يتغير توزيع مستقبلات الدوبامين وتغير ديناميكياً في نواة الفئران المتكئة بعد الانسحاب من تعاطي الكوكايين. (2010)

تشابك البروتين

تم وصف هذه الطريقة بالتفصيل سابقًا (بودرو وولف ، 2005; Ferrario et al.، 2010). تم قطع رأس الفئران ، وتمت إزالة أدمغتها بسرعة ، وتم تشريح NAc بأكمله (أو المناطق الفرعية الأساسية والقذيفة) على الجليد من قسم الاكليلية 2mm الذي تم الحصول عليه باستخدام مصفوفة دماغية. تم تقطيع أنسجة NAc الكاملة على الفور إلى شرائح 400μm باستخدام مفرمة أنسجة McIllwain (Vibratome، St. Louis، MO) ، في حين تم تنفيس المناطق الفرعية الأساسية والقذائف الصغيرة يدويًا باستخدام مشرط. بعد ذلك ، تمت إضافة الأنسجة إلى أنابيب إيبندورف التي تحتوي على CSF مصطنع باردًا على الجليد مع ارتفاع 2 mM (sulfosuccinimidyl) suberate (BS³. بيرس التكنولوجيا الحيوية ، روكفورد ، IL). تم السماح بتفاعل التشابك المتواصل لمدة 30 min عند 4 ° C مع إثارة لطيفة ، ثم تم إنهاؤها بإضافة 100mM glycine (10 min عند 4 ° C). تم تكوير الأنسجة عن طريق الطرد المركزي لفترة وجيزة ، وإعادة تعليقها في المخزن المؤقت لتحلل الجليد الباردة التي تحتوي على مثبطات الأنزيم البروتيني والفوسفاتيز ، وتم إقرانها في 5 sec ، وطردها مرة أخرى. تم تخزين قسامة طاف في -80 ° C حتى تحليلها من قبل النشاف الغربي.

تحليل لطخة غربية من DARs في الأنسجة متشابكة

تم إلكترود العينات (20-30μg من إجمالي البروتين / المحللة) على المواد الهلامية 4-15٪ Tris-HCl (Biorad، Hercules، CA). تم نقل البروتينات إلى أغشية فلوريد البولي فينيل إيثيلين من أجل التسمير المناعي باستخدام تيار ثابت (1.15mA) من أجل 1.5 h. تم استخدام ملف التبريد لمنع التسخين الزائد. تم تأكيد النقل الكامل للركام عالي الوزن الجزيئي عن طريق تلطيخ المواد الهلامية بعد نقلها باللون الأزرق Coomassie. علاوة على ذلك ، تحققنا من أن بروتينات DAR المتشابكة لم يتم اكتشافها في هلام التراص (لا تظهر البيانات). بعد النقل ، تم غسل الأغشية في DDH₂O ، يتم تجفيفه بالهواء لمدة 1 ساعة في درجة حرارة الغرفة (RT) ، وإعادة ترطيبه باستخدام 100٪ MeOH ، وغسله في محلول ملحي 1x Tris (TBS) وغمره في 0.1M NaOH ، ودرجة الحموضة 10 لـ 15 min عند RT. بعد ذلك ، تم غسلها في TBS ، تم حظرها باستخدام 3٪ Bovine Serum Albumin (Sigma – Aldrich ، St. Louis ، MO) في TBS-Tween-20 (TBS-T) ، pH 7.4 ، لـ 1 hr في RT ، واحتضانها طوال الليل عند 4 ° C مع وجود أجسام مضادة تتعرف على D1 DAR (1: 1000؛ Millipore؛ Cat # AB1765P) و D2 DAR (1: 1000؛ Millipore، Billercia، CA؛ Cat # AB5084P) و D3؛ القط # AB1P). لم يتم تحليل D1000 و D1786 DAR بسبب نقص الأجسام المضادة التي تعترف بمستقبلات متشابكة داخل الخلايا. تجدر الإشارة إلى أنه تم شراء الكثير من الأجسام المضادة DAR المستخدمة في هذه التجارب في 4-5 ؛ تظهر الكثير الحالية من هذه الأجسام المضادة (2005-06) أنماطًا مختلفة من النطاقات لا يتم تغييرها في الأنسجة من الفئران بالضربة القاضية DAR (الملاحظات غير المنشورة). بعد حضانة الأجسام المضادة الأولية ، تم غسل الأغشية بمحلول TBS-T ، تم تحضينها لمدة 2009 min مع IgG المصاحب للأرنب IgG أو مكافحة IgG المضادة للفأر (10: 60 ؛ Upstate Biotechnology ، Lake Placid ، NY) ، تم غسلها باستخدام TBS- تي ، تشطف مع DDH₂O ، ومنغمسين في الكشف عن التألق الكيميائي الركيزة (Amersham GE، Piscataway، NJ). بعد تطوير اللقطات ، تم التقاط الصور باستخدام برنامج Versa Doc Imaging Software (Bio-Rad). تم تحديد الكثافة المنتشرة للعصابات السطحية والخلوية باستخدام برنامج Quantity One (Bio-Rad). تم تطبيع قيم البروتين السطحي ، داخل الخلايا والكلى (السطح + داخل الخلايا) إلى البروتين الكلي في الخط المحدد باستخدام Ponceau S (Sigma-Aldrich) وتحليلها باستخدام TotalLab (ديناميات غير خطية ، نيوكاسل ، المملكة المتحدة). لم تتطلب نسبة السطح / داخل الخلوي التطبيع ، لأن كلا القيمتين يتم تحديدهما في نفس المسار. لفحص خصوصية الجسم المضاد ، أجريت دراسات امتصاص الامتصاص للأجسام المضادة DAR مع الببتيد المستخدم لتوليد كل جسم مضاد. تم الجمع بين الجسم المضاد D1 أو D2 أو D3 DAR مع تركيز زائد من 10 أضعاف من الببتيد في 500μl من TBS ، مختلطة مع 4 ساعة في 4 ° C ، مخفف إلى الحجم النهائي من 20ml ، تم إضافته إلى الغشاء ، 4 ° C.

