حمية معتدلة عالية الدهون تزيد من سكروز الإدارة الذاتية في الجرذان الصغيرة (2013)

ديان ب. فيجاليكز,^1,2 جينيفر ل. جاي,² مولي أيتشون, إروين ج. ماجريسو,⁴ كونستانس هـ,¹ أريانا زافوش,² ستيفن سي بينوا,³ و جون إف ديفيس³

لقد سبق أن أبلغنا أن اتباع نظام غذائي عالي الدهون يزيد من الدافع للسكروز في الفئران البالغة. في هذه الدراسة ، قمنا باختبار التأثيرات التحفيزية والكيميائية العصبية والتمثيل الغذائي للنظام الغذائي عالي الدهون لدى الفئران الذكور التي تمر بمرحلة البلوغ ، خلال أسابيع 5-8. لاحظنا أن اتباع نظام غذائي عالي الدهون زاد من دوافع الاستجابة للسكروز ، الذي كان مستقلاً عن التغييرات الأيضية أو التغيرات في مستقلبات الناقلات العصبية للكاتيكولامينات في النواة المتكئة. ومع ذلك ، كانت مستويات AGRP مرنا في منطقة ما تحت المهاد مرتفعة بشكل كبير. لقد أثبتنا أن زيادة تنشيط الخلايا العصبية AGRP يرتبط بالسلوك المحفّز ، وأن إدارة AGRP الخارجية (الدماغية الثالثة) أسفرت عن زيادة كبيرة في الدافع للسكروز. هذه الملاحظات تشير إلى أن زيادة التعبير ونشاط AGRP في ما تحت المهاد الإنسي قد يكون السبب وراء زيادة الاستجابة للسكروز الناجم عن تدخل النظام الغذائي عالي الدهون. أخيرًا ، قارنا الدافع للسكروز في فئران البلوغ مقابل البالغين ولاحظنا زيادة الحافز للسكروز في فئران البلوغ ، وهو ما يتفق مع التقارير السابقة بأن الحيوانات والبشر الصغار لديهم تفضيل متزايد للذوق الحلو ، مقارنةً بالبالغين. تشير دراساتنا معًا إلى أن النظام الغذائي للخلفية يلعب دورًا قويًا في تحفيز الذوق الحلو لدى الحيوانات المراهقة.

المواد

وكانت الموضوعات الذكور الفئران ألبينو من Simonsen (جيلروي ، كاليفورنيا). تم الحفاظ على الفئران على chow (حمية مختبر القوارض 5001 ، LabDiet) أو حمية معتدلة الدهون عالية (31.8 ٪ ؛ Research Diets Inc) libitum الإعلانية. تتم مطابقة الوجبات الغذائية مع محتوى الكربوهيدرات الكلي (58٪ kcal مقابل 51٪ kcal للدهون المنخفضة والدهون العالية على التوالي). يحتوي Chow قليل الدسم على نسبة سكريات خالية من 6.23 gm٪ والنظام الغذائي عالي الدهون يحتوي على سكروز 29 gm٪. تم الحفاظ عليها في دورة 12: 12 h المظلمة بالضوء مع إضاءة على 6 AM. ما لم تتم الإشارة إلى خلاف ذلك ، تم إحضار فئران في 3 أسابيع من العمر ، مباشرة بعد الفطام ، وتم إسكانها للتأقلم حتى 5 أسابيع من العمر. في هذا العصر ، بدأ التدريب على النظام الغذائي و / أو التدريب والاختبارات السلوكية. البروتوكولات المحددة موصوفة بالتفصيل أدناه ، وملخصة في الجدول 1. لأن الفئران الذكور تمر عبر سن البلوغ في 6^th-7^th الأسبوع من العمر ، تم تصميم توقيت الدراسات لدراسة الفئران لأنها تعبر هذه المرحلة التنموية. تتبع جميع الإجراءات التي تم إجراؤها على الفئران إرشادات المعاهد الوطنية للصحة في رعاية الحيوان ، وتمت الموافقة عليها من قبل اللجنة الفرعية لرعاية الحيوان واستخدامه في لجنة البحث والتطوير في نظام VA Puget Sound للرعاية الصحية.

  

الجدول 1

البروتوكولات التجريبية

السكروز الإدارة الذاتية

البروتوكول العام. استندت الإجراءات إلى منهجيتنا المنشورة (Figlewicz et al.، 2008; Figlewicz et al.، 2006). تم تنفيذ جميع إجراءات التدريب والاختبار بين 0700 و 1200 ساعة. شملت التجربة مراحل 2-3: التكوين التلقائي والتدريب الثابت (FR) ؛ الجراحة والانتعاش في الأفواج المحددة (انظر الجدول 1)؛ والتدريب التدريجي للنسب (PR) باستخدام خوارزمية العلاقات العامة لريتشاردسون وروبرتس (ريتشاردسون وروبرتس ، 1996). تتطلب خوارزمية العلاقات العامة 1 و 2 و 4 و 6 و 9 و 12 و 16 و 20 و 28 و 36 و 48 و 63 و 83 و 110 و 145 و 191 و 251 و 331 و 437 و 575 الخ) يضغط رافعة لإنجاح تسليم المكافآت خلال جلسة ، وهو اختبار صارم للتحفيز والمكافأة (759). تم تدريب الفئران على إدارة سكروز 999٪ (مكافأة 999 مل) في وعاء سائل. كان لصناديق التشغيل ، التي يسيطر عليها نظام Med Associates (Georgia، VT) ، ذراعان ، لكن رافعة واحدة فقط (رافعة نشطة وقابلة للسحب) قامت بتنشيط مضخة التسريب. كما تم تسجيل مكابس على الذراع الآخر (رافعة غير نشطة ، ثابتة). تم تسليم محلول السكروز إلى وعاء إسقاط سائل للاستهلاك الفموي (Med Associates). تم إجراء تدريب أولي خلال جلسات لمدة ساعة واحدة لأيام 27 وفقًا لجدول التعزيز المستمر (FR5: تم تعزيز كل رافعة ضغط) ، مع أقصى قدر ممكن من مكافآت Xrose سكروزوز التي يتم تسليمها في الجلسة. بدأت كل جلسة بإدخال ذراع نشطة وإضاءة ضوء أبيض بقي طوال الجلسة بأكملها. ترافق نغمة المركب المنفصلة مع كل عملية تسليم مكافأة ، متبوعة بنقطة 0.5 بالثانية (10 Hz ، 1 ديسيبل فوق الخلفية) + ضوء (50 W الضوء الأبيض فوق الذراع النشط) مرفقة بكل عملية تسليم مكافأة ، تليها مهلة 5 ثانية بعد كل تسليم سكروز. تم تنفيذ تدريب العلاقات العامة لمدة أقصاها 2900 h / day لمدة عشرة أيام. انتهت الجلسات اليومية بعد 20 دقيقة من عدم وجود ضغط نشط للضغط على الاستجابة ، وعندها تم إيقاف تشغيل إضاءة المنزل وتراجع الرافع النشط.

