.55 ±5.98 0.21 ±0.079
HC3.70 0.41 ±2.36 0.19 ±0.042
 ระดับ Ir LeuArg
AMY13.46 1.69 ±11.07 1.45 ±0.270
STR14.50 0.89 ±12.12 0.93 ±0.046
ฉิบหาย11.21 1.32 ±10.80 1.44 ±0.776
VTA12.96 1.63 ±10.96 1.39 ±0.245
HC5.29 0.75 ±5.67 0.72 ±0.663
 
ตารางที่ 2 การรักษา ghrelin เรื้อรังไม่ได้เปลี่ยนระดับ ir ของ Met5- เอนเกภาลิน - คลัง6เพ7 (MEAP), dynorphin B (DynB) หรือ Leu-enkephalin-Arg6 (LeuArg) ในพื้นที่ใด ๆ ที่เกี่ยวข้องกับรางวัลที่ตรวจสอบ กล่าวคือ. ที่หน้าท้อง tegmental พื้นที่ (VTA), amygdala (AMY), striatum (STR), prefrontal cortex (PFC) และฮิบโปแคมปัส (HC) ค่าทั้งหมดแสดงถึงค่าเฉลี่ย± SEM
 ghrelinพาหนะp-ราคา
 ระดับ Ir MEAP
AMY12.00 3.91 ±15.46 3.02 ±0.517
STR43.59 7.24 ±61.15 12.46 ±0.176
ฉิบหาย3.75 0.46 ±3.17 0.64 ±0.550
VTA11.96 1.03 ±10.60 0.91 ±0.249
HC6.75 1.88 ±5.20 1.01 ±0.314
 ระดับ Ir DynB
AMY3.97 1.09 ±5.42 2.27 ±0.488
STR11.15 0.89 ±13.03 2.41 ±0.434
ฉิบหาย3.23 0.50 ±2.38 0.18 ±0.072
VTA5.11 0.15 ±8.25 1.59 ±0.070
HC4.32 0.87 ±3.19 0.29 ±0.095
 ระดับ Ir LeuArg
AMY9.67 1.53 ±9.47 1.29 ±0.928
STR8.69 0.87 ±8.87 0.44 ±0.875
ฉิบหาย4.61 0.47 ±4.47 0.39 ±0.921
VTA8.35 1.04 ±6.99 0.42 ±0.407
HC4.97 0.50 ±3.47 0.41 ±0.086
 

 

 

 

4 การสนทนา

การศึกษาครั้งนี้สนับสนุนสมมติฐานที่ว่าบทบาททางสรีรวิทยาของเปปไทด์ orexigenic รวมถึงการควบคุมการให้รางวัล อันที่จริงเราแสดงให้เห็นว่าการบริหารอุปกรณ์ต่อพ่วงของศัตรู GHS-R1A ลดความสามารถของมอร์ฟีนในการกระตุ้นให้เกิดการเคลื่อนไหวของหัวรถจักรเพิ่มระดับโดปามีนใน NAc และทำให้เกิดการตั้งค่าที่ถูกต้องในหนู นอกจากนี้เรายังพบว่า JMV2959 ย่อยเรื้อรัง แต่ไม่ใช่ ghrelin การรักษาเพิ่มระดับเนื้อเยื่อ ir ของ MEAP ใน VTA, DynB ใน hippocampus และ LeuArg ใน striatum ซึ่งเป็นหลักฐานแรกว่าความสามารถของ ghrelin peptides ในการควบคุมการเสริมแรงอาจเกี่ยวข้องกับ opioid peptides .

ข้อมูลที่นำเสนอในที่นี้แสดงให้เห็นว่าการเป็นปรปักษ์กัน GHS-R1A ส่งผลต่อความสามารถของมอร์ฟีนในการกระตุ้นระบบโดปามีน mesolimbic ในหนู ตามผลการวิจัยที่แสดงให้เห็นว่า JMV2959 ปิดกั้นความสามารถของมอร์ฟีนในการเพิ่มระดับแอคคัมบัลโดพามีนนอกเซลล์และทำให้เกิดพฤติกรรมตายตัวในหนู (Sustkova-Fiserova et al., 2014) ในเชิงสนับสนุนการบริหาร ghrelin ส่วนกลางจะช่วยเพิ่มจุดพัก แต่ไม่ใช่จำนวนของการกดคันโยกที่ใช้งานอยู่ในตารางการเสริมแรงอัตราส่วนก้าวหน้าในเฮโรอีนที่ให้นมด้วยตนเอง (Maric et al., 2012) ข้อโต้แย้งที่ว่าการส่งสัญญาณ ghrelin เกี่ยวข้องกับการติดยาได้รับการสนับสนุนเพิ่มเติมจากผลการวิจัยที่แสดงให้เห็นว่า JMV2959 ลดปริมาณการบริโภครวมทั้งแรงจูงใจในการบริโภคแอลกอฮอล์ในหนูและการให้รางวัลแอมเฟตามีนโคเคนและนิโคตินถูกขัดขวางโดยการต่อต้าน GHS-R1A ในสัตว์ฟันแทะ ( สำหรับการทบทวนโปรดดู Engel and Jerlhag (2014)) และความหลากหลายของยีนที่เกี่ยวข้องกับ ghrelin เกี่ยวข้องกับการดื่มแอลกอฮอล์การสูบบุหรี่และแอมเฟตามีน (สำหรับการทบทวนโปรดดู Engel and Jerlhag (2014))