D1 DARs

لا توجد فروق ذات دلالة إحصائية بين مجموعات الكوكايين والمالحة على WD45. ومع ذلك ، كانت آثار الإدارة الذاتية للكوكايين واضحة على WD1. أشار تحليل NAc بأكمله إلى وجود نسبة سطحية / داخل D1 DAR أعلى بكثير في مجموعة WD1-Coc مقارنة مع المجموعات التي تحتوي على محلول ملحي ذاتي الإدارة (الشكل. 2a). يعزى ذلك إلى زيادة متواضعة في D1 DARs السطحية جنبًا إلى جنب مع انخفاض متواضع في D1 DARs داخل الخلايا (لم يكن أي من هذين التأثيرين ذا دلالة إحصائية) ، في غياب أي تغيير في إجمالي مستويات D1 DAR (السطح + داخل الخلايا) (الشكل. 2a). داخل جوهر NAc ، لم يتم العثور على تأثير كبير لأي مقياس D1 DAR (الشكل. 2b). ومع ذلك ، عرضت قذيفة NAc التغييرات التي كانت مماثلة لتلك التي لوحظت في NAc بأكمله ولكن أكثر قوة قليلا (الشكل. 2c). تمت زيادة نسبة D1 DAR للسطح / داخل الخلايا في مجموعة WD1-Coc بسبب الزيادة الكبيرة في تعبير D1 DAR السطحي. لم تتغير مستويات الخلايا ، ولكن كان هناك اتجاه نحو زيادة إجمالي مستويات D1 DAR. باختصار ، تم التعبير عن جزء أكبر من بروتين D1 DAR على سطح في غلاف NAc من فئران WD1-Coc مقارنة مع فئران WD1-Sal. عاد توزيع D1 DAR إلى حالة التحكم بعد أيام 45 من الانسحاب من الإدارة الذاتية للكوكايين.

التين 2

تمت زيادة التعبير السطحي D1 DAR في غلاف NAc بعد يوم 1 من الانسحاب من الإدارة الذاتية للكوكايين

