บทบาทของ hypocretin (orexin) ในพฤติกรรมทางเพศชาย (2007)

J Neurosci 2007 Mar 14;27(11):2837-45.

Muschamp JW1, โดมิงเกซ เจเอ็ม, Sato SM, เซินไร, ฮัลล์ EM.

นามธรรม

บทบาทของเซลล์ประสาท hypocretin (orexin; hcrt / orx) ในการควบคุม arousal นั้นได้รับการยอมรับอย่างดี

เมื่อเร็ว ๆ นี้ hcrt / orx มีส่วนเกี่ยวข้องกับรางวัลอาหารและพฤติกรรมการแสวงหายาเสพติด เรารายงานที่นี่ว่าในหนูตัวผู้ Fos immunoreactivity (ir) ในเซลล์ประสาท hcrt / orx เพิ่มขึ้นอย่างชัดเจนในระหว่างการมีเพศสัมพันธ์ในขณะที่การตัดอัณฑะก่อให้เกิดการลดลงของจำนวนเซลล์ประสาทเซลล์ hcrt / orx และระดับโปรตีนในเวลาที่สอดคล้องกับ

ผลกระทบนี้ถูกย้อนกลับโดยการเปลี่ยน estradiol Immunolabeling สำหรับตัวรับ androgen (AR) และ estrogen (ER alpha) พบว่าไม่มี colocalization ของ hcrt / orx ที่มี AR และเซลล์ประสาท hcrt / orx เพียงไม่กี่ตัวที่แสดงออกถึง ER alpha ซึ่งบ่งชี้ว่าการควบคุมฮอร์โมนของการแสดงออกของ hcrt / orx นั้นเกิดจากเซลล์ประสาทที่มีตัวรับเหล่านั้น นอกจากนี้เรายังแสดงให้เห็นว่าการให้ยาต้านตัวรับ orexin-1 receptor ในระบบ SB 334867 [N- (2-methyl-6-benzoxazolyl) -N” -1,5-naphthyridin-4-yl urea] ขัดขวางพฤติกรรมการมีโค สถานที่หนึ่งสำหรับผลของการมีเพศสัมพันธ์ของ hcrt / orx อาจเป็นพื้นที่หน้าท้อง (VTA) เราแสดงให้เห็นว่า hcrt-1 / orx-A ทำให้อัตราการยิงและการทำงานของประชากรของเซลล์ประสาท VTA dopamine (DA) เพิ่มขึ้นในร่างกาย การกระตุ้นการทำงานของ hcrt / orx ในระหว่างการมีเพศสัมพันธ์และในทางกลับกันการกระตุ้นเซลล์ประสาท VTA DA โดย hcrt / orx อาจส่งผลให้นิวเคลียสเพิ่มขึ้นอย่างแข็งแกร่งใน DA ที่สังเกตเห็นก่อนหน้านี้ในระหว่างพฤติกรรมทางเพศของผู้ชาย การติดฉลากภูมิคุ้มกันแบบสามครั้งต่อมาใน VTA ด้านหน้าแสดงให้เห็นว่า Fos-ir ในเซลล์ประสาทไทโรซีนไฮดรอกซิเลสบวกต่อเส้นใย hcrt / orx เพิ่มขึ้นระหว่างการมีเพศสัมพันธ์

ข้อมูลเหล่านี้สนับสนุนมุมมองที่ว่า hcrt / orx เปปไทด์อาจทำหน้าที่ในลักษณะที่ไวต่อสารสเตียรอยด์เพื่ออำนวยความสะดวกในการแสวงหาพลังงานธรรมชาติของรางวัลเช่นการมีเพศสัมพันธ์ผ่านการเปิดใช้งานระบบ mesolimbic DA

บทนำ

นับตั้งแต่การค้นพบในปี 1990 (de Lecea et al., 1998; Sakurai และคณะ, 1998) ระบบ hypocretin (orexin; hcrt / orx) ถูกมองเป็นส่วนใหญ่ในบริบทของพฤติกรรมเร้าอารมณ์และพฤติกรรมการบริโภค (Sutcliffe และ de Lecea, 2002; ซีเกล 2004) หนูกลายพันธุ์ที่มีความผิดปกติของสัญญาณ hcrt / orx แสดงรูปแบบที่ไม่สม่ำเสมอของการเร้าอารมณ์ที่ถูกทำเครื่องหมายด้วยการเปลี่ยนบ่อย ๆ ระหว่างการนอนหลับและการตื่นตัว (โมชิซูกิ และคณะ 2004) เชื่อกันว่าเปปไทด์ hcrt / orx ช่วยให้เกิดความตื่นตัวที่ต่อเนื่องโดยการฉายภาพที่แข็งแกร่งในการกระตุ้นการทำงานของเซลล์ aminergic ในกลุ่มก้านสมอง (เช่น locus ceruleus, raphe) (Peyron et al., 1998; นัมบูและคณะ, 1999; Saper et al., 2005) นอกเหนือจากการคาดการณ์ของพวกเขาไปยังเว็บไซต์ที่ควบคุมความตื่นตัวและความตื่นตัวแล้วเซลล์ประสาท hcrt / orx ยังคาดการณ์ถึงต้นกำเนิดของทางเดิน mesolimbic dopamine (DA) ในบริเวณหน้าท้องส่วนท้อง (VTA) (VTA) (Fadel และ Deutch, 2002) รูปแบบการเชื่อมต่อนี้ทำให้กลุ่มวิจัยหลายกลุ่มประเมินบทบาทของ hcrt / orx ในการเสริมแรงที่เกี่ยวข้องกับรางวัล (DiLeone และคณะ, 2003; แฮร์ริสและคณะ 2005; แฮร์ริสและแอสตันโจนส์ 2006).

การศึกษาในสัตว์ที่กำลังเคลื่อนที่ โฆษณาฟรี แสดงให้เห็นว่าเซลล์ hcrt / orx เพิ่มอัตราการยิงของพวกมันในช่วงเวลาที่มีการกระตุ้นพฤติกรรมการสำรวจ (Mileykovsky et al., 2005) และผลลัพธ์ของหัวรถจักรที่ได้รับการปรับปรุงหลังจากการแช่ intracerebroventricular hcrt / orx ถูกลดทอนโดยการปิดล้อมตัวรับ DA (Nakamura และคณะ, 2000) การศึกษาอื่น ๆ ได้แสดงให้เห็นถึงกิจกรรมเซลล์ DA ที่เพิ่มขึ้น ในหลอดทดลอง โดย hcrt / orx (Korotkova และคณะ, 2003) เช่นเดียวกับการเติมนิวเคลียส accumbens (NAc) DA ในร่างกาย หลังการใช้ hcrt / orx กับ VTA (นาริตะและคณะ, 2006) เมื่อเร็ว ๆ นี้การศึกษาพฤติกรรมพบว่าการเปิดใช้งานระบบ hcrt / orx อาจเป็นส่วนสำคัญในการสร้างแรงจูงใจสำหรับยาเสพติดBoutrel et al., 2005; แฮร์ริสและคณะ 2005; Borgland และคณะ, 2006) เช่นเดียวกับรางวัลอาหารธรรมชาติที่ความแข็งแกร่งในการเสริมแรงถูกกำหนดโดย homeostatically โดยโครงสร้าง hypothalamic (Hoebel, 1969; ม้วนและอัล 1980; Fulton และคณะ, 2000; Thorpe et al., 2005).

เช่นเดียวกับ hcrt / orx ภายนอกที่สามารถปรับปรุงการให้อาหารและการหาอาหาร (Kotz, 2006) การฉีด intrahypothalamic ของ hcrt / orx ช่วยให้พฤติกรรมทางเพศของหนูชาย (Gulia และคณะ, 2003) ในแง่ของการศึกษาแบบคลาสสิกที่พฤติกรรมการกินอาหารหรือพฤติกรรมร่วมของเพศชายถูกกระตุ้นโดยการกระตุ้นด้วยไฟฟ้าของเว็บไซต์ในพื้นที่ด้านข้าง hypothalamic (LHA) ซึ่งปัจจุบันเป็นที่รู้จักกันว่ามีเซลล์ประสาท hcrt / orx (วอฮ์นและฟิชเชอร์, 1962; Caggiula และ Hoebel, 1966; สเวนสันและคณะ 2005) เราค้นหาหลักฐานการเปิดใช้งานเซลล์ประสาท hcrt / orx ระหว่างการสังวาสและการเสื่อมสภาพของพฤติกรรมโดยตัวรับ orexin-1 (OX)1) การปิดล้อม นอกจากนี้เรายังประเมินการควบคุม neuroendocrine ของระบบ hcrt / orx โดยการวัดผลของการตัดอัณฑะและฮอร์โมนทดแทนในเนื้อหา hcrt / orx ส่วนกลางและโดยอิมมูโนเบลตาคู่สำหรับ hcrt / orx และตัวรับฮอร์โมนสเตียรอยด์ ในที่สุดเราประเมินขอบเขตที่ระบบ mesolimbic DA สามารถใช้งานได้โดย hcrt / orx ในร่างกาย และเซลล์ประสาท DA ใน VTA ที่รับอินพุต hcrt / orx แสดงว่ามีการเพิ่มขึ้นของ Fos immunoreactivity (ir) ในระหว่างการมีเพศสัมพันธ์หรือไม่

วัสดุและวิธีการ

Fos immunohistochemistry, พฤติกรรมและจำนวนเซลล์

ผู้ใหญ่ (∼325 กรัม) หนูเพศผู้ที่มีประสบการณ์ทางเพศยาว - หนูอีแวนส์ (ฮาร์ลาน, อินเดียแนโพลิส, อิน) ถูกนำมาใช้และรักษาให้สอดคล้องกับสถาบันสุขภาพแห่งชาติ แนวทางการดูแลและใช้สัตว์ทดลองและขั้นตอนทั้งหมดได้รับการอนุมัติจากคณะกรรมการดูแลและใช้สัตว์ในสถาบันของมหาวิทยาลัย ในสัปดาห์ก่อนการทดสอบสัตว์ทุกตัวได้รับอนุญาตให้มีประสบการณ์ทางเพศวันละ 1 ชั่วโมง 10 ครั้งกับตัวเมียที่ถูกตัดรังไข่ที่นำไปสู่การเป็นสัดโดย estradiol benzoate (48 μg, sc) และ progesterone 400 ชั่วโมงต่อมา (4 μg, sc; ให้ 2 ชั่วโมงก่อน การทดสอบซิกม่าเซนต์หลุยส์ MO) การทดสอบพฤติกรรมในการทดลองทั้งหมดดำเนินการ 40 ชั่วโมงในช่วงเวลากลางคืนตามปกติของสัตว์ในกรงบ้านภายใต้แสงจากหลอดไส้สีแดง XNUMX วัตต์หลอดเดียว สำหรับการทดลองสังวาสกลุ่มเดียว (n = 6) ของตัวผู้ได้รับอนุญาตให้มีเพศสัมพันธ์ในกรงบ้านของพวกเขาโดยตัวเมียที่เป็นสัดจะมีการหลั่งเพียงครั้งเดียวหลังจากนั้นตัวเมียก็ถูกกำจัดออกไป สัตว์ทุกตัวติดตั้งเกือบจะในทันทีและเข้าใกล้ใน <4 นาที เวลาแฝงในการหลั่งเฉลี่ยสำหรับกลุ่มนี้คือ 632.6 ± 169.64 วินาที (ค่าเฉลี่ย± SEM; n = 6) กลุ่มควบคุม (n = 6) ใช้เพื่อควบคุมระดับกิจกรรม สัตว์เหล่านี้ได้รับการตรวจสอบด้วยสายตาเพื่อตรวจสอบว่าพวกมันตื่นและเคลื่อนไหวเป็นระยะเวลา 15 นาทีซึ่งสอดคล้องกับระยะเวลาการทดสอบการมีเพศสัมพันธ์ของกลุ่มทดลอง ฝากรงถูกเปิดและปิดในช่วงเริ่มต้นและสิ้นสุดของช่วงเวลา 15 นาทีนี้ แต่ไม่เช่นนั้นสัตว์ต่างๆก็จะไม่ถูกรบกวน ไม่มีการใช้สัตว์ควบคุมที่หยุดนิ่งในช่วงเวลานี้ สัตว์ถูกตัดสินว่าสงบนิ่งหากดูเหมือนว่าพวกมันนอนอยู่บนปีกหรืออยู่ในท่าก้มศีรษะ (ดัดแปลงมาจาก Espana และคณะ, 2003) หกสิบนาทีหลังจากเริ่มการสังวาสหรือสังเกตการควบคุมสัตว์ได้รับการดมยาสลบอย่างล้ำลึกด้วยโซเดียม pentobarbital (100 มก. / กก.) และได้รับการผสมด้วย 0.1 m PBS, pH 7.4 และ 4% พาราฟอร์มัลดีไฮด์ใน PBS สมองถูกแช่แข็งใน 20% ซูโครส - พีบีเอสและส่วนอื่น ๆ 40 μm cryostat (30 ต่อสัตว์) จากบริเวณใกล้เคียงของประชากรเซลล์ hcrt / orx hypothalamic ถูก immunolabeled สำหรับ prepro-hcrt / orx (1: 100; อร์ค, Billerica, MA) และ Fos (1: 10,000; EMD Biosciences, San Diego, CA) ด้วย 3 3, XNUMX′-diaminobenzidine (DAB) และ DAB เข้มข้นของนิกเกิลตามลำดับตามขั้นตอนของอิมมูโนEspana และคณะ, 2003; Sato et al., 2005) จำนวนเซลล์ถูกดำเนินการภายใต้กำลังขยายสูงโดยใช้กล้องจุลทรรศน์และกล้องโอลิมปัส (โตเกียวญี่ปุ่น) ในส่วนเดียวในระดับ rostrocaudal ที่สอดคล้องกัน (ดู มะเดื่อ. 1B,C) (2.45 มม. ด้านหลังถึง bregma) (สเวนสัน, 2004) ในแต่ละซีกโลกเซลล์ที่อยู่ในระยะการนับ 470 × 630 μmจะถูกติดแท็กโดยใช้ซอฟต์แวร์การวิเคราะห์ภาพดิจิตอล (Image-Pro Plus; Cyber ​​Cyberics สื่อ, Silver Spring, MD) โดยผู้ทดสอบตาบอดกับเงื่อนไขการทดลอง ในซีกโลกทั้งสองเขตการนับด้านข้างจะใช้ fornices เป็นขอบเขตการอยู่ตรงกลาง ช่องนับที่อยู่ตรงกลางใช้ fornices เป็นขอบเขตด้านข้าง จำนวนของเซลล์ Fos-only, hcrt / orx-only และ double-label ที่มีทั้ง hcrt / orx และ Fos-ir ถูกบันทึกไว้

