Hipokretien (orexin) vergemaklik beloning deur die antirewende effekte van sy cotransmitter dynorphin in ventrale tegmentale area (2014)

Proc Natl Acad Sci VSA A. 2014 Apr 22; 111 (16): E1648-E1655.

Gepubliseer aanlyn 2014 Mar 24. doi:  10.1073 / pnas.1315542111

PMCID: PMC4000785

Neurowetenskap

Kyk “Teenstrydige rolle van cotransmission van dynorfine en hipokretien op beloning en motivering”In volume 111 op bladsy 5765.

Kyk “PNAS Plus Beduidingsverklarings”In volume 111 op bladsy 5771.

Hierdie artikel is aangehaal deur ander artikels in PMC.

Spring na:

Betekenis

Hipokretien (orexien) en dynorphine is neuromodulators wat 'n belangrike rol speel in die regulering van invloed en motivering. Orexin is krities vir beloning en is betrokke by dwelmsoektogte, terwyl dynorfine negatiewe bui bemiddel en betrokke is by depressiewe-like state. Oorweging van hierdie teenstrydige effekte, berig dat beide peptiede in dieselfde neurone uitgedruk word en koreleer word, is teenintuïtief. Hier demonstreer ons dat orexien en dynorfien binne dieselfde sinaptiese vesikels saamgepers word en dat hierdie kolokalisering 'n groot invloed op beloning, dwelmopname en impulsiewe gedrag het. Die feit dat orexine die depressiewe agtige effekte van dynorfien insluit, verander aansienlik hoe ons die funksionele rol van orexien in die brein beskou.

sleutelwoorde: verslawing, kappa-opioïede reseptor, bui, neurotransmissie, stres

Abstract

Hipokretien (orexien) en dynorfien is neuropeptiede met opponerende aksies op gemotiveerde gedrag. Orexin is betrokke by arousale en beloningstoestande, terwyl die dinorfin betrokke is in depressiewe lande. Ons wys dat hierdie peptiede, ondanks hul teenstrydige aksies, in dieselfde sinaptiese vesikels binne die hipotalamus verpak word. Ontwrigting van die orexienfunksie blunts die lonende effekte van laterale hipotalamiese (LH) stimulasie, elimineer kokaïen-geïnduseerde impulsiwiteit, en verminder kokaïen selfadministrasie. Gelyktydige ontwrigting van die dinorforffunksie omkeer hierdie gedragsveranderings. Ons wys ook dat orexien en dynorfien teenstrydige aksies het oor die opwinding van ventrale tegmentale area (VTA) dopamienneurone, 'n prominente teiken van oreksienbevattende neurone, en dat intra-VTA-oreksienantagonisme afname in kokaïen-selfadministrasie en LH selfstimulasie veroorsaak. wat omgeskakel word deur dynorphien antagonisme. Ons bevindings identifiseer 'n unieke sellulêre proses waardeur orexien die beloning drempel-verheffende effekte van coreleased dynorphin kan okkupeer en sodoende op 'n permissiewe manier optree om beloning te vergemaklik.

Orexin bevorder arousal (1) en is betrokke by die belonende effekte van voedsel (2, 3), seksuele gedrag (4), en dwelms van misbruik (5, 6). Dit word hoofsaaklik binne die hipotalamus geproduseer (7), en optree by orexien 1 reseptor (OX1R) en OX2R (ook bekend as Hcrt-R1 en Hcrt-R2), wat uitgedruk word in baie breinareas, insluitende die ventrale tegmentale area (VTA) van die middelbrein (8). Dynorphin, in teenstelling, word wyd uitgespreek, bevorder depressiewe-agtige gedrag, en speel 'n sleutelrol in die bemiddeling van die aversive effekte van stres (9, 10). Aktivering van kappa-opioïede reseptor (KORs), die reseptore waarteen dynorfine optree (11), kan die belonende effekte van dwelms van mishandeling verminder (12, 13) via aksies wat, ten minste gedeeltelik, bemiddel word binne die middelste dopamien-stelsel (DA) (14, 15). Ten spyte van hul oënskynlik teenstrydige effekte op motivering, is daar bewyse dat hierdie peptiede in tandem kan optree; Byvoorbeeld, beide orexien en dynorfien word vrygestel tydens elektriese stimulasie van die hipotalamus (16). Soos DA neurone, verhoog orexien- en dynorfienneurone hul aktiwiteit in reaksie op stimulering soos belonings en stressors (17). Die funksionele effekte van hierdie patroon van neuropeptide-ekspressie op breinbeloningsisteme, en weer op gemotiveerde gedrag, word swak verstaan ​​omdat orexien en dynorfien nie tradisioneel saam bestudeer word nie. Gegewe hul teenstrydige effekte op gedrag en neuronale fisiologie wanneer hulle alleen bestudeer word, kan dit veronderstel word dat oorheersing in die effek van een peptied oor die ander wyd uiteenlopende gedragsfenotipes in beloningsensitiwiteit kan veroorsaak. Byvoorbeeld, dominante orexine seinverandering kan verhoog sensitiwiteit en beloning soek, terwyl dominante dynorfine seinering kan lei tot verminderde beloning sensitiwiteit en anergie. Aangesien hierdie state van groot belang is vir psigiatriese siektes soos verslawing en depressie, waar beloningsverwerking versteur word, het ons probeer ondersoek hoe hierdie peptiede, alleen en in kombinasie, gemotiveerde gedrag en die VTA DA-kring beïnvloed wat hulle reguleer. Om dit te doen gebruik ons ​​EM om peptiedkolokalisering op 'n mikrostruktuurvlak te karakteriseer, sowel as gedragstegnieke wat die sensitiwiteit van breinbeloningskringe, impulsbeheer en dwelmopname, na farmakologiese of genetiese manipulasie van die orexien-dynorfienstelsel beoordeel. Daarbenewens het ons elektrofisiologie gebruik om te bepaal hoe die gepaardgaande teenwoordigheid van orexien en dynorfien, alleen of in kombinasie met antagoniste by hul reseptore, die opwinding van VTA DA neurone beïnvloed.

Results

Orexin en Dynorphin Is Cotransmitters.

Ons het die ekspressie van orexien en dynorfine bevestig binne dieselfde neurone van die muis laterale, periforniese en dorsomediale hipotalamus met behulp van fluorescensmikroskopie (18) (Fig 1A). Die bestaan ​​van neurone wat meervoudige senders uitdruk, is in ander breinbane beskryf en kan die neurale basis vir filtermeganismes voorstel deurdat vrystelling van gesamentlike neurotransmitters by differensiële vuurspoed voorkom (19). Met behulp van EM, het ons gevind dat orexien en dynorfien binne dieselfde sinaptiese vesikels gekolokaliseer word. Die meeste gevalle van koakverpakking is waargeneem in ongemeierde, erikose aksonale prosesse, waar immunolabeling gevind is in of naby vesikels. Binne neuronale selliggame was betekenisvolle etikettering geassosieer met die Golgi-kompleks, terwyl niemand in aangrensende kerne gevind is nie (Fig 1 B en C). Dendriete bevat ook vesikel-geassosieerde etikettering vir beide peptiede, wat potensiële dendritiese vrystelling van hierdie transmitters voorstel. 'N klein aantal mikrostruktuur profiele gevang axon terminals met etikettering vir beide peptiede geleë in groot (~ 100 nm) vesicles geleë buite die vrylating sone van asimmetriese sinapse (Fig 1 B en C), ter ondersteuning van die gevolgtrekking dat orexien en dynorfine as cotransmitters funksioneer en dat hulle onder normale toestande saam eerder as differensiaal vrygestel word as 'n funksie van selfrekwensie.