D2 DARs

في NAc بأكمله ، كان التأثير الرئيسي الذي لوحظ هو انخفاض تعبير D2 DAR في الفئران التي بها الكوكايين الذي يتم إدارته ذاتيًا مقارنة بعناصر التحكم المالحة (الشكل. 3a). كان هذا أكثر وضوحًا على WD45 ، عندما لوحظ انخفاض في النطاق السطحي ، جميع النطاقات الثلاثة داخل الخلايا (~ 55 ، 75 و 100kDa) ، وفي مستويات D2 DAR الإجمالية مقارنة بعناصر التحكم المالحة. تم زيادة نسبة D2 DAR السطحية / داخل الخلايا بشكل طفيف ولكن بشكل ملحوظ في مجموعة WD45-Coc ، نظرًا لانخفاض أكبر في داخل الخلايا عن D2 DARs السطحية ، مما يشير إلى أن الخلايا تعوض عن انخفاض تعبير D2 DAR عن طريق توزيع جزء أكبر من المتاح D2 DARs إلى السطح. من المهم أن تضع في اعتبارك أن نسبة السطح / الخلوية المرتفعة لا تشير إلى زيادة انتقال D2 DAR في هذه الحالة بالذات ، لأن المستوى المطلق ل D2 DAR معبرًا عن السطح قد انخفض. في مجموعة WD1-Coc ، كان التأثير الهام الوحيد هو انخفاض المستويات داخل الخلوي لمونومر D2 DAR (~ 55kDa) ، مقارنة بكل من مجموعات WD45-Sal و WD1-Sal ، على الرغم من أن العديد من التدابير الأخرى تميل أيضًا إلى الانخفاض (الشكل. 3a).

التين 3

انخفضت مستويات D2 DAR داخل الخلايا والسطح في NAc بعد أيام 45 من الانسحاب من الإدارة الذاتية للكوكايين

كان الانخفاض الكلي في تعبير D2 DAR واضحًا أيضًا في المناطق دون الإقليمية الأساسية والممتازة لـ NAc (الشكل. 3b و 3c، على التوالي) ، على الرغم من أن الآثار تميل إلى أن تكون أكثر وضوحًا في الصدفة. وبالتالي ، انخفضت مستويات D2 DAR السطحية في فئران الكوكايين فقط على WD45 في الأساس ، ولكن على WD1 و WD45 في الصدفة. انخفض مجموع D2 DARs بشكل ملحوظ فقط في قذيفة. حدث انخفاض في نطاقي D2 DAR داخل الخلايا في كل من أيام السحب في كلٍ من الصميم والقذيفة ، على الرغم من وجود اختلافات خاصة بالسحب والمنطقة من حيث أظهر النطاق داخل الخلايا تأثيرًا ذي دلالة إحصائية. باختصار ، انخفضت مستويات سطح البروتين D2 DAR والبروتين داخل الخلوي في NAc بعد الإدارة الذاتية للكوكايين. كانت بعض الانخفاضات واضحة بالفعل بواسطة WD1.

يزيد التعبير السطحي D1 DAR بشكل عابر في غلاف NAc بعد التوقف عن الإدارة الذاتية للكوكايين

بعد الإدارة الذاتية للكوكايين ، تمت زيادة تعبير سطح D1 DAR في غلاف NAc على WD1 لكن تم تطبيعه بواسطة WD45 ، في حين لم تلاحظ أي تغييرات في القلب ، مما يشير إلى زيادة عابرة محصورة في الصدفة. وقد تم الحصول على نتائج مماثلة في الدراسات السابقة باستخدام تصوير مستقبلات الأشعة. بن شاهر وآخرون. (2007) وجدت زيادة في كثافة D1 DAR في غلاف NAc من الفئران 20 min (ولكن ليس أيام 14 أو 60) بعد التوقف عن الوصول الموسّع (6 ساعة / يوم) للإدارة الذاتية للكوكايين ، في حين لم تلاحظ أي تغييرات في جوهر الكوكايين أو بعد وصوله القصير - الإدارة (2 ساعة / يوم). نادر وآخرون. (2002) لاحظت زيادة طفيفة في كثافة D1 DAR في القشرة ولكن ليس في قرود الريس التي قُتلت بعد آخر جلسات إدارة ذاتية للكوكايين في 100. القردة التي تم تقييمها بعد أيام من توقف 30 عن النظام نفسه أظهرت زيادة في كثافة D1 DAR في NAc المنحدر وفي كل من النواة والقشرة بمستويات الذيلية أكثر ، لكن كثافة D1 DAR قد تطورت بحلول أيام 90 (Beveridge et al.، 2009). كل هذه النتائج ، مثلنا ، تشير إلى زيادة عابرة في مستويات D1 DAR ، وخاصة في الصدفة ، بعد التوقف عن الإدارة الذاتية للكوكايين. ومع ذلك ، أشارت دراسة سابقة أجرتها هذه المجموعة إلى انخفاض في كثافة D1 DAR في NAc (الأكثر قوة في القشرة) من قرود الريس التي لديها كوكايين ذاتي الإدارة لفترة أطول من الوقت (أشهر 18 ؛ مور وآخرون ، 1998a). تم العثور على ارتباط D1 DAR المتناقص في NAc أيضًا 18 hr بعد التوقف عن نظام وصول ممتد عند الفئران ، على الرغم من أن إجمالي تناول الكوكايين في هذه الدراسة كان أعلى منه في دراسات الفئران التي تمت مناقشتها أعلاه (De Montis et al.، 1998). تشير هذه النتائج إلى أن تكيفات D1 DAR تعتمد على العديد من جوانب التعرض للكوكايين. وهناك اعتبار آخر يتمثل في أن التصوير الإشعاعي للمستقبل يقيس مجموع المستقبلات الخلوية ، في حين أن تجارب تشابك البروتين يمكن أن تميز بين مستقبلات السطح والمستقبلات داخل الخلايا. ومن المثير للاهتمام ، وجدت دراسة منعت من نقص المناعة اتجاه نحو زيادة مستويات D1 DAR في NAc لمستخدمي الكوكايين البشري (Worsley et al.، 2000).