รูป 1 

เพิ่ม Fos immunoreactivity ในเซลล์ hcrt / orx ระหว่างการสังวาส A, Hcrt / orx neuron (ด้านขวา) แสดง Fos-ir สเกลบาร์ 25 μm B, ตัวแทนไมโครกราฟจากสนามนับที่ถูกต้องในซีกซ้ายของชายที่ไม่คุมควบคุม แถบมาตราส่วน (นิ้ว A) 200 μm C, Micrograph จาก copulating ชาย สเกลบาร์ 200 μm ลูกศรแสดงเซลล์ประสาท hcrt / orx แสดง Fos-ir; เครื่องหมายดอกจันระบุนิวเคลียส Fos-ir ในเซลล์ที่ไม่ใช่ hcrt / orx fx, fornix

การทดลองตอนและ immunoblotting

ตัวเต็มวัยของผู้ใหญ่ (∼325 กรัมในช่วงเริ่มต้นของการทดลอง) หนูหนูอีแวนส์ยาวได้รับยาสลบ (75 mg / kg Ketamine HCl และ 10 mg / kg xylazine HCl, ip) และตอน สัตว์ที่ได้รับอนุญาต 7, 14, หรือ 28 d ของเวลาอยู่รอดหลังการผ่าตัดก่อนที่พวกเขาจะได้รับการวิสัญญีและสมบูรณ์และสมองของพวกเขาถูก immunolabeled สำหรับ prepro-hcrt / orx ข้างต้น (ทุกกลุ่ม n = 5) สัตว์เหล่านี้ถูกนำไปเปรียบเทียบกับกลุ่มผ่าตัดที่ได้รับการผ่าตัดแบบตะลุมพุกภายใต้การดมยาสลบn = 5) ชามถูกฆ่าตายในเวลา 28 วัน จำนวนเซลล์ถูกดำเนินการข้างต้นที่ระนาบโคโรนาเดียวกันภายใต้กำลังขยายที่ต่ำกว่า

ในการทดสอบแยก 28 d castrates (n = 5) และการควบคุมที่หลอกลวง (n = 5) ได้รับการระงับความรู้สึกด้วยโซเดียมเพนโทบาร์บิทัล (100 มก. / กก.) สมองของพวกเขาถูกกำจัดออกและแช่แข็งอย่างรวดเร็วใน 2-methylbutane ที่แช่เย็นด้วยน้ำแข็งแห้ง จากนั้น hypothalami ที่ถูกแช่แข็งจะถูกปิดกั้นโดยการตัดโคโรนาสองครั้งโดยหนึ่งชิ้นผ่านบริเวณ preoptic ตรงกลาง (mPOA) เพียงแค่ rostral ไปยังการแยกชิ้นส่วนของส่วนหน้าและอีกอันผ่านนิวเคลียส hypothalamic ด้านหลังเพียงหางไปยังส่วนของโพรงที่สามใน hypothalamic และ ช่องคลอด จากนั้นบล็อกจะถูกตัดแต่งด้วยการตัดซากิตทัลสองอันที่ปลายตรงกลางของก้านสมองทั้งสองข้างและโดยการตัดตามแนวนอนที่ปลายด้านหลังของช่องด้านหลังของช่องที่สามของ hypothalamic จากนั้นบล็อกเนื้อเยื่อจะถูกทำให้เป็นเนื้อเดียวกันด้วย sonication โปรตีนถูกแยกออกเป็นบัฟเฟอร์ที่มีคลื่นวิทยุดัดแปลง pH 8.0 ด้วยตัวยับยั้งโปรตีเอส (Roche Complete Mini protease ผสม Roche Diagnostics, Indianapolis, IN) และสารสกัดถูกแยกออกจากกันหลังจากการหมุนเหวี่ยง หลังจากพิจารณาความเข้มข้นของโปรตีนทั้งหมดสำหรับสารสกัดจากแต่ละเรื่องโปรตีน 40 ไมโครกรัมจากสัตว์แต่ละชนิดจะถูกบรรจุลงในหลุมที่แยกจากเจล 15% SDS-PAGE การแยกอิเล็กโทรโฟเรติกการถ่ายโอนไปยังเยื่อโพลีไวนิลิดีนไดฟลูออไรด์ (ไบโอ - ราด, เฮอร์คิวลิส, CA) และการติดฉลากภูมิคุ้มกันทำได้ตามวิธีการของแหลมมลิ (คลีฟแลนด์และคณะ, 1977) ใช้ 1: 1000 ของแอนติบอดีต่อต้าน prepro-hcrt / orx ที่ระบุไว้ก่อนหน้านี้และต่อมา 1: 2000 ต่อต้าน-β-actin (Sigma) และ 1: 5000 แพะต่อต้านกระต่าย IgG (เทคโนโลยีชีวภาพ Santa Cruz, Santa Cruz, CA ) ในนมผง 5% ในน้ำเกลือทริสบัฟเฟอร์ แถบโปรตีนถูกมองเห็นได้ด้วยชุด chemiluminescence ที่ปรับปรุงแล้ว (ECL; GE Healthcare, Piscataway, NJ) และ Kodak (Rochester, NY) ภาพยนตร์ BioMax ฟิล์มถูกฉายเป็นเวลา 40 วินาทีและสแกนแบบดิจิทัลและวัดความหนาแน่นเชิงแสงด้วยซอฟต์แวร์ ImageJ ที่เปิดเผยต่อสาธารณะ สำหรับสัตว์แต่ละตัวค่าความหนาแน่นของแสงสำหรับ hcrt / orx เป็นเปอร์เซ็นต์ของการควบคุมการโหลด act-actin ถูกกำหนดและอยู่ภายใต้การวิเคราะห์ทางสถิติ

ในการทดลองครั้งที่สามหนูตัวผู้ตามที่อธิบายไว้ข้างต้นได้รับการผ่าตัดเสแสร้ง (n = 3) หรือตอนและฉีดทุกวันที่สองสำหรับ 28 d ด้วย dihydrotestosterone (500 μg, sc; n = 4), estradiol benzoate (20 μg, sc; n = 3) หรือยานพาหนะน้ำมัน (0.1 μl; n = 3) ฮอร์โมนทั้งสองถูกซื้อจากซิกมา ปริมาณฮอร์โมนที่ถูกเลือกสำหรับความสามารถในการศึกษาก่อนหน้านี้เพื่อรักษาเพศสัมพันธ์ใน castrates (Putnam et al., 2005) ในวันที่ 28 หลังจากการผ่าตัดสัตว์ถูกฆ่าตายและ hypothalami ของพวกเขาถูกปิดกั้นสำหรับการวัดเนื้อหา prepro-hcrt / orx โดย immunoblot ตะวันตกตามที่อธิบายไว้ข้างต้น

ตัวรับสเตียรอยด์ฮอร์โมนและ hcrt / orx

ส่วนสมองจาก LHA ของเพศชายที่ไร้สมรรถภาพทางเพศ (∼350 กรัม) หนูที่มีความสมบูรณ์ทางเพศ (หนูทดลองอีแวนส์) ได้รับอิมมูโนเบลสำหรับแอนโดรเจนตัวรับ (AR) (1: 750; n = 6; เทคโนโลยีชีวภาพของ Santa Cruz) หรือตัวรับเอสโตรเจน (ERα) (1: 2500; n = 9; เทคโนโลยีชีวภาพของ Santa Cruz) ใช้ DAB ที่มีความเข้มข้นของนิกเกิล ต่อจากนั้นส่วนที่มีป้ายกำกับ AR ได้รับการติดฉลากสองครั้งสำหรับ prepro-hcrt / orx (ดังกล่าวข้างต้น) และส่วนที่มีป้ายกำกับERαถูกย้อมสีสองครั้งสำหรับ prepro-hcrt / orx (n = 5) หลังจากติดตั้งส่วนที่ตรงกับหนึ่งในสี่ของชั้นชเวียนของ LHA ในแผนที่ของ สเวนสัน (2004) ถูกวาดด้วยมือภายใต้กล้องจุลทรรศน์โดยใช้อุปกรณ์แนบกล้องลูซิด้าและติดแท็กเซลล์คู่และเดี่ยวในแต่ละส่วน ภาพวาดถูกสแกนแบบดิจิทัลและวางทับบนระดับแผนที่โดยใช้ Adobe Illustrator Adobe (San Jose, CA) และประชากรแต่ละเซลล์ถูกแมปไปยังภาพประกอบของแผนที่ (สเวนสัน, 2004) ในกรณีของส่วนที่มีป้ายกำกับERα-plus-hcrt / orx จะมีการนับจำนวนเซลล์ประสาท hcrt / orx ที่มีป้ายกำกับเดี่ยวและคู่