Fig. 1. 

Orexien en dynorfine is kotransmitters in neurone van die hipotalamus. (A, ver links) Bright-field photomicrograph toon die gebied van hipotalamus wat ondersoek word na orexien (rooi) en dynorfine (groen) immunoreaktiwiteit. (A, Verre Regs) Samevoegde tweekanaals beeld ...

Beloningsdrempelverhogende effekte van Orexin-blokkade word omgekeerd deur Dynorphin Blockade.

Om die funksionele betekenis van hierdie unieke patroon van transmitteruitdrukking te ondersoek, het ons ondersoek of ontwrigtings in orexien en dynorfine seinwerking komplekse gedrag kan beïnvloed wat normale en afwykende motivering weerspieël. In C57BL / 6-muise opgelei om intrakraniale selfstimulasie (ICSS) te verrig wat versterk is met laterale hipotalamiese (LH) stimulasie (20), blokkade van OX1Rs deur N- (2-Methyl-6-benzoxazolyl) -N "-1,5-naftyridin-4-yl ureum (SB334867) gedurende die lig fase het dosisafhanklike stygings in beloningsdrempels veroorsaak (Fig 2A; eenrigting herhaalde maatreëls ANOVA vir Dosis: F3,12 = 4.44, P <0.02). Toenames in ICSS-drempels weerspieël behandelingsgeïnduceerde afname in die lonende impak van die stimulasie, 'n depressiewe vorm wat dui op verminderde sensitiwiteit vir beloning20). Hierdie effek was nie te danke aan sedasie of ander nie-spesifieke gedragsgestremdhede, omdat die ICSS-reaksietariewe nie geraak is nie (Fig 2B; eenrigting herhaalde maatreëls ANOVA vir Dosis: F3,24 = 0.33, P > 0.80).

Fig. 2. 

Beloning-verhoging effekte van orexin blokkade word omgekeer deur dynorphin blokkade. (A) Blokkeer van orexine sein by OX1R deur SB334867 (0-30 mg / kg, ip) verhoog beloningsdrempels in die ICSS-toets, wat verminderde beloning aandui. Hierdie effek ...

Verhogings in beloningsdrempels wat deur SB334867 veroorsaak word, is verhoed deur voorbehandeling met nor-binaltorphimine (norBNI) [tweerigting herhaalde maatreëls ANOVA vir geneesmiddel (tussen vakke faktor) × Dosis SB (binne vakke faktor) interaksie: F3,24 = 3.98, P <0.01], wat langdurige blokkade van dinorfienaksies by KORs lewer (10). Hierdie data dui daarop dat die verlies van orexine seinverwysing latente antirewente effekte van gekoreleerde dynorfine openbaar. Administrasie van norBNI alleen het nie beloningsdrempels verminder nie. Alhoewel hierdie effek verband hou met die unieke farmakodinamika van norBNI en ander prototipe KOR-antagoniste (10), kan dit ook aandui dat daar oorbodigheid is in prosesse wat die aktiwiteit van breinbeloningskringe moduleer of dat fasiese toenames in orexin-toon alleen (onbeheersd deur gekoreleerde dynorfine) onvoldoende is om 'n beloningssignaal van die stimulasie-plek in die laterale hipotalamus oor te dra. Hierdie bevindinge kan aanvanklik nie teenstrydig wees met die werk van ander wat SB334867 op ICSS-drempel tydens die donker fase ondersoek het nie (21). Daar is egter aansienlike bewyse dat afname in oreksienfunksie gevolge kan hê wat afhang van of diere tydens hul lig of donker fase getoets word. Byvoorbeeld, kos en water behou hul lonende effekte in orexin-KO-muise wanneer toetse gedurende die donker fase uitgevoer word, maar nie gedurende die lig fase nie (22), die tyd waarop ons al ons gedragstoetse uitgevoer het.

Om die effekte van sistemiese SB334867- en norBNI-toediening op ICSS te lokaliseer, is 'n afsonderlike kohort muise geïmplanteer met LH stimulerende elektrodes en VTA-gidskanne. Mikroinfusie van SB334867 na VTA het gemerkte toenames in beloningsdrempels, wat 'n afname in beloning sensitiwiteit aandui, veroorsaak. Alhoewel intra-VTA norBNI alleen geen effek op ICSS-drempels gehad het nie, het dit die drempelverhogende effekte van die daaropvolgende SB334867-infusie geblokkeer (Fig 2C; eenrigting herhaalde maatreëls ANOVA vir dwelm: F3,9 = 10.98, P <0.01). Alhoewel intrakraniale medisyne-infusies geneig was om 'n matige afname in die maksimum reaksietempo te lewer in vergelyking met sistemiese geneesmiddelinspuitings, het hierdie effekte nie statistiese betekenisvolheid bereik nie (Fig 2D; eenrigting herhaalde maatreëls ANOVA vir dwelm: F3,9 = 1.03, P = 0.112).

Impulsiwiteit Reguleer deur Orexin en Dynorphin Transmission.

Impulsiwiteit word gekenmerk deur tekorte in die onderdrukking van beloningsgerigte gedrag, met hoë impulsiwiteitsvlakke wat algemeen voorkom in baie psigiatriese siektes (23). Dwelms van mishandeling, insluitende kokaïen, kan ook impulsiwiteit verhoog, wat veronderstel word om die ontwikkeling van verslawing te bestuur (24). Met inagneming van die sleutelrol vir gekoreleerde orexien en dynorfine in die beheer van sensitiwiteit vir die bevredigende effek van LH stimulasie in die ICSS toets, het ons veronderstel dat interaksies tussen hierdie twee neuropeptiede die basislyn impulsiwiteit en kokaïen-geïnduceerde tekorte in hierdie gedrag kan beïnvloed. Impulsiwiteit kan gekwantifiseer word in knaagdiere deur premature response in die 5-keuse seriële reaksietydtaak (5-CSRTT) te meet (25), 'n diermodel wat analoog is aan die deurlopende prestasietoets wat gebruik word om aandag in mense te bestudeer. Voorlopige reaksie in hierdie toets is geneig om onder normale toestande laag te wees en word vererger deur dwelms wat DA-transmissie verlig (26). Ons het die 5-CSRTT gebruik om die bydrae van die orexin-dynorfienstelsel na spontane en kokaïen-geïnduseerde impulsiewe gedrag te ondersoek. Wanneer dit alleen toegedien word, verminder SB334867 die reeds lae aantal spontane voortydige response (Fig 3A; F3,21 = 4.89, P <0.01). Hierdie vermindering het plaasgevind in die gebrek aan effekte op die akkuraatheid van die reaksie (F3,21 = 1.45, P = 0.25), pellet herwinning latency (F3,21 = 0.91, P = 0.44), of die aantal stimulusproewe wat voltooi is (F3,21 = 1.46, P = 0.25), wat aandui dat hulle nie te wyte was aan verswakte waaksaamheid of motoriese vermoëns nie. Administrasie van norBNI het egter die uitwerking van SB334867 op premature reaksie omgeskakel (Fig 3B; F3,18 = 0.45, P = 0.71), wat daarop dui dat onbeheerde dynorphien oordrag van kritieke belang is om hierdie antiimpulsiewe effekte te bemiddel. Gegee alleen of in kombinasie met SB334867, het norBNI geen effekte op die mate van reaksie-akkuraatheid geproduseer nie (F3,18 = 0.66, P > 0.58), latensie (F3,18 = 3.09, P > 0.06), of die aantal stimulusproewe wat voltooi is (F3,18 = 2.38, P > 0.10). Voorbehandeling met SB334867 het ook die tweeledige toename in voortydige reaksie wat deur kokaïen veroorsaak is, voorkom (Fig 3C; F6,24 = 5.84, P <0.01). Hierdie data lewer bewys dat orexien-neurotransmissie impulsiewe gedrag onder beide basislyn- en kokaïen-gestimuleerde toestande op 'n dinorfien-sensitiewe manier kan reguleer.

