Ipa ti ibanujẹ ΔFOSB lori opioid ati iyasọtọ olugbawọle ti oluṣan ngba ni ibẹrẹ ninu 2011 (nucleus accumbens) (XNUMX)

Neuropharmacology. 2011 Dec;61(8):1470-6. doi: 10.1016/j.neuropharm.2011.08.046.

Sim-Selley LJ, Cassidy MP, Sparta A, Zachariou V, Nestler EJ, Selley DE.

orisun

Department of Pharmacology and Toxicology and Institute for Drug and alcohol Studies, Virginia Commonwealth University School of Medicine, Richmond, VA 23298, USA.

áljẹbrà

Ipin ifọrọwerọ iduroṣinṣin ΔFosB jẹ ifasilẹ ninu awọn accumbens nucleus (NAc) nipasẹ ifihan onibaje si ọpọlọpọ awọn oogun ti ilokulo, ati ikosile transgenic ti ΔFosB ninu striatum ṣe alekun awọn ohun-ini ere ti morphine ati kokeni.e. Sibẹsibẹ, ipilẹ mechanistic fun awọn akiyesi wọnyi jẹ oye ti ko pe. A lo awoṣe asin bitransgenic pẹlu ikosile inducible ti ΔFosB in dopamine D (1) olugba / dynorphin-ti o ni awọn neuronu striatal lati pinnu ipa ti ikosile ΔFosB lori opioid ati ami ifihan olugba cannabinoid ninu NAc. Awọn abajade fihan pe iṣẹ amuaradagba G-amuaradagba mu opioid ati idinamọ ti adenylyl cyclase ni a mu dara si ni NAc ti awọn eku ti o ṣafihan ΔFosB. Bakanna, idinamọ kappa opioid ti adenylyl cyclase ni ilọsiwaju ninu awọn eku ti n ṣalaye ΔFosB. Ni idakeji, ifihan agbara-igbasilẹ olugba cannabinoid ko yatọ laarin awọn eku overexpressing ΔFosB ati awọn eku iṣakoso. TAwọn awari hese daba pe ami ifihan olugba cannabinoid ati cannabinoid jẹ iyatọ ti o yatọ nipasẹ ikosile ti ΔFosB, ati tọka pe ikosile ΔFosB le ṣe agbejade diẹ ninu awọn ipa rẹ nipasẹ imudara mu ati ami ifihan olugba opioid kappa ni NAc.

koko: G-amuaradagba, adenylyl cyclase, striatum
Lọ si:

1. ifihan

Awọn olugba opioid ati CB cannabinoid1 awọn olugba (CB1R) jẹ awọn ibi-afẹde neurobiological fun awọn kilasi oogun meji ti a lo lọpọlọpọ ti o pẹlu morphine, heroin ati awọn opioids oogun, ati marijuana (Δ).9-tetrahydrocannabinol (THC)), lẹsẹsẹ. Awọn ipa nla ti opioids ati awọn cannabinoids jẹ ilaja nipasẹ awọn olugba G-protein-papọ ti o mu ṣiṣẹ ni akọkọ Gi / o awọn ọlọjẹ ati gbejade awọn idahun ipa ipa isalẹ bi idinamọ ti adenylyl cyclase (Awọn ọmọde, ọdun 1991, Awọn ọmọde, ati al., 1992, Howlett, ati al., Ọdun 2002). Mọto, ailagbara iranti ati awọn ipa psychoactive ti Δ9-THC jẹ iṣelọpọ nipasẹ CB1R (Huestis, ati al., 2001, Zimmer, ati al., 1999), eyiti o pin kaakiri ni ọpọlọ, pẹlu awọn ipele giga ninu ganglia basal, hippocampus ati cerebellum (Herkenham, ati al., 1991). Analgesic ati awọn ipa ti o ni ẹsan ti iwulo ile-iwosan pupọ julọ ati awọn oogun opioid ilokulo jẹ ilaja nipataki nipasẹ awọn olugba mu opioid (MOR) (Mathes, ati al., 1996), eyiti o jẹ idarato ninu eto limbic ati ọpọlọ (Mansour, ati al., 1994). Eto mesolimbic, ti o ni awọn asọtẹlẹ dopaminergic lati agbegbe ventral tegmental (VTA) si awọn accumbens nucleus (NAc), ṣe ipa pataki ninu awọn ipa ere ti opioids ati cannabinoids (Bozarth ati Ọlọgbọn, ọdun 1984, Vaccarino, ati al., 1985, Zangen, ati al., 2006), bakanna pẹlu awọn oogun ilokulo miiran (Koob ati Volkow, 2010). Pẹlupẹlu, opioid endogenous ati awọn eto cannabinoid ṣe alabapin ninu awọn ipa ere ti awọn kilasi pupọ ti awọn oogun psychoactive (Maldonado, ati al., 2006, Trigo, ati al., 2010). Bayi, o ṣe pataki lati ṣe alaye awọn ilana nipasẹ eyiti opioid ati CB1Awọn ifihan agbara R jẹ ofin ni NAc.

Ibeere aringbungbun kan ninu aaye ilokulo oogun jẹ lati ṣe idanimọ awọn ọlọjẹ ti o ṣe agbedemeji iyipada lati nla si awọn ipa igba pipẹ ti awọn oogun psychoactive. ifosiwewe transcription AP-1 ΔFosB jẹ iyanilenu pataki nitori pe o jẹ ọja iyatọ splice ti o ni iduroṣinṣin ti fosb Jiini ti o ṣajọpọ lori ifihan leralera si awọn oogun ilokulo tabi awọn ere adayeba (McClung, ati al., Ọdun 2004, Nestler, 2008, Nestler, ati al., Ọdun 1999). A ti rii pe ΔFosB ti fa ni ọpọlọ ni atẹle ifihan leralera si morphine, Δ9-THC, kokeni tabi ethanol, pẹlu oogun kọọkan ti n ṣe agbekalẹ ilana agbegbe alailẹgbẹ ti ikosile ΔFosB (Perrotti, ati al., 2008). Wiwa ti o ni ibamu laarin awọn oogun ni pe ΔFosB ti ni ifarasi giga ni striatum, nibiti gbogbo awọn oogun mẹrin ti fa ΔFosB ni ipilẹ NAc ati gbogbo ayafi Δ9-THC ikosile pataki ti o fa ni ikarahun NAc ati caudate-putamen.

Awọn ijinlẹ elegbogi fihan pe iṣakoso ifowosowopo ti dopamine D1 olugba (D1R) antagonist SCH 23390 dina ΔFosB fifa irọbi ni NAc ati caudate-putamen ni atẹle kokeni aarin tabi iṣakoso morphine, ni iyanju pataki pataki ti D1Awọn iṣan ti n ṣalaye R (Muller ati Unterwald, 2005, Nye, ati al., 1995). Ipa ti ifasilẹ ΔFosB lori awọn ihuwasi agbedemeji oogun ti ṣe iwadii nipa lilo awọn eku bitransgenic ti o ṣalaye ΔFosB ni awọn olugbe neuronal kan pato ti NAc ati striatum dorsal (Chen, ati al., ọdun 1998). Awọn eku ti o ṣalaye ΔFosB ni dynorphin/D1Awọn neuronu rere R ni NAc ati dorsal striatum (laini 11A) ṣafihan awọn idahun ti o yipada si awọn oogun ilokulo, ni pataki ifamọ imudara si awọn ipa ere ti kokeni tabi morphine (Colby, ati al., Ọdun 2003, Kelz, ati al., 1999, Zachariou, ati al., 2006). Awọn iyipada wọnyi waye ni laisi awọn iyipada ninu awọn ipele ti MOR tabi awọn ipin-ọpọlọpọ G-amuaradagba. Sibẹsibẹ, awọn ipele mRNA dynorphin dinku ni NAc ti ΔFosB ti n ṣalaye awọn eku (Zachariou, ati al., 2006), ni iyanju pe ibi-afẹde kan ti ΔFosB jẹ jiini ti n ṣe koodu peptide opioid endogenous. Ifilọlẹ ΔFosB le tun ṣe awọn ayipada ihuwasi nipasẹ ṣiṣatunṣe ami ifihan olugba ni NAc, ṣugbọn iṣeeṣe yii ko ti ṣe iwadii. Nitorinaa, awọn ijinlẹ lọwọlọwọ lo awoṣe asin bitransgenic lati pinnu boya ijẹẹmu ti ΔFosB ni dynorphin/D1R ti o ni awọn neurons striatal n ṣe iyipada iṣẹ-amuaradagba G-amuaradagba ti MOR ati idinamọ adenylyl cyclase ti MOR-ati KOR ni NAC. Ipa ti ΔFosB lori CB1R-mediated G-amuaradagba aṣayan iṣẹ-ṣiṣe ni a tun ṣe ayẹwo nitori Δ9-THC iṣakoso nfa ΔFosB ni NAc (Perrotti, ati al., 2008) ati eto endocannabinoid ni a mọ lati ṣe ilana awọn iyika ere ọpọlọ (Gardner, 2005, Maldonado, ati al., 2006), ṣugbọn ipa ti ΔFosB lori eto endocannabinoid ko ti ṣe iwadii.

