تفاعل السكروز يؤدي إلى تحفيز متاجرة مستقبلات AMPA السريعة (2013)

ي Neurosci. مخطوطة المؤلف متاحة في PMC Oct 3 ، 2013.
نشر في الصيغة النهائية المعدلة على النحو التالي:
النسخة النهائية المحررة للناشر من هذه المقالة متاحة مجانًا على J Neurosci
انظر المواد الأخرى في PMC ذلك استشهد المادة المنشورة.

ملخص

والآليات التي من خلالها المكافآت الطبيعية مثل السكر تؤثر على انتقال متشابك والسلوك غير مستكشفة إلى حد كبير. هنا ، علينا التحقيق في تنظيم المشابك نواة accumbens من تناول السكروز. وقد أظهرت الدراسات السابقة أن AMB مستقبلات الاتجار هو آلية رئيسية لتنظيم قوة متشابك ، وذلك المختبر، يجري تهريب مستقبلات AMPA المحتوية على الوحدة الفرعية GluA1 بواسطة آلية من خطوتين تتضمن نقل مستقبلات خارج الشبكية ثم مستقبلات متشابكة. نذكر أنه في الجرذان ، فإن الابتلاع اليومي المتكرر لمحلول السكروز 25٪ عابر بشكل تلقائي لحركة عابرة ومتقلبة ينشط المشابك الأساسية من خلال دمج Ca2+- مستقبلات AMPA المنفذة (CPARs) ، والتي تحتوي على مستقبلات AMPA المحتوية على GluA1 ، وتفتقر إلى GluA2. كشفت دراسات الفيزيولوجيا الكهربية والكيميائية الحيوية والكمية الإلكترونية أن التدريب على السكروز (7 أيام) قد تسبب في وجود مجموعة GluA24 داخل الشوكة مستقرة (> 1 ساعة) ، وأنه في هذه الفئران ، تم تحفيز السكروز الفردي بسرعة (5 دقائق) ولكن بشكل عابر (أقل من 24 ساعة) GluA1 في مواقع خارج المشبكي. كانت مستقبلات CPARs ومستقبلات الدوبامين D1 مطلوبة in الجسم الحي لارتفاع الحركة بعد تناول السكروز. ومن الجدير بالذكر أن بروتوكول 7-day الخاص بالابتلاع اليومي لمحلول 3٪ من السكرين ، وهو من مواد التحلية الخالية من السعرات الحرارية ، يسبب تشابكًا متشابكًا مع GluA1 مماثلًا لابتلاع 25٪ من السكروز. تيالنتائج hese تحديد المتاجرة GluA1 خطوة متعددة ، وصفت سابقا المختبر، كآلية للتنظيم الحاد من انتقال متشابك في الجسم الحي من مكافأة الثوابت الطبيعية. يتم تحفيز الاتجار عن طريق مسار كيميائي لا يعتمد على القيمة الحرارية للسكروز.

المُقدّمة

الاستهلاك المفرط للسكروز هو مشكلة صحية عامة مهمة (هو ومالك ، 2010) ، ولكن الآليات التي من خلالها لا تُعرف المكافآت الطبيعية غير الكاملة مثل السكروز التي تنظم انتقال المشبته للتأثير على السلوك. اللدونة متشابك في النواة المتكئة ، وهو جزء لا يتجزأ من الدوائر مكافأة الدماغ (Sesack و Grace ، 2010) ، يساهم في العديد من أشكال السلوك الدافع ، بما في ذلك مكافأة التعلم (اليوم وكاريلي ، 2007) ، والاستجابات للإجهاد الاجتماعي (LaPlant et al.، 2010) ، وأمراض الإدمان (Luscher and Malenka، 2011). التعرض المتكرر للكوكايين يسبب اللدونة المشبكية في الخلايا العصبية المتكئة ومنطقة tegmental البطنية (VTA) (Brebner وآخرون ، 2005; Grueter et al.، 2010; Mameli وآخرون ، 2009; Pascoli et al.، 2012; توماس وآخرون، 2001; Ungless et al.، 2001). عند توسيع نطاق وصول الكوكايين الذاتي متبوعًا بالانسحاب لفترات طويلة ، فإن نقاط الاشتباك العصبي يتم تثبيتها من خلال دمج Ca2+-مستقبلات الغلوتامات من نوع AMPA -potmable التي تفتقر إلى غلوكامكس (CPAR) ، والتي تتوسط إشاراتها احتضان شغف الكوكايين (Conrad et al.، 2008; McCutcheon وآخرون ، 2011a). على غرار الكوكايين ، مكافآت غير أساسية مثل السكروز ارتفاع متصاحب الدوبامين (سميث ، 2004) ، ولكن لم يتم التحقيق تحريض مكافأة excosens اللدونة المستحسنة.