Fig. 3. 

Impulsiwiteitsgedrag gereguleer deur die balans van orexien en dynorfien. (A) SB334867 verswak premature response in die 5-CSRTT-ratmodel van motoriese impulsiwiteit. Maatreëls van akkuraatheid, latensie om die voedselkorrel te haal, en die aantal proewe wat weggelaat is, was ...

Dynorphine Mediate Reduced Cocaine Self-Administrasie in OX1R-Null Mice.

Kwesbaarheid vir verslawing is aansienlik verhoog in impulsiewe individue, en kokaïen-geïnduseerde toenames in impulsiwiteit word veronderstel om by te dra tot die opkoms van verslawing (23, 27). Daarbenewens is orexien-transmissie- en dynorphin-oordrag onafhanklik betrokke by die regulering van die lonende effekte van kokaïen en ander dwelmmiddels (mishandeling)28-32). Ons het veronderstel dat interaksies tussen orexien en die dermorfien-oordrag direk dwelmopname kan beheer. Om hierdie moontlikheid te ondersoek, het ons 'n ondersoek gedoen na die self-administrasie van kokaïen in geneties gemodifiseerde muise wat nie OX het nie1Rs (OX1R- / -). Muise van hierdie genotipe vertoon aansienlik laer kokaïen-selfadministrasie oor 'n wye verskeidenheid dosisse (0.1-1 mg / kg per infusie), maar toon onveranderlike reaksie op voedselbelonings onder dieselfde versterkingsskedules (33), wat daarop dui dat die vermindering van kokaïenopname nie ondergeskik is aan tekorte in gedragsverrigting nie. Verder, OX1R- / - muise toon normale dosisse kokaïen-selfadministrasie tydens die ongeveer drie aanvanklike sessies van kokaïen toegang, maar toon dan vinnig afname in kokaïenopname (33). Ons het hierdie fenotipe bevestig teen 'n dosis van 0.3 mg / kg per infusie, wat daarop dui dat sein via OX1R's speel 'n kritieke rol in die opstel en handhawing van kokaïen selfadministrasie gedrag [Fig 4; tweerigting herhaalde maatreëls ANOVA, Genotipe (tussen vakke faktor) × Dwelm Behandeling (binne vakke faktor): F1,12 = 12.91, P <0.01]. Net soos voorbehandeling met norBNI normale ICSS en impulsiewe gedrag by muise gegee het wat SB334867 gegee is, het dit ook kokaïen-selfadministrasie in OX gedeeltelik herstel.1R- / - muise, wat 'n unieke voorbeeld bied waarin 'n gedragstekort wat deur genetiese ablasie veroorsaak word in die funksie van een neurotransmitterstelsel gered word deur blokkade van 'n ander. Hierdie bevindinge dui daarop dat, in OX1R- / - muise, die onbeheerde aksies van die dynorfien verswak die belonende eienskappe van kokaïen, en verminder sodoende selfadministrasie van die geneesmiddel. Interessant genoeg, in OX1R+ / + (beheer) muise, norBNI onverwags verminder kokaïen self-administrasie. Een moontlike verduideliking vir hierdie effek is dat dynorphine wat vrygestel word deur nieorexienneurone, soos die sogenaamde "direkte" striatonigrale medium stekelneurone, die teenoorgestelde effekte op kokaïen inname het en die ewige effekte van kokaïen eintlik kan vergemaklik. Die bestaan ​​van twee populasies van KORs met teenoorgestelde rolle in kokaïenbeloning, sal ook verduidelik hoekom norBNI slegs gedeeltelik die tekorte in kokaïen-opneemgedrag wat in die OX opgespoor is, gedeeltelik omskep het.1R KO muise. Alternatiewelik verminder KOR-antagonisme die aversive of stresvolle effekte van kokaïen-onttrekking (34), wat bydra tot dwelminnamepatrone (17). Ongeag, hierdie data dui daarop dat die depressief-agtige effekte van dynorphine oorheers in die afwesigheid van ongeskonde oreksien-sein, wat verminderings in die lonende effekte van kokaïen veroorsaak, terwyl die effekte van orexien die lonende effekte van kokaïen vergemaklik, en die duur daarvan verleng in die afwesigheid van dynorfine sein.

Fig. 4. 

Verminderde kokaïen-selfadministrasie in OX1R KO muise word herstel deur KOR blokkade. Waardedaling van orexine sein by OX1R deur genetiese deletie van hierdie reseptor verminder iv self-toediening van kokaïen (0.3 mg / kg per infusie). Hierdie tekort is gedeeltelik ...

Orexin en Dynorphin kan gebalanseerde opponerende effekte uitoefen op die opwinding van VTA DA Neurons.