Lọ si:

2. Awon nkan ise nkan ati awon ona lati se nkan

2.1. Reagents

[35S] GTPγS (1250 Ci/mmol), [α-32P] ATP (800 Ci/mmol) ati [3H] cAMP (26.4 Ci/mmol) ni a ra lati PerkinElmer (Shelton, CT). ATP, GTP, GDP, cAMP, bovine serum albumin, creatine phosphokinase, papaverine, imidazole ati WIN-55212-2, ni a ra lati ọdọ Sigma Aldrich (St. Louis, MO). GTPγS jẹ rira lati ọdọ Roche Diagnostic Corporation (Chicago, IL). DAMGO ti pese nipasẹ Eto Ipese Oògùn ti National Institute on Drug Abuse (Rockville, MD). Econo-1 scintillation ito ti a gba lati Fisher Scientific (Norcross, GA). Ecolite scintillation omi ti a gba lati ICN (Costa Mesa, CA). Gbogbo awọn kemikali miiran ni a gba lati Sigma Aldrich tabi Fisher Scientific.

2.2. Eku

Awọn eku bitransgenic akọ ti o wa lati NSE-tTA (laini A) × TetOp-ΔFosB (laini 11) ni ipilẹṣẹ bi a ti ṣalaye ninu Kelz et al. (Kelz, ati al., 1999). Awọn eku bitransgenic ni a loyun ati dide lori doxycycline (100 µg ninu omi mimu) lati dinku ikosile transgene. Ni ọsẹ mẹjọ ti ọjọ ori, a yọ doxycycline kuro ninu omi fun idaji awọn eku lati gba ikosile transgene laaye, lakoko ti o jẹ pe awọn eku ti o ku ni a tọju lori doxycycline lati dinku transgene. A gba awọn ọpọlọ ni awọn ọsẹ 8 lẹhinna, akoko eyiti awọn ipa transcriptional ti ΔFosB jẹ o pọju (McClung ati Nestler, 2003). Laini asin transgenic keji ti a lo ninu eyiti Δc-Jun, atako odi ti c-Jun, ti ṣafihan ni D1R/dynorphin ati D2Awọn sẹẹli R/enkephalin ti striatum, hippocampus ati kotesi parietal (Peakman, ati al., 2003). C-Jun ati awọn ọlọjẹ idile Jun ti o jọmọ dimerize pẹlu awọn ọlọjẹ idile Fos ati sopọ mọ aaye AP-1 ti awọn jiini ibi-afẹde lati ṣe ilana transcription. Bibẹẹkọ, didasilẹ ti N-terminus ti c-Jun (Δc-Jun) jẹ ki o jẹ alailagbara transcriptionly eka ati pe o ni anfani lati ṣe idiwọ idinamọ DNA ti awọn eka AP-1 ti nṣiṣe lọwọ. Awọn eku bitransgenic akọ ti o wa lati NSE-tTA (laini A) × TetOp-FLAG-Δc-Jun (laini E) ni ipilẹṣẹ gẹgẹbi a ti ṣalaye ninu Peakman et al. (Peakman, ati al., 2003). Awọn eku bitransgenic ni a loyun ati dide lori doxycycline (100 µg ninu omi mimu) lati dinku ikosile transgene. Pups ti gba ọmu ni awọn ọsẹ 3, genotyped, ati pin si awọn ẹgbẹ, pẹlu idaji itọju lori omi ti o ni doxycycline ati idaji lori omi mimu deede lati fa ikosile FLAG-Δc-Jun. A gba awọn ọpọlọ ni awọn ọsẹ 6 lẹhinna, akoko eyiti awọn ipele ti o pọju ti FLAG-Δc-Jun ti ni iwọn (Peakman, ati al., 2003). Gbogbo awọn ilana ẹranko ni a ṣe ni ibamu pẹlu Awọn ile-iṣẹ ti Orilẹ-ede ti Itọsọna Ilera fun Itọju ati Lilo Awọn ẹranko yàrá.

2.3. Igbaradi Membrane

Awọn ọpọlọ ti wa ni ipamọ ni -80 ° C titi di ọjọ ayẹwo. Ṣaaju ki o to ṣe ayẹwo, ọpọlọ kọọkan ti yo, ati pe NAc ti pin lori yinyin. Ayẹwo kọọkan jẹ isokan ni 50 mM Tris-HCl, 3 mM MgCl2, 1 mM EGTA, pH 7.4 (membrane buffer) pẹlu 20 strokes lati kan homogenizer gilasi ni 4°C. Awọn homogenate jẹ centrifuged ni 48,000 × g ni 4°C fun iṣẹju mẹwa 10, ti a tun daduro ni ifipamọ awo awọ, ti a tun fi sii ni 48,000 × g ni 4°C fun iṣẹju 10 ati tun daduro ni 50 mM Tris-HCl, 3 mM MgCl2, 0.2 mM EGTA, 100 mM NaCl, pH 7.4 (assay saarin). Awọn ipele amuaradagba jẹ ipinnu nipasẹ ọna Bradford (Bradford, ọdun 1976) lilo bovine serum albumin (BSA) gẹgẹ bi apewọn.

2.4. Agonistimuti35S] GTPγS Asopọmọra

Membranes ti wa ni iṣaju fun iṣẹju mẹwa 10 ni 30 ° C pẹlu adenosine deaminase (3 mU/ml) ni ifipamọ ayẹwo. Awọn membranes (5–10 µg amuaradagba) lẹhinna ni idawọle fun wakati 2 ni 30°C ni ifipamọ idanwo ti o ni 0.1% (w/v) BSA, 0.1 nM [35S] GTPγS, 30 µM GDP ati adenosine deaminase (3 mU/ml) pẹlu ati laisi awọn ifọkansi ti o yẹ ti DAMGO tabi WIN55,212-2. Isopọmọ ti kii ṣe pataki ni a wọn pẹlu 20 µM GTPγS. Iṣeduro naa ti pari nipasẹ sisẹ nipasẹ awọn asẹ fiber gilasi GF/B, atẹle nipa awọn fifọ 3 pẹlu 3 milimita yinyin-tutu 50 mM Tris-HCl, pH 7.4. Iṣeduro radioactivity jẹ ipinnu nipasẹ omi scintillation spectrophotometry lẹhin isediwon alẹ moju ti awọn asẹ ni Econo-1 scintillation ito.