مستقبلات AMPA (AMPARs) هي وسطاء أساسيون للإرسال التحفيزي المركزي ، ويساهم تهريبهم في عمليات عصبية متنوعة ، بما في ذلك التعلم والذاكرة. (Nedelescu et al.، 2010; Rumpel وآخرون ، 2005; Whitlock et al.، 2006). تتكون AMPAR من أربع وحدات فرعية مختلفة ، GluA1-4. تحتوي AMPARs التي تحتوي على GluA2 على Ca2+غير قابلة للحركة وحركة المرور إلى المشابك ، في حين أن مستقبلات GluA2 تفتقر (CPARs) ، والتي هي في الغالب homomers GluA1 ، إجراء كاليفورنيا2+ ويظهر تصحيح داخلي. يخضع GluA1 لتهريب متشابك يعتمد على النشاط من خلال مسار من خطوتين يعمل فيهما فسفرة Ser 845 بواسطة بروتين kinase المعتمد على البروتين (PKA) وبروتين كيناز II المعتمد على cGMP (cGKII) على تعزيز تراكم المستقبات في المواقع خارج الشبكية في غشاء البلازما (Esteban وآخرون ، 2003; Serulle et al.، 2007; Sun et al.، 2008; Sun et al.، 2005). بعد الانتشار الجانبي إلى المشبك ، يعمل فسفرة Ser Serve 818 من PKC على تثبيت AMPAR داخل المشبك (Boehm et al.، 2006) ، ترتكز إلى الكثافة بعد المشبكي (Ehlers وآخرون ، 2007; أوه وآخرون ، 2006; Serulle et al.، 2007). كما2+يساهم الفسفرة في البروتين كيناز II (CaMKII) للـ Ser 567 و Ser 831 أيضًا في دمج التشابك والاستهداف خارج الشبكية (لو وآخرون ، 2010; Roche وآخرون ، 1996) ، على التوالي. ومع ذلك ، لا يعرف ما إذا كان في الجسم الحي يستخدم دمج CPARs هذه الآليات السريعة والمتعددة الخطوات الموضحة المختبر.

وللتحقق من الآليات التي تقوم بها المكافئات غير الحسية مثل السكروز بتنظيم المشابك الاستتباعية المثيرة ، استخدمنا نموذجًا من ابتلاع السكروز القصير والتغيرات المقاسة في انتقال متشابك في الخلايا العصبية المتكئة. نلاحظ أن ابتلاع السكروز المتكرر يثبّت المشابك المتكئة من خلال دمج CPARs ، وأنه في حيوان مدرب على السكروز ، يكون حافز السكروز المفرد كافيًا للحث على انتقال GluA1 السريع إلى المواقع الخارجية. ولأن السكرين ، وهو مُحلي غير حراري ، يسبب متشابكًا متشابهًا مع السكروز ، فإن المتاجرة هي استجابة لمحفزات الثيوسسينسوري بدلاً من مسارات الكالوريات. وعلاوة على ذلك ، منع الحصار CPAR الارتفاع الناجم عن السكروز من النشاط الحركي التلقائي في الجسم الحي، مزيد من التعريف CPAPs المتكئين باعتبارها المنظمين المهمين للاستجابات إلى المكافآت الطبيعية.