Breinstrukture wat insette ontvang van hipotalamiese orexien en dynorfienneurone, word potensieel aan beide peptiede blootgestel, en dus onderhewig aan hul opponerende effekte op neuronale opwinding (35, 36). Die mate waartoe die effekte van een peptied oor die ander van die ander heers, is waarskynlik afhanklik van talle faktore, insluitende die relatiewe oorvloed van elke peptied, langlewendheid in die ekstrasellulêre ruimte, en reseptoruitdrukking in verskillende bevolkings van teikenneurone, asook interaksies tussen die reseptore en hul intrasellulêre seinmeganismes in postsynaptiese selle. Impulsiwiteit en kokaïenbeloning word, ten minste gedeeltelik, deur DA neurone in die VTA gereguleer (26), 'n prominente teiken van hipotalamiese oreksienbevattende selle (37). Verder, die infusie van orexien in die VTA verhoog dwelm soek (6). Om die relatiewe bydraes van elke peptied op die aktiwiteit van VTA-neurone te evalueer, het ons elektrofisiologiese opnames van DA-selle in C57BL / 6-muisbreinskywe gemaak wat blootgestel is aan orexien en dynorfine wat enkel of saam toegedien word. Soos verwag het, was die orexien uniforme opwinding, wanneer afsonderlik toegepasFig 5 A en B; F2,50 = 18.95, P ≤ 0.01). In die populasie van DA neurone aangeteken, het die meeste gereageer op versadigende konsentrasies van albei peptiede, hoewel 'n klein minderheid selektief slegs reageer op orexien of dynorfien (Fig 5B). Opmerklik, wanneer albei peptiede toegepas is op die dubbel-responsiewe neurone (n = 10), was daar geen netto effek op vuurprys nie (Fig 5A), wat daarop dui dat die teenoorgestelde effekte van elke peptied by versadigende konsentrasies mekaar effektief kan uitskakel na korelease. Vier van die 10 neurone het voorkeur-inhibisie deur dynorfien getoon ondanks die teenwoordigheid van orexin, terwyl een sel by voorkeur opgewonde was (> 1.5-voudige verandering) deur orexin ondanks die aanwesigheid van dynorfine (Fig 5 A en C). Alhoewel meer selle reageer op orexien as dynorfien, het die selle wat reageer op albei peptiede nie 'n netto verandering in vuurspoed gehad toe orexien en dynorfine toegepas is nie, wat daarop dui dat die teenoorgestelde invloede van elke peptied gebalanseer is binne die stel VTA DA neurone bestudeer.

Fig. 5. 

Orexien en dynorphine oefen gebalanseerde maar opponerende effekte op VTA DA neurone. (A, links) Coapplied orexin en dynorphin lei tot geen netto verandering in die vuursnelheid van VTA DA neurone (n = 10). Toegepas afsonderlik, dynorfine was inhibitief en oreksien was opwindend. ...

Om die potensiële orexin-dinorforf-interaksies binne VTA DA-neurone wat sensitief was vir beide orexien en dynorfien verder te verhelder, het ons gepoog om die inhibitiewe effekte van bad toegepaste dynorfien te versterk deur behandeling met SB334867 (Fig. S2A; F5,25 = 2.13, P <0.01) of om die opwindende effekte van ore wat op ore toegedien word, te behandel met norBNI (Fig. S2B; F3,27 = 5.48, P <0.01). In beide eksperimente, OX1R en KOR blokkade versuim het om hierdie effekte te produseer, wat daarop dui dat SB334867 en norBNI geen effekte uitoefen via nie-spesifieke aksies. Meer belangrik, hierdie data dui daarop dat die toon van elke peptied in vitro onvoldoende is om beïnvloed te word deur die toepassing van klein molekule antagoniste soos SB334867 en norBNI. Hierdie bevinding is in ooreenstemming met vorige werk wat aandui dat eksocytose van groot, peptiedbevattende vesikels tipies slegs plaasvind by hoë volgehoue ​​vuurfrekwensies wat nie normaalweg in snypreparate teenwoordig is nie (38).

Om te verifieer dat norBNI nie gedrag beïnvloed het deur middel van "off-target" -aksies direk by OX nie1Rs, ons het die gevolge van hierdie antagonis op OX vervolgens ondersoek1R sein. Spesifiek, ons het 'n fluorometriese beeldplaatlezer (FLIPR) -assessering gebruik om die vermoë van orexien A, SB334867, of norBNI wat toegedien is in bad te bepaal om intracellulêre kalsiumtransiente in gekweekte CHO-selle te induceer wat die menslike OX uitdruk.1Rs. Alhoewel orexin A die verwagte toenames in intrasellulêre kalsium (EC50 = 0.01 μM) en SB334867 dosisafhanklik verswak hierdie effek (EC50 = 0.035 μM), noBNI versuim het om enige effekte op enige basislyn of orexien A-verhoogde toename in intrasellulêre kalsium te lewer. Dit dui daarop dat die effekte van norBNI op VTA DA neuronale fisiologie slegs via voorgestelde KOR seinmeganismes is en die geneesmiddel geen direkte effek by OX het nie1R (39) (Fig. S3 A-C).

Orexien-dinorfien interaksies in VTA Reguleer Kokaïen Self-Administrasie.

Ons elektrofisiologie studies toon dat dinamiese interaksies tussen orexien en dynorfien VTA DA aktiwiteit reguleer, en dat VTA neurone waarskynlik as 'n belangrike substraat dien vir die effekte van die orexien-dinorforfstelsel op gemotiveerde gedrag. Om hierdie hipotese direk te toets, het ons die effekte van intra-VTA infusie van SB334867 op iv kokaïen selfadministrasie by rotte ondersoek. In vergelyking met intra-VTA-infusie, het intra-VTA SB334867 'n merkbare vermindering van kokaïeninname veroorsaak wat deur norBNI geblokkeer is (Fig 6; eenrigting ANOVA: F3,24 = 11.56, P <0.01), wat daarop dui dat onbestrede dinorfienaksies binne hierdie breingebied die kokaïenbeloning verswak. Dit lyk of hierdie resultate in stryd is met die resultate wat die afwesigheid van intra-VTA SB334867 op kokaïen-selfadministrasie in lae-inspanning vaste verhouding 1 (FR1) versterkingsskedules getoon het (40). Verskeie verslae het egter getoon dat soos SB334867 verhoog word, meer effektief is om dwelms te verminder (2, 33). Aangesien rotte in hierdie eksperiment 'n hoër poging FR5 skedule uitvoer, is die huidige bevindings in ooreenstemming met hierdie literatuur. Hierdie data bied direkte bewyse dat die teenstellende aard van orexien en dynorfine op VTA DA neuronale fisiologie betekenisvolle effekte op beloningsgedrewe gedrag kan uitoefen.

Fig. 6. 

Orexine-dinorfin-interaksies in VTA bemiddel dwelmopname. Kokaïen selfadministrasie word verminder deur intra-VTA SB334867 (3 μg per kant), terwyl hierdie effek omgekeer word deur voorbehandeling met norBNI (10 mg / kg, ip) (n = 9). ***P < ...

