(HUMAN) Awọn ibaraẹnisọrọ ati Awọn Ilana ti Ọlọhun si Cocaine Chrono beere Apapọ Ifarahan Afẹyinti ΔFosB ati Calcium / Calmodulin-Dependent Protein Kinase II in the Nucleus Accumbens Shell (2013)

Ipa transcription ΔFosB ati kalisiki ti a ṣe sọ di mimọ ti ọpọlọ / idaamu-igbẹkẹle amuaradagba kinase II (CaMKIIα) wa ni mimu ninu awọn akopọ sẹẹli (NAc) nipasẹ ifihan onibaje si awọn kokenkan tabi awọn oogun psychostimulant miiran ti ilokulo, ninu eyiti awọn ọlọjẹ meji naa ṣe ilaja ifesi ti awọn idahun oogun oogun . Biotilẹjẹpe ΔFosB ati CaMKIIα mejeeji ṣatunṣe ikosile olugba mimu AMPA glutamate ati iṣẹ ni NAc, dendritic spine formation on NAc medium spiny neurons (MSNs), ati ifamọra locomotor si kokenin, ko si ọna asopọ taara laarin awọn ohun sẹẹli wọnyi lati ṣe ayewo loni. Nibi, a ṣe afihan pe ΔFosB ti wa ni fosifeti nipasẹ CaMKIIα ni Ser27 ti amuṣiṣẹpọ amuaradagba ati pe CaMKII jẹ nilo fun ikojọpọ ti kojọpọ ti ΔFosB ni eku NAc.

Lọna miiran, a fihan pe ΔFosB jẹ pataki ati pe o to fun fifa irọbi awọ ara ti CaMKIIα pupọ ikosile ni vivo, yiyan ipa fun D₁-iwọn MSNs ni ipinlẹ ikarahun NAC.

Pẹlupẹlu, fifa awọn ọpa ẹhin dendritic lori NAc MSNs ati ifesi ihuwasi ihuwasi pọ si kokeni lẹhin NAc overexpression ti ΔFosB jẹ igbẹkẹle CaMKII mejeeji.

Ni pataki, a ṣafihan fun igba akọkọ ti fifa ΔFosB ati CaMKII ni NAc ti afẹsodi afẹsodi eniyan, ni iyanju awọn fojusi ti o ṣeeṣe fun idawọle ọjọ iwaju. Awọn data wọnyi mulẹ pe ΔFosB ati CaMKII ṣe alabapin ninu iru-sẹẹli kan-ati ọpọlọ-ẹkunrẹrẹ t’ọlọtọ ifunni rere gẹgẹbi ọna pataki kan fun sisakoso ẹbun eleyii ti ọpọlọ ni idahun si kokeni onibaje.

ifihan

Ẹri pọ si ṣe atilẹyin wiwo ti awọn ayipada ninu ikosile jiini ṣe alabapin si awọn ọna ti afẹsodi oogun (Robison ati Nestler, 2011). Olulaja pataki kan ti awọn ayipada wọnyi ni ΔFosB, ifosiwewe transos kan ti idile Fos (Nestler, 2008). Isakoso onibaje ti o fẹrẹ to eyikeyi oogun ti ilo fa awọn ikojọpọ pipẹ ti ΔFosB ninu awọn eegun ipakokoro (NAc), agbegbe limbic pataki fun awọn ihuwasi ere. Sfifa irọbi han ni pato si kilasi ti NAc alabọde spiny neuron (MSN) ti o ṣalaye awọn olugba D1 dopamine. Ifiweranṣẹ nla ti a ko le ṣalaye ti ΔFosB ni iru NAC MSNs wọnyi D1 iru awọn npọ mu awọn iṣẹ ṣiṣe pọ si ati awọn idahun ti o ni ere fun awọn kokenkan ati morphine (Kelz et al., 1999; Zachariou et al., 2006), pẹlu iṣakoso iṣakoso eeyan ti pọ si (Colby et al., 2003). Pẹlupẹlu, jiini tabi idena ti gbogun ti iṣẹ-ṣiṣe transcriptional ΔFosB dinku awọn ipa ẹsan ti awọn oogun wọnyi (Zachariou et al., 2006), ṣafihan pe ifilọlẹ induction ti ΔFosB jẹ olulaja to ṣe pataki ti awọn ayipada to gun ni fifẹ ni NAc nipasẹ iṣakoso oogun oogun onibaje.

Iduroṣinṣin ti ko wọpọ ti ΔFosB (ti o ni ibatan si gbogbo awọn ọlọjẹ Fos miiran) jẹ ohun-ini iṣan ti iṣọn, nitori ipọnpọ ti awọn ibugbe degron ti o wa ni FosB ni kikun-ipari (Carle et al., 2007), ati ilana ilana ti ofin. FosB ni fosifeti ni vitro ati ni vivo ni Ser27, ati iṣe yii siwaju sii ni iduroṣinṣin ΔFosB, ~ 10-agbo, ni aṣa alagbeka ati NAc ni vivo (Ulery-Reynolds et al., 2009). Biotilẹjẹpe a ti fihan Ser27-ΔFosB lati jẹ aropo fun casein kinase-2 ni vitro (Ulery et al., 2006), ẹrọ rẹ ti ni vivo irawọ owurọ jẹ aimọ.

Kalsia amuaradagba-ti ibatan igbẹkẹle kinni II (CaMKII) jẹ iṣọn-jinlẹ afihan-jinlẹ / threonine kinase ti eyiti α ati β isoforms ṣe dodecameric homo- ati hetero-holoenzymes ni vivo, ati pe o ṣe pataki fun awọn ọna pupọ ti neuroplasticity (Lisman et al., 2002; Colbran ati Brown, 2004). CaMKIIα ti wa ni induced yiyan ni NAc ikarahun nipasẹ onibaje amphetamine (Loweth et al., 2010), ati idiwọ oogun elegbogi ti iṣẹ CaMKII ni ikarahun NAc dinku ifamọ ihuwasi si amphetamine (Loweth et al., 2008ati ẹla ()Pierce et al., 1998), lakoko ti apọju overexpression ti CaMKIIα ninu ipin NAc yii mu ifamọ aifọwọyi mọ si ati iṣakoso ti ara ẹni ti amphetamine (Loweth et al., 2010). CaMKIIα le ni ipa lori awọn ihuwasi ere nipasẹ iṣatunṣe awọn atungbe awọn olugba gbigbasilẹ AMPA glutamate (Pierce et al., 1998), bi iṣẹ CaMKIIα ti pẹ ni ajọṣepọ pẹlu iṣẹ olugba AMPA ati ifọkanbalẹ synaptik ni ọpọlọpọ awọn ọna neuroplasticity (Malinow ati Malenka, 2002).

Litireso yii ṣafihan ọpọlọpọ awọn afiwera laarin ΔFosB ati CaMKII: mejeeji jẹ pataki ati pe o to fun ọpọlọpọ awọn ipa ihuwasi ti awọn oogun ti ilokulo, mejeeji awọn ere igigirisẹ iwuwo dendritic ni ọpọlọpọ awọn oriṣi sẹẹli neuronal ni vivo (Jourdain et al., 2003; Maze et al., 2010), ati awọn mejeeji tiraka ni o kere diẹ ninu awọn ipa ihuwasi wọn nipasẹ modulu ti awọn olugba AMPA (Kelz et al., 1999; Malinow ati Malenka, 2002; Vialou et al., 2010). Pelu awọn afiwera wọnyi, ko si ọna asopọ iṣẹ kan laarin ΔFosB ati CaMKII ti a mọ. Nibi, a ṣe idasile ilana isọdọtun laarin ΔFosB ati CaMKII, ati ṣafihan pe awọn ọlọjẹ meji ṣe agbekalẹ D1-Iru ifunni kan pato-siwaju ifunni ni ikarahun NAc ti o jẹ fifa nipasẹ kokenin ati ṣe ilana ọpọlọpọ awọn ifunni kokeni ni vivo.

Lọ si:

Awon nkan ise nkan ati awon ona lati se nkan

Ibeere 1: iTRAQ Onínọmbà Olugbeja ti NAc Shell ati Mojuto Lẹhin Itọju Kokoro (1A X)

Agbalagba (Awọn ọsẹ 8) awọn eegun akọ ni a ṣakoso 20 mg / kg cocaine tabi IP ọkọ saline tabi lẹẹkan fun ọjọ kan fun ọjọ meje. 24 hr lẹhin abẹrẹ to kẹhin, ikarahun NAc ati mojuto rẹ jẹ microdissected (1A X) ati filasi ti o tutu. Awọn itupalẹ iTRAQ ni a ṣe bi a ti ṣalaye tẹlẹ (Ross et al., 2004; Davalos et al., 2010).

olusin 1

Ikarahun-kan pato induction ti CaMKII ni NAc nipasẹ kokeni

Ibeere 2: Quantifying Awọn iyipada Amuaradagba ni Iwontun-wonsi NAc mojuto ati ikarahun Lẹhin Itọju Ẹkọ (Ọpọtọ 1B – D)

Agbalagba (Awọn ọsẹ 8) awọn eegun akọ ni a ṣakoso 10 mg / kg cocaine tabi IP ọkọ iyo iyo omi lẹẹkan ni ọjọ kan fun awọn ọjọ meje ni awọn yara gbigbasilẹ locomotor. Awọn idahun ti a pe ni Locomotor si abẹrẹ kan ti kokenin (5 mg / kg IP) ni a gbasilẹ ninu awọn ẹranko ti a mu pẹlu iṣaaju pẹlu kokeni (ti a pe ni “onibaje”) ati apakan kan ti awọn ti a mu pẹlu iyo-iyo (ti a pe ni “ńlá”), ati awọn idahun lopoti si iyọ-iyo a gbasilẹ nikan ninu awọn ẹranko ti o ni iyọ ati onibaje to ku (ti a pe ni “iyo”). Awọn idaniloju iṣẹ-ṣiṣe Locomotor ni a ṣe bi a ti ṣalaye (Hiroi et al., 1997). Ni ṣoki, a fi awọn eegun akọ ti agbalagba ni 18 ”× 24” Awọn apoti gbigbasilẹ aaye PAS (Awọn ohun elo San Diego) fun 30 min lati gbe, ni a fun ni abẹrẹ IP kan ti iyo ati abojuto fun afikun 30 min, ati pe wọn fun Abẹrẹ IP ọkan ti 5 mg / kg cocaine ati abojuto fun 30 min.

24 hr ti o tẹle abẹrẹ ikẹhin yii, awọn eku ti ni idibajẹ laisi aapọn lati yago fun awọn ipa ti anesitetiki lori awọn ipele amuaradagba neuronal ati awọn ipinlẹ-phospho. Awọn ọpọlọ ni a ge lilu oni-nọmba ni matiresi 1.2 mm (Braintree Scientific) ati ki o yọ ẹran-ara apọju ni iyọ salfatie ti o ni iyọda ti o ni aabo (Roche) ati awọn amusowo phosphatase (Sigma Aldrich) awọn lilo awọn apo ifawọn 14 fun Puntọ NAc ati iwọn fifo 12 kan ti o ku ti o ku àsopọ fun ikarahun NAc (Wo 1A X) ati lẹsẹkẹsẹ aotoju lori yinyin gbẹ. Awọn ayẹwo ti wa ni homogenized nipasẹ sonication ina ni atunṣe modulu RIPA: 10 mM Tris base, 150 mM sodium chloride, 1 mM EDTA, 0.1% sodium dodecyl imi-ọjọ, 1% Triton X-100, 1% sodium deoxycholate, pH 7.4hat, aabo pH 4hat, pH 15ase bi loke. Lẹhin afikun ti ifipamọ Laemmli, awọn ọlọjẹ ti ya sọtọ lori XNUMX – XNUMX% polyacrylamaide graels gelle (Eto Criterion, BioRad), ati pe a ti ṣe imukuro Iwọ-oorun nipasẹ lilo Odyssey eto (Li-Cor) ni ibamu si awọn ilana iṣelọpọ.

Ibeere 3: Oniye awọn iyipada idaabobo ọlọjẹ ni Iwọn NAc mojuto ati ikarahun Lẹhin Iyọkuro Cocaine (Fig 1E)

Agbalagba (Awọn ọsẹ 8) awọn eegun akọ ni a ṣakoso 10 mg / kg cocaine tabi IP ọkọ saline tabi lẹẹkan fun ọjọ kan fun ọjọ meje. Awọn ọjọ 14 lẹhin abẹrẹ ikẹhin, awọn ẹranko ti a tọju pẹlu iyo ni a fun ni abẹrẹ miiran-iyo (ti a pe ni “iyo), ati awọn ẹranko ti o ni itọju pẹlu kokeni ni a fun abẹrẹ miiran iyo (ti a pe ni ọjọ 14 yiyọ tabi“ 14d WD ”) tabi abẹrẹ kan ti kokenin ( ti a pe ni “14d WD Chal” fun ipenija). Ni wakati hr lẹhin abẹrẹ ikẹhin, awọn ẹranko ni idibajẹ ati pipaarẹ Iwo-oorun bi o ti wa Ṣe idanwo 2.

Ibeere 4: Quantifying Awọn iyipada Amuaradagba ni Iwontun-wonsi NAc mojuto ati ikarahun Lẹhin Isakoso Iṣeduro Ẹmi (Ọpọtọ 2A – C)

A ṣe ikẹkọ awọn iṣiro lati ṣe abojuto 0.5 mg / kg / idapo ti kokenin ni awọn akoko ọkan-hr labẹ iṣeto 1-ti o wa titi fun ọjọ mẹsan. Lẹhin awọn akoko ipilẹ mẹsan, awọn eku pin si awọn ẹgbẹ meji ni iwọntunwọnsi nipasẹ gbigbemi kẹmika lori awọn akoko meji to kẹhin. Ẹgbẹ kan ti awọn eku laaye lati ṣakoso cocaine ti ara ẹni (0.5 mg / kg / idapo) ni awọn akoko-ọkan kan (wiwọle kukuru, ShA) lakoko ti ẹgbẹ miiran ti awọn eku ti ṣakoso iṣakoso ni awọn akoko mẹfa-wakati (wiwọle gigun, LgA ) fun awọn ọjọ mẹwa mẹwa (awọn akoko imudara).