مواد وطرق

الموضوعات والإجراءات الجراحية

كانت هذه المواضيع ذكور فئران سبراغ-داولي (Taconic ؛ تجارب سلوكية) تزن 150-300 gram عند الوصول وفئران Sprague-Dawley الحوامل الإناث (Taconic ، تجارب زراعة الخلايا). تم وضع الفئران 18 في القفص لإجراء تجارب سلوكية على دورة 2h / 12h داكنة الضوء (إطفاء الأنوار في 12: 18) والحصول على الطعام والماء libitum الإعلانية في كل الأوقات. تمت الموافقة على جميع الإجراءات التجريبية من قبل لجنة رعاية واستخدام الحيوان المؤسسي في كلية الطب بجامعة نيويورك وتم تنفيذها وفقًا "لمبادئ رعاية الحيوان المعملية" (NIH منشورة رقم 85 – 23).

تدريب السكروز والقياسات الحركية

تم نقل الفئران إلى غرفة الاختبار 3 أيام متتالية لـ 2 h / day في أقفاصهم المنزلية. في اليوم الرابع تم إدخال زجاجات تحتوي على الماء أو 25٪ سكروز من خلال غطاء القفص لـ 5 min. ثم وزنت الزجاجات. لجميع التجارب ، كان مطلوبا من الفئران أن تشرب على الأقل 1 غرام من السكروز أثناء وصول 5 دقيقة خلال أيام 3 من بدء التدريب ليتم تضمينها في الدراسة. في الواقع ، استوفت جميع الفئران هذا المعيار. بعد إزالة الزجاجة ، بقيت الفئران في غرفة الاختبار لمدة دقيقة 30 قبل النقل إلى منشأة الحيوان. في يوم التضحية ، تم جعل الفئران فاقدًا للوعي من قبل CO2تم قطع رأسه بواسطة المقصلة وعينات الأنسجة التي تم جمعها على الجليد. بالنسبة للتجارب الحركية ، تم وضع الفئران في غرف القياس الحركية (Accuscan، Columbus، OH) بإجمالي 35-min. بعد 15-min في الغرفة ، تم إدخال زجاجة مع سدادة حبة من خلال الجزء العلوي من الغرفة واستقرت. تمت إزالة الزجاجة من الجزء العلوي من الغرفة بعد 5-min ، وظلت الفئران في الغرفة للحصول على 15-min إضافية بعد إزالة الزجاجة. تم تكرار هذا الإجراء بشكل مماثل لـ 7 أيام متتالية. تم قياس المسافة المقطوعة باستخدام نظام VersaMax (Accuscan، Columbus، OH) ، والذي قام بمراقبة النشاط الحيواني عبر شبكة من 16 × 16 أشعة ضوء الأشعة تحت الحمراء التي تجتاز القفص الحيواني (42 × 42 × 30 cm) من الأمام إلى الخلف ومن اليسار إلى اليمين . تم تخزين المعلومات حول حالة الحزمة ، الممسوحة ضوئيًا بمعدل 100 مرة في الثانية ، على القرص. تم التعبير عن النشاط كمسافة متنقلة تقاس بالسنتيمترات خلال 12 مختلف صناديق 3-min في جلسة دقيقة 35 (كانت الحاوية النهائية 2-min).

تدريب السكرين

لمقارنة الاتجار الناجم عن السكروز من GluA1 مع آثار تناول السكرين ، تم إيواء 12 الذكور البالغين الفئران (250 ز) في منشأة الحيوان في دورة 12 ضوء / الظلام. ثم تم تعريض جميع الجرذان إلى غرفة الاختبار عن طريق نقلها إلى غرفة الاختبار ، وغادرت إلى 2 ساعة ، ونقلها مرة أخرى إلى منشأة الحيوان. في يوم واحد من 4th (بعد أيام 3 من التعود) ، أعطيت الفئران زجاجات الوصول التي تحتوي على الماء ، السكروز ، أو السكرين. أعطيت الفئران 4 الوصول إلى زجاجة تحتوي على الماء تقع على الجزء العلوي من القفص مع صنبور بروز في القفص من خلال الغطاء. كان وقت الوصول دقائق 5 ، ثم تمت إزالة الزجاجة ، وبعد 15 دقيقة تم نقل الفئران دقيقة إضافية مرة أخرى إلى منشأة الحيوان. أعطيت الفئران 4 الوصول إلى حل السكروز 25 ٪ وأعطيت الفئران 4 الوصول إلى الحل السكرين 3 (Sweet'n منخفض). تم قياس حجم السائل المستهلك. تم تكرار هذا الإجراء في أيام 7. في يوم 7th من الشرب ، مباشرة بعد إزالة الزجاجة ، تم التضحية بالفئران وتم حصاد المتكئة الأساسية وتم اختبار مستويات GluA1 من قبل لطخة غربية.

