يتم تطبيع تعديلات دلتافوسب بوساطة إشارات الدوبامين عن طريق نظام غذائي عالي الدهون قابل للطبخ (2008)

دراسة كاملة

بيول الطب النفسي. 2008 Dec 1؛ 64 (11): 941-50. Epub 2008 Jul 26.

Teegarden SL، Nestler EJ، Bale TL.

مصدر

قسم علم الأحياء الحيواني ، جامعة بنسلفانيا ، فيلادلفيا ، بنسلفانيا 19104-6046 ، الولايات المتحدة الأمريكية.

ملخص

خلفية:

وقد تم الإشارة إلى الحساسية للمكافأة كعامل مؤهب للسلوكيات المرتبطة بتعاطي المخدرات وكذلك الإفراط في تناول الطعام. ومع ذلك ، فإن الآليات الأساسية التي تسهم في حساسية المكافأة غير معروفة. لقد افترضنا أن أي خلل في إشارات الدوبامين قد يكون سببًا أساسيًا لزيادة حساسية المكافأة حيث يمكن للمثيرات المجزية أن تعمل على تطبيع النظام.

أساليب:

استخدمنا نموذج الفأرة الجينية لزيادة حساسية المكافأة ، الفأرة Delta FosB-overexpressing ، لفحص تغيرات مسار المكافأة استجابة لنظام غذائي عالي الدهون مستساغ. تم فحص علامات إشارات المكافأة في هذه الفئران على حد سواء في الأساس وبعد أسابيع 6 من التعرض للحمية مستساغ. تم فحص الفئران في اختبار سلوكي بعد انسحاب غذائي عالي الدهون لتقييم ضعف هذا النموذج لإزالة محفزات مجزية.

النتائج:

تظهر نتائجنا تغيير مسار مسار المكافأة على طول منطقة الدائرة المتكافلة - التحت المميتة - البطنية النواة الناتجة عن الإفراط في التعبير عن دلتا FosB في النواة المتكئة والمناطق المخطط. مستويات الفوسفورلود الحلقي الفسفوري (cAMP) استجابة عنصر بروتين الارتباط (pCREB)، عامل التغذية العصبية المشتق من الدماغ (BDNF)، تم تخفيض الفوبامين والدوبامين والدهون الفوسفاتين أحادي الفوسفات المنظم مع كتلة جزيئية من 32 kDa (DARPP-32) في النواة المتكئة في فئران دلتا FosB ، مما يوحي بتخفيض إشارات الدوبامين. ستة أسابيع من التعرض لاتباع نظام غذائي غني بالدهون خففت تماما هذه الاختلافات ، وكشف عن قدرة قوية مجزية لنظام غذائي مستساغ. كما أظهرت الفئران دلتا FosB زيادة كبيرة في النشاط الحركي والاستجابات المرتبطة القلق 24 بعد الانسحاب عالية من الدهون.

الاستنتاجات:

تثبت هذه النتائج حساسية كامنة للتغيرات في المكافأة المرتبطة بإعطاء خلل في دلتا FosB وإشارات الدوبامين التي يمكن تطبيعها مع الحمية المستساغة ويمكن أن تكون نوعًا مؤهلاً مهيئًا في بعض أشكال السمنة.

المُقدّمة

على الرغم من معرفتنا المتزايدة للأنظمة العصبية التي تتحكم في الشهية والشبع ، فإن معدلات السمنة تستمر في الارتفاع في الولايات المتحدة. العلاجات الدوائية الحالية لها فعالية محدودة ، والتعديلات السلوكية تعاني من الحد الأدنى من الامتثال على المدى الطويل (1). وقد تم ربط استهلاك الأطعمة ذات الكثافة السعوية العالية ، بالتغييرات في الإجهاد وممرات المكافأة في الدماغ ، مما يوحي بأن الخواص المجزية لمثل هذه الأطعمة قد تتجاوز إشارات توازن الطاقة (2-4). الأطعمة عالية الدهون تعمل كمكافآت طبيعية ، وتنشيط مراكز مكافأة الدماغ بطريقة مماثلة لعقاقير الإساءة ، وعلى هذا النحو قد استخدمت في نماذج الإدارة الذاتية (5-8). وبالتالي ، فمن المرجح أن السلوكيات والدوافع للإفراط في تناول الطعام وتعاطي المخدرات يشتركان في آليات أساسية مشتركة ، مما قد يؤدي إلى فتح طرق جديدة لعلاج كلتا الحالتين.

عند دراسة العلاقة بين الأطعمة المستساغة ومسارات تنظيم المكافأة والإجهاد في الدماغ ، لقد حددنا سابقًا علامات جزيئية وكيميائية حيوية للمكافأة المخفضة وزيادة الإجهاد بعد الانسحاب من حمية غذائية عالية الدهون (HF). على غرار عقاقير الإساءة ، أدى التعرض لنظام غذائي مستساغ في دراساتنا إلى زيادة مستويات عامل النسخ ΔFosB في النواة المتكئة (NAc) ، وهي بنية مكافاة الدماغ المركزية (9 ، 10). تظهر الفئران التي تفرط في إفرازها بشكل مفرط increasedFosB زيادة فعّالة في الاستجابة لمكافأة الطعام (11) ، مما يجعلها أداة قيّمة لدراسة دور حساسية المكافأة و dysregulation طويلة الأمد لنظام المكافأة في الاستجابات الجزيئية والكيميائية الحيوية لنظام غذائي مستساغ.

في هذه الدراسة ، استخدمنا الفئران -FosB-overexpressing لفحص التغييرات على المدى الطويل في علامات المكافأة في NAc-hypothalamus-ventral tegmental area (VTA) neurocircuitry ردا على اتباع نظام غذائي HF مستساغ. استنادًا إلى دراسات سابقة في هذه الفئران الحساسة للمكافأة ، افترضنا أن التغييرات التي يسببها ΔFOSB في حساسية الثواب تنطوي على خلل في إشارات الدوبامين الناتجة عن ردود NAc إلى VTA. علاوة على ذلك ، افترضنا أن التعرض لمكافأة طبيعية من نظام غذائي عالي الكثافة HF سيعمل على تطبيع نظام الدوبامين في هذه الفئران ، مما يؤدي إلى استجابة مبالغ فيها لضغوط الانسحاب من هذا النظام الغذائي HF. الجانب الفريد من استخدام نظام غذائي مستساغ كمواد مجزية يسمح لنا لتشمل مدخلات ما تحت المهاد لمكافأة الدوائر في النمط الظاهري التي قد تكون تنبؤية من السكان الموهوبين للسمنة مقاومة للعلاج. لدراسة هذه الفرضية ، قمنا بدراسة علامات نقل عصبي الدوبامين ، بما في ذلك pCREB ، BDNF ، و DARPP-32 في NAc و hydroxylase التيروزين وناقل الدوبامين في VTA ، بعد التعرض لموجات الديكامبون. وفحصنا أيضًا علامات محددة لتوازن الطاقة معروف أنها تؤثر على إنتاج الدوبامين ، بما في ذلك مستقبلات الليبتين والأوركسين في VTA وتعبير الأويكسين داخل الهايبوتلاموس الجانبي.