A ṣe ilana opolo ọpọlọ fun immunohistochemistry bi a ṣe ṣalaye (Perrotti et al., 2004). Awọn ọpọlọ ni a fi turari 18 – 24 hr lẹhin ifihan ikẹhin si oogun, ti o yorisi ibajẹ ti amuaradagba FosB eyikeyi to ni iru iru pe gbogbo immunoreactivity ti o ku tan imọlẹ osFosB. Ibajẹ ibajẹ yii jẹ idaniloju nipasẹ pipaarẹ Iha iwọ-oorun, eyiti o fihan ko si idaamu pataki pẹlu anti anti directed lodi si C ipari ti FosB ipari-kikun ti ko ni idanimọ ΔFosB (data ko han). Lẹhin ti gige sinu awọn apakan 35 µm, nọmba awọn sẹẹli ajẹsara ti ΔFosB ni a ti ṣalaye nipasẹ afọju afọju ni awọn apakan meji nipasẹ NAc ti eku kọọkan, ati tumọ si awọn iye fun aaye 40 × lẹhinna lẹhinna ni iṣiro nipasẹ agbegbe fun ẹranko kọọkan. A ṣe akiyesi ẹranko kọọkan ni akiyesi ẹni kọọkan fun itupalẹ iṣiro. Awọn idanimọ ti awọn ipin ti wa ni idanimọ nipa lilo Paxinos ati Watson (Paxinos ati Watson, 2007).

Quantification ti CaMKIIα immunoreactivity ni a ṣe nipasẹ lilo eto Iṣẹ-aṣẹ bi a ti ṣalaye (Covington et al., 2009). Awọn agbara ibaramu ti CaMKII ati GAPDH ni ipinnu pẹlu sọfitiwia Odyssey. Awọn abajade ni a gbekalẹ bi awọn iye agbara kikankikan fun mm² o si gbekalẹ bi ọna ± sem (n = 4 – 10 fun ẹgbẹ kan). Awọn idiyele fun GAPDH ni a lo bi itọkasi lati ṣe deede iwuwo CaMKII fun sisanra sisanra ati awọn ipo.

olusin 2

Induction ti CaMKII ni ikarahun NAc ti ṣiṣakoso awọn eku ati awọn afẹsodi kokeni eniyan

Ibeere 5: Quantifying Awọn ipele Amuaradagba ni Awọn eniyan-igbẹkẹle Cocaine (2D X)

ilana

Awọn sẹẹli ọpọlọ eniyan ti Postmortem ni a gba lati Banki Ọpọlọ Quebec Su igbu Brain (Ile-ẹkọ Ile-ẹkọ Ile-ẹkọ Ilera ti Douglas, Ile-iṣẹ Montreal, Quebec, Canada). Itoju ti sẹẹli tẹsiwaju ni pataki bi a ti ṣalaye (Quirion et al., 1987). Ni ṣoki, ni kete ti o ba ti fa jade, a gbe ọpọlọ lori yinyin tutu ni apoti Styrofoam kan o si yara lọ si awọn ohun elo Bankbebe Apaniyan Quebec. Ẹdọfuramu niya lẹsẹkẹsẹ nipa gige sagittal ni aarin ọpọlọ, ni ọpọlọ ọpọlọ, ati cerebellum. Awọn ohun elo ẹjẹ, ẹṣẹ ọfun, iṣọn choroid, cerebellum idaji, ati idaji ọpọlọ idaji ni a ṣe deede lati fifa ni apa osi ti o ge ge ni iṣọkan sinu awọn ege cm-cm cm ṣaaju ki didi. Ipa idaji cerebellum idaji ni a ge sagittally sinu awọn ege 1cm nipọn ṣaaju didi. Awọn tissues jẹ itanna ti o tutu ni 1-methylbutane ni −2 ° C fun ~ 40 iṣẹju-aaya. Gbogbo awọn sẹẹli ti o tutu ni a tọju lọtọ ni awọn baagi ṣiṣu ni −60 ° C fun ibi ipamọ igba pipẹ. Awọn agbegbe ọpọlọ pato ni a yọ lati awọn ege coronal ti o tutu lori awo didan irin pẹlu yinyin ti o gbẹ ni ayika lati ṣakoso iwọn otutu ti ayika. O ṣe imuduro Iha Iwọ-oorun ni bi a ti ṣe apejuwe rẹ ninu Ṣe idanwo 2.

Ẹgba

Ẹgbẹ naa ni akojọpọ ọkunrin 37 ati awọn akọle obinrin 3, ti o wa ni ọjọ-ori laarin ọdun 15 – 66. Gbogbo awọn koko-ọrọ ku lojiji laisi ailorukọ igba pipẹ tabi aisan iṣaro gigun. Ninu ọrọ kọọkan, okunfa iku ni idaniloju nipasẹ ọfiisi Coroner ti Quebec, ati iboju toxicological ni a ṣe pẹlu awọn ayẹwo ti ara lati gba alaye lori oogun ati lilo nkan ti ko ni ofin ni akoko iku. Ẹgbẹ koko-ọrọ ni awọn ẹni-kọọkan 20 ti o pade awọn ibeere SCID-I fun igbẹkẹle kikan. Ẹgbẹ iṣakoso naa ni awọn akọle 20 pẹlu ko si itan ti igbẹkẹle kokeni ati pe ko si awọn iwadii aisan ọpọlọ. Gbogbo awọn akọle ku lojiji lati awọn okunfa ti ko ni ipa taara lori àsopọ ọpọlọ. Awọn ẹgbẹ ti baamu fun ọjọ ori koko-itumo, idaduro itutu, ati pH. Fun gbogbo awọn akọle, awọn iṣaro ọpọlọ ni a ṣe bi a ti ṣalaye tẹlẹ (Dumais et al., 2005), ngbanilaaye lati ni aaye si alaye ọran lori alaye ọpọlọ ati itan-akọọlẹ iṣoogun, gẹgẹ bi awọn ile-iwosan ati iwulo sociodemographic miiran ti o yẹ. Ni ṣoki, oniroyin olukọni ti ṣe ikẹkọ naa Ifọrọwanilẹnuwo isẹgun Ikẹkọ fun DSM-IV Awọn apọju Ọpọlọ (SCID-I) pẹlu ọkan tabi diẹ ẹ sii ti alaye ti ẹbi naa. Ẹgbẹ kan ti awọn ile-iwosan ṣe atunyẹwo awọn igbelewọn SCID-I, awọn ijabọ ọran, awọn akọsilẹ alakan, ati awọn igbasilẹ iṣoogun lati gba awọn iwadii aisan ọpọlọ.

6 Onimọnran: Itọju Imọye Itọju-ọrọ fun Chromatin fun Rat NAc (Ọpọtọ 3A – C)

Agbalagba (Awọn ọsẹ 8) awọn eegun akọ ni a ṣakoso 10 mg / kg cocaine tabi IP ọkọ saline tabi lẹẹkan fun ọjọ kan fun ọjọ meje. 24 hr lẹhin abẹrẹ to kẹhin, ikarahun NAc ati mojuto naa jẹ microdissected. A ṣe ilana immunoprecipitation ti Chromatin (ChIP) ni awọn igigirisẹ ijade NAc ti awọn ikarahun tabi mojuto lati awọn eku meje fun ẹgbẹ kan ni awọn ẹgbẹ lapapọ 14 (awọn ẹranko 98 lapapọ, awọn adagun awọ cocaine 7, awọn adagun omi iyo omi iyo omi 7). Awọn iṣọpọ ni asopọ mọ-wẹwẹ, wẹ, ati ni fipamọ ni −80 ° C titi ti irun-osin chromatin nipasẹ sonication. Chromatin Sheared ti wa ni abe pẹlu alẹ lo pẹlu awọn aporo ti a fiwe si awọn ilẹkẹ didan (Dynabeads M-280, Invitrogen). A lo IgG ti ko ni ajesara bi iṣakoso. Lẹhin asopọ-ọna asopọ iyipada ati isọdọmọ DNA, a lo qPCR lati wiwọn awọn ipele ti DNA olugbeleke CaMKIIα. A ṣe apẹrẹ awọn alabẹrẹ lati ṣafikun agbegbe ti o ni ọkọọkan ipohunpo AP-1 ti o wa pẹlu ~ 450 bp saju aaye ibẹrẹ gbigbejade (Siwaju: ACTGACTCAGGAAGAGGGATA; Yiyi: TGTGCTCCTCAGAATCCACAA).

olusin 3

Iru sẹẹli- ati agbegbe-kan pato inFosB induction ti CaMKIIα ni vivo

Ibeere 7: Wiwọn Atọka CaMKII ati Ifihan Amuaradagba pẹlu Ẹjẹ-Iru-Kan pato ΔFosB Overagexpression (3D X)

Oku bitransgenic eku yo lati NSE-tTA (laini A) × TetOp-ΔfosB (laini 11) ati NSE-tTA (laini B) × TetOp-FLAG-ΔfosB (laini 11) eku (Chen et al., 1998; Kelz et al., 1999; Werme et al., 2002; Zachariou et al., 2006) ti loyun ati ji dide lori 100 µg / ml doxycycline lati ṣe iyọkuro ikosile ΔFosB lakoko idagbasoke. A pin awọn ẹlẹgbẹ pẹtẹdiẹ ni jija ara: idaji wa lori doxycycline ati idaji ni a yipada si omi, ati pe a lo awọn ẹranko 8 si 11 awọn ọsẹ nigbamii nigbati awọn ipa transcription ti ΔFosB pọ julọ (Kelz et al., 1999; McClung ati Nestler, 2003). Fun awọn itupalẹ transcriptional, awọn eku ti yiyara de iyara, ati pe o yọ awọn opolo ati gbe lori yinyin. Awọn ifọpa ti NAc ni a mu pẹlu abẹrẹ abẹrẹ 14-won ati fifọ ni kiakia lori yinyin gbigbẹ titi ti RNA jade. Ipinya RNA, qPCR, ati itupalẹ data ni a ṣe gẹgẹ bi a ti ṣalaye tẹlẹ (LaPlant et al., 2009). Ni ṣoki, RNA ti ya sọtọ pẹlu TriZol reagent (Invitrogen), tun wẹ sii pẹlu ohun elo RNAeasy micro lati Qiagen, ati ṣayẹwo fun didara pẹlu Agilent's Bioanalyzer. A ṣe atẹjade iyipada ni lilo iScript (BioRad). a ti gbejade QPCR pẹlu eto Ẹrọ biosystems 7900HT RT PCR pẹlu awọn ọna agbekalẹ atẹle: 10 min ni 95 ° C; Awọn kẹkẹ 40 ti 95 ° C fun 1 min, 60 ° C fun 30 iṣẹju-aaya, 72 ° C fun 30 iṣẹju-aaya; alapapo ifunwara si 95 ° C lati ṣe agbekalẹ awọn iṣupọ pipin fun iṣeduro ti awọn ọja PCR ẹyọkan. Awọn itupalẹ immunohistoche kemikali ti ΔFosB ati ikosile amuaradagba CaMKIIα ni a ṣe bi a ti ṣalaye ninu rẹ Ṣe idanwo 4.

Aṣayan 8: Awọn ipa ti Intra-NAc D1 ati D2 Doceptam Antagonists lori Awọn iyipada Amuaradagba Cocaine-Mediated (Ọpọtọ 3H)

Agbalagba (Awọn ọsẹ 8) awọn eegun akọ ni a ṣakoso 10 mg / kg cocaine tabi ọkọ iyo iyo (ẹgbẹ “ọkọ”) IP lẹẹkan fun ọjọ kan fun ọjọ meje. 30 min saju abẹrẹ kookan kọọkan, awọn eku ni a ṣakoso IP boya D1 olugba antagonist SCH 23390 (0.5 mg / kg, “ẹgbẹ D1 Ant”), tabi D2 receptor antagonist eticlopride (0.5 mg / kg, “D2 Ant” ẹgbẹ)) , tabi abẹrẹ iṣakoso iyo (“ẹgbẹ kokenine”). 24 hr lẹhin abẹrẹ ikẹhin, awọn ẹranko ni iyasọtọ ati awọn ọlọjẹ ṣoki nipasẹ pipaarẹ Iha Iwọ-oorun bi fun Ṣe idanwo 2.