هل الزيادة العابرة في تعبير سطح D1 DAR التي لاحظناها في غلاف NAc مهمة بالنسبة لحضن الكوكايين الناشئ عن جديلة؟ يصعب تقييم ذلك ، لأنه لم تختبر أي دراسات تأثير الحقن داخل NAc لعوامل ناهض D1 DAR أو الخصوم على الكوكايين الناشئ عن جديلة الساعين بعد انسحاب القفص المنزلق (أو إعادة التثبيط الناجم عن الكوكايين الذي يسعى بعد التدريب على الانقراض). ومع ذلك ، فإن مستقبلات D1 في NAc الإنسي (القشرة والوسط الإنسي) متورطة في إعادة الكوكايين التي تستعد للكوكايين والتي تسعى إلى الانقراض بعد انقراضها ، على ما يبدو من خلال آلية تتطلب التنشيط التعاوني لـ D1 و D2 DARs (Anderson et al.، 2003; 2008; Bachtell et al.، 2005; Schmidt and Pierce، 2006; شميت وآخرون ، 2006). جنبا إلى جنب مع النتائج التي توصلنا إليها ، يمكن أن يشير هذا إلى أن الخلايا العصبية في قشرة NAc أكثر استجابة للكوكايين الذي يتوسط D1 DAR والذي يسعى في انسحاب مبكر بسبب عملية نقل D1R عابرة. ومع ذلك يجب توخي الحذر في الاستقراء من إعادة التأهيل إلى دراسات الحضانة ، لأن التدريب على الانقراض والانسحاب من القفص المنزلي يرتبطان بتباين عصبي مختلف في NAc (Sutton et al.، 2003; قاسم زاده وآخرون ، 2009; الذئب و Ferrario ، 2010). من المهم أن نلاحظ أن D1 DARs في اللوزة الجانبية السفلية والقشرة الأمامية الجبهية مهمة أيضًا لإعادة تثبيت الكوكايين الناجم عن الإشارات (على سبيل المثال ، Ciccocioppo et al.، 2001; Alleweireldt et al.، 2006; Berglind وآخرون ، 2006).

على المستوى الخلوي ، يمكن لكل من DAR قبل المشبك وبعد المشبكي أن تعدل من استثارة الخلايا العصبية المتوسطة الشوكي ، ونوع الخلية السائدة وخلايا الخلايا العصبية الناتجة من NAc (نيكولا وآخرون ، 2000; أودونيل ، 2003). من المعروف أن تعاطي الكوكايين المتكرر غير المرتبط بتعزيز بعض آثار تنشيط D1 DAR في NAc. وهكذا ، بعد يوم إلى شهر واحد من التوقف عن علاج الكوكايين ، لوحظت قدرة مُعزِّئات D1 DAR المعززة على تثبيط نشاط الخلايا العصبية المتوسطة الشوكي (مدفوعة بالجلوتامات الشاردة) في جميع أنحاء NAc (هنري وأبيض ، 1991; 1995). ومع ذلك ، فإن تعبير سطح D1 DAR المتزايد الذي تم الإبلاغ عنه هنا من غير المرجح أن يفسر هذه النتائج السابقة ، لأنه مقيد بالصدفة ولم يظهر إلا على WD1. بعد يوم واحد من تحدٍ للكوكايين ، تم إعطاء 10-14 يومًا بعد التوقف عن الحقن المتكررة للكوكايين ، بورييه ومالكا (2002) لاحظ تعزيز تثبيط DA بوساطة الاستجابات متشابك مثير في الخلايا العصبية الشوكي NAc المتوسطة التي تم بوساطة من قبل DARs D1 تشبه قبل المشبكي على المحطات العصبية الغلوتامات. ومع ذلك ، الآثار المحتملة للحقن التحدي (على سبيل المثال ، انظر Boudreau وآخرون ، 2007 و Kourrich et al.، 2007) ، بالإضافة إلى اختلافات الأنواع وعدم وجود تسجيلات في جوهرها ، تجعل من الصعب مقارنة النتائج التي توصلوا إليها مع نتائجنا. تجدر الإشارة أيضا إلى أن منبهات DAR والخصوم المستخدمة من قبل هنري والأبيض (1991; 1995) و بورييه ومالينكا (2002) لم يميز بين D1 و D5 DARs.

