يؤدي استهلاك الحمية الغربية في الفترة المحيطة بالولادة إلى اللدونة الغاشمة والتغييرات النمطية في GABAergic ضمن ممر الهايبوتلاماس والمكافأة من الولادة إلى النضج الجنسي في الجرذ (2017)

ملخص

استهلاك الأمهات في الفترة المحيطة بالولادة من الطاقة الغذائية الكثيفة يزيد من خطر السمنة عند الأطفال. ويرتبط هذا مع الاستهلاك المفرط للطعام مستساغ التي يتم استهلاكها لممتلكاتها hedonic. لا تزال الآلية الضمنية التي تربط الغذاء بين الأمهات حول الولادة وتفضيل الأبناء للوزن غير مفهومة بشكل جيد. في هذه الدراسة ، نهدف إلى دراسة تأثير التغذية الحمية الغنية بالدهون / عالية السكر [النظام الغذائي الغربي (WD)] أثناء الحمل والرضاعة على مسارات المكافأة التي تتحكم في إطعام الفئران من الولادة إلى مرحلة النضج الجنسي. أجرينا متابعة طولية لنسل WD ونسل التحكم في ثلاث فترات زمنية حرجة (الطفولة والمراهقة والبلوغ) وركزنا على دراسة تأثير التعرض للولادة للنظام الغذائي المستساغ على (1) تفضيل الدهون ، (2) المظهر الجانبي للتعبير الجيني ، و (ج) التغييرات العصبية / المعمارية من شبكات الدوبامين mesolimbic. لقد أظهرنا أن التغذية WD المقيدة في فترة ما حول الولادة لها تأثير واضح وطويل الأمد على تنظيم دارات الدماغ المتماثلة والمتعجلة ولكن ليس على تفضيل الدهون. أظهرنا فترة محددة من تطور تفضيل الدهون التي ترتبط بتواقيع معينة من الجزيئات الدماغية. في نسل من السدود تغذية WD ، لاحظنا خلال فترة الطفولة وجود تفضيل الدهون المرتبطة مع ارتفاع التعبير عن الجينات الرئيسية المشاركة في أنظمة الدوبامين (DA) ؛ في مرحلة المراهقة ، تفضيل عالي الدهون لكلا المجموعتين ، يتقلص تدريجيًا خلال اختبار الأيام 3 لمجموعة WD ويرتبط بتعبير منخفض للجين الرئيسي المشترك في أنظمة DA لمجموعة WD التي يمكن أن تشير إلى آلية تعويضية لحمايتها من التعرض لمزيد من الدهون. وأخيرا في مرحلة البلوغ ، تفضيل الدهون التي كانت مماثلة لفئران السيطرة ولكنها ترتبط بتعديل عميق في الجينات الرئيسية المشاركة في شبكة حمض أمينيوبتيريك، ومستقبلات السيروتونين وحمض polysialic-NCAM المعتمد على إعادة الهيبوتالاموس. وإجمالًا ، تكشف هذه البيانات أن WD WD ، الذي يقتصر على فترة ما حول الولادة ، ليس له تأثير دائم على توازن الطاقة وتفضيل الدهون في وقت لاحق من الحياة على الرغم من أن إعادة عرض قوية للمسار المستقر والمتمثل في سلوك تناول الطعام قد حدث. ستكون هناك حاجة إلى المزيد من التجارب الوظيفية لفهم مدى أهمية هذه الدوائر في إعادة التصميم.

: الكلمات المفتاحية مكافأة ، DOHaD ، تفضيلات غذائية ، تغذية ، γ-aminobutyric acid ، مجموعة TaqMan منخفضة الكثافة

المُقدّمة

من المعترف به الآن أن البيئة والأحداث في الحياة المبكرة تسهم في الاستعداد للصحة والمرض في وقت لاحق من الحياة (-). تم اقتراح مفهوم البصمة الأيضية لوصف كيف يمكن للتغيرات في البيئة الغذائية والهرمونية خلال فترة ما حول الولادة أن تؤهب النسل إلى السمنة والأمراض المرتبطة بها في وقت لاحق. وهناك قضية مهمة من أسلوب الحياة الغربية لدينا هو overnutrition نتيجة لاستهلاك الطاقة الغذائية الكثيفة. في الواقع ، فإن الأفراد الذين يتعرضون إلى تناول الأمهات لهذا النوع من الطعام يكونون أكثر عرضة للإصابة بالبدانة ومتلازمة الأيض (, ). وقد أظهرت العديد من الدراسات أن النظام الغذائي عالي الدهون (HFD) من خلال الحمل والإرضاع له تأثير طويل الأجل على الأيض النسل (-). بالإضافة إلى المسارات المتضمنة في تنظيم التمثيل الغذائي ، تلعب أنظمة مكافآت الدماغ أيضًا دورًا مهمًا في سلوك التغذية (, ). يتم تغيير neolotransmission ، Medolimbic الدوبامين (DA) ، درس بشكل مكثف في سياق مكافأة والإدمان ، في السمنة الناجمة عن النظام الغذائي في كل من البشر (-) والحيوانات (-). تتطور توقعات DA ، إلى حد كبير ، بعد الولادة () ، وبالتالي قد يتأثر تطورها بالنظام الغذائي المبكر. على مدى السنوات القليلة الماضية ، أثبتت التجارب على القوارض أن تناول HFD الأمومي يعزز التغذية لطفلي في النسل (, ). على الرغم من أن هذه الملاحظة تنطوي على بعض التغييرات في وظيفة نظام DA (-) ، تتوفر بيانات محدودة تتعلق بتطور الجنين وإعادة عرض مسارات المكافأة أثناء الحياة المبكرة (). علاوة على ما إذا كان عدم تأثر جزء التشوير غير DA لنظام المكافآت مثل GABA (نظام am-aminobutyric acid) بالإجهاد التغذوي في الفترة المحيطة بالولادة غير موثق. في الواقع ، يبدو أن الخلايا العصبية GABA تلعب دورًا رئيسيًا في المكافأة والنفور. منطقة tegmental بطني (VTA) الخلايا العصبية GABA تلقي نمط مماثل من المدخلات من مناطق الدماغ المختلفة () ، والدراسات السلوكية المستندة إلى optogenetic الأخيرة تسليط الضوء على الدور الرئيسي لل VTA GABA في النفور مكان مشروط () وبمكافأة السلوك الاستثنائي (). يتكون Nucleus accumbens (NAc) بشكل أساسي من إسقاط الخلايا العصبية الشوكية المتوسطة GABAergic ويعمل كواجهة بينية وحركية تجمع إشارات ناشئة عن النظام الحوفي وتحولها إلى عمل بواسطة الإخراج إلى الشاحبة البطنية (VP) وغيرها من المستجيبات الحركية (). وأخيرًا ، ما تحت المهاد الذي يتكون من العديد من اتصالات GABA في LH () ونواة arcuate ، يدمج إشارات الجوع والشبع ().

تهدف هذه الدراسة إلى التعرف على تأثير تناول الحمية الغربية للأم في نسل الفئران من الولادة إلى النضج الجنسي (1) على تفضيل الدهون (2) على صورة التعبير الجيني لنظام DA ، ونظام GABAergic ومرونة ما تحت المهاد (hypothalamus). ، و (3) على التغييرات العصبية / المعمارية من شبكات الدوبامين mesolimbic لنفس الفترة. لذلك قمنا بتقييم ، على دراسة طولية (من الفطام ، P25 ، إلى النضج الجنسي ، P45 والبلوغ ، P95) ، تأثير WD WD على نمو وزن الجسم والنمو الشحمي للنباتات أبقى تحت الطعام بانتظام بعد الفطام. بشكل متزامن ، أجرينا اختبار تفضيل الدهون متبوعًا بتحليل ترانسكريبوميك مكرس وتحليل مكون أساسي لاحق (PCA) لمجموعة مختارة من الواسمات الخاصة بآليات تناول الطعام ، وأنظمة الاختيار والتحفيز. نتائجنا أثرت بشكل كبير النتائج الأخيرة التي تركز على البرمجة الغذائية لنظام DA.

مواد وطرق

بيان الأخلاق

أجريت جميع التجارب وفقا لتوجيهات لجنة رعاية الحيوان المحلية ، والاتحاد الأوروبي (التوجيه 2010 / 63 / الاتحاد الأوروبي) ، والمعهد الوطني للبحوث الزراعية (باريس ، فرنسا) ، والطب البيطري الفرنسي (A44276). تمت الموافقة على البروتوكول التجريبي من قبل لجنة الأخلاقيات المؤسسية وسجلت تحت المرجع APAFIS 8666. تم اتخاذ كل الاحتياطات لتقليل الضغط وعدد الحيوانات المستخدمة في كل سلسلة من التجارب.

الحيوانات والحمية

تم الحفاظ على الحيوان في دورة 12 h / 12 h / الظلام في 22 ± 2 ° C مع الطعام والماء libitum الإعلانية. تم شراء اثنتين وثلاثين أنثى جرذان Sprague-Dawley (وزن الجسم: 240 – 290 g) في يوم الحمل 1 (G1) مباشرة من Janvier (Le Genest Saint Isle، France). تم إسكانها بشكل فردي وإطعام إما نظام غذائي (CD) (5٪ fat fever و 0٪ sucrose) لـ 16 منها أو WD (21٪ fat fever و 30٪ sucrose) لـ 16 منها خلال فترة الحمل والإرضاع (انظر الجدول Table1: 1: تكوين النظام الغذائي في المئة سعرة حرارية من ABDiet Woerden ، هولندا). عند الولادة ، تم تعديل حجم القمامة لثمانية جرو في القمامة بنسبة 1: 1 من الذكور إلى الإناث. أبقينا 12 من السدود 16 مع القمامة تتألف من الذكور 4 وإناث 4 لكل مجموعة. في الفطام (P21) ، تم الاحتفاظ بالنسل المولود من سدود CD و WD في الطعام القياسي حتى نهاية التجربة (الأرقام (Figures1A، B) .1A، B). تم تسجيل وزن الجرو عند الولادة وبعد ذلك كل يوم في 10: 00 am حتى P21 (الفطام). بعد الفطام وحتى نهاية التجربة ، تم تقييم الفئران كل أيام 3. نقدم البيانات عن ذرية الذكر فقط. تم استخدام الجرذان الإناث لدراسة أخرى (الشكل (Figure11).

الجدول 1 

تكوين النظام الغذائي في نسبة السعرات الحرارية من كل عنصر من مكونات النظام الغذائي الأمهات تدار أثناء الحمل والرضاعة والحمية القياسية للنسل.
الشكل 1 

تصميم تجريبي. (A) رسم تخطيطي لتصميم الدراسة. تم تغذية اثنين وثلاثين أنثى جرذان SPD في يوم الحمل 1 (G1) إما نظام غذائي السيطرة على 16 منهم أو اتباع نظام غذائي غربي للآخرين خلال فترة الحمل والرضاعة. في الفطام ، ذرية ...