การค้นพบในปัจจุบันที่มีระดับเพิ่มขึ้นของเปปไทด์ opioid ใน striatum, VTA และฮิบโปแคมปัสหลังจากการรักษา JMV2959 ย่อยเรื้อรังแนะนำเป็นครั้งแรกระหว่างการทำงานของเปปไทด์ opioid และการส่งสัญญาณ ghrelin opioids ภายนอกนั้นมีส่วนเกี่ยวข้องในการให้รางวัลผลกระทบไม่เพียง แต่เกิดจาก opioids เท่านั้น แต่ยังรวมถึงยาอื่น ๆ ที่ใช้ในทางที่ผิดและผลตอบแทนตามธรรมชาติและในกระบวนการปรับตัวที่เห็นหลังจากได้รับยาซ้ำ (Trigo et al., 2010, Van Ree et al., 2000) แน่นอนว่ากิจกรรมของระบบโดปามีน mesolimbic นั้นควบคุมโดย opioids ภายนอกที่ระดับ VTA และ NAc (Hirose et al., 2005, Spanagel et al., 1992) และการกระทำนั้นแสดงให้เห็นว่าโดยตรงหรือโดยอ้อม ผ่านการมอดูเลตของเครื่องส่งสัญญาณอื่น (Charbogne et al., 2014)

เราพบว่าในที่นี้การรักษา JMV2959 แบบย่อยเรื้อรังเพิ่มระดับ MEAP ใน VTA MEAP นั้นได้มาจาก proenkephalin และใช้เป็นเครื่องหมายของเปปไทด์ proenkephalin ซึ่งส่วนใหญ่เปิดใช้งานตัวรับ op-opioid เราตั้งสมมติฐานว่าการเพิ่มระดับของ MEAP ภายนอกใน VTA หลังจากการรักษา JMV2959 อาจป้องกันไม่ให้ความสามารถของมอร์ฟีนในการลดการยับยั้ง GABA ของเซลล์ประสาท mesoaccumbal dopamine (จอห์นสันและนอร์ท, 1992) ซึ่งอาจส่งผลให้ลดลง JMV2959 สนับสนุน GHS-R1A ตั้งอยู่ที่ GABAergic interneurons ใน VTA (Abizaid et al., 2006) นอกจากนี้จากการศึกษาก่อนหน้านี้ได้แสดงให้เห็นว่าการฉีดยาเข้าเส้นเลือด VTA ของ JMV2959 ผ่านทาง กลไกที่ไม่รู้จักลดทอนรางวัลที่เกิดจาก ghrelin (Jerlhag et al., 2011) เช่นเดียวกับการบริโภคซูโครส ghrelin-mediated ในสัตว์ฟันแทะ (Skibicka et al., 2011) แนะนำว่าหน้าท้องด้านล่างระดับ GHS-R1A ในการสนับสนุนการโต้แย้งดังกล่าวมีการค้นพบแสดงให้เห็นว่าเปปไทด์ที่ควบคุมความหิวอื่น ๆ เช่นกาลานินและโอรินหรือเม็กซิกันเป็นตัวกลางไกล่เกลี่ยคุณสมบัติของรางวัลมอร์ฟีน ผ่านทาง กลไกท้องถิ่นภายใน VTA (Narita et al., 2006, Richardson และ Aston-Jones, 2012)

ใน striatum เราพบว่า JMV2959 ย่อยแบบเรื้อรังเพิ่มระดับ ir ของ LeuArg ซึ่งแสดงให้เห็นว่าความสามารถของ JMV2959 ในการลดทอนการตั้งค่าสถานที่ปรับอากาศแบบมอร์ฟีนที่เกิดขึ้นการปล่อยโดปามีนและการกระตุ้นด้วย locomotor เพิ่มขึ้นอย่างน้อยส่วนหนึ่ง กิจกรรม opioid ตัวรับ ระดับ LeuArg ที่เพิ่มขึ้นอาจเป็นผลมาจากการเพิ่มการแปลงเอนไซม์ของเปปไทด์ dynorphin เป็น enkephalins หรือจากการปลดปล่อย Dyn ที่เพิ่มขึ้นใน NAc เพื่อตอบสนองต่อโดปามีนที่เพิ่มขึ้นตามด้วยการย่อยสลายเป็น LeuArg แม้ว่าการศึกษาก่อนหน้านี้ได้แสดงให้เห็นว่ากิจกรรมของระบบโดปามีน mesolimbic ถูกควบคุม ผ่านทาง op-opioid receptor ใน NAc (Spanagel et al., 1992) และ endogenous κ-opioid receptors ไม่ได้ให้สารยับยั้งโทนิคของโดปามีนในเยื่อหุ้มเซลล์ mesoaccumbal และลดการปล่อยโคปาเด็นใน NAc (Chefer et al., 2005) แสดงว่า JMV2959 เปลี่ยนระดับ ir DynB ใน striatum ดังนั้นจึงมีการศึกษาเพิ่มเติมเกี่ยวกับ prodynorphin peptides เพื่ออธิบายการมีปฏิสัมพันธ์ระหว่าง GHS-R1A antagonism และ dynorphins