مواد وطرق

أشكال حيوانات

ذكور الفئران ذات الذبذبات القاتلة التي تفوق بشكل مفرط على ΔFOSB في الخلايا العصبية إيجابية الدينوphinين في NAc والمخطط الظهري (Kelz et al.، 1999) تم توليدها على خلفية مختلطة (ICR: C57Bl6 / SJL) في مركز جامعة جنوب تكساس الطبي الجنوبي وصيانتها و اختبار في جامعة بنسلفانيا. تمت المحافظة على جميع الفئران على الدوكسيسيكلين (100 ميكروغرام / مل في مياه الشرب) حتى وصوله إلى جامعة بنسلفانيا. للحث على الإفراط في التعبير ، تمت إزالة الدوكسيسيكلين (n = 23) (12). استمر السيطرة على الفئران (ن = 26) لتلقي الدواء. تم تعيين الفئران لمجموعات النظام الغذائي بعد ثمانية أسابيع من إزالة دوكسيسيلين حيث تم إظهار التعبير الزمني للوصول إلى المستويات القصوى (13). تم الحفاظ على الفئران في دورة 12: 12 light-dark (الأضواء على 0700) مع الطعام والشراب المتاح بالمال. أجريت جميع الدراسات وفقًا للبروتوكولات التجريبية التي أقرتها لجنة رعاية واستخدام الحيوان المؤسسي بجامعة بنسلفانيا ، وتم تنفيذ جميع الإجراءات وفقًا للمبادئ التوجيهية المؤسسية.

تعرض النظام الغذائي

تم الحفاظ على الفئران في المنزل تشاو (ن = 16) أو وضعها على HF (ن = 16-17) لمدة ستة أسابيع. شملت House Chow (Purina Lab Diet، St. Louis، MO) 4.00 kcal / g ، والتي تتكون من 28٪ protein و 12٪ fat و 60٪ carbohydrate. يحتوي النظام الغذائي HF (حمية البحث ، نيو برونزويك ، نيو جيرسي) على 4.73 kcal / g ، يتألف من بروتين 20 ، 45٪ fat ، و 35٪ carbohydrate.

الكيمياء الحيوية والتعبير الجيني

تم تحليل الفئران بعد ستة أسابيع من التعرض الغذائي. تمت إزالة العقول من الجمجمة وإما المجمدة على الجليد الجاف أو تشريح NAc (تقريبا 0.5 - 1.75 مم من bregma ، على عمق 3.5 - 5.5 مم) والمجمدة في النيتروجين السائل. تم تخزين الأنسجة عند -80 درجة مئوية حتى يعاير.

التحاليل البيوكيميائية

يتم وصف طرق البقع الغربية في المواد التكميلية. كانت الأجسام المضادة المستخدمة: Cdk5 ، CREB ، و BDNF (1: 500 ، Santa Cruz Biotechnology ، Santa Cruz ، CA) و phospho-CREB (pCREB) (Ser 133) (1: 500 ، Cell Signaling Technology ، Danvers، MA).

مستقبل autoradiography

يتم وصف الطرق التفصيلية للتصوير الذاتي في المواد التكميلية. كانت Ligands المستخدمة هي 2 nM H3 - SCH 23390 و 5 nM H3 - spiperone (PerkinElmer، Boston، MA).

التهجين في الموقع

تم إجراء معالجة الأنسجة والتهجين كما هو موضح سابقًا (14). تم تقديم مسبار DARPP-32 من قبل P. Greengard (جامعة روكفلر) ، ومسبار orexin بواسطة J. Elmquist (مركز جامعة تكساس الطبي الجنوبي الغربي). عرضت الشرائح التي تم اختبارها لـ DARPP-32 للتصوير لأيام 3 ، وتم عرض الشرائح التي تم اختبارها لـ orexin للتصوير لأيام 4. تم إجراء القياس الكمي للصور الفيلم كما هو موضح سابقا (10).

QRT-PCR

تم عزل RNA من VTA والتعبير عن الجينات الفردية التي تم تقييمها باستخدام فحوصات التعبير الجيني TaqMan (Applied Biosystems، Foster City، CA). يمكن الاطلاع على طرق مفصلة والتحليلات الإحصائية في المواد التكميلية.

التحليلات السلوكية

من أجل دراسة آثار حساسية المكافأة على التغيرات السلوكية الناجمة عن النظام الغذائي ، تم سحب مجموعة فرعية من الفئران من HF بعد أربعة أسابيع من التعرض ، وعاد إلى منزل chow (ن = 9 السيطرة ، ن = 8 ΔFosB). بعد مرور 24 ساعة من الانسحاب ، تعرضت الفئران لاختبار المجال المفتوح وفقا لنموذج الانسحاب الغذائي الذي نشرناه سابقا (10). باختصار ، تم وضع الماوس في وسط جهاز المجال المفتوح ومراقبته لمدة خمس دقائق. تم قياس تقاطعات الخطوط الكلية ، وبولي بولي ، والوقت في المركز ، والصلبان إلى المركز.

إحصائيات

تم تحليل جميع البيانات باستثناء البقع الغربية باستخدام ANOVA ثنائي الاتجاه متبوعًا باختبار فيشر PLSD مع علاج الدوكسيسيكلين (تعبير ΔFosB) وحالة النظام الغذائي كمتغيرات مستقلة. لتحليلات RT-PCR ، تم استخدام قيمة P منخفضة لتصحيح مقارنات متعددة داخل مجموعات من الجينات ذات الصلة (انظر المواد التكميلية). تم تحليل البقع الغربية باستخدام اختبار t للطالب مع علاج الدوكسيسيكلين كمتغير مستقل ، ومقارنة الكثافات البصرية داخل نفس اللطخة. يتم تقديم جميع البيانات على أنها تعني ± SEM.

النتائج

الاختلافات البيوكيميائية القاعدية

لتوضيح المسارات الجزيئية التي تكمن وراء حساسية المكافأة المعززة في الفئران التي تعاني من فرط التعبير FosB ، تم فحص مستويات العديد من جزيئات الإشارة الرئيسية في NAc. كان هناك اتجاه لزيادة مستويات Cdk5 في NAc لفئران ΔFosB مقارنة مع حيوانات التحكم في القمامة المحفوظة على الدوكسيسيكلين (F = 5.1 ، P = 0.08 ؛ الشكل 1 أ). أعربت الفئران osFosB عن مستويات منخفضة بشكل ملحوظ من pCREB (F = 7.4 ، P <0.05 ؛ الشكل 1 ب) وكذلك المستويات الإجمالية لـ CREB (F = 5.4 ، P = 0.05 ؛ الشكل 1C). كما لوحظ انخفاض كبير في BDNF في NAc من الفئران ΔFosB (F = 10.6 ، P <0.05 ؛ الشكل 1D).