السلوك (اختبار اختيار الزجاجة)

تمت دراسة ثلاث مراحل تطور حرجة (P21 إلى P25: juvenile ، P41 إلى P45: المراهقة و P91 إلى P95: البالغون الشباب). الجراء الذكور 24 (n = 12 لكل مجموعة) تم اختيارها عشوائيًا ووضعها في قفص فردي لإجراء اختبار مجاني من زجاجتين (الأشكال (Figures1A، B) 1أ ، ب) (-). تم استخدام هذا الاختبار لدراسة الجاذبية نحو طعم الدهون على وجه التحديد عن طريق فصله عن المذاق الحلو وأكبر قدر ممكن من التأثير الاستقلابي للسعرات الحرارية. في الواقع ، يرتبط استهلاك محلول زيت الذرة 1٪ مع تناول 0.09 kcal / ml فقط. بعد يوم واحد من التعود على وجود زجاجتين ، تم تنفيذ الاختبار خلال أيام 2 في P25 وعلى مدى أيام 4 في P41 و P91 (الشكل (Figure1A) .1ا). في التفاصيل ، في الفطام (P21) ، تم إيواء الجراء 24 بشكل فردي لمدة أيام 2 (الشكل (Figure1A): 1A): يوم 1 ، مرحلة التعود ، يوم 2 ، تم إعطاء الفئران خيارًا مجانيًا من زجاجتين بين مستحلب زيت الذرة 1٪ في 0.3٪ صمغ الزانث (Sigma Aldrich ، St. Quentin Fallavier ، فرنسا) وحل زانتان اللثة ( 0.3٪). في P41 و P91 ، تم استخدام الجراء 24 واقترح اختيار حر اثنين من زجاجة لمدة ثلاثة أيام متتالية. تم تسجيل استهلاك حل زانتان اللثة وحل الطعم (زيت الذرة 1٪) يومياً في 11: 00 am for 3 days (P45 and P95). كان مقلوب الموقف من القنينتين يوميا لمنع الانحياز تفضيل الموضع. تم حساب درجة تفضيل الدهون على أنها نسبة حجم "محلول الدهون" المستهلكة إلى الحجم الإجمالي المستهلك في 24 h. تم الحفاظ على جميع الفئران تحت حمية غذائية قياسية في جميع أنحاء الاختبار السلوكي.

جمع الأنسجة وأخذ عينات الدم

اليوم التالي لليوم الأخير من اختبار الاختيار المجاني المكون من زجاجتين ، نصف الفئران (n = 6 لكل مجموعة) تم التخلص منها بسرعة بين الساعة 09:00 و 12:00 صباحًا بواسطة CO2 استنشاق. تم جمع الدم في أنابيب مع EDTA (Laboratoires Léo SA ، St Quentin en Yvelines ، فرنسا) وطرده عند 2,500 g لـ 15 min عند 4 ° C. تم تجميد البلازما في −20 ° C. تم تشريح الأعضاء ومستودع الدهون البربريتون الفردية وزنها. تمت إزالة الدماغ بسرعة ووضعها في مصفوفة الدماغ (WPI ، ساراسوتا ، فلوريدا ، الولايات المتحدة الأمريكية الفئران 300 - 600 ز). أولاً تم تشريح الهيبوتالام [وفقاً لإحداثيات الأطلس في باكسينوس: −1.0 إلى −4.5 mm من Bregma ()] ، ومن أجل كل فأر ، تم الحصول على شريحتين إكليتيتين من سمك 2 مم على مستوى NAc وآخر على مستوى VTA. تم الحصول على عينات من اليمين واليسار NAc واليمين الأيمن والأيسر VTA (أربع عينات في المجموع لكل حيوان) باستخدام اثنين من اللكمات مختلفة (مختبرات Stiefel ، Nanterre ، فرنسا) (قطر 4 ملم لل NAc و 3 ملم لدماغ الدماغ المتوسط). تم قطع العينات المجمدة في النيتروجين السائل وتخزينها في −80 ° C لتحديد لاحقة من التعبير الجيني بواسطة مجموعة TaqMan منخفضة الكثافة (TLDA).

الفئران الأخرى (n = 6 لكل مجموعة) تم تخديرها بعمق باستخدام بنتوباربيتال (150 مجم / كجم في البوصة) وتم ترطيبها بنضح ملحي فسيولوجي عبر القلب متبوعًا ببارافورمالدهيد المثلج 4٪ في محلول الفوسفات (PB) ، ودرجة الحموضة 7.4. تمت إزالة الأدمغة بسرعة ، وغمرها في نفس المثبت لمدة ساعة واحدة عند 1 درجات مئوية ، وأخيراً تخزينها في 4٪ PB سكروز لمدة 25-24 ساعة. تم بعد ذلك تجميد الأدمغة في الأيزوبنتان عند درجة حرارة -48 درجة مئوية ، وتم تخزينها أخيرًا عند -60 درجة مئوية حتى الاستخدام. تم قطع NAc و hypothalamus و VTA إلى 80 ميكرون من الأقسام الإكليلية التسلسلية مع ناظم البرد (Microm ، Microtech ، Francheville ، فرنسا). تم إجراء سلسلتين أو ثلاث سلاسل من 20 شرائح زجاجية تحتوي على 10-4 أقسام لكل منطقة من مناطق الدماغ. لكل شريحة زجاجية ، تكون المقاطع التسلسلية متباعدة بمقدار 6 ميكرومتر (الشكل (Figure66).

الشكل 6 

الكمي للخلايا العصبية الموجبة TH / NeuN في منطقة tegmental البطنية (VTA) وألياف الكثافة TH في النواة المتكئة (NAc) من الفطام إلى البلوغ في النسل من النظام الغذائي الغربي (WD) أو نظام غذائي تغذى (CD) تغذى السدود. (A) مخطط من Paxinos و Watson ...

تحليل البلازما البيوكيميائية

تم استخدام البلازما EDTA التي تم جمعها على P25 ، P45 ، و P95 لقياس جلوكوز البلازما ، NEFA (الأحماض الدهنية غير esterified) ، الأنسولين ، و leptin. تم قياس الجلوكوز و NEFA باستخدام التفاعلات الأنزيمية اللونية مع مجموعات محددة (الجلوكوز وأطقم NEFA PAP 150 ، BioMérieux ، Marcy-l'Etoile ، فرنسا). تمت معايرة الهرمونات بمجموعات محددة من ELISA بعد إرشادات الشركة المصنعة للأنسولين و leptin (الأنسولين الجرذان / الفأر ELISA kit، جرذ leptin ELISA kit، Linco Research، St. Charles، MO، USA).

المناعية

تم حظر الشرائح الزجاجية التي تحتوي على مقاطع VTA و NAc التسلسليين لأول مرة لـ 3 – 4 h ومن ثم تم تحضينها خلال الليل في 4 ° C مع مزيج من الأجسام المضادة التالية: الماوس anti-NeuN (1: 500؛ IgM؛ Millipore Bioscience Research Reagents، Merk، الولايات المتحدة الأمريكية) وأرانب anti-TH (1: 1,000؛ Millipore Bioscience Research Reagents، Merk، USA). بعد الحضانة مع الأجسام المضادة الأولية والغسيل اللاحق مع PB ، تم تحضين الأقسام في خليط من الأجسام المضادة الثانوية: Alexa 488 حمار مضاد للفئران IgM و Alexa 568- حمار مضاد للأرانب IgG (1: 500 ؛ Invitrogen ، ThermoFisher Scientific ، Waltham ، MA ، الولايات المتحدة الأمريكية) لـ 2 h. تم تركيب المقاطع في سوبيرفروست بالإضافة إلى شرائح الذهب (ThermoFisher Scientific ، Waltham ، MA ، الولايات المتحدة الأمريكية) ، تم تجفيفها بالهواء ، وتم تغطيةها باستخدام كاشف Prolong ™ Gold antifade (Invitrogen ، ThermoFisher Scientific ، Waltham ، MA ، الولايات المتحدة الأمريكية).

TH Neurons Count in VTA

لكل فئران ، تم حساب خلايا TH-positive كما هو موضح سابقًا () عند ثلاثة مستويات روستوكودية مختلفة من VTA: عند مستوى خروج العصب الثالث (المسافة بالنسبة لـ Bregma: −5.3 mm) ، 200 µm rostral و 200 cam الذيلية إلى هذا المستوى (الأرقام (Figures6A) .6ا). بالنسبة إلى الجانب الأيسر والجانب الأيمن ، تم الحصول على صورة رقمية تضم VTA بالكامل من الجهاز الطرفي الملحق إعلاميًا إلى الحدود الجانبية للدماغ باستخدام التكبير × 40 لماسح ضوئي رقمي NanoZoomer-XR C12000 (هاماماتسو ، اليابان). تم رسم خط حول محيط VTA لكل مقطع. تم اختيار الحدود من خلال فحص شكل الخلايا والإشارة إلى أطلس Paxinos و Watson. تم تعريف الخلايا العصبية الدوبامينية كجسم خلية neun (+) / TH (+) immunoreactive مع نواة مرئية بوضوح. باستخدام برنامج NIH Image J (مكون إضافي مضاد للخلية) ، تم عد الخلايا NeuN (+) / TH (+) من قبل شخصين مختلفين بدون معرفة بمجموعات الحيوانات. تم تصحيح أخطاء عد الخلايا المنقسمة باستخدام صيغة Abercrombie ()، أين N = n[t/(t + d)] (N = العدد الإجمالي للخلايا ؛ n = عدد الخلايا المحسوبة ؛ t = سمك القسم و d = قطر الخلية) ، وكان عامل التصحيح هذا 0.65. يتم التعبير عن البيانات على أنها متوسط ​​[NeuN (+) / TH (+) في اليسار واليمين VTA] ± SEM.

كثافة الالياف في NAc

تم تقدير محتوى البروتين TH في محطات الأعصاب الدوبامينية في NAc عن طريق تحليل قياس الكثافة التشريحية للأقسام مناعية TH. تم تحديد كثافة الألياف TH في ثلاثة مستويات عشوائية على طول محور Rostrocaudal من NAc (Bregma 2.20 ، 1.70 ، و 1.20 مم) (الشكل (Figure6B) .6ب). باختصار ، صورة رقمية رقمية تضم المخطط بأكمله و NAc تم الحصول عليها باستخدام تكبير 40 لماسح ضوئي رقمي NanoZoomer-XR C12000 تم الحصول على (هاماماتسو ، اليابان). بالنسبة إلى NAc معين ، تم رسم خط حول النواة بأكملها لتحديد مساحة قياس الكثافة البصرية (OD) (الشكل (Figure6B) .6ب). تم تطبيع القيمة التي تم الحصول عليها مع قيمة OD التي تم قياسها من منطقة دائرية مرسومة على الجسم الثفني (وهي منطقة غير ملطخة للكيمياء المناعية TH) من نفس القسم باستخدام برنامج NIH Image J. يتم التعبير عن البيانات كمتوسط ​​لنسبة OD (قيمة التطوير التنظيمي في قيمة NAc / OD في الجسم الثفني للأجزاء الثلاثة) ± SEM.