Aṣayan 9: Awọn Ipa ti AAV-Mediated ΔFosB Ikunju lori Iṣalaye Amuaradagba (Ọpọtọ 4 A – C)

Iṣẹ abẹ Stereotaxic ni a ṣe lori awọn eku ọkunrin agbalagba (awọn ọsẹ 8) lati fun AAV-GFP (amuaradagba Fuluorisenti alawọ) tabi AAV-GFP-ΔFosB (Maze et al., 2010). Awọn abẹrẹ wiwọn 33 (Hamilton) ni oṣiṣẹ fun gbogbo awọn iṣẹ abẹ, lakoko eyiti 0.5 µl ti ọlọjẹ ga-titer ti a ti sọ di mimọ ni apapọ akoko minii 5, tẹle atẹle afikun 5 min post-infusion infused. Gbogbo awọn ijinna ni a ṣe afiwe ibatan si Bregma: igun 10 °, AP = + 1.7 mm, Lat = 2.5 mm, DV = −6.7 mm. Awọn ọjọ 14 lẹhin iṣẹ abẹ, awọn ẹranko ni a fun ni abẹrẹ IP kan ti 10 mg / kg cocaine ninu awọn iyẹwu ibojuwo ipo lati ṣe ayẹwo awọn ipa ihuwasi ti oveFosB overexpression. 24 hr lẹhin abẹrẹ ikẹhin yii, awọn eku ti ni idibajẹ bi fun Ṣe idanwo 2, ati microdissection àsopọ ni a ṣe labẹ itọnisọna itosi itanna ti iwakusa lati gba iṣegun NAC ti o ni idaniloju. Western blotting ti a lẹhinna ṣe bi fun Aṣayan 2.

olusin 4

ΔFosB jẹ pataki ati pe o to fun cocaine-mediated D1 receptor-depend CaMKIIα induction ni ikarahun NAc

Ibeere 10: Awọn Ipa ti AAV-Mediated ΔJunD Ṣẹdun lori Imukuro Iduro Agbara Cocaine-Ọpọtọ 4 D-F)

Abẹrẹ sitẹrio ti AAV-GFP tabi AAV-GFP-ΔJunD ni a ṣe bi fun Aṣayan 8. Awọn ọjọ 14 lẹhin iṣẹ abẹ, awọn ẹranko ni a ṣakoso ni 10 mg / kg cocaine tabi IP ọkọ iyo iyo omi lẹẹkan ni ọjọ kan fun awọn ọjọ meje ni awọn yara gbigbasilẹ locomotor. Awọn idahun Locomotor si abẹrẹ kan ti kokenin (5 mg / kg IP) tabi a gba silẹ iru-iyo. 24 hr lẹhin abẹrẹ ikẹhin yii, awọn eku ti ni idibajẹ, burandi ẹran, ati awọn iwo-oorun Iwọ-oorun ti a ṣe bi ninu Aṣayan 9.

11 Idanwo: Ni Vitro Awọn Ooyan Oogun Kinase (Ọpọtọ 5A – D)

Atọka CaMKIIα ati ΔFosB ni a wẹ lati awọn sẹẹli kokoro (Brickey et al., 1990; Jorissen et al., 2007), ati awọn iṣeduro ete kinsi amuaradagba ni a ṣe ((Colbran, 1993), gẹgẹbi a ti ṣalaye tẹlẹ. Ni ṣoki, CaMKII ni iṣaju lori yinyin pẹlu 2.5 µM ​​(tabi ifọkansi itọkasi) ti ΔFosB, 1 mM Ca²⁺, 40 mM Mg²⁺, 15 µM ​​calmodulin, ati 200 mM HEPES pH 7.5. Pilathorylation ni ipilẹṣẹ nipasẹ afikun ti 200 µM ​​ATP pẹlu tabi laisi [γ-³²P] ATP ati gba ọ laaye lati tẹsiwaju fun 10 min ni iwọn otutu yara (Olusin 5A & B) tabi minii 2 lori yinyin (Olusin 5C & D.). Awọn ọja ti yanju nipasẹ didari Iha Iwọ-oorun (Olusin 5A & B) tabi nipasẹ autoradiogram ati kika kika scintillation (Fig B-D).

olusin 5

ΔFosB jẹ ọmọ-ọwọ agbara fun CaMKIIα

12 Idanimọ: Idanimọ ti PhoXhorylation Ser27 ΔFosB (Fig 5E)

Ni Vitro kinni awọn iṣeduro ni wọn ṣe bi fun Ṣe idanwo 11, awọn ọlọjẹ naa niya nipasẹ SDS-PAGE, ati awọn igbohunsafefe ti o baamu pẹlu ΔFosB ni a ti ge ni isalẹ ki o tẹriba si ibi-iṣọ to gaju. Awọn iṣẹ iyansilẹ m / z ti awọn idapọpọ iyin ti o baamu ni gbogbo awọn panẹli jẹ aami lori oke ti awọn tente oke dẹlẹ. Kii ṣe gbogbo awọn ions ida kan ni a samisi nitori awọn aaye aaye. Ni gbogbogbo, ọrọ fun awọn aami ion ida ti wa ni awọ ni dudu ayafi nigbati wọn ba jẹrisi taara tabi ṣafikun ẹri si niwaju awọn aaye ti irawọ owurọ, ninu ọran ti wọn samisi ni pupa. Ẹri fun awọn ọja pipin egungun ẹhin ni a gbekalẹ ni ipo atẹyinyin atẹyin ti phosphopeptide pẹlu aaye ti a rii ti isimi irawọ owurọ fihan ni pupa pẹlu yiyan lẹta lẹta amino acid kan. Apejuwe oni nọmba ti awọn ege ege ege ti a woye ni a tun samisi lori ọkọọkan peptide bii b ati y ions. Awọn okun zoomiki fun awọn apakan ti m / z ipo lati ṣafihan ipin isalẹ awọn ẹya ipinlẹ ni o samisi ni oke ti awọn iwoye ọpọ awọn ege kọọkan. Awọn ipin apa ti a fihan ninu nronu H ṣe idaniloju niwaju Ser27 fosfryryex isoformen, sibẹsibẹ, laarin idapọ ti awọn isospspryrylated miiran ti o wa ni awọn aaye Ser28, Ser31, Ser34, ati Thr37. Iwaju pa5, pa5-P, pb5, ati pb5-P ions ṣeduro iyasọtọ irawọ owurọ ti iṣẹku ti Ser27.

Ibeere 13: Quantification ti Ser27 fosifeti silẹ (Ọpọtọ 5F)

Awọn peptides boṣewa ni a ṣe apẹẹrẹ ijuwe ojiji ti awọn irawọ owurọ ati awọn fọọmu ti ko ni irawọ ti Ser27 NUMFosB. Lẹhin kolaginni ati isọdọmọ, “elo” idiotypic peptide ti o ni “pipẹ” ti tuka ni ifa omi 50 / 50 acetonitrile / firanṣẹ ati firanṣẹ fun itupalẹ amino acid lati pinnu ipin didi lori ojutu iṣura iṣura sintetiki. Kọọkan peptide “eru” kọọkan ni a fun ni taara sinu 4000 QTRAP mass spectrometer (MS) lati pinnu agbara ikọlu ti o dara julọ fun pipin MS / MS ati meji si awọn itejade MRM meji. Nigbamii, awọn peptides ti o wuyi “iwuwo” ni a tẹriba LCMS lori 4000 QTRAP lati rii daju pipin peptide. A ṣe irin-iṣẹ naa ni ipo meteta quadrupole, pẹlu Q1 ti a ṣeto lori idiyele m / z pato kan pato (Q1 kii ṣe ọlọjẹ), ati Q3 ṣeto si iye m / z pato kan ti o baamu si ipin kan pato ti peptide yẹn. Ni ipo MRM, lẹsẹsẹ awọn ifura kanṣoṣo (iṣọja iwaju / ipin awọn iyipada ibi ti agbara ikọlu jẹ tun lati ṣe iṣapeye kikankikan ti awọn ipin ida ti iwulo) ni a ṣe lelẹ leralera, ati pe a ti ta iyipo naa (ojo melo 1 – 2 iṣẹju-aaya) jakejado gbogbo akoko ti ipinya HPLC. Awọn iyipada MRM ni a ti pinnu lati inu ifihan MS / MS ti awọn peptides ti o wa. Awọn iyipo meji fun peptide, ti o baamu pẹlu awọn ipin ions idapọmọra giga, lẹhinna yan ati agbara ijamba iṣapeye lati mu iwọn ifihan agbara ti awọn itejade MRM lilo awọn adaṣiṣẹ adaṣe. Awọn oke ti o waye lati awọn peptides boṣewa ati awọn ayẹwo ΔFosB ti a fara han si CaMKII tabi iṣakoso lẹhinna ni akawe lati pinnu opo pipọ ti fọọmu peptide kọọkan ninu ifesi. Onínọmbà data lori data LC-MRM ni a ṣe nipasẹ lilo sọfitiwia X MultiXant 1.1.

14 Ayẹwo: Ifisi ti ΔFosB ni CaMKII Awọn eku Overagexpressing (Olusin 5G & H)

Transgenic eku overexpressing T286D CaMKII (Mayford et al., 1996; Kourrich et al., 2012) ati awọn ẹlẹgbẹ iru idalẹnu egan ni a gbe dide ni isansa ti doxycycline lati gba ikosile transgene. Awọn eku agba ni a ṣakoso 20 mg / kg cocaine tabi saline IP lẹẹkan lojoojumọ fun awọn ọjọ 14. 24 hr lẹhin abẹrẹ ikẹhin, awọn ẹranko ni iyasọtọ ati immunohistochemistry ati quantification ti expressionFosB ikosile ni a ṣe bi ninu Ṣe idanwo 4.

Aṣayan 15: Awọn Ipa ti HSV-Mediated ΔFosB Ojuxpression ati CaMKII Inhibition lori Awọn iyipo Dendritic NAc (Ọpọtọ 6A – E)

Awọn eku akọ agbalagba (awọn ọsẹ 8) ni a fun ni sitẹrio ni ipilẹ ni NAc pẹlu HSV-GFP, HSV-GFP-ΔFosB (Olausson et al., 2006), HSV-GFPAC3I, tabi HSV-GFPAC3I-ΔFosB. Ninu awọn ikole wọnyi, AC3I, oluyẹwo orisun-peptide ti iṣẹ-ṣiṣe CaMKII, ti dapọ si C-terminus ti GFP. GFPAC3I ni a kọsẹ nipasẹ PCR nipa lilo pMM400-vector ti o ni GFPAC3I gẹgẹ bi awoṣe pẹlu awọn alakọja atẹle: GFP-AC3I-F: 5 'CC GCTAGC GCCGCCACC ATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGT 3' (clampNheIKozak); GFP-AC3I-R: 5 'CC TCCGGA TTACAGGCAGTCCACGGCCT 3' (clampBspEIstop). Ọja PCR Abajade ni a fi sii sinu p1005 + ati p1005 + -Δ Awọn aṣogun FosB nipa lilo awọn aaye NheI ati BspEI. Ti a fọwọsi didaṣe nipasẹ sisẹ. Awọn alakoso Stereotaxic jẹ: igun 10 °, AP = + 1.6 mm, Lat = + 1.5 mm, DV = −4.4 mm (Barrot et al., 2002). Pipade ati ọpọlọ apakan ti a ṣe bi fun Ṣe idanwo 4.

A ṣe agbekalẹ ọpa ẹhinChristoffel et al., 2011). Ni ṣoki, awọn abawọn Dendritic 50 – 150 µm kuro lati soma ti yan laileto lati awọn sẹẹli HSV ti o ṣafihan GFP. A gba awọn aworan lori ibi-iṣọọpọ LSM 710 (Carl Zeiss) fun itupalẹ aarun nipa lilo NeuronStudio pẹlu algorithm rayburst. NeuronStudio ṣe itọsi awọn ẹhin bi tinrin, olu, tabi aapẹẹrẹ ti o da lori awọn iye wọnyi: (1) ipin ipin, (2) ori si ipin ọrun, ati iwọn ila opin ori (3). Spines pẹlu ọrun le ti wa ni classified bi boya tinrin tabi Olu, ati awọn ti wọn ko ni ọrun pataki ni a ṣe ipin bi aigbọngan. Awọn aami pẹlu ọrun kan ni a damo bi tinrin tabi olu ti o da lori iwọn ila opin ori.

olusin 6

Dena iṣẹ ṣiṣe CaMKII ṣe idilọwọ awọn ipa ati aapọn ihuwasi ti ΔFosB ni NAc

Ibeere 16: Awọn Ipa ti HSV-Mediated ΔFosB Ikunju ati Iṣẹ eefin CaMKII lori Awọn Idahun Ipara (Ọpọtọ 6F)

Awọn eku akọ agbalagba ni a fun pẹlu awọn ọlọjẹ bi fun Ṣe idanwo 15, ati awọn idahun idalehin si abẹrẹ kan ti 5 mg / kg ti kokeni jẹ wiwọn bi fun Aṣayan 9. Awọn data locomotor ni a ṣalaye bi fifọ tan ina tan-an pupọ lori 30 min lẹhin abẹrẹ awọ.

Alaye ni Afikun

Ilé Ẹran

Awọn eku Sprague Dawley eku (250 – 275 g; Awọn ile-iṣẹ Charles River) wa ni ipo-meji. Ọmọ mẹjọ-mẹjọ C57BL / 6J eku akọ (The Labour Jackson) ni a fi ẹgbẹ papọ pẹlu iwọn ti o pọju ninu awọn ẹranko marun marun fun ẹyẹ kan. Gbogbo awọn ẹranko ni a gbe si ile ẹran fun ọsẹ ≥1 ṣaaju awọn afọwọṣe idanwo ati gbe ni awọn yara ti o ṣakoso afefe (23 – 25 ° C) lori ina 12 hr / iyika dudu (awọn imọlẹ lori ni 7: 00 AM) pẹlu iraye si ounjẹ ati omi ipolongo libitum. Awọn aṣero ni a ṣe ni ibamu pẹlu awọn itọnisọna ti Awujọ fun Neuroscience ati abojuto eto igbekalẹ ẹran ati igbimọ lilo (IACUC) ni Oke Sinai.

oloro

Awọn oogun ni a ṣakoso IP ati tu ni iyọ-omi ti o ni iyọ, pẹlu kokenin (5 – 20 mg / kg fun 10 µl fun eku, fun 1 milimita fun awọn eku, NIDA) ati SCH 23390 tabi eticlopride hydrochloride (0.5 mg / kg fun 1 milimita, Tocris) . Fun iṣẹ abẹ sitẹriodu, eku ti di adarọ ese pẹlu “amulumala” ti ketamine (100 mg / kg) ati xylazine (10 mg / kg) (Henry Schein) ni iyọ-omi ti o ni iyọ.