ในการศึกษาครั้งนี้เรายังแสดงให้เห็นว่าการรักษา JMV2959 ช่วยเพิ่มระดับ hippocampal DynB อย่างมีนัยสำคัญ Ghrelin เพิ่มการรวมหน่วยความจำเช่นเดียวกับการสร้างกระดูกสันหลัง dendritic สร้าง potentiation ระยะยาวและก่อให้เกิดการอำนวยความสะดวกหน่วยความจำ ผ่านทาง hippocampal GHS-R1A เป็นหนู (Carlini และคณะ, 2010, Diano et al., 2006) นอกจากนี้ GHS-R1A หนูที่น่าพิศวงแสดงความจำเชิงพื้นที่ที่ดีขึ้นในการทดสอบเขาวงกตน้ำมอร์ริสและหน่วยความจำตามบริบทที่กระจัดกระจายในกระบวนทัศน์ความหวาดกลัวเมื่อเทียบกับหนูป่าชนิด (Albarran-Zeckler et al., 2012) เปปไทด์ Dynorphin รวมถึง DynB มีมากมายในฮิปโปแคมปัสและลดทอนความสามารถในระยะยาว (Chavkin et al., 1985, Wagner et al., 1993) เช่นเดียวกับการเรียนรู้เชิงพื้นที่ในหนู (Sandin et al., 1998) ดังนั้นเราจึงตั้งสมมติฐานว่าศัตรู GHR-R1A อาจลดทอนความทรงจำของรางวัลโดยการยับยั้ง potentiation hippocampal ระยะยาว ผ่านทาง ยืนยันการใช้งาน DynB รวมข้อมูลเหล่านี้ให้กลไกที่มีศักยภาพใหม่ที่ JMV2959 ผ่านทาง opioid เปปไทด์อาจเปลี่ยนการเสริมแรง อย่างไรก็ตามตัวรับ opioid มีการกระจายอย่างกว้างขวางในสมองชี้ให้เห็นว่าพื้นที่อื่น ๆ ที่ไม่รวมอยู่ในการศึกษาปัจจุบันอาจมีส่วนร่วมในการได้รับรางวัลมอร์ฟีนที่ควบคุมโดย GHS-R1A ตัวอย่างเช่นการรับประทานอาหารที่เกิดจาก ghrelin รวมถึงการกดคานสำหรับน้ำตาลซูโครสจะลดลงโดยการบริหารส่วนกลางหรือภายในมลรัฐของคู่อริตัวรับ op-opioid (Romero-Pico et al., 2013) อย่างไรก็ตามบทบาทของเพปไทด์ opioid ในพื้นที่อื่น ๆ จะต้องมีการชี้แจงในการศึกษาที่จะเกิดขึ้น

ลิแกนด์ภายนอกμ-receptor, endomorphins และ beta-endorphin ไม่ได้ถูกวิเคราะห์ในที่นี้ดังนั้นเราจึงไม่สามารถแยกแยะผลกระทบที่เป็นไปได้ของ JMV2959 ต่อเปปไทด์เหล่านี้ แท้จริงแล้วคุณสมบัติที่ให้ผลตอบแทนของมอร์ฟีนนั้นมีตัวรับμ-opioid ใน VTA เช่นเดียวกับ NAc (Hirose et al., 2005, Johnson และ North, 1992, Murakawa et al., 2004, Yoshida et al., 1999) อย่างไรก็ตามตัวรับμ-receptor ไม่ได้ลดการบริโภคอาหารที่ทำให้เกิด ghrelin (Naleid et al., 2005) หรือการกระตุ้นด้วยการเคลื่อนที่ของ ghrelin และการปล่อยโดปามีน ghrelin (Jerlhag et al., 2011) แสดงถึงความสามารถของ GHSR- 1A คู่อริเพื่อควบคุมการเสริมกำลังไม่รวมตัวรับμ ในทางตรงกันข้าม JMV2959 มีผลต่อเปปไทด์ opioid ที่ได้จาก proenkephalin และ prodynorphin แสดงให้เห็นว่าพวกเขาอาจมีส่วนร่วมในผลกระทบที่เกิดจากศัตรู GHSR-1A