الشكل 1

عرضت الفئران overexpressing ΔFosB علامات البيوكيميائية من انخفاض الإشارات الدوبامين في NAC

تناول الطعام ووزن الجسم على نظام غذائي غني بالدهون

درسنا بعد ذلك آثار نظام غذائي HF مجزي بشكل طبيعي على التغييرات في جزيئات الإشارة في الفئران التي تعاني من فرط التعبير FosB. لم تكن هناك فروق بين الفئران ΔFosB والضوابط في تناول الطعام في أي من المنزل أو HF. ومع ذلك ، كان هناك انخفاض عام في مدخول السعرات الحرارية إلى وزن الجسم الطبيعي عند التعرض لـ HF الذي كان خاصًا بالفئران ΔFOSB (F = 11.2 ، P <0.01 ؛ الشكل 2A). في نهاية ستة أسابيع من التعرض للنظام الغذائي ، كانت الفئران التي تلقت HF تزن أكثر بكثير من تلك الموجودة في حمية الطعام (F = 17.2 ، P <0.001) ، ووزن الفئران FosB أقل بشكل عام من الضوابط (F = 5.6 ، P <0.05 ؛ الشكل. 2 ب). كان هذا التأثير محددًا للاختلافات بين المجموعات على حمية الطعام (P <0.05).

الشكل 2

أظهرت الفئران المضطربة من نوع (FOSB) عدم وجود اختلافات في كمية الطعام التي يتناولها أي من الوجبات الغذائية سواء كانت غذائية أو عالية الدهون (HF)

الاختلافات البيوكيميائية على النظام الغذائي عالي الدهون

لتحديد كيف يمكن تغيير الاختلافات الأساسية في إشارة NAc بواسطة النظام الغذائي HF ، تم فحص نفس البروتينات الإشارية التي درست في خط الأساس في الحيوانات التي تلقت ستة أسابيع من HF. لم تكن هناك اختلافات كبيرة في مستويات Cdk5 (الشكل. 3A). لم تعد مستويات PCREB ومجموع CREB مختلفة بعد ستة أسابيع من HF (الشكل 3B ، C). ارتفعت مستويات BDNF بشكل ملحوظ في الفئران ΔFosB بعد ستة أسابيع من التعرض HF (F = 6.5 ، P = 0.05 ؛ الشكل 3D).

الشكل 3

حذر من وجود فروقات في الإشارات الغذائية ذات دلالة عالية (HF) لوحظت في NAc للفئران المرتخبة over pressFOSB

مستقبل دوبامين

استخدمنا مستقبلات التصوير الإشعاعي الذاتي لتقييم ما إذا كانت التغييرات التي يسببها ΔFosB في إشارات الدوبامين في NAc مرتبطة بالتغيرات في تعبير مستقبل الدوبامين (الشكل 4 أ). يبدو أن النظام الغذائي عالي الدهون يزيد بشكل طفيف من كثافة ارتباط مستقبلات الدوبامين D1 (P = 0.14) ، وكان هذا الاختلاف أكبر في الفئران ΔFosB (الشكل 4 ب). كان هناك أيضًا اتجاه نحو زيادة منطقة ربط D1 بعد HF (P = 0.06) ، وأظهر الاختبار اللاحق أن هذا مهم في الفئران ΔFosB (P <0.05 ؛ الشكل 4C). على عكس مستقبلات D1 ، لا توجد تغييرات في كثافة ارتباط مستقبلات D2 (تحكم chow = 97.6 ± 6.9 ، تحكم HF = 101.1 ± 8.2 ، ΔFosB chow = 91.6 ± 1.0 ، ΔFosB HF = 94.8 ± 9.5) أو منطقة ربط (تشاو التحكم = 47.3 ± 3.4 ، التحكم HF = 53.8 ± 6.0 ، ΔFosB chow = 51.9 ± 3.7 ، ΔFosB HF = 49.0 ± 3.3) في NAc تمت ملاحظتها.

الشكل 4

النظام الغذائي عالي الدهون (HF) أدى إلى تغييرات في تجليد مستقبلات الدوبامين D1 وتعبير DARPP-32 في النواة المتكئة (NAc) للفئران الزائدة ΔFosB

تعبير DARPP-32 في NAc

تم استخدام التهجين في الموقع لتحديد مستويات التعبير عن DARPP-32 في NAc (الشكل 4 د). أدى النظام الغذائي عالي الدهون إلى زيادة تعبير DARPP-32 بشكل كبير في منطقة الدماغ هذه (F = 5.1 ، P <0.05) ، وكان هناك تفاعل كبير بين النظام الغذائي وتعبير ΔFosB (F = 8.9 ، P <0.05) ، مع إظهار الفئران ΔFosB أكبر التغيير الناجم عن النظام الغذائي (الشكل 4E). تم الكشف عن اختلاف أساسي في تعبير DARPP-32 بين التحكم وفئران ΔFosB عن طريق الاختبار المخصص (P <0.01) ، بالإضافة إلى زيادة كبيرة في تعبير DARPP-32 في الفئران ΔFosB على HF (P <0.01).

التعبير الجيني في VTA

تم استخدام QRT-PCR لتقييم التغييرات في التعبير الجيني في VTA ، واستهداف العديد من الجينات الرئيسية المتورطة سابقًا في تنظيم المكافأة. تم تطبيع جميع العينات إلى بيتا-أكتين. لضمان عدم تغيير تعبير بيتا-أكتين عن طريق العلاج ، تم إجراء اختبار منفصل لمقارنة بيتا-أكتين بعنصر تحكم داخلي ثان ، GAPDH. لم تكن هناك فروق ذات دلالة إحصائية في تعبير β-actin (قيم ΔCT ، β-actin - GAPDH: تحكم chow = 2.29 ± 0.21 ، تحكم HF = 2.01 ± 0.04 ، ΔFosB chow = 2.32 ± 0.49 ، ΔFosB HF = 2.37 ± 0.10).

لوحظ وجود اتجاه للتفاعل بين تعبير ΔFosB ومعالجة النظام الغذائي للتعبير عن هيدروكسيلاز التيروزين (F = 3.6 ، P <0.06 ؛ الشكل 5 أ). يبدو أن ستة أسابيع من التعرض لـ HF تقلل من تعبير التيروزين هيدروكسيلاز في الفئران الضابطة وتزيد من التعبير في الفئران ΔFosB. لوحظ تفاعل كبير بين تعبير ΔFosB والتعرض للنظام الغذائي للتعبير عن ناقل الدوبامين (F = 6.7 ، P <0.03 ؛ الشكل 5 ب). على غرار التيروزين هيدروكسيلاز ، أدى التعرض لـ HF إلى تقليل تعبير ناقل الدوبامين في الفئران الضابطة وزيادة التعبير بشكل ملحوظ في الفئران ΔFosB (P <0.05). لم يصل الاختلاف الأساسي في تعبير ناقل الدوبامين بين التحكم وفئران ΔFosB إلى أهمية (P = 0.16) ، ولكن بعد 6 أسابيع من HF ، عبرت الفئران ΔFosB عن مستويات مرتفعة بشكل ملحوظ من ناقل الدوبامين مقارنةً بالضوابط (P <0.05).