التعبير الجيني من قبل TLDA و TaqMan

تم عزل الحمض النووي الريبي (RNA) من NAc المجمدة (Snap-frozen NAc) ، وعينات VTA المخصّصة ، و hypothalamus ، باستخدام مجموعة NucleoSpin RNA / protein (Macherey-Nagel ، Hoerdt ، فرنسا). تم تقديم مجموع الحمض النووي الريبي إلى الهضم الدايني بعد تعليمات الشركة الصانعة ، وتم تقدير الكمية من قبل 260 / 280 nm UV الممتص ، وتم تقييم الجودة باستخدام نظام Agilent 2100 Bioanalyzer ، ثم تم حساب رقم سلامة RNA (RIN). تم تجاهل العينات مع RIN تحت 8. تم نسخ عكسي واحد ميكروغرام من مجموع الحمض النووي الريبي إلى cDNA باستخدام مجموعة RT عالية السعة (Applied Biosystems، Foster City، CA، USA) في الحجم الإجمالي لـ 10 µl.

كما هو موضح سابقا () ، و TLDA عبارة عن بطاقة Micro-fluidic جيدة لـ 384 والتي يمكن من خلالها تنفيذ 384 في وقت واحد في الوقت الفعلي PCRs (Applied Biosystems، Foster City، CA، USA). استخدمنا TLDA المصممة خصيصا لتغطية مختلف عائلات الجينات ذات الصلة باللدونة وتنظيم كمية الطعام. تم تكوين كل بطاقة مخصصة كخطوط تحميل 2 × عينة 4 تحتوي على غرف تفاعل 2 48 (المرجع: 96a). مجموعة جين 92 (جدول S1 في المواد التكميلية) ودرست أربعة جينات التدبير المنزلي (18S ، Gapdh ، Polr2a ، و Ppia). تم تنفيذ PCR في الوقت الحقيقي باستخدام كواشف Life Technologies TaqMan وتشغيلها على نظام الكشف التسلسلي ABI Prism 7900HT (Applied Biosystems، Foster City، CA، USA). تم جمع بيانات الفلورة الخام من خلال PCR باستخدام برنامج SDS 2.3 (Applied Biosystems ، فوستر سيتي ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية) ، والتي أدت إلى زيادة دورات العتبة Ct مع تحديد تلقائي لكل من خط الأساس والعتبة. بعد التصفية باستخدام ThermoFisher cloud App (ThermoFisher ، الولايات المتحدة الأمريكية) للتمييز بين عمليات PCR الشاذة ، كانت المقايسات لكل عينة n = 6 (n = 5 لمجموعة WD في P25). ثم تم تحليل البيانات باستخدام تطبيق ThermoFisher Cloud (ThermoFisher ، الولايات المتحدة الأمريكية) من أجل القياس النسبي. استند التقدير النسبي للتعبير الجيني (RQ) على طريقة Ct المقارنة باستخدام المعادلة RQ = 2-ΔΔCtحيث كان ΔΔCt لهدف جين واحد هو تباين Ct الخاص به تم طرحه من عينة تدريج وتطبيع مع تحكم داخلي. على وجه التحديد ، حددنا جين التدبير الإداري الأكثر استقرارا باستخدام خوارزمية geNorm (ThermoFisher Cloud App RQ ، ThermoFisher ، الولايات المتحدة الأمريكية). من بين أربعة جينات التدبير المنزلي ، تم تعريف Gapdh بأنها السيطرة الذاتية ل NAc و hypothalamus ، و Ppia ل VTA وهذا ينطبق على جميع العينات من الفترات الزمنية الثلاث التي تم تحليلها. تم تصميم التمثيل البياني لتعبير الجينات يدويًا لتعيين لون واحد لزيادة 10٪ للتعبير الجيني نسبة إلى مجموعة الأقراص المضغوطة. وقد لوحظ وجود اختلاف كبير ، باستخدام اختبار رتبة غير مألوف ويلكوكسون ، مع علامة النجمة.

التحليل الإحصائي

يتم التعبير عن النتائج على أنها تعني ± SEM في الجداول والأشكال. تم استخدام اختبار مان-ويتني غير بارامترية لتحليل وزن الجسم في نقاط زمنية مختلفة ، تفضيلات الدهون ، ونسبة OD التي تم الحصول عليها من الكيمياء المناعية.

لتقييم أهمية تفضيلات الدهون في أيام 3 ، أجرينا تحليلاً إحصائيًا لكل عمود في كل يوم. بالنسبة لكل مجموعة ، تم اختبار استهلاك محلول الحل والمحلول الدهني باستخدام اختبار رتبة غير مميّزة في ويلكوكسون. قارنا قيمة متوسط ​​التفضيل بالقيمة الافتراضية لـ 50٪ (الخط الأحمر المنقط). ولوحظ وجود اختلاف كبير مع علامة النجمة الحمراء. استخدمنا نفس الاختبار لتحليل قيمة QQR RQ ؛ قارنا متوسط ​​قيمة RQ مع القيمة الافتراضية لـ 1. ولوحظ وجود اختلاف كبير مع علامة النجمة (الشكل (Figure44).

الشكل 4 

التعبير الجيني النسبي في النواة المتكئة (NAc) ، المنطقة القطبية البطنية (VTA) ، و hypothalami من الفئران المغذية للغذاء في الفترة المحيطة بالولادة والغربية ، واتباع نظام غذائي يحكم بالفترة المحيطة بالولادة على الفئران في ثلاث فترات زمنية. التقدير الكمي للتعبير عن الجينات في ...

بالنسبة لتحليل عينات البلازما ، أجرينا اختبارًا غير معنوي لمان وويتني. تم تحليل عدد خلايا TH-positive مع ANOVA ثنائية الاتجاه و ANOVA p تم حساب القيمة. بسبب تعدد الاختبارات المنفذة ، بونفتروني اللاحق تم تطبيق التصحيح يتبع فقط هذا الاختبار. تم إجراء التحليل الإحصائي باستخدام برنامج Prism 6.0 (GraphPad Software Inc.، La Jolla، CA، USA).

تم إجراء PCA غير خاضع للإشراف لأول مرة على معلمات 130 (TLDA ، والسلوك ، وبيانات البلازما) في نقطة زمنية مختلفة لكل خرامة خزعة دماغية (VTA ، NAc ، و hypothalamus) لتصور البنية العامة لمجموعة البيانات (أي ثلاث وحدات PCA عالمية لكل نقطة زمنية). يمكن تعريف PCA على أنه الإسقاط المتعامد للبيانات على مساحة خطية أبعاد أقل ، بحيث يتم تضاعف تباين البيانات المسقطة إلى الحد الأقصى في الفضاء الجزئي. قمنا في البداية بتصفية الجينات التي لا يتم التعبير عنها أو التعبير عنها قليلاً (الشكل (Figure5) .5). ظهرت قيم النسل من السدود التي تغذيها الأقراص المدمجة ومن السدود التي تغذيها WD في ألوان مختلفة في مخططات PCA الفردية لتصور ما إذا كانت هاتين المجموعتين التجريبيتين منفصلتين بشكل جيد عن طريق مكونات PCA غير الخاضعة للرقابة. يفصل هذا التحليل مجموعات الجينات التي يتم التعبير عنها بشكل تفاضلي بين مجموعتي النسل. في وقت لاحق ، تم إجراء PCAs ركزت على مجموعة مختلفة من علامات مرنا: اللدونة (التصاق الخلية ، الهيكل الخلوي ، عامل التغذية العصبية ، synaptogenesis ، والتنظيم النسخ) ، مسار DA ، GABAergic المسار ، والمفارقات اللاجينية (هيستون deacetylase وترانس أسيتيل ترانسفيراز). وتسمح هذه التراكيب المحورية المركزة للشخص بالتصوير في وقت واحد للعلاقة بين الأنظمة الغذائية للأمهات وبعض العلامات والارتباطات بين جينات أسرية معينة. تم استخدام مقياس نوعي لتحليل PCA وتركيز PCA: +++: فصل جيد جدًا. ++: فصل جيد مع فأر واحد على الجانب الخاطئ من فصل الـ PCA ؛ +: فصل جيد جدا مع اثنين من الفئران (واحدة من كل مجموعة) على الجانب الخطأ ، -: لا يوجد فصل واضح.

الشكل 5 

تحليل المكون الرئيسي (PCA). يسجل مؤامرة مبعثر من PCA (A، B). (A) Global PCA from nucleus accumbens (NAc) samples of p95 rat male. المثلثات السوداء تتوافق مع ذرية من السيطرة على النظام الغذائي (CD) تغذية السدود ومثلثات حمراء تتوافق مع ذرية ...

النتائج

وزن الجسم والنمو

لم يؤثر مدخول WD الأمومي أثناء الحمل (من G1 إلى G21) على وزن الجراء عند الولادة (الشكل (Figure2) 2) (CD: 6.55 ± 0.07 g vs WD: 6.54 ± 0.05 g p = 0.9232) (الأشكال (Figures2A، B) .2A، B). زيادة وزن الجسم من الولادة إلى الفطام كانت أعلى بـ 21٪ في النسل المولود من سدود WD مقارنة بالنسل من سدود CD مع وزن جسم أعلى بشكل كبير عند الفطام في النسل الذي ولد من سد WD (36.19 ± 0.90 g vs 47.32 ± 1.48 g p <0.001) (شكل (Figure2C) .2C). من الفطام إلى نهاية التجربة (P95) ، تم تغذية الفئران بنظام غذائي قياسي ، وظل وزن الجسم أعلى بالنسبة للنسل من سد WD أكثر من نسل سدود CD. في التفاصيل: خلال فترة المراهقة (P39) (الأرقام (Figures2A، D)، 2A ، D) ، CD: 176.8 ± 3.3 g vs WD: 192.2 ± 3.3 g p = 0.0016 وفي P93 (شاب بالغ) (الأشكال (Figures2A، E) 2A ، E) CD: 478 ± 9.9 g vs WD: 508.6 ± 10.3 g p = 0.0452.

الشكل 2 

تطور أوزان الجسم النسل من الولادة إلى سن البلوغ. (A) يوم وزن الجسم 0 حتى اليوم 100. فترة الرضاعة في فترات حمراء وفاتحة بعد الولادة (ج) في مرحلة الطفولة ، (د) مرحلة المراهقة ، و (ه) الشباب في الرمادي. على منحنى النمو ، ذرية الذكر من السيطرة على النظام الغذائي ...

الهرمونات والعلامات الأيضية في فترة زمنية مختلفة

تم قياس لبتين البلازما ، الأنسولين ، الجلوكوز ، وتركيزات NEFA في P25 ، P45 ، و P95. في جميع الأعمار ، لم تكن مستويات الجلوكوز في البلازما و NEFA و leptin لنمو WD مختلفة إحصائياً عن ذرية CD (جدول) (Table2,2, n = 6 لكل مجموعة). لاحظنا زيادة كبيرة في ترسب الدهون (نسبة كتلة الدهون خلف الصفاق) على النسل من السدود التي تغذيها WD في P25 فقط (p = 0.0327 ، اختبار مان وويتني).

الجدول 2 

نسبة كتلة الدهون الرجعية البريتوني وجرعة البلازما: الجلوكوز. الأنسولين ، NEFA ، و leptin.