ในขณะที่การศึกษาก่อนหน้าแสดงให้เห็นว่าการบริหาร ghrelin ระบบทำให้รางวัล (Jerlhag, 2008) เช่นเดียวกับการเพิ่มคุณสมบัติการให้รางวัลของยาเสพติด (สำหรับการตรวจสอบดู Engel และ Jerlhag (2014)) เราที่นี่แสดงให้เห็นว่า ระดับของเนื้อเยื่อ ir ของเปปไทด์ opioids ในพื้นที่ที่เกี่ยวข้องกับการให้รางวัล การบริหาร ghrelin ในร่างกายแสดงการแสดงออกของ c-fos ในพื้นที่ hypothalamic แต่ไม่ใช่ใน mesolimbic และพื้นที่ hippocampal (Pirnik et al., 2011) และการเชื่อมโยงของ ghrelin ที่มีการเรืองแสงถูก จำกัด อยู่ที่เซลล์ควบคุมด้านอาหารของมลรัฐ hypothalamus (Schaeffer et al., 2013 ) เมื่อนำมารวมกับการค้นพบแสดงให้เห็นว่า ghrelin ที่ถูกแยกออกจากจำนวนรอยในมลรัฐนั้นไม่สามารถตรวจพบในพื้นที่สมองที่ลึกกว่านี้หลังจากการบริหาร ghrelin รอบนอก (Furness et al., 2011, Grouselle et al., 2008, Sakata et al., 2009 ) เพิ่มความเป็นไปได้ที่ระบบ ghrelin เปิดใช้งานระบบการให้รางวัล ผ่านทาง กลไกทางอ้อมเป็นอิสระจาก opioids ภายนอก การสนับสนุนโดปามีนที่เกิดจาก ghrelin ต้องใช้การส่งสัญญาณ hypothalamic ต้นกำเนิด orexigenic (Cone et al., 2014), การบริหาร ghrelin ต่อพ่วงไม่เปลี่ยนปริมาณแอลกอฮอล์ในหนู (Lyons et al., 2008) และการวางตัวเป็นกลางของ ghrelin ไม่ทำให้แอลกอฮอล์ลดลง - รางวัลที่ได้รับจากการบริโภคหนูหรือแอลกอฮอล์ในหนู (Jerlhag et al., in press) ความเป็นไปได้ที่การจัดการย่อยเรื้อรังของ ghrelin เพิ่มระดับของเนื้อเยื่อ ir ของเพปไทด์ opioids ควรได้รับการพิจารณา

ความสามารถของยาเสพติดที่จะทำให้เกิดการกระตุ้น, การปล่อยโดปามีนและการกำหนดสถานที่ที่มีเงื่อนไขนั้นมีความสัมพันธ์อย่างใกล้ชิดกับคุณสมบัติการเสริมแรงของยาเสพติดและพารามิเตอร์เหล่านี้ถือเป็นส่วนหนึ่งของกระบวนการติดยาเสพติด (Wise, 2004) เมื่อพิจารณาจากที่นี่เราพบว่า JMV2959 ลดทอนพารามิเตอร์การให้รางวัลเหล่านี้ในหนูเราตั้งสมมติฐานว่า GHS-R1A อาจมีบทบาทสำคัญในกระบวนการติดยาเสพติดและ opioids ที่เกี่ยวข้องกับกระบวนการเหล่านี้ ข้อมูลเหล่านี้รวมกันบ่งชี้ว่าคู่อริของ GHS-R1A ควรได้รับการอธิบายว่าเป็นการรักษาผู้ติดยาเสพติด

บทบาทของแหล่งเงินทุน

JE และ EJ ได้รับการสนับสนุนโดยทุนสนับสนุนจากสภาวิจัยแห่งสวีเดน (หมายเลขที่อนุญาต 2011-4646, 2009-2782 และ 2011-4819), มูลนิธิสมองของสวีเดน, LUA / ALF (หมายเลขอนุญาต 148251) จากโรงพยาบาลมหาวิทยาลัย Sahlgrenska แอลกอฮอล์ สภาวิจัยการผูกขาดการค้าปลีกเครื่องดื่มแอลกอฮอล์แห่งสวีเดนและรากฐานของ Adlerbertska, Fredrik และ Ingrid Thuring, Tore Nilsson, Längmanska, Torsten และ Ragnar Söderberg, วิลเฮล์มและ Martina Lundgren, NovoNordisk, Knut และ Alice Wallenberg, Magnus Bergvall, Anérskekeke สมาคมการแพทย์แห่งสวีเดนสมาคมเพื่อการวิจัยทางการแพทย์แห่งสวีเดนและมูลนิธิวิจัยจิตเวชโกเธนเบิร์ก สภาวิจัยเครื่องดื่มแอลกอฮอล์แห่งสวีเดนผูกขาดการค้าปลีกและสภาวิจัยสวีเดน (K2012-61X-22090-01-3) สนับสนุน แหล่งเงินทุนไม่มีบทบาทในการออกแบบการศึกษาในการรวบรวมการวิเคราะห์และการตีความของข้อมูลในการเขียนรายงานและในการตัดสินใจที่จะเผยแพร่ข้อมูล

 

 

 