تأثير AGRP على الإدارة الذاتية للسكروز

كما أظهرت نتائجنا زيادة تعبير AGRP mRNA في فئران البلوغ التي تغذت على نظام غذائي عالي الدهون ، أردنا أن نؤكد أن AGRP يمكن أن تزيد من الإدارة الذاتية للسكروز. تم أخذ الفئران التي تغذت على الطعام من 5-wk من خلال تدريب FR ، ثم حصلت على الكانيولا في البطين الدماغي الثالث (ICV). بعد أسبوع من الشفاء ، تأكيد الموضع من خلال اختبار استجابة أنجيوتنسين الثاني للشرب (انظر فيجليفيتش وآخرون ، [2006]) ، ودورة واحدة من إعادة FR التدريب ، بدأت الفئران على نموذج الإدارة الذاتية للعلاقات العامة. بعد PR Day 1 ، تم تعيين الفئران إلى واحدة من مجموعتين ، مما يعني أن أداء PR Day 1 لا يختلف بين المجموعتين (مركبة CSF مصطنعة أو aCSF أو AGRP أو 2 μl من 0.01 nmol). تلقوا حقن aCSF (n = 8) أو AGRP (n = 7) في أيام العلاقات العامة 2 و 5 و 8. تم تقدير كمية الطعام اليومي الإجمالي خلال فترة التدريب على العلاقات العامة.

تأثير العمر على سكروز الإدارة الذاتية

قارنا سلوك الإدارة الذاتية بين فئران البلوغ والبالغين الصغار أو الذين تم تغذيتهم بتناول الطعام أو نظام 31.8٪ من الدهون. كان لدى الفئران أسبوعان من التأقلم مع vivarium VAPSHCS (3 — 5wk أو 8 — 10 wk). ثم تلقوا النظام الغذائي خلال فترة الاختبار / التدريب بأكملها (4 wk). وهكذا ، كما في التجربة الأولية ، تمت دراسة فئران البلوغ في سن 5-8 من العمر. تمت دراسة الصغار البالغين في 10-13 من العمر.

تحديد تكوين الجسم

تم قياس تكوين الجسم باستخدام التحليل الطيفي بالرنين المغناطيسي الكمي (QMR [نيكسون وآخرون ، 2010]) لتحديد محتوى الماء في الجسم من الفئران الفردية ، والتي يتم حساب الدهون في الجسم النسبية. تم وضع الحيوانات في حوامل أسطوانية غير مخدرة ، ثم يتم إدراج أصحابها في جهاز QMR لمسح 2 بالدقيقة ، والذي يقوم بإجراء قياسات ثلاثية. يتم حفظ البيانات على جهاز كمبيوتر متكامل (EchoMRI ، Echo Medical Systems ، هيوستن ، تكساس) لحساب فوري لكامل الجسم من الماء والدهون والكتلة الخالية من الدهن.

اختبار تحمل الجلوكوز في الوريد (IVGTT)

تم إجراء اختبارات IVGTT الواعية في فئران بها قنيات IV مزروعة بشكل مزمن ، والتي تم صيامها بين عشية وضحاها قبل الدراسة ، باستخدام المنهجية المعتمدة على Frangioudakis و Gyte و Loxham و Poucher (2008). تم زرع القنيات الوريدية الثنائية قبل أسبوعين من الدراسة ، وفقًا لمنهجيتنا المعمول بها (Figlewicz et al.، 2009). تم رسم عينات خط الأساس عند t-10 min (0.5 ml لتحديد الأنسولين والجلوكوز ، في جميع النقاط الزمنية) و t0 min. تلقت الفئران ضخ 1 جم من الجلوكوز / 2ml / kg على مدى 15-20 ثانية متبوعة بتدفق 0.5 ml من المياه المالحة. تم أخذ عينات دم في 5 و 15 و 30 و 60 و 90 و 120 min. نظرًا لسد قسطرة أثناء الإجراء (وبالتالي ، عدم القدرة على الحصول على عينات من الدم) ، فإن 'n' النهائية لبيانات خط الأساس / IVGTT المقدمة هي 7-8 بالنسبة للفئران التي تغذت على طريقة تشاو و 8 للفئران التي تتغذى على حمية الدهون 31.8٪ (الجدول 3). تم تحديد الأنسولين البلازمي باستخدام مجموعات RIA من الأنسولين Linco rat (# RI-13K و SRI-13K و Linco) وتم تحديد نسبة الجلوكوز في البلازما على محلل جلوكوز YSI). تم حساب المساحة تحت المنحنى (AUC) للاستجابة من الأساس عند 5 min و 120 min. تم حساب مؤشر HOMA على أنه صائم (الجلوكوز [مم] × الأنسولين [U / L]) / 22.5 وتم حسابه باستخدام عينات الصيام النهائية المقاسة للأنسولين والجلوكوز.

  

الجدول 3

المعلمات الأيضية¹

المعلمات الصيامية

تم صيام الفئران من التجربة 1 بين عشية وضحاها قبل القتل الرحيم ، بعد أيام قليلة من الانتهاء من IVGTT. تم تخدير الفئران بعمق باستنشاق الأيزوفلورين و exsanguinated. تمت إزالة العقول بسرعة وتجميدها في النيتروجين السائل لقياس مرنا الببتيد المهاد والنواة تتكاثف الكاتيكولامينات. تم استخدام البلازما الطرفية أو المصل لقياس صيام الأنسولين والجلوكوز واللبتين والدهون الثلاثية. بالنسبة للدهون الثلاثية ، تم استخدام Point Scientific Triglyceride GPO Kit # T7531-400 (Fisher # 23-666-418) والمعايير KIT # 7531-STD (Fisher # 23-666-422) تم استخدامها ، وتم تقييم 3 ofl من المصل. تم قياس بلازما اللبتين باستخدام Millipore Linco RIA Kit # RL 83K.

الكاتيكولامينات طرق HPLCDavis وآخرون ، 2008]

الموت الرحيم للجرذان بتخدير الأيزوفلورين ، وتمت إزالة العقول بسرعة وتجميدها وتخزينها في −80 ° C. تم عزل اللكمات الدقيقة الثنائية للنواة المتكئة (NAcc) من كل حيوان. على الرغم من العناية الكبيرة التي تم اتخاذها لتقليل التلوث في مناطق المخ المجاورة ، نظرًا لطبيعة وحجم كل كمة صغيرة ، فإن طريقتنا لم تسمح لنا بتمييز المناطق دون الإقليمية (أي NAcc core مقابل shell) داخل NAcc. لتحليل كروماتوجرافيا السائل عالي الأداء (HPLC) ، تمت إضافة محلول مضاد للأكسدة (0.4 N perchlorate و 1.343 mM ethylenediaminetetaceacetic acid (EDTA) و 0.526 mM metabisulfite sodium metabisulfite إلى العينات ، متبوعة بالتجانس باستخدام تجانس الأنسجة باستخدام الموجات فوق الصوتية VA ، تم إذابة جزء صغير من تجانس الأنسجة في كبريتات دوديسيل الصوديوم 2 ٪ (SD /) (ث / ت) لتقدير البروتين (مجموعة تفاعلات البروتين بيرس بي سي إيه ؛ روكفورد ، إيل). تم تدوير التعليق المتبقي عند 14,000 g لـ 20 دقيقة في أجهزة الطرد المركزي المبردة ، وكان طاف محفوظة ل HPLC.