تأثير WD في الفترة المحيطة بالولادة على تفضيل الدهون من الفطام إلى البلوغ

لاستكشاف تأثير WD على تفضيل الدهون ، استخدمنا نموذج اختيار من زجاجتين في ثلاث نقاط زمنية مختلفة أثناء النمو. تم استخدام هذا الاختبار لدراسة تفضيل الذوق الدهني بشكل خاص عن طريق تجنب أكبر قدر ممكن من التأثير الاستقلابي لابتلاعه. أظهرنا أن الاختلافات في كمية السعرات الحرارية "الزائدة" من الزجاجة (في P25 و P45 و P95) ليست ذات دلالة إحصائية بين المجموعات (الأرقام S1A - C في المواد التكميلية). وعلاوة على ذلك ، يؤدي الاختلاف في استهلاك محاليل زيت الذرة 1٪ إلى زيادة السعرات الحرارية بنسبة 1٪ لجرذان WD في P25 (WD: 4.9٪ مقابل CD: 3.9٪ من السعرات الحرارية المبتلعة) و 0.5٪ لجرذان CD في P45 (WD: 2٪ vs CD: 2.5٪ of calories ingested) (Figures S1D – F في المواد التكميلية). في P25 ، ليس لدى الجراء من سدود CD أي تفضيل للدهون (44.87 ± 9.8٪ ، p = 0.339) ؛ على فئران WD المقابلة يفضل الدهون (75.12 ± 8.04٪ ، p = 0.039 بعد اختبار تصنيف موقع ويلكوكسون ، علامة النجمة الحمراء). علاوة على ذلك ، هناك فرق إحصائي بين المجموعتين p = 0.0347 (اختبار Mann and Whitney ، علامة التجزئة السوداء) (الشكل (Figure33ا).

الشكل 3 

التطور التطوري لتفضيل الدهون من الفطام إلى البلوغ. (A) أول يوم لتفضيل الدهون في P25 و P45 و P95. تم استخدام مجموعات مختلفة من الحيوانات في كل نقطة زمنية (n = 6 / مجموعة / نقطة زمنية). (B) ثلاثة أيام متتالية من الدهون ...

في P45 و P95 ، تتمتع المجموعتان بتفضيل هام للدهون ، أي يختلفان بشكل كبير عن القيمة النظرية لـ 50٪ (في P45 ، CD: 80.68 ± 2.2٪ p = 0.0005 و WD: 78.07 ± 3.25٪ p = 0.0005 ؛ في P95 ، CD: 74.84 ± 8.4٪ p = 0.0425 و WD: 69.42 ± 8.9٪ p = 0.109 بعد اختبار تصنيف موقع ويلكوكسون ، علامة النجمة الحمراء) (الشكل (Figure3A) .3ا). كانت قيم المجموعتين لا يمكن تمييزها بعد يوم واحد من عرض الذوق (في P45 p = 0.7857 وفي P95 p = 0.9171 اختبار مان ويتني) (الشكل (Figure33ا).

لمعرفة كيفية تنظيم الفئران استهلاك الدهون مع مرور الوقت ، كررنا العرض الدهون لمدة ثلاثة أيام متتالية في P45 و P95 (أرقام (Figures3B، C) .3قبل الميلاد). ومن المثير للاهتمام في P45 ، فقدت الذكور فقط من سد WD تدريجيا تفضيل الحل الدهون (الشكل (Figure3B) 3B) (اليوم الثالث: 53.12 ± 8.36٪ p = 0.851 بعد اختبار تصنيف موقع ويلكوكسون). ومع ذلك ، في P95 (سن البلوغ) ، فضلت جميع الحيوانات الدهون دون أي تطور خلال اختبار 3 أيام (الشكل (Figure33C).

باختصار ، في هذا النموذج ، لاحظنا ، في مرحلة مبكرة (الطفولة) ، تفضيل الدهون في الجرذان التي تغذيها سدود WD مع عدم الاهتمام التدريجي مع مرور الوقت خلال فترة المراهقة. لاحظنا عدم وجود فرق بين المجموعتين من الفئران في مرحلة البلوغ.

التوقيع الجزيئي لدونة الدماغ ودوائر GABA في مجال الممرات Hypothalamus و Reward Pathways

لتحديد ما إذا كان تناول WD من الأمهات أثناء الحمل والرضاعة له تأثير على المهاد ومكافأة مسارات النسل ، قمنا بقياس التعبير النسبي للعديد من العوامل الرئيسية لدقة الدماغ ونمذجة الدماغ وعلامات الدارات العصبية المتورطة في تناول الطعام والتخلل اللاجيني. المنظمين. استخدمنا TLDA لتحليل وفرة هذه الخلايا في مناطق الدماغ المختلفة (مثل الوطاء ، VTA ، NAc) (الجدول S1 في المواد التكميلية) في الفترات الزمنية الثلاث. تم إجراء الفحص بعد اختبارات اختيار الزجاجة اثنين في P25 ، P45 ، و P95 (الشكل (Figure1) 1) على ستة ذكور ولدوا من سد WD fed وستة من الذكور ولدوا من سدود تغذية CD.

في P25 في الوطاء ، عرضت خمس جينات من ثلاث عشرة فئة مختلفة مستوى تعبير mRNA أقل بشكل رئيسي في علامات اللدونة وعلامات GABA تتراوح بين −20٪ (Gfap) و −40٪ (Gabra5) في الجراء من السدود التي تغذيها WD مقارنة بالفئران من سد سى دى. في خزعات مسار المكافأة (VTA و NAc) ، عرضت جيناتان مستويات إحصائية أعلى من mRNA (D2R و Gabra1) ، أي ، DA و GABA مستقبلات DA وجين واحد تعبير أقل (Hcrtr2) (أي ، مستقبل orexin 2) في NAc ، في حين عرضت أربعة جينات مستوى التعبير مرنا أعلى بكثير (Map2 ، Gabara1 ، Hcrtr1 ، و Hcrtr2) (أي علامات اللدونة ، مستقبلات GABA ومستقبلات السيروتونينية) في VTA (الشكل (Figure44).

في P45 في الوطاء ، عرضت خمس جينات من ثلاث عشرة فئة مختلفة مستوى تعبير mRNA أقل يتراوح بين −20٪ (Fos) و −50٪ (FosB) في الجراء من سدود WD fed مقارنة بالفئران من السدود المغذية CD. في P45 في خزعات مسار المكافأة ، عرضت أربعة جينات أعلى مستوى التعبير مرنا (Gfap ، دات ، Cck2r ، و Kat5) واثنين من الجينات التعبير أقل (Fos و FosB) في NAc في حين عرضت ثلاثة جينات مستوى التعبير أقل مرنا (قوس ، FosB ، و Th) وجين واحد مستوى أعلى (Gabrg2) في VTA.

في P95 في الوطاء ، عرضت جينات 20 من ثلاث عشرة فئة مختلفة مستوى أعلى للتعبير mRNA يتراوح بين + 20 و + 40٪ (Syt4 إلى Gjd2) وعرضت جينات 3 تعبير mRNA أقل (FosB و D1r و Gabarb1) في الجراء من WD تغذى السدود مقارنة مع الفئران من السدود تغذية CD. في P95 في خزعات مسار المكافأة ، عرضت جينات 12 مستوى تعبير mRNA أعلى يتراوح بين + 20 و + 40٪ (Syn1 إلى Hcrt1) وجين 1 تعبير أقل (Th) في NAc ، عرضت جينات 6 مستوى تعبير mRNA أعلى (Ncam1 GTA1 و Gjd2 و Gabra5 و Htr1a و Htr1b) و 6 عرض مستوى تعبير mRNA أقل (Cntf و Igf1 و Fos و Socs3 و Gabrb2 و Hdac3) في VTA.

ثم أجرينا ثلاثة من الـ PCA غير الخاضع للإشراف المطابق لخزعة الدماغ الثلاثة باستخدام جميع المعلمات الكمية (مثل ، جرعة البلازما ، والبيانات السلوكية وتغيرات التعبير mRNA). تم الحصول على فصل واضح من المجموعتين فقط في P95 ل NAc و VTA (الجدول (Table33).

الجدول 3 

تحليل المكون الرئيسي (PCA): التحليل النوعي لفصل مجموعة PCA للـ PCA العالمية وتركيز PCA.

وفقا لدائرة الارتباط PCA وبيانات TLDA (تمثل غالبية المتغيرات المتضمنة في PCA) ، قمنا بتعريف العائلات الجينية التي يمكن أن تكون مسؤولة عن الفصل وأدت PCA مركزة (الأرقام (Figures5A، B، 5أ ، ب ، على سبيل المثال). كشفت PCA المركزة أنه في علامات P25 DA في NAc وعلامات اللدونة في منطقة ما تحت المهاد يمكن فصل مجموعتي النسل (الجدول (Table33 للملخص). ولم يتم الحصول على أي تمييز من هذا القبيل في P45. ومع ذلك ، أظهر نفس التحليل في P95 أن العلامات المختلفة لنظام GABA في NAc و hypothalamus ، بالإضافة إلى علامات اللدونة (في الوطاء ، NAc و VTA) والمنظمين اللاجينية (فقط في NAc) تساهم في فصل المجموعتين من الحيوانات ( الشكل (Figure5، 5. الطاولة Table33).

يكشف هذا التحليل التأثير الطويل الأمد لنظام غذائي في الفترة المحيطة بالولادة على علامات GABAergic بالإضافة إلى اللدونة والعلامات اللاجينية في كل من المسار المتجانس ومسار الثراء المتورطين في سلوك التغذية.

وأكد Immunohistochemistry من خلايا TH تحاليل النص

نظرًا لأننا لاحظنا بعض الاختلاف في mRNA في NAc و VTA في الفترات التطويرية المختلفة ، استهدفنا ربط هذه النتائج بـ immunostaining TH. تم تحليل عدد الخلايا الإيجابية TH / NeuN في VTA حيث توجد أجسام الخلايا الدوبامينية وتم تحديد كمية OD من TH immunolabeling في النهايات العصبية الموجودة في NAc. كانت TH (+) خلايا أقل وفرة في VTA لـ WD مقارنة بجرذان CD في P45 فقط (الأرقام (Figures6A، C، E، 6أجاد؛ الشكل S2أ في المواد التكميلية). لم يكن هناك تفاعل معنوي بين مستوى القسم وتقدير TH / NeuN في الفترات الثلاث (P25 p = 0.9991 ، P45 p = 0.9026 و P95 p = 0.9170). في P45 فقط ، تم الحصول على فرق إحصائي بين مجموعتي النسل (p = 0.0002) (الشكل (Figure6E) .6E). بالإضافة إلى ذلك ، لاحظنا عدم وجود اختلاف في OD من immunostaining TH في NAc في P25 و P45 بين المجموعتين (قيم نسبة OD في P25: 1.314 ± 0.022 في CD مقابل 1.351 ± 0.026 في WD ، p = 0.2681 ؛ قيم نسبة OD عند P45: 1.589 ± 0.033 في القرص المضغوط مقابل 1.651 ± 0.027 في WD ، p = 0.1542). ومع ذلك ، تم العثور على انخفاض كبير في OD لنهايات العصب TH في NAc من مجموعة WD عند P95 (قيم نسبة OD عند p95: 1.752 ± 0.041 في القرص المضغوط مقابل 1.550 ± 0.046 في WD ، p = 0.0037) (الأشكال (Figures6B، D، F، 6B، D، F، الشكل S2ب في المواد التكميلية).