الشكل 5

أدى التعرض الغذائي عالي الدهون (HF) والتعبير ΔFosB إلى تغييرات في التعبير عن عدد من الجزيئات الرئيسية في VTA

كان هناك اتجاه يشير إلى تأثير زيادة تعبير ΔFosB لتقليل مستويات TrkB في VTA (F = 5.7 ، P <0.04 ؛ الشكل 5C). على الرغم من عدم وجود تأثيرات رئيسية على التعبير عن مستقبلات بيتا أفيونية المفعول ، كان هناك اتجاه نحو تقليل التعبير في الفئران ΔFosB (P = 0.08 ؛ الشكل 5 د). تم تحديد التعبير عن مستقبلات اللبتين أيضًا في VTA. تم العثور على تأثير كبير للتعرض للنظام الغذائي (F = 6.1 ، P <0.03) ، مع HF يقلل بشكل كبير من مستويات مستقبلات اللبتين في VTA في كل من ΔFosB وفئران التحكم (الشكل 5E). تم أيضًا فحص التعبير عن مستقبلات الأوركسين 1 في VTA. كان هناك تأثير كبير للنظام الغذائي على التعبير عن مستقبلات الأوركسين (F = 9.0 ، P <0.02) ، مع تعرض الفئران لـ HF معبرة عن مستويات أعلى في VTA (الشكل 5F). كان هناك أيضًا اتجاه لفئران ΔFosB للتعبير عن مستويات أعلى بشكل عام من مستقبلات الأوركسين 1 في منطقة الدماغ هذه (P <0.05).

التعبير Orexin في المهاد الجانبي

قمنا بقياس مستويات الأوركسين في منطقة ما تحت المهاد الوحشي ، أصل التعصيب أوركسينرجيك لل VTA ، عن طريق التهجين في الموقع (الشكل 6 أ). كان هناك تفاعل كبير بين تعبير ΔFosB والتعرض للنظام الغذائي على تعبير orexin (F = 9.1 ، P <0.01) ، مع زيادة HF بشكل كبير في مستويات orexin في الفئران الضابطة (P <0.05) وتناقص التعبير في الفئران ΔFosB (الشكل 6 ب). على الرغم من عدم وجود فروق ذات دلالة إحصائية في تعبير orexin في الحالة القاعدية ، بعد 6 أسابيع من HF ، أعربت الفئران ΔFosB عن مستويات منخفضة بشكل ملحوظ من orexin مقارنة بعناصر التحكم (P <0.05).

الشكل 6

النظام الغذائي عالي الدهون (HF) له تأثيرات مختلفة على تعبير الأوركسين في السيطرة (Ctrl) وفئران overFosB overexpressing

Beالتحليلات havioral

لتقييم التغيرات في الإثارة والعاطفية بسبب التغيير الغذائي ، تعرضت الفئران لاختبار المجال المفتوح بعد 24 ساعة من الانسحاب من النظام الغذائي عالي التردد (10). تأثرت تقاطعات الخطوط الإجمالية ، التي تم تسجيلها كمقياس للإثارة ، بشكل كبير بتعبير ΔFosB (F = 6.6 ، P <0.05) والنظام الغذائي (F = 4.6 ، P <0.05 ؛ الشكل 7 أ). كانت الفئران ΔFosB أكثر نشاطًا في البيئة الجديدة من الفئران ، وأظهر الاختبار اللاحق أن الفئران المسحوبة من HF كانت أكثر نشاطًا بشكل ملحوظ من تلك التي تعرضت للطعام (P <0.05). تم حساب بولي برازي كمقياس للسلوك الشبيه بالقلق (10). كان هناك تأثير رئيسي لتعبير ΔFosB (F = 10.2 ، P <0.01) ، مع فئران FosB مفرطة في التعبير تنتج المزيد من بولي برازي في البيئة الجديدة ، لا سيما في مجموعات الطعام المنزلي وسحب HF (الشكل 7 ب). الفئران FOSB التي تم الحفاظ عليها على نظام غذائي عالي التردد أنتجت عددًا أقل من بولي برازي من تلك التي تم الاحتفاظ بها في الطعام وتلك التي تم سحبها قبل 24 ساعة من الاختبار. لا يبدو أن الفئران الضابطة تتأثر بالنظام الغذائي. لم تكن هناك تأثيرات مهمة لتعبير ΔFosB أو النظام الغذائي في الوقت الذي يقضيه في وسط الحقل المفتوح (التحكم في الطعام = 14.5 ± 3.1 ثانية ، التحكم في HF = 18.0 ± 3.2 ثانية ، التحكم W / D = 15.4 ± 1.9 ثانية ، ΔFosB chow = 16.9 ± 2.4 ثانية ، ΔFosB HF = 13.1 ± 3.9 ثانية ، ΔFosB W / D = 19.8 ± 2.6 ثانية).

الشكل 7

كانت الفئران الإفراط في التعبير عن ΔFosB أكثر حساسية لتأثيرات اتباع نظام غذائي عالي الدهون (HF) الانسحاب

مناقشة

في علاج السمنة ، هناك حاجة ماسة لتحديد العوامل التي تؤثر على القابلية للإفراط في تناول الطعام وزيادة الوزن. تلعب مسارات مكافأة الدماغ دورًا مهمًا في تحفيز الأغذية والتغييرات الغذائية المستساغة والاستجابة لها (6 و 10 و 15 و 16). يمكن أن تؤثر إشارات الأوركسية والمفكّرات على تأثر الإشارات مباشرة عبر دائرة ما تحت المهاد- VTA-NAc ، فإن توضيح الجينات التي تستجيب للحمية المستساغة الغنية بالطاقة في مراكز المكافأة قد يوفر أهدافًا علاجية جديدة في علاج السمنة (17 ، 18). لذلك ، قمنا بفحص العلامات البيوكيميائية والجزيئية الخاصة بمؤشرات المكافئ والطاقة على امتداد دائرة ما تحت المهاد - VTA-NAc استجابة لنظام غذائي عالي الجودة في فئران ΔFosB-overexpressing كنموذج للحساسية المعززة للتغيرات في المكافأة (13 ، 19 ، 20) ، والحساسية السلوكية بعد انسحاب النظام الغذائي. افترضنا أن عدم انتظام إشارة الدوبامين في فئران FOSB يمكن تطبيعه من خلال التأثيرات المجزية لنظام غذائي عالي الكثافة ، والذي يشمل تقاطع إشارات توازن الطاقة ونظام الدوبامين.

لفحص العلامات التي تشير إلى وجود خلل في إشارات الدوبامين في NAc ، قمنا بفحص مستويات مستقبلات D1 ومُستقبلات المصب. على الرغم من عدم وجود فروق ذات دلالة إحصائية في ربط مستقبلات D1 ، كان هناك اتجاه لتعرض HF لزيادة منطقة الربط في الفئران ΔFosB. هذا أمر مثير للاهتمام حيث أن استحثاث ΔFOSB من قبل الأدوية والمكافآت الطبيعية يبدو أنه يسود في النوع الفرعي الإيجابي Dynorvin من الخلايا العصبية الشوكية المتوسطة التي تعبر في المقام الأول عن مستقبلات D1 (9 ، 21). تم تخفيض مستويات تركيز pCREB المستهدف من الدوبامين إلى أسفل في فئران FOSB ، مما يدعم تنشيط مستقبلات D1 في منطقة الدماغ (22 و 23). ومن المثير للاهتمام، ونحن أيضا الكشف عن انخفاض ملحوظ في إجمالي مستويات CREB في الفئران ΔFosB، مما يشير إلى مزيد من خفض القدرة على نقل الإشارة الدوبامين التي قد تكون ثانوية بالنسبة لردود الفعل الناتجة عن انخفاض لفترة طويلة في pCREB (24). يتم تنظيم تعبير BDNF بواسطة pCREB ، وهو مرتفع مع تنشيط D1 ، وهو وسيط هام للمرونة العصبية المرتبطة بالمكافأة في NAc (25 ، 26). وفقا لذلك ، فقد اكتشفنا انخفاضا كبيرا في البروتين BDNF في NAc من الفئران ΔFosB.