เภสัชวิทยาและพฤติกรรมการมีส่วนร่วม

ตัวเต็มวัยเพศชาย (∼350 กรัมในช่วงเริ่มต้นของการทดลอง) หนูอีแวนส์ยาว - (n = 9) ได้รับประสบการณ์ทางเพศ 1 ชั่วโมงสี่ครั้งกับผู้หญิงที่เปิดกว้างทางเพศในช่วงสัปดาห์ก่อนการทดสอบพฤติกรรม สัตว์ที่ไม่สามารถอุทานอย่างน้อยหนึ่งครั้งในช่วง 30 นาทีแรกของการทดสอบขั้นสุดท้ายจะถูกแยกออกจากการทดลอง การฝึกประสบการณ์และการทดสอบพฤติกรรมดำเนินการภายใต้แสงหลอดไส้สีแดง 40 W 2 ชม. ในช่วงออกหากินของสัตว์ ทำการทดสอบพฤติกรรมการมีเพศสัมพันธ์ในกรงบ้านของตัวผู้และใช้เวลา 30 นาที คุณลักษณะที่โดดเด่นของพฤติกรรมการมีเพศสัมพันธ์ของผู้ชาย (เช่นการติดตั้งการเข้าสู่ระบบและการหลั่ง) ได้รับคะแนนจากผู้สังเกตการณ์ที่ตาบอดในการรักษาด้วยการทดลองโดยใช้ซอฟต์แวร์คอมพิวเตอร์ที่กำหนดเองซึ่งบันทึกความถี่และข้อมูลเวลาแฝงสำหรับเหตุการณ์พฤติกรรมแต่ละอย่าง สามสิบนาทีก่อนการทดสอบพฤติกรรมสัตว์ได้รับการฉีด OX1 ศัตรู N- (2-methyl-6-benzoxazolyl) -N "-1,5-naphthyridin-4-yl urea (SB 334867) (20 mg / kg, ip) หรือ DMSO vehicle (0.5 ml / kg) การทดลองดังกล่าวเป็นไปตามการออกแบบภายในอาสาสมัครแบบถ่วงดุลอย่างง่ายเพื่อให้สัตว์ห้าตัวได้รับการฉีดยาในการทดสอบวันแรกและอีกสี่ตัวที่เหลือได้รับยานพาหนะ หลังจากช่วงเวลาล้างยา 48 ชั่วโมงสัตว์ที่ได้รับการรักษาด้วยยาในวันแรกจะได้รับยานพาหนะและในทางกลับกัน

electrophysiology

หนู Dawley กลุ่ม Sprague เพศผู้ผู้ใหญ่ (∼350 กรัม) ถูกดมยาสลบด้วยคลอไรด์ไฮเดรต (400 มก. / กก., IP สำหรับการเหนี่ยวนำ 100 มก. ·กก.-1 ·ชม-1 หลังจากนั้นสำหรับการบำรุงรักษา) และติดตั้งบนเครื่องมือ stereotaxic กะโหลกและดูราเหนือส่วนก้านสมองที่มี VTA ถูกลบออก สัตว์แต่ละตัวแรกได้รับการฉีดน้ำไขสันหลังเทียม (aCSF) [0.5 μl / 5 นาที; จากแลมบ์ดา, anteroposterior, +2.6 หรือ +3.4 มม.; ปานกลาง, ± 0.8 มม.; dorsoventral −7.0 มม. กะโหลกศีรษะแบนตามแผนที่ stereotaxic (Paxinos และ Watson, 1998)] ด้วยเข็มฉีดยา 32 ga Hamilton (0.5 μl / 5 นาที) ที่ด้านหนึ่งของ VTA จากนั้น 10 นาทีต่อมาขั้นตอนการสุ่มตัวอย่างเซลล์ต่อแทร็คถูกดำเนินการที่ด้าน ipsilateral ของ VTA สัตว์ต่อไปได้รับการแช่ hcrt-1 / orx-A (0.014 nmol n = 4; 1.4 nmol n = 5; หรือ 140 nmol n = 6 ละลายใน aCSF American Peptide, Sunnyvale, CA) เข้าสู่ VTA contralateral ก่อนที่จะมีการทำซ้ำขั้นตอนต่อเซลล์ตามรอย การฉีดขึ้นรูปถูกยกขึ้นโดยซีกโลกและจากบริเวณที่ฉีดด้านหน้าหรือด้านหลัง บันทึกหน่วยเดียวนอกเซลล์ด้วย micropipettes แก้วเดี่ยวบาร์เรล (เส้นผ่านศูนย์กลางภายนอก 1.5 มม. ก่อนที่จะดึงเครื่องมือ World Precision Instruments, Sarasota, FL) ที่เต็มไปด้วย NaCl 2 m และหลังหัก อิเล็กโทรดอิมพิแดนซ์อยู่ระหว่าง 2 ถึง 4 MΩที่ 135 Hz เซลล์ประสาท DA ถูกระบุด้วยศักย์เชิงลบนอกเซลล์ซึ่งมักจะมีการแบ่งส่วนเริ่มต้นที่โดดเด่น / somatodendritic (IS / SD), ระยะเวลาที่อาจเกิดการกระทำที่กว้าง, อัตราการยิงช้า, และเข็มเดี่ยวผิดปกติหรือรูปแบบการยิงระเบิด (เกรซและบันนีย์ 1983) เพื่อทำการทดลองเซลล์ต่อแทร็คอิเล็กโทรดการบันทึกถูกส่งผ่านบล็อกที่กำหนดไว้ใน VTA (2.8–3.4 มม. ด้านหน้าสู่แลมบ์ดา; 0.6-1.0 มม. ด้านข้างถึงกึ่งกลาง; 6.5–8.5 มม. ใต้ผิวสมอง) หกครั้ง. แต่ละเซลล์ประสาท DA ที่ระบุถูกบันทึกไว้เป็นเวลา 2–5 นาทีทางออนไลน์โดยใช้ระบบเก็บข้อมูลของแผนภูมิ (เครื่องมือโฆษณา, Mountain View, CA) จำนวนเฉลี่ยของเซลล์ประสาท DA ที่ทำงานตามธรรมชาติที่พบตามธรรมชาติต่ออิเล็กโทรดแทร็คจากสัตว์แต่ละตัว (เซลล์ต่อแทร็ค) คือดัชนีสำหรับกิจกรรมประชากรเซลล์ประสาท VTA DA อัตราการยิงเฉลี่ยของเซลล์ประสาท DA นั้นพิจารณาจากเซลล์ประสาท DA ทั้งหมดที่สุ่มตัวอย่างจากสัตว์ทุกตัวในแต่ละกลุ่ม

เพื่อทดสอบการปิดการใช้งานสลับขั้วในกลุ่ม 140 nmol hcrt / orx, apomorphine HCl (20 μg / kg, ip; n = 4; Sigma) ได้รับการบริหารทันทีหลังจากเสร็จสิ้นการสุ่มตัวอย่าง post-hcrt-1 / orx-A สิบนาทีหลังจากการฉีด apomorphine ได้ทำการสุ่มตัวอย่างอิเล็กโทรดแทร็กอีกหกแทร็กที่ด้านข้างของ VTA ที่ได้รับ hcrt-1 / orx-A ก่อนหน้านี้

พฤติกรรม, อิมมูโนเคมีวิทยาสามระดับและจำนวนเซลล์

ผู้ใหญ่ (∼300 กรัม) หนูตัวผู้ยาว - อีแวนส์ได้รับประสบการณ์ทางเพศสี่ชั่วโมง 1 ชั่วโมงกับหญิงที่เปิดกว้าง ก่อนการดมยาสลบ (1 ชั่วโมง), การปะและการเตรียมเนื้อเยื่อสำหรับการสร้างภูมิคุ้มกันโรคสัตว์ (n = 6) ได้รับอนุญาตให้มีเพศสัมพันธ์กับการพุ่งออกมาครั้งเดียว ดังกล่าวข้างต้นสัตว์ที่ติดตั้งและบุกรุกเข้ามาเกือบจะทันทีและค่าเฉลี่ยเวลาการหลั่งของกลุ่มนี้คือ 588.50 ± 85.03 วินาที (หมายถึง± SEM) กลุ่มทดลองเปรียบเทียบกับกลุ่มควบคุมที่มีประสบการณ์ทางเพศและไม่ได้รับการเข้าถึงหญิงที่เป็นสัดสำหรับการสังวาส (n = 6) จากข้างต้นการทดสอบเกิดขึ้น 2 ชั่วโมงในช่วงเวลาออกหากินเวลากลางคืนตามปกติของสัตว์ภายใต้แสงจากหลอดไส้สีแดง หลังจากที่สัตว์ถูกฆ่าตายตรึงและแบ่งส่วนไมโครโตมที่เย็นแล้ว (ตามด้านบน) สี่ส่วนจากสัตว์แต่ละตัวซึ่งเป็นตัวแทนของระดับ VTA สี่ rostrocaudal ได้รับการคัดเลือกสำหรับอิมมูโนฮิสโตเคมี สำหรับจำนวนวิชา (n) ใช้สำหรับการนับเซลล์ในแต่ละระดับดู 4 ตาราง. ส่วนถูกติดป้ายกำกับสำหรับ Fos (1: 7500; Santa Cruz Biotechnology) ที่มี DAB ดังกล่าวข้างต้น prepro-hcrt / orx (1: 500) และ tyrosine hydroxylase (TH; 1: 2000; อร์ค) ที่มีแอนติบอดี้ทุติยภูมิเรืองแสงไซยาไนด์คอนจูเกต (1: 200; Cy3 และ Cy2 ตามลำดับ; Jackson ImmunoResearch, West Grove, PA) จำนวนเซลล์ถูกดำเนินการภายใต้กำลังขยายสูง (40 ×) เมื่อ a Leica (Nussloch, ประเทศเยอรมนี) ใช้กล้องจุลทรรศน์ DM 4000B นักวิจัยสเตอริโอ ซอฟต์แวร์ (MBF Bioscience, Williston, VT) โดยผู้ทดลองทำการตาบอดต่อสภาวะการรักษา นักวิจัยสเตอริโอ ซอฟต์แวร์ถูกใช้เพื่อกำหนดเขตข้อมูลการนับที่รวมเซลล์ DA ทั้งหมดภายในแต่ละระดับของ VTA ที่ความยาวโฟกัสเดี่ยวในแต่ละระดับ rostrocaudal สี่ระดับของ VTA เซลล์ห้าชนิดถูกติดแท็ก: เซลล์ประสาท TH-positive, เซลล์ประสาท TH-positive ที่แสดง Fos-ir, เซลล์ประสาท TH-positive แสดงโดยตรง (บนโซมาติกพลาสซึม) เส้นใย orx, เซลล์ประสาท TH-positive ที่แสดงทั้งการผสมแบบ fos-ir และ hcrt / orx และในที่สุดนิวเคลียสเดี่ยว Fos-positive ไม่ได้อยู่ในเซลล์ประสาท TH

การวิเคราะห์ข้อมูล.

กลุ่มหมายถึงการนับเซลล์ในการทดลอง Fos และการวัดความหนาแน่นเชิงแสงของบลูสตอลจากการทดลองครั้งแรกนั้นถูกเปรียบเทียบโดยกลุ่มตัวอย่างอิสระ t ทดสอบ. ตรงกัน-ตัวอย่าง t ทำการทดสอบโดยใช้วิธีจาก OX1 การทดลองพฤติกรรมศัตรู การนับเซลล์ในการตัดอัณฑะการทดลองแบบสามฉลากและค่าเฉลี่ยอัตราการเผาและมาตรการการติดตามผลต่อเซลล์นั้นอยู่ภายใต้ ANOVA

ผลสอบ

การมีเพศสัมพันธ์เพิ่ม Fos immunoreactivity ในเซลล์ hcrt / orx

เปอร์เซ็นต์ของเซลล์ hcrt / orx-ir ที่แสดง Fos-ir แตกต่างกันอย่างมีนัยสำคัญระหว่างกลุ่มที่มีสัตว์ copulating แสดงเพิ่มขึ้น Fos-ir ในเซลล์ hcrt / orx (t(10) = 7.71; p <0.01) (1 ตาราง, มะเดื่อ. 1) ค่าเฉลี่ยของ hcrt / orx ที่มีป้ายกำกับสองครั้งก็แตกต่างกันอย่างมากระหว่างกลุ่ม (t(10) = 6.03; p <0.001) ที่น่าสังเกตคือในสัตว์ที่มีเพศสัมพันธ์ไม่พบความแตกต่างของจำนวนเซลล์ประสาท hcrt / orx Fos-positive ระหว่างฟิลด์การนับที่อยู่ตรงกลางและด้านข้าง (ไม่แสดงข้อมูล) (แฮร์ริสและแอสตันโจนส์ 2006) จำนวนเฉลี่ยของนิวเคลียส Fos-ir (เซลล์ Fos-only และ double-label hcrt / orx neurons) มีความสำคัญมากกว่าในสัตว์ copulating มากกว่าในการควบคุมแบบ noncopulating (t(10) = 16.97; p <0.001) (1 ตาราง).