Awọn alaibidi

CaMKIIα (lapapọ): Sokekeke 05 – 532, 1: 5,000

CaMKII phospho-Thr286: Promega V111A, 1: 1,000

ΔFosB (lapapọ): Ifaworanhan Foonu 5G4, 1: 250

ΔFosB phospho-Ser27: Awọn irawọ owurọ, 1: 500

GluA1 (lapapọ): Abcam, Ab31232, 1: 1,000

GluA1 phospho-Ser831: Millipore N453, 1: 1,000

GluA1 phospho-Ser845: Chemicon Ab5849, 1: 2,000

GluA2: Millipore 07 – 598, 1: 2,000

NR2A: Sigma HPA004692, 1: 2,500

NR2B: Millipore Ab1557P, 1: 1,000

Awọn iṣiro iṣiro

Gbogbo awọn atupale iṣiro ni a ṣe nipasẹ lilo package sọfitiwia Prism 6 (GraphPad) Ti lo idanwo t-akeko ọmọ-iwe fun gbogbo awọn afiwera ọlọgbọn-meji (ti o tọka ni Awọn abajade ibiti a ti fi iye t) fun, ati pe ọna kan ANOVA lo fun gbogbo awọn afiwe ọpọ (itọkasi ni apakan awọn abajade ibi ti wọn fi iye F) fun.

Lọ si:

awọn esi

Onibaje kokeni Induces CaMKII ni NAC ikarahun

Ọpọlọpọ awọn ijinlẹ ti fihan pe awọn MSN ni ikarahun NAc ati mojuto wọn ni awọn oriṣiriṣi biokemika ati awọn idahun ti ẹkọ iṣe si ifihan onibaje si awọn oogun ti ilokulo (Kourrich ati Thomas, 2009; Loweth et al., 2010) ati pe awọn ipin meji naa ṣe iyatọ awọn ihuwasi wiwa oogun (Ito et al., 2004). Lati pinnu awọn ipa iyatọ ti kokeni lori awọn amuaradagba awọn eroja ti ikarahun NAc vs. mojuto, a ti lo Ilobapọ Isobaric Ijọpọ pupọ (iTRAQ) ati ibi-itọju ibi-itọju nla kan (MS / MS). Awọn eku ọkunrin akọ ni a fi sinu abẹrẹ IP pẹlu kokenin (20 mg / kg) tabi iṣan-omi lojoojumọ fun awọn ọjọ 7; 24 hr lẹhin abẹrẹ to kẹhin, ikarahun NAc ati mojuto rẹ jẹ microdissected (1A X) ati filasi ti o tutu. Awọn ọlọjẹ ninu awọn ayẹwo wọnyi lẹhinna jẹ ibeere ni lilo iTRAQ. Gbogbo awọn isoformasi CaMKII mẹrin ṣe afihan awọn ilosoke nla ninu ikosile lẹhin itọju kokeni ti o jẹ pato si ikarahun NAc ni afiwe si mojuto. Orisirisi awọn fosifeti amuaradagba, pẹlu PP1 catalytic ati awọn ipinfunni ilana ati PP2A, eyiti a ti ni iṣọpọ tẹlẹ pẹlu ọpọlọpọ awọn amọdaju CaMKII ni awọn eto miiran (Colbran, 2004), tẹle apẹẹrẹ kanna. Awọn awari wọnyi pese iwe aramada, ẹri ti a ko fi oju han pe ọna ọna ami ami CaMKII ni a ṣakoso ofin nipasẹ kọọmu ni NAc ni ọna ikarahun kan pato.

Lati jẹrisi wiwa yii ni pipọ, a ṣe itọju awọn eku bi loke pẹlu kokeni (ni awọn abẹrẹ to yatọ) tabi iyọ ati awọn idahun idahun koleki si kọọdu kan (5 mg / kg) tabi iwọn iyọ iyọ iyọ. Ifihan tunṣe si 10 mg / kg cocaine yorisi ni apẹẹrẹ aṣoju ti ifamọ ipo ẹru (1B X). Awọn ijinlẹ siwaju pẹlu ilana ifaagun dosing yii ti a fi han, nipa lilo pipaarẹ Iha Iwọ-oorun, pe atunyẹwo kikan tun le ṣe okunfa CaMKIIα yiyan ni NAC ikasi 24 hr lẹhin abẹrẹ ikẹhin ti kokeni (Ọpọtọ 1C ati D; p = 0.0019; F = 7.943; df = 29). Ni afikun, phosphorylation ti canonical CaMKII aropo Ser831 ti ipin GluA1 ti olugba AMPA ti pọsi ni ikarahun NAc ati kii ṣe mojuto (p = 0.0261; F = 4.208; df = 28), lakoko ti CaMKIIα Thr286 autophosphorylation ni lagbara ṣugbọn kii ṣe aṣa to ṣe pataki si fifa irọbi ni ikarahun nikan (1D X). Orisirisi awọn olugba glutamate miiran ko ni arowoto. Ni idakeji awọn iwọnwọn wọnyi ti CaMKII, awọn ayẹwo awọ-ara kanna ti o ṣe afihan induction ti ΔFosB ninu ikarahun mejeeji (p = 0.0260; F = 4.189; df = 29) ati mojuto (p = 0.0350; F = 3.807; df = 29) ti NAc (Ọpọtọ 1C ati D), ni ibamu pẹlu awọn awari iṣaaju (Perrotti et al., 2008).

Niwọn igba ti awọn ijinlẹ iṣaaju ti ilana ilana kokenini ti awọn olugba AMPA ṣe atupale awọn ẹranko lẹhin ~ Awọn ọjọ 14 ti yiyọ kuro lati kokeni onibaje (wo Ọrọ ijiroro), a tun ṣe awọn itupalẹ biokemika wọnyi ni aaye yii. A rii pe, Awọn ọjọ 14 lẹhin abẹrẹ ikẹhin ti kokenin, ΔFosB wa ni ipo giga ni NAc (p = 0.0288; F = 4.258; df = 22), lakoko ti CaMKII tabi awọn irawọ owurọ ti GluA1 Ser831 ṣi pọ si (Fig 1E). Sibẹsibẹ, 1 hr lẹhin iwọn idaamu 10 mg / kg kan ti kokeni, awọn ipele ti lapapọ CaMKII (p = 0.0330; F = 3.947; df = 26) ati ti GluA1 Ser831 (p = 0.0213; F = 4.509; df = 27) phosphorylation jẹ igbesoke mejeeji si iwọn kan ti o rii lẹhin ifihan iṣọn onibaje ni ibẹrẹ (Fig 1E). Awọn data wọnyi tọka pe awọn neurons ikara ikara NAc jẹ ipilẹṣẹ fun fifa irọbi CaMKII lakoko awọn akoko itusilẹ, boya nipasẹ priming taara ti olugbeleke gene gene CaMKII (wo Ọrọ ijiroro). Pẹlupẹlu, otitọ pe ΔFosB induction jẹ iduroṣinṣin ju ifilọlẹ CaMKII ni imọran aye ti awọn ọna afikun, boya orisun-chromatin tabi bibẹẹkọ, ti o ṣe “idẹke kan” lori ilana CaMKII, gẹgẹ bi a ti bo ninu ijiroro.

Lati lekun awọn akiyesi wọnyi siwaju, a ṣawari awọn awoṣe ti iṣakoso iṣakoso kikan, eyiti o pẹlu gbigbemi oogun ti o ni iyọọda. A fun awọn eegun akọ tabi abo boya wiwọle kukuru tabi gigun si kokenkan; bi o ti ṣe yẹ (Ahmed ati Koob, 1998), awọn ipo wiwọle gigun nikan ti o yori si ṣiṣe iṣakoso ararẹ ti oogun (2A X). ΔFosB ti a lilu si iwọn ti o tobi nipasẹ pipẹ vs. iwọle kukuru si kokenin ni ikarahun NAc mejeeji (p = 0.0011; F = 11.12; df = 17) ati mojuto (p = 0.0004; F = 13.86; df = 17). Ni ifiwera, CaMKIIα ṣe ifilọlẹ ni ikarahun NAc nikan nipasẹ wiwọle pipẹ si kokeni (Ọpọtọ 2B ati C; p = 0.0236; F = 4.957; df = 16). O jẹ ohun ti o nira lati ṣe afiwe apapọ gbigbemi cocaine lojoojumọ kọja awọn ẹranko ti o ni iwọle si (~ 12 mg / kg IV), awọn ẹranko ti o ni wiwọle-gun (~ 70 mg / kg IV), ati awọn ẹranko ti a nṣakoso ṣàdánwò (10 mg / kg), ati beere idi ti igbehin elicits logan induction ti ΔFosB ati CaMKII ṣugbọn kukuru-wiwọle ko ṣe. Iyatọ yii ṣee ṣe nitori awọn iyatọ ninu awọn ipele cocaine ti o pọ julọ (a ti fun kokenine ti a ṣakoso pẹlu bi a bolus kan ṣoṣo, lakoko ti a ti gba kọọdu ti iṣakoso ti ara ẹni nipasẹ awọn abere IV pupọ), tabi nipasẹ awọn iyatọ ni gigun ifihan ifihan oogun (awọn ọjọ 7 fun oniyewe iṣakoso, awọn ọjọ 19 fun iṣakoso ara ẹni).

Laibikita awọn iwe nla lori osFosB ati CaMKII ni igbese cocaine, ko si awọn ijinlẹ ti awọn ọlọjẹ wọnyi ni awọn olumulo kokeni eniyan. Nibi, a ṣafihan ẹri akọkọ pe awọn ipele ti ΔFosB mejeeji (p = 0.0316; t = 1.921; df = 34) ati CaMKII (p = 0.0444; t = 1.755; df = 32) ti pọ si ni NAc ti awọn eniyan igbẹkẹle kokeni (2D X, Table 1). Awọn data wọnyi tọka pe iwadii wa ti ΔFosB ati CaMKII induction nipasẹ cocaine ni NAc ti o ni agbara jẹ ibamu si afẹsodi afẹsodi eniyan.

Table 1

Ifiwewe ti awọn ayẹwo lati awọn eniyan afẹsodi eeyan ati ẹgbẹ iṣakoso ti ibaamu

ΔFosB ṣe atunto Atagba TransM CaMKII ni yiyan ni D1-Iru MSNs ti NAc Shell

Wiwa pe CaMKII ati ΔFosB mejeeji ni irẹpọ nipasẹ cocaine ninu NAC ti o ni agbara mu wa lati pinnu boya ΔFosB le ṣe ilana transcription ti idile CaMKII. A ti sọ tẹlẹ CaMKIIα bi afojusun ti o ṣeeṣe fun ΔFosB ninu igbekale microarray alailowaya ti NAc (McClung ati Nestler, 2003), ṣugbọn wiwa yii ko ni imudarasi siwaju ninu iwadi yẹn. A kọkọ lo ChIP ti onirọpo (qChIP — ChIP atẹle nipa PCR pipọ) lati pinnu boya ΔFosB di olupolowo CaMKIIα pupọ ni NAc ti awọn eku akọ akọ tabi abo, ati pe a wa ni l’akoko pe iṣipọ yii pọ si ni pataki, nipasẹ iṣakoso kokeni onibaje, ninu ikarahun ( p = 0.0133; t = 2.901; df = 12), ṣugbọn kii ṣe mojuto, ipinya (3A X). Lati ni oye siwaju si awọn ọna ti o jọmọ si ipin-inu-iyasọtọ pato ni ΔFosB ti o di olupolowo CaMKIIα, a lo qChIP lati ṣe idanimọ ipo ti awọn igbesoke histone ni agbegbe jiini yii. Awọn iṣaaju ti ṣafihan ifilọlẹ klasini ti acetylation H3 ni olupolowo CaMKIIα ni apapọ Asin lapapọ NAc (Wang et al., 2010). Ni ifiwera, a rii pe kokeni dinku idinku acetlation H3 ni olupolowo CaMKIIα yiyan ni ipin NAc (3B X; p = 0.0213; t = 2.726; df = 10), pẹlu ko si iyipada ti o han ni ikarahun, ni ibamu pẹlu ipin-ṣoki pato awọn iyipada chromatin ti o kọja si abuda ΔFosB. qChIP fun ami idagabẹrẹ, dinku H3 lysine 9 (H3K9me2), ṣafihan awọn aṣa fun idinku ninu mejeeji ikarahun ati awọn ipilẹ mojuto (3C X).

Lati pinnu boya ΔFosB ṣe ilana transcription CaMKIIα ni vivo, a lo awọn laini Asin bitransgenic meji ti o ṣe inducibly overexpress ΔFosB ni pataki ni D1 vs. D2-Iru MSNs ni ọna ti iṣakoso nipasẹ iṣakoso doxycycline ni omi mimu (Chen et al., 1998; Kelz et al., 1999; Werme et al., 2002). Agbalagba ọkunrin eku overexpressing ΔFosB daada ni D1-Iru MSNs ti ni alekun awọn ipele ti CaMKIIα mRNA ni NAc (p = 0.0337; t = 1.996; df = 13), ipa ti a ko rii ni eku overexpressing ΔFosB ni pataki julọ ni iru MSNs D23D X). Alekun ti CaMKIIα mRNA, ti a ṣe nipasẹ ifilọlẹ ΔFosB ni iru MSNs D1, ni a mu pẹlu ifunpọ pọ si amuaradagba CaMKIIα ninu ikarahun NAc mejeeji (p = 0.0030; t = 3.578; df = 14) ati mojuto (p = 0.0392; t = 2.275; df = 14; Ọpọtọ 3E ati F). Awọn data wọnyi ṣafihan pe ΔFosB lagbara lati ṣe iwakọ ifarahan ẹbun CaMKIIα ni D1-Iru MSNs ni awọn ẹka mejeeji, botilẹjẹpe Ṣe nọmba 3B daba pe awọn iyipada chromatin ti kola-kola ni agba igbega CaMKIIα (fun apẹẹrẹ, idinku acetylation) dena ΔFosB lati ṣe agbega CaMKII ni ipinlẹ mojuto lẹhin ti kokeni.