تنخفض مستويات D2 DAR في NAc بعد التوقف عن الإدارة الذاتية للكوكايين

وكان التأثير الرئيسي الذي لوحظ في دراستنا انخفاض في بروتين D2 DAR في كل من جوهر NAc وقذيفة بعد التوقف عن الإدارة الذاتية للكوكايين ، نسبة إلى الضوابط المالحة. كان هذا أكثر وضوحًا في الغلاف ، حيث تم تقليل النطاقات الداخلية والسطحية والإجمالية على كل من WD1 و WD45. بشكل أساسي ، انخفض التعبير السطحي D2 DAR فقط على WD45 ولم تنخفض مستويات D2 DAR الإجمالية بشكل ملحوظ. وقد وجدت العديد من الدراسات الأخرى بالمثل انخفاض التعبير D2 DAR بعد التوقف عن الإدارة الذاتية للكوكايين. في قرود الريس مع خبرة واسعة في الإدارة الذاتية للكوكايين ، انخفضت كثافة D2 DAR ، المقاسة باستخدام تصوير مستقبلات الأشعة الذاتية ، في العديد من المناطق القاتلة بما في ذلك اللب NAc والقشرة عندما تم الحصول على الأنسجة بعد الجلسة الأخيرة مباشرة (مور وآخرون ، 1998b; نادر وآخرون ، 2002). باستخدام PET ، تم اكتشاف هذا التأثير في العقد القاعدية خلال أسبوع 1 من بدء الإدارة الذاتية للكوكايين (نادر وآخرون ، 2006). قد يعتمد معدل استرداد مستويات D2 DAR أثناء الانسحاب على إجمالي كمية الكوكايين. في دراسة التصوير التلقائي ، تعافت مستويات D2 DAR في NAc للتحكم في القيم بعد أيام 30 أو 90 من الانسحاب من جلسات 100 للإدارة الذاتية للكوكايين (Beveridge et al.، 2009). ومع ذلك ، في دراسة PET للقرود ذات التعرض الطويل (1 year) وبالتالي ارتفاع المدخول الكلي للكوكايين ، أظهرت قرود 3 من 5 استرداد مستويات D2 DAR بعد أيام 90 بينما لم تظهر قرود 2 أي انتعاش حتى بعد شهور 12نادر وآخرون ، 2006). بشكل عام ، تتوافق هذه النتائج جيدًا مع النتائج التي توصلنا إليها حول مستويات D2 DAR المتدنية طوال عملية السحب.