تم فصل العينات على عمود Microsorb MV C-18 (5 Am، 4.6_250 mm، Varian؛ Walnut Creek، CA) وتم فحصها في وقت واحد بحثًا عن حمض DA و 3,4-dihydroxyphenylacetic acid (DOPAC) والحمضان المتماثلان (HOPA) تدهور الدوبامين ، 5-HT و 5-HIAA. تم اكتشاف مركبات باستخدام كاشف صفيف قياس الألوان بقناة 12 (CoulArray 5200 ، ESA ؛ Chelmsford، MA) مرفق بنظام توصيل المذيبات Waters 2695 (Waters؛ Milford، MA) وفقًا للشروط التالية: معدل تدفق 1 ml / min ؛ إمكانات الكشف عن 50 و 175 و 350 و 400 و 525 mV و ؛ إمكانات التنظيف لـ 650 mV. تألفت المرحلة المتنقلة من محلول الميثانول 10٪ في H المقطر₂O تحتوي على 21 جم / لتر (0.1 M) حمض الستريك ، 10.65g / l (0.075 M) Na2HPO4 ، 176 mg / l (0.8 M) حمض heptanesulfonic و 36 mg / l (0.097 mM) EDTA عند درجة الحموضة من 4.1. تم تقدير عينات مجهولة مقابل منحنى قياسي من نقطة 6 بحد أدنى R² من 0.97. تم تفريق عينات مراقبة الجودة مع كل تشغيل لضمان معايرة HPLC.

الببتيدات Orexigenic مرنا qPCR

قمنا بقياس التعبير عن الببتيدات تحت المهاد التي تحفز التغذية وتورطت في سلوكيات التحفيز والمكافأة (Figlewicz & Sipols ، 2010): نيوببتيد Y (NPY [ هان ، برينينجر ، باسكن ، وشوارتز ، 1998; Jewett et al.، 1995; كيلي ونانيني وبرات وهودج 2001])؛ الببتيد المرتبط بالأجوث (AGRP)أبونت ، أتاسوي ، وستيرنسون ، 2011; بارنز ، أرغيروبولوس ، وبراي ، 2010; Broberger et al.، 1998; هاجان وآخرون ، 2000; هان ، برينينجر ، باسكن ، وشوارتز ، 1998; كوشيك وآخرون ، 2011; Krashes وآخرون ، 2011; روسي وآخرون ، 1998; تريسي وآخرون ، 2008])؛ و orexin (Cason وآخرون ، 2010; تشوي ، ديفيس ، فيتزجيرالد ، وبينوا ، 2010). تم قتل الفئران باستخدام تخدير الأيزوفلورين ، وتمت إزالة الأدمغة بسرعة وتجميدها وتخزينها عند درجة حرارة -80 درجة مئوية حتى المعالجة. تم تشريح المهاد الإنسي والجانبي ككتلة واحدة باستخدام طائرة تجميد AHP-1200CPV (Thermoelectric Cooling America ، Chicago ، Il) والتي حافظت على درجة حرارة ثابتة تبلغ 12 درجة مئوية طوال عملية التشريح. تم عزل إجمالي الحمض النووي الريبي من الأنسجة التي تم تشريحها مجهريًا بواسطة كاشف Trizol (Invitrogen ، Carlsbad ، CA) وتنقيته باستخدام RNeasy Mini Kit (Qiagen ، فالنسيا ، كاليفورنيا) وفقًا لتعليمات الشركة الصانعة. تمت معالجة إجمالي الحمض النووي الريبي لإزالة أي تلوث محتمل للحمض النووي الجيني باستخدام DNase الخالي من RNase (Promega ، Madison ، WI) ، وتم قياسه باستخدام مقياس الطيف الضوئي NanoVue (GE Healthcare ، Cambridge ، المملكة المتحدة). تم تأكيد جودة الحمض النووي الريبي بواسطة الرحلان الكهربائي لجيل الاغاروز القياسي. تم إعادة نسخ الحمض النووي التكميلي (cDNA) بعد ذلك (RT) من 1-2 ميكروغرام من إجمالي الحمض النووي الريبي بمزيج من السداسيات العشوائية وتهيئة oligo DT باستخدام iScript cDNA Synthesis Kit (Bio-Rad Laboratories ، Inc. ، Hercules ، CA). تم أيضًا تحضير تفاعلات غير منقولة (بدون RT) من كل عينة للتحكم في تلوث الحمض النووي الجيني المحتمل. تم تخفيف عناصر التحكم (كدنا) و no-RT ، واستخدم 5-10 نانوغرام من قالب (كدنا) من كل عينة لقياس تعبير الرنا المرسال للجينات المختارة عن طريق PCR الكمي في الوقت الحقيقي باستخدام نظام MyIQ Real-Time PCR Detection System (Bio-Rad ، Hercules تم إجراء قياسات ثلاثية لكل عينة على ألواح الآبار القياسية iCycler 96 ، إلى جانب عدم وجود عناصر تحكم في القالب (NTC) لاكتشاف التلوث المتبادل المحتمل ، في 20 حجمًا من تفاعلات التفاعل تتكون من 10 ميكرولتر 2 × iQ Sybr Green Supermix (Bio- Rad ، Hercules ، CA) ، 2 ميكرولتر من 0.2-0.5 ميكرومتر كل تمهيدي ، 3 ميكرولتر ماء DEPC ، و 5 ميكرولتر من القالب. تضمنت جميع تفاعلات qPCR تحليل منحنى الذوبان لضمان خصوصية الإشارة. تم حساب التعبير النسبي لكل جين مهم عن طريق الاستقراء لمنحنى قياسي يتم تشغيله بشكل فردي على كل لوحة ومشتق من التخفيفات التسلسلية لعينة مجمعة من cDNA المرجعي ، وتم تطبيعه للتعبير النسبي عن الجينات المرجعية (البروتين الفوسفوري الريبوسومي الحمضي 36B4 للتعبير الجيني في النسيج تحت المهاد ، وبروتين الريبوسوم الميتوكوندريا L32 للتعبير في النواة المتكئة). تم استخدام متواليات التمهيدي التالية (IDT ، San Diego ، CA) لتضخيم الجرذان prepro-orexin و NPY و AGRP: Prepro-orexin ، Forward: 5′-TTCCTTCTACAAAGGTTCCCT-3 ′ ، 5′-GCAACAGTTCGTAGAGACGGCAG-3 ′ ؛ NPY: إلى الأمام ، 5- TACTCCGCTCTGCGACACTACATC-3 ′ ؛ عكس: 5′-CACATGGAAGGTCTTCAAGCC-3 ′ ؛ AGRP ، إلى الأمام: 5′-GCAGAAGGCAGAAGCTTGGC-3 ′ ؛ الخلف: 5′-CCCAAGCAGGACTCGTGCAG-3 ′.