Nitori data asin transgenic wa tọka si pe ifunni ΔFosB ti ikasi pupọ pupọ ti CaMKII jẹ pato si iru MSN ti D1 ni NAc, atẹle wa lati pinnu boya ilana igbẹkẹle kokeni ti CaMKII nilo ifisilẹ ti olugba D1 dopamine. Awọn eku ọkunrin agbalagba ni a fun ni kokeni onibaje tabi iyọ bi iṣaaju, ṣugbọn 30 iṣẹju ṣaaju abẹrẹ kọọkan, awọn eku ninu ẹgbẹ kokeni ni a fun ni abẹrẹ IP ti iyọ, alatako D1 SCH 23390 (0.5 mg / kg), tabi olugba olugba D2 eticlopride (0.5 mg / kg). A ṣe itupalẹ awọn ẹranko 24 hr lẹhin abẹrẹ ikẹhin ti kokeni. Idoti Iha Iwọ-oorun fi han pe D1, ṣugbọn kii ṣe D2, atakoko ṣe idiwọ ilosoke ilaja kokeni ni ΔFosB (p <0.0001; F = 18.96; df = 18), bi a ti royin tẹlẹ (Nye et al., 1995), bi daradara ni CaMKII (p = 0.0005; F = 10.99; df = 18; Ọpọtọ 3G ati H). Awọn data wọnyi ṣe atilẹyin ẹda-ọrọ ti kokeni n ṣe afikun ilolupo ΔFosB-iyin-ọrọ ninu ikosile ẹbun CaMKII pataki ni D1-Iru MSNs ti ikarahun NAc. Yoo jẹ pataki ninu awọn iwadii ọjọ iwaju lati ṣafihan taara ipa-iru ipa kan pato ti kokenini lori ikosile CaMKII laarin agbegbe ọpọlọ yii.

ΔFosB jẹ Iwọn mejeeji Tọju ati O to fun Itọju Ẹlẹ-ara ti CaMKII ni NAC Shell

Lati ni ibamu pẹlu lilo awọn eku bitransgenic, a kọwe atẹle ti ipa ti ΔFosB ni ṣiṣalaye ifasita kokeni ti CaMKIIα nipa lilo gbigbe gbigbe jiini-ilaja jiini ni awọn eku. A ni awọn iṣan patikulu abomọ-idapọ ti idapọmọra adeno (AAV) sinu ikarahun NAc ti awọn eku akọ ọkunrin (nibiti a le yan ikarahun yiyan) si overexpress ΔFosB pẹlu GFP tabi GFP nikan. Lẹhinna a fun awọn ẹranko ni abẹrẹ IP kan ti kokeni 10 mg / kg. Awọn ẹranko ti ṣe ohun elo ifaworanhan ΔFosB / GFP ṣafihan esi idawọle ti o pọ si akawe si awọn ẹranko ti o pọ si GFP nikan (4A X). 24 hr lẹhin abẹrẹ kokankan kan, awọ-ara NAC ti ara Gcc ni a yọ jade kuro ninu awọn ẹranko wọnyi nipa itankale labẹ orisun ina Fuluorisenti kan. Iyọlẹnu ara ti Iwọ-OorunỌpọtọ 4B ati C) ti ṣafihan agbara ΔFosB ti o lagbara pupọ bii ilosoke pataki ni amuaradagba CaMKIIα lapapọ akawe si awọn ẹranko GFP (p = 0.0070; t = 2.894; df = 30), iru si fifa ti a rii pẹlu iṣakoso kokeni onibaje. Ni afikun, CaMKIIα autophosphorylation ni Thr286 (itọkasi ti imuṣiṣẹ enzymu) pọ si nipasẹ ΔFosB overexpression (p = 0.0330; t = 2.243; df = 28), bi o ṣe jẹ irawọ-ọrọ ti aropo CaMKII, Ser831 ti GluA1 (p = XNUM; x = xNUMX; 0.0540; df = 2.012), tun nfarawe awọn iṣe ti kokeni onibaje (Ọpọtọ 1C ati D). Tni apapọ, awọn data wọnyi pese ẹri siwaju pe ikosile ΔFosB ni ikarahun NAc jẹ to fun ifamọ ibi-ara si kokenkan ati fun ifasilẹ ati ṣiṣe CaMKII ni ipinya yii.

A lo ọna kan ti o jọra lati pinnu boya ΔFosB tun jẹ pataki fun ifunpọ awọ-cocaine ti CaMKIIα ni ikarahun NAc. A lo AAV lati ṣe iṣupọ amuaradagba JunD ti o rọ, ti a pe ni ΔJunD, eyiti o jẹ olutọsọna odi ti activFosB transbetal transcriptional (Winstanley et al., 2007) pẹlu GFP tabi GFP nikan. Ni ọsẹ meji lẹhinna, nigbati ikosile transgene jẹ iwọn ti o ga julọ, a fun awọn ẹranko ni kokeni (10 mg / kg) tabi iyọ lojoojumọ fun awọn ọjọ 7, ati idanwo fun awọn idahun idahun locomotor si ipenija koko (5 mg / kg) 24 hr lẹhin abẹrẹ onibaje to kẹhin (4D X). ΔJunD overexpression ṣe idiwọ ifamọra ile-iṣẹ si kokeni, ati tun ṣe idiwọ ifaami CaMKIIα ati ṣiṣiṣẹ ni ikarahun NAc (Ọpọtọ 4E ati F; p = 0.0437; F = 2.997; lapapọ df = 38), o nfihan pe iṣẹ ṣiṣe transcription ti ΔFosB jẹ pataki fun ifasita awọ-iṣọn-kekere ti CaMKIIα ni apa isalẹ yii. O yanilenu, a rii pe ΔJunD dinku awọn ipele ti ΔFosB labẹ iyo ati awọn ipo itọju cocaine (p = 0.0004; F = 8.110; df = 35), igbega igbega aramada pe ΔFosB da lori iṣẹ AP-1 fun awọn ipele ikosile tirẹ.

CaMKII Phosphorylates ΔFosB ni Ser27

lilo ni vitro awọn amuaradagba kinase amuaradagba, a pinnu pe ifiedFosB ti a wẹ mimọ jẹ aropo logan fun CaMKIIα. Inu ti Re₆-ΔFosB pẹlu CaMKIIα ati ATP ṣe ayipada gbigbe si oke ni iṣipopada electrophoretic ti ΔFosB (5A X); awọn ẹgbẹ igbohunsafẹfẹ abajade ti o daba pupọ awọn aaye pupọ ti irawọ owurọ. Kanna ni vitro kinase assays lilo γ-³²P] ATP fihan iṣakojọpọ ti idapọmọra radiolabeled sinu awọn igbohunsafefe ΔFosB5B X), iṣafihan phosphorylation taara ti amuaradagba. A ṣe ipilẹṣẹ irawọ kan-pato kan si Ser27 ti o ni iṣaju ti ΔFosB (Ulery et al., 2006). Lakoko ti anti anti yii ko ṣe ifihan agbara kan si awọn isediwon ọpọlọ ti o ni Ser27-phosphorylated ΔFosB (data ti ko han), a ni anfani lati ṣe awari idaṣẹ phoXhory Ser27 ninu ni vitro kinase assay lilo CaMKII (5B X). Awọn itupalẹ Kinetic ti CaMKII irawọ owurọ ti ΔFosB tọka pe o jẹ iyọkuro agbara fun kinase (5C X), pẹlu ifarahan K_M ti 5.7 ± 2.0µM ati K_nran ti 2.3 ± 0.3min^-1. Awọn abajade wọnyi ni afiwera si ọpọlọpọ daradara-ṣe apejuwe ni vivo awọn sobsiti CaMKII (Colbran ati Brown, 2004). Ni afikun, a pinnu pe CaMKII phosphorylates ΔFosB pẹlu stoichiometry kan ti 2.27 ± 0.07 mol / mol (5D X), o nfihan pe o kere ju awọn aaye mẹta mẹta ti CaMKII phosphorylation laarin Oun₆-ΔFosB amuaradagba, ni adehun pẹlu 5A X.

Lati ṣe iwadii awọn aaye ti ẹni kọọkan ti irawọ owurọ, a lo awọn itupalẹ MS ti awọn ayẹwo lati ọdọ wa ni vitro kinase assays. Fig 5E ṣe afihan phosphorylation ΔFosB ni Ser27 ti o ni iṣaaju ati ni ọpọlọpọ awọn aaye afikun (data ko han). Fun fifun iṣafihan iṣẹ iṣaaju ti Ser27, a ni idojukọ lori aaye yii nipa jijẹ aami ti o ni aami peptides sintetiki ti o nmọ si irawọ-ati awọn ipinlẹ ti non -spspho-ti Ser27, lẹhinna lo awọn titobi ti a mọ ti awọn peptides wọnyi bi awọn ajohunše ni awọn itupalẹ MRM ti ΔFosB ṣaaju ati lẹhin ni vitro irawọ owurọ nipasẹ CaMKII. Iwọn atẹleỌpọtọ 5F) jẹrisi pe Ser27 jẹ aropo agbara fun CaMKII. Awọn abajade wọnyi tọka pe, laarin awọn iṣẹku ti ọpọlọpọ awọn gbigbeku laarin ΔFosB, Ser27 jẹ aropo ti o munadoko pataki fun CaMKII.

CaMKII Mediates Cocaine ikojọpọ ti ΔFosB ni ikarahun NAc

Niwon CaMKII le ṣe irawọ owurọ spFosB ni vitro ni aaye ti o ṣe alekun iduroṣinṣin rẹ ni vitro ati ni vivo (Ulery et al., 2006; Ulery-Reynolds et al., 2009), a pinnu boya CaMKII awọn iṣẹ ṣiṣe iṣakoso awọn ipele levelsFosB ni NAc ni vivo. Lati koju ibeere yii, a kọkọ lo laini Asin kan ju iwọn lilo alamọ-kalisẹ-ara ti CaMKIIα (T286D) ni awọn agbegbe ọpọlọ lọpọlọpọ pẹlu NAc (Mayford et al., 1996; Kourrich et al., 2012). A abẹrẹ akọ-ara akọ ti ara akọ ati akọ ati abo lilu pẹlu XCXX mg / kg cocaine tabi iyo-lẹẹkan lẹẹkan ojoojumọ fun awọn ọjọ 20, lẹhinna ṣe itupalẹ awọn ẹranko ni ọjọ kan lẹhin abẹrẹ ikẹhin. A rii pe awọn ipele basal ti ΔFosB pọ si ni awọn ẹranko ẹranko ni ikarahun NAc (p = 14; F = 0.0001; df = 9.207), ṣugbọn kii ṣe ipilẹ (Ọpọtọ 5G ati H). Ni iyalẹnu, ifilọlẹ igbẹkẹle koko-koko ti ΔFosB ti ni idiwọ ninu awọn ẹranko mutant ni ikarahun mejeeji ati mojuto, ni iyanju pe, botilẹjẹpe CaMKII le ṣe ilana iduroṣinṣin taara stabilityFosB ni ikarahun NAc, o le tun dubulẹ loke ti ΔFosB ni awọn ipa ọna ṣiṣiṣẹ kokeni ni awọn ilana apa mejeeji NAc .

A nilo iṣẹ-ṣiṣe CaMKII fun ΔFosB-Ilana Ilana ati ihuwasi Agbara

Wiwọle kokenini ti awọn itọsi dendritic lori NAc MSNs jẹ ọkan ninu awọn aṣamubadọgba ifasimu ti oogun ti o dara julọ ni agbegbe ọpọlọ yii, ati pe iru ifọnkan ọpa-ẹhin ni a ti ni ibamu pẹlu awọn idahun ihuwasi ihuwasi si oogun naa (Robinson ati Kolb, 2004; Russo et al., 2010) o si royin lati jẹ yiyan fun MSNs-D1-type (Lee et al., 2006). A ti ṣe afihan laipẹ pe ifilọlẹ kokenini ti awọn itọsi dendritic ni NAc jẹ igbẹkẹle lori ΔFosB ati eto eto iṣalaye isalẹ rẹ (Maze et al., 2010). Bi o tilẹ jẹ pe iwe-ọrọ nlanla wa nipa ilowosi ti CaMKII ni dendritic ọpa ẹhin egungun ati fifa ni awọn agbegbe ọpọlọ miiran ati awọn ọna ṣiṣe idanwo (Jourdain et al., 2003; Penzes et al., 2008; Okamoto et al., 2009), ipa rẹ ni dida ẹda ẹhin NAN MSN ti a ko kọ iwadi. Nitorinaa, a pinnu boya iṣẹ CaMKII ni a nilo fun ΔFosB-ti n ṣalaye awọn iṣan ti iṣan ti MSN nipasẹ lilo iṣupọ iṣaro-iṣaro HSV ti idiwọ CaMKII inhibitor peptide AC3I dapọ si GFP, iṣelọpọ ti iṣafihan tẹlẹ lati ṣe idiwọ iṣẹ CaMKII ni vivo (Zhang et al., 2005; Klug et al., 2012). Iwoye apọju ti ΔFosB ni ikarahun NAc ti awọn eku agbalagba fa ilosoke pataki ninu iwuwo ẹhin MSN dendritic (p <0.0001; F = 8.558; df = 59; Ọpọtọ 6A ati B) gẹgẹbi a ti royin tẹlẹ (Maze et al., 2010), ati pe alekun yii jẹ iwakọ nipataki nipasẹ tinrin (p = 0.0027; F = 5.319; df = 59) ati stubby (p = 0.0378; F = 2.988; df = 59) awọn oriṣi ọpa ẹhin (mejeeji ro pe wọn jẹ awọn ọpa ẹhin ti ko dagba) ()Ọpọtọ 6C – E). Ko si ipa ti a ri lori ogbo diẹ, awọn ẹyẹ ti o ni olu. Sibẹsibẹ, nigbati GFP-AC3I ti parowa, ΔFosB indu ti awọn eegun ti parẹ patapata (Ọpọtọ 6A – E), ṣafihan pe iṣẹ-ṣiṣe CaMKII ni a nilo fun ΔFosB fifa ifa awọn eegun dendritic ni ikarahun NAc.