1 ตาราง 

เพิ่ม Fos-ir ระหว่างการสังวาสในเซลล์ hcrt / orx ของหนูตัวผู้

การลดอัณฑะลดลง hcrt / orx immunoreactivity และโปรตีนในมลรัฐ

เมื่อเปรียบเทียบกับการควบคุมแบบเสแสร้งนับเซลล์ประสาท hcrt / orx-ir แสดงให้เห็นว่าจำนวนเซลล์ลดลงอย่างมีนัยสำคัญ 28 d หลังจากการตัดอัณฑะ (มะเดื่อ. 2A) (F(3,16) = 7.60; p <0.005) นี่แสดงถึงการลดลง 31.8% ของจำนวนเซลล์ในประชากรที่สังเกตได้ โพสต์นี้ การทดสอบ (Tukey) ไม่พบความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญระหว่างจำนวนหนูที่ได้รับการเสแสร้งหรือ 7 หรือ 14 วัน การวิเคราะห์อิมมูโนโลทล็อตต์ทางตะวันตกของ hypothalamic prepro-hcrt / orx พบว่าการลดลงอย่างมีนัยสำคัญของความหนาแน่นเชิงแสงเฉลี่ยของแถบ hcrt / orx จาก 28 d castrates เมื่อเปรียบเทียบกับการควบคุมแบบเสแสร้ง (มะเดื่อ. 2B) (t(8) = 2.99; p <0.05.)

รูป 2 

การตัดอัณฑะลด hcrt / orx-ir ในมลรัฐหนูชาย A, ตัวแทนไมโครกราฟของเซลล์ประสาทที่ติดฉลาก hcrt / orx ในซีกโลกหนึ่งแสดงการลดลงอย่างมีนัยสำคัญในจำนวนเซลล์โดย 28 d หลังจากการตัดอัณฑะ ค่าสิ่งที่ใส่เข้าไปคือค่าเฉลี่ยของจำนวนเซลล์สำหรับทั้งสองซีก±± SEM; **p <0.005. สเกลบาร์ 200 μm; fx, fornix Bimmunoblots ตะวันตกแสดงการลดลงอย่างมีนัยสำคัญใน hypothalamic prepro-hcrt / orx ที่ 28 d castrates แต่ละวงแสดงสัญญาณจากสัตว์หนึ่งในทั้งสองกลุ่ม ค่านั้นหมายถึง±ความหนาแน่นของออพติคอล (od) สำหรับ hcrt / orx ซึ่งสัมพันธ์กับβ-actin; * * * *p <0.05. C, Immunoblots สำหรับ prepro-hcrt / orx ใน 28 d castrates แสดง E2 เพื่อรักษาเนื้อหา hcrt / orx ใน hypothalamic ที่เทียบเท่ากับ shams เมื่อเปรียบเทียบกับการควบคุมด้วยน้ำมัน กลุ่มที่มีอักษรตัวพิมพ์เล็กเหมือนกันไม่แตกต่างกันอย่างมีนัยสำคัญ (p <0.05)

Estradiol คืนระดับโปรตีน hcrt / orx ใน hypothalamic

ที่ 28 d หลังจากการตัดอัณฑะหรือเสแสร้งการผ่าตัดระดับ prepro-hcrt / orx ในสัตว์ที่ได้รับการรักษาด้วยน้ำมันนั้นต่ำกว่าการให้ยาแบบอี - เอสตราไดออล2) กลุ่มที่ได้รับการจัดการ (F(3,9) = 8.47; p <0.005) (มะเดื่อ. 2C) การวิเคราะห์ความแปรปรวนทางเดียวด้วย โพสต์เฉพาะกิจ (Tukey) การทดสอบพบว่าระดับ prepro-hcrt / orx วัดเป็น sham- และ E2สัตว์ที่ได้รับการบำบัดไม่แตกต่างกันและ E2 กลุ่มไม่แตกต่างจากสัตว์ที่ได้รับ DHT

ERαนั้น coextensive กับ hcrt / orx และถูก coexpressed ในประชากรที่แตกต่างทางกายวิภาคของเซลล์ประสาท hcrt / orx

Nuclear AR ถูกกำจัดออกทางช่องท้องจากประชากรเซลล์ประสาท hcrt / orx หลักโดยแพร่กระจายทางสื่อกลางจากนิวเคลียสคันศรไปยังระบบประสาทตา ไม่ว่าในกรณีใดที่พบนิวเคลียร์ ARs และ hcrt / orx ในเซลล์ประสาทเดียวกัน (ไม่แสดงข้อมูล) แม้ว่าERαจะแสดงรูปแบบการกระจายที่คล้ายคลึงกันในขอบเขตหน้าท้องของไฮโปทาลามัส แต่การติดฉลากERαนั้นกว้างขวางกว่าในนิวเคลียสของ ventromedial ยิ่งไปกว่านั้นการติดฉลากERαพบในแถบที่เรียวเล็กของเซลล์ที่ยื่นออกมาตรงกลางจากแคปซูลภายในที่อยู่ใต้ zona incerta ไปยัง dorsomedial hypothalamus (DMH) ไม่ค่อยพบฉลากสำหรับERαในเซลล์ประสาท hcrt / orx (<1% ของประชากรที่สำรวจ) เมื่อERαถูกมองว่า colocalize ด้วย hcrt / orx โดยทั่วไปจะอยู่ในเซลล์ประสาทภายในหรือเพียงแค่ rostral ไปยัง DMHมะเดื่อ. 3) ดังนั้นแม้ว่าเซลล์ประสาท hcrt / orx จำนวนน้อยมากในมลรัฐ express แสดงว่าERα แต่มีสัดส่วนสูง (∼65%) ของเซลล์ที่อยู่ในหรือใกล้กับ DMH ทำ (มะเดื่อ. 3).

รูป 3 

ERαสามารถทำงานร่วมกันได้กับ hcrt / orx นิวเคลียสERαนั้นแทนด้วยวงกลมปิดเซลล์ประสาท hcrt / orx จะถูกแทนด้วยวงกลมเปิดและERαบวกสองเซลล์บวกกับเซลล์ hcrt / orx จะถูกแทนด้วยดาว ตัวเลขอยู่ในหน่วยมิลลิเมตรหางเสือกับ bregma AHN นิวเคลียส hypothalamic ล่วงหน้า; fx, fornix; ot, ทางเดินแก้วนำแสง; PVN นิวเคลียส paraventricular; VMH, ventromedial hypothalamus; 3v, ช่องที่สาม

การปิดกั้นตัวรับ Hcrt / orx บั่นทอนการมีเพศสัมพันธ์

เปรียบเทียบกับยานพาหนะการปรับสภาพด้วย OX1 คู่อริ SB 334867 เพิ่มเวลาแฝงหมายถึง intromit และลดความถี่การหลั่งเฉลี่ย (2 ตาราง) จับคู่-ตัวอย่าง t การทดสอบพบว่ามีผลกระทบอย่างมีนัยสำคัญของ SB 334867 ต่อความล่าช้าในการบุกรุก (t(8) = 3.31; p <0.05) และความถี่ในการหลั่ง (t(8) = 2.40; p <0.05) การรักษาด้วยยาดูเหมือนว่าจะทำให้ค่าเวลาแฝงเฉลี่ยเพิ่มขึ้นอย่างไม่มีนัยสำคัญในการเพิ่มขึ้นและอุทานและลดจำนวน intromissions เฉลี่ย2 ตาราง).

2 ตาราง 

OX1 ศัตรู SB 334867 บั่นทอนพฤติกรรมการมีเพศสัมพันธ์ของผู้ชาย

Hcrt-1 / orx-A เพิ่มอัตราการยิงเซลล์ประสาท VTA DA และกิจกรรมของประชากรและทำให้เกิดการยับยั้งการสลับขั้ว

ขนาดที่ต่ำที่สุดของ hcrt-1 / orx-A (0.014 nmol) เพิ่มขึ้นหมายถึงอัตราการยิงเซลล์ประสาท VTA DA เมื่อเปรียบเทียบกับการควบคุมด้วยยานพาหนะ (มะเดื่อ. 4B,C) (การเปรียบเทียบแบบคู่; F(1,18) = 13.83, p <0.01; หลังจากผสม 2 × 3 ANOVA F(1,10) = 13.67, p <0.005) แต่ไม่มี hcrt-1 / orx-A ขนาดอื่นที่มีผลกระทบนี้ ปริมาณนี้มีผลต่อผลกระทบหลักที่สำคัญของ hcrt / orx ต่ออัตราการยิงที่ตรวจพบใน 2 × 3 ANOVA ก โพสต์เฉพาะกิจ (Tukey) การทดสอบพบว่าไม่มีความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญในอัตราระหว่างกลุ่มควบคุม aCSF ที่ได้รับการรักษาข้ามขนาด hcrt-1.4 / orx-A ปริมาณ 1 nmol เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญกิจกรรมประชากรเซลล์ประสาท VTA DA (จำนวนของเซลล์ประสาทที่ใช้งานตามธรรมชาติที่ตรวจพบในแต่ละเส้นทางอิเล็กโทรด (มะเดื่อ. 4D) (การเปรียบเทียบแบบคู่ F(1,24) = 6.42, p <0.05; หลังจากปฏิสัมพันธ์ที่สำคัญใน 2 × 3 ผสม ANOVA F(2,10) = 16.71, p <.001) ปริมาณสูงสุดของ hcrt-1 / orx-A ที่ทดสอบ (140 nmol) ช่วยลดการทำงานของประชากรของเซลล์ประสาท DA (เซลล์ต่อแทร็ก) (มะเดื่อ. 4D) (ทางเดียววัดซ้ำ ANOVA ในปริมาณ 140 nmol F(2,6) = 12.20; p <0.01) การลดลงนี้ถูกย้อนกลับโดยการฉีด apomorphine ที่เป็นระบบ (Tukey's โพสต์เฉพาะกิจ ทดสอบ).

รูป 4 

Hcrt / orx ควบคุมกิจกรรมของเซลล์ประสาท VTA DA ในร่างกาย. Aรูปแบบของคลื่นของเซลล์ประสาท VTA DA ทั่วไปแสดงศักยภาพการกระทำที่กว้างและการแตก IS / SD B, อัตราการยิงและรูปแบบของเซลล์ประสาทที่ใช้ยานพาหนะเดียวกันแสดงกิจกรรมการระเบิดแบบทั่วไป; ด้านล่างเป็นเซลล์ประสาทที่ยิงเร็วซึ่งตรวจพบหลังจากการฉีดยาเฉพาะที่ 0.014 nmol ของ hcrt 1 / orx A (n = 4) C, Dปริมาณความสัมพันธ์ของ hcrt-1 / orx-A ในระดับท้องถิ่นต่ออัตราการยิงและกิจกรรมของประชากรของเซลล์ประสาท VTA DA Hcrt-1 / orx-A (1.4 nmol; n = 5) เพิ่มกิจกรรมของประชากร กิจกรรมประชากรลดลงหลังจาก 140 nmol ของ hcrt 1 / orx A (n = 4) กลับรายการโดย apomorphine แบบระบบ (20 ไมโครกรัม / กิโลกรัม) จำนวนภายในแต่ละแท่งจะแสดงจำนวนของเซลล์ประสาทที่บันทึกไว้ แสดงให้เห็นว่าหมายถึง± SEM * * * *p <0.05; **p <0.01.