2.5. Adenylyl Cyclase Assay

Membranes (5-25 µg amuaradagba) ni a ti ṣaju pẹlu adenosine deaminase gẹgẹbi a ti salaye loke, lẹhinna ni idawọle fun iṣẹju 15 ni 30 ° C ni iwaju tabi isansa ti 1µM forskolin, pẹlu tabi laisi DAMGO, U50,488H tabi WIN55,212-2, ninu ifipamọ idanwo ti o ni 50 µM ATP, [α-32P] ATP (1.5 µCi), 0.2 mM DTT, 0.1% (w/v) BSA, 50 µM cyclic AMP, 50 µM GTP, 0.2 mM papaverine, 5 mM phosphocreatine, 20 sipo / ml creatine phosphokinase (adeneUde phosphokinase m / milimita) ni iwọn ipari ti 3 µl. Labẹ awọn ipo wọnyi, lapapọ [α-32P] cAMP ti gba pada ni gbogbogbo kere ju 1% ti lapapọ iye ti fikun [α-32P] ATP ninu ayẹwo kọọkan. Idahun naa ti pari nipasẹ sise fun iṣẹju 3 ati [32P]Cyclic AMP ti ya sọtọ nipasẹ ọwọn meji (Dowex ati alumina) ti Salomon (Solomoni, ọdun 1979). [3H] cAMP (10,000 dpm) ni a fi kun si ọpọn kọọkan ṣaaju kiromatografi iwe bi odiwọn inu. Radioactivity jẹ ipinnu nipasẹ omi scintillation spectrophotometry (ṣiṣe 45% fun 3H) lẹhin 4.5 milimita ti eluate ti tuka ni 14.5 milimita ti omi ito scintillation Ecolite.

2.6. Atọjade data

Ayafi ti bibẹẹkọ itọkasi, data jẹ ijabọ bi awọn iye itumọ ± SE ti awọn adanwo lọtọ 4-8, ọkọọkan eyiti a ṣe ni ẹẹmẹta. Nẹtiwọki-simula [35S] GTPγS abuda ti wa ni iṣiro bi agonist-imurasilẹ abuda iyokuro basali abuda. Iṣẹ ṣiṣe adenylyl cyclase Net forskolin-stimulated ti wa ni asọye bi iṣẹ ṣiṣe itara forskolin – iṣẹ ṣiṣe basali (pmol/mg/min). Idalọwọduro ogorun ti forskolin-stimulated adenylyl cyclase aṣayan iṣẹ-ṣiṣe ti wa ni asọye bi (net forskolin-stimulated aṣayan iṣẹ-ṣiṣe ni awọn isansa ti agonist – net forskolin-stimulated aṣayan iṣẹ-ṣiṣe ni iwaju agonist/net forskolin-stimulated aṣayan iṣẹ-ṣiṣe ni awọn isansa ti agonist) × 100. Gbogbo. awọn itupale iṣipopada ati awọn iṣiro iṣiro ni a ṣe ni lilo Prism 4.0c (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA). Awọn ipa ifọkansi ni a ṣe atupale nipasẹ ipadasẹhin ti kii ṣe laini lati gba EC50 ati Emax awọn iye. Pataki iṣiro ti data ipa ifọkansi jẹ ipinnu nipasẹ itupalẹ ọna meji ti iyatọ (ANOVA), ni lilo iwọn lilo agonist ati ifilọlẹ pupọ (tan tabi pipa) gẹgẹbi awọn ifosiwewe akọkọ. Pataki iṣiro ti awọn iye-ipin-fit (Emax tabi EC50) jẹ ipinnu nipasẹ idanwo t-T-T ọmọ ile-iwe ti kii ṣe pọ meji, ni lilo atunṣe Welch tabi iyipada root square ti data nibiti o jẹ dandan lati ṣe atunṣe fun awọn iyatọ ti ko ni ibamu (ti a rii nipasẹ F-idanwo) ni EC50 awọn iṣiro.

Lọ si:

3. Awọn esi

3.1. Ipa ti ikosile ΔFosB lori opioid ati imuṣiṣẹ amuaradagba G-protein ti o ni agbedemeji olugba cannabinoid

Lati mọ boya MOR- tabi CB1Imuṣiṣẹpọ G-amuaradagba R-mediated ti yipada nipasẹ ikosile transgenic inducible ti ΔFosB ninu NAc, agonist-stimulated [35S] GTPγS abuda ni a ṣe ayẹwo ni awọn membran ti o ya sọtọ ti a pese sile lati agbegbe yii ti awọn eku bitransgenic ni ipo ti n ṣalaye (ΔFosB lori) tabi kii ṣe ṣalaye (ΔFosB pipa) transgene ΔFosB. Afọwọṣe DAMGO enkephalin yiyan MOR ni a lo lati mu MOR ṣiṣẹ ati pe cannabinoid aminoalkylindole WIN55,212-2 ti lo lati mu CB ṣiṣẹ1R. Awọn ligands wọnyi ni iṣaaju fihan lati jẹ agonists kikun ni MOR ati CB1R, lẹsẹsẹ (Breivogel, ati al., 1998, Seley, ati al., Ọdun 1997). Ko ṣee ṣe lati ṣe ayẹwo iṣẹ-ṣiṣe G-amuaradagba ti KOR-alajaja nitori pe ifihan naa kere ju ni ọpọlọ rodent (Awọn ọmọde, ati al., 1998). Awọn abajade ṣe afihan ifọkansi ti o gbẹkẹle iṣẹ ṣiṣe G-amuaradagba nipasẹ mejeeji DAMGO ati WIN55,122-2 ni NAC lati ΔFosB pipa ati ΔFosB lori awọn eku (olusin 1). Fun iṣẹ ṣiṣe ti DAMGO (Ṣe nọmba 1A), ANOVA-ọna meji ti data ipa ifọkansi ṣe afihan awọn ipa akọkọ pataki ti ipo ΔFosB (p<0.0001, F=22.12, df=1) ati idojukọ DAMGO (p <0.0001, F=29.65, df=5) pẹlu ko si ibaraenisepo pataki (p=0.857, F=0.387, df=5). Iṣiro ipadasẹhin ti kii ṣe lainidii ti awọn ipa ifọkansi ṣe afihan DAMGO E ni pataki ti o ga julọmax iye ni ΔFosB lori awọn eku (Emax = 73 ± 5.2% iwuri) ni ibatan si awọn eku ΔFosB (E)max = 56 ± 4.1% imudara; p<0.05 yatọ si ΔFosB lori awọn eku nipasẹ t-idanwo Ọmọ ile-iwe). DAMGO EC50 awọn iye ko yatọ laarin ΔFosB lori ati ΔFosB ni pipa awọn eku (302 ± 72 nM dipo 212 ± 56 nM, lẹsẹsẹ, p = 0.346).

olusin 1 

Ipa ti ikosile ΔFosB lori agonist-igbega [35S] GTPγS abuda ni NAC. Awọn ọmọ inu lati ΔFosB-ifihan (ΔFosB lori) tabi iṣakoso (ΔFosB pipa) awọn eku ni a ṣe ayẹwo bi a ti ṣalaye ni Awọn ọna lilo awọn ifọkansi oriṣiriṣi. ...

Ni idakeji si awọn abajade ti o gba pẹlu MOR agonist DAMGO, ko si awọn iyatọ ti o gbẹkẹle ipo ΔFosB ni imuṣiṣẹ amuaradagba G-amuaradagba pẹlu cannabinoid agonist WIN55,212-2 (Ṣe nọmba 1B). ANOVA-ọna meji ti data ipa ifọkansi WIN55,212-2 ṣafihan ipa akọkọ pataki ti ifọkansi WIN55,212-2 (p <0.0001, F = 112.4, df = 7), ṣugbọn kii ṣe ti ipo ΔFosB (p = 0.172). , F = 1.90, df = 1) ko si si ibaraenisepo (p = 0.930, F = 0.346, df = 7). Bakanna, ko si ipa ti ipo ΔFosB lori WIN55,212-2 Emax awọn iye (103 ± 6% dipo 108 ± 8% iwuri ni ΔFosB lori ati pa eku, lẹsẹsẹ, p = 0.813 nipasẹ t-idanwo ọmọ ile-iwe) tabi EC50 awọn iye (103 ± 20 nM dipo 170 ± 23 nM ni ΔFosB titan ati pipa awọn eku, lẹsẹsẹ, p = 0.123).