Nigbamii a lo awọn irinṣẹ viral kanna lati pinnu boya iṣẹ CaMKII nilo fun awọn ipa ΔFosB lori ifamọ ihuwasi si kokeni. 72 hr lẹhin abẹrẹ ajẹsara sinu ikarahun NAc, a fun awọn ẹranko ni abẹrẹ kan ti 5 mg / kg kocaine ati iṣẹ ṣiṣe ipo wọn silẹ. Gẹgẹbi a ti ṣafihan tẹlẹ pẹlu isunmọ AAV ti o pọ si ti ΔFosB (4A X), HSV-mediatexpression ti ΔFosB ṣe ifamọra ifamọra ẹdun si kọọdu (p = 0.0002; F = 8.823; df = 37; Ọpọtọ 6F). Gẹgẹbi pẹlu fifa irọpa awọn itọsi dendritic, idiwọ ti iṣẹ CaMKII nipasẹ coexpression ti GFP-AC3I patapata dina increaseFosB-iṣalaye ilosoke ninu ifamọ awọ, ti o tọka pe iṣẹ CaMKII nilo fun teFosB-induced awọn atunṣe ni awọn ipa ihuwasi cocaine.

Lọ si:

fanfa

Iwadi lọwọlọwọ ṣe alaye ẹrọ-siwaju siwaju kikọ sii aramada nibiti kokeni ṣe ifamọra ΔFosB ni NAc, eyiti o ṣe ifisilẹ iwe ti KaMKIIα pupọ pupọ yan ni ikarahun NAc. CaMKIIα atẹle fosifeti ati ṣatunṣe andFosB ti o yori si ikojọpọ ΔFosB nla ati si fifa irọbi CaMKIIα (Ọpọtọ 6G). Awọn ipele iṣakojọpọ ti awọn ọlọjẹ meji lakoko ifihan onibaje si kokenine lẹhinna ṣetọju ni awọn ọna pataki lati ṣe akiyesi awọn idahun ihuwasi ihuwasi si oogun naa. Eyi jẹ iyanilẹnu pataki paapaa bi asFosB ati CaMKII ṣe afihan kọọkan ni iṣaaju lati nilo fun awọn idahun ihuwasi ihuwasi si kokeni (Pierce et al., 1998; Peakman et al., 2003), ati pe a ṣe iṣawakiri wiwa yii fun ΔFosB ni ikarahun NAc ni pataki ni lilo ọna ọna gbogun kan (Ọpọtọ 4 ati Ati66).

Biotilẹjẹpe transgenic ΔFosB overrexpression ni D1-Iru MSNs le ṣe induction CaMKII ni mejeeji NAc ikarahun ati mojuto ti awọn ẹranko kocaine-naïve, ni aaye ti kokeni, ikojọpọ ti ΔFosB endogenous, eyiti o waye ni awọn ipinlẹ mejeeji, iwakọ ifaworanhan ti CaMKII pataki ni ikarahun NAc . Iyatọ yii le ni ibatan si awọn ipele giga ti ΔFosB ti a ṣe sinu awoṣe bitransgenic wa, sibẹsibẹ, o le tun ṣe afihan agbara ti kokeni lati ṣe iyatọ iyatọ alapolowo CaMKIIα ninu ikarahun vs. MSNs to ṣe pataki si igbelaruge abuda ΔFosB ni iṣaaju tabi yọkuro rẹ ni ipinlẹ igbehin. Ni otitọ, data ChIP wa, eyiti o ṣe afihan pipin nipa kokeni-mediated ti awọn akole ni olugbeleke ẹbun CaMKIIα ni ipin NAc nikan, ṣe atilẹyin ilowosi ti o ṣeeṣe ti ẹrọ chromatin kan. Ni fifipamọ pẹlu afọwọkọ yii, ΔFosB overexpression in ni D1-Iru MSNs ni anfani lati ṣe induction CaMKIIα ni ipilẹ NAc ni isansa kokenko (Ọpọtọ 3F), ni iyanju pe awọn iyipada nṣiṣe lọwọ ti olugbeleke CaMKIIα ti o ṣe idiwọ ifilọlẹ yii lakoko ifihan kookia onibaje. Ilana ti ilẹ ala-ilẹ chromatin ni olugbeleke CaMKII le tun ṣalaye idi ti CaMKII ṣe nfa nipasẹ iwọn ipenija ti kokenini ni NAc ikasi ti eku onibaje-yiyọkuro eku (Fig 1Eṣugbọn kii ṣe ti awọn ẹranko-naïve1D X). Eyi le ṣe aṣoju ẹya epigenetic “gene priming” ti ΔFosB (Robison ati Nestler, 2011), ati nitorinaa le jẹ ẹrọ iṣuu mọnamọna kan ti ọranyan ti ifẹkufẹ cocaine (Awọn pickens et al., 2011). Bibẹẹkọ, fun iyipada chromatin yii lati jẹ alayọkan ni asopọmọ si irukoko ti ifẹkufẹ, yoo ni lati pọ si ni akoko pupọ. Yoo jẹ ohun ti o nifẹ lati pinnu boya eyi ni ọran naa, ati lati ṣe iwadi boya awọn Jiini miiran fihan ΔFosB-ti o gbẹkẹle, ilana-abẹ pato kan nipasẹ koken. O tun ṣe pataki lati ṣe akiyesi pe ifunni kikọ siwaju-siwaju ti a ṣe apejuwe ko ja si ikojọpọ ailopin ti CaMKII tabi ΔFosB (Fig 1E); ṣiṣi silẹ “Bike” molikula ti o jẹ iduro fun eyi jẹ ipinnu pataki ti awọn ijinlẹ iwaju.

Awọn iṣẹ ti a mọ ti ΔFosB ati CaMKII ni ọpọlọpọ awọn ọna ṣiṣe idanwo ati awọn ẹkun ọpọlọ ṣe apejọ ni ọpọlọpọ awọn ipele (Ọpọtọ 6F). Awọn iṣọn mejeeji ni asopọ ni pẹkipẹki si dendritic spine idagbasoke: CaMKII ṣe ajọṣepọ pẹlu cytoskeleton actin (Okamoto et al., 2009), ṣe ilana iwọn ori ọpa ẹhin (Matsuzaki et al., 2004), ati pe o jẹ pataki ati pe o to fun awọn alekun ti ifilọlẹ ti ṣiṣu ṣe pọsi ni nọmba filopodia ati nọmba synapse ni awọn aṣa bibẹ awọn apopọ hippocampalJourdain et al., 2003), whileFosB jẹ pataki ati pe o to fun dida apọju dendritic ọpa-ẹhin eegun dendritic ọpa ẹhin ni NAc MSNs (Maze et al., 2010). Ni afikun, awọn ohun alumọni mejeeji ti ni nkan ṣe pẹlu ilana ti awọn olugba glutamate AMPA. CaMKII ko ṣe ilana awọn ipele lapapọ ti awọn ipinfunni olugba gbigba AMPA, ṣugbọn ṣe iwakọ ifisi ti awọn olugba AMPA sinu awọn iyọkuro ati mu alekun ikanni AMPA ṣiṣẹ nipasẹ irawọ irawọ GluA1 ni Ser831 ni hippocampal pyramidal neurons ni aṣa ati ni vivo (atunwo ni (Malinow ati Malenka, 2002; Colbran ati Brown, 2004)). Iru gbigbe kakiri ti GluA1 si synapse ti ni ipa ninu iṣẹ kokeni onibaje (daradara)Boudreau ati Wolf, 2005). Pẹlupẹlu, awọn idahun ihuwasi si iṣẹ-ṣiṣe olugba olugba AMPA ni NAc ni ilọsiwaju nipasẹ CaMKIIα overexpression ni ọna igbẹkẹle-igbẹkẹle dopamine D1 dopamine (Olorin et al., 2010). D1-akoko ifaagun pato ti ΔFosB ni a ti han lati mu ifilọlẹ GluA2 silẹ ni NAc (Kelz et al., 1999), eyiti o dẹkun awọn idahun AMPA ti n ṣalaye nipasẹ GluA1, lakoko ti a fihan nibi pe kukuru-ΔFosB overexpression – ati ifihan ifihan kuru kukuru-ko ni ipa lori apamọwọ yii (Fig 1). Biotilẹjẹpe, a ti rii laipẹ pe kukuru-kukuru oveFosB overexpression ti sibẹsibẹ dinku awọn idahun AMPA ni D1-Iru MSNs ni NAc (Grueter et al., 2013). Awọn data wọnyi daba awọn ọna ṣiṣe iyasọtọ ti igba ara ẹni ti o le jẹ lẹsẹsẹ-igbẹkẹle lẹsẹsẹ ti neuroadaptations si kokenine ti o tẹ awọn oriṣiriṣi awọn ipa lilọsiwaju afẹsodi ti a ko loye daradara. Ni ipele ihuwasi, CaMKII ati ΔFosB mejeeji ni a nilo fun ifamọ ipora si kokeni (wo loke), ati pe awọn mejeeji ni a nilo lati ṣakoso iṣakoso afaralera ti kokeni ni awọn ifi (Colby et al., 2003; Wang et al., 2010), ni iyanju pe awọn ọlọjẹ mejeeji ṣe pataki fun mejeeji awọn adaṣe ihuwasi kukuru-ati igba pipẹ si ifihan iṣoogun, botilẹjẹpe nipasẹ awọn ọna ti a ṣe iyatọ ni isalẹ apakan. Aigbekele, ΔFosB ati CaMKII ṣe ilana iru awọn atunṣe ihuwasi iruju nipasẹ awọn ayipada ni iṣẹ synaptik NAc, botilẹjẹpe iṣẹ pupọ ni a nilo lati taara sopọ awọn iyasọtọ synaptiki si iyipada ihuwasi.

CaMKII holoenzyme ni nigbakannaa ajọṣepọ pẹlu ọpọlọpọ awọn ọlọjẹ ti o ni ibatan synapse (Robison et al., 2005) eyiti a ro lati ṣatunṣe ifọkansi rẹ si iwuwo postsynapti (iwuwo PSD), lasan kan daba lati jẹ pataki fun ṣiṣu synaptik. Ni pataki, ibaraenisepo ti CaMKII pẹlu ipin-ilẹ GluN2B ti olugba-glutamate Iru NMDA ni a fihan laipe lati ṣe ilana mejeeji ṣiṣu synaptic ati ẹkọ (Halt et al., 2012). Lakoko ti ACPNUMXI peptide ṣe mimic aaye agbegbe autoinhibitory ti CaMKII, ati nitorinaa ṣe idiwọ iṣẹ ṣiṣe enzymu catalytic, o tun ṣe idiwọ awọn ibaraenisọrọ ọpọlọpọ-amuaradagba (Strack et al., 2000; Robison et al., 2005). Nitorinaa, awọn ihuwasi ati awọn ipa ipa ara ti HSV-GFP-AC3I royin nibi le waye nipasẹ idinku irawọ owurọ ti awọn ọlọjẹ afojusun CaMKII, awọn ayipada ni ibi-afẹde CaMKII, tabi ayipada kan ti igbekale ipa igbekale CaMKII ni awọn ibi-afẹde (Lisman et al., 2002).

Ihamọ ti dabaa ΔFosB-CaMKII loop si ikarahun NAc jẹ ti akọsilẹ pataki, bi iṣẹ aipẹ ti ṣafihan ọpọlọpọ awọn iyatọ ti ẹkọ-ara laarin ikarahun NAc ati mojuto ni idahun si iṣakoso koken, imọran ti a jẹrisi nipasẹ iTRAQ alailowaya wa (Tabili S1) . Awọn MSN ni ikarahun NAc ṣafihan ibanujẹ ni agbara ibọn lẹhin kokeni onibaje ti o ni itọju fun awọn ọsẹ, lakoko ti awọn MSN pataki lati inu awọn ẹranko kanna ṣafihan itusilẹ kan (ọjọ 1 – 3) ni agbara ibọn ti o pada si awọn ipele basal laarin awọn ọsẹ 2 (Kourrich ati Thomas, 2009). Ni afikun, awọn ọlọjẹ synaptik lọpọlọpọ ni a ṣe ilana lọtọ ni ikasi NAc vs. mojuto ti awọn ẹranko ti a fi han si kokeni onibaje, pẹlu GluA2 (Knackstedt et al., 2010). Bi onibaje amphetamine ṣe fa CaMKIIα pataki ni ikarahun NAc (Loweth et al., 2010), kii ṣe iyalẹnu pe a wa iru ipa kan pẹlu kokeni. Bibẹẹkọ, bi ΔFosB ṣe fa ni ikarahun NAC ati ojulowo nipasẹ kokeni onibaje (Perrotti et al., 2008), ati pe nigba ti a fihan pe fifa irọbi CaMKIIα ninu ikarahun jẹ ΔFosB-ti o gbẹkẹle, awọn awari wa n pese ẹri tuntun fun awọn ọna gbigbe iyatọ ti o yatọ ni olupolowo CaMKIIreg laarin awọn ipin meji wọnyi, eyiti o jẹ iṣeduro fun yiyan yiyan ti CaMKIIα ni ikarahun.