Bespreking

Ons rapporteer dat orexien en dynorfine, neuropeptiede wat teenmotiewe op motivering kan veroorsaak, in dieselfde sinaptiese vesikels voorkom. Die bevinding dat hierdie neuropeptiede saamgepaklaar word en waarskynlik onder dieselfde fisiologiese toestande gekoreleer word (16) het verreikende implikasies omdat dit die moontlikheid veroorsaak dat hierdie proses ook voorkom in stelsels wat tradisioneel gekonseptualiseer word, afhangende van individuele senders. Ons demonstreer ook dat orexin, via OX sein1Rs, verlig sleutel funksionele en gedragseffekte van die cotransmitter dynorphine. Orexine-dynorfiene neurone druk verhoogde vlakke van die onmiddellike vroeë geen c-Fos uit in reaksie op belonings en beloning-voorspellende aanwysings (4, 6, 22), wat hoë vlakke van neuronale aktivering aandui wat die vrystelling van neuropeptied bevoordeel. Ons verskaf dan bewyse dat corelease van orexien gevolge van dynorfine op gemotiveerde gedrag kan okkulteer via sy optrede op DA neurone in die VTA. Blokkeer van orexien kan dynorfine- of KOR-agonist-agtige effekte op ICSS- en kokaïenverwante gedrag veroorsaak wat omgekeerd word met KOR-antagonisme (13, 41, 42). Vorige studies van elk van hierdie peptiede in isolasie ondersteun hierdie gevolgtrekkings: Direkte infusie van orexien in die VTA herstel dwelmsoek (6), terwyl intra-VTA-infusie van KOR-agoniste depressiewe-agtige effekte veroorsaak, soos dysforia (43). Ons vermoed dat orexin gewoonlik saamwerk met opwindende reageer-responsiewe insette op die VTA [bv. Glutamaat van prefrontale korteks en ander strukture (44, 45)] om die inhibitiewe invloed van dynorfine en plaaslike GABA-oordrag op DA neurone te oorkom, wat die voorkoms van DA-vrylating verhoog met beloning en gemotiveerde gedrag.

Dit is belangrik om te beklemtoon dat hoewel die orexien-oordrag blyk te wees om die depressiewe effekte van KOR-aktivering te verreken, veroorsaak KOR-antagonisme nie 'n suiwer wederkerige effek nie (verhoogde beloningfunksie). Ons vermoed dat dit onder andere die gevolg is van die verskillende farmakodinamiese en farmakokinetiese profiele van SB334867 en norBNI. Die voormalige dwelm toon klassieke aktiwiteit en a t1/2 van ~ 24 min (46), terwyl 'n enkele inspuiting van laasgenoemde funksionele antagonisme van KORs lewer wat vir weke voortduur (10). Daarbenewens is prototipe KOR-antagoniste soos norBNI "bevooroordeelde agoniste" wat gelyktydig ander seinweë kan aktiveer, soos dié van c-Jun kinase (39), wat sodoende akute effekte of kompenserende aanpassings tot gevolg het wat voldoende is om hoër vlakke van orexin toon te verreken. Definitiewe gevolgtrekkings oor die vraag of hierdie effekte wederkerig is op die ontwikkeling van kortwerkende KOR-antagoniste wat nie op ander intrasellulêre seinbane optree nie; sulke verbindings is tans nie beskikbaar nie (10). Verder fokus die huidige eksperimente op die VTA en kan die moontlikheid uitgesluit word dat die effekte van orexien en dynorfine nie digotomies in ander strukture kan wees nie of dat die VTA die enigste struktuur is waarby orexien-dinorfin-interaksies gedrag beïnvloed. Byvoorbeeld, daar is bewyse dat orexien betrokke is by die stresrespons en mag langs dynorfien deelneem om negatiewe affektiewe toestande teweeg te bring wat dwelm-onttrekking vergesel (40, 47). Dit is duidelik dat bykomende werk nodig is om die omstandighede, anatomiese loki en meganismes wat voorkom dat dit moontlik is om teenwoordige aksies van orexien en dynorfien in verskillende gedragsparadigmas toe te laat.

Ons data ondersteun ook die siening dat die werking van albei peptiede modulatories is, aangesien ontwrigting van óf OX1Rs of KORs verminder, maar het nie die getoetsde gedrag afgeskaf nie. Byvoorbeeld, ICSS-gedrag het voortgegaan selfs by hoë dosisse SB334867, wat aantoon dat orexien alleen nie voldoende is om rekening te hou met die lonende effekte van LH-stimulasie nie. Een moontlikheid is dat alhoewel orexien nie ICSS-gedrag kan handhaaf nie, verminder dit sy ontwrigting deur die aksies van dynorfine te vergoed. Differensiële uitdrukking van orexien en dynorfine deur dieselfde populasie van hipotalamiese neurone kan 'n meganisme wees waardeur die opwinding van DA neurone in die VTA deur eksterne stimuli, sowel as ondervinding of siekte, gereguleer kan word. As een voorbeeld, word orexiene-mRNA-vlakke verminder na aanleiding van 'n tipe chroniese sosiale stres wat 'n depressiewe-agtige fenotipe in muise tot gevolg het (48) en rotte (49). Hierdie depressief-agtige fenotipe kan ten minste gedeeltelik toegeskryf word aan reduksies in orexin-uitdrukking wat die optrede van dynorfine onopgevoed maak. Hierdie bevindings het belangrike implikasies vir die interpretasie van data wat orexien en dinorfien in isolasie betref, aangesien aanpassings in een stelsel teenwaarts aangepas kan word deur aanpassings in die ander. Hulle kan ook buigsaamheid toevoeg in die ontwerp van terapeutiese strategieë om afwykings te behandel wat wissel van narkolepsie tot bui en impulsbeheerstoornisse. Byvoorbeeld, 'n unieke benadering tot die behandeling van toestande wat veroorsaak word deur dysregulering van orexien, kan wees om KOR-funksie te manipuleer, en omgekeerd kan afwykings wat gekenmerk word deur veranderde dynorfine-funksie vergoed word deur manipulasies van orexiensisteme.

Materiaal en metodes

Diere.

Die volwasse manlike C57BL / 6J-muise (8 wk van ouderdom; Jackson Laboratorium) wat in EM-eksperimente gebruik is, is groepgehuisd (drie tot vyf per hok); Diegene wat vir ICSS gebruik is, was een na die operasie gehuisves. Volwasse mans (350 g) Sprague-Dawley-rotte (Charles River Laboratories) is gebruik in die 5-CSRTT- en kokaïen-selfadministrasie-eksperimente en is in groepe van vier gehuisves. Die volwasse manlike C57BL / 6J-muise (postnatale dae 19-21) wat vir die elektrofisiologie-eksperimente gebruik is, is groepgehuis (drie tot vyf per hok). Die OX1- / - muise en hul OX1+ / + rommelmaats (6 wk van ouderdom) wat vir die selfadministrasiestudies gebruik is, is van Jackson Laboratorium verkry en is meer as sewe generasies teruggekeer na C57BL / 6-muise. Hierdie muise is groepgehuis (twee per hok). Alle diere is onder temperatuur beheerde toestande gehuisves op 'n 12-h lig / donker siklus, en gedragstoetsing het 4-5 h in die ligsiklus plaasgevind; Kos en water was beskikbaar ad libitum, tensy anders aangedui. Prosedures is uitgevoer in ooreenstemming met die Nasionale Instituut van Gesondheid Gids vir die versorging en gebruik van laboratoriumdiere (50) en is goedgekeur deur die Institusionele Diereversorgings- en Gebruikskomitees van McLean Hospital, die Universiteit van British Columbia, en Scripps Florida.

Immunohistochemie en Mikroskopie.

Fluorescentie en silwerversterkte goue immunolabelling vir orexien A of prodynorfien is uitgevoer op alternatiewe muisbreinafdelings volgens voorheen gerapporteerde prosedures (51), en verwerk volgens standaard EM protokolle. Nie-oorvleuelende streke van immuno-gemerkte weefsel is dan lukraak gekies en gefotografeer vir kwantifisering van deeltjies met behulp van ImageJ sagteware (National Institutes of Health) (SI Materiale en Metodes, Immunohistochemie en Mikroskopie).