cFos الكيمياء المناعية (ICC) والكمية

تم استخدام مضان ICC لتحديد أجسام الخلايا العصبية إيجابية FOS و AGRP في ما تحت المهاد الإنسي ، وفقا لمنهجية المعمول بها لدينا (Figlewicz et al.، 2011). في اليوم الأخير (يوم العلاقات العامة 10) ، تم وضع الفئران في غرف الإدارة الذاتية الخاصة بهم كالمعتاد لمدة 90 دقيقة. مباشرة بعد جلسة الـ 90 دقيقة الأخيرة ، تم تخدير الفئران بعمق باستنشاق أيزوفلوران وإعطائها 0.9٪ كلوريد الصوديوم متبوعًا بمحلول بارافورمالدهيد بارد 4٪. استند توقيت التخدير والقتل الرحيم على المسار الزمني المعروف لتعبير الذروة لبروتين cFos في 90-120 دقيقة بعد الحدث. وبالتالي فإن تعبير cFos سيعكس تنشيط الجهاز العصبي المركزي في بداية المهمة السلوكية ، بدلاً من أن يكون نتيجة للحيوانات التي تواجه المهمة. تمت إزالة الأدمغة وتثبيتها بعد ذلك في بارافورمالدهيد عدة أيام ، ثم تم وضعها لاحقًا في 20٪ سكروز- PBS ، ثم 30٪ محلول سكروز- PBS. تم تقسيم الأدمغة على ناظم ناظم (لايكا CM 3050S ناظم البرد) للكيمياء المناعية. استخدمنا منهجيتنا الراسخة لتقدير بروتين cFos المناعي في أقسام الدماغ (Figlewicz et al.، 2011). تم غسل المقاطع التاجية كاملة الدماغ 12 μm ذات الشرائح العريضة ثلاث مرات في محلول ملحي بالفوسفات (PBS ، OXOID ، Hampshire ، إنجلترا). تم غسل الأقسام لمدة 20 min باستخدام ماء 100٪ من الإيثانول / DI (50٪ ، v / v) متبوعًا بغسل PBS ، ثم تم حظره لمدة 1 ساعة في درجة حرارة الغرفة في برنامج تلفزيوني يحتوي على 5٪ من الماعز الطبيعي أو مصل الحمير. ثم تم غسلها عدة مرات في برنامج تلفزيوني وحضنت بين عشية وضحاها في 4 ° C في حلول الأجسام المضادة الأولية تتكون في برنامج تلفزيوني. تم غسل الأقسام ثلاث مرات في برنامج تلفزيوني ثم حضنت في الظلام في درجة حرارة الغرفة في محلول الأجسام المضادة الثانوية تتكون في برنامج تلفزيوني لمدة 1 ساعة. تم غسل المقاطع مرة أخرى لاحقًا في برنامج تلفزيوني ، وتم تركيبها وتراجعها في وسط تركيب مجموعة Vectashield الثابت (Vector ؛ Burlingame ، CA). تم الحصول على صور رقمية للأقسام باستخدام مجهر مضان نيكون Eclipse E-800 متصلاً بكاميرا التقاط رقمية Qimaging Retiga باستخدام برنامج NIS Elements (Nikon).

استنادًا إلى دراسات PCR التي أظهرت زيادة مستويات AGRP mRNA ، ركزنا على مناطق المهاد الأنسي ، وخاصة النواة البطنية والنواة المقوسة (ARC)). تم تقييم أقسام 12 μ المطابقة لأطلس من أجل تعبير cFos وكميتها في الأقسام والمناطق المتطابقة ، بناءً على أطلس باكسينوس واتسون [2005]. من أجل القياس الكمي (عند التكبير 40 ×) ، تم اختيار المناطق المطابقة للأطلس. تم استخدام برنامج NIS Elements (نيكون) لالتقاط صورة للمنطقة المرغوبة. تم تحديد منطقة للعد وتم إنشاء عتبة لتعداد الخلايا الإيجابية. تم استخدام المنطقة والخلفية المتطابقة (العتبة) لأقسام من المجموعات التجريبية المعنية ، ونُفذت عملية حسابية للخلايا الإيجابية (التقدير الكمي) في الجلسة نفسها لجميع المجموعات التجريبية ، لمنع التغييرات بين الجلسة في إعداد الخلفية. للتحليل الإحصائي ، تم أخذ التعداد من فأر فردي فقط في حالة توفر أقسام مقابلة أو كاملة في كل منطقة ؛ لم يتم أخذ البيانات الخاصة بمنطقة معينة من الفئران إذا كان هناك تمثيل ثنائي غير كامل لتلك المنطقة.

بالإضافة إلى التقدير الكمي لـ cFos ، تم إجراء كيمياء مناعية كمية مزدوجة التسمية لـ cFos و AGRP. نظرًا لأننا لم نرغب في إزعاج الأداء السلوكي للحيوانات ، لم تتم معالجتها مسبقًا بالكولشيسين لتحسين تصور AGRP. لذلك قد يتم التقليل من تصور تصور الخلايا العصبية الإيجابية AGRP. كان إجراء التلوين المزدوج لـ AGRP مشابهًا لمقايسة cFos-immunoreactivity من تلقاء نفسه ، باستثناء أنه تم حظر الأقسام لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة في مصل الحمير PBS-5 ٪. بعد ذلك ، تم استخدام خليط من الأجسام المضادة الأولية fos-Ab و AGRP للحضانة طوال الليل عند 4 درجات مئوية ؛ وبالمثل ، كان كلا من الأجسام المضادة الثانوية في نفس المحلول وحضنت لمدة ساعة في الظلام في درجة حرارة الغرفة. تم إجراء فحوصات التحسين الأولية لتحديد التخفيف المناسب للأجسام المضادة الأولية. كانت الأجسام المضادة الأولية المستخدمة هي الأرانب المضادة لـ cFos (1: 500) (sc-52) والماعز المضادة لـ AGRP (1: 100) (18634) (Santa Cruz Biotechnology ، Inc. ، Santa Cruz ، CA). كانت الأجسام المضادة الثانوية المستخدمة هي مضادات الأرانب المرتبطة بالحمار المترافق مع Cy3 (Jackson Immunoresearch ؛ West Grove ، PA) ، و Alexa fluor 488 Ant-goat IgG (مجسات جزيئية ، يوجين ، أوريغون) ؛ تم تخفيف جميع الأجسام المضادة الثانوية عند 1: 500.

تحاليل احصائية

يتم تقديم بيانات المجموعة كوسائل ± الخطأ المعياري للمتوسط ​​(SEM) في النص والجداول والأشكال. يتم تعريف الأهمية على أنها p 0.05. يتم إجراء مقارنات إحصائية بين المجموعات التجريبية ، كما هو معروض ضمن "النتائج" باستخدام اختبار الطالب غير المقيد (على سبيل المثال ، مقارنة النظام الغذائي أو العمر أو العلاج). يتم تعريف "تسوية" البيانات عند استخدامها.

تأثير اتباع نظام غذائي متوسط ​​الدهون على الدافع شبه البلوغي للسكروز

تناولت الفئران نظام الحمية الغذائية 31.8٪ من الدهون خلال أسبوع ، كان لدى 5-8 ، أثناء جلسات الإدارة الذاتية ، دافع مرتفع بشكل كبير للسكروز ، مقارنةً بالجرذان التي تمت تغذيتها بتناول الطعام. كما هو موضح في الشكل 1a، لم يكن هناك اختلاف في الأداء خلال التدريب الأولي لـ FR (متوسط ​​FRDays 1-10 المطابع للرافعة النشطة ، 38 ± 5 مقابل 39 ± 2 لنظام الحمية الدهنية Chow مقابل 31.8٪ ، على التوالي). ومع ذلك ، عندما تم تحويل الفئران إلى مهمة العلاقات العامة الأكثر صرامة ، كانت هناك زيادة كبيرة في عدد مكابس رافعة نشطة ، وعدد المكافآت السكروز التي اتخذت ، ولكن ليس في الطول الكلي للجلسة (الشكل 1b). لم يكن هناك أي تأثير للعلاج النظام الغذائي المزمن على عدد من مكابس رافعة غير نشط. عندما تم إطعام الفئران نظام غذائي عالي الدهون خلال WX 5-8 ولكن عاد بعد ذلك إلى حمية تشاو تم تناولها من خلال تدريب FR والعلاقات العامة خلال أسابيع 9-12 ، كان هناك اتجاه ولكن لم يكن هناك فرق كبير في مكابس رافعة نشطة. وبالتالي ، يبدو أنه لا يوجد أي تأثير سلوكي على نظام غذائي عالي الدهون معتدلة يتم استهلاكه خلال الفترة الزمنية المحيطة بالبلوغ. تم تلخيص بيانات معلمات العلاقات العامة لهذه الأتراب في الجدول 2. من أجل البدء في توضيح آلية (آليات) المساهمة في الزيادة التي يسببها النظام الغذائي في تحفيز السكروز ، أجرينا عددًا من قياسات الأيض و CNS.