เซลล์ประสาท VTA ที่ TH-positive ที่มี hcrt / orx appositions แสดงการเพิ่มขึ้นของ Fos-ir หลังจากมีเพศสัมพันธ์

การวิเคราะห์ความแปรปรวนแบบสองทางกับจำนวนเฉลี่ยของนิวเคลียสฟอส - ir ในเซลล์ประสาทเชิงบวกที่ไม่ใช่ TH แสดงผลอย่างมีนัยสำคัญของการรักษา (F(1,38) = 38.88; p <0.001) และระดับกายวิภาค (F(7,38) = 12.59; p <0.001) รวมถึงปฏิสัมพันธ์ที่สำคัญระหว่างสองปัจจัยนี้ (F(7,38) = 7.45; p <0.001) บ่งชี้ว่า Fos ที่เกิดขึ้นในระหว่างการมีเพศสัมพันธ์จะปรากฏเป็นพิเศษในระดับการนับล่วงหน้า สิ่งนี้ได้รับการยืนยันโดย ANOVA ทางเดียวที่ตามมาและ โพสต์เฉพาะกิจ (Tukey) การทดสอบซึ่งเผยให้เห็นระดับ Anteriormost สองระดับ (“ rostral” และ“ middle 1”) เพื่อให้มีจำนวนนิวเคลียส Fos-positive เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ (F(3,24) = 9.48; p <0.001) สิ่งเดียวกันนี้ไม่เป็นความจริงสำหรับการควบคุมแบบไม่รวมซึ่งพื้นฐาน Fos-ir ไม่แตกต่างกันตามระดับ (3 ตาราง) เปอร์เซ็นต์ของเซลล์ประสาทที่มีข้อความ TH ซึ่งมีชื่อใน hcrt / orx ไม่แตกต่างจากการทดลองทดลอง แม้กระนั้นวัดนี้ได้แสดงให้เห็นว่าลาดลาด rostrocaudal กับระดับ rostral ส่วนใหญ่มีเปอร์เซ็นต์ของเซลล์ประสาทเหล่านี้อย่างมีนัยสำคัญในทั้งสองกลุ่ม (4 ตาราง) (F(3,38) = 133.57; p <0.001) การค้นพบนี้สอดคล้องกับความหนาแน่นที่สูงขึ้นของเส้นใย hcrt / orx ที่เราพบใน VTA ด้านหน้า เปอร์เซ็นต์ของเซลล์ประสาทที่ติดฉลาก TH ที่แสดง Fos-ir (แต่ไม่มี hcrt / orx appositions) ไม่แตกต่างกันโดยการรักษาหรือตามระดับ rostrocaudal เปอร์เซ็นต์ของเซลล์ประสาท TH ที่แสดงทั้ง Fos และ hcrt / orx appositions แสดงให้เห็นผลอย่างมีนัยสำคัญของการรักษา (F(1,38) = 8.62; p <0.01), ระดับ (F(3,38) = 4.53; p <0.01) และปฏิสัมพันธ์ (F(3,38) = 4.53; p <0.01) ความแปรปรวนทางเดียวบนวิธีการจากกลุ่มทดลองแสดงให้เห็นว่า Fos-ir ที่เกิดจากการมีเพศสัมพันธ์ในเซลล์ประสาท TH ที่มีการปรากฏตัวของ hcrt / orx เกิดขึ้นอย่างเด่นชัดที่สุดภายในเซลล์ที่อยู่ใน rostral VTA (F(3,24) = 4.85; p <0.05)

3 ตาราง 

จำนวนนิวเคลียส Fos-ir ในเซลล์ที่ไม่ใช่บวก TH ของ VTA ที่ระดับ rostrocaudal สี่ระดับ

4 ตาราง 

เปอร์เซ็นต์ของเซลล์ประสาท TH ที่แสดงการอ้างอิง hcrt / orx, Fos หรือทั้งสองอย่าง

การสนทนา

Fos-ir ที่เพิ่มขึ้นในเซลล์ hcrt / orx ใน LHA หลังจากมีเพศสัมพันธ์แสดงให้เห็นว่าการเปิดใช้งานของเซลล์เหล่านี้มาพร้อมกับพฤติกรรมการสืบพันธุ์เพศชาย (มอร์แกนและเคอร์แรน 1991) ข้อมูลเหล่านี้สอดคล้องกับการศึกษา 2-deoxyglucose ก่อนหน้านี้ที่รายงานกิจกรรมการเผาผลาญที่เพิ่มขึ้นใน LHA หลังจากได้รับกลิ่นของผู้หญิงที่เป็นอันตราย (Orsini และคณะ, 1985) เอฟเฟกต์นี้อาจสะท้อนการส่ง hcrt / orx ที่ปรับปรุงแล้วในพื้นที่เทอร์มินัลเซลล์ประสาท hcrt / orx เช่น mPOA ซึ่งแสดง hcrt / orx เพื่ออำนวยความสะดวกในพฤติกรรมการมีเพศสัมพันธ์ของผู้ชาย (Gulia และคณะ, 2003). การเหนี่ยวนำ Fos ที่เกี่ยวกับเพศในเซลล์ประสาท hcrt / orx สอดคล้องกับแนวคิดที่ว่าเซลล์ประสาท hcrt / orx มีความไวต่อสารเสริมแรงตามธรรมชาติ การศึกษาล่าสุดแสดงให้เห็นว่า Fos-ir เพิ่มขึ้นในเซลล์ประสาท hcrt / orx ของหนูที่ได้รับการปรับสภาพเพื่อคาดหวังรางวัลอาหารและการเพิ่มขึ้นของ Fos-ir นี้สัมพันธ์กับคะแนนความชอบของสัตว์ในกระบวนทัศน์ความชอบสถานที่ปรับอากาศ (แฮร์ริสและคณะ 2005) การเปิดใช้งานของเซลล์ประสาท hcrt / orx อาจเป็นปรากฏการณ์ที่เกี่ยวข้องกับการให้รางวัลเพราะการศึกษาข้างต้นแสดงให้เห็นว่าการขาดการเพิ่มขึ้นอย่างแข็งแกร่งในเซลล์ Fos-ir hcrt / orx ในสัตว์ที่สัมผัสกับสิ่งแปลกใหม่กระตุ้น ผู้เขียนเหล่านี้ยังรายงานเปอร์เซ็นต์ของเซลล์ประสาท hcrt / orx ที่แสดง basal (15%), ความแปลกใหม่ที่เกิดขึ้น (18%), และอาหารที่ปรับอากาศ (50%) Fos-ir ที่เข้ากันได้กับที่เรารายงานที่นี่ (12% basal vs 40 % มีเพศสัมพันธ์) ข้อสังเกตเหล่านี้ชี้ให้เห็นว่าเซลล์ประสาท hcrt / orx เปิดใช้งานโดยได้รับรางวัลตามธรรมชาติเช่นอาหารและเพศ

กฎเอสโตรเจนของ hcrt / orx ที่อธิบายไว้ที่นี่ให้หลักฐานเพิ่มเติมสำหรับการควบคุม hypocretinergic ที่เป็นไปได้ของพฤติกรรมทางเพศชาย เป็นที่น่าสังเกตว่าช่วงเวลาของการสูญเสีย hcrt / orx ที่รายงานที่นี่เข้ากันได้กับข้อมูลพฤติกรรมคลาสสิกที่แสดงว่าพฤติกรรมทางเพศของผู้ชายใช้เวลาหลายสัปดาห์ในการลดลงหลังจากการตัดอัณฑะและยิ่งกว่านั้นคือ E2 มากกว่า DHT ที่จำเป็นสำหรับการคืนสถานะของพฤติกรรม (ฮัลล์และอัล 2006) หากไม่มีการทดลองเพิ่มเติมเราสามารถคาดเดาได้เฉพาะกลไกที่อ้างอิงการมี hcrt / orx อย่างต่อเนื่องในกรณีที่ไม่มี E2. คำอธิบายที่ง่ายที่สุดอาจเป็นได้ว่าเวลาหน่วงของการลดระดับ hcrt / orx สะท้อนความหน่วงแฝงไปถึงการสูญเสียเชิงปริมาณที่หาได้ง่ายในร้านค้า vesicular ของเครื่องส่งสัญญาณ ดังที่อธิบายไว้ด้านล่างการไม่มี ERs ในเซลล์ประสาท hcrt / orx แนะนำการควบคุมการแสดงออก hcrt / orx โดยอินพุตจากเซลล์ประสาทที่มีตัวรับเหล่านั้น เพราะการสังเคราะห์ neuropeptide (Enyeart และคณะ, 1987) การเคลื่อนไหว (Shakiryanova และคณะ, 2005) และการเปิดตัวเป็นปรากฏการณ์ที่ขึ้นอยู่กับกิจกรรม (Fulop และคณะ 2005) postcastration ใด ๆ ลดลงใน hcrt / orx ปลุกปั่นเส้นประสาท (Smith และคณะ, 2002) อาจส่งผลเสียต่อกระบวนการเหล่านี้ทำให้จลนศาสตร์ของการปล่อยเปปไทด์ชะลอตัวลงซึ่งระดับการสังเคราะห์ที่ลดลงอาจไม่ชัดเจนในบางครั้ง ดูเหมือนว่าการกระทำของสเตียรอยด์นั้นเป็นองค์ประกอบแรกของน้ำตกที่สลับซับซ้อนไม่ว่าจะด้วยกลไกใดก็ตามดูเหมือนว่าจะเป็นการรักษาระดับพื้นฐานของเปปไทด์

เซลล์ประสาท hcrt / orx ดูเหมือนจะควบคุมการบริโภคอาหารเพื่อตอบสนองต่อปัจจัยทางร่างกายที่เกี่ยวข้องกับความสมดุลของพลังงาน (Olszewski และคณะ, 2003; Burdakov และคณะ 2006) เซลล์ประสาท hcrt / orx นั้นมีความไวต่อสภาพแวดล้อมของฮอร์โมนและอาจช่วยให้เกิดพฤติกรรมการสืบพันธุ์ในลักษณะเดียวกัน ข้อมูลที่นำเสนอในที่นี้ชี้ให้เห็นว่าการแสดงออกพื้นฐาน hcrt / orx ได้รับการปรับปรุงโดย E2. ในสัตว์ที่ยังคงอยู่ในสภาพสมบูรณ์โดยการแสดงออกอย่างสมบูรณ์ของ hcrt / orx ตัวส่งสัญญาณนี้น่าจะเอื้อต่อการประมวลผลในโครงสร้างที่สำคัญต่อพฤติกรรมและรางวัลทางเพศของผู้ชาย เซลล์ hcrt / orx เพลิดเพลินกับการเชื่อมต่อซึ่งกันและกันอย่างมีนัยสำคัญกับพื้นที่เช่น mPOA, นิวเคลียสเตียงของ stria terminalis (BNST) และ VTA (Peyron et al., 1998; Sakurai และคณะ, 2005) ซึ่งเป็นที่รู้จักกันว่าเป็นสิ่งสำคัญสำหรับการแสดงออกของพฤติกรรมทางเพศชาย (สำหรับการตรวจสอบดู ฮัลล์และอัล 2006) การลดลงของ hcrt / orx หลังจากการตัดอัณฑะนั้นคาดว่าจะลดแหล่งที่มาที่สำคัญของการกระตุ้นการป้อนข้อมูลให้กับโครงสร้างเหล่านี้

ลักษณะที่การเปิดใช้งาน ER รักษานิพจน์ hcrt / orx พื้นฐานกำลังรอการศึกษาเพิ่มเติม อย่างไรก็ตามมีโอกาสที่จะได้รับแรงผลักดันจากผู้ให้การสนับสนุนจากพื้นที่แสดงอาการของERαที่ฉายไปยัง LHA (1990 และอื่น ๆ อีกมาก; โยชิดะและคณะ 2006) โดยเฉพาะโครงสร้างเหล่านั้นที่พบว่ามีการคาดคะเนที่น่าตื่นเต้น [เช่น BNST และ mPOA (จอร์ชสและแอสตันโจนส์ 2002; เฮนนี่และโจนส์ 2006)] เรารายงานว่าไม่มีการ colocalization ของ AR ด้วย hcrt / orx และแม้ว่าเซลล์ประสาท hcrt / orx สองสามตัวนั้นเป็นERα-immunopositive เซลล์เหล่านี้มีจำนวนไม่มากพอที่จะอธิบายผลกระทบที่ทำเครื่องหมายไว้ของการตัดอัณฑะและพวกมันไม่ได้ลงทะเบียน เนื้อหา hcrt / orx หลังจากตอน (มะเดื่อ 2A, 3) นอกจากนี้เรายังรายงานว่าERα-ir nuclei และ hcrt / orx neurons มักจะถูก juxtaposed เพิ่มความเป็นไปได้ของกฎระเบียบท้องถิ่นของ hcrt / orx neuronal และกิจกรรมการแสดงออกของยีนโดยเซลล์ที่มี EREB ซึ่งอยู่ใกล้เคียง ความสำคัญของกิจกรรมวงจรโลคัล excitatory ประเภทนี้ได้รับการอธิบายไว้ในระบบ hcrt / orx (Li et al., 2002) อย่างไรก็ตามจนกระทั่งการทดลองทางกายวิภาคที่จำเป็นแสดงให้เห็น synapses excitatory ทำโดยเซลล์ที่มีERαบนเซลล์ประสาท hcrt / orx, ขึ้นอยู่กับฮอร์โมน, การแสดงออกที่ขับเคลื่อนด้วยอวัยวะของ hcrt / orx ไม่สามารถสันนิษฐานได้ Hcrt การแสดงออกผันผวนรายวันทาเฮรี และคณะ, 2000) ระหว่างตั้งครรภ์Kanenishi และคณะ, 2004) และเพื่อตอบสนองต่อการควบคุมอาหารที่หลากหลาย (Cai et al., 1999; Griffond และคณะ, 1999) กลไกระดับโมเลกุลที่ควบคุมการเปลี่ยนแปลงของ hcrt การแสดงออกไม่ได้มีลักษณะดังนั้นการติดตามเส้นทางจากนิวเคลียสไปยังเมมเบรนและการตั้งชื่อโมเลกุลส่งสัญญาณผู้สมัครที่อาจส่งผลกระทบต่อการแสดงออก hcrt / orx เป็นเรื่องยากในเวลานี้