ร่วมให้ข้อมูล

JAE ออกแบบการศึกษาและเขียนต้นฉบับ IN ดำเนินการส่วนหนึ่งของมือในการทำงานวิเคราะห์ข้อมูลเขียนต้นฉบับ EJ ออกแบบการศึกษาเขียนโปรโตคอลจัดการการค้นหาวรรณกรรมวิเคราะห์และรับการวิเคราะห์ทางสถิติและเขียนร่างแรกของต้นฉบับ ผู้เขียนทั้งหมดมีส่วนร่วมและได้รับการอนุมัติต้นฉบับสุดท้าย

 

 

 

 

ขัดผลประโยชน์

EJ ได้รับการสนับสนุนทางการเงินจาก Novo Nordisk Foundation สิ่งนี้ไม่ได้เปลี่ยนแปลงนโยบายของวารสารในการแบ่งปันข้อมูลและวัสดุ ผู้เขียนที่เหลือประกาศว่าไม่มีความขัดแย้งทางผลประโยชน์

 

 

กิตติกรรมประกาศ

Britt-Mari Larsson, Kenn Johannessen, Qin Zhou และ Lova Segerströmได้รับการยอมรับอย่างสุดซึ้งสำหรับผู้เชี่ยวชาญและความช่วยเหลือด้านเทคนิคที่มีค่า ศัตรู GHS-R1A JMV2959 จัดหาโดยÆterna Zentaris ศาสตราจารย์ Jean Martinez และ Dr. Jean-Alain Fehrentz ได้รับการยอมรับสำหรับการสังเคราะห์ JMV2959

 