وجدت دراسات PET لمدمني الكوكايين البشريين أيضًا انخفاض مستويات D2 DAR في العديد من المناطق المهاجمة ، بما في ذلك المخطط البطني ، والتي كانت واضحة في الانسحاب المبكر وكذلك بعد 3-4 أشهر من إزالة السموم (Volkow وآخرون ، 1990, 1993, 1997). ومع ذلك ، فإن أهمية السلوك غير واضحة ، حيث أن توافر D2 DAR لا يرتبط بالتأثيرات الذاتية الإيجابية للكوكايين أو بقرار تناول المزيد من الكوكايين بعد جرعة فتيلة (Martinez et al.، 2004). من المهم أن نلاحظ أنه في حين أن شغف الكوكايين الناشئ عن جديلة يظهر زيادة معتمدة على الوقت أثناء الانسحاب ("الحضانة") ، فإن هذا لا يحدث بالنسبة للكوكايين المستهلكة (لو وآخرون ، 2004a). لذلك ، نتائج مارتينيز وآخرون. (2004) اترك الباب مفتوحًا لاحتمال ارتباط D2 DAR بتوافر الكوكايين الناشئ عن الإشارات ، وهو محور نموذج الحضانة الذي تمت دراسته هنا. انخفاض توافر D2 DAR لدى مستخدمي الكوكايين البشري يرتبط بانخفاض الأيض القشري الأمامي (Volkow وآخرون ، 1993). إلى جانب التغييرات الأخرى ، قد يسهم ذلك في فقدان السيطرة التي تحدث عندما يتعرض المدمنون للعقاقير أو للإشارات المرتبطة بالمخدرات ، وإلى ظهور أكبر للعقاقير مقارنة بالمكافآت غير الدوائية (Volkow وآخرون ، 2007; Volkow وآخرون ، 2009). تجدر الإشارة إلى أن انخفاض مستويات D2 DAR في دراسة PET يمكن أن يشير إلى ارتفاع إصدار DA بدلاً من انخفاض مستويات D2 DAR ، لكن النتائج الحديثة تعارض هذا التفسير في حالة المرضى الذين يعتمدون على الكوكايين (Martinez et al.، 2009). علاوة على ذلك ، وجدت دراسة ما بعد الوفاة لمستخدمي الكوكايين البشريين وجود اتجاه نحو انخفاض مستويات D2 DAR في NAc باستخدام التطعيم المناعي (Worsley et al.، 2000).

لا يمكن للدراسات التي أجريت على مدمني الكوكايين البشريين تحديد ما إذا كان توفر D2 DAR المتناقص سمة من سمات الاستعداد أو نتيجة لتعرض الكوكايين ، لكن النتائج الأخرى تشير إلى أن كلاهما صحيح. من ناحية ، وجدت التجارب التي أجريت على البشر الذين لا يسيئون استعمال المخدرات وجود علاقة عكسية بين توفر D2 DAR وتقارير عن "الإعجاب بالمخدرات" عند تناول الميثيلفينيديت (Volkow وآخرون ، 1999; 2002). هذه النتائج تشير إلى أن انخفاض توافر D2 DAR قد يزيد من التعرض للإدمان. استنتاج مماثل مدعوم من خلال دراسات أجريت على قرود الريس. في القردة ذات المكانة الاجتماعية ، يزيد تحقيق الهيمنة الاجتماعية من توفر D2 DAR في المخطط ويرتبط ذلك بانخفاض حساسية التأثيرات المعززة للكوكايين مقارنة بالقردة الثانوية (مورغان وآخرون، 2002). يرتبط الوضع الاجتماعي أيضًا بتوفر D2 DAR الفتاك في المتطوعين الخاليين من المخدرات (Martinez et al.، 2010). من ناحية أخرى ، تظهر كل من دراسات PET و autoradiography أن الإدارة الذاتية للكوكايين على المدى الطويل تقلل من توفر مستقبلات D2 DAR الفتاكة في القرود الموجودة بشكل فردي ، كما تمت مناقشته أعلاه (مور وآخرون ، 1998b; نادر وآخرون ، 2002; نادر وآخرون ، 2006). يبدو أن الإدارة الذاتية للكوكايين المزمن تقلل أيضًا من توفر D2 DAR لدى القرود المهيمنة اجتماعيًا (Czoty وآخرون ، 2004). وهكذا ، بعد الإدارة الذاتية للكوكايين على المدى الطويل ، لم تعد هناك فروق ذات دلالة إحصائية في توافر مستقبلات D2 أو آثار التعزيز للكوكايين بين القردة السائدة والتابعية (Czoty وآخرون ، 2004). ومع ذلك ، عادت مستويات D2 DAR المرتفعة في القرود المهيمنة أثناء الامتناع عن ممارسة الجنس ، وكان هذا مرتبطًا بوقت استجابة أطول في رد الفعل على الجدة ، وهي سمة تنبئ بانخفاض الحساسية لتأثيرات تعزيز الكوكايين (Czoty وآخرون ، 2010).