Elektrofisiologie.

Patchpipette (3-5 MΩ) is gevul met 143 mM kaliumglukonaat, 10 mM Hepes, 0.2 mM EGTA, 2 mM MgATP, 0.3 mM NaGTP (met 'n pH van 7.2) en 270-280 mM mOsmol. Data is verkry by 20 kHz en gefiltreer by 2 kHz deur gebruik te maak van pClamp 10.0 sagteware (Molekulêre toestelle). Na die verkryging van 'n heel-sel konfigurasie, is die selle spanning geklem by -70 mV en 'n reeks spanningsstappe (250 ms, van -60 tot -130 mV in 10-mV stappe) is toegepas om hipoliparisering te bepaalIh) strome. Ih is bepaal as die verandering in stroom tussen ~30 ms en 248 ms nadat die spanningstap toegepas is. Intrinsieke aktiwiteit van VTA DA neurone is gemeet in stroomklamp af. Eksperimente het begin toe 'n stabiele basiese vuurprys bereik is; Substraten is dan vir 5 min toegedien en daarna met kunsmatige serebrospinale vloeistof uitgespoel. Die laaste 3-min van elke 5-min-segment is vir data-analise gebruik. Dynorphin A (1-17; 200 nM) en orexin A (100 nM) is verkry uit Amerikaanse Peptide en opgelos in gedistilleerde water. Hierdie konsentrasies is voorheen gevind om versadigingseffekte op VTA-selaktiwiteit uit te oefen (5, 52). Thiorphan (1 μM) en bestatin (10 μM) is verkry uit Sigma-Aldrich, opgelos in gedistilleerde water, en toegedien saam met dynorfine A (SI Materiale en Metodes, Elektrofisiologie).

FLIPR-toets.

OX1R aktiwiteit is beoordeel deur intracellulêre kalsiumvlakke te meet deur FLIPR-toetse soos hierbo beskryf (53) (SI Materiale en Metodes, Fluorometriese Imaging Plate Reader Assay).

ICSS.

Muise is geïmplanteer met monopolêre stimulerende elektrodes of kanule (PlasticsOne) onder ketamien / xylazine (80 en 10 mg / kg, onderskeidelik ip; Sigma) stereotakties gerig op die LH (18) en / of kontralaterale VTA [van bregma: anteroposterior (AP), -3.2 mm; mediolaterale (ML), -0.5 mm; dorsoventrale (DV), -4.7 mm van dura]. Na 'n 7-d herstelperiode is muise opgelei om te reageer op breinstimulasie soos voorheen beskryf (18). Die laagste frekwensie wat ondersteun is (drempelwaarde) is bereken met behulp van die minste-vierkante lyn-van-die-beste-pas analise. Wanneer muise voldoen het aan stabiliteitskriteria vir ICSS-drempels (± 10% oor 5 opeenvolgende dae), is effekte van geneesmiddelbehandelings gemeet. SB334867 (Scripps Florida) of DMSO-voertuig is op alternatiewe dae gegee met 'n Hamilton-spuit (0.1 mL / kg ip), en drempels is onmiddellik gekwantifiseer in 15-min toets sessies. Die norBNI (10 mg / kg ip; Sigma) is in sout (10 mL / kg) 48 h voor die aanvang van die ICSS-toetsing gegee.

Die 5-CSRTT.

Rotte was voedselbeperkend (tot 85% vrygewiggewig) en opgelei in rekenaar beheerde operante kamers gehuisves in geventileerde, klinkdempende kabinette (Med Associates) en 5-CSRTT prosedures uitgevoer soos beskryf (25). SB334867 (in DMSO, 0.1 mL / kg) en / of kokaïen (in sout, 1 mL / kg, Sigma) is gegee deur ip-inspuiting 10 min voor toetsing, soos in ander eksperimente, en norBNI is ten minste 48 h gegee voor die begin van toetsing (SI Materiale en Metodes, Die 5-Keuse Seriële Reaksie Tyd Taak).

IV Kokaïen Self-Administrasie.

Rotte en muise is narkoseer met 'n isofluraan (1-3% vol / vol) suurstofdampmengsel en chirurgies voorberei met Silastic (VWR Scientific) kateters in die jugular vein volgens gevestigde prosedures (54). Onmiddellik na die inplanting van die kateter in die rotte is bilaterale roestvaststaal-geleidingskanules (23 maat, 17 mm lank) in die VTA ingeplant (vanaf bregma: AP, 5.3 mm; ML, ± 0.7 mm; DV, -7.5 mm vanaf dura ). Toetse met SB334867 of norBNI gedurende 60 minute daaglikse sessies is uitgevoer nadat stabiele inname van kokaïen bereik is (<20% variasie in reaksie gedurende 3 agtereenvolgende dae; SI Materiale en Metodes, IV Kokaïen Self-Administrasie).

Statistiek.

Data word uitgedruk as gemiddelde ± SEM. Vir ICSS eksperimente is twee-rigting herhaalde maatstawwe ANOVA gebruik om te vergelyk tussen SB334867-behandelde en norBNI + SB334867-behandelde toestande. Een-rigting herhaalde maatreëls ANOVA met Newman-Keuls post hoc toetse is gebruik om te vergelyk binne SB334867 en norBNI + SB334867 toestande. Eenmalige herhaalde maatreëls ANOVA- en Newman-Keuls-toetse is ook gebruik om alle 5CSRTT-eksperimente te vergelyk. Tweerigting-herhaalde maatreëls ANOVA is gebruik om te vergelyk tussen behandelingsgroepe in eksperimente met kokaïen, met OX1R KO muise. Een-rigting herhaalde maatreëls ANOVA en Newman-Keuls toetse is gebruik om gemiddelde reaksies op orexien en dynorphine deur VTA DA neurone te vergelyk. Eenmalige herhaalde maatreëls ANOVA- en Newman-Keuls-toetse is ook gebruik om die kokaïeninname in rotte wat met SB334867 en norBNI behandel is, te vergelyk. Verskille is as beduidend beskou as P <0.05.

Aanvullende materiaal

Ondersteunende inligting: 

Erkennings

Ons dank dr. Garrett Fitzmaurice vir nuttige kommentaar op die manuskrip en Miranda S. Gallo en Melissa Chen vir hulp in data-insameling. Hierdie werk is ondersteun deur die Nasionale Instituut van Gesondheidstoelaes F32-DA026250 en K99-DA031767 (na JWM), F32-DA024932 en K99-DA031222 (na JAH), R01-DA023915 (tot. PJK) en R01-MH063266 (na WAC ) en deur 'n navorsingsraad vir Natuurwetenskappe en Ingenieursnavorsingsraad (tot SLB).

voetnote

 

Konflik van belangstelling: WAC beskik oor 'n patent (US Patent 6,528,518; Genoemde: McLean Hospital) wat verband hou met die gebruik van kappa-opioïed antagoniste vir die behandeling van depressiewe afwykings. Alle ander outeurs verklaar geen mededingende belange.