الكهربية

تم تدريب الجرذان على السكروز كما هو موضح أعلاه في أقفاص بلاستيكية واضحة ، وبعد إزالة الزجاجة في اليوم 7 ، تم تخديرها بالكيتامين (100 mg / kg ip) وزيلازين (10 mg / kg ip) و perfused عبر transcardially مع المياه المالحة الباردة (تجارب mEPSC) أو قطع رأسه على الفور (تجارب التصحيح). تمت إزالة الدماغ بسرعة إلى السائل النخاعي الاصطناعي (ACSF) يتألف من التالي (في mM): لتجارب mEPSC: NaCl (118) ، KCl (2.5) ، CaCl2 (3) ، MgCl2 (1) ، NaHCO3 (26) ، NaH2PO4 (1) ، D-glucose (10) ، osmolarity تم تعديلها إلى 325 mOsm ويتم تهويتها بواسطة 95٪ O2/ 5٪ CO2 (pH 7.4) ؛ لتجارب التصحيح: 75 السكروز ، 87 NaCl ، 2.5 KCl ، 1.25 NaH2PO4، 0.5 CaCl27 MgCl2 6 H2O ، 25 NaHCO3، 10 dextrose ، فقشت مع 95٪ O2 / 5٪ CO2 (pH 7.4). تم قطع الشرائح الاكليلية (300μm thick) المحتوية على النواة المتكئة في ACSF البارد بالثلج باستخدام vibrotome (Leica، VT1200S) وتم الاحتفاظ بها مغمورة في ACSF (ACSF، in mM: 124 NaCl، 2.5 KCl، 1.25 NaH2PO4، 2.5 CaCl2، 1.5 MgSO4 7H2O، 26 NaHCO3، و 10 سكر العنب) لمدة <30 دقيقة ؛ ثم تُحفظ في شريحة ما قبل الحاضنة في درجة حرارة الغرفة لمدة ساعة على الأقل للسماح بالتعافي. بالنسبة لتجارب mEPSC: تم بعد ذلك نقل شريحة واحدة إلى غرفة تسجيل حيث تم غمرها بشبكة من النايلون عند 1 درجة مئوية باستخدام سخان ومراقب للمحلول المضمن TC32B (Warner Instruments ، CT). تم ترطيب الغرفة بشكل مستمر بواسطة ACSF بمعدل ثابت 324 مل / دقيقة. تم تحديد الخلايا العصبية الشوكية المتوسطة من المنطقة الأساسية للنواة المتكئة تحت التوجيه البصري باستخدام مجهر فيديو تباين التداخل التفاضلي بالأشعة تحت الحمراء (Hamamatsu C2) مع مجهر أوليمبوس BX5405WI المستقيم المزود بهدف غمر بالماء لمسافة طويلة 50x. أقطاب التصحيح (40-4 M–) مليئة بمحلول ماصة داخل الخلايا يتكون من (بالمللي مول): CsCl (6) ، HEPES (145) ، EGTA (10) ، و MgATP (0.5). تم تعديل الأسمولية إلى 5 ملي أسمول مع السكروز ، وتم تعديل الأس الهيدروجيني إلى 290 مع CsOH. تم تسجيل تيارات ما بعد التشابك المثيرة المصغرة (mEPSCs) في وجود bicuculline (7.4 ميكرومتر) و tetrodotoxin (10 ميكرومتر) باستخدام مضخم Axopatch 1B (الأجهزة الجزيئية ، CA) ورقمنتها بواسطة Digidata 200A (الأجهزة الجزيئية ، كاليفورنيا). لتجارب التصحيح: تم نقل الشرائح إلى غرفة التسجيل وامتصاصها (1322-2.0 مل دقيقة-1) مع ACSF المؤكسد في 33 - 35 ° C التي تحتوي على Picrotoxin 50 tom لعزل EPSCs. تم صنع تسجيلات الخلايا الكاملة الجسدية من الخلايا العصبية الشوكية المتوسطة في المنطقة الوسطى في المشابك الفولطية مع مضخم الصوت متعدد الوظائف 700B (أجهزة جزيئية) باستخدام مجهر الفيديو IR-DIC. تم ملء ماصات التصحيح (4 – 6 MΩ) بمحلول داخل الخلايا (في mM: 125 Cs-gluconate و 2 CsCl و 5 TEA-Cl و 4 Mg-ATP و 0.3 GTP و 10 phosphocreatine و 10 HEPES و 0.5 EGTA و 3.5 QX -314). تم ترشيح البيانات في 2 kHz ، ورقمتها في kHz 10 ، وتحليلها مع Clampfit 10 (الأجهزة الجزيئية). تم تطبيق التحفيز خارج الخلايا (0.01-1 مللي ثانية ، 5-150 μA ، 0.2 Hz) باستخدام قطب صغير قطب زجاجي 0.05-0.5 mm من قطب التسجيل. بعد ~ 10 دقيقة من تسجيل خط الأساس ، كان perfused حل يحتوي على Naspm (200 μM) في الحمام ل 10 دقيقة. تم قياس التغيرات في السعة EPSC قبل وبعد تطبيق الدواء في عقد إمكانات −70 ، −50 ، −30 ، 0 ، + 20 ، + 40 و + 60 mV. مؤشر تصحيح (ir) تم حسابها عن طريق تصحيح أي تغيرات محتملة في إمكانات الإحالة ويتم حسابها من المعادلة التالية: ir = (I-70 / 70) / (I40+ / 40) ، أين I-70 و I40+ هي اتساع EPSC المسجلة في mVXXV + و 70 mV على التوالي.