  

الشكل 1

يتم زيادة العلاقات العامة بدافع الاستجابة لمكافآت السكروز في الفئران المحيطة بالحيوان التي تتغذى على حمية الدهون 31.8 ٪ (ن = 8). 1a. خلال جلسات FR ، لم يكن هناك أي تأثير للنظام الغذائي ، ولكن تأثير النظام الغذائي واضح عندما يتم تحويل الفئران إلى نموذج العلاقات العامة. 1b. البيانات هي ...

  

الجدول 2

تأثير حمية بيريوبرت عالية الدهن على أداء النسب التقدمية للسكروز

تأثير النظام الغذائي المعتدل الدهون العالية على المعلمات الأيضية

مباشرة بعد الانتهاء من الاختبار السلوكي ، تم تحديد تكوين الدهون في الجسم على الفئران التي كان تدخل النظام الغذائي والنموذج السلوكي خلال wks 5-8. ثم تلقت الفئران القنية الوريدية المزمنة لاختبارات تحمل الجلوكوز الوريدي (الواعية) (IVGTTs). في وقت لاحق ، تم الحصول على البلازما الصيام الطرفية والمصل لاتخاذ تدابير التمثيل الغذائي إضافية. كما هو موضح في الجدول 3، لم تكن هناك اختلافات في تكوين الجسم ، ووزن الجسم ، ومقاييس الأنسولين أو الجلوكوز الصيام ، وحساسية الأنسولين (حساب HOMA) أو ردود الفعل على IVGTT ، بين الفئران التي تغذيها الدواجن والتي تحتوي على نسبة عالية من الدهون. لم الصيام الطرفية اللبتين وقياسات الدهون الثلاثية لا تختلف بين المجموعتين. وبالتالي ، على الرغم من أن علاج النظام الغذائي كان له تأثير كبير على تحفيز السكروز ، إلا أنه يعكس استجابة سلوكية لدى الفئران التي تغذى على نسبة عالية من الدهون والتي تعاني من السمنة.

تأثير حمية معتدلة الدهون على الجهاز العصبي المركزي ومكافأة الكيمياء العصبية

بالإضافة إلى قياسات الأيض الطرفية ، تم قياس أدمغة من الفوج الذي كان له تدخل في النظام الغذائي والتدريب السلوكي خلال الأسابيع 5-8 لمقاييس النواة المتكافلة بالأمين (ن = 4 لكل مجموعة حمية) أو مستويات مرنا من ببتيدات orexigenic المهاد. كما هو موضح في الجدول 4، لم يكن هناك أي تأثير كبير على النظام الغذائي عالي الدهون على مستقلبات الدوبامين والنورادرين أو السيروتونين في النواة المتكئة ، وهو موقع مركزي للمكافأة والنشاط التحفيزي (إيكيموتو وبانكسيب ، 1996; كيلي وبريدج ، 2002) حيث يلعب كل من أنظمة الناقل العصبي هذه دورًا تنظيميًا رئيسيًا. ضمن المستخلصات تحت المهاد ، تم قياس مستويات الرنا المرسال من الببتيدات الأصلية ، NPY ، AGRP ، والأوريكسين. لوحظ اتجاه قوي ولكن غير مهم لزيادة AGRP في الفئران التي تتغذى على الدهون في هذه المجموعة (ن = 8 لأي نظام غذائي) ؛ لذلك كررنا نموذج التدريب على النظام الغذائي / السلوكي في مجموعة إضافية وقمنا بقياس NPY و AGRP و orexin mRNA في منطقة ما تحت المهاد. في المجموعات المجمعة ، لاحظنا زيادة كبيرة (p <0.05) في AGRP mRNA في الفئران التي تغذت على نظام غذائي عالي الدهون مقابل عناصر التحكم في الطعام (الشكل 2) ، ولكن لا يوجد تغيير كبير في تعبير NPY أو orexin. لتقييم الصلات المحتملة بين تعبير AGRP وسلوك الإدارة الذاتية ، قمنا بقياس الخلايا العصبية المناعية لـ cFos و AGRP في ما تحت المهاد العصبي المتوسط. تم إطعام مجموعات من الفئران الحمية الغذائية للدهون المشبعة أو 31.8٪ ؛ تم أخذ البعض من خلال بروتوكول الإدارة الذاتية (أسابيع 5-8) وتم التعامل مع الآخرين كعناصر تحكم سلوكية. الشكل 3a يوضح مثالًا على التوطين المشترك لـ cFos و AGRP في الخلايا العصبية النواة المقوسة. كما هو ملخص في الجدول 5، يرتبط تنشيط الخلايا العصبية AGRP (شارك في التعبير عن cFos-ICC و AGRP-ICC داخل الخلايا نفسها) مع نشاط الإدارة الذاتية. هذا يظهر في الشكل 3b، حيث يظهر عدد الخلايا العصبية المنشطة (cFos الإيجابية) كعدد الخلايا العصبية ، أو كنسبة مئوية من إجمالي الخلايا العصبية الإيجابية لـ AGRP: هناك تنشيط كبير للخلايا العصبية AGRP في السكروز ذاتي الجرذان ، مقابل عناصر التحكم في المناولة ، في مجموعات النظام الغذائي مجتمعة. أظهرت مقارنة العلاج داخل النظام الغذائي لعدد من الخلايا العصبية AGRP تفعيلها في مجموعة الإدارة الذاتية مقابل الضوابط التعامل مع الاتجاه الذي لم يصل إلى أهمية إحصائية (تشاو ، P = .078 ؛ 31.8 ٪ نظام غذائي للدهون ، P = .073) . الأهم من ذلك ، لا تربط هذه البيانات بين تنشيط الخلايا العصبية AGRP وسلوك الإدارة الذاتية فحسب ، ولكن بسبب توقيت قياس cFos (بعد دقائق من وضع الفئران في غرف الإدارة الذاتية الخاصة بها) ، يعكس تعبير cFos نشاط الخلايا العصبية AGRP في ترقب أو عند بداية نشاط الإدارة الذاتية. كان هناك اتجاه غير مهم لزيادة إجمالي الخلايا العصبية إيجابية AGRP في مجموعة الإدارة الذاتية (مقابل ضوابط المناولة ، P = 90). في تلك الفئران ، حيث تمت مطابقة ضغط الضغط بين مجموعات النظام الغذائي ، تم أيضًا مطابقة عدد الخلايا العصبية الإيجابية لـ AGRP. لم يكن هناك أي تأثير للعلاج النظام الغذائي وحده على عدد الخلايا العصبية إيجابية AGRP في الفئران السيطرة السلوكية.

  

الشكل 2

تأثير نظام غذائي يحتوي على 31.8٪ من الدهون على تعبير mRNA الببتيد الإنسي. يتم تطبيع البيانات بالنسبة للفئران التي تتغذى على نسبة عالية من الدهون (ن = 17) مقابل تلك الخاصة بعناصر التحكم في الطعام (ن = 16). يرتفع AGRP mRNA بشكل ملحوظ (p <0.05).

  

الشكل 3

تنشيط الخلايا العصبية AGRP في بداية الإدارة الذاتية السكروز. 3a. التوطين المشترك لـ cFos و AGRP في الخلايا العصبية المقوسة للنواة ، تكبير 60x. 3b. عدد الخلايا العصبية الفعالة المناعية لـ AGRP (تحت cFos-immunopositive) في ما تحت المهاد العصبي المتوسط ...