Iṣowo nla ti iṣẹ aipẹ ti ni idojukọ lori awọn iyatọ iyatọ laarin D1- ati D2-Iru NAc MSNs. Botilẹjẹpe awọn olugba D1 ati D2 awọn olukopa mejeeji kopa ninu awọn ipa ti o ni ere ti kokeni (Ara, 2010), Iṣẹ aipẹ fihan pe iṣiṣẹ optogenetic ti D1-Iru MSNs mu awọn idahun ihuwasi si kokeni, lakoko ti D2-Iru MSN mu ṣiṣẹ ni idakeji ipa (Lobo et al., 2010). Ni ila pẹlu awọn awari wọnyi, eku D1-receptor knockice eku wa ni aipe ni gbigba ti iṣakoso iṣakoso ti kokeni (Caine et al., 2007), lakoko ti awọn knockouts D2 kii ṣe (Caine et al., 2002). Isakoso agonist D1 taara sinu NAc nfa ihuwasi kaliini-koni ni iṣipopada awọn iṣipopada igbapada (Ara, 2010). O yanilenu, ipa yii nilo D1-olugba-igbẹkẹle olugba-igbẹkẹle ninu iṣẹ CaMKII ninu ikarahun NAc, ṣugbọn kii ṣe ipilẹ (Anderson et al., 2008), abajade kan ti awọn dovetails dara julọ pẹlu D1- ati ikarahun-pato specificFosB-CaMKII ti a dabaa nibi.

A ti royin tẹlẹ pe Ser27 ni ΔFosB le ṣee di nipasẹ amọdaju nipasẹ casein kinase-2 (Ulery et al., 2006), sibẹsibẹ, a fi idi mulẹ nibi ti CaMKII fosifeti ΔFosB ni eyi ati awọn aaye miiran pẹlu kinetikisi nla ati stoichiometry ati pe o le ṣe iṣedede irisi giga ti o ga M_r akiyesi fun ΔFosB (5A X) pẹlu ifihan kikan ni vivo (Nestler, 2008). A ti mọ tẹlẹ pe idaṣẹ phosphorylation Ser27 mu iduroṣinṣin ΔFosB ati iṣẹ ṣiṣe transcriptional (Ulery et al., 2006; Ulery ati Nestler, 2007; Ulery-Reynolds et al., 2009). Iṣẹ ọjọ iwaju yoo ni idojukọ bayi ni idanimọ ati awọn abajade iṣe ti awọn aaye aramada ti phoFosB irawọ owurọ ti o fihan nipasẹ iwadi lọwọlọwọ.

Koko-siwaju ifunni ti a ṣalaye nibi n pese sisọpo ẹrọ tuntun ti o ṣeeṣe nipasẹ eyiti iṣakoso leralera ti kokeni mu awọn abuku ni ilọsiwaju ni NAc. Bii eyi, ipa ọna biokemika le pese ipinnu pataki fun ifunni itọju ọjọ iwaju ni awọn ibajẹ afẹsodi. Nitori CaMKII jẹ aaye ati nilo fun ọpọlọpọ awọn neuronal basal ati awọn iṣẹ ihuwasi, a ti yago fun lilo taara awọn alamọ CaMKII gẹgẹbi itọju afẹsodi. Wa data daba pe diẹ arekereke ifokansi ti siseto ti CaMKII fifa irọbi, eyiti o jẹ kan pato si iru sẹẹli kọọkan ati ipinya ti oju-iwe ẹsan ọpọlọ, le pese afẹsodi itọju ti yoo yago fun awọn ilolu ti idiwọ CaMKII eto.

Lọ si:

Awọn idunnu

Iṣẹ yii ni atilẹyin nipasẹ awọn ifunni lati Ile-iṣẹ Orile-ede lori ilokulo Oògùn (EJN), NIDA-Yale Proteomics Centre DA018343 (AJR ati EJN), ati Foundation Hartwell (AJR). Awọn onkọwe yoo fẹ lati dupẹ lọwọ Gabby Rundenko fun ẹbun oninurere ti mimọ ΔFosB ati Roger Colbran fun ẹbun oninurere ti CaMKIIα mimọ.

Lọ si:

jo

1. Ahmed SH, Koob GF. Iyipo lati iwọntunwọnsi si gbigbemi oogun pupọ: iyipada ni aaye ipo hedonic. Imọ. 1998; 282: 298 – 300. [PubMed]
2. Anderson SM, Olokiki KR, Sadri-Vakili G, Kumaresan V, Schmidt HD, Bass CE, Terwilliger EF, Cha JH, Pierce RC. CaMKII: Afara biokemika ti o so pọmọ awọn eepo dopamine ati awọn eto gilutẹẹti wa ni kikan. Nat Neurosci. 2008; 11: 344 – 353. [PubMed]
3. Boudreau AC, Wolf ME. Ihuwasi ihuwasi si kokeni ni nkan ṣe pẹlu pọsi iṣalaye olugba gbigbara AMPA ninu awọn akopọ eegun aaye. J Neurosci. 2005; 25: 9144 – 9151. [PubMed]
4. Brickey DA, Colbran RJ, Fong YL, Soderling TR. Iṣalaye ati iwa ti ipilẹ-ọrọ ti Ca2 + / nutsodulin-protein protein kinase II lilo eto ikosile baculovirus. Biochem Biophys Res Commun. 1990; 173: 578 – 584. [PubMed]
5. Caine SB, Negus SS, Mello NK, Patel S, Bristow L, Kulagowski J, Vallone D, Saiardi A, Borrelli E. ipa ti dopamine D2-like awọn olugba ni iṣakoso iṣakoso kookan ni iṣakoso: awọn ijinlẹ pẹlu DiceNUMX olugba olugba ati eku aramada D2 olugba atako. J Neurosci. 2; 2002: 22 – 2977. [PubMed]
6. Caine SB, Thomsen M, Gabriel KI, Berkowitz JS, Gold LH, Koob GF, Tonegawa S, Zhang J, Xu M. Aini iṣakoso ara ẹni ti kokenin ni dopamine D1 receptor knock-out eku. J Neurosci. 2007; 27: 13140 – 13150. [PMC free article] [PubMed]
7. Carle TL, Ohnishi YN, Ohnishi YH, Alibhai IN, Wilkinson MB, Kumar A, Nestler EJ. Awọn ilana iṣeduro ati igbẹkẹle ti idaabobo fun Idagbasoke FosB: idanimọ ti awọn ibugbe FosB degron ati awọn ilọsiwaju fun iduroṣinṣin ti DeltaFosB. Eur J Neurosci. 2007; 25: 3009-3019. [PubMed]
8. Chen J, Kelz MB, Zeng G, Sakai N, Steffen C, Shockett PE, Picciotto MR, Duman RS, Nestler EJ. Awọn eranko ti o wa ni igbesi aye ti ko ni idiwọ, iṣeduro iṣeduro ti o ni imọran ni ọpọlọ. Mol Pharmacol. 1998; 54: 495-503. [PubMed]
9. Christoffel DJ, Golden SA, Dumitriu D, Robison AJ, Janssen WG, Ahn HF, Krishnan V, Reyes CM, Han MH, Ables JL, Eisch AJ, Dietz DM, Ferguson D, Neve RL, Greengard P, Kim Y, Morrison JH , Russo SJ. IkappaB kinase ṣe ilana ijatil ipọnju wahala-indu ti awujọ ati ṣiṣu ihuwasi. J Neurosci. 2011; 31: 314 – 321. [PMC free article] [PubMed]
10. Colbran RJ. Inactivation ti Ca2 + / calmodulin-based protein kinase II nipasẹ ipilẹ basophosphorylation. J Biol Chem. 1993; 268: 7163 – 7170. [PubMed]
11. Colbran RJ. Awọn fosifeti amuaradagba ati kalisiomu / idapọ-igbẹkẹle amuaradagba kinase II ti o gbẹkẹle igbẹ-ara iṣan ọra. J Neurosci. 2004; 24: 8404 – 8409. [PubMed]
12. Colbran RJ, Brown AM. Kalsia-igbẹkẹle amuaradagba kinisi II ati idapọ onigun alailori. Neurobiol Curr Opin. 2004; 14: 318 – 327. [PubMed]
13. Colby CR, Whisler K, Steffen C, Nestler EJ, Ara DW. Ti ikede aifọwọyi pato ti ara ẹni ti DeltaFosB nmu igbaradi fun kokeni. J Neurosci. 2003; 23: 2488-2493. [PubMed]
14. Covington HE, 3rd, Maze I, LaPlant QC, Vialou VF, Ohnishi YN, Berton O, Fass DM, Renthal W, Rush AJ, 3rd, Wu EY, Ghose S, Krishnan V, Russo SJ, Tamminga C, Haggarty SJ, Nestler EJ. Awọn iṣẹ antidepressant ti awọn idiwọ histone deacetylase. J Neurosci. 2009; 29: 11451 – 11460. [PMC free article] [PubMed]
15. Davalos A, Fernandez-Hernando C, Sowa G, Derakhshan B, Lin MI, Lee JY, Zhao H, Luo R, Colangelo C, Sessa WC. Awọn ọlọjẹ ti pipọ ti awọn ọlọjẹ-oniṣakoso caveolin-1: abuda ti polymerase i ati ifosiwewe idasilẹ transcript / CAVIN-1 IN awọn sẹẹli endothelial. Awọn ọlọjẹ Ẹjẹ Mol. 2010; 9: 2109 – 2124. [PMC free article] [PubMed]
16. Dumais A, Lesage AD, Alda M, Rouleau G, Dumont M, Chawky N, Roy M, Mann JJ, Benkelfat C, Turecki G. Awọn okunfa ewu fun igbẹmi igbẹmi ara ẹni ninu ibanujẹ nla: iwadii iṣakoso iṣakoso ti iwuri ati awọn ihuwasi ibinu ni okunrin. Am J Awoasinwin. 2005; 162: 2116 – 2124. [PubMed]
17. Grueter BA, Robison AJ, Neve RL, Nestler EJ, Malenka RC. ΔFosB ṣe iyatọ modulates iṣan awọn ọpọlọ ngba taara ati iṣẹ ọna ipa ọna taara. Proc Natl Acad Sci USA. 2013 ninu atẹjade. [PMC free article] [PubMed]
18. Idapọ AR, Dallapiazza RF, Zhou Y, Stein WA, Qian H, Juntti S, Wojcik S, Brose N, Silva AJ, apaadi JW. Aṣa CaMKII si GluN2B jẹ pataki lakoko isọdọkan iranti. EMBO J. 2012; 31: 1203 – 1216. [PMC free article] [PubMed]
19. Hiroi N, Brown JR, Haile CN, Ẹnyin H, Greenberg ME, Nestler EJ. Awọn eku eniyan FosB: isonu ti ifasita kokeni onibaje ti awọn ọlọjẹ ti o ni ibatan Fos ati ifamọ giga si kokeni ti psychomotor ati awọn ipa ẹsan. Proc Natl Acad Sci US A. 1997; 94: 10397-10402. [PMC free article] [PubMed]
20. Ito R, Robbins TW, Everitt BJ. Iṣakoso iyatọ lori ihuwasi koko-koni nipa ibi-iṣan akotan ọta ati ikarahun. Nat Neurosci. 2004; 7: 389 – 397. [PubMed]
21. Jorissen HJ, Ulery PG, Henry L, Gourneni S, Nestler EJ, Rudenko G. Dimerization ati awọn ohun-ini abuda ti DNA ti Delta transos ifosiwewe. Itanna-aye. 2007; 46: 8360 – 8372. [PubMed]
22. Jourdain P, Fukunaga K, Muller D. Kalisiomu / amuaradagba igbẹkẹle amuaradagba kinisi II ṣe alabapin si idagbasoke filopodia ti o gbẹkẹle iṣẹ-ṣiṣe ati dida ọpa ẹhin. J Neurosci. 2003; 23: 10645 – 10649. [PubMed]
23. Kelz MB, Chen J, Carlezon WA, Jr, Whisler K, Gilden L, Beckmann AM, Steffen C, Zhang YJ, Marotti L, Ara DW, Tkatch T, Baranauskas G, Surmeier DJ, Neve RL, Duman RS, Picciotto MR, Nestler EJ. Ifọrọwọrọ ti itumo transtaFosB factor transcription ninu ọpọlọ iṣakoso ifamọ si kokeni. Iseda. 1999; 401: 272-276. [PubMed]
24. Klug JR, Mathur BN, Kash TL, Wang HD, Matthews RT, Robison AJ, Anderson ME, Deutch AY, Ololufe DM, Colbran RJ, Winder DG. Idilọwọ Jiini ti CaMKII ni Awọn aami aiṣedeede alabọde Dorsal Stuatal Awọn iṣan Neurons dinku Awọn ilana Excitatory Awọn imupọ ati Imudarasi Iyatọ iṣan-inu. PLoS Ọkan. 2012; 7: e45323. [PMC free article] [PubMed]
25. Knackstedt LA, Moussawi K, Lalumiere R, Schwendt M, Klugmann M, Kalivas PW. Ikẹkọ ti o lọ kuro lẹhin iṣakoso iṣakoso idaabobo awọ ara jẹ mu ṣiṣu glutamatergic ṣiṣẹ lati dojuti wiwa klasini. J Neurosci. 2010; 30: 7984 – 7992. [PMC free article] [PubMed]
26. Kourrich S, Thomas MJ. Awọn neurons ti o jọra, awọn aṣeyọri idakeji: iriri psychostimulant ṣe iyatọ awọn ohun elo ibọn ni ohun-ini accumbens dipo ikarahun. J Neurosci. 2009; 29: 12275 – 12283. [PMC free article] [PubMed]
27. Kourrich S, Klug JR, Mayford M, Thomas MJ. AMPAR-Ipa Ipa ti Striatal alphaCaMKII ṣe igbelaruge Ifamọra ti Ẹsan Cocaine. J Neurosci. 2012; 32: 6578 – 6586. [PMC free article] [PubMed]
28. LaPlant Q, Chakravarty S, Vialou V, Mukherjee S, Koo JW, Kalahasti G, Bradbury KR, Taylor SV, Maze I, Kumar A, Graham A, Birnbaum SG, Krishnan V, Truong HT, Neve RL, Nestler EJ, Russo SJ . Ipa ti kappaB ifosiwewe iparun ni homonu homonu-ti o jẹ ilaja aifọkanbalẹ ninu awọn eku obinrin. Biol Awoasinwin. 2009; 65: 874 – 880. [PMC free article] [PubMed]
29. Lee KW, Kim Y, Kim AM, Helmin K, Nairn AC, Greengard P. Ṣiṣẹda dendritic ọpa ẹhin dendritic ni D1 ati D2 dopamine receptor-ti o ni awọn alabọde spiny neurons ninu awọn ikojọpọ nukusia. Proc Natl Acad Sci US A. 2006; 103: 3399-3404. [PMC free article] [PubMed]
30. Lisman J, Schulman H, Cline H. Ipilẹ molikula ti iṣẹ CaMKII ni synaptiki ati iranti ihuwasi. Nat Rev Neurosci. 2002; 3: 175 – 190. [PubMed]
31. Lobo MK, Covington HE, 3rd, Chaudhury D, Friedman AK, Sun H, Damez-Werno D, Dietz DM, Zaman S, Koo JW, Kennedy PJ, Mouzon E, Mogri M, Neve RL, Deisseroth K, Han MH, Nestler EJ. Iru ipadanu pato-sẹẹli ti BDNF ṣe afihan mimics optogenetic iṣakoso ẹsan awọ. Imọ. 2010; 330: 385 – 390. [PMC free article] [PubMed]
32. Loweth JA, Baker LK, Guptaa T, Guillory AM, Vezina P. Idena ti CaMKII ninu ikarahun eegun ngba sẹsẹ dinku idinku gbigbemi amphetamine ni awọn eku ti o ni oye. Leti Neurosci. 2008; 444: 157 – 160. [PMC free article] [PubMed]
33. Loweth JA, Singer BF, Baker LK, Wilke G, Inamine H, Bubula N, Alexander JK, Carlezon WA, Jr, Neve RL, Vezina P. Atẹjade t’olofin ti alpha-Ca2 + / protein kinsi amuaradagba kinisi II ninu ikasi ikasi nukulu mu imudara ihuwasi ihuwasi si amphetamine. J Neurosci. 2010; 30: 939 – 949. [PMC free article] [PubMed]
34. Malinow R, Malenka RC. AMẸRIKA olugba gbigba ọja ati ṣiṣu synaptiki. Annu Rev Neurosci. 2002; 25: 103 – 126. [PubMed]
35. Matsuzaki M, Honkura N, Ellis-Davies GC, Kasai H. Ipilẹ ilana ti agbara igba pipẹ ni awọn eegun dendritic nikan. Iseda. 2004; 429: 761 – 766. [PubMed]
36. Mayford M, Bach ME, Huang YY, Wang L, Hawkins RD, Kandel ER. Iṣakoso ti iṣeto iranti nipasẹ ikosile ilana ti transgene CaMKII kan. Imọ. 1996; 274: 1678 – 1683. [PubMed]
37. Maze I, Covington HE, Xalima, Russo SJ, Mikiiki M, Mouzon E, Neve RL, Haggarty SJ, Ren Y, Sampath SC, Hurd YL, Greengard P, Tarakhovsky A, Schaefer A, Nestler EJ. Iṣẹ pataki ti histone methyltransferase G3a ni ṣiṣu ti iṣelọpọ kokeni. Imọ. 9; 2010: 327-213. [PMC free article] [PubMed]
38. McClung CA, Nestler EJ. Ilana ti fifun pupọ ati ikuna cocaine nipasẹ CREB ati DeltaFosB. Nat Neurosci. 2003; 6: 1208-1215. [PubMed]
39. Nestler EJ. Atunwo. Awọn ọna iṣan-igbasilẹ ti afẹsodi: ipa ti DeltaFosB. Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci. 2008; 363: 3245-3255. [PMC free article] [PubMed]
40. Fun HE, ireti BT, Kelz MB, Iadarola M, Nestler EJ. Awọn ẹkọ nipa imọ-ẹjẹ ti ilana ti awọn onibajẹ FOS ti o niiṣe pẹlu ifunini ti antigeni nipasẹ kokeni ni igun-ara ati idaamu. J Pharmacol Exp Ther. 1995; 275: 1671-1680. [PubMed]
41. Okamoto K, Bosch M, Hayashi Y. Awọn ipa ti CaMKII ati F-actin ninu ṣiṣu igbekale ti awọn itọsi dendritic: idanimọ eegun ola ti idanimọ aami? Fisioloji (Bethesda) 2009; 24: 357 – 366. [PubMed]
42. Olausson P, Jentsch JD, Tronson N, Neve RL, Nestler EJ, Taylor JR. DeltaFosB ninu ile-iṣẹ accumbens ṣe atunṣe iwa ihuwasi ati imudarasi ti o ni atilẹyin. J Neurosci. 2006; 26: 9196-9204. [PubMed]
43. Paxinos G, Watson C. Ọpọlọ eku ni awọn ipoidojuu stereotaxic. Ẹda 6th. Amsterdam; Boston: Ijinlẹ Akẹkọọ / Elsevier; 2007.
44. Peakman MC, Colby C, Perrotti LI, Tekumalla P, Carle T, Ulery P, Chao J, Duman C, Steffen C, Monteggia L, Allen MR, Iṣura JL, RS Duman, McNeish JD, Barrot M, Ara DW, Nestler EJ , Schaeffer E. Ti o ni idiwọ, ọpọlọ aifọwọyi pato ti agbegbe ti o jẹ iyipada buburu ti C-Jun ni awọn ekun transgenic n dinku ifamọ si kokeni. Ipolowo ọlọ. 2003; 970: 73-86. [PubMed]
45. Penzes P, Cahill ME, Jones KA, Srivastava DP. Convergent CaMK ati awọn ifihan agbara RacGEF n ṣakoso dendritic be ati iṣẹ. Awọn iṣesi Ẹjẹ Biol. 2008; 18: 405 – 413. [PubMed]
46. Perrotti LI, Hadeishi Y, Ulery PG, Barrot M, Monteggia L, Duman RS, Nestler EJ. Atọka ti deltaFosB ninu awọn ẹya-ara iṣan ti o ni iṣan lẹhin iṣọnju iṣoro. J Neurosci. 2004; 24: 10594-10602. [PubMed]
47. Perrotti LI, Weaver RR, Robison B, Iyanni W, Maze I, Yazdani S, Elmore RG, Knapp DJ, Selley DE, Martin BR, Sim-Selley L, Bachtell RK, Ara DW, Nestler EJ. Awọn ilana ti o yatọ ti DeltaFosB ifunni ni ọpọlọ nipasẹ awọn oogun ti iwa-ipa. Synapse. 2008; 62: 358-369. [PMC free article] [PubMed]
48. Awọn elegbogi CL, Airavaara M, Theberge F, Fanous S, Ireti BT, Shaham Y. Neurobiology ti libisi ti ifẹkufẹ oogun. Awọn aṣa Neurosci. 2011; 34: 411 – 420. [PMC free article] [PubMed]
49. Pierce RC, EA Quick, Reeder DC, Morgan ZR, Kalivas PW. Kalisita-onisẹpo awọn ẹlẹẹkeji ṣe atunṣe ikosile ti ifamọ ihuwasi si kokeni. J Pharmacol Exp Ther. 1998; 286: 1171 – 1176. [PubMed]
50. Quirion R, Robitaille Y, Ti ologun J, Chabot JG, Lemoine P, Pilapil C, Dalpe M. ọpọlọ olugba gbigbọ ọpọlọ ori lilo awọn apakan apakan ni aaye gbogbo ọna: ọna gbogbogbo ti o din idinku awọn aleebu ara. Synapse. 1987; 1: 446 – 454. [PubMed]
51. Robinson TE, Kolb B. Ṣiṣu ṣiṣu ti o ni nkan ṣe pẹlu ifihan si awọn oogun ti ilokulo. Neuropharmacology. 2004; 47 (Ipese 1): 33 – 46. [PubMed]
52. Robison AJ, Nestler EJ. Ilana transcriptional ati epigenetic ti afẹsodi. Nat Rev Neurosci. 2011; 12: 623 – 637. [PMC free article] [PubMed]
53. Robison AJ, Bass MA, Jiao Y, MacMillan LB, Carmody LC, Bartlett RK, Colbran RJ. Awọn ibaraenisepo ọpọlọpọ ti kalisiomu / isodi-igbẹkẹle amuaradagba kinisi II pẹlu awọn ọlọjẹ iwuwo ti postsynapti density NR2B, densin-180, ati alpha-actinin-2. J Biol Chem. 2005; 280: 35329 – 35336. [PubMed]
54. Ross PL, Huang YN, Marchese JN, Williamson B, Parker K, Hatta S, Khainovski N, Pillai S, Dey S, Daniels S, Purkayastha S, Juhasz P, Martin S, Bartlet-Jones M, He F, Jacobson A, Pappin DJ. Iwọn opo-amuaradagba ti ọpọlọpọ ninu Saccharomyces cerevisiae lilo awọn aamiagbara isobaric tagging isobaric. Awọn ọlọjẹ Ẹjẹ Mol. 2004; 3: 1154 – 1169. [PubMed]
55. Russo SJ, Dietz DM, Dumitriu D, Morrison JH, Malenka RC, Nestler EJ. Synapse mowonlara: awọn ilana ti synaptiki ati ṣiṣu igbekale ni awọn eepo ipalọlọ. Awọn aṣa Neurosci. 2010; 33: 267 – 276. [PMC free article] [PubMed]
56. Ara DW. Ninu: Awọn olugba Dopamine. Neve KA, olootu. Niu Yoki: Humana Press; 2010. p. 479 – 524.
57. Akọrin BF, Loweth JA, Neve RL, Vezina P. Transient viral-mediated overexpression of alpha-kalisiki / nutsodulin-protein protein kinase II ninu eegun ikasi ikarahun nyorisi si igbesoke iṣẹ ṣiṣe pipẹ ti alpha-amino-3-hydroxyl-5 -methyl-4-isoxazole-propionate awọn olugba: dopamine Iru-olugba 1 ati kinsi amuaradagba A gbára. Eur J Neurosci. 2010; 31: 1243 – 1251. [PMC free article] [PubMed]
58. Strack S, McNeill RB, Colbran RJ. Ilana ati ilana ti kalisiomu / olutọju igbẹkẹle amuaradagba kinase II ti o fojusi si ipin-iṣẹ NR2B ti olugba-Neth-Methyl-D-aspartate. J Biol Chem. 2000; 275: 23798 – 23806. [PubMed]
59. Ulery-Reynolds PG, Castillo MA, Vialou V, Russo SJ, Nestler EJ. Phosphorylation ti DeltaFosB mediates iduroṣinṣin rẹ ni vivo. Neuroscience. 2009; 158: 369 – 372. [PMC free article] [PubMed]
60. Ulery PG, Nestler EJ. Ilana ti iṣẹ-ṣiṣe transcriptional DeltaFosB nipasẹ Ser27 phosphorylation. Eur J Neurosci. 2007; 25: 224-230. [PubMed]
61. Ulery PG, Rudenko G, Nestler EJ. Ilana ti itọju DeltaFosB nipasẹ phosphorylation. J Neurosci. 2006; 26: 5131-5142. [PubMed]
62. Vialou V, et al. DeltaFosB ninu awọn iyika ẹbun ọpọlọ n ṣalaye iyọrisi aifọkanbalẹ ati awọn idahun antidepressant. Nat Neurosci. 2010; 13: 745 – 752. [PMC free article] [PubMed]
63. Wang L, Lv Z, Hu Z, Sheng J, Hui B, Sun J, Ma L. Chronic cocaine-induced H3 acetylation ati imuṣiṣẹ transcriptional ti CaMKIIalpha ninu awọn ikojọpọ nukus ṣe pataki fun iwuri fun imudara oogun. Neuropsychopharmacology. 2010; 35: 913 – 928. [PMC free article] [PubMed]
64. Werme M, Messer C, Olson L, Gilden L, Thoren P, Nestler EJ, Brene S. Delta FosB n ṣe atunṣe kẹkẹ ti nṣiṣẹ. J Neurosci. 2002; 22: 8133-8138. [PubMed]
65. Winstanley CA, LaPlant Q, Theobald DE, Green TA, Bachtell RK, Perrotti LI, DiLeone RJ, Russo SJ, Garth WJ, Ara DW, Nestler EJ. Ifunni DeltaFosB ninu idaabobo-ara-ara-ara-ara-ara jẹ ifarada si ibajẹ aifọwọdọwọ inu iṣọn. J Neurosci. 2007; 27: 10497-10507. [PubMed]
66. Zachariou V, Bolanos CA, Selley DE, Theobald D, MP Cassidy, Kelz MB, Shaw-Lutchman T, Berton O, Sim-Selley LJ, Dileone RJ, Kumar A, Nestler EJ. Aaye pataki fun DeltaFosB ni ile-iṣẹ naa ti n tẹ ni iṣẹ morphine. Nat Neurosci. 2006; 9: 205-211. [PubMed]
67. Zhang R, Khoo MS, Wu Y, Yang Y, Grueter CE, Ni G, Iye EE, Jr, Thiel W, Guatimosim S, Song LS, Madu EC, Shah AN, Vishnivetskaya TA, Atkinson JB, Gurevich VV, Salama G, Lederer WJ, Colbran RJ, Anderson ME. Idiwọ Calmodulin kinase II ndaabobo lodi si arun okan ti igbero. Nat Med. 2005; 11: 409 – 417. [PubMed]