Hierdie artikel is 'n PNAS Direkte Voorlegging.

Sien kommentaar op bladsy 5765.

Hierdie artikel bevat ondersteunende inligting aanlyn by www.pnas.org/lookup/suppl/doi:10.1073/pnas.1315542111/-/DCSupplemental.

Verwysings

1. Adamantidis AR, Zhang F, Aravanis AM, Deisseroth K, die Lecea L. Neurale substraten van ontwaking ondersoek met optogenetiese beheer van hipokretienneurone. Aard. 2007; 450 (7168): 420-424. [PubMed]
2. Borgland SL, et al. Orexin A / hypocretin-1 bevorder selektief motivering vir positiewe versterkers. J Neurosci. 2009; 29 (36): 11215-11225. [PMC gratis artikel] [PubMed]
3. Sjaap R, et al. Orexin sein via die orexin 1 reseptor bemiddel operant reageer op voedsel versterking. Biolpsigiatrie. 2010; 67 (8): 753-760. [PMC gratis artikel] [PubMed]
4. Muschamp JW, Dominguez JM, Sato SM, Shen RY, Hull EM. 'N Rol vir hipokretien (orexien) in manlike seksuele gedrag. J Neurosci. 2007; 27 (11): 2837-2845. [PubMed]
5. Borgland SL, Taha SA, Sarti F, Fields HL, Bonci A. Orexin A in die VTA is van kritieke belang vir die induksie van sinaptiese plastisiteit en gedrags sensitiwiteit vir kokaïen. Neuron. 2006; 49 (4): 589-601. [PubMed]
6. Harris GC, Wimmer M, Aston-Jones G. 'N rol vir laterale hipotalamiese orexine neurone in beloning soek. Aard. 2005; 437 (7058): 556-559. [PubMed]
7. Peyron C, et al. Neurone wat hipokretien (orexien) bevat, produseer verskeie neuronale stelsels. J Neurosci. 1998; 18 (23): 9996-10015. [PubMed]
8. Marcus JN, et al. Differensiële uitdrukking van orexienreseptore 1 en 2 in die rotbrein. J Comp Neurol. 2001; 435 (1): 6-25. [PubMed]
9. Bruchas MR, Land BB, Chavkin C. Die dynorphine / kappa opioïde stelsel as 'n modulator van stres-geïnduseerde en pro-verslawende gedrag. Brein Res. 2010; 1314: 44-55. [PMC gratis artikel] [PubMed]
10. Carroll FI, Carlezon WA., Jr Ontwikkeling van κ opioïed reseptor antagoniste. J Med Chem. 2013; 56 (6): 2178-2195. [PMC gratis artikel] [PubMed]
11. Chavkin C, James IF, Goldstein A. Dynorphin is 'n spesifieke endogene ligand van die kappa opioïede reseptor. Wetenskap. 1982; 215 (4531): 413-415. [PubMed]
12. Bruijnzeel AW. kappa-opioïede reseptor sein en brein beloning funksie. Brain Res Brain Res Ds. 2009; 62 (1): 127-146. [PMC gratis artikel] [PubMed]
13. Wee S, Koob GF. Die rol van die dynorphin-kappa opioïde stelsel in die versterkende effekte van dwelms van misbruik. Psigofarmakologie (Berl) 2010; 210 (2): 121-135. [PMC gratis artikel] [PubMed]
14. Shippenberg TS, Zapata A, Sjef VI. Dinorforf en die patofisiologie van dwelmverslawing. Pharmacol Ther. 2007; 116 (2): 306-321. [PMC gratis artikel] [PubMed]
15. Zhang Y, Butelman ER, Schlussman SD, Ho A, Kreek MJ. Effek van die endogene kappa opioïde agonist dynorphine A (1-17) op kokaïen-verhoogde stygings in striatale dopamienvlakke en kokaïengeïnduceerde plekvoorkeur in C57BL / 6J-muise. Psigofarmakologie (Berl) 2004; 172 (4): 422-429. [PubMed]
16. Li Y, van die Pol AN. Differensiële teiken-afhanklike aksies van saamgesproke inhibitiewe dynorfine en opwindende hipokretien / oreksienneuropeptiede. J Neurosci. 2006; 26 (50): 13037-13047. [PubMed]
17. Koob GF, Le Moal M. Verslawing en die brein antireward stelsel. Annu Rev Psychol. 2008; 59: 29-53. [PubMed]
18. Chou TC, et al. Orexien (hipokretien) neurone bevat dynorfien. J Neurosci. 2001; 21 (19): RC168. [PubMed]
19. Bamford NS, et al. Heterosynaptiese dopamienneurotransmissie kies stelle kortikostriatale terminale. Neuron. 2004; 42 (4): 653-663. [PubMed]
20. Carlezon WA, Jr, Chartoff EH. Intrakraniale selfstimulasie (ICSS) by knaagdiere om die neurobiologie van motivering te bestudeer. Nat Protoc. 2007; 2 (11): 2987-2995. [PubMed]
21. Riday TT, et al. Orexin-1-reseptor antagonisme verminder nie die lonende sterkte van kokaïen in Switserse-Webster-muise nie. Brein Res. 2012; 1431: 53-61. [PMC gratis artikel] [PubMed]
22. McGregor R, Wu MF, Kapper G, Ramanathan L, Siegel JM. Hoogs spesifieke rol van hipokretien (oreksien) neurone: Differensiaalaktivering as 'n funksie van die dagfase, operante versterking versus operante vermyding en ligvlak. J Neurosci. 2011; 31 (43): 15455-15467. [PMC gratis artikel] [PubMed]
23. de Wit H. Impulsiwiteit as 'n determinant en gevolg van dwelmgebruik: 'n Oorsig van onderliggende prosesse. Verslaafde Biol. 2009; 14 (1): 22-31. [PMC gratis artikel] [PubMed]
24. Winstanley CA, Olausson P, Taylor JR, Jentsch JD. Insig in die verhouding tussen impulsiwiteit en dwelmmisbruik van studies met behulp van diermodelle. Alkohol Clin Exp Res. 2010; 34 (8): 1306-1318. [PMC gratis artikel] [PubMed]
25. Bari A, Dalley JW, Robbins TW. Die toepassing van die 5-keuse seriële reaksie tyd taak vir die assessering van visuele aandag prosesse en impuls beheer in rotte. Nat Protoc. 2008; 3 (5): 759-767. [PubMed]
26. Robbins TW. Die 5-keuse seriële reaksietyd taak: Gedrags farmakologie en funksionele neurochemie. Psigofarmakologie (Berl) 2002; 163 (3-4): 362-380. [PubMed]
27. Koob GF, Volkow ND. Neurokringkunde van verslawing. Neuropsychopharmacology. 2010; 35 (1): 217-238. [PMC gratis artikel] [PubMed]
28. Smith RJ, Sien RE, Aston-Jones G. Orexine / hipokretien sein by die orexin 1 reseptor reguleer cue-elected cocaine-soek. Eur J Neurosci. 2009; 30 (3): 493-503. [PMC gratis artikel] [PubMed]