مناقشة

في هذه الدراسة ، افترضنا أن التغذية المحيط بالولادة في الفترة المحيطة بالولادة ستؤثر على برنامج تطوير مسارات المكافأة المتضمنة في توازن الطاقة ، واختيار الطعام ، وتناول الطعام للنسل. درسنا على نطاق واسع تأثير تناول WD الأمهات من الولادة إلى الفطام على GABA ، السيروتونين ، ومسارات DA لمناطق معينة من الدماغ (VTA ، NAc ، و hypothalamus) في النسل ، من الطفولة إلى مرحلة البلوغ. تشير نتائجنا إلى أن استخدام نظام غذائي غني بالدهون والحلوى ، مقيد بدقة في فترة ما حول الولادة ، له تأثير على التفضيل المبكّر للدهون (الطفولة) في النسل المرتبط بالتغيّر في صورة التعبير الجيني والتغييرات العصبية / المعمارية للميسبوليب شبكات الدوبامين. ومع ذلك ، عندما تم الحفاظ على النسل تحت نظام غذائي ، لاحظنا في الفئران المراهقين WD المغذية فقدان تدريجي من جاذبية نحو الدهون التي ترتبط مع انخفاض التعبير عن جينات نظام DA وانخفاض طفيف في الخلايا العصبية TH- إيجابية في VTA . في وقت لاحق في الحياة لم يكن تفضيل الدهون مختلفًا بين المجموعات على الرغم من أن اللدونة المهمة لشبكات GABAergic وشبكة توازن الطاقة في الوطاء قد تم تحديدها في الفئران من سدود WD fed (الشكل (Figure77).

الشكل 7 

ملخص رسومي. NAc، nucleus accumbens؛ VTA ، منطقة tegmental بطني.

التأثير الأول لمقدار ما قبل الولادة - WD الذي لاحظناه في هذه الدراسة هو زيادة وزن الجسم للنسل عند الفطام ولكن لا فرق عند الولادة. في الواقع ، فإن الحيوانات من مجموعة WD تكسب 21٪ وزنا أكبر من CD في نهاية فترة المص. قدمت دراسات سابقة نتائج متضاربة فيما يتعلق بالتغيير في الوزن عند الولادة بالنسبة للنسل من السدود التي تغذيها WD: ارتفاع وزن الجسم (, ) ، وزن أقل للجسم (, , ) أو لا فرق (, ). تتوافق بياناتنا مع تحليل التحوف التلوي الحديث (أجريت على منشورات 171 التجريبية التي خلصت إلى أن التعرض لأمراض الحمى الثلاثية الأمومية لم يؤثر على وزن المولود عند الولادة ولكنه أدى إلى زيادة وزن الجسم في نهاية فترة الرضاعة. ارتفاع وزن الجسم لنسل WD ربما يعكس تغير في تركيب الحليب و / أو إنتاج الحليب الذي تم توضيحه في المطبوعات السابقة (, ). وفقًا لارتفاع وزن الجسم ، كانت نسبة الدهون خلف الصفاق من نسل WD أعلى بكثير من ذرية CD في نهاية فترة الرضاعة (P25، Table) Table2)، 2) ، والذي يتوافق أيضًا مع الدراسات السابقة (, ). ومع ذلك ، فإن ارتفاع السمنة لم يستمر في P45 و P95 ، ولم تختلف معاملات التمثيل الغذائي الأخرى مثل الأنسولين ، NEFA ، والبلازما الجلوكوز بين المجموعات. أظهرت نتائجنا أنه بدون السمنة الواضحة أثناء الحمل والرضاعة ، فإن النظام الغذائي بحد ذاته لا يكفي لتحفيز التأثيرات الأيضية الدائمة في النسل (, , ).

تم الإبلاغ عن أن تناول الحمض النووي في الفترة المحيطة بالولادة يرتبط ارتباطًا إيجابيًا بتفضيل النسل للأطعمة المستساغة (). في دراستنا ، أجرينا دراسة طولية تهدف إلى اختبار تفضيل الدهون على النسل التي يتم فطامها في الطعام العادي.

تأثير WD في الفترة المحيطة بالولادة على الطفولة (بعد الفطام)

تلتقط صغار القوارض الطعام الصلب 19-20 بعد الولادة (عندما تكون مسارات المكافأة الدماغية لم تنضج بعد). ولذلك كان من المثير للاهتمام للغاية دراسة تفضيلهم المبكر جدا للدهون وربط هذا التفضيل المبكر مع تحليل نصوص الدماغ. فقط بعد الفطام ، لاحظنا تفضيلًا للدهون في ذرية WD التي لم يتم إثباتها في الجرذان CD. وهذا يتماشى مع تقارير أخرى تظهر وجود صلة بين سوء التغذية في الفترة المحيطة بالولادة وتفضيل الغذاء المستساغ وتفضيل منخفض للدهون في سن مبكرة لجرذان التحكم ().

لم تسمح PCA العالمية بتمييز مجموعة الجراء فيما يتعلق بالنظام الغذائي للأم في هذا السن. ومع ذلك ، عندما تم تنفيذ PCA مستهدف ، مقتصرة على علامات DA ، حصلنا على فصل جيد للمجموعات. في الواقع ، هناك زيادة ملحوظة في التعبير عن mRNAs لمستقبلات D2 في NAc في الجراء WD. يمكن أن يكون هذا oversanpresstic overXpression D2 في NAc تشارك جزئيا في الدافع العالي للدهون (). يتم تعديل عدد قليل من النصوص في الجراء WD مقارنة مع الجراء CD ، مثل زيادة الوحدوي ألفا 1 GABAA في NAc و VTA وانخفاض في الوحدتين الفرعيتين ألفا 5 GABAA في منطقة ما تحت المهاد والتي تقترح إعادة تنظيم مستقبلات GABAA في هذه النوى.

تأثير WD في فترة ما حول الولادة على مرحلة المراهقة

ﻓﻲ P45 ، ﻻﺣظﻧﺎ ﺗﻔﺿﯾﻼً ﻣﺷﺎﺑﮭًﺎ ﻣرﺗﻔﻌﺎً ﻟﻟدھون ﻟﮐل ﻣن اﻟﻣﺟﻣوﻋﺗﯾن ﻓﻲ اﻟﯾوم اﻷول ﻣن اﻟﻌرض ، وﻟﮐن ، ﻣن اﻟﻣﺛﯾر ﻟﻼھﺗﻣﺎم ، ﻓﻘدان WD ﻓﻘدان اھﺗﻣﺎﻣﮭﻣﺎ ﺑﺷﮐل ﻣﺗدرج ﻟﻟدھون ﺑﻌد اﻟﻌرض اﻟﻣﺗﮐرر. فترة المراهقة هي فترة حرجة لإعادة تنظيم السلوكيات العصبية اللازمة للمعالجة المعرفية مدى الحياة () ، وأظهرت دراسات مختلفة وجود ثغرة ملحوظة للتأثير المعرفي الضار لنظام غذائي دهني (-). هذه النتيجة هي في تناقض واضح مع العمل السابق لمجموعة Muhlhausler (, ) حيث أظهرت فئران الأحداث (أسابيع 6) تفضيلًا واضحًا للأطعمة السريعة. ومع ذلك ، فقد كان النموذج التجريبي في منشوراتهم مختلفًا لأن الجرذان كانت تتمتع بحرية الوصول إلى كلٍّ من الطعام التقليدي والطايف من الفطام إلى الذبيحة (أسابيع 6).

بشكل متزامن ، قمنا بقياس زيادة mRNA في DAT في NAc وانخفاضا من mRNA Th في VTA الذي تم تأكيده من قبل immunohistochemistry التي أظهرت عدد خلايا TH (+) مخفض في VTA لجرذان WD. بعد نشاط transcriptomic مرتفع لنظام DA عند الفطام ، قد يفسر النشاط المنخفض في P45 الفائدة المنخفضة للطعام المستساغ الملاحظ في فئران WD. يجب أيضًا ملاحظة أن الانخفاض المنهجي لتعبير Fos و FOSB mRNA في النوى المختلفة التي قمنا بتحليلها يمكن أن يكون علامة على نشاط مخفض مخفض بعد تعرض WD الأمومي.

أظهرت فئران WD المراهقين عدم اهتمام أكثر للدهون وهو عكس سلوكهم السابق. يبدو أن استخدام نظام غذائي "طبيعي" خلال مرحلة الطفولة "يحميهم" من تفضيل الدهون المفرط في مرحلة المراهقة. على العكس من ذلك ، عندما يكون لدى الجرذان حرية الوصول إلى الوجبات السريعة بعد الفطام ، كما هو الحال في Ref. (, ) ، فإنها تثبت في مرحلة المراهقة تفضيل قوي للدهون. هذه النتيجة تشير إلى أن نظام 3 أسابيع حمية غذائية بعد الفطام يمكن إعادة برمجتها الدوائر وجعل نسل المراهقين أقل حساسية لتحدي الدهون الحادة.