جميع الخلايا العصبية الشوكية المتوسطة في NAc اكسبريس DARPP-32 (27). العديد من العوامل المؤثرة في المصب تجعلها لاعبا حيويا في مسارات المكافأة (28) ، وقد تم توريطها في إدمان المخدرات والاضطرابات الأخرى التي تنطوي على نظام الدوبامين بما في ذلك الاضطرابات العاطفية وانفصام الشخصية (27 ، 29). لقد اكتشفنا تخفيضات أساسية عميقة في تعبير DARPP-32 في NAc لفئران ΔFosB. وينظم التعبير DARPP-32 من قبل BDNF، وبالتالي انخفاض التعبير قد تكون ذات صلة مباشرة إلى خفض في مستويات BDNF في الكشف عن الفئران ΔFosB (27، 29، 30). حتى التغييرات المعتدلة في حالة فسفرة DARPP-32 يمكن أن تؤدي إلى تغيرات جوهرية في الإشارة داخل الخلايا داخل NAc (27). أبلغت دراسات سابقة عن عدم حدوث أي تغيير في بروتين DARPP-32 في فئران ΔFosB بعد إزالة 12-wk من الدوكسيسيكلين عند إجراء تقييم مخطط أكثر عمومية (31) ، مما يشير إلى أن آثار ΔFosB على DARPP-32 قد يكون الوقت والمنطقة محددة.

افترضنا أن التخفيضات الكبيرة في الأرقام القياسية لإشارات الدوبامين في بريدا من ΔFosB الفئران المرجح تشارك التغيرات في الخلايا العصبية الدوبامين VTA الإسقاط، على الرغم من ΔFosB لا overexpressed داخل هذه الخلايا العصبية. لذلك ، درسنا التعبير عن الجينات ذات الصلة بالدوبامين في VTA ، بما في ذلك هيدروكسيلاز التيروزين وناقل الدوبامين. وترتبط بشكل إيجابي مستويات هيدروكسيلاز التيروزين وناقل الدوبامين مع إخراج الدوبامين. كان هناك اتجاه لفئران ΔFosB لإظهار هيدروكسيلاز التيروزين انخفاض وانخفاض كبير في نقل الدوبامين ، تمشيا مع dysregulation من إشارات الدوبامين في NAc. كما يفترض أن هذه التخفيضات الأساسية في الجينات ذات الصلة بالدوبامين في VTA للفئران ΔFosB تعكس التغير في التغذية المرتدة من NAc خلال الإفراط في التعبير عن مصطلح FOSB على المدى الطويل.، فحصنا التعبير عن مستقبل BDNF ، TrkB ، كآلية محتملة لتعليقات NAc إلى VTA (32). على غرار التيروزين hydroxylase وناقل الدوبامين ، أظهر تعبير TrkB أيضًا اتجاهاً يتم تخفيضه أساسًا في فئران FOSB التي لم تصل إلى دلالة عند تصحيحها لعدة مقارنات. يمكن نقل مركب BDNF-TrkB بشكل ارتجاعي والعمل داخل VTA للتأثير على التعبير الجيني المحلي وتعزيز نمو الخلايا وصيانتها (33). علاوة على ذلك ، يمكن تنشيط BDNF من TrKB قبل المشابك داخل NAc مباشرة تحفيز العصبية الدوبامين (32) ، ودعم تناقص الكامنة وراء إشارات الدوبامين في هذه الفئران.

ينظم تنشيط Dynorphin لمستقبلات op-opioid إشارات الدوبامين وهو آلية أخرى حيث يوفر NAc التغذية الراجعة إلى VTA (34). وجدنا أن التعبير عن مستقبلات الأفيون في V VTA أظهر وجود اتجاه لتخفيض الفئران ΔFosB. بما أن overFOSB overexpression قد تبين أنه يقلل من التعبير عن dynorphin في NAc (20) ، فإن الفئران FOSB من المحتمل أن يكون لها تخفيضات عميقة في صافي VTA κ-تفعيل المواد الأفيونية. على الرغم من أن إشارات Dynorphin عادةً ما تمارس تأثيرًا مثبطًا على الخلايا العصبية للدوبامين (35) ، فإن الفئران التي تُظهر الإدارة الذاتية المحسنة لعقاقير إساءة الاستخدام تظهر مستويات منخفضة من Dynorphin في NAc ، مما يشير إلى دور في تقليل إشارات الدينورفين بشكل أساسي في تعزيز حساسية المكافأة ، 36). تم ربط عدم تنظيم نظام dynorphin - κ-opioid باكتساب واستمرار تعاطي المخدرات ، مما يدعم توازنًا حرجًا في إشارات المواد الأفيونية في تطبيع مسارات الدوبامين (38).

استنادًا إلى القدرة المكافئة لنظام غذائي عالي الكثافة HF ، افترضنا أن خلل في الدوبامين ومكافأة المكافئ في فئران ΔFosB من شأنه أن يؤهب هذه الفئران لاستجابات مكافئة معززة لمثل هذا النظام الغذائي ، وبالتالي تطبيع نظام المكافأة من خلال تفعيل الوطاء دائرة -VTA-NAc. خلال التعرض اتباع نظام غذائي لمدة ستة أسابيع، لوحظ عدم وجود فروق في تناول الطعام بين ΔFosB والسيطرة على الفئران، مما يدل على أن التغييرات الموجودة في علامات الحيوية والجزيئية للإشارات مكافأة في الفئران ΔFosB لم تكن بسبب الاختلافات في السعرات الحرارية المستهلكة. كما كان متوقعًا ، تم اكتشاف اختلافات أساسية تم اكتشافها في PCREB ، إجمالي CREB ، BDNF ، DARPP-32 ومستويات مستقبل الأفيون بين ΔFosB وفئران التحكم ، على الأرجح بسبب زيادة إنتاج الدوبامين في فئران FOSB على HF (29 ، 39-41) .

أظهر فحص كل من هيدروكسيلاز التيروزين وناقل الدوبامين في الـ VTA استجابات متعارضة مفاجئة لـ ΔFosB وفئران التحكم بعد HF. وأظهرت فئران التحكم انخفاضا في هيدروكسيلاز التيروزين وتعبير ناقل الدوبامين ، في حين أظهرت فئران FosB زيادة في التعبير عن كل من هذه الجينات ذات الصلة بالدوبامين. ومن المثير للاهتمام أن تعبير التيروزين هيدروكسيلاز يتغير في الـ VTA عن طريق تعاطي الكوكايين المزمن أو الميتامفيتامين (42-44) ، مما يوحي بأن mFosB الفئران قد تجد المكافأة الطبيعية لـ HF أكثر بروزًا من الفئران المسيطرة.