ความคิดที่ว่าการส่งสัญญาณ hcrt / orx มีส่วนร่วมในการเสริมพฤติกรรมเช่นเพศได้รับการสนับสนุนโดยข้อมูลที่แสดงความบกพร่องในพฤติกรรมทางเพศหลังการรักษาด้วย OX1 คู่อริ SB 334867 (2 ตาราง) ในขนาดที่ใกล้เคียงกับที่ใช้ในการสกัดกั้นการจัดการด้วยตนเองของโคเคนที่เกิดจากความเครียด (Boutrel et al., 2005), SB 334867 เพิ่มความล่าช้าในการหายใจอย่างมีนัยสำคัญและจำนวนการหลั่งลดลงอย่างมีนัยสำคัญบ่งชี้ว่าการปิดล้อมของการส่งผ่าน hcrt / orx อาจส่งผลกระทบต่อคุณสมบัติแรงจูงใจของผู้หญิงที่เป็นสัด

DA เป็นสารสื่อประสาทที่สำคัญสำหรับการให้รางวัลแรงจูงใจจูงใจและพฤติกรรมการปรับตัว (Berridge และ Robinson, 1998; Ikemoto และ Panksepp, 1999; ปรีชาญาณ 2004) เราพบว่ามีฤทธิ์กระตุ้นขึ้นกับปริมาณของ hcrt / orx ที่มีศักยภาพต่อกิจกรรมของเซลล์ประสาท VTA DA การค้นพบนี้สนับสนุนบทบาทของ hcrt / orx ในการเสริมแรงและแสดงให้เห็นว่าระบบ mesolimbic DA เป็นสถานที่ที่อยู่นอก mPOA ซึ่งประมาณการ hcrt / orx อาจทำหน้าที่เพื่อเสริมสร้างพฤติกรรมทางเพศของผู้ชาย ที่ขนาดต่ำสุดที่ทดสอบ (0.014 nmol) hcrt / orx เพิ่มอัตราการยิงโดยไม่ส่งผลกระทบต่อกิจกรรมของประชากร (เซลล์ / แทร็ก) (มะเดื่อ. 4C) ที่ขนาดกลาง (1.4 nmol), กิจกรรมของประชากรของเซลล์ประสาท DA เพิ่มขึ้น, แสดงให้เห็นว่าเซลล์ประสาท hyperpolarized ก่อนหน้านี้ถูกเปิดใช้งาน (มะเดื่อ. 4D) ที่ขนาดสูงสุด (140 nmol) กิจกรรมของประชากรของเซลล์ประสาท VTA DA ลดลง สิ่งที่น่าสนใจการลดลงของ hcrt / orx ในกิจกรรมของประชากรเซลล์ประสาท VTA DA ถูกกลับรายการโดยการบริหารแบบเฉียบพลันของ DA agonist apomorphine (มะเดื่อ. 4D) ในสัตว์ปกติ apomorphine hyperpolarizes DA เซลล์ประสาทโดยการเปิดใช้งานเครื่องรับและลดอัตราการยิงและกิจกรรมของประชากร อย่างไรก็ตามหลังจากการรักษาด้วยยารักษาโรคจิตเรื้อรังหรือการรักษาด้วยยาเสพติดซ้ำแล้วซ้ำอีก apomorphine สามารถลดการใช้ยาในกิจกรรมของประชากรได้ (เกรซและคณะ 1997; Shen และ Choong, 2006) Apomorphine มีความคิดที่จะย้อนกลับการยับยั้งการสลับขั้วโดยการทำสลับขั้วของเซลล์ที่มีการทำ overexcited มากพอที่จะทำการยิงต่อไป เมื่อรวมกันแล้วข้อมูลเหล่านี้ชี้ให้เห็นว่า hcrt / orx ออกฤทธิ์กระตุ้นขึ้นกับขนาดของเซลล์ประสาท VTA DA ซึ่งสัมพันธ์กับก่อนหน้านี้ ในหลอดทดลอง งาน (Korotkova และคณะ, 2003).

ความสำคัญของการลดทอนเส้นทางจาก LHA ถึง VTA ได้รับการสำรวจในการทดลองจำนวนหนึ่ง (Bielajew และ Shizgal, 1986; ชิซกาล, 1989; คุณและคณะ 2001) ข้อมูลเหล่านี้แสดงให้เห็นว่าการเพิ่มขึ้นของ NAc DA ในระหว่างพฤติกรรมกระตุ้นแรงจูงใจเชิงสมมุติฐานเช่นการมีเพศสัมพันธ์ (Pfaus et al., 1990; Wenkstern และคณะ, 1993) หรือการให้อาหาร (Hernandez และ Hoebel, 1988; Rada et al., 2005) อาจขึ้นอยู่กับการคาดการณ์จากมากไปน้อยเหล่านี้ การคาดการณ์ดังกล่าวมี hcrt / orx ได้รับการสนับสนุนโดยการทดลองที่การไหลของ NAc DA จะเพิ่มขึ้นหลังจากการฉีด intra-VTA ของ hcrt / orx (นาริตะและคณะ, 2006) ภายในไฮโปทาลามัส serotonin [5-hydroxytryptamine (5-HT)] สามารถสร้างเซลล์ประสาท hcrt / orx ได้อย่างรุนแรงใน LHA (Li et al., 2002) เลือก serotonin reuptake inhibitors หรือ 5-HT เองกลับเข้าไปใน LHA ใกล้กับประชากรหลักของเซลล์ hcrt / orx-expressing ลดการปล่อย NAc DA ที่ฐานและตัวเมียLorrain et al., 1997, 1999) ในแง่ของข้อมูลที่นำเสนอข้างต้นแสดงการเปิดใช้งานของเซลล์ประสาท hcrt / orx ในระหว่างการมีเพศสัมพันธ์และของเซลล์ประสาท VTA DA โดย hcrt / orx เรายืนยันว่าการคาดการณ์ hcrt / orx ลงไปที่ VTA สามารถไกล่เกลี่ยการปล่อย NAc DA ที่เกี่ยวข้องกับเพศ นอกจากนี้การยับยั้งการคาดการณ์เหล่านี้โดย intra-LHA 5-HT อาจอธิบายผลยับยั้งของ 5-HT ในการปลดปล่อย NAc DA และพฤติกรรมทางเพศ

สารตั้งต้นทางกายวิภาคสำหรับการโต้ตอบ hcrt / orx-DA นั้นปรากฏชัดเจนในการค้นพบของเราว่าเซลล์ประสาท VTA ที่เป็นบวก TH จะถูก innervated โดยระบบ hcrt / orx และแสดง Fos-ir ที่เพิ่มขึ้นเมื่อสัมผัสกับสิ่งเร้าที่ให้รางวัลเช่นการมีเพศสัมพันธ์ (มะเดื่อ. 5, 4 ตาราง) ผลกระทบนี้แสดงให้เห็นทั้งพฤติกรรมที่เกี่ยวข้องและความจำเพาะเชิงพื้นที่เนื่องจากการเหนี่ยวนำ Fos ในเซลล์ประสาท TH hcrt / orx-apposed ถูกตรวจพบเฉพาะใน VTA ด้านหน้าของสัตว์ที่ทำปฏิกิริยา บางทีอาจเป็นเรื่องธรรมดาที่รูปแบบการเปิดใช้งานนี้จะปรากฏในส่วนของ VTA นี้เนื่องจากเซลล์ DA มีอยู่แค่หางกระรอกไปยังประชากรหลักของเซลล์ประสาท hcrt / orx ซึ่งเส้นใยลงมาสำรวจบริเวณนี้ก่อนที่จะแยกไปยังเป้าหมายส่วนปลายในก้านสมอง (Peyron et al., 1998).

รูป 5 

การมีเพศสัมพันธ์ก่อให้เกิด Fos-ir ในเซลล์ประสาท VTA DA ที่เพิ่ม hcrt / orx A, Micrographs แสดง TH, hcrt / orx, และการติดฉลาก Fos ใน VTA ลูกศรแสดงเซลล์ประสาท TH Fos-positive ที่มีการผนวก hcrt / orx; เครื่องหมายดอกจันทำเครื่องหมายเซลล์ประสาทที่มีป้ายกำกับสองครั้งโดยไม่ต้องใช้ appositions สเกลบาร์ขนาด 45 μm Bรายละเอียดของเซลล์ประสาท TH Fos-positive ที่มีลูกศรระบุไซต์ของ hcrt / orx boutons ในการต่อท้าย Cส่วนโคโรนาแสดงระดับ rostrocaudal ของ VTA ที่ใช้ในการนับ (สีเทาเข้ม) ตัวเลขที่ด้านบนซ้ายของแต่ละส่วนอยู่ในหน่วยมิลลิเมตรจาก bregma ตัวเลขที่มุมขวาบนคือค่าประมาณ± SEM โดยประมาณของความหนาแน่นของเซลล์ในระดับนั้น กล่องแสดงพื้นที่ของไมโครกราฟใน A.

ข้อมูลเหล่านี้แนะนำเส้นทางใหม่ซึ่งสเตอรอยด์อวัยวะสืบพันธุ์อาจส่งผลกระทบต่อการป้อนข้อมูล hypothalamic ไปยังระบบ DA ที่เกี่ยวข้องในพฤติกรรมแรงจูงใจ (มะเดื่อ. 6) พวกเขายังเพิ่มพฤติกรรมทางเพศให้กับรายการพฤติกรรมที่ควบคุมโดย hcrt / orx ที่เพิ่มมากขึ้นเช่นความเร้าอารมณ์พฤติกรรมการบริโภคและการแสวงหายาเสพติด

รูป 6 

แบบจำลองสำหรับการควบคุม hcrt / orx โดย gonadal เตียรอยด์และ VTA DA โดย hcrt / orx Estradiol สังเคราะห์จาก gonadal testosterone โดย aromatase ทำหน้าที่เกี่ยวกับเซลล์ประสาทที่ประกอบด้วยERαใน BNST, mPOA และ LHA โครงสร้างเหล่านี้คาดการณ์ไปยังเซลล์ประสาท hcrt / orx hypothalamic การคาดคะเนที่กระตุ้นจากโครงสร้างเหล่านี้อาจมีผลต่อเซลล์ประสาท hcrt / orx และการแสดงออกของยีนในลักษณะที่ไวต่อสารสเตียรอยด์ การคาดการณ์ Hcrt / orx สู่ VTA ช่วยเสริมการทำงานของเซลล์ประสาทส่วนกลางสมองส่วนกลางในระหว่างพฤติกรรมทางเพศของผู้ชาย ผลกระทบนี้อาจถูกบล็อกโดยเงินทุนภายใน LHA ของ 5-HT ที่ยับยั้งกิจกรรม hcrt / orx, ลดพฤติกรรมทางเพศและการปล่อย NAc DA

เชิงอรรถ

  • ได้รับเมษายน 21, 2006
  • การแก้ไขได้รับมกราคม 23, 2007
  • ยอมรับกุมภาพันธ์ 8, 2007

  • งานนี้ได้รับการสนับสนุนโดยทุนสนับสนุนการบริการสาธารณสุขของสหรัฐอเมริกา MH073314 (JWM), MH40826 และ MH01714 (EMH) และ AA12435 (R. -YS) เราขอขอบคุณดร. ซาเมียร์ฮัจดาห์มานสำหรับคำแนะนำที่เป็นประโยชน์ของเขาและดร. ซูซินหวางสำหรับการเตรียมอุปกรณ์กล้องจุลทรรศน์