تأثير WD حول الولادة على البالغين

لم تعد فئران البالغين تعرض الفرق في تفضيل الدهون ، حتى بعد التقديم المكرر للدهون كما سبق وصفه (, ). بشكل متزامن ، لاحظنا انخفاضاً في mRNA Th والبروتين في NAc ، وميل لتعبير أقل من Dat mRNA في الـ VTA. نايف وزميلهأبلغت بالفعل عن نشاط منخفض لنظام DA في الفئران البالغة التي تم تغذيتها في فترة ما حول الولادة مع HFD ، مع استجابة DA غير المنتظمة للأمفيتامين قياسًا بالجزئية الصغيرة وزيادة الدافع لمكافأة الدهون (انظر الجدول الذي لخص بيانات qPCR الأخيرة في هذا النموذج ، الطاولة S2 في المواد التكميلية). إن أحد القيود على تقدير الكميائي (mRNA والكيمياء المناعية) في NAc يأتي من حقيقة أن خلايا NAc يمكن أن تعبر أيضًا عن الحمض النووي الريبوزي (mRNA) والبروتين ، ومن ثم يمكن أن تحيز تقدير ألياف DA (, ). ومع ذلك ، فإن استخدام TH immunostaining في NAc كشف بشكل أساسي عن المحطات المحورية الكثيفة القادمة من الخلايا العصبية DA في الدماغ المتوسط ​​(VTA و SNc). عادة ، يمكن تمييز الخلايا العصبية التي تعبر عن الخلايا العصبية في المخطط و NAc فقط في الحيوانات شديدة الضراوة DA () وبالتالي يمكن أن يكون من الصعب اكتشافها في الأقسام المناعية لدينا. في هذه الدراسة ، لاحظنا أيضا زيادة قوية في مستقبلات الأفيون في مو في NAc عندما أظهرت مجموعات أخرى ، مع نماذج مختلفة ، تعبير انخفاض في المخطط البطني من الفئران تتعرض في وقت مبكر إلى HFD (أثناء الرضاعة والحمل) (, ) أو لا تغيير (). هذه التعديلات ، التي تم قياسها على مستوى mRNA فقط ، يمكن أن تعكس نشاطًا بسيطًا في hypo لدوائر DA المرتبطة بحساسية أفيونية أعلى () التي قد لا تكون كافية للتأثير على الاختبار السلوكي الذي قمنا به. هذه الافتراضات تحتاج إلى تأكيد باستخدام النهج الوظيفية. في ورقة حديثة ، مع نموذج مماثل ، لم يتمكن روماني-بيريز وآخرون من ملاحظة زيادة كبيرة في الدوافع في صناديق تكييف التشغيل من أجل نسل HFD ولكنهم لاحظوا وقت استجابة أقل للوصول إلى مربع هدف في نموذج اختبار المدرج (). على الرغم من عدم وجود تفضيل طويل الأمد للدهون في ظروفنا التجريبية ، وجدنا أن تناول الـ WD الخاص بالولادة في الفترة المحيطة بالولادة له تأثير طويل الأمد على دارات دماغية أخرى تتم في الغالب عن طريق إعادة عرض GABA في NAc و Hypothalamus. تعتبر NAc بمثابة "الحارس الحسي" للسلوك الطموح (). وقد أظهرت الدراسات الحديثة أن تناول الطعام تم قمعه عن طريق تثبيط الخلايا العصبية LH الإفراج GHA (). أوكونور وآخرون. أظهرت أن الخلايا العصبية NAc D1R (الخلايا العصبية إسقاط GABAergic) تمنع بشكل انتقائي الخلايا العصبية LH VGAT لوقف تناول الطعام (). تكشف هذه التجارب عن دائرة GABA (NAc / Hypothalamus) التي قد تكون مسؤولة عن التحكم في الاستجابة السلوكية. يكمّل هذا المخطط البطني - الوطائي دارة أخرى تشتمل على نواة سطرية نهايات طرفيّة (GABA) تطلق الخلايا العصبية (VGAT) إلى الغلوتامات التي تطلق الخلايا العصبية Vglut LH والتثبيط المباشر لإطعام LH vglut2 (). عنصر آخر مهم في دائرة تنظيم الشهية التي تنطوي على NAc shell هو إسقاط كابح للإفراج عن GABA إلى نائب الرئيس (). هذه البيانات تسلط الضوء على الدور الحاسم للإشارات GABA في التفاعل بين الوطاء و NAc لتعزيز التغذية. في دراستنا ، لم نتمكن من التمييز بين مجموعة الخلايا العصبية المشاركة في إعادة تشكيل GABA وكيف يمكن لهذه التعديلات أن تغير الشبكات. ومع ذلك ، فإن الدور المركزي لدوائر GABA يستحق المزيد من الاهتمام. على وجه الخصوص ، سيكون من المثير للاهتمام للغاية إجراء مزيد من التجارب الوظيفية لدوائر GABA هذه باستخدام المقاربات الكهربائية الفسيولوجية (). لاحظنا أيضًا حدوث زيادة عالمية في نسخ مرنا لـ 5HT1a ومستقبلات 5HT1b في النوى الثلاثة المدروسة. غالبية إسقاط ألياف السيروتونين يأتي من نواة راش الظهرية (DRN) ونواة رادف المتوسط ​​(MRN). البيانات الحديثة من في الجسم الحي وأظهرت التسجيلات والدراسات التصويرية دورًا إيجابيًا لـ 5HT في المكافأة (). وتشارك الألياف 5HT من DRN في السيطرة الاندفاعية (). يمكن أن يكون زيادة 5HT1a في VTA و NAc آلية تعويضية يمكنها التحكم في الاندفاع. في المهاد ، تشير الدراسات الدوائية إلى أن الأنواع الفرعية لمستقبلات 5HT1a قد تمنع سلوك التغذية الناجم عن تحفيز السيروتونين (, ). زيادة 5HT1a والمستقبلات b في الوطاء يمكن أن تحفز عمل التغذية الكابتة للسيروتونين وبالتالي يمكن أن تشكل آلية تعويضية. يجب التحقق من هذه الافتراضات عن طريق إجراء التجارب الوظيفية المناسبة.

ترتبط تغييرات هذه الشبكات بتعديلات في علامات اللدونة مثل NNA mRNA. في منطقة ما تحت المهاد من الفئران البالغة ، لاحظنا زيادة في نصوص Ncam1 و St8sia4 مما يشير إلى زيادة في إشارة حمض البوليساليك (PSA). PSA هو glycan السطح الخلوي الذي ينظم التفاعل بين خلية إلى أخرى. تشترك polysialylation من بروتينات التصاق الخلايا في العديد من العمليات التي تعتمد على اللدونة العصبية المتشابكة في الجهاز العصبي المركزي ، وقد أفيد أنها مطلوبة من أجل اللدونة المشبكية التكيفية لدارات التغذية خلال توازن الطاقة الإيجابي الحاد (, ). بالإضافة إلى ذلك ، قد تشارك منظمات تنظيمية أخرى لتفاعل الخلية و synaptogenesis في هذه اللدونة المهاد.

في الختام (الشكل (Figure7)، 7) ، تناول WD الأم له تأثير طويل الأمد على تنظيم الدوائر التماثل والمضي في تنظيم سلوك الأكل في النسل. من خلال تحليل ثلاث فترات زمنية حرجة ، تمكنا من إظهار تطور واضح لتفضيل الدهون المرتبط بتوقيعات جزيئية معينة في المخ. خلال الطفولة ، قد يكون تفضيل الدهون مرتبطًا بالنشاط الأعلى لنظام DA. ارتبط المراهقة ، التي تتميز بانعكاس تفضيل الدهون ، بانخفاض التعبير عن علامات نظام DA مما يشير إلى آلية تعويضية. وثمة نقطة مثيرة للاهتمام للإخطار وهي أنه في هذا النموذج ، يمكن لنظام غذائي متوازن بعد الفطام أن يحمي الفئران المراهقة من العادات الغذائية الضارة عن طريق تقليل الرغبة في الدهون. على الرغم من أن المجموعتين تتمتعان بفرصة عالية مماثلة للدهون في مرحلة البلوغ ، إلا أن الفئران من السدود التي تغذيها WD أظهرت إعادة عرض عميقة لدوائر GABA. ما هي نتائج هذه اللدونة الدائمة؟ هل سيؤدي تناول كمية كبيرة من الحميات السمينة المفرطة خلال فترة المراهقة إلى إعادة تنشيط نظام المكافآت الممزق؟ مثل هذه الأسئلة يمكن أن تكون ذات صلة بالمتابعة الغذائية للمولود الجديد والأطفال في الدول الغربية.

بيان الأخلاق

أجريت جميع التجارب وفقا لتوجيهات لجنة رعاية الحيوان المحلية ، والاتحاد الأوروبي (التوجيه 2010 / 63 / الاتحاد الأوروبي) ، والمعهد الوطني للبحوث الزراعية (باريس ، فرنسا) ، والطب البيطري الفرنسي (A44276). تمت الموافقة على البروتوكول التجريبي من قبل لجنة الأخلاقيات المؤسسية وسجلت تحت المرجع APAFIS 8666. تم اتخاذ كل الاحتياطات لتقليل الضغط وعدد الحيوانات المستخدمة في كل سلسلة من التجارب.

الكاتب الاشتراكات

أجرى JP و PB تجربة والمشاركة في المناقشة والكتابة. قامت TM بإجراء PCA وشاركت في المناقشة والكتابة. ساهمت SN في تصميم التجربة وشاركت في المناقشة. ساهمت PP في تصميم التجربة ، وشاركت في المناقشات ، وكتبت المخطوطة. قام VP بتصميم وتنفيذ التجارب ، وتحليل البيانات ، وكتب المخطوطة.

بيان تضارب المصالح

يعلن المؤلفون أن البحث أجري في غياب أي علاقات تجارية أو مالية يمكن تفسيرها على أنها تضارب مصالح محتمل.

شكر وتقدير

يود المؤلفون أن يعترفوا بـ Guillaume Poupeau و Blandine Castellano لرعايتهم للحيوانات طوال فترة الدراسة ، أنتوني Pagniez لمساعدته في استخراج mRNA و TLDA ، Isabelle Grit لمساعدتها في تحليل عينات البلازما ، و Alexandre Benani و Marie-Chantal Canivenc لمناقشتها المفيدة وتصميم TLDA.

الحواشي

 

التمويل. وقد أيد هذا البحث من خلال منحة لمنظمي دي لا لوار ParimAD (نائب الرئيس) ، ومنحة مؤسسة LCL (VP و PP) ، ومؤسسة SanteDige (VP) و INRA Metaprogram DIDIT (SN ، VP ، PP).

 

 

المواد التكميلية

يمكن العثور على المواد التكميلية لهذه المقالة عبر الإنترنت على http://journal.frontiersin.org/article/10.3389/fendo.2017.00216/full#supplementary-material.

الشكل سنومكس

كمية الطاقة الكلية من زيت الذرة المحتوي على زجاجة. (A) استهلاك السعرات الحرارية من زجاجة زيت الذرة ل 24 ح في P25 في الجراء من النظام الغذائي الغربي (WD) تغذية السدود والجراء من السيطرة على النظام الغذائي (CD) السدود. (B) استهلاك السعرات الحرارية من زجاجة زيت الذرة لـ 24 h في P45 (اليوم الثالث من اختبار الزجاجة). (C) استهلاك السعرات الحرارية من زجاجة زيت الذرة لـ 24 h في P95 (اليوم الثالث من اختبار الزجاجة). للوحات (A-C)يتم التعبير عن البيانات على أنها تعني ± SEM ، لا يوجد فرق إحصائي (p > 0.05) ، بعد اختبار مان وويتني غير البارامترية ، في جميع الأعمار. (د) نسبة السعرات الحرارية المتناولة من قارورة زيت الذرة تقارن بمجموع السعرات الحرارية (زجاجة زيت الذرة + حمية تشوو القياسية) ل 24 h في P25 في الجراء WD والقرص المضغوط. (E) نسبة استهلاك السعرات الحرارية من زجاجة زيت الذرة مقارنة بمجموع السعرات الحرارية (زجاجة زيت الذرة + حمية تشويه قياسية) لـ 24 h في P45 (اليوم الثالث من اختبار الزجاجة) في الجراء WD والقرص المضغوط. (F) نسبة السعرات الحرارية المتناولة من قارورة زيت الذرة تقارن بمجموع السعرات الحرارية (زجاجة زيت الذرة + حمية تشوو القياسية) ل 24 h في P95 (اليوم الثالث من اختبار الزجاجة) في الجراء WD والقرص المضغوط. للوحات (D، E)، يتم التعبير عن البيانات في المئة من إجمالي السعرات الحرارية التي لا يوجد فرق إحصائي (p > 0.05) ، بعد مربع كاي مع تصحيح ييتس ، في جميع الأعمار.

الشكل سنومكس

تصوير photomicrographs th من immunostaining TH في نواة متكئة (NAc) ومنطقة tegmental بطني (VTA) في ثلاث نقاط زمنية مختلفة. (A) Photomicrograph TH / NeuN المناعية على مستوى VTA ، −5.30 ملم من Bregma. تم وضع العلامات الحمراء على NeuN ، والأخضر لـ TH. يظهر السهم الأبيض خروج العصب الثالث. (B) Photomicrograph من TH التعدين على مستوى NAc ، + 1.70 ملم من Bregma. وضع العلامات الخضراء على TH. يُظهر السهم الأبيض الصوار الأمامي.