29. Boutrel B et al. Rol vir hipokretien in die bemiddeling van stres-geïnduseerde herinstelling van kokaïen-soekende gedrag. Proc Natl Acad Sci VSA. 2005; 102 (52): 19168-19173. [PMC gratis artikel] [PubMed]
30. Narita M, et al. Direkte betrokkenheid van orexinergiese stelsels in die aktivering van die mesolimbiese dopamienweg en verwante gedrag wat deur morfien veroorsaak word. J Neurosci. 2006; 26 (2): 398-405. [PubMed]
31. Hollander JA, Lu Q, Cameron MD, Kamenecka TM, Kenny PJ. Insulêre hipokretien-oordrag reguleer nikotienbeloning. Proc Natl Acad Sci VSA. 2008; 105 (49): 19480-19485. [PMC gratis artikel] [PubMed]
32. Lawrence AJ, Cowen MS, Yang HJ, Chen F, Oldfield B. Die orexinesisteem reguleer alkohol-soek in rotte. Br J Pharmacol. 2006; 148 (6): 752-759. [PMC gratis artikel] [PubMed]
33. Hollander JA, Pham D, Fowler CD, Kenny PJ. Hypokretien-1-reseptore reguleer die versterkings- en beloningsverhogende effekte van kokaïen: Farmakologiese en gedragsgenetika-bewyse. Front Behav Neurosci. 2012; 6: 47. [PMC gratis artikel] [PubMed]
34. Potter DN, Damez-Werno D, Carlezon WA, Jr, Cohen BM, Chartoff EH. Herhaalde blootstelling aan die K-opioïed-reseptor-agonist salvinorien A moduleer ekstrasellulêre sein-gereguleerde kinase en beloning sensitiwiteit. Biolpsigiatrie. 2011; 70 (8): 744-753. [PMC gratis artikel] [PubMed]
35. Korotkova TM, Sergeeva OA, Eriksson KS, Haas HL, Brown RE. Opwekking van ventrale tegmentale area dopaminerge en nondopaminerge neurone deur oreksiene / hipokretiene. J Neurosci. 2003; 23 (1): 7-11. [PubMed]
36. Margolis EB, Hjelmstad GO, Bonci A, Fields HL. Kappa-opioïed-agoniste inhibeer direk dopaminerge neurone in die middellyn. J Neurosci. 2003; 23 (31): 9981-9986. [PubMed]
37. Fadel J, Deutch AY. Anatomiese substrate van oreksien-dopamien interaksies: Laterale hipotalamiese projeksies na die ventrale tegmentale area. Neuroscience. 2002; 111 (2): 379-387. [PubMed]
38. Torrealba F, Carrasco MA. 'N Oorsig oor elektronmikroskopie en neurotransmitterstelsels. Brain Res Brain Res Ds. 2004; 47 (1-3): 5-17. [PubMed]
39. Bruchas MR, Chavkin C. Kinase-kaskades en ligandgerigte sein by die kappa opioïede reseptor. Psigofarmakologie (Berl) 2010; 210 (2): 137-147. [PMC gratis artikel] [PubMed]
40. Sjaap R, Sarhan M, Dileone RJ. Rol van orexien / hipokretien in afhanklikheid en verslawing. Brein Res. 2010; 1314: 130-138. [PMC gratis artikel] [PubMed]
41. Todtenkopf MS, Marcus JF, Portoghese PS, Carlezon WA., Jr Effekte van kappa-opioïede reseptor ligande op intrakraniale selfstimulasie by rotte. Psigofarmakologie (Berl) 2004; 172 (4): 463-470. [PubMed]
42. Tomasiewicz HC, Todtenkopf MS, Chartoff EH, Cohen BM, Carlezon WA., Jr Die kappa-opioïde agonis U69,593 blokke kokaïen-geïnduseerde verbetering van die stimulering van die brein stimulasie. Biolpsigiatrie. 2008; 64 (11): 982-988. [PMC gratis artikel] [PubMed]
43. Bals-Kubik R, Ableitner A, Herz A, Shippenberg TS. Neuro-anatomiese terreine wat die motiveringseffekte van opioïede bemiddel soos gekarteer deur die gekondisioneerde plekvoorkeurparadigma by rotte. J Pharmacol Exp Ther. 1993; 264 (1): 489-495. [PubMed]
44. Moorman DE, Aston-Jones G. Orexien / hipokretine moduleer reaksie van ventrale tegmentale dopamienneurone tot prefrontale aktivering: Diurnale invloede. J Neurosci. 2010; 30 (46): 15585-15599. [PMC gratis artikel] [PubMed]
45. Mahler SV, Smith RJ, Aston-Jones G. Interaksies tussen VTA-orexien en glutamaat in cue-geïnduceerde herinstelling van kokaïen wat in rotte soek. Psigofarmakologie (Berl) 2013; 226 (4): 687-698. [PMC gratis artikel] [PubMed]
46. Porter RA, et al. 1,3-Biarylureas as selektiewe nie-peptiedantagoniste van die orexien-1-reseptor. Bioorg Med Chem Lett. 2001; 11 (14): 1907-1910. [PubMed]
47. Koob GF. 'N Rol vir breinstresisteme in verslawing. Neuron. 2008; 59 (1): 11-34. [PMC gratis artikel] [PubMed]
48. Lutter M, et al. Orexin sein bemiddel die antidepressant-agtige effek van kalorie beperking. J Neurosci. 2008; 28 (12): 3071-3075. [PMC gratis artikel] [PubMed]
49. Nocjar C, Zhang J, Feng P, Panksepp J. Die sosiale nederlaag diermodel van depressie toon verminderde vlakke van orexien in mesokortiese streke van die dopamienstelsel, en van dinorfien en orexien in die hipotalamus. Neuroscience. 2012; 218: 138-153. [PubMed]
50. Komitee oor Sorg en Gebruik van Laboratoriumdiere. Gids vir die versorging en gebruik van laboratoriumdiere. Bethesda: Natl Inst Gesondheid; 1985. DHHS Publ Nr (NIH) 85-23.
51. Yi H, Leunissen J, Shi G, Gutekunst C, Hersch S. 'n Nuwe prosedure vir die vooraf inbedding van dubbel immunogold-silwer etikettering op die ultrastruktuurvlak. J Histochem Cytochem. 2001; 49 (3): 279-284. [PubMed]
52. Ford CP, Beckstead MJ, Williams JT. Kappa opioïde inhibisie van somatodendritiese dopamien inhibitiewe postsynaptiese strome. J Neurofisiolo. 2007; 97 (1): 883-891. [PMC gratis artikel] [PubMed]
53. Smart D, et al. Karakterisering van rekombinante menslike orexien reseptor farmakologie in 'n Chinese hamster ovarium sellyn met FLIPR. Br J Pharmacol. 1999; 128 (1): 1-3. [PMC gratis artikel] [PubMed]
54. Fowler CD, Lu Q, Johnson PM, Marks MJ, Kenny PJ. Habenular α5 nikotiniese reseptor subeenheid sein beheer kontrole nikotien inname. Aard. 2011; 471 (7340): 597-601. [PMC gratis artikel] [PubMed]