من أجل دراسة كيف يمكن أن يكون الإدخال المهادي المحتمل للـ VTA هو نقل الإشارات التي تعكس توازن الطاقة ، تم أيضًا دراسة التعبير عن مستقبلات الليبتين ومستقبلات orexin-1. يتم زيادة مستويات الليبتين المتداولة بواسطة HF ، ويمكن أن يعمل الليبتين بدوره في VTA لتغيير إشارات الدوبامين (18 ، 45). وبالمثل ، انخفض التعبير عن مستقبلات الفبتاتين VTA من خلال HF في كل من الفئران FOSB وضوابط التحكم ، تماشياً مع زيادة الوزن واتباع نظام غذائي مماثل أثناء استخدام HF. زيادة الدهون عالية أيضا التعبير عن مستقبلات أويكسين - 1 في VTA لكل من الفئران الفوسفات و ΔFosB. ينشط Orexin الخلايا العصبية الدوبامين في VTA ، ويعزز اللدونة VTA ، ويزيد مستويات الدوبامين في NAc (46-48). أظهر النظام الغذائي عالي الدهون زيادة تعبير الأويكسين في الفئران ، وفقا لملاحظاتنا (49 ، 50). وهكذا، وزيادة التعبير عن مستقبلات أوركسين فضلا عن التغيرات في إشارات اللبتين في VTA يمكن أن تعزز مكافأة النظام الغذائي في كل من ΔFosB والسيطرة على الفئران، ودعم الانفصال بين مسارات بث إشارات توازن الطاقة، وتلك المرتبطة مباشرة لمكافأة.

لدراسة التأثيرات المثيرة للضغط على سحب المكافأة ، تم فحص الفئران في اختبار مفتوح المجال 24 بعد إزالة HF. كانت الفئران FosB أكثر حساسية للتأثيرات الحادة من انسحاب النظام الغذائي المفضل ، مما يدل على زيادة نشاط الإثارة وإنتاج بولي البراز في الساحة المفتوحة الجديدة مقارنة مع جميع مجموعات التحكم والنظام الغذائي الأخرى. كما أظهرت الفئران FSB نمطًا سلوكيًا مثيرًا للاهتمام في هذا الاختبار موضحًا للمكافأة وحساسية الإجهاد ، حيث أدى نظام الحمية HF في البداية إلى خفض إنتاج لبولي البراز بالنسبة إلى الطعام ، والانسحاب من جديد زاد من هذه الاستجابة المرتبطة بالقلق. هذه الزيادة الملحوظة في نشاط المجال المفتوح لا ترتبط بالتغييرات في تعبير الأويكسين ، مما يوحي بوجود علاقة للإثارة الناجمة عن الإجهاد والتي ليست مجرد تأثير للتغيرات في التشوير بوساطة الأكسجين. بشكل عام ، تدعم هذه البيانات فرضيتنا أن mFosB الفئران ستكون أكثر حساسية للتأثيرات الحادة الناجمة عن انسحاب النظام الغذائي المفضل بسبب حساسية المكافأة المرتفعة.

كيف يؤدي الإفراط المفرط على المدى الطويل لـ ΔFosB في NAc إلى حدوث مثل هذه التغييرات في السلوك وإشارات المكافأة؟ لقد اقترحنا نموذجًا لكشف VTA المتزامن حيث تبدلت التغذية المرتدة المتغيرة من NAc و hypothalamus إشارات بشأن حالة المكافأة لتحديد تنظيم نظام الدوبامين الذي قد يدعم الارتباط بين dysregulation لمسار المكافأة والتهيؤ للسمنة (الشكل 8). أثناء التعرض لموجات الديكامترية (HF) ، تتلاقى المدخلات المتعددة التي تعكس توازن الطاقة وحالة المكافئ على VTA. قد تؤثر الزيادات في تشوير leptin و orexin وكذلك تغير التغذية المرتدة من NAc إلى المهاد الجانبي على كيفية استجابة هذه الإشارات للمستقبلات في HF في فئران FOSB (17 و 18 و 45 و 47 و 51-53). قد تعطي الارتفاعات التي يسببها النظام الغذائي عالية الدهون في BDNF ردود فعل مكافأة ل VTA ، مواصلة تعزيز التغييرات في التعبير الجيني الدوبامين ذات الصلة.

الشكل 8

الحمية العالية الدهون (HF) تطبيع إشارات عدم ثبات النظام في الفئران ΔFosB

تحدد هذه النتائج العلامات الجزيئية لحساسية المكافأة وتشير إلى أن عدم انتظام نظام الدوبامين على المدى الطويل قد يؤهب الفرد للإدمان والسمنة. علاوة على ذلك ، توفر هذه البيانات خطوة مهمة نحو تحديد الأهداف العلاجية الجديدة المحتملة في علاج والوقاية من السمنة وغيرها من الاضطرابات التي قد تركز على نظام المكافآت. في المستقبل ، سيكون من المهم التحقيق في كيفية استجابة هذا النظام لإزالة نظام غذائي عالي المستوى ، وكذلك للتحقيق في أي اختلافات جنسية في الحساسية للمكافأة والتعرض الغذائي عالي الدهون.

المواد التكميلية

الملحق. أساليب

انقر هنا للعرض. (61K، doc)

شكر وتقدير

يود المؤلفان أن يشكروا كاتي ستيفن على المساعدة في تربية الحيوانات ونقلها. تم دعم هذا العمل من خلال منحة من مركز جامعة بنسلفانيا للسكري (DK019525) ومنح من المعهد الوطني للصحة العقلية (R01 MH51399 و P50 MH66172) والمعهد الوطني لتعاطي المخدرات (R01 DA07359).

الحواشي

الإفصاح المالي: يعلن جميع المؤلفين أنه ليس لديهم مصالح مالية بيولوجية أو تضارب مصالح محتمل.

مراجع حسابات

1. Wadden TA، Berkowitz RI، Womble LG، Sarwer DB، Phelan S، Cato RK، Hesson LA، Osei SY، Kaplan R، Stunkard AJ. تجربة عشوائية من تعديل نمط الحياة والعلاج الدوائي للسمنة. إن إنجل جا ميد. 2005، 353 (20): 2111-20 [مجلات].

2. Blendy JA، Strasser A، Walters CL، Perkins KA، Patterson F، Berkowitz R، Lerman C. Reduced nicotine reward in obesity: cross-comparison in human and mouse. علم الادوية النفسية (بيرل) 2005

3. Franken IH، Muris P. ترتبط الفروق الفردية في حساسية المكافأة بشغف الطعام ووزن الجسم النسبي لدى النساء الأصحاء. شهية. 2005، 45 (2): 198-201 [مجلات].

4. Kelley AE، Berridge KC. علم الأعصاب من المكافآت الطبيعية: ملاءمة للأدوية الادمان. ي Neurosci. 2002، 22 (9): 3306-11 [مجلات].

5. Cagniard B، Balsam PD، Brunner D، Zhuang X. الفئران مع الدوبامين المرتفع المزمن يحمل دافعًا معززًا ، ولكن لا يتعلم ، للحصول على مكافأة غذائية. Neuropsychopharmacology. 2006، 31 (7): 1362-70 [مجلات].

6. ليانغ نورث كارولاينا ، Hajnal A ، نورغرين ر. الشام تغذية زيت الذرة يزيد المتكئين الدوبامين في الفئران. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 2006، 291 (5): R1236-9 [مجلات].