อ้างอิง

  1. Abizaid, A. , Liu, ZW, Andrews, ZB, Shanabrough, M. , Borok, E. , Elsworth, JD, Roth, RH, Sleeman, MW, Picciotto, MR, Tschop, MH, Gao, XB และ Horvath TL Ghrelin ปรับกิจกรรมและการป้อนข้อมูล synaptic ของเซลล์ประสาทส่วนกลางสมองโดปามีนขณะที่ส่งเสริมความอยากอาหาร เจ. คลีนิก Investig 2006 116: 3229–3239
  2. Albarran-Zeckler, RG, Brantley, AF, และ Smith, RG ตัวรับฮอร์โมนหลั่งฮอร์โมนการเจริญเติบโต (GHS-R1a) หนูที่น่าพิศวงแสดงการปรับปรุงหน่วยความจำเชิงพื้นที่และการขาดดุลในหน่วยความจำตามบริบท Behav ความต้านทานของสมอง 2012; 232: 13–19
  3. ดูในบทความ 
  4. ดูในบทความ 
  5. ดูในบทความ 
  6. ดูในบทความ 
  7. ดูในบทความ 
  8. ดูในบทความ 
  9. ดูในบทความ 
  10. ดูในบทความ 
  11. ดูในบทความ 
  12. ดูในบทความ 
  13. ดูในบทความ 
  14. ดูในบทความ 
  15. ดูในบทความ 
  16. ดูในบทความ 
  17. ดูในบทความ 
  18. ดูในบทความ 
  19. ดูในบทความ 
  20. ดูในบทความ 
  21. ดูในบทความ 
  22. ดูในบทความ 
  23. ดูในบทความ 
  24. ดูในบทความ 
  25. ดูในบทความ 
  26. ดูในบทความ 
  27. ดูในบทความ 
  28. ดูในบทความ 
  29. ดูในบทความ 
  30. ดูในบทความ 
  31. ดูในบทความ 
  32. ดูในบทความ 
  33. ดูในบทความ 
  34. ดูในบทความ 
  35. ดูในบทความ 
  36. ดูในบทความ 
  37. ดูในบทความ 
  38. ดูในบทความ 
  39. ดูในบทความ 
  40. ดูในบทความ 
  41. ดูในบทความ 
  42. ดูในบทความ 
  43. ดูในบทความ 
  44. ดูในบทความ 
  45. ดูในบทความ 
  46. ดูในบทความ 
  47. ดูในบทความ 
  48. Carlini, รองประธาน, Perez, MF, Salde, E. , Schioth, HB, Ramirez, OA และ de Barioglio, SR การอำนวยความสะดวกในการชักนำให้เกิดหน่วยความจำของ Ghrelin เกี่ยวข้องกับการกระตุ้นการทำงานของไนตริกออกไซด์และการลดลงของเกณฑ์เพื่อส่งเสริม LTP ใน gyps ฮิพโพแคมปัส Physiol Behav 2010 101: 117–123
  49. Charbogne, P. , Kieffer, BL และ Befort, K. วิธีการทางพันธุกรรมในร่างกายสำหรับการวิจัยติดยา 15 ปี: ตัวรับ Opioid และการทำให้ล้มลงของยีนเปปไทด์ในรูปแบบของการใช้ยา Neuropharmacology 2014; 76: 204–217
  50. Chavkin, C. , Shoemaker, WJ, McGinty, JF, Bayon, A. และ Bloom, FE การศึกษาลักษณะเฉพาะของ prodynorphin และ proenkephalin neuropeptide system ในหนูหนูฮิปโปแคมปัส .. J. Neurosci 1985; 5: 808–816
  51. Chefer, VI, Czyzyk, T. , Bolan, EA, Moron, J. , Pintar, JE และ Shippenberg, TS ระบบรับภายนอกคัปปา - opioid ควบคุมพลวัตโดปามีน mesoaccumbal และความอ่อนแอต่อโคเคน J. Neurosci 2005 25: 5029–5037
  52. กรวย, JJ, McCutcheon, JE และ Roitman, MF Ghrelin ทำหน้าที่เป็นตัวเชื่อมระหว่างสถานะทางสรีรวิทยาและการส่งสัญญาณ dopamine phasic J. Neurosci 2014; 34: 4905–4913
  53. De Vries, TJ และ Shippenberg, TS ระบบประสาทพื้นฐานการติดยาเสพติด J. Neurosci ปี 2002 22: 3321–3325
  54. Diano, S. , Farr, SA, เบอนัวต์, SC, McNay, EC, da Silva, I. , Horvath, B. , Gaskin, FS, Nonaka, N. , Jaeger, LB, ธนาคาร, WA, Morley, JE, Pinto , S. , Sherwin, RS, Xu, L. , Yamada, KA, Sleeman, MW, Tschop, MH, และ Horvath, TL Ghrelin ควบคุมความหนาแน่นของ synapse ของกระดูกสันหลังและประสิทธิภาพของหน่วยความจำ ชัยนาท Neurosci 2006 9: 381–388
  55. Egecioglu, E. , Skibicka, KP, Hansson, C. , Alvarez-Crespo, M. , Friberg, PA, Jerlhag, E. , Engel, JA และ Dickson, SL สัญญาณ Hedonic และ Incentive สำหรับการควบคุมน้ำหนักของร่างกาย รายได้ Endocr Metab Disord ปี 2011 12: 141–151
  56. Engel, JA และ Jerlhag, E. บทบาทของฮอร์โมนในสมองในพยาธิสรีรวิทยาของโรคพิษสุราเรื้อรัง: ผลกระทบต่อเภสัชบำบัด ระบบประสาทส่วนกลางของยาเสพติด 2014; 28: 875–886
  57. Franklin, KBJ และ Paxinos, G. สมองของหนูในพิกัด stereotaxic นักวิชาการสื่อมวลชนซานดิเอโก; 1997
  58. Furness, JB, Hunne, B. , Matsuda, N. , Yin, L. , Russo, D. , Kato, I. , Fujimiya, M. , Patterson, M. , McLeod, J. , Andrews, ZB และ Bron , R. การตรวจสอบการปรากฏตัวของ ghrelin ในระบบประสาทส่วนกลางของหนูและหนู ประสาท ปี 2011 193: 1–9