تجزئة التحت خلوي والتشكيل الغربي

تم جمع المتكاثفات على الجليد كما هو موضح أعلاه. عندما تم تشريح النواة والقشرة بشكل منفصل ، تم تأكيد الفصل عن طريق فحص الكسور المتزامنة لـ dopamine β-hydroxylase ، وهو إنزيم موجود في أطراف المحاور إلى القشرة ولكن ليس النواة (Sesack و Grace ، 2010). تم تحضير الخلايا الكاملة و synaptosome و PSD كما هو موضح سابقا (الأردن وآخرون، 2004). تم إعادة تعليق حبيبات Synaptosomal في 200 Xl 25 mM Tris مع 1٪ Triton X-100 ، هزّتها 4 ° C لـ 30-min ، وطردها مركزياً في 13,800 × g لـ 15-min في microcentrifuge إلى أقراص PSD. تم تعليق البيليه التي تحتوي على PSDs الخام في 25 mM Tris مع 2٪ SDS. تم تحليل الكسور بواسطة لطخة غربية على جلات SDS-PAGE كما هو موضح سابقًا (الأردن وآخرون، 2004). تم استخدام الأجسام المضادة التالية: الدوبامين β-هيدروكسيلاز (1: 1,000، Abcam)، GluA1 (1: 1,000، Millipore)، phosphor-Ser 845 GluA1 (1: 1,000، Millipore)، GluA2 (1: 1,000، Millipore) و tubulin (1: 10,000 ، Sigma).