  • ควรติดต่อจดหมายโต้ตอบกับ John Muschamp, ภาควิชาจิตวิทยา, Florida State University, Tallahassee, FL 32306-1270 [ป้องกันอีเมล]

อ้างอิง

  1. ↵
    1. Berridge KC
    2. Robinson TE

    (1998) บทบาทของโดปามีนคืออะไรในการให้รางวัล: ผลกระทบทางความชอบ, การให้รางวัลการเรียนรู้หรือการกระตุ้นสิ่งจูงใจ Brain Res Brain Res Rev 28: 309 369-

  2. ↵
    1. Bielajew C
    2. ชิซกัลพี

    (1986) หลักฐานที่แสดงถึงเส้นใยจากมากไปน้อยในการกระตุ้นตัวเองของมัด forebrain ตรงกลาง Neurosci J 6: 919 929-

  3. ↵
    1. Borgland SL
    2. Taha SA
    3. Sarti F
    4. เขตข้อมูล HL
    5. Bonci A

    (2006) Orexin A ใน VTA มีความสำคัญสำหรับการเหนี่ยวนำของพลาสติกซินแนปและความไวต่อพฤติกรรมต่อโคเคน เซลล์ประสาท 49: 589 601-

  4. ↵
    1. บูทเรล B
    2. เคนนี PJ
    3. Specio SE
    4. Martin-Fardon R,
    5. Markou A
    6. Koob GF
    7. de Lecea L

    (2005) บทบาทของ hypocretin ในการเป็นสื่อกลางที่ทำให้เกิดความเครียดในพฤติกรรมการแสวงหาโคเคน Proc Natl Acad Sci สหรัฐอเมริกา 102: 19168 19173-

  5. ↵
    1. Burdakov D
    2. เซ่น LT
    3. Alexopoulos H
    4. วิลเลียมส์ RH
    5. Fearon IM
    6. โอเคลลี่ฉัน
    7. Gerasimenko O
    8. Fugger L
    9. Verkhratsky A.

    (2006) Tandem-pore K + channel ไกล่เกลี่ยการยับยั้งเซลล์ประสาท orexin ด้วยกลูโคส เซลล์ประสาท 50: 711 722-

  6. ↵
    1. คาจิอูลา AR,
    2. Hoebel BG

    (1966)“ ไซต์ตอบแทนเพื่อนร่วมทาง” ในไฮโปทาลามัสหลัง วิทยาศาสตร์ 153: 1284 1285-

  7. ↵
    1. Cai XJ
    2. วิดโดว์สัน PS,
    3. Harrold J
    4. วิลสันเอส
    5. Buckingham RE
    6. Arch JR
    7. Tadayyon M
    8. Clapham JC
    9. ไวล์ดิ้งเจ
    10. วิลเลียมส์จี

    (1999) การแสดงออกของออโทซิน Hypothalamic: การปรับระดับน้ำตาลในเลือดและการให้อาหาร โรคเบาหวาน 48: 2132 2137-

  8. ↵
    1. คลีฟแลนด์ DW
    2. ฟิสเชอร์ SG
    3. เคิร์ชเนอร์เมกะวัตต์
    4. Laemmli สหราชอาณาจักร

    (1977) การทำเพปไทด์โดยโปรตีโอไลซิสที่ จำกัด ในโซเดียมโดเดซิลซัลเฟตและการวิเคราะห์โดยเจลอิเล็กโทรโฟรีซิส J Biol Chem 252: 1102 1106-

  9. ↵
    1. เดอเลเซอา L
    2. คิลดัฟฟ์ TS
    3. Peyron C
    4. เกา X
    5. PE Foye
    6. Danielson PE
    7. ฟูกุฮาระซี
    8. แบตเทนเบิร์กเอล,
    9. เกาท์วิค VT,
    10. Bartlett FS II,
    11. Frankel WN
    12. Van den Pol AN
    13. บลูม FE
    14. Gautvik KM
    15. ซัทคลิฟฟ์ เจ.จี

    (1998) hypocretins: เปปไทด์เฉพาะมลรัฐที่มีกิจกรรม neuroexcitatory Proc Natl Acad Sci สหรัฐอเมริกา 95: 322 327-

  10. ↵
    1. DiLeone RJ
    2. Georgescu D,
    3. Nestler EJ

    (2003) เส้นประสาท hypothalamic ด้านข้างในการให้รางวัลและการติดยาเสพติด นิยายวิทยาศาสตร์ 73: 759 768-

  11. ↵
    1. Enyeart JJ
    2. Sheu SS
    3. PM Hinkle

    (1987) dihydropyridine modulators ของแรงดันไฟฟ้าที่ไวต่อช่อง Ca2 + โดยเฉพาะควบคุมการผลิตโปรแลคตินโดยเซลล์เนื้องอกต่อมใต้สมอง GH4C1 J Biol Chem 262: 3154 3159-

  12. ↵
    1. Espana RA
    2. วาเลนติโน่ RJ
    3. Berridge CW

    (2003) Fos immunoreactivity ใน hypocretin-synthesizing และ hypocretin-1 เซลล์ประสาทรับแสดง: ผลกระทบของการตื่นขึ้นมาในเวลากลางวันและกลางคืนที่เกิดขึ้นเองความเครียดและการบริหาร hypocretin-1 Neuroscience 121: 201 217-

  13. ↵
    1. Fadel J
    2. เยอรมัน AY

    (2002) สารตั้งต้นทางกายวิภาคของปฏิกิริยา orexin-dopamine: การประมาณค่า hypothalamic ด้านข้างไปยังพื้นที่หน้าท้อง Neuroscience 111: 379 387-

  14. ↵
    1. Fulop T
    2. ราดาบาห์ เอส,
    3. สมิ ธ ซี

    (2005) เครื่องส่งสัญญาณดิฟเฟอเรนเชียลขึ้นอยู่กับกิจกรรมในเซลล์ต่อมหมวกไต chromaffin ของเมาส์ Neurosci J 25: 7324 7332-

  15. ↵
    1. Fulton S
    2. Woodside B
    3. ชิซกัลพี

    (2000) การปรับวงจรรางวัลสมองโดย leptin วิทยาศาสตร์ 287: 125 128-

  16. ↵
    1. จอร์ชส F
    2. แอสตันโจนส์

    (2002) การเปิดใช้งานของเซลล์พื้นที่หน้าท้องโดยนิวเคลียสเตียงของ stria terminalis: การป้อนข้อมูลใหม่กรดอะมิโน excitatory กับโดปามีนเซลล์สมองส่วนกลาง Neurosci J 22: 5173 5187-

  17. ↵
    1. เกรซ AA
    2. Bunney BS

    (1983) อิเล็กโทรวิทยาสรีรวิทยาในเซลล์และนอกเซลล์ของเซลล์ประสาทโดปามิเนอร์จิคแบบนิโกร 1 การระบุและการจำแนกลักษณะ Neuroscience 10: 301 315-

  18. ↵
    1. เกรซ AA
    2. Bunney BS
    3. มัวร์เอช
    4. ทอดด์ CL

    (1997) บล็อก depolarization โดปามีนเซลล์เป็นแบบจำลองสำหรับการดำเนินการรักษาของยารักษาโรคจิต เทรนด์ Neurosci 20: 31 37-

  19. ↵
    1. Griffond B
    2. RISold PY
    3. Jacquemard C
    4. Colard C
    5. Fellmann D.

    (1999) ภาวะน้ำตาลในเลือดที่เกิดจากอินซูลินเพิ่มขึ้น preprohypocretin (orexin) mRNA ในพื้นที่ hypothalamic ด้านข้างของหนู Lett Neurosci 262: 77 80-

  20. ↵
    1. Gulia KK
    2. Mallick HN
    3. VM ของ Kumar

    (2003) Orexin A (hypocretin-1) แอปพลิเคชั่นที่ potium preoptic potentiates พฤติกรรมทางเพศของผู้ชายในหนู Neuroscience 116: 921 923-

  21. ↵
    1. แฮร์ริส GC
    2. แอสตันโจนส์

    (2006) ความเร้าอารมณ์และรางวัล: การแบ่งขั้วในฟังก์ชัน orexin เทรนด์ Neurosci 29: 571 577-

  22. ↵
    1. แฮร์ริส GC
    2. Wimmer M
    3. แอสตันโจนส์

    (2005) บทบาทของเซลล์ประสาท hypothalamic orexin ด้านข้างในการแสวงหารางวัล ธรรมชาติ 437: 556 559-

  23. ↵
    1. Henny P
    2. โจนส์ พ.ศ.

    (2006) Innervation of neurons orexin / hypocretin โดย GABAergic, glutamatergic หรือ cholinergic terminal forebrain ที่ฐานเป็นหลักฐานโดย immunostaining สำหรับ transs vesicular presynaptic และโปรตีนแบบนั่งร้าน J Comp Neurol 499: 645 661-

  24. ↵
    1. เฮอร์นันเดซ L
    2. Hoebel BG

    (1988) รางวัลอาหารและโคเคนเพิ่มโดปามีนนอกเซลล์ในนิวเคลียส accumbens ตามที่วัดได้จาก microdialysis นิยายวิทยาศาสตร์ 42: 1705 1712-

  25. ↵
    1. Hoebel BG

    (1969) การให้อาหารและการกระตุ้นตนเอง Ann NY Acad Sci 157: 758 778-

  26. ↵
    1. ฮัลล์ EM
    2. ไม้ RI
    3. แมคเคนน่า เค

    (2006) ในสรีรวิทยาการสืบพันธุ์ของ Knobil and Neill, Neurobiology of male sexual behavior, ed Neill JD (Elsevier, New York), Ed 3, pp 1729–1824

  27. ↵
    1. Ikemoto S
    2. Panksepp J

    (1999) บทบาทของนิวเคลียส accumbens โดปามีนในพฤติกรรมกระตุ้น: การตีความแบบรวมที่มีการอ้างอิงพิเศษเพื่อการแสวงหารางวัล Brain Res Brain Res Rev 31: 6 41-

  28. ↵
    1. Kanenishi K
    2. อุเอโนะเอ็ม
    3. Momose S
    4. คุวาบาระ H,
    5. ทานากะเอช
    6. Sato C
    7. โคบายาชิ T
    8. ชมกิจการ
    9. ซากาโมโตะเอช
    10. ฮาตาต

    (2004) การแสดงออกของ mRNA Prepro-orexin ในสมองของหนูจะเพิ่มขึ้นในระหว่างตั้งครรภ์ Lett Neurosci 368: 73 77-

  29. ↵
    1. Korotkova TM
    2. Sergeeva OA
    3. Eriksson KS
    4. ฮาสแอล
    5. RE สีน้ำตาล

    (2003) การกระตุ้นของ dopaminergic dopaminergic และ nondopaminergic neurons ในพื้นที่หน้าท้องโดย orexins / hypocretins Neurosci J 23: 7 11-

  30. ↵
    1. CM Kotz

    (2006) การบูรณาการการให้อาหารและการออกกำลังกายที่เกิดขึ้นเอง: บทบาทของ orexin Physiol Behav 88: 294 301-

  31. ↵
    1. ลี่วาย
    2. Gao XB
    3. Sakurai T
    4. Van den Pol AN

    (2002) Hypocretin / orexin กระตุ้นเซลล์ประสาท hypocretin ผ่านเซลล์ประสาทกลูตาเมตท้องถิ่น - กลไกที่มีศักยภาพสำหรับการเตรียมระบบเร้าอารมณ์ hypothalamic เซลล์ประสาท 36: 1169 1181-

  32. ↵
    1. Lorrain DS
    2. Matuszewich L
    3. ฟรีดแมน RD,
    4. ฮัลล์ EM

    (1997) สารเซโรโทนินนอกเซลล์ในพื้นที่ hypothalamic ด้านข้างจะเพิ่มขึ้นในช่วงระยะเวลา postejaculatory และมีเพศสัมพันธ์ลดลงในหนูตัวผู้ Neurosci J 17: 9361 9366-