  59. Grouselle, D. , Chaillou, E. , Caraty, A. , Bluet-Pajot, MT, Zizzari, P. , Tillet, Y. และ Epelbaum, J. Pulsatile cerebrospinal fluid และพลาสมา ghrelin สัมพันธ์กับการหลั่งฮอร์โมนการเจริญเติบโตและการรับประทานอาหารในแกะ J. Neuroendocrinol 2008 20: 1138–1146
  60. Hirose, N. , Murakawa, K. , Takada, K. , Oi, Y. , Suzuki, T. , Nagase, H. , Cools, AR, และ Koshikawa, N. ปฏิสัมพันธ์ระหว่างตัวรับ mu- และ delta-opioid โดยเฉพาะ putative delta1- และตัวรับ delta2-opioid ส่งเสริมการปล่อยโดปามีนในนิวเคลียส accumbens ประสาท 2005 135: 213–225
  61. เจอร์ลาก, อี. การบริหารระบบของ ghrelin ทำให้เกิดความพึงพอใจต่อสถานที่ปรับอากาศและกระตุ้นโดปามีน accumbal ผู้เสพติด Biol 2008 13: 358–363
  62. Jerlhag, E. , Egecioglu, E. , Dickson, SL และ Engel, JA การควบคุมกลูตามาเทอจิคของการกระตุ้น ghrelin ที่เกิดจากระบบโดปามีน mesolimbic ผู้เสพติด Biol ปี 2011 16: 82–91
  63. Jerlhag, E. , Egecioglu, E. , Landgren, S. , Salome, N. , Heilig, M. , Moechars, D. , Datta, R. , Perrissoud, D. , Dickson, SL และ Engel, JA ข้อกำหนดในการส่งสัญญาณ ghrelin ส่วนกลางสำหรับรางวัลแอลกอฮอล์ พร Natl Acad วิทย์ สหรัฐอเมริกา. 2009; 106: 11318–11323
  64. Jerlhag, E. , Ivanoff, L. , Vater, A. และ Engel, JA การหมุนเวียน ghrelin แบบรอบนอกไม่ได้เป็นสื่อกลางในการให้รางวัลแอลกอฮอล์และการดื่มแอลกอฮอล์ในสัตว์ฟันแทะ แอลกอฮอล์ Clin ประสบการณ์ Res 2014; 38: 959–968
  65. Johnson, SW และ North, RA Opioids กระตุ้นเซลล์โดปามีนโดยการทำ hyperpolarization J. Neurosci 1992; 12: 483–488
  66. Kojima, M. , Hosoda, H. , Date, Y. , Nakazato, M. , Matsuo, H. , และ Kangawa, K. Ghrelin เป็นเปปไทด์ที่ปล่อยฮอร์โมนออกมาจากกระเพาะอาหาร ธรรมชาติ. 1999; 402: 656–660
  67. Koob, GF และ Le Moal, M. การติดยาเสพติดการบิดเบือนของรางวัลและการกระจาย Neuropsychopharmacol ปิด Publ Am Coll Neuropsychopharmacol 2001 24: 97–129
  68. ลียง, AM, โลเวอรี่, EG, สปาร์ตา, ดร. และธีล, TE ผลของการมีอยู่ของอาหารและการจัดการของ orexigenic และ anorectic agent ต่อการดื่มเอทานอลที่เพิ่มขึ้นซึ่งเกี่ยวข้องกับการดื่มในขั้นตอนที่มืด แอลกอฮอล์ Clin ประสบการณ์ Res 2008 32: 1962-1968
  69. Maric, T. , Sedki, F. , Ronfard, B. , Chafetz, D. , และ Shalev, U. บทบาทที่ จำกัด ของ ghrelin ในการควบคุมตนเองของเฮโรอีนและการควบคุมอาหารที่เกิดจากเฮโรอีนในหนู ผู้เสพติด Biol 2012; 17: 613–622
  70. Morganstern, I. , Barson, JR, และ Leibowitz, SF การควบคุมปริมาณยาเสพติดและอาหารเกินความต้องการโดยระบบเปปไทด์ที่คล้ายกัน ฟี้ ยา Abus รายได้ปี 2011; 4: 163–173
  71. Murakawa, K. , Hirose, N. , Takada, K. , Suzuki, T. , Nagase, H. , Cools, AR และ Koshikawa, N. Deltorphin II ช่วยเพิ่มระดับโดปามีนนอกเซลล์ในนิวเคลียส accumbens ผ่านกลไกการทำงานของตัวรับ opioid Eur เจ Pharmacol 2004; 491: 31–36
  72. Naleid, AM, Grace, MK, Cummings, DE, และ Levine, AS Ghrelin ชักนำการให้อาหารในทางเดินของรางวัล mesolimbic ระหว่างพื้นที่หน้าท้องส่วนล่างและนิวเคลียส accumbens เปปไทด์ 2005 26: 2274–2279
  73. Narita, M. , Nagumo, Y. , Hashimoto, S. , Narita, M. , Khotib, J. , Miyatake, M. , Sakurai, T. , Yanagisawa, M. , Nakamachi, T. , Shioda, S. , และซูซูกิต. การมีส่วนร่วมโดยตรงของระบบ orexinergic ในการเปิดใช้งานทางเดินโดปามีน mesolimbic และพฤติกรรมที่เกี่ยวข้องที่เกิดจากมอร์ฟีน J. Neurosci 2006 26: 398–405
  74. Nestler, EJ มีทางเดินโมเลกุลที่พบบ่อยสำหรับการติดยาเสพติด? ชัยนาท Neurosci 2005 8: 1445–1449
  75. Nylander, I. , Stenfors, C. , Tan-No, K. , Mathe, AA และ Terenius, L. การเปรียบเทียบระหว่างการฉายรังสีด้วยไมโครเวฟกับการสลายตัว: ระดับพื้นฐานของไดโอฟินและเอ็นคิฟาลินกับผลของการรักษามอร์ฟีนเรื้อรังต่อเพปไทด์ไดโนฟิน neuropeptides 1997; 31: 357–365