  

الجدول 4

نواة تتسرب من المستقلبات الأمينية

  

الجدول 5

Agrp تنشيط الخلايا العصبية: النظام الغذائي والعلاج السلوكي

تأثير إدارة AGRP على تحفيز السكروز

تفسيرنا لهذا الاستنتاج هو أن تعبير AGRP في الفئران البلوغية هو آلية أساسية تقوم عليها الإدارة الذاتية للسكروز المعززة للفئران عالية الدسم التي تتغذى على النظام الغذائي. للتأكد من فعالية AGRP لزيادة الدافع للسكروز ، كانت تدار AGRP عن طريق البطين الثالث لجرذان الفئران شبه البلعمية المغذية خلال جزء العلاقات العامة من النموذج السلوكي. كان نظام الجرعة هذا الخاص بـ AGRP عتبة فرعية لتحفيز تناول الطعام خلال أسبوعين من نموذج العلاقات العامة ، ولكنه أدى إلى زيادة كبيرة في إدارة سكروز ذاتي ، كما هو مبين في الشكل 4. (لاحظ أن كل مكافأة سكروز لها محتوى من السعرات الحرارية 0.1 kcal ، وبالتالي فإن نشاط الإدارة الذاتية للسكروز يساهم في الحصول على سعرات حرارية ضئيلة في إجمالي الاستهلاك اليومي.) الجدول 6 يعرض بيانات معلمة الإدارة الذاتية عبر نموذج العلاقات العامة لـ 9-day ، مع حقن AGRP أو aCSF ICV في أيام 2 و 5 و 8. في الفئران التي عولجت بـ AGRP ، زاد عدد مكابس الرافعة النشطة بشكل كبير بشكل عام عبر PR Days 2-10 (p = 0.03) ، وفي أيام غير الحقن (p = 0.048) مع اتجاه نحو زيادة في (المتوسط) أيام الحقن. بالإضافة إلى ذلك ، تمت زيادة وقت التوقف (الذي يعكس إجمالي الوقت المستغرق في مهمة الإدارة الذاتية) زيادة كبيرة في أيام غير الحقن (ع = 0.02) مع اتجاهات نحو زيادة إجمالية ، وفي أيام الحقن. تم زيادة عدد مكافآت السكروز بشكل عام عبر PR Days 2-10 (p = 0.03). لم يكن هناك أي تأثير للعلاج AGRP على ضغط رافعة غير نشط ، مقارنة مع الضوابط المعالجة aCSF ، أو بين أيام الحقن وغير حقن. تدعم النتائج تفسيرًا للتأثير المستدام لـ AGRP لزيادة الإدارة الذاتية للسكروز: ضغطت الفئران أكثر على ذراع المكافأة ، وحصلت على المزيد من مكافآت السكروز ، وقضت وقتًا أطول في المشاركة في المهمة.

  

الشكل 4

البطين الثالث (ICV) AGRP (0.01 nmol) يحفز الإدارة الذاتية للسكروز في نموذج العلاقات العامة ، ولكن ليس له أي تأثير على المدخول اليومي من الطعام خلال فترة الدراسة (PR Days 2 — 10 ، مع الحقن في أيام 2 و 5) . يتم التعبير عن بيانات AGRP (n = 8) ...

  

الجدول 6

تأثير ICV AGRP مقابل aCSF على أداء النسب التقدمية للسكروز

تأثير مرحلة الحياة على التفضيل والتحفيز للسكروز

في التجربة النهائية ، قمنا بتقييم ما إذا كان الدافع للسكروز يختلف بين فئران البلوغ والبالغين. في البداية ، تم منح الفئران القديمة 5 و 10-wk اختبار تفضيل السكروز مع خيارات الحلول التي تتراوح من 0 إلى 20٪ sucrose ، قبل بدء اختبار الإدارة الذاتية والتدريب. كما هو موضح في الشكل 5a، وتمشيا مع النتائج الواردة في الأدبيات ، بدا أن الفئران قبل البلوغ تفضل حلاوة أكثر حلاوة من الفئران البالغة: فمعظم الجرذان قبل البلوغ تناولت ذروة تناول محلول سكروز 20٪ ، في حين أظهرت الفئران البالغة مدخولها الذروة من 15 ٪ السكروز. بعد ذلك ، تم تقسيم كلتا الفئتين العمريتين بين تشاو الفئران والنظام الغذائي عالي الدهون خلال التدريب والاختبار في الإدارة الذاتية. كانت هناك زيادة صغيرة ولكنها ذات دلالة إحصائية في عدد مكابس الرافعة النشطة من قبل الفئران شبه البلوغية مقابل الفئران البالغة (45 ± 3 مقابل 37 ± 2 ، p = 0.05) تم حسابها في متوسط ​​جلسات FR ، دون فرق في عدد المكافآت السكروز أو عدد من المطابع على رافعة غير نشطة. كما هو موضح في الشكل 5b، كان هناك تأثير إجمالي مهم للغاية للعمر ، عبر جلسات العلاقات العامة ، مع زيادة الضغط الفعال بشكل كبير للضغط على البلوغ (n = 15) مقابل فئران البالغين (n = 14) (2-way ANOVA ، PRDay × age) ؛ تأثير العمر ، P = 0.017 ، لا يوجد تأثير مستقل لـ PRDay ، لا يوجد تفاعل كبير). كان هناك اتجاه نحو تأثير أكبر للعمر في الحالة الغذائية التي تحتوي على نسبة عالية من الدهون ولكن هذا لم يحقق دلالة إحصائية (P = .13). الجدول 7 يسرد المعلمات السلوكية للعلاقات العامة: بالإضافة إلى زيادة الضغط على ذراع الرافعة النشطة ، تلقت الفئران حول البلوغ مكافآت السكروز بشكل ملحوظ ، وأظهرت اتجاهًا نحو زيادة وقت التوقف. بالإضافة إلى ذلك ، كان لدى الفئران شبه البلوغية زيادة صغيرة ولكنها مهمة في الضغط على ذراع غير نشط (أي غير مجزية) ، على الرغم من أن كلا من الفئران شبه البلوغية والكبار ، كان عدد مكابس الرافعة غير النشطة حوالي 10٪ تقريبًا من العدد من يضغط رافعة نشطة. هذه النتائج تشير إلى أن الفئران شبه البلورية تفضل وستسعى بشغف إلى الحصول على الأطعمة ذات المذاق الحلو ، ويمكن تضخيم التأثير بخلفية حمية عالية الدهون.

  

الشكل 5

زادت جرذان الأحداث من تحفيز مكافآت السكروز مقارنة بفئران البالغين. 5a. اختبارات تفضيل السكروز للأحداث (شبه البلوغ ، ن = 15) والشباب البالغ (ن = 14) الفئران. تناولت الفئران 30 min للشرب من مجموعة التركيزات (0-20٪ sucrose). ...

  

الجدول 7

تأثير العمر على أداء النسب التدريجية^a لسكروز

وأيد هذا البحث من قبل NIH منح DK40963. ديان فيجليفيتش لاتيمان ، كبيرة الباحثين في مجال البحث العلمي ، برنامج أبحاث المختبرات الطبية الحيوية ، قسم نظام الرعاية الصحية بوغيت ساوند ، سياتل ، واشنطن. تم دعم ستيفن بينوا من قبل المعاهد الوطنية للصحة DK066223 وشركة Ethicon Endosurgery Inc. ويشكر المؤلفون الدكتور تامي ولدن هانسون لدعمهم قياسات تكوين الجسم. الدكتور وليام بانكس ولوسي ديلمان للحصول على الدعم مع قياسات الدهون الثلاثية. وآمالي ألفر ، وسامانثا توماس نادلر للمساعدة في الدراسات السلوكية.