Da lori apẹrẹ ti awọn iyipo ati otitọ pe awọn iwadii iṣaaju wa ti ṣe afihan biphasic WIN55,212-2 ifọkansi ipa-ipa ni ọpọlọ (Breivogel, ati al., 1999, Breivogel, ati al., 1998), WIN55,212-2 ekoro ni a tun ṣe atupale nipa lilo awoṣe aaye meji. Onínọmbà ti data aropin fihan ilọsiwaju diẹ ninu oore ti ibamu ni lilo awoṣe aaye meji (R2 = 0.933 ati 0.914, apao awọn onigun mẹrin = 3644 ati 5463 ni ΔFosB titan ati pipa eku, ni atele) ni akawe si awoṣe aaye kan (R)2 = 0.891 ati 0.879, apao awọn onigun mẹrin = 6561 ati 6628 ni ΔFosB titan ati pipa awọn eku, lẹsẹsẹ). Sibẹsibẹ, ko si awọn iyatọ pataki ti a rii laarin ΔFosB lori ati pa awọn eku ni boya Emax tabi EC50 awọn iye ti awọn aaye agbara giga tabi kekere (Tuntun Tuntun 1), botilẹjẹpe aṣa kan wa si ọna EC kekere kan50 iye ni aaye agbara giga ninu awọn eku pẹlu ΔFosB lori (EC50ga = 28.0 ± 10.6 nM) ni akawe si awọn ti o ni ΔFosB pipa (EC)50ga = 71.5 ± 20.2 nM; p = 0.094). Pẹlupẹlu, ko si ipa ti ipo ΔFosB lori basal [35S] GTPγS abuda ni awọn membran NAc (253 ± 14 dipo 226 ± 14 fmol/mg ni ΔFosB lori ati pa eku, lẹsẹsẹ, p = 0.188). Awọn data wọnyi tọka pe ikosile transgenic inducible ti ΔFosB ninu NAc ti eku pọ si imuṣiṣẹ amuaradagba G-amuaradagba MOR-laisi ni ipa pataki CB1R-mediated tabi basali G-amuaradagba aṣayan iṣẹ-ṣiṣe.

3.2. Ipa ti ΔFosB lori opioid ati idinamọ agbedemeji cannabinoid ti adenylyl cyclase

Lati ṣe iṣiro ipa ti ikosile transgenic inducible ti ΔFosB lori iyipada ti iṣẹ ipa ipa isalẹ nipasẹ MOR ati CB1R, idinamọ ti 1 µM iṣẹ ṣiṣe adenylyl cyclase ti o ni itara funskolin ni a ṣe ayẹwo ni awọn membran NAc. Ni afikun si MOR- ati CB1Idilọwọ R-mediated ti iṣẹ ṣiṣe adenylyl cyclase, awọn ipa ti iṣẹ KOR ni a tun ṣe ayẹwo ni lilo agonist kikun yiyan KOR U50,488 (Zhu, ati al., 1997), nitori awọn abajade iṣaaju fihan pe dynorphin mRNA jẹ ibi-afẹde ti ΔFosB ni awoṣe bitransgenic (Zachariou, ati al., 2006). Awọn abajade fihan pe DAMGO, U50,488 ati WIN55,212-2 kọọkan ṣe agbejade ifọkansi-igbẹkẹle ifọkansi ti iṣẹ ṣiṣe cyclase adenylyl ni pipa ΔFosB ati ΔFosB lori awọn eku (olusin 2). ANOVA-ọna meji ti data ipa ifọkansi DAMGO (Ṣe nọmba 2A) ṣe afihan awọn ipa akọkọ pataki ti ipo ΔFosB (p = 0.0012, F = 11.34, df = 1) ati idojukọ DAMGO (p <0.0001, F = 29.61, df = 6), ṣugbọn ko si ibaraenisepo pataki (p = 0.441, F = 0.986). , df = 6). Iṣiro ipadasẹhin ti kii ṣe lainidii ti awọn iha ifọkansi-ipa DAMGO ṣe afihan DAMGO EC ti o dinku ni pataki50 iye ni ΔFosB lori awọn eku (101 ± 11 nM) ni akawe si ΔFosB ni pipa awọn eku (510 ± 182 nM, p <0.05 nipasẹ t-idanwo ọmọ ile-iwe). Sibẹsibẹ, ko si iyatọ pataki ni DAMGO Emax awọn iye (20.9 ± 1.26% dipo 19.8 ± 1.27% idinamọ ni ΔFosB titan ati pipa awọn eku, lẹsẹsẹ, p = 0.534).

olusin 2 

Ipa ti ikosile ΔFosB lori idinamọ ti iṣẹ ṣiṣe cyclase adenylyl ni NAc. Awọn ọmọ inu lati ΔFosB-ifihan (ΔFosB lori) tabi iṣakoso (ΔFosB pipa) awọn eku ni a ṣe ayẹwo bi a ti ṣalaye ni Awọn ọna ni iwaju 1 µM ...

Idinamọ adenylyl cyclase ti o ṣe agbedemeji KOR tun yatọ bi iṣẹ kan ti ikosile transgenic inducible ti ΔFosB (Ṣe nọmba 2B). ANOVA-ọna meji ti U50,488 data ipa ifọkansi ṣe afihan awọn ipa akọkọ pataki ti ipo ΔFosB (p = 0.0006, F = 14.53, df = 1) ati ifọkansi U50,488 (p <0.0001, F = 26.48, df = 3) , laisi ibaraenisepo pataki (p = 0.833, F = 0.289, df = 3). Iṣiro ipadasẹhin ti kii ṣe lainidi ti awọn ipa ifọkansi ṣe afihan U50,488 E ti o tobi julọmax iye ni ΔFosB lori awọn eku (18.3 ± 1.14% idinamọ) ni akawe si ΔFosB kuro eku (12.5 ± 2.03% idinamọ; p <0.05 yatọ si ΔFosB lori nipasẹ t-idanwo ọmọ ile-iwe), laisi iyatọ pataki ninu U50,488 EC50 awọn iye (310 ± 172 nM dipo 225 ± 48 nM ni ΔFosB titan ati pipa awọn eku, lẹsẹsẹ, p = 0.324).

Ni idakeji si awọn ipa ti a ṣe akiyesi pẹlu MOR ati KOR, ko si ipa pataki ti ikosile transgenic ΔFosB inducible lori idinamọ ti adenylyl cyclase nipasẹ cannabinoid agonist WIN55212-2 (Ṣe nọmba 2C). ANOVA-ọna meji ti WIN55,212-2 data ipa ifọkansi ṣe afihan ipa pataki ti ifọkansi oogun (p <0.0001, F = 23.6, df = 2), ṣugbọn kii ṣe ti ipo ΔFosB (p = 0.735, F = 0.118, df) = 1) bẹni ko si ibaraenisepo pataki (p = 0.714, F = 0.343, df = 2). Pẹlupẹlu, ko si ipa ti ipo ΔFosB lori basali tabi iṣẹ ṣiṣe adenylyl cyclase ti o ni itara funskolin ni laisi eyikeyi agonist. Iṣẹ ṣiṣe cyclase Basal adenylyl jẹ 491 ± 35 pmol/mg/min ni ΔFosB lori awọn eku ni akawe si 546 ± 44 ni ΔFosB kuro ni eku (p = 0.346 nipasẹ t-idanwo ọmọ ile-iwe). Bakanna, iṣẹ ṣiṣe adenylyl cyclase ni iwaju 1 µM forskolin jẹ 2244 ± 163 pmol/mg/min ni ΔFosB lori awọn eku dipo 2372 ± 138 pmol/mg/min ni ΔFosB kuro ni eku (p = 0.555).