جدول S1

Taqman قائمة جينات مجموعة منخفضة الكثافة مع رموز جرد تقنيات الحياة المقابلة.

جدول S2

ملخص البيانات المنشورة المتعلقة بالتعبير عن نصوص مسار الدوبامين. تتطابق الأحرف الحمراء مع فترة الطفولة ، والأحرف الزرقاء إلى مرحلة المراهقة ، والأحرف السوداء إلى البالغين. =: يتوافق مع تعبير شبيه مماثل بين المجموعات ، +: يتوافق مع تعبير النص العالي في الجراء من نظام غذائي عالي السعرات الحرارية [الوجبات السريعة ، والنظام الغذائي الغربي (WD) ، أو نظام غذائي غني بالدهون (HFD)] السدود المغذية ، و-: يتطابق مع تعبير نصي منخفض في الجراء من نظام غذائي عالي السعرات الحرارية (الطعام غير المرغوب فيه ، WD أو HFD) تغذى السدود.

مراجع حسابات

1. باركر دي جي. أصول الجنين من أمراض الشيخوخة. Eur J Clin Nutr (1992) 46 (Suppl 3): S3 – 9. [مجلات]
2. Desai M، Gayle D، Han G، Ross MG. فرط المبرمج المبرمج بسبب انخفاض آليات فقدان الشهية في الذرية المقيدة للنمو داخل الرحم. Reprod Sci Thousand Oaks Calif (2007) 14: 329 – 37.10.1177 / 1933719107303983 [مجلات] [الصليب المرجع]
3. غوران MI ، Dumke K ، بوريت SG ، Kayser B ، ووكر RW ، Blumberg B. تأثير obesogenic من التعرض عالية الفركتوز خلال التنمية في وقت مبكر. Nat Rev Endocrinol (2013) 9: 494 – 500.10.1038 / nrendo.2013.108 [بك المادة الحرة] [مجلات] [الصليب المرجع]
4. ليفين BE. البصمة الأيضية: التأثير الحرج للبيئة المحيطة بالولادة على تنظيم توازن الطاقة. Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci (2006) 361: 1107 – 21.10.1098 / rstb.2006.1851 [بك المادة الحرة] [مجلات] [الصليب المرجع]
5. أولسون CM ، Strawderman MS ، Dennison BA. زيادة وزن الأم أثناء الحمل ووزن الطفل في عمر 3 سنوات. Matern Child Health J (2009) 13: 839.10.1007 / s10995-008-0413-6 [مجلات] [الصليب المرجع]
6. تشن إتش ، سيمار د ، موريس إم جي. تتم برمجة دارات الغدد الصماء العصبية الحيوية من خلال السمنة الأمومية: التفاعل مع بيئة التغذية بعد الولادة. PLoS One (2009) 4: e6259.10.1371 / journal.pone.0006259 [بك المادة الحرة] [مجلات] [الصليب المرجع]
7. Muhlhausler BS، Adam CL، Findlay PA، Duffield JA، McMillen IC. زيادة تغذية الأم يغير تطور شبكة تنظيم الشهية في الدماغ. FASEB J (2006) 20: 1257 – 9.10.1096 / fj.05-5241fje [مجلات] [الصليب المرجع]
8. Samuelsson AM، Matthews PA، Argenton M، Christie MR، McConnell JM، Jansen EHJM، et al. تؤدي السمنة التي يسببها النظام الغذائي في فئران الإناث إلى فرط النمو الوراثي ، والسمنة ، وارتفاع ضغط الدم ، ومقاومة الأنسولين. Hypertension (2008) 51: 383 – 92.10.1161 / HYPERTENSIONAHA.107.101477 [مجلات] [الصليب المرجع]
9. كيني PJ. الآليات الخلوية والجزيئية الشائعة في السمنة وإدمان المخدرات. Nat Rev Neurosci (2011) 12: 638 – 51.10.1038 / nrn3105 [مجلات] [الصليب المرجع]
10. Denis RGP، Joly-Amado A، Webber E، Langlet F، Schaeffer M، Padilla SL، et al. استساغة يمكن أن تدفع التغذية مستقلة عن الخلايا العصبية Agrp. Cell Metab (2015) 22: 646 – 57.10.1016 / j.cmet.2015.07.011 [بك المادة الحرة] [مجلات] [الصليب المرجع]
11. Stice E، Spoor S، Bohon C، Small DM. ترتبط العلاقة بين السمنة والاستجابة الحادة للجسم بالأغذية بواسطة الأليل Taqia A1. العلوم (2008) 322: 449 – 52.10.1126 / science.1161550 [بك المادة الحرة] [مجلات] [الصليب المرجع]
12. Frank GK، Reynolds JR، Shott ME، Jappe L، Yang TT، Tregellas JR، et al. ويرتبط فقدان الشهية العصبي والسمنة استجابة عكس الدماغ مكافأة. Neuropsychopharmacology (2012) 37: 2031 – 46.10.1038 / npp.2012.51 [بك المادة الحرة] [مجلات] [الصليب المرجع]
13. Green E، Jacobson A، Haase L، Murphy C. يرتبط انخفاض النواة المتكئة ونواة النواة المذنبة بطعم لطيف مع السمنة لدى كبار السن. Brain Res (2011) 1386: 109 – 17.10.1016 / j.brainres.2011.02.071 [بك المادة الحرة] [مجلات] [الصليب المرجع]
14. Davis JF، Tracy AL، Schurdak JD، Tschop MH، Lipton JW، Clegg DJ، et al. التعرض لمستويات مرتفعة من الدهون الغذائية يخفف مكافأة psychostimulant والدوران دورانيني في الفئران mesolimbic. Behav Neurosci (2008) 122: 1257 – 63.10.1037 / a0013111 [بك المادة الحرة] [مجلات] [الصليب المرجع]
15. جيجر BM ، Haburcak M ، Avena NM ، Moyer MC ، Hoebel BG ، Pothos EN. عجز في النقل العصبي الدوبامين الميزوبيمبي في السمنة الغذائية للفئران. Neuroscience (2009) 159: 1193 – 9.10.1016 / j.neuroscience.2009.02.007 [بك المادة الحرة] [مجلات] [الصليب المرجع]
16. Rivera HM، Kievit P، Kirigiti MA، Bauman LA، Baquero K، Blundell P، et al. يؤثر النظام الغذائي عالي الدهون والسمنة على تناول الطعام المستساغ وإشارات الدوبامين في ذرية الرئيسيات غير البشرية. السمنة (2015) 23: 2157 – 64.10.1002 / oby.21306 [بك المادة الحرة] [مجلات] [الصليب المرجع]
17. Gugusheff JR، Ong ZY، Muhlhausler BS. الأصول المبكرة للتفضيلات الغذائية: استهداف النوافذ الحرجة للتنمية. FASEB J (2015) 29: 365 – 73.10.1096 / fj.14-255976 [مجلات] [الصليب المرجع]
18. Bayol SA، Farrington SJ، Stickland NC. غذاء الأمهات "الوجبات السريعة" في الحمل والرضاعة يشجع على زيادة طعم "الوجبات السريعة" وزيادة ميل البدانة إلى ذرية الفئران. Br J Nutr (2007) 98: 843 – 51.10.1017 / S0007114507812037 [مجلات] [الصليب المرجع]
19. Vucetic Z، Kimmel J، Totoki K، Hollenbeck E، Reyes TM. نظام غذائي غني بالدهون في الأم يغير الميثيل والتعبير الجيني للجينات الدوبامين والجينات الأفيونية. Endocrinology (2010) 151: 4756 – 64.10.1210 / en.2010-0505 [بك المادة الحرة] [مجلات] [الصليب المرجع]
20. Naef L، Moquin L، Dal Bo G، Giros B، Gratton A، Walker CD. إن المدخول عالي الدهون من الأمهات يغير تنظيم ما قبل التشابك للدوبامين في النواة المتكئة ويزيد من الدوافع للمكافآت الدهنية في النسل. Neuroscience (2011) 176: 225 – 36.10.1016 / j.neuroscience.2010.12.037 [مجلات] [الصليب المرجع]
21. Ong ZY، Muhlhausler BS. إن التغذية "الغذائية غير المرغوبة" لسدود الفئران تبدل خيارات الطعام وتطور مسار المكافأة المتوسطة في النسل. FASEB J (2011) 25: 2167 – 79.10.1096 / fj.10-178392 [بك المادة الحرة] [مجلات] [الصليب المرجع]
22. Romaní-Pérez M، Lépinay AL، Alonso L، Rincel M، Xia L، Fanet H، et al. تأثير التعرض لفترة ما حول الولادة لنظام غذائي غني بالدهون والتوتر على الاستجابة للتحديات التغذوية ، والسلوك الذي يحفز على الغذاء ووظيفة الدوبامين الميزوبيمبي. Int J Obes (Lond) (2017) 41 (4): 502 – 9.10.1038 / ijo.2016.236 [مجلات] [الصليب المرجع]
23. Beier KT، Steinberg EE، DeLoach KE، Xie S، Miyamichi K، Schwarz L، et al. تم الكشف عن بنية دوائر الخلايا العصبية للدوبامين VTA عن طريق رسم خرائط المدخلات والمخرجات. Cell (2015) 162: 622 – 34.10.1016 / j.cell.2015.07.015 [بك المادة الحرة] [مجلات] [الصليب المرجع]
24. Tan KR، Yvon C، Turiault M، Mirzabekov JJ، Doehner J، Labouèbe G، et al. الخلايا العصبية GABA من محرك VTA مكيفة مكان النفور. Neuron (2012) 73: 1173 – 83.10.1016 / j.neuron.2012.02.015 [مجلات] [الصليب المرجع]
25. van Zessen R، Phillips JL، Budygin EA، Stuber GD. تنشيط الخلايا العصبية VTA GABA يعطل استهلاك مكافأة. Neuron (2012) 73: 1184 – 94.10.1016 / j.neuron.2012.02.016 [بك المادة الحرة] [مجلات] [الصليب المرجع]
26. هو ه. مكافأة والنفور. Annu Rev Neurosci (2016) 39: 297 – 324.10.1146 / annurev-neuro-070815-014106 [مجلات] [الصليب المرجع]
27. Stanley BG، Urstadt KR، Charles JR، Kee T. Glutamate and GABA in an lateral hypothalamic mechanisms controlling food intake. Physiol Behav (2011) 104: 40 – 6.10.1016 / j.physbeh.2011.04.046 [مجلات] [الصليب المرجع]
28. Ancel D، Bernard A، Subramaniam S، Hirasawa A، Tsujimoto G، Hashimoto T، et al. لا يمكن الاستغناء عن مستشعر الدهون الفموية GPR120 من أجل الكشف عن الدهون غير الحسية في الدهون الغذائية في الفئران. J Lipid Res (2015) 56: 369 – 78.10.1194 / jlr.M055202 [بك المادة الحرة] [مجلات] [الصليب المرجع]
29. Ackroff K، Lucas F، Sclafani A. نكهة تفضيل نكهة كدالة من مصدر الدهون. Physiol Behav (2005) 85: 448 – 60.10.1016 / j.physbeh.2005.05.006 [مجلات] [الصليب المرجع]
30. Camandola S ، Mattson MP. يتوسط المستقبل مثل 4 مستقبلات الدهون ، والسكر ، وتفضيل ذوق أومامي ، وتنظيم تناول الطعام والوزن الغذائي. السمنة (2017) 25: 1237 – 45.10.1002 / oby.21871 [بك المادة الحرة] [مجلات] [الصليب المرجع]