  33. ↵
    1. Lorrain DS
    2. Riolo JV
    3. Matuszewich L
    4. ฮัลล์ EM

    (1999) ซีโรโทนินด้านข้างยับยั้งไซโตนินในนิวเคลียส Neurosci J 19: 7648 7652-

  34. ↵
    1. Mileykovskiy BY
    2. Kiyashchenko LI
    3. ซีเกล เจเอ็ม

    (2005) ความสัมพันธ์เชิงพฤติกรรมของกิจกรรมในเซลล์ประสาทที่ระบุ hypocretin / orexin เซลล์ประสาท 46: 787 798-

  35. ↵
    1. Mochizuki T
    2. ครอคเกอร์ A,
    3. แม็คคอร์แม็กเอส
    4. Yanagisawa M
    5. Sakurai T
    6. สแกมเมลล์ TE

    (2004) ความไม่แน่นอนของสถานะพฤติกรรมในหนูที่หลุดออกจาก orexin Neurosci J 24: 6291 6300-

  36. ↵
    1. มอร์แกน JI
    2. Curran T

    (1991) การกระตุ้นการมีเพศสัมพันธ์ในระบบประสาท: การมีส่วนร่วมของโปรโต - oncogenes fos และมิถุนายน Annu Rev Neurosci 14: 421 451-

  37. ↵
    1. นาคามูระที
    2. Uramura K
    3. นัมบูที
    4. Yada T
    5. โกโตะเค
    6. Yanagisawa M
    7. ซากุไร

    (2000) hyperlocomotion ที่เกิดจาก Orexin และ stereotypy นั้นถูกสื่อกลางโดยระบบ dopaminergic สมอง Res 873: 181 187-

  38. ↵
    1. นัมบูที
    2. Sakurai T
    3. มิซูคามิเค
    4. โฮโซยา Y
    5. Yanagisawa M
    6. ไปที่ K

    (1999) การกระจายของเซลล์ประสาท orexin ในสมองหนูผู้ใหญ่ สมอง Res 827: 243 260-

  39. ↵
    1. นาริตะเอ็ม
    2. Nagumo Y
    3. Hashimoto S
    4. Khotib J
    5. Miyatake M
    6. Sakurai T
    7. Yanagisawa M
    8. นาคามาชิที
    9. ชิโอดะ S
    10. ซูซูกิ T

    (2006) การมีส่วนร่วมโดยตรงของระบบ orexinergic ในการเปิดใช้งานทางเดินโดปามีน mesolimbic และพฤติกรรมที่เกี่ยวข้องที่เกิดจากมอร์ฟีน Neurosci J 26: 398 405-

  40. ↵
    1. Olszewski PK
    2. หลี่ดี
    3. เกรซ MK
    4. Billington CJ
    5. CM Kotz
    6. Levine AS

    (2003) พื้นฐานทางประสาทของผล orexigenic ของ ghrelin ที่ทำหน้าที่ภายในมลรัฐด้านข้าง เปปไทด์ 24: 597 602-

  41. ↵
    1. Orsini JC
    2. Jourdan F
    3. คูเปอร์ HM
    4. Monmaur P.

    (1985) อิทธิพลของกลิ่นไม่พึงประสงค์ของผู้หญิงที่มีต่อไฮโปทาลามัสด้านข้างในหนูตัวผู้ การวิเคราะห์ Deoxyglucose แบบกึ่งปริมาณ Physiol Behav 35: 509 516-

  42. ↵
    1. Paxinos G
    2. วัตสันซี

    (1998) สมองหนูในพิกัด stereotaxic (วิชาการนิวยอร์ก), Ed 4

  43. ↵
    1. Peyron C
    2. Tighe DK
    3. Van den Pol AN
    4. เดอเลเซอา L
    5. เฮลเลอร์ HC
    6. Sutcliffe JG
    7. คิลดัฟฟ์ TS

    (1998) เซลล์ประสาทที่มีโครงการ hypocretin (orexin) ไปยังระบบประสาทหลายระบบ Neurosci J 18: 9996 10015-

  44. ↵
    1. Pfaus JG
    2. Damsma G
    3. Nomikos GG
    4. Wenkstern DG,
    5. Blaha CD
    6. Phillips AG
    7. Fibiger HC

    (1990) พฤติกรรมทางเพศช่วยเพิ่มการส่งโดปามีนส่วนกลางในหนูตัวผู้ สมอง Res 530: 345 348-

  45. ↵
    1. พัท SK
    2. Sato S
    3. Riolo JV
    4. ฮัลล์ EM

    (2005) ผลของฮอร์โมนเทสโทสเตอโรนต่อการมีเพศสัมพันธ์, โดพามีนอยู่ตรงกลาง, และ NOS-immunoreactivity ในหนูเพศผู้ตอน Behav Horm 47: 513 522-

  46. ↵
    1. Rada P
    2. Avena NM
    3. Hoebel BG

    (2005) การดื่มสุราประจำวันกับน้ำตาลซ้ำ ๆ ต้องปล่อยโดปามีนในเปลือก accumbens Neuroscience 134: 737 744-

  47. ↵
    1. ม้วน ET
    2. เบอร์ตัน MJ
    3. โมราเอฟ

    (1980) การวิเคราะห์ระบบประสาทของรางวัลการกระตุ้นสมองในลิง สมอง Res 194: 339 357-

  48. ↵
    1. Sakurai T
    2. อะมิมิยะ
    3. Ishii M
    4. Matsuzaki I
    5. Chemelli RM
    6. ทานากะเอช
    7. Williams SC
    8. ริชาร์ดสัน JA
    9. Kozlowski GP
    10. วิลสันเอส
    11. Arch JR
    12. Buckingham RE
    13. เฮย์เนส AC
    14. Carr SA
    15. อันนันอาร์เอส
    16. McNulty DE
    17. Liu WS
    18. Terrett JA
    19. Elshourbagy NA
    20. ดีเจเบิร์กมา
    21. เอตอัล

    (1998) Orexins และตัวรับ orexin: ครอบครัวของ neuropeptides hypothalamic และตัวรับโปรตีนคู่ G ที่ควบคุมพฤติกรรมการให้อาหาร เซลล์ 92: 573 585-

  49. ↵
    1. Sakurai T
    2. นากาตะอา
    3. ยามานากะ A
    4. Kawamura H
    5. สึจิโนะ N,
    6. Muraki Y
    7. Kageyama H
    8. Kunita S
    9. Takahashi S
    10. โกโตะเค
    11. โคยาม่าวาย
    12. ชิโอดะ S
    13. ยานางิซาวะม

    (2005) การป้อนข้อมูลของเซลล์ประสาท orexin / hypocretin เปิดเผยโดย tracer เข้ารหัสพันธุกรรมในหนู เซลล์ประสาท 46: 297 308-

  50. ↵
    1. Saper CB
    2. สแกมเมลล์ ทีอี,
    3. ลูเจ

    (2005) กฎการควบคุม Hypothalamic ของการนอนหลับและจังหวะ circadian ธรรมชาติ 437: 1257 1263-

  51. ↵
    1. Sato S
    2. Braham CS
    3. พัท SK
    4. ฮัลล์ EM

    (2005) การสังเคราะห์เซลล์ประสาทไนตริกออกไซด์และสเตียรอยด์อวัยวะสืบพันธุ์ใน MPOA ของหนูตัวผู้: การปรับสภาพร่วมและการฟื้นฟูฮอร์โมนเทสโทสเตอโรนของการมีเพศสัมพันธ์และ nNOS-immunoreactivity สมอง Res 1043: 205 213-

  52. ↵
    1. ชาคีรียาโนวา ดี
    2. ทัลลี A
    3. Hewes RS
    4. Deitcher DL
    5. เลวีแทน อีเอส

    (2005) การปลดปล่อยกิจกรรมขึ้นอยู่กับถุง synaptic neuropeptide Nat Neurosci 8: 173 178-

  53. ↵
    1. Shen RY
    2. ชองเคซี

    (2006) การปรับตัวที่แตกต่างกันในเซลล์ประสาทในพื้นที่หน้าท้องของโดปามีนในการควบคุมและหนูที่สัมผัสกับเอธานอลหลังการรักษาเมธิลฟีนิเดต จิตเวช Biol 59: 635 642-

  54. ↵
    1. ชิซกัลพี

    (1989) ไปสู่การวิเคราะห์เซลล์ของการกระตุ้นด้วยตนเองในกะโหลกศีรษะ: การมีส่วนร่วมของการศึกษาการชน Neurosci Biobehav Rev 13: 81 90-

  55. ↵
    1. ซีเกล เจเอ็ม

    (2004) Hypocretin (orexin): บทบาทในพฤติกรรมปกติและประสาทวิทยา Annu Rev Psychol 55: 125 148-

  56. ↵
    1. Simerly RB
    2. ช้างซี
    3. Muramatsu M
    4. สเวนสัน LW

    (1990) การกระจายตัวของแอนโดรเจนและเซลล์รับเอสโตรเจนที่ประกอบด้วย mRNA ในสมองของหนู: การศึกษาการผสมพันธุ์ในแหล่งกำเนิด J Comp Neurol 294: 76 95-

  57. ↵
    1. สมิ ธ MD,
    2. Jones LS
    3. Wilson MA

    (2002) ความแตกต่างทางเพศในความตื่นเต้นง่ายชิ้น hippocampal: บทบาทของฮอร์โมนเพศชาย Neuroscience 109: 517 530-

  58. ↵
    1. Sutcliffe JG
    2. de Lecea L

    (2002) The hypocretins: การตั้งค่าขีด จำกัด arousal Nat Rev Neurosci 3: 339 349-

  59. ↵
    1. สเวนสัน LW

    (2004) แผนที่สมอง III: โครงสร้างของสมองหนู (Elsevier, New York), Ed 3

  60. ↵
    1. สเวนสัน LW
    2. ซานเชซ - วัตต์ G,
    3. วัตต์ AG

    (2005) การเปรียบเทียบของฮอร์โมนที่เน้นการสร้างเม็ดสีเมลานินและ hypocretin / orexin mRNA รูปแบบการแสดงออกในรูปแบบการบรรจุใหม่ของโซน hypothalamic ด้านข้าง Lett Neurosci 387: 80 84-

  61. ↵
    1. Taheri S
    2. Sunter D
    3. Dakin C
    4. Moyes S
    5. ซีล L,
    6. การ์ดิเนอร์เจ
    7. Rossi M
    8. Ghatei M
    9. บลูม

    (2000) การเปลี่ยนแปลงในเวลากลางวันใน orexin A immunoreactivity และ prepro-orexin mRNA ในระบบประสาทส่วนกลางของหนู Lett Neurosci 279: 109 112-

  62. ↵
    1. Thorpe AJ
    2. เคลียร์ JP
    3. Levine AS
    4. CM Kotz

    (2005) orexin บริหารส่วนกลาง A เพิ่มแรงจูงใจในการอัดเม็ดของหนูในหนู Psychopharmacology (Berl) 182: 75 83-

  63. ↵
    1. วอฮ์นอี
    2. ฟิชเชอร์ AE

    (1962) พฤติกรรมทางเพศของผู้ชายที่เกิดจากการกระตุ้นด้วยไฟฟ้าในกะโหลกศีรษะ วิทยาศาสตร์ 137: 758 760-

  64. ↵
    1. Wenkstern D
    2. Pfaus JG
    3. Fibiger HC

    (1993) การส่งโดปามีนเพิ่มขึ้นในนิวเคลียสของหนูตัวผู้ในช่วงแรกที่สัมผัสกับหนูเพศเมีย สมอง Res 618: 41 46-

  65. ↵
    1. ปรีชาญาณ RA

    (2004) โดปามีนการเรียนรู้และแรงจูงใจ Nat Rev Neurosci 5: 483 494-

  66. ↵
    1. โยชิดะเค
    2. แม็คคอร์แม็กเอส
    3. Espana RA
    4. ครอคเกอร์ A,
    5. สแกมเมลล์ TE

    (2006) ผู้ให้คำปรึกษากับเซลล์ประสาท orexin ของสมองหนู J Comp Neurol 494: 845 861-

  67. ↵
    1. คุณ ZB
    2. เฉิน YQ
    3. ปรีชาญาณ RA

    (2001) การปล่อยโดปามีนและกลูตาเมตในนิวเคลียส accumbens และพื้นที่หน้าท้องของหนูหลังจากการกระตุ้นตนเองด้วย hypothalamic ด้านข้าง Neuroscience 107: 629 639-

บทความที่อ้างถึงบทความนี้