3.3. Ipa ti ΔcJun lori opioid ati idinamọ agbedemeji cannabinoid ti adenylyl cyclase

Nitori ikosile transgenic inducible ti ΔFosB imudara ifihan ifihan inhibitory lati MOR ati KOR si adenylyl cyclase ni NAc, o jẹ iwulo lati pinnu boya oludena odi ti o lagbara ti transcription mediated ΔFosB yoo ṣe iyipada ami ifihan olugba opioid ni ọna idakeji. Lati koju ibeere yii, idinamọ ti iṣẹ ṣiṣe adenylyl cyclase ti forskolin nipasẹ DAMGO ati U50,488 ni a ṣe ayẹwo ni awọn membran ti a pese sile lati NAc ti awọn eku bitransgenic ni ipo ti n ṣalaye ΔcJun. Awọn abajade ko ṣe afihan ipa pataki ti ikosile ΔcJun lori idinamọ ti iṣẹ ṣiṣe cyclase adenylyl nipasẹ MOR tabi KOR (olusin 3). ANOVA-ọna meji ti awọn ifọkansi ipa-ipa DAMGO ṣe afihan ipa akọkọ pataki ti idojukọ DAMGO (p <0.0001, F = 20.26, df = 6), ṣugbọn kii ṣe ti ipo ΔcJun (p = 0.840, F= 0.041, df = 1) ko si si ibaraenisepo pataki (p = 0.982, F= 0.176, df = 6). Bakanna, ko si iyatọ pataki ninu Emax tabi EC50 awọn iye laarin awọn eku pẹlu ΔcJun lori (Emax = 23.6 ± 2.6%; EC50 = 304 ± 43 nM) tabi ΔcJun kuro (Emax = 26.1 ± 2.5%, p = 0.508; EC50 = 611 ± 176 nM, p = 0.129). Awọn abajade ti o jọra ni a rii pẹlu U50,488, bii ọna ANOVA meji-ọna ti awọn ipa-ipa ifọkansi ṣe afihan ipa pataki ti ifọkansi (p <0.0001, F = 11.94, df = 6), ṣugbọn kii ṣe ti ipo ΔcJun (p = 0.127). , F= 2.391, df = 1) ko si si ibaraenisepo pataki (p = 0.978, F= 0.190, df = 6). Bakanna, ko si awọn iyatọ pataki ni Emax tabi EC50 awọn iye laarin awọn eku pẹlu ΔcJun lori (Emax = 14.8 ± 2.9%; EC50 = 211 ± 81 nM) tabi pipa (Emax = 16.7 ± 1.8%, p = 0.597; EC50 = 360 ± 151 nM, p = 0.411).

olusin 3 

Ipa ti ikosile ΔcJun lori idinamọ ti iṣẹ ṣiṣe cyclase adenylyl ni NAc. Awọn ẹya ara ẹrọ lati ΔcJun-ifihan (ΔcJun lori) tabi iṣakoso (ΔcJun pipa) awọn eku ti wa ni idawọle ni iwaju DAMGO (A), U50,488H (B) tabi WIN55,212-2 ...

Ikosile ΔcJun tun ko ni ipa pataki ni idinamọ ti adenylyl cyclase ni NAc nipasẹ agonist cannabinoid. ANOVA-ọna meji ti awọn igun ipa ifọkansi WIN55,212-2 ṣe afihan ipa akọkọ pataki ti ifọkansi WIN55,212-2 (p <0.0001, F = 15.53, df = 6), ṣugbọn kii ṣe ti genotype (p = 0.066, F = 3.472, df = 1) ko si si ibaraenisepo pataki (p = 0.973, F = 0.208, df = 6). Bakanna, ko si awọn iyatọ pataki ni WIN55,212-2 Emax awọn iye (13.0 ± 2.3% ati 13.6 ± 0.9% idinamọ ni ΔcJun lori dipo awọn eku, lẹsẹsẹ, p = 0.821) ati tabi EC50 awọn iye (208 ± 120 nM ati 417 ± 130 nM ni ΔcJun ni idakeji awọn eku, lẹsẹsẹ, p = 0.270). Nitorinaa, botilẹjẹpe aṣa diẹ wa si agbara idinku ti WIN55,212-2 ninu awọn eku ti n ṣalaye ΔcJun, transgene ko ṣe iyipada pataki cannabinoid idinamọ ti adenylyl cyclase. Pẹlupẹlu, ko si ipa ti ipo ΔcJun lori basali tabi iṣẹ ṣiṣe adenylyl cyclase ti o ni itara funskolin. Iṣẹ ṣiṣe cyclase Basal adenylyl jẹ 1095 ± 71 pmol / mg / min ati 1007 ± 77 pmol / mg / min (p = 0.403) ninu awọn eku pẹlu ΔcJun titan tabi pa, lẹsẹsẹ. Iṣẹ ṣiṣe cyclase Adenylyl ti a mu nipasẹ 1 µM forskolin jẹ 4185 ± 293 pmol/mg/min dipo 4032 ± 273 pmol/mg/min (p = 0.706) ninu awọn eku pẹlu ΔcJun tan tabi pa, lẹsẹsẹ.

3.4. Iṣoro

Awọn abajade iwadi yii ṣe afihan imudara MOR-mediated G-protein imudara ati idinamọ ti adenylyl cyclase ni NAc ti eku pẹlu ikosile transgenic inducible ti ΔFosB ni dynorphin/D1R ti o ni awọn neuronu. Idena aarin-KOR ti iṣẹ ṣiṣe adenylyl cyclase tun jẹ imudara ni NAc ti ΔFosB ti n ṣalaye awọn eku, ni iyanju pe ΔFosB n ṣe ilana eto opioid endogenous ni NAc. DAMGO Emax iye ti o tobi ju fun MOR-simulated [35S] GTPγS abuda, ati EC rẹ50 iye jẹ kekere fun idinamọ adenylyl cyclase, ni ΔFosB awọn eku ti n ṣalaye ni afiwe si awọn eku iṣakoso. Awọn awari wọnyi daba pe o ṣeeṣe ti ifiṣura olugba fun iyipada ipa ṣugbọn kii ṣe imuṣiṣẹ amuaradagba G-labẹ awọn ipo idanwo ti a ṣe ayẹwo. Wiwa pe idinamọ ti o pọju ti adenylyl cyclase nipasẹ agonist KOR ni o kan nipasẹ ikosile ΔFosB ni imọran ifipamọ olugba kekere fun esi-alaja KOR, ni ibamu pẹlu awọn ipele kekere ti awọn aaye abuda KOR ni ọpọlọ Asin (Unterwald, ati al., 1991). Ni idakeji, CB1Iṣẹ ṣiṣe G-amuaradagba R-mediated ati idinamọ ti adenylyl cyclase ko ni ipa nipasẹ ikosile ΔFosB, ni iyanju pe awọn eto opioid ati cannabinoid yatọ si idahun wọn si ΔFosB ninu awọn neurons NAc wọnyi.

Ipa ti ΔFosB lori ifihan agbara-igbasilẹ olugba opioid jẹ ibamu pẹlu ijabọ wa ti tẹlẹ pe ikosile ΔFosB ninu striatum yipada nla ati awọn ipa onibaje ti morphine (Zachariou, ati al., 2006). Iwadi kan ti iwadii yẹn ni awọn eku pẹlu ikosile transgenic ti ΔFosB ni dynorphin/D1Awọn neurons striatal R jẹ ifarabalẹ si morphine ni ipo karabosipo ju awọn idari lọ. Pẹlupẹlu, ipa yii jẹ afarawe nipasẹ ikosile ilaja virally ti ΔFosB nipasẹ abẹrẹ kan pato aaye sinu NAc. Awọn akiyesi wọnyi wa ni ibamu pẹlu awọn abajade lọwọlọwọ ti o ṣe afihan ifihan MOR imudara ni NAc.

A ti ṣe idanimọ fifi koodu jiini tẹlẹ dynorphin gẹgẹbi ibi-afẹde ti ΔFosB, ati daba pe dynorphin ti o dinku yoo wa ni ibamu pẹlu awọn ohun-ini ere imudara ti morphine ni awọn eku bitransgenic ΔFosB (Zachariou, ati al., 2006). Awọn abajade ti o wa lọwọlọwọ fihan pe idinamọ aarin-KOR ti adenylyl cyclase ni NAc ti ni ilọsiwaju ni awọn eku ti n ṣalaye ΔFosB, eyiti o le ṣe afihan ilosoke isanwo ni ifamọ KOR lẹhin idinku dynorphin. Awọn ijinlẹ iṣaaju ti fihan pe KOR ti ni atunṣe ni awọn agbegbe ọpọlọ ti awọn eku prodynorphin knockout, pẹlu NAc (Clarke, ati al., Ọdun 2003).