كما هو الحال في البشر والقردة ، تشير دراسات الفئران إلى أن انخفاض توافر D2 DAR هو عامل خطر لضعف الكوكايين. وهكذا ، أظهرت دراسات PET في الفئران ذات الاندفاع العالي (سمة مرتبطة بزيادة الإدارة الذاتية للكوكايين) انخفاض توفر D2 / D3 DAR في المخطط البطني (داللي وآخرون ، 2007). يتم تقليل مستويات D2 DAR في NAc أيضًا في الفئران التي تظهر استجابة حركية عالية للحداثة ، وهي سمة أخرى مرتبطة بضعف الإدمان (Hooks et al.، 1994). تشير نتائجنا في الفئران إلى أن انخفاض مستويات D2 DAR في NAc يمكن أن يكون أيضًا نتيجة لتعرض الكوكايين المتكرر ، بما يتوافق مع الدراسات التي أجريت على القرود والبشر (أعلاه). ومع ذلك ، وجدت دراستان تصوير المستقبل مستقبلات في الفئران نتائج تختلف عن تلك التي لدينا. بن شاهر وآخرون. (2007) لم تلاحظ انخفاض مستويات D2 DAR في NAc بعد الانسحاب (أيام 20 ، أيام 14 من أيام 60) من نظام الإدارة الذاتية للكوكايين الممتد الوصول مشابه لنظامنا (6 ساعة / يوم) ، على الرغم من أنه لوحظ انخفاض في قذيفة NAc بعد نظام وصول محدود (2 ساعة / يوم) و 14 يوم سحب (بن شاهار وآخرون ، 2007). ستيفانسكي وآخرون. (2007) لم يتم العثور على أي تغييرات في مستويات D2 DAR في جوهر أو قذيفة 24 h بعد التوقف عن الوصول المحدود إلى الإدارة الذاتية للكوكايين (2 ساعة / يوم) ، على الرغم من انخفاض مستويات D2 DAR في عناصر التحكم في الكوكايين المقرن. كما ذُكر أعلاه ، تقيس تصوير الإشعاع الذاتي للمستقبل مجموع المستقبلات الخلوية ، بينما تقيس دراسات التشابك PET والبروتين مستقبلات سطح الخلية.

بشكل عام ، تدعم الدراسات حول العلاقة بين مستويات D2 DAR والإدارة الذاتية للكوكايين نموذجًا تقيد فيه D2 DARs عادة الإدارة الذاتية للكوكايين. لذلك ، فإننا نقترح أن انخفاض مستويات D2 DAR لوحظ في تجاربنا قد تسهم في الكوكايين الناجم عن جديلة تسعى بعد انسحاب الكوكايين. على وجه الخصوص ، حقيقة أن تعبير D2 DAR السطحي في جوهر NAc قد انخفض على WD45 ولكن ليس WD1 ، بالإضافة إلى دور رئيسي لـ NAc في السعي وراء الكوكايين الناجم عن جديلة ، يوحي بأن Dregnum DAR المعتمد على الوقت في تنظيم NAc قد المساهمة في التكثيف المعتمد على الوقت للبحث عن الكوكايين الناجم عن جديلة. هذا من شأنه أن يتنبأ بأن ضخ NAc داخل ناهض D2 أثناء الانسحاب من شأنه أن يقلل من السعي وراء الكوكايين الناشئ عن جديلة. لسوء الحظ ، لم تقم أي من الدراسات بفحص آثار العقاقير الداخلية D2 DAR داخل نموذج الحضانة. من ناحية أخرى ، تشير الدراسات المتعلقة بإعادة تركيب الكوكايين إلى أن D2 و D1 DARs في الغلاف والقلب الإنسي يعملان بشكل تعاوني لتعزيز البحث عن الكوكايين (Anderson et al.، 2003; Bachtell et al.، 2005; Schmidt and Pierce، 2006; شميت وآخرون ، 2006). استنادًا إلى هذه النتائج ، قد يُتوقع أن يقلل تعبير D2 DAR الذي تمت ملاحظته في تجاربنا من تقليل السعي إلى الحصول على الكوكايين ، أي ينتج عنه تأثير عكس التكثيف المعتمد على الانسحاب والذي يتم ملاحظته فعليًا. قد يعكس هذا التباين المشكلات التي تحدث عن طريق التعميم من عملية إعادة التوطين بالكوكايين بعد التدريب على الانقراض إلى الكوكايين الناشئ عن السعى بعد الانسحاب.