المجهر الإلكتروني

في يوم حصاد الأنسجة (يوم 7 من تدريب السكروز) ، تم وضع الفئران من مجموعات اختبار 3 (الماء ، السكروز / الماء ، السكروز ، مجموعة الجرذان / اختبار 3) في غرف القياس الحركية لـ 15-min ؛ في 15-min تم تقديم زجاجة من خلال قمة الغرفة. تلقت الجرذان في مجموعة المياه المياه ، تلقت الفئران في مجموعة الأوكوزوم السكروز 25 ٪ ، والفئران في مجموعة السكروز / المياه ، التي استهلكت 25 ٪ السكروز لأيام 6 ، تلقت المياه. كانت الجرذان تخديرًا عميقًا مع Nembutal (50 mg / kg ip) و perfused عن طريق العجلة مع 0.1 M الفوسفات العازلة (pH 7.4) التي تحتوي على 4٪ بارافورمالدهيد و 0.1٪ غلوتارالدهيد بمعدل 50 مل / دقيقة خلال أول 3-min ، ثم في معدل 20 ml / min لـ 7-min المتتالية. تم تحضير الأنسجة لوضع العلامات المناعية (PEG) وتم التقاط الصور كما هو موضح سابقًا (Nedelescu et al.، 2010). تم تصنيف Immunolabels وفقًا لموضعها بالنسبة إلى PSD عند الوصلات المشبكية غير المتماثلة مثل "cleft" أو "قرب PSD" (ضمن عرض 1 PSD من PSD) أو "عند PSD" أو "intraspinous" أو "غشاء extrasynaptic". كل حيوان ، كانت المشابك 93 عينات من قلب المتكئين. تم ضمان أخذ العينات العشوائية من خلال تحليل جميع المشابك 93 التي واجهتها عشوائياً في المرة الأولى التي كنا ننتشر فيها بشكل منهجي عبر الشبكة ، ثم تجميع نفس عدد نقاط الاشتباك العصبي من كل حيوان من الحيوانات الثلاثة التي تلقت علاجات سابقة للوفاة. تم إجراء نوعين من التقدير الكمي. كان أحدها لتقييم مستوى gluR1- immunoreactivity ، عن طريق حساب عدد جزيئات PEG التي حدثت في مجالات وظيفية منفصلة في العمود الفقري. وكان الآخر لتقييم نسبة نقاط الاشتباك العصبي المسمى في PSD بأي عدد من جزيئات PEG. حتى المشابك الموصوفة بجزيئات 1 PEG فقط اعتبرت مصنفة ، على أساس العمل السابق الذي يوضح خصوصية إجراء GluR1-PEG (Nedelescu et al.، 2010). تم تحليل آثار العلاج على نسبة ومستوى GluR1-immunolabeling بواسطة ANOVA في اتجاه واحد مع مقارنات مخصصة بعد انتهاء الوقت (فيشر LSD). للقضاء على التحيز التجريبي ، كانت البيانات ثلاثية الأعمى: قام أحد التجريبيين بإجراء تدريب السكروز وأبقى سجلات الحيوانات في مجموعات الاختبار الثلاثة ، قام المجرب الثاني بإنشاء الصور المجهرية الإلكترونية وقام بتعيين رمز أبجدي رقمي جديد لكل صورة مجهرية وأبقى الرمز مختومًا ، وثلاثة من المجربين إضافية مسحها micrographs وجزيئات PEG محسوبة. بعد اكتمال تقدير PEG ، اجتمع المجربون للكشف عن هويات كل صورة مجهرية.

زرع القنية والحقن داخل الجمجمة

تم استخدام الحقن داخل القحف لإيصال Naspm و APV إلى النواة المتكئة. لغرس القنية ، كما هو موضح سابقا (كار وآخرون ، 2010) ، تم تخدير الفئران بعمق مع الكيتامين (100 ملغ / كغ الملكية الفكرية) وزيلازين (10 ملغ / كغ IP) وحقن ما بعد الجراحة مع بنامين مسكن (1 ملغم / كغم تحت الجلد). تم زرع الفئران بطريقة تجسيميّة باستخدام قنينتين لقياس 26-cannulae (PlasticsOne، Roanoke، VA) بشكل ثنائي في قلب المتكثفات مع إحداثيات: 1.6 mm الأمامي إلى bregma؛ 2.9 ملم الجانبي إلى الدرز السهمي ، نصائح بزاوية 8 ° باتجاه خط الوسط ، 5.6 ملم بطني إلى سطح الجمجمة. عقدت Cannulae في مكان من قبل الاكريليك الأسنان وتمت المحافظة على سالتة مع stylet الانسداد. بالنسبة للحقن داخل الجمجمة ، تم تحميل حلول Naspm و APV إلى طنين 30 سم من أنابيب PE-50 المرفقة في أحد طرفي محاقن 25-μl Hamilton مملوءة بالماء المقطر وفي الطرف الآخر إلى قنية حاقن 31-gauge ، والتي مددت 2.0 ملم وراء الأدلة المزروعة. تم تركيب المحاقن على الحائزين التوأم لمضخة حقنة ميكروسكتر من جامعة هارفارد 2272 التي قدمت وحدات حقن 0.5 μl خلال فترة 100 ثانية. بعد دقيقة واحدة من الانتهاء من الحقن ، تمت إزالة قنية الحاقن من الأدلة ، واستبدلت styts ، ووضعت الحيوانات في غرف اختبار الحركية للتدريب السكروز. بعد الأضحية الحيوانية ، تم تحليل أقسام الدماغ المبردة لتوطين الكانيولا ؛ تم استبعاد 2 من الحيوانات 15 من الدراسة بسبب وضع قنية غير لائق.

