Tek farlı bir dorsal striatumdan metamfetaminle aktive olan Fos-eksprese eden nöronlardaki moleküler değişikliklerin floresan aktive hücre sınıflandırma (FACS) (2013) kullanılarak saptanması

Metamfetamin ve diğer ilaçlar beyindeki tüm nöronların küçük bir kısmını aktive eder. Daha önce, nöral aktivite markeri Fos'i eksprese eden aktive edilmiş nöronlarda seçici olarak indüklenen moleküler değişiklikleri karakterize etmek için floresansla aktive olan hücre sınıflandırma (FACS) bazlı bir metot geliştirdik. Ancak, bu yöntem birçok sıçandan havuz örneklerini gerektirir. Şimdi, Fos-eksprese dorsal striatal nöronlardaki moleküler değişiklikleri, multipleks amplifikasyon öncesi bir strateji kullanarak tek bir sıçandan karakterize etmek için modifiye edilmiş bir FACS-bazlı bir metodu tarif ediyoruz.

Fos ve NeuN (bir nöronal belirteç) immünohistokimyası, dorsal striatum nöronlarının% 5-6'inin, akut metamfetamin enjeksiyonlarından (90 mg / kg, ip) 5 dakika sonra aktive edildiğini, 0.5'ten% X daha azının salin enjeksiyonlarıyla aktive edildiğini gösterir.

NeuN etiketli nöronları Fos-pozitif ve Fos-negatif nöronlara ayırmak için FACS kullandık ve RT-qPCR kullanılarak beş Fos-pozitif nörondan az olan mRNA ekspresyonunu değerlendirdik. Metamfetamin, erken erken gen yay, homer-3, c-fos, fosB ve izoformlarının 20-2-kat artışlarını uyardı (ΔfosB ve yeni bir isoform ΔfosB-2) Fos-pozitif fakat Fos-negatif nöronlarda değil. Erken erken gen mRNA indüksiyonu, tek dorsal striatum homojenatlarından gelen sıralanmamış numunelerde değerlendirildiğinde 10 kat daha düşük veya mevcut değildi. Değiştirilmiş yöntemimiz, karmaşık bağımlılık modellerinde, uyuşturucular veya uyuşturucuyla ilişkili ipuçları tarafından aktive edilen nöronlardaki benzersiz moleküler değişiklikleri incelemeyi mümkün kılar.

Metamfetamin ve diğer ilaçlar beyindeki tüm nöronların küçük bir kısmını aktive eder. Burada, nöral aktivite markeri Fos'i eksprese eden aktif nöronlarda seçici olarak indüklenen moleküler değişiklikleri karakterize etmek için geliştirilmiş bir yöntem bildiririz. Tek bir sıçan dorsal striatumundan 5 Fos-eksprese eden nöronların akut metamfetaminle indüklenmiş gen ekspresyonunu değerlendirmek için hedeflenmiş PCR ön amplifikasyonuyla birlikte FACS kullandık. Metamfetamin, Fos-pozitif nöronlarda Fos-pozitif nöronlarda, erken erken genlerin (IEG'ler) 3-20-kat artışlarını indüklemiştir. Hedeflenen PCR ön amplifikasyonu, karmaşık bağımlılık modellerinde ilaçlar veya ilaçla ilişkili ipuçları ile aktive edilen nöronlardaki benzersiz moleküler değişikliklerin çalışılmasını mümkün kılar.

2013 yayınlandı. Bu makale bir ABD Hükümeti çalışmasıdır ve ABD'de kamu malıdır.