تحدث زيادة معتمدة على الزمن في تعبير سطح D3 DAR في قلب NAc بعد التوقف عن الإدارة الذاتية للكوكايين

تشير الدراسات الخاصة بالعقاقير المفضلة D3 DAR في نماذج الإدارة الذاتية واستعادة الكوكايين إلى أن مضادات D3 DAR قد تكون مفيدة في علاج إدمان الكوكايين ، وعلى وجه الخصوص ، في تقليل التفاعل مع الإشارات المرتبطة بالكوكايين (Heidbreder et al.، 2005. 2008. Le Foll et al.، 2005; شي و غاردنر ، 2007). هذه النتائج تعني أن تفعيل D3 DAR بواسطة DA الذاتية قد يكون متورطا في التوسط في السعي وراء الكوكايين الذي يسببه جديلة. تظهر نتائجنا أن تعبير D3 DAR السطحي في جوهر NAc لم يتغير على WD1 من الإدارة الذاتية للوصول الموسعة للكوكايين ولكنه زاد على WD45 بالترافق مع حضانة شغف الكوكايين. لم يزداد التعبير السطحي D3 DAR بشكل ملحوظ في القشرة ، على الرغم من وجود زيادة صغيرة ولكنها مهمة في نسبة السطح / داخل الخلايا. بالنظر إلى دور انتقال D3 DAR في الاستجابة إلى الإشارات المرتبطة بالكوكايين وأهمية النواة في السعي إلى الحصول على الكوكايين الناجم عن الإشارات ، فمن المغري التكهن بأن زيادة تعبير سطح D3 DAR في جوهر NAc ساهم في حضانة الكوكايين الناجم عن جديلة شغف الذي لوحظ على WD45. ومع ذلك ، لم يتم إنشاء الموقع العصبي الذي تعمل فيه مضادات D3 DAR للحد من البحث عن الكوكايين. على وجه التحديد ، لم تقم أي من الدراسات بفحص تأثير الحقن داخل NAc لـ D3 DAR مفضلاً المخدرات على سعي الكوكايين الناشئ عن جديلة. في نموذج مختلف ، شميدت وآخرون. (2006) وجدت أن حقن ناهض D3- تفضيل PD 128,907 في جوهر أو قذيفة لم ينتج إعادة الكوكايين تسعى بعد التدريب الانقراض.

تتوافق نتائجنا بشكل عام مع دراسات التصوير الإشعاعي للمستقبلات التي تقيس مستويات D3 DAR الكلية في NAc بعد التعرض للكوكايين. ستيلي وماش (1996) ذكرت أن D3 DAR ملزمة كان أعلى في NAc من ضحايا جرعة زائدة من الكوكايين مقارنة مع الضوابط العمر المتطابقة. بعد التعرض للكوكايين في نموذج لتفضيل المكان المكيف وثلاثة أيام من الانسحاب ، عرضت الفئران زيادة D3 DAR ملزمة في جوهر NAc وقذيفة (Le Foll et al.، 2002). Neisewander et al. (2004) تم قياس D3 DAR في الفئران التي تتمتع بخبرة واسعة في مجال الإدارة الذاتية للكوكايين والتي تم اختبارها من أجل إعادة التهيؤ للكوكايين بعد فترات انسحاب مختلفة ثم قتل 24 في وقت لاحق. لم يتغير ارتباط D3 DAR في NAc على WD1 ولكنه زاد بعد فترة زمنية أطول (WD31-32) ، بما يتمشى مع ملاحظتنا للزيادة المعتمدة على الوقت. علاوة على ذلك ، فإن العلاج بالعقاقير أثناء الانسحاب الذي قلل من السعي للحصول على الكوكايين قد أضعف أيضًا الزيادة في ارتباط D3 DAR ، مما يشير إلى أن ربط D3 DAR مرتبط وظيفيًا بالبحث عن الكوكايين. تجدر الإشارة إلى أن D3 DAR يزيد في Neisewander et al. (2004) كانت كبيرة في جوهرها بينما لوحظت فقط اتجاهات في قذيفة ، ولكن تم تحليل المناطق دون الإقليمية في جزء منقح من NAc حيث الأساسية وقذيفة أقل تميزا. تم إجراء تحليلنا على جوهر وقذيفة من أجزاء منقاري والذيلية من NAc.

تم دعم هذا العمل من قِبل DA009621 و DA00453 وجائزة NARSAD المحقق المتميز إلى MEW و DA020654 إلى MM وجائزة خدمة البحوث الوطنية D021488 السابقة إلى KLC