تحليل احصائي

تم استخدام ANOVA في اتجاه واحد متبوعًا باختبارات فيشر بوست (hock) للاختبارات الميكروسكوبية والكيمياء المناعية والتجارب الأحيائية. تم استخدام اختبارات t-two للطلاب tailed لعلم الكهربية. بالنسبة لتجارب فرط السكر في السكروز ، تم استخدام ANOVA في اتجاهين ، متبوعة باختبارات فيشر ما بعد الولادة.

النتائج

توصيف نموذج ابتلاع السكروز

استخدمنا نموذج ابتلاع السكروز للتحقيق في آثار مكافأة الطبيعية ، حافزا للنزعة على انتقال متشابك (الشكل شنومكسا). ونقلت ذكور الجرذان البالغة إلى غرفة اختبار في ثلاثة أيام متتالية. في اليوم الرابع (اليوم الأول من التدريب) ، تم وضع الفئران في غرفة قياس حركي. بعد دقائق 15 من قياس النشاط الحركي في الغرفة ، تم إدخال زجاجات تحتوي إما على الماء (للحيوانات المائية) أو محلول السكروز 25٪ (لحيوانات Sucrose) في غرف القياس من خلال ثقوب في غطاء الغرفة. تمت إزالة الزجاجات بعد دقائق 5 وتم قياس النشاط الحركي لدقائق 15 إضافية قبل أن يتم إرجاع الحيوانات إلى أقفاص المنزل. كررنا هذا الإجراء للأيام المتتالية 7. في بعض التجارب ، تم تمديد تدريب السكروز إلى 8th يوم. سمح لنا هذا الوصول القصير غير المشروط بالحل المستساغ للغاية بالتحقيق في كل من التأثيرات الحادة والتراكمية لسحب السكروز ، حيث قامت الحيوانات بتشرب السكروز بشكل قوي خلال نافذة الوصول خلال ثلاثة أيام من التدريب (الشكل شنومكسب). مكنت هذه الظروف التجريبية من مقارنة مجموعات الاختبار على الفور بعد التوقف عن تناول الطعام. كان معيارنا لإدراجها في الدراسة هو أن الفئران بدأت تستهلك ما لا يقل عن غرام واحد من السكروز خلال فترة الوصول في غضون ثلاثة أيام من بدء التدريب ؛ تم استبعاد أي الحيوانات من الدراسة على أساس هذا المعيار.

الشكل 1  

يتسبب تناول السكروز المتكرر في حدوث ارتفاعات عابرة في الحركة التلقائية.

لاحظنا أنه خلال ثلاثة أيام من التدريب ، استهلكت حيوانات السكروز محلول السكروز بشكل ملحوظ أكثر من الحيوانات المائية المستهلكة للمياه (الشكل شنومكسب). بالإضافة إلى ذلك ، على الرغم من عدم وجود فروق ذات دلالة إحصائية في الحركة التلقائية خلال أيام التدريب 1 – 6 (لم تظهر البيانات) ، فقد لاحظنا ارتفاعًا كبيرًا في إجمالي المسافة المقطوعة في حيوانات Sucrose مقارنة بالحيوانات المائية في ثلاث دقائق بعد إزالة الزجاجة في اليوم 7 (الشكل 1D) ، وكان هذا الاختلاف موجودًا أيضًا في اليوم 8 (الشكل 1E). لم يلاحظ أي فروق في إجمالي المسافة المقطوعة بين الحيوانات المائية وسكروز في الدقائق الثلاث السابقة لإدخال الزجاجة في أي من أيام الاختبار (الشكل شنومك) ، مما يشير إلى ارتفاع حركة كان استجابة حادة لابتلاع السكروز محددة للفئران المدربة السكروز ، بدلا من استجابة مشروطة إلى غرفة الحركي. تمشيا مع هذا الاحتمال ، كان هناك ارتباط إيجابي كبير بين كمية السكروز المستهلكة والمسافة الكلية التي تم قطعها (الشكل 1F). لم يكن هناك اختلاف في أوزان الحيوانات بين مجموعتي السكروز والماء قبل أو بعد أيام تدريب 7 (لا تظهر البيانات).