Ni idakeji si ΔFosB, ikosile transgenic inducible ti ΔcJun, iyipada ti o ni agbara odi ti ΔFosB alabaṣepọ cJun, ko paarọ idinamọ adenylyl cyclase nipasẹ MOR tabi KOR agonists. Awọn abajade wọnyi daba pe awọn ipele basali ti ikosile ΔFosB, eyiti o jẹ kekere, ko ṣe ipa pataki ni mimu ami ifihan olugba opioid ni ipele yii ti gbigbe ifihan agbara ni NAc. Otitọ pe ipa ti o ni ẹsan ti morphine dinku nipasẹ ikosile ΔcJun ninu iwadi wa tẹlẹ (Zachariou, ati al., 2006) daba boya ifakalẹ morphine ti ΔFosB lakoko ilana isọdọtun jẹ pataki ni ṣiṣatunṣe awọn idahun ihuwasi si oogun naa tabi awọn ipa transcription ti ΔFosB miiran ju awọn ti o kan ami ifihan isunmọ nipasẹ awọn olugba opioid le ni agba ere opioid. Ni eyikeyi iṣẹlẹ, awọn abajade iwadi lọwọlọwọ fihan gbangba pe, nigbati ikosile ΔFosB ti ga ju awọn ipele basali ni dynorphin/D striatal1Awọn iṣan ti n ṣalaye R, ilosoke to lagbara wa ninu isọdọkan ti MOR ati KOR si idinamọ ti adenylyl cyclase ni NAc.

Awọn ọna ṣiṣe nipasẹ eyiti MOR- ati ami ami-ilaja KOR jẹ imudara nipasẹ ΔFosB overexpression ko ṣe akiyesi, ṣugbọn a ti ṣafihan tẹlẹ pe awọn ipele MOR, ti a ṣe ayẹwo nipasẹ [3H] naloxone abuda, ko yatọ si ni NAc ti ΔFosB ni idakeji awọn eku (Zachariou, ati al., 2006). Iwadi kanna naa rii pe GαiAwọn ipele amuaradagba 1 ati 2 ko ni ipa ni agbegbe yii nipasẹ ikosile ΔFosB. Bibẹẹkọ, awọn itupalẹ igbelewọn ikosile jiini iṣaaju fihan pe Gαo mRNA jẹ atunṣe ni NAc ti ΔFosB lori awọn eku (McClung ati Nestler, 2003). Yoo jẹ iwulo ni awọn ẹkọ iwaju lati ṣe ayẹwo ni kikun ipa ti ikosile transgenic ΔFosB lori ikosile G-amuaradagba ni ipele amuaradagba bi daradara bi lori ikosile ti ọpọlọpọ awọn ọlọjẹ modular G-amuaradagba.

O jẹ iyanilenu pe ikosile ΔFosB ko mu CB pọ si1Ifiṣafihan agbedemeji R ni NAc. O ṣee ṣe pe awọn iyipada ni CB1Ami ifihan R waye ni iye eniyan ọtọtọ ti awọn neuron ti o wa ni ṣoki ni gbogbo igbaradi NAc. Fun apẹẹrẹ, iṣakoso ti Δ9- THC ṣe pataki ΔFosB ninu mojuto, ṣugbọn kii ṣe ikarahun, ti NAc (Perrotti, ati al., 2008). Initõtọ, o ti han pe ipenija pẹlu Δ9-THC atẹle iṣakoso leralera ti Δ9-THC pọ si itusilẹ dopamine ni mojuto NAc, ṣugbọn itusilẹ idinku ninu ikarahun naa (Cadoni, ati al., 2008). O tun ṣe pataki lati ṣe akiyesi pe laini 11A ti awọn eku bitransgenic ṣalaye ΔFosB nikan ni dynorphin/D1R rere alabọde spiny awọn iṣan ti striatum, ṣugbọn CB1R jẹ afihan ni mejeeji dynorphin/D1R ati enkephalin/D2R awọn neuronu striatal rere (Hohmann ati Herkenham, ọdun 2000), bakannaa lori awọn ebute ti awọn afferents cortical (Robbe, ati al., 2001). Ikosile ti olutọsọna odi ti o lagbara ti transcription mediated ΔFosB, ΔcJun, tun ko ni ipa pataki lori ami ifihan olugba cannabinoid, botilẹjẹpe ΔcJun jẹ afihan inducibly ninu mejeeji D mejeeji.1 ati D2-ti o ni awọn olugbe ti awọn neurons spiny alabọde ninu awọn eku wọnyi (Peakman, ati al., 2003). O ṣee ṣe, sibẹsibẹ, pe ikosile basal ΔFosB ti lọ silẹ to pe ΔcJun kii yoo kan ami ami olugba, bi a ti daba nipasẹ awọn abajade pẹlu MOR ati KOR. O tun ṣee ṣe pe CB1Ami ifihan R jẹ imudara iwọntunwọnsi nipasẹ ikosile basal ΔFosB, iru eyiti o pọ si ikosile ΔFosB tabi didi awọn iṣe rẹ pẹlu ΔcJun ni awọn ipa diẹ nikan ti ko de ipele pataki iṣiro. Atilẹyin aiṣe-taara fun itumọ yii ni a le rii nipa ifiwera WIN55,212-2 EC50 awọn iye laarin awọn eku ti n ṣalaye ΔcJun dipo ΔFosB. Iwọn ti WIN55,212-2 EC50 iye fun idinamọ adenylyl cyclase ninu awọn eku pẹlu ikosile ifasilẹ ti ΔcJun si EC rẹ50 iye fun imuṣiṣẹ amuaradagba G-amuaradagba ninu awọn eku pẹlu ikosile ifasilẹ ti ΔFosB jẹ 4.0, lakoko ti ipin kanna ninu awọn eku laisi ifilọlẹ ti boya transgene jẹ 1.2.

Ni omiiran, awọn cannabinoids le fa ikosile ΔFosB laisi ipa taara lori CB1R ifihan agbara. Ninu oju iṣẹlẹ yii, awọn cannabinoids le ṣe iyipada idahun si awọn ipa psychoactive ti awọn oogun miiran nipasẹ ilana ilana transcriptional mediated ΔFosB. Ini otitọ, iṣakoso ti Δ9-THC ṣe agbejade ifamọ agbelebu si awọn opioids ati amphetamine (Cadoni, ati al., 2001, Lamarque, ati al., 2001), ni ibamu pẹlu arosọ yii. Pẹlupẹlu, iṣakoso leralera ti agonist cannabinoid CP55,940 ni a royin lati mu imuṣiṣẹ amuaradagba G-amuaradagba MOR-aladede ni NAc, bakanna si awọn eku inducibly n ṣalaye ΔFosB ninu iwadi lọwọlọwọ (Vigano, ati al., Ọdun 2005). Ipa ti ikosile ΔFosB lori Δ9-THC-mediated awọn ihuwasi ko ti ni iṣiro, ṣugbọn awọn esi ti o wa lọwọlọwọ ko ṣe idiwọ ibaraenisepo kan. Awọn abajade ti eyi ati iwadi iṣaaju wa (Zachariou, ati al., 2006) ṣafihan awọn iyipada ti o fa ΔFosB ni MOR ati KOR/dynorphin ni striatum. Awọn ipa ti o ni ere ti Δ9-THC, gẹgẹ bi idiwọn nipasẹ yiyan aaye, ti paarẹ ni awọn eku asan MOR, lakoko ti piparẹ ti KOR dinku Δ9-THC ibi ikorira ati fi han Δ9-THC ibi ààyò (Ghozland, ati al., 2002). Bakanna, ikorira ibi ti o ni ilodi si Δ9-THC ko si ni knockout pro-dynorphin ni akawe si awọn eku iru igbẹ (Zimmer, ati al., 2001). Awọn data wọnyi daba pe Δ9-THC le jẹ ere diẹ sii lẹhin ifilọlẹ ΔFosB ati ifilọlẹ abajade ti ami ifihan MOR pẹlu awọn idinku ninu ikosile dynorphin.