• Andersen SL، Teicher MH. الإجهاد ، والفترات الحساسة والأحداث الزوجية في اكتئاب المراهقين. الاتجاهات في علم الأعصاب. 2008، 31: 183-191. [مجلات]
• Aponte Y، Atasoy D، Sternson SM. الخلايا العصبية AGRP كافية لتنظيم سلوك التغذية بسرعة وبدون تدريب. طبيعة علم الأعصاب. 2011، 14: 351-355. [بك المادة الحرة] [مجلات]
• Barnes MJ، Argyropoulos G، Bray GA. يتم حظر التفضيل على اتباع نظام غذائي عالي الدهون ، ولكن ليس فرط البلع بعد تنشيط مستقبلات الأفيون مو في الفئران بالضربة القاضية AgRP. أبحاث الدماغ. 2010، 1317: 100-107. [بك المادة الحرة] [مجلات]
• Bolaños CA، Barrot M، Berton O، Wallace-Black D، Nestler EJ. ميثيلفينيديت العلاج خلال مرحلة ما قبل وفترة ما حول فترة البلوغ يغير الاستجابات السلوكية للمنبهات العاطفية في مرحلة البلوغ. الطب النفسي البيولوجي. 2003، 54: 1317-1329. [مجلات]
• Bolaños CA، Glatt SJ، Jackson D. Subsensitivity to dopaminergic drugs in periadolescent الفئران: تحليل سلوكي والكيمياء العصبية. أبحاث الدماغ أبحاث الدماغ التنموية. 1998، 111: 25-33. [مجلات]
• Brandon CL، Marinelli M، Baker LK، White FJ. تعزيز التفاعل والقابلية للتعرض للكوكايين بعد معالجة الميثيلفينيديت في الفئران المراهقة. Neuropsychopharmacology. 2001، 25: 651-61. [مجلات]
• Brandon CL، Marinelli M، White FJ. يؤدي تعرض المراهقين إلى الميثيلفينيديت إلى تغيير نشاط الخلايا العصبية الدوبامين في الفئران. الطب النفسي البيولوجي. 2003، 54: 1338-1344. [مجلات]
• Broberger C ، و Johansen J ، و Johansson C ، و Schalling M ، و Hokfelt T. دوائر الدماغ المرتبطة بالبروتين Y / agouti المرتبطة بالجينات (AGRP) في فئران طبيعية ومعقمة بالجلوتامات أحادية الصوديوم. وقائع الأكاديمية الوطنية للعلوم. 1998، 95: 15043-15048. [بك المادة الحرة] [مجلات]
• Cason AM ، Smith RJ ، Tahsili-Fahadan P ، Moorman DE ، Sartor GC ، Aston-Jones G. دور orexin / hypocretin في البحث عن المكافآت والإدمان: الآثار المترتبة على السمنة. علم وظائف الأعضاء والسلوك. 2010 ؛ 100: 419-428. [بك المادة الحرة] [مجلات]
• Choi DL، Davis JF، Fitzgerald ME، Benoit SC. دور orexin-A في الحافز الغذائي ، وسلوك التغذية القائم على المكافأة وتفعيل الخلايا العصبية التي يسببها الغذاء في الفئران. علم الأعصاب. 2010، 167: 11-20. [مجلات]
• Cizza G، Brown RJ، Rother KI. ارتفاع معدل الإصابة وتحديات مرض السكري في مرحلة الطفولة. مراجعة مصغرة. مجلة التحقيق الغدد الصماء. 2012 epub قد 8 ، 2012. [بك المادة الحرة] [مجلات]
• كولدويل إس إي ، أوزوالد تي كيه ، ريد د. تختلف علامة النمو بين المراهقين الذين يفضلون نسبة السكر العالية مقابل المنخفضة. علم وظائف الأعضاء والسلوك. 2009 ؛ 96: 574-580. [بك المادة الحرة] [مجلات]
• Davis JF، Choi DL، Benoit SC. الأنسولين ، اللبتين والمكافأة. الاتجاهات في الغدد الصماء والتمثيل الغذائي. 2010، 21: 68-74. [بك المادة الحرة] [مجلات]
• Davis JF، Choi DL، Schurdak JD، Fitzgerald MF، Clegg DJ، Lipton JW، Figlewicz DP، Benoit SC. ينظم اللبتين توازن الطاقة والتحفيز من خلال العمل في دوائر عصبية متميزة. الطب النفسي البيولوجي. 2011a، 69: 668-674. [بك المادة الحرة] [مجلات]
• ديفيس جيه إف ، تشوي دل ، شورداك جد ، كراوس إي جي ، فيتزجيرالد إم إف ، ليبتون جي دبليو ، ساكاي آر آر ، بينوا إس سي. تعدل الميلانوكورتينات المركزية النشاط القشري المتوسطي وسلوك البحث عن الطعام في الفئران. علم وظائف الأعضاء والسلوك. 2011b ؛ 102: 491-495. [بك المادة الحرة] [مجلات]
• Davis JF، Tracy AL، Schurdak JD، Tschop MH، Clegg DJ، Benoit SC، Lipton JW. التعرض لمستويات مرتفعة من الدهون الغذائية يخفف من المكافأة النفسية ودوبامين ميزوليمبيك في الفئران. علم الأعصاب السلوكي. 2008، 122: 1257-1263. [بك المادة الحرة] [مجلات]
• ديسور جا ، بوشامب GK. التغييرات الطولية في التفضيلات الحلوة لدى البشر. علم وظائف الأعضاء والسلوك. 1987 ؛ 39: 639-641. [مجلات]
• Desor JA، Greene LS، Maller O. Preferences for sweet and salty in 9- to 15-year and human للبالغين. علم. 1975، 190: 686-687. [مجلات]
• Drewnowski A. كثافة الطاقة ، استساغة ، والشبع: الآثار المترتبة على السيطرة على الوزن. مراجعات التغذية. 1998، 56: 347-353. [مجلات]
• Figlewicz DP، Bennett JL، Aliakbari S، Zavosh A، Sipols AJ. يعمل الأنسولين في مواقع مختلفة من الجهاز العصبي المركزي لتقليل تغذية السكروز الحاد والإدارة الذاتية للسكروز في الفئران. المجلة الأمريكية لعلم وظائف الأعضاء. 2008، 295: R388-R394. [بك المادة الحرة] [مجلات]
• Figlewicz DP ، Bennett JL ، Naleid AM ، Davis C ، Grimm JW. يقلل الأنسولين داخل البطيني واللبتين من الإدارة الذاتية للسكروز في الفئران. علم وظائف الأعضاء والسلوك. 2006 ؛ 89: 611-616. [مجلات]
• Figlewicz DP، Bennett-Jay JL، Kittleson S، Sipols AJ، Zavosh A. Sucrose self-management and CNS activation in the rat. أنا ياء. 2011، 300: R876-R884. [بك المادة الحرة] [مجلات]
• Figlewicz DP ، Ioannou G ، Bennett Jay J ، Kittleson S ، Savard C ، Roth CL. تأثير تناول المحليات بشكل معتدل على صحة التمثيل الغذائي في الفئران. علم وظائف الأعضاء والسلوك. 2009 ؛ 98: 618-624. [بك المادة الحرة] [مجلات]
• Figlewicz DP، Sipols AJ. الإشارات التنظيمية للطاقة ومكافأة الطعام. علم الصيدلة والكيمياء الحيوية والسلوك. 2010، 97: 15-24. [بك المادة الحرة] [مجلات]