7. Mendoza J، Angeles-Castellanos M، Escobar C. Entrainment بواسطة وجبة مستساغة تحفز النشاط الاستباقي للغذاء وتعبير c-Fos في المناطق ذات الصلة بالمكافأة في الدماغ. علم الأعصاب. 2005، 133 (1): 293-303 [مجلات].

8. Schroeder BE، Binzak JM، Kelley AE. لمحة عامة عن التنشيط القشري قبل الجبهي بعد التعرض للدلائل السياقية المرتبطة بالنيكوتين أو الشكولاتة. علم الأعصاب. 2001، 105 (3): 535-45 [مجلات].

9. Nestler EJ، Barrot M، Self DW. DeltaFosB: مفتاح جزيئي مستدام للإدمان. Proc Natl Acad Sci US A. 2001؛ 98 (20): 11042 – 6. [مقال PMC المجاني] [PubMed]

10. Teegarden SL، Bale TL. ينتج نقص في التفضيل الغذائي زيادة العاطفة وخطر الانتكاس الغذائي. بيول الطب النفسي. 2007، 61 (9): 1021-9 [مجلات].

11. Olausson P، Jentsch JD، Tronson N، Nestler EJ، Taylor JR. dFosB في Nucleus Accumbens ينظم السلوك الآلي المعزز بالغذاء والدافع. مجلة علم الأعصاب. 2006، 26 (36): 9196-9204 [مجلات].

12. Chen J، Kelz MB، Zeng G، Sakai N، Steffen C، Shockett PE، Picciotto MR، Duman RS، Nestler EJ. الحيوانات المعدلة وراثيا مع التعبير الجيني ، مستهدف محفز في الدماغ. مول Pharmacol. 1998، 54 (3): 495-503 [مجلات].

13. Kelz MB، Chen J، Carlezon WA، Jr، Whisler K، Gilden L، Beckmann AM، Steffen C، Zhang YJ، Marotti L، Self DW، Tkatch T، Baranauskas G، Surmeier DJ، Neve RL، Duman RS، Picciotto MR، Nestler EJ. التعبير عن عامل النسخ deltaFosB في الدماغ يتحكم في الحساسية للكوكايين. طبيعة. 1999، 401 (6750): 272-6 [مجلات].

14. Bale TL، Dorsa DM. فروق في الجنس وتأثيرات هرمون الاستروجين على مستقبلات حامض الريبونوكليكس لمستقبلات الأوكسيتوسين في الوطاء البطني. الغدد الصماء. 1995، 136 (1): 27-32 [مجلات].

15. Avena NM، Long KA، Hoebel BG. تظهر الفئران التي تعتمد على السكر تحسين الاستجابة للسكر بعد الامتناع عن ممارسة الجنس: دليل على تأثير الحرمان من السكر. فيسيول بيهاف. 2005، 84 (3): 359-62 [مجلات].

16. Will MJ، Franzblau EB، Kelley AE. تقوم النواة المتكئة بالمواد الأفيونية بتنظيم تناول نظام غذائي غني بالدهون من خلال تفعيل شبكة دماغية موزعة. ي Neurosci. 2003، 23 (7): 2882-8 [مجلات].

17. Zheng H، Patterson LM، Berthoud HR. مطلوب إشارات Orexin في منطقة tegmental بطني للشهية عالية الدهون الناجمة عن التحفيز الأفيونية من المتكئة نواة. ي Neurosci. 2007، 27 (41): 11075-82 [مجلات].

18. Hommel JD، Trinko R، Sears RM، Georgescu D، Liu ZW، Gao XB، Thurmon JJ، Marinelli M، DiLeone RJ. إشارات مستقبلات الليبتين في الخلايا العصبية الدوبامين الدماغ المتوسط ​​ينظم التغذية. الخلايا العصبية. 2006، 51 (6): 801-10 [مجلات].

19. Colby CR، Whisler K، Steffen C، Nestler EJ، Self DW. يعزز overexpression من نوع DeltaRosB الخاص بالخلية القابلة للإستزاف من الحافز للكوكايين. ي Neurosci. 2003، 23 (6): 2488-93 [مجلات].

20. Zachariou V، Bolanos CA، Selley DE، Theobald D، Cassidy MP، Kelz MB، Shaw-Lutchman T، Berton O، Sim-Selley LJ، Dileone RJ، Kumar A، Nestler EJ. دور أساسي للدلتا فوسب في النواة المتكئة في عمل المورفين. نات نيوروسكي. 2006، 9 (2): 205-11 [مجلات].

21. Lee KW، Kim Y، Kim AM، Helmin K، Nairn AC، Greengard P. cocaine-induced spendor formation dendritic formation in D1 and D2 dubNine receptor-containing neurons medium spinal-containing neubons in spoin numbles in nucleus accumbens. Proc Natl Acad Sci US A. 2006؛ 103 (9): 3399 – 404. [مقال PMC المجاني] [PubMed]

22. Blendy JA، Maldonado R. Genetic analysis of drug addiction: the role of cAMP response element element protein protein. يول مول ميد. 1998، 76 (2): 104-10 [مجلات].

23. Nestler EJ. الآليات الجزيئية لإدمان المخدرات. الفارماكولوجيا العصبية. 2004 و 47 1: 24 – 32. [PubMed]

24. Tanis KQ، Duman RS، Newton SS. CREB Binding and Activity in Brain: Specificity and Induction by Electroconvulsive Seizure. بيول الطب النفسي. 2007

25. كومار A ، Choi KH ، Renthal W ، Tsankova NM ، Theobald DE ، Truong HT، Russo SJ، Laplant Q، Sasaki TS، Whistler KN، Neve RL، Self DW، Nestler EJ. إعادة تشكيل الكروماتين هي آلية رئيسية وراء اللدونة التي يسببها الكوكايين في المخطط. الخلايا العصبية. 2005، 48 (2): 303-14 [مجلات].

26. Graham DL، Edwards S، Bachtell RK، Dileone RJ، Rios M، Self DW. نشاط الديناميكية الحيوية في النواة المتكئة مع استخدام الكوكايين يزيد من الإدارة الذاتية والانتكاس. نات نيوروسكي. 2007، 10 (8): 1029-37 [مجلات].

27. Svenningsson P، Nairn AC، Greengard P. DARPP-32 mediates the actions of multiple drugs of abuse. Aaps J. 2005؛ 7 (2): E353 – 60. [مقال PMC المجاني] [PubMed]

28. Palmer AA، Verbitsky M، Suresh R، Kamens HM، Reed CL، Li N، Burkhart-Kasch S، McKinnon CS، Belknap JK، Gilliam TC، Phillips TJ. اختلافات في التعبير الجيني في الفئران المختارة لتحديد حساسية الميتامفيتامين. مام جينوم. 2005، 16 (5): 291-305 [مجلات].

29. Bogush A، Pedrini S، Pelta-Heller J، Chan T، Yang Q، Mao Z، Sluzas E، Gieringer T، Ehrlich ME. تتوسط AKT و CDK5 / p35 تحفيز عامل التغذية العصبي المشتق من DARPP-32 في الخلايا العصبية الشوكية متوسطة الحجم في المختبر. J Biol Chem. 2007، 282 (10): 7352-9 [مجلات].