31. Coupé B، Amarger V، Grit I، Benani A، Parnet P. Nutritional programme Programme to hypothalamic organization and early response to leptin. Endocrinology (2010) 151: 702 – 13.10.1210 / en.2009-0893 [مجلات] [الصليب المرجع]
32. Paillé V، Brachet P، Damier P. Role of nigral lesion in the genesis of dyskinesias in a rat model of Parkinson's disease. Neuroreport (2004) 15: 561 – 4.10.1097 / 00001756-200403010-00035 [مجلات] [الصليب المرجع]
33. Benani A، Hryhorczuk C، Gouazé A، Fioramonti X، Brenachot X، Guissard C، et al. يشمل تناول المدخول الغذائي للدهون الغذائية PSA التي تعتمد على إعادة ربط نظام melanocortin المقوس في الفئران. J Neurosci (2012) 32: 11970 – 9.10.1523 / JNEUROSCI.0624-12.2012 [مجلات] [الصليب المرجع]
34. Kirk SL، Samuelsson AM، Argenton M، Dhonye H، Kalamatianos T، Poston L، et al. تؤثر السمنة لدى الأم التي يسببها النظام الغذائي في الجرذان بشكل دائم على العمليات المركزية التي تنظم تناول الطعام في النسل. PLoS One (2009) 4: e5870.10.1371 / journal.pone.0005870 [بك المادة الحرة] [مجلات] [الصليب المرجع]
35. Ong ZY، Muhlhausler BS. إن استبعاد نظام غذائي منخفض الدهون من الفطام إلى البلوغ يعكس برمجة تفضيلات الطعام لدى الذكور ، ولكن ليس في الإناث ، ذرية "سلال الفئران". Acta Physiol Oxf Engl (2014) 210: 127 – 41.10.1111 / apha.12132 [مجلات] [الصليب المرجع]
36. Ribaroff GA، Wastnedge E، Drake AJ، Sharpe RM، Chambers TJG. النماذج الحيوانية من التعرض الحمية عالية الدهون والدهون على الأيض في النسل: تحليل التحوف التلوي. Obes Rev (2017) 18 (6): 673 – 86.10.1111 / obr.12524 [بك المادة الحرة] [مجلات] [الصليب المرجع]
37. Bautista CJ، Montaño S، Ramirez V، Morales A، Nathanielsz PW، Bobadilla NA، et al. التغيرات في تركيب الحليب في الجرذان البدناء التي تستهلك حمية غنية بالدهون. Br J Nutr (2015) 115: 538 – 46.10.1017 / S0007114515004547 [مجلات] [الصليب المرجع]
38. Rolls BA، Gurr MI، Van Duijvenvoorde PM، Rolls BJ، Rowe EA. الإرضاع في الجرذان النحيلة والسمنة: تأثير تغذية الكافيتريا والبدانة الغذائية على تركيبة الحليب. Physiol Behav (1986) 38: 185 – 90.10.1016 / 0031-9384 (86) 90153-8 [مجلات] [الصليب المرجع]
39. White CL، Purpera MN، Morrison CD. السمنة الأم ضرورية للبرمجة تأثير النظام الغذائي عالي الدهون على النسل. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol (2009) 296: R1464.10.1152 / ajpregu.91015.2008 [بك المادة الحرة] [مجلات] [الصليب المرجع]
40. Sun B، Purcell RH، Terrillion CE، Yan J، Moran TH، Tamashiro KLK. يؤثر حمية الأم عالية الدسم أثناء الحمل أو الرضاع بشكل مختلف على حساسية اللبتين والسمنة. Diabetes (2012) 61: 2833 – 41.10.2337 / db11-0957 [بك المادة الحرة] [مجلات] [الصليب المرجع]
41. برثود محركات الأيض والمتعوض في السيطرة العصبية للشهية: من هو رئيسه؟ Curr Opin Neurobiol (2011) 21: 888 – 96.10.1016 / j.conb.2011.09.004 [بك المادة الحرة] [مجلات] [الصليب المرجع]
42. Henning SJ، Chang SS، Gisel EG. عدم القدرة على التحكم في إطعام الرضاع والفئران. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol (1979) 237: R187 – 91. [مجلات]
43. Leibowitz SF، Lucas DJ، Leibowitz KL، Jhanwar YS. أنماط التنمية من تناول المغذيات الكبيرة في الجرذان الإناث والذكور من الفطام إلى النضج. Physiol Behav (1991) 50: 1167 – 74.10.1016 / 0031-9384 (91) 90578-C [مجلات] [الصليب المرجع]
44. Trifilieff P، Feng B، Urizar E، Winiger V، Ward RD، Taylor KM، et al. زيادة تعبير مستقبلات الدوبامين D2 في نواة الكبار المتكئة يعزز الدوافع. Medical Psychiatry (2013) 18: 1025 – 33.10.1038 / mp.2013.57 [بك المادة الحرة] [مجلات] [الصليب المرجع]
45. الرمح ليرة لبنانية. الدماغ في سن المراهقة والمظاهر السلوكية المرتبطة بالعمر. Neurosci Biobehav Rev (2000) 24: 417 – 63.10.1016 / S0149-7634 (00) 00014-2 [مجلات] [الصليب المرجع]
46. Vendruscolo LF، Gueye AB، Darnaudéry M، Ahmed SH، Cador M. Sugar overconsumption خلال المراهقة يغير بشكل انتقائي وظيفة التحفيز والمكافأة في الجرذان البالغة. PLoS One (2010) 5: e9296.10.1371 / journal.pone.0009296 [بك المادة الحرة] [مجلات] [الصليب المرجع]
47. Boitard C، Parkes SL، Cavaroc A، Tantot F، Castanon N، Layé S، et al. تبديل نظام غذائي غني بالدهون في مرحلة المراهقة إلى نظام غذائي الكبار السيطرة يعيد التعديلات العصبية. Front Behav Neurosci (2016) 10: 225.10.3389 / fnbeh.2016.00225 [بك المادة الحرة] [مجلات] [الصليب المرجع]
48. Naneix F، Darlot F، Coutureau E، Cador M. Long-lasting deficits in hedonic and nucleus accumbens reactivity to sweet reward by sugar overconsumption during teen. Eur J Neurosci (2016) 43: 671 – 80.10.1111 / ejn.13149 [مجلات] [الصليب المرجع]
49. بيكر H ، كوباياشي K ، Okano H ، Saino-Saito S. تعبير القشرية والجسدية من التيروزين هيدروكسيلاز مرنا في الفئران حديثي الولادة والبالغين. Cell Mol Neurobiol (2003) 23: 507 – 18.10.1023 / A: 1025015928129 [مجلات] [الصليب المرجع]
50. Jaber M، Dumartin B، Sagné C، Haycock JW، Roubert C، Giros B، et al. تنظيم تفاضلي لمادة هيدروكسيلاز التيروزين في العقد القاعدية للفئران التي تفتقر إلى ناقلة الدوبامين. Eur J Neurosci (1999) 11: 3499 – 511.10.1046 / j.1460-9568.1999.00764.x [مجلات] [الصليب المرجع]
51. Klietz M، Keber U، Carlsson T، Chiu WH، Höglinger GU، Weihe E، et al. ويرتبط خلل الحركة الناجم عن D-DOPA بنقص تناسبي رقمي ناقص للخلايا العصبية المعبّرة للتيروزين hydroxylase الموريتاني. Neuroscience (2016) 331: 120 – 33.10.1016 / j.neuroscience.2016.06.017 [مجلات] [الصليب المرجع]
52. Kelley AE، Baldo BA، Pratt WE، Will MJ. الدارة القشرية - المهاد والدافع الغذائي: تكامل الطاقة والعمل والمكافأة. Physiol Behav (2005) 86: 773 – 95.10.1016 / j.physbeh.2005.08.066 [مجلات] [الصليب المرجع]
53. Jennings JH، Ung RL، Resendez SL، Stamatakis AM، Taylor JG، Huang J، et al. تصور ديناميكيات الشبكة الووطية للسلوكيات الشهية والاجنبية. Cell (2015) 160: 516 – 27.10.1016 / j.cell.2014.12.026 [بك المادة الحرة] [مجلات] [الصليب المرجع]
54. O'Connor EC، Kremer Y، Lefort S، Harada M، Pascoli V، Rohner C، et al. الخلايا العصبية Accumbal D1R إسقاط إلى المهاد الجانبي يأذن التغذية. Neuron (2015) 88: 553 – 64.10.1016 / j.neuron.2015.09.038 [مجلات] [الصليب المرجع]
55. Jennings JH، Rizzi G، Stamatakis AM، Ung RL، Stuber GD. تقوم بنية الدائرة المثبطة لطيلي الوطاء بتغذية التغذية. العلوم (2013) 341: 1517 – 21.10.1126 / science.1241812 [بك المادة الحرة] [مجلات] [الصليب المرجع]
56. Stratford TR، Wirtshafter D. المشاركة الطفيفة في الوريد في التغذية المستمدة من الشاحبة البطنية. Eur J Neurosci (2013) 37: 648 – 53.10.1111 / ejn.12077 [بك المادة الحرة] [مجلات] [الصليب المرجع]
57. Paille V، Fino E، Du K، Morera-Herreras T، Perez S، Kotaleski JH، et al. الدوائر GABAergic السيطرة على المرونة التي تعتمد على توقيت ارتفاع. J Neurosci (2013) 33: 9353 – 63.10.1523 / JNEUROSCI.5796-12.2013 [مجلات] [الصليب المرجع]
58. Fonseca MS، Murakami M، Mainen ZF. تنشيط الخلايا العصبية الظهرية المصل للرئتين السيروتونين يعزز الانتظار لكنه لا يعزز. Curr Biol (2015) 25: 306 – 15.10.1016 / j.cub.2014.12.002 [مجلات] [الصليب المرجع]
59. Doya K. Metalearning و neuromodulation. Neural Netw (2002) 15: 495 – 506.10.1016 / S0893-6080 (02) 00044-8 [مجلات] [الصليب المرجع]
60. Leibowitz SF، Alexander JT. السيروتونين المجهري في التحكم في سلوك الأكل وحجم الوجبات ووزن الجسم. Biol Psychiatry (1998) 44: 851 – 64.10.1016 / S0006-3223 (98) 00186-3 [مجلات] [الصليب المرجع]
61. Voigt JP، Fink H. Serotonin السيطرة على التغذية والشبع. Behav Brain Res (2015) 277: 14 – 31.10.1016 / j.bbr.2014.08.065 [مجلات] [الصليب المرجع]
62. Brenachot X، Rigault C، Nédélec E، Laderrière A، Khanam T، Gouazé A، et al. يقوم الهستون acetyltransferase MOF بتنشيط polysialylation ما تحت المهاد لمنع السمنة التي يسببها النظام الغذائي في الفئران. مول Metab (2014) 3: 619 – 29.10.1016 / j.molmet.2014.05.006 [بك المادة الحرة] [مجلات] [الصليب المرجع]