• Frangioudakis G، Gyte AC، Loxham SJ، Poucher SM. اختبار تحمل الجلوكوز عن طريق الوريد في فئران ويستار القنية: طريقة قوية للتقييم المباشر لإفراز الأنسولين المحفّز بالجلوكوز. مجلة الطرق الدوائية والسمية. 2008، 57: 106-113. [مجلات]
• Hagan MM، Rushing PA، Pritchard LM، Schwartz MW، Strack AM، Van Der Ploeg LHT، Woods SC، Seeley RJ. تشمل الآثار طويلة المدى للجرثومة الناتجة عن AgRP- (83-132) آليات أخرى غير حصار مستقبلات الميلانوكورتين. المجلة الأمريكية لعلم وظائف الأعضاء. 2000، 279: R47-R52. [مجلات]
• Hahn TM، Breininger JF، Baskin DG، Schwartz MW. تعايش Agrp و NPY في الخلايا العصبية السفلية المنشطة للصيام. طبيعة علم الأعصاب. 1998، 1: 271-272. [مجلات]
• نسبة Hodos W. التقدمية كمقياس لقوة المكافأة. علم. 1961، 134: 943-944. [مجلات]
• Ikemoto S ، Panksepp J. الانفصال بين الاستجابات الشهية والتكميلية عن طريق التلاعب الدوائي لمناطق الدماغ ذات الصلة بالمكافأة. علم الأعصاب السلوكي. 1996، 110: 331-345. [مجلات]
• Jewett DC، Cleary J، Levine AS، Schaal DW، Thompson T. Effects of neuropeptide Y، insulin، 2-deoxyglucose، and الحرمان من الطعام على السلوك الذي تحركه الأطعمة. علم الأدوية النفسية. 1995، 120: 267-271. [مجلات]
• ينظم Kaushik S و Rodriguez-Navarro JA و Arias E و Kiffin R و Sahu S و Schwartz GJ و Cuervo AM و Singh R. Autophagy in neurons AgRP hypothalamic metal food وتوازن الطاقة. استقلاب الخلية. 2011، 14: 173-183. [بك المادة الحرة] [مجلات]
• Kelley AE، Berridge KC. علم الأعصاب من المكافآت الطبيعية: ملاءمة للأدوية الادمان. مجلة علم الأعصاب. 2002، 22: 3306-3311. [مجلات]
• Kelley SP، Nannini MA، Bratt AM، Hodge CW. Neuropeptide-Y في النواة paraventricular يزيد من الإيثانول الإدارة الذاتية. الببتيدات. 2001، 22: 515-522. [بك المادة الحرة] [مجلات]
• Kohli R، Boyd T، Lake K، Dietrich K، Nicholas L، Balistreri WF، Ebach D، Shashidkar H، Xanthakos SA. تقدم سريع من ناش في الطفولة. مجلة أمراض الجهاز الهضمي للأطفال والتغذية. 2010، 50: 453-456. [بك المادة الحرة] [مجلات]
• Krashes MJ، Koda S، Ye CP، Rogan SC، Adams AC، Cusher DS، Maratos-Flier E، Roth BL، Lowell BB. يؤدي التنشيط السريع القابل للعكس للخلايا العصبية من AgrP إلى تغذية سلوك التغذية في الفئران. مجلة التحقيقات السريرية. 2011، 121: 1424-1428. [بك المادة الحرة] [مجلات]
• مينيلا JA ، Pepino MY ، ريد د. المحددات الوراثية والبيئية للإدراك المر والتفضيلات الحلوة. طب الأطفال. 2005، 115: 216-222. [بك المادة الحرة] [مجلات]
• مايرز KP ، Sclafani A. تطوير تفضيلات النكهة المستفادة. علم النفس التنموي. 2006، 48: 380-388. [مجلات]
• المعهد القومي للسرطان برنامج البحوث التطبيقية. مصادر السعرات الحرارية من السكريات المضافة بين سكان الولايات المتحدة ، 2005-06. تم تحديث 21 ديسمبر 2010. [تم الوصول إلى 21 September 2011] ؛ 2010 متاح من: http://riskfactor.cancer.gov/diet/foodsources/added_sugars/
• Nixon JP، Zhang M، Wang CF، Kuskowski MA، Novak CM، Levine JA، Billington CJ، Kotz CM. تقييم نظام التصوير بالرنين المغناطيسي الكمي لتحليل تكوين الجسم كله في القوارض. بدانة. 2010، 18: 1652-1659. [بك المادة الحرة] [مجلات]
• أوغدن CL ، كارول MD. قسم الدراسات الاستقصائية للصحة والتغذية. انتشار السمنة بين الأطفال والمراهقين: الولايات المتحدة ، اتجاهات 1963-1965 من خلال 2007-2008. [تم الوصول إلى 21 September 2011] ؛ الصحة E-Stat. 2010 2010 متاح من: http://www.cdc.gov/nchs/fastats/overwt.htm.
• Paxinos G، Watson C. أطلس دماغ الفئران في إحداثيات التجسيمي. 5th. San Diego CA: Elsevier Academic Press؛ 2005.
• ريتشاردسون NR ، روبرتس دي سي. جداول النسبية التدريجية في دراسات الإدارة الذاتية للعقار في الفئران: طريقة لتقييم فعالية التعزيز. مجلة طرق علم الأعصاب. 1996، 66: 1-11. [مجلات]
• Roitman MF، Stuber GD، Phillips PE، Wightman RM، Carelli RM. يعمل الدوبامين كمشرف ثانوي للبحث عن الطعام. مجلة العلوم العصبية. 2004، 24: 1265-1271. [مجلات]
• Rossi M، Kim M، Morgan D، Small C، Edwards C، Sunter D، Abusnana S، Goldstone A، Russell S، Stanley S، Smith D، Yagaloff K، Ghatei M، Bloom S. A C-terminal fragment of Agouti- البروتين المرتبط يزيد من التغذية ويؤثر على تأثير هرمون ألفا الميلانوسيت المنشط في الجسم الحي. الغدد الصماء. 1998، 139: 4428-4431. [مجلات]
• Stanhope KL. دور السكريات المحتوية على الفركتوز في أوبئة السمنة ومتلازمة التمثيل الغذائي. المراجعات السنوية للطب. 2012، 63: 329-343. [مجلات]
• Sturman DA ، Mandell DR ، Moghaddam B. المراهقون يظهرون اختلافات سلوكية عن البالغين أثناء التعلم والإنقراض. علم الأعصاب السلوكي. 2010، 124: 16-25. [بك المادة الحرة] [مجلات]
• Tracy AL، Clegg DJ، Johnson JD، Davidson TL، Woods SC. يزيد مضادات الميلانوكورتين AgRP (83-132) من الاستجابة الشهية للدهون ، ولكن ليس للكربوهيدرات ، معزز. الصيدلة الكيمياء الحيوية ، والسلوك. 2008، 89: 263-271. [بك المادة الحرة] [مجلات]
• Vartanian LR، Schwartz MB، Brownell KD. آثار استهلاك المشروبات الغازية على التغذية والصحة: ​​مراجعة منهجية وتحليل تلوي. الجريدة الامريكية للصحة العامة. 2007، 97: 667-75. [بك المادة الحرة] [مجلات]