30. Benavides DR، Bibb JA. دور Cdk5 في تعاطي المخدرات واللدونة. Ann NY Acad Sci. 2004، 1025: 335-44 [مجلات]

31. Bibb JA، Chen J، Taylor JR، Svenningsson P، Nishi A، Snyder GL، Yan Z، Sagawa ZK، Ouimet CC، Nairn AC، Nestler EJ، Greengard P. يتم تنظيم تأثيرات التعرض المزمن للكوكايين من قبل البروتين العصبي Cdk5. طبيعة. 2001، 410 (6826): 376-80 [مجلات].

32. Blochl A، Sirrenberg C. Neurotrophins يحفز إفراز الدوبامين من الخلايا العصبية المتوسطة mesencephalic عبر مستقبلات Trk و p75Lntr. J Biol Chem. 1996، 271 (35): 21100-7 [مجلات].

33. Berton O، McClung CA، Dileone RJ، Krishnan V، Renthal W، Russo SJ، Graham D، Tsankova NM، Bolanos CA، Rios M، Monteggia LM، Self DW، Nestler EJ. الدور الأساسي من BDNF في مسار الدوبامين mesolimbic في ضغوط هزيمة الاجتماعية. علم. 2006، 311 (5762): 864-8 [مجلات].

34. Nestler EJ، Carlezon WA.، Jr الدوبامين ميزوليببيك مكافأة الدائرة في الاكتئاب. بيول الطب النفسي. 2006، 59 (12): 1151-9 [مجلات].

35. Ford CP، Beckstead MJ، Williams JT. Kappa opioid inhibition of somatodendritic dubamine inhibitory والتيارات postynaptic. ي Neurophysiol. 2007، 97 (1): 883-91 [مجلات].

36. Nylander I، Vlaskovska M، Terenius L. Brain dynorphin and enkephalin systems in Fischer and Lewis rat: effects of morphine tolerance and withdraw. الدماغ الدقة. 1995، 683 (1): 25-35 [مجلات].

37. Nylander I، Hyytia P، Forsander O، Terenius L. Difference between alcohol-preferring (AA) and alcohol-avoiding (ANA) rat in the prodynorphin and proenkephalin systems. كحول الكحول إكسب Res. 1994، 18 (5): 1272-9 [مجلات].

38. كريك ام جي. الكوكايين والدوبامين والنظام الأفيوني الداخلي. J Addict Dis. 1996، 15 (4): 73-96 [مجلات].

39. Carlezon WA، Jr، Duman RS، Nestler EJ. وجوه كثيرة من CREB. اتجاهات neurosci. 2005، 28 (8): 436-45 [مجلات].

40. Dudman JT، Eaton ME، Rajadhyaksha A، Macias W، Taher M، Barczak A، Kameyama K، Huganir R، Konradi C. Dopamine D1 receptors mediate CREB phosphorylation via phosphorylation of the NMDA receptor at Ser897-NR1. ي Neurochem. 2003، 87 (4): 922-34 [مجلات].

41. النفس دي دبليو. تنظيم سلوكيات تعاطي المخدّرات والتجنّهات عن طريق إجراء عمليات تجديد عصبي في نظام الدوبامين المسري. الفارماكولوجيا العصبية. 2004 و 47 1: 242 – 55. [PubMed]

42. Beitner-Johnson D، Nestler EJ. يمارس المورفين والكوكايين إجراءات مزمنة شائعة على هيدروكسيلاز التيروزين في مناطق مكافآت الدوبامين في الدماغ. ي Neurochem. 1991، 57 (1): 344-7 [مجلات].

43. لو L ، جريم JW ، Shaham Y ، Hope BT. إجراء عمليات تجديد عصبية جزيئية في المنطقة المتكئة والبطنية الداخلية خلال الأيام الأولى لـ 90 من الامتناع القسري عن تعاطي الكوكايين ذاتيًا في الفئران. ي Neurochem. 2003، 85 (6): 1604-13 [مجلات].

44. Shepard JD، Chuang DT، Shaham Y، Morales M. Effect of methamphetamine self-administration on tyrosine hydroxylase and dopamine transporter levels in mesolimbic and nigrostriatal dopamine pathways of the rat. علم الادوية النفسية (Berl) 2006 ؛ 185 (4): 505 – 13. [PubMed]

45. Fulton S، Pissios P، Manchon RP، Stiles L، Frank L، Pothos EN، Maratos-Flier E، Flier JS. تنظيم اللبتين لمسار الدوبامين المسلفن. الخلايا العصبية. 2006، 51 (6): 811-22 [مجلات].

46. Narita M، Nagumo Y، Miyatake M، Ikegami D، Kurahashi K، Suzuki T. Implication of protein kinase C in the orexin -ducedduced rise of extrafular dopamine levels and its rewarding effect. Eur J Neurosci. 2007، 25 (5): 1537-45 [مجلات].

47. Narita M، Nagumo Y، Hashimoto S، Khotib J، Miyatake M، Sakurai T، Yanagisawa M، Nakamachi T، Shioda S، Suzuki T. Direct direct of orexinergic systems in the activation of the mesolimbic dopamine pathway and related behaviors induced by morphine. ي Neurosci. 2006، 26 (2): 398-405 [مجلات].

48. Borgland SL، Taha SA، Sarti F، Fields HL، Bonci A. Orexin A in the VTA ضروري لتحريض اللدونة متشابك والتوعية السلوكية للكوكايين. الخلايا العصبية. 2006، 49 (4): 589-601 [مجلات].

49. Park ES، Yi SJ، Kim JS، Lee HS، Lee IS، Seong JK، Jin HK، Yoon YS. التغييرات في أويكسين-أ و نيوروبيبتيد صاء التعبير في منطقة ما تحت المهاد من الفئران التي تغذت على الصيام. J Vet Sci. 2004، 5 (4): 295-302 [مجلات].

50. Wortley KE، Chang GQ، Davydova Z، Leibowitz SF. الببتيدات التي تنظم تناول الطعام: يتم زيادة تعبير الجين orexin خلال حالات زيادة شحوم الدم. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 2003، 284 (6): R1454-65 [مجلات].

51. Zheng H، Corkern M، Stoyanova I، Patterson LM، Tian R، Berthoud HR. الببتيدات التي تنظم تناول الطعام: ينشط التناول المتسبب في الشهية ينشط الخلايا العصبية المخططة و يثبط الخلايا العصبية POMC. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 2003، 284 (6): R1436-44 [مجلات].

52. Baldo BA، Gual-Bonilla L، Sijapati K، Daniel RA، Landry CF، Kelley AE. تنشيط مجموعة فرعية من الخلايا العصبية التي تحتوى على orexin / hypocretin تحت تاثير مستقبل GABAA بوساطة النواة المتكئة النواة ، ولكن ليس بالتعرض لبيئة جديدة. Eur J Neurosci. 2004، 19 (2): 376-86 [مجلات].

53. Harris GC، Wimmer M، Aston-Jones G. A role for hypothalamic orexin neurons in reward seeking. طبيعة. 2005، 437 (7058): 556-9 [مجلات].