Ni akojọpọy, awọn abajade iwadi yii fihan pe ikosile ti ΔFosB ni D1R/dynorphin rere striatal neurons ti mu ilọsiwaju MOR- ati ami ami-ilaja KOR ni ipele ti G-amuaradagba idalọwọduro ti iṣẹ ṣiṣe adenylyl cyclase ninu NAC. Wiwa yii wa ni ibamu pẹlu awọn ẹkọ ti o ti ṣe afihan ipa kan fun eto opioid endogenous ni ẹsan (Trigo, ati al., 2010), ati pese ẹrọ ti o pọju fun awọn ipa agbedemeji ΔFosB lori ẹsan. Ni idakeji, CB1Ami ifihan R-mediated ni NAc ko ni ipa pataki nipasẹ ikosile ΔFosB striatal labẹ awọn ipo ti a ṣe ayẹwo, botilẹjẹpe awọn iwadii siwaju jẹ atilẹyin ọja lati pinnu ipa ti ifasilẹ ΔFosB lori eto endocannabinoid.

Awọn Iwadii Iwadii

  • Ifiṣafihan MOR jẹ imudara ni awọn akopọ iparun ti awọn eku ti o ṣafihan ΔFosB
  • Idinamọ KOR ti adenylyl cyclase tun jẹ ilọsiwaju ninu awọn eku ti n ṣalaye ΔFosB
  • Ikosile ti ΔFosB ko paarọ CB1R ifihan agbara ni arin accumbens
Lọ si:

Ohun elo Afikun

01

Lọ si:

Awọn idunnu

Awọn onkọwe dupẹ lọwọ Hengjun He, Jordan Cox ati Aaron Tomarchio fun iranlọwọ imọ-ẹrọ pẹlu [35S] GTPγS igbelewọn abuda. Iwadi yii ni atilẹyin nipasẹ Awọn ifunni USPHS DA014277 (LJS), DA10770 (DES) ati P01 DA08227 (EJN).

Lọ si:

Awọn akọsilẹ

AlAIgBA ti Olukede: Eyi jẹ faili PDF kan ti iwe afọwọkọ ti a ko ni ti a ti gba fun atejade. Gẹgẹbi iṣẹ kan si onibara wa a n pese irufẹ akọkọ ti iwe afọwọkọ naa. Iwe afọwọkọ naa yoo di ifarada, sisọtọ, ati atunyẹwo idiyele ti o njẹri ṣaaju ki o to wa ni akosile ti o gbẹkẹhin. Jọwọ ṣe akiyesi pe nigba aṣiṣe awọn ilana aṣiṣe ilana le ṣawari eyi ti o le ni ipa lori akoonu naa, ati gbogbo awọn iwe aṣẹ ti o wa labẹ akosile naa ni.

Lọ si:

jo

  • Bozarth MA, Ologbon RA. Awọn aaye olugba opiate iyasọtọ ti anatomically ṣe ilaja ere ati igbẹkẹle ti ara. Science. 1984;224: 516-517. [PubMed]
  • Bradford MM. Ọna ti o yara ati ifarabalẹ fun titobi awọn iwọn microgram ti amuaradagba ni lilo ilana ti isunmọ amuaradagba-awọ. Ẹran Anal. Ṣekeko. 1976;72: 248-254. [PubMed]
  • Breivogel CS, Childers SR, Deadwyler SA, Hampson RE, Vogt LJ, Sim-Selley LJ. Onibaje delta9Itọju tetrahydrocannabinol ṣe agbejade isonu ti o gbẹkẹle akoko ti awọn ọlọjẹ G-mu ṣiṣẹ olugba cannabinoid ninu ọpọlọ. J. Neurochem. 1999;73: 2447-2459. [PubMed]
  • Breivogel CS, Selley DE, Childers SR. Agbara agonist olugba Cannabinoid fun iyanju [35S] GTPγS sisopọ si awọn membran cerebellar eku ni ibamu pẹlu awọn idinku agonist-induced ni isunmọ GDP. J. Biol. Chem. 1998;273: 16865-16873. [PubMed]
  • Cadoni C, Pisanu A, Solinas M, Acquas E, Di Chiara G. Ifarabalẹ ihuwasi lẹhin ti o leralera si Delta 9-tetrahydrocannabinol ati ifamọ agbelebu pẹlu morphine. Psychopharmacology (Berl) 2001;158: 259-266. [PubMed]
  • Cadoni C, Valentini V, Di Chiara G. Ifamọ ihuwasi si delta 9-tetrahydrocannabinol ati ifamọ agbelebu pẹlu morphine: awọn iyipada iyatọ ninu ikarahun ikojọpọ ati gbigbe dopamine mojuto. J. Neurochem. 2008;106: 1586-1593. [PubMed]
  • Chen J, Kelz MB, Zeng G, Sakai N, Steffen C, Shockett PE, Picciotto MR, Duman RS, Nestler EJ. Awọn ẹranko transgenic pẹlu inducible, ikosile jiini ti a fojusi ni ọpọlọ. Mol. Elegbogi. 1998;54: 495-503. [PubMed]
  • Awọn ọmọde SR. Opioid olugba-sopọ awọn ojiṣẹ keji. Aye Sci. 1991;48: 1991-2003. [PubMed]
  • Childers SR, Fleming L, Konkoy C, Marckel D, Pacheco M, Sexton T, Ward S. Opioid ati cannabinoid receptor inhibition ti adenylyl cyclase ni ọpọlọ. Ann. NY Acad. Sci. 1992;654: 33-51. [PubMed]
  • Childers SR, Xiao R, Vogt LJ, Sim-Selley LJ. Kappa opioid fọwọkan ti [35S] GTPγS abuda ni ọpọlọ ẹlẹdẹ Guinea: Aini ẹri fun kappa2-aṣayan aṣayan iṣẹ-ṣiṣe ti G-awọn ọlọjẹ. Ṣekeko. Pharmacol. 1998;56: 113-120. [PubMed]
  • Clarke S, Zimmer A, Zimmer AM, Hill RG, Ibi idana I. Ekun yiyan-ilana ti micro-, delta- ati kappa-opioid awọn iṣan sugbon ko opioid receptor-bi 1 awọn olugba ni awọn ọpọlọ ti enkephalin ati dynorphin knockout eku. Neuroscience. 2003;122: 479-489. [PubMed]
  • Colby CR, Whisler K, Steffen C, Nestler EJ, Ara DW. Ti ikede aifọwọyi pato ti ara ẹni ti DeltaFosB nmu igbaradi fun kokeni. J. Neurosci. 2003;23: 2488-2493. [PubMed]
  • Gardner EL. Eto ifihan Endocannabinoid ati ẹsan ọpọlọ: tcnu lori dopamine. Pharmacol. Biochem. Behav. 2005;81: 263-284. [PubMed]
  • Ghozland S, Matthes HW, Simonin F, Filliol D, Kieffer BL, Maldonado R. Awọn ipa idaniloju ti awọn cannabinoids ti wa ni iṣeduro nipasẹ mu-opioid ati awọn olugba kappa-opioid. J. Neurosci. 2002;22: 1146-1154. [PubMed]
  • Herkenham M, Lynn AB, Johnson MR, Melvin LS, de Costa BR, Rice KC. Iwa ati isọdi agbegbe ti awọn olugba cannabinoid ni ọpọlọ eku: pipo in vitro autoradiographic iwadi. J. Neurosci. 1991;11: 563-583. [PubMed]
  • Hohmann AG, Herkenham M. Isọdi ti cannabinoid CB (1) olugba mRNA ni awọn agbegbe ti neuronal ti eku striatum: aami-meji ni iwadi arabara ipo. Synapse. 2000;37: 71-80. [PubMed]
  • Howlett AC, Barth F, Bonner TI, Cabral G, Casellas P, Devane WA, Felder CC, Herkenham M, Mackie K, Martin BR, Mechoulam R, Pertwee RG. International Union of Pharmacology. XXVII. Iyasọtọ ti awọn olugba cannabinoid. Pharmacological Review. 2002;54: 161-202.
  • Huestis MA, Gorelick DA, Heishman SJ, Preston KL, Nelson RA, Moolchan ET, Frank RA. Idilọwọ awọn ipa ti taba lile ti o mu nipasẹ CB1-aṣayan cannabinoid antagonist olugba SR141716. Agbegbe. Gen. Ayanyakalẹ. 2001;58: 322-328. [PubMed]
  • Kelz MB, Chen J, Carlezon WA, Jr, Whisler K, Gilden L, Beckmann AM, Steffen C, Zhang YJ, Marotti L, Ara DW, Tkatch T, Baranauskas G, Surmeier DJ, Neve RL, Duman RS, Picciotto MR, Nestler EJ. Ifọrọwọrọ ti itumo transtaFosB factor transcription ninu ọpọlọ iṣakoso ifamọ si kokeni. Iseda. 1999;401: 272-276. [PubMed]
  • Koob GF, Volkow ND. Neurocircuitry ti afẹsodi. Neuropsychopharmacology. 2010;35: 217-238. [PMC free article] [PubMed]
  • Lamarque S, Taghzouti K, Simon H. Itọju onibajẹ pẹlu Delta (9) -tetrahydrocannabinol nmu idahun locomotor si amphetamine ati heroin. Awọn ipa fun ailagbara si afẹsodi oogun. Neuropharmacology. 2001;41: 118-129. [PubMed]
  • Maldonado R, Valverde O, Berrendero F. Ilowosi ti endocannabinoid eto ni oògùn afẹsodi. Tesiwaju Neurosci. 2006;29: 225-232. [PubMed]
  • Mansour A, Fox CA, Thompson RC, Akil H, Watson SJ. mu-Opioid olugba mRNA ikosile ninu eku CNS: lafiwe si abuda mu-receptor. Agbejade ọlọjẹ. 1994;643: 245-265. [PubMed]
  • Matthes HWD, Maldonado R, Simonin F, Valverde O, Slowe S, Idana I, Befort K, Dierich A, LeMeur M, Dolle P, Tzavara E, Hanoune J, Roques BP, Kieffer BL. Pipadanu analgesia ti o fa morphine, ipa ere ati awọn aami aiṣan kuro ninu awọn eku ti ko ni jiini olugba µ-opioid. Iseda. 1996;383: 819-823. [PubMed]
  • McClung CA, Nestler EJ. Ilana ti fifun pupọ ati ikuna cocaine nipasẹ CREB ati DeltaFosB. Nat. Neurosci. 2003;6: 1208-1215. [PubMed]
  • McClung CA, Ulery PG, Perrotti LI, Zachariou V, Berton O, Nestler EJ. DeltaFosB: iyipada molikula fun idaamu igba pipe ni ọpọlọ. Ọpọlọ Res. Mol. Ọpọlọ Res. 2004;132: 146-154. [PubMed]
  • Muller DL, Unterwald EM. D1 dopamine receptors modulate deltaFosB induction ni eku striatum lẹhin iṣeduro morphine isakoso. J. Pharmacol. Exp. Ther. 2005;314: 148-154. [PubMed]
  • Nestler EJ. Atunwo. Awọn ọna iṣan-igbasilẹ ti afẹsodi: ipa ti DeltaFosB. Philos. Atagba R. Soc. Lọndọnu. B. Biol. Sci. 2008;363: 3245-3255. [PMC free article] [PubMed]
  • Nestler EJ, Kelz MB, Chen J. DeltaFosB: mediator molula ti igba ti ko ni aifọwọyi ati ibajẹ ihuwasi. Agbejade ọlọjẹ. 1999;835: 10-17. [PubMed]
  • Fun HE, ireti BT, Kelz MB, Iadarola M, Nestler EJ. Awọn ẹkọ nipa imọ-ẹjẹ ti ilana ti awọn onibajẹ FOS ti o niiṣe pẹlu ifunini ti antigeni nipasẹ kokeni ni igun-ara ati idaamu. J. Pharmacol. Exp. Ther. 1995;275: 1671-1680. [PubMed]
  • Peakman MC, Colby C, Perrotti LI, Tekumalla P, Carle T, Ulery P, Chao J, Duman C, Steffen C, Monteggia L, Allen MR, Iṣura JL, Duman RS, McNeish JD, Barrot M, Ara DW, Nestler EJ , Schaeffer E. Inducible, ẹkun-ọpọlọ kan pato ti iṣaro odi ti o ni agbara ti c-Jun ni awọn eku transgenic dinku ifamọ si kokeni. Agbejade ọlọjẹ. 2003;970: 73-86. [PubMed]
  • Perrotti LI, Weaver RR, Robison B, Iyanni W, Maze I, Yazdani S, Elmore RG, Knapp DJ, Selley DE, Martin BR, Sim-Selley L, Bachtell RK, Ara DW, Nestler EJ. Awọn ilana ti o yatọ ti DeltaFosB ifunni ni ọpọlọ nipasẹ awọn oogun ti iwa-ipa. Synapse. 2008;62: 358-369. [PMC free article] [PubMed]
  • Robbe D, Alonso G, Duchamp F, Bockaert J, Manzoni OJ. Isọdi agbegbe ati awọn ilana iṣe ti awọn olugba cannabinoid ni awọn synapses glutamatergic ti accumbens nucleus eku. J. Neurosci. 2001;21: 109-116. [PubMed]
  • Salomon Y. Adenylate cyclase assay. Adv. Cyclic Nucleotide Res. 1979;10: 35-55. [PubMed]
  • Selley DE, Sim LJ, Xiao R, Liu Q, Childers SR. Mu opioid olugba-igbega [35S] GTPγS abuda ni eku thalamus ati awọn laini sẹẹli ti o gbin: Awọn ọna gbigbe ifihan agbara ti o wa labẹ ipa agonist. Mol. Elegbogi. 1997;51: 87-96. [PubMed]
  • Trigo JM, Martin-Garcia E, Berrendero F, Robledo P, Maldonado R. Eto opioid endogenous: sobusitireti ti o wọpọ ni afẹsodi oogun. Oògùn Ọti-Ọti Duro. 2010;108: 183-194. [PubMed]
  • Unterwald EM, Knapp C, Zukin RS. Isọdi agbegbe Neuroanatomical ti κ1 ati κ2 awọn olugba opioid ni eku ati ọpọlọ ẹlẹdẹ Guinea. Agbejade ọlọjẹ. 1991;562: 57-65. [PubMed]
  • Vaccarino FJ, Bloom FE, Koob GF. Blockade ti arin accumbens opiate receptors attenuates iṣan heroin ere ninu eku. Psychopharmacology (Berl) 1985;86: 37-42. [PubMed]
  • Vigano D, Rubino T, Vaccani A, Bianchessi S, Marmorato P, Castiglioni C, Parolaro D. Awọn ọna ẹrọ molikula ti o ni ipa ninu ibaraenisepo asymmetric laarin cannabinoid ati awọn eto opioid. Psychopharmacology (Berl) 2005;182: 527-536. [PubMed]
  • Zachariou V, Bolanos CA, Selley DE, Theobald D, MP Cassidy, Kelz MB, Shaw-Lutchman T, Berton O, Sim-Selley LJ, Dileone RJ, Kumar A, Nestler EJ. Aaye pataki fun DeltaFosB ni ile-iṣẹ naa ti n tẹ ni iṣẹ morphine. Nat. Neurosci. 2006;9: 205-211. [PubMed]
  • Zangen A, Solinas M, Ikemoto S, Goldberg SR, Wise RA. Awọn aaye ọpọlọ meji fun ẹsan cannabinoid. J. Neurosci. 2006;26: 4901-4907. [PubMed]
  • Zhu J, Luo LY, Li JG, Chen C, Liu-Chen LY. Imuṣiṣẹ ti olugba kappa opioid eniyan ti cloned nipasẹ awọn agonists ṣe imudara [35S] GTPγS si awọn membran: ipinnu awọn agbara ati awọn ipa ti awọn ligands. J. Pharmacol. Exp. Ther. 1997;282: 676-684. [PubMed]
  • Zimmer A, Valjent E, Konig M, Zimmer AM, Robledo P, Hahn H, Valverde O, Maldonado R. Isansa ti delta -9-tetrahydrocannabinol dysphoric ipa ni dynorphin-deficient eku. J. Neurosci. 2001;21: 9499-9505. [PubMed]
  • Zimmer A, Zimmer AM, Hohmann AG, Herkenham M, Bonner TI. Alekun iku, hypoactivity, ati hypoalgesia ni cannabinoid CB1 olugba knockout eku. Proc. Natl. Acad. Sci. AMẸRIKA 1999;96: 5780-5785. [PMC free article] [PubMed]