  76. Pirnik, Z. , Bundzikova, J. , Holubova, M. , Pychova, M. , Fehrentz, JA, Martinez, J. , Zelezna, B. , Maletinska, L. และ Kiss, A. Agonists Ghrelin ส่งผลกระทบต่อการแสดงออกของโปรตีน Fos ในพื้นที่สมองที่เกี่ยวข้องกับการควบคุมการบริโภคอาหารในหนูเพศชาย C57BL / 6 Neurochem int ปี 2011 59: 889–895
  77. ริชาร์ดสัน, KA และแอสตันโจนส์, กรัม เซลล์ประสาทด้านข้าง hypothalamic orexin / hypocretin ที่คาดการณ์ว่าจะมีการเปิดใช้งานพื้นที่ tegmental ที่หน้าท้องแตกต่างกันไปตามความต้องการของมอร์ฟีน J. Neurosci 2012; 32: 3809–3817
  78. Romero-Pico, A. , Vazquez, MJ, Gonzalez-Touceda, D. , Folgueira, C. , Skibicka, KP, Alvarez-Crespo, เมตร, Van Gestel, MA, Velasquez, DA, Schwarzer, C. , Herzog, H. , Lopez, M. , Adan, RA, Dickson, SL, Dieguez, C. , และ Nogueiras, R. Hypothalamic kappa-opioid receptor จะปรับเปลี่ยนผลของ orgenigenic ของ ghrelin NeuropsychopHarmacol ปิด Publ Am Coll Neuropsychopharmacol 2013; 38: 1296–1307
  79. Sakata, I. , Nakano, Y. , Osborne-Lawrence, S. , Rovinsky, SA, Lee, CE, Perello, M. , แอนเดอร์สัน, JG, Coppari, R. , Xiao, G. , Lowell, BB, Elmquist, JK และ Zigman, JM การจำแนกลักษณะของเมาส์ ghrelin เซลล์นักข่าวนวนิยาย regul Pept 2009; 155: 91–98
  80. Sandin, J. , Nylander, I. , Georgieva, J. , Schott, PA, Ogren, SO และ Terenius, L. การฉีดวัคซีน Hippocampal dynorphin B ทำให้การเรียนรู้เชิงพื้นที่ในหนู: ผล kappa-opioid receptor-mediated ประสาท 1998; 85: 375–382
  81. Schaeffer, M. , Langlet, F. , Lafont, C. , Molino, F. , Hodson, DJ, Roux, T. , Lamarque, L. , Verdie, P. , Bourrier, E. , Dehouck, B. , Baneres , JL, Martinez, J. , Mery, PF, Marie, J. , Trinquet, E. , Fehrentz, JA, Prevot, V. , และ Mollard, P. การตรวจจับอย่างรวดเร็วของการไหลเวียนของ ghrelin โดยเซลล์ประสาทปรับเปลี่ยนความอยากอาหารในมลรัฐ พร Natl Acad วิทย์ สหรัฐอเมริกา. 2013; 110: 1512–1517
  82. Skibicka, KP, Hansson, C. , Alvarez-Crespo, M. , Friberg, PA, และ Dickson, SL Ghrelin ตั้งเป้าหมายในพื้นที่หน้าท้องเพื่อเพิ่มแรงจูงใจด้านอาหาร ประสาท ปี 2011 180: 129–137
  83. Spanagel, R. , Herz, A. และ Shippenberg, TS ซึ่งตรงข้ามกับระบบ opioid ภายนอกที่ใช้งานอยู่ในปัจจุบันจะปรับเปลี่ยนเส้นทางของโดปามินอจิก mesolimbic พร Natl Acad วิทย์ สหรัฐอเมริกา. 1992; 89: 2046–2050
  84. Sustkova-Fiserova, M. , Jerabek, P. , Havlickova, T. , Kacer, P. และ Krsiak, M. การเป็นปรปักษ์ของตัวรับ Ghrelin จากการปล่อยมอร์ฟีนโดปามีนที่เกิดจากมอร์ฟีนและการกระตุ้นพฤติกรรมในหนู เภสัช 2014; 231: 2899–2908
  85. Trigo, JM, Martin-Garcia, E. , Berrendero, F. , Robledo, P. , และ Maldonado, R. ระบบ opioid ภายนอก: สารตั้งต้นทั่วไปในการติดยาเสพติด ยาเสพติดแอลกอฮอล์ขึ้นอยู่กับ 2010 108: 183–194
  86. Tschop, M. , Smiley, DL และ Heiman, ML Ghrelin ชักนำให้เกิดความอ้วนในหนู ธรรมชาติ. 2000 407: 908–913
  87. Van Ree, JM, Niesink, RJ, Van Wolfswinkel, L. , Ramsey, NF, Kornet, MM, Van Furth, WR, Vanderschuren, LJ, Gerrits, MA และ Van den Berg, CL opioids จากภายนอกและให้รางวัล Eur เจ Pharmacol 2000 405: 89–101
  88. แว็กเนอร์, JJ, Terman, GW, และ Chavkin, C. ภายนอก Dynorphins ยับยั้งสารสื่อประสาท excitatory และบล็อกการเหนี่ยวนำ LTP ในฮิบโป ธรรมชาติ. 1993; 363: 451–454
  89. ปรีชาญาณ RA โดปามีนการเรียนรู้และแรงจูงใจ ชัยนาท รายได้ Neurosci 2004; 5: 483–494
  90. ปรีชาญาณ RA และ Bozarth, MA ทฤษฎีกระตุ้นจิตของการติดยาเสพติด จิตวิทยา รายได้ปี 1987; 94: 469–492
  91. Yoshida, Y. , Koide, S. , Hirose, N. , Takada, K. , Tomiyama, K. , Koshikawa, N. , และ Cools, AR Fentanyl เพิ่มการปลดปล่อยโดปามีนในนิวเคลียสหนูหนู: การมีส่วนร่วมของ mesolimbic mu- และตัวรับ delta-2-opioid ประสาท 1999; 92: 1357–1365