يحفز تناول السكروز دمج CPAR

أدى تدريب السكروز إلى ارتفاع عابر في الحركة في يوم التدريب النهائي. لتحديد ما إذا كانت هذه النتيجة من تناول السكروز مصحوبة بالتغيرات الكهربية في النواة المتكئة ، وهي المنطقة التي تنظم سلوك المكافأة ، قمنا بإعداد شرائح النواة المتكئة مباشرة بعد إزالة الزجاجة في اليوم 7 وسجلت من الخلايا العصبية من النواة المتكئة (الشكل شنومكسا). وقد تدخلت المنطقة الفرعية الأساسية في الاستجابات الحركية للمحفزات المكافئة (Sesack و Grace ، 2010). وجدنا أن كل من اتساع وتواتر تيارات ما بعد التشظيح التلقائية المصغرة العفوية (mEPSCs) كانت أكبر بكثير في قلب المتكئة من حيوانات السكروز مقارنة بالحيوانات المائية (الشكل شنومكسب). وهذا يدل على أن استهلاك السكروز المتكرر يمكن أن ينظم بشكل إيجابي انتقال متشابك في النواة المتكئة النواة. لتحديد ما إذا كان دمج CPAR قد لعب دوراً في التحفيز بعد السكروز ، قمنا بتحديد مؤشرات لتصحيح الخلايا العصبية الأساسية المتكسبة عن طريق قياس EPSCs عند إمكانات الغشاء المختلفة (الأرقام 2C و 2D و 2E). CPARs يتم تصحيحها داخليا في إمكانات depolarized بسبب حصار polyamine الذاتية. لاحظنا تصحيحًا مهمًا في تسجيلات من الخلايا العصبية لحيوانات السكروز ، كما هو مبين في اللاخطية في العلاقة I / V ، مقارنة بالحيوانات المائية (الشكل 2E) ، بالإضافة إلى زيادة كبيرة في مؤشر تصحيح (الشكل 2F).

الشكل 2  

يتم تحفيز نقاط الاشتباك العصبي الأساسية المتراكمة بعد تناول السكروز المتكرر.

لتأكيد ارتفاع مستويات CPAR بواسطة طريقة أخرى ، سجلنا من الخلايا العصبية الأساسية المتكئة بعد إدراج مانع CPAR المحدد ، 1-Naphthylacetyl spermine (Naspm) في الحمام. وجدنا أن Naspm انخفض بشكل كبير من سرعة EPSC في تسجيلات من الخلايا العصبية من السكروز وليس الحيوانات المائية (أرقام 3A – C). بالإضافة إلى ذلك ، بعد علاج نازم ، أصبحت علاقة I / V في الخلايا العصبية من حيوانات Sucrose خطية ، مما يعكس تثبيط CPARs في synapses الحيوان Sucrose ، في حين لم يلاحظ أي تأثير معنوي على علاقة I / V بعد المعالجة بالنواة في العصبونات من الحيوانات المائية (شخصيات 3D). هذه النتائج تثبت أن تناول السكروز المتكررة يدفع دمج CPARs في نقاط الاشتباك العصبي الأساسية المتكئة.

الشكل 3  

يؤدي تناول السكروز إلى دمج مستقبلات AMPA من نوع Ca2 +.

يحرض السكروز ابتلاع GluA1 الاتجار

CPARs هي مستقبلات AMPA التي تفتقر إلى الوحدة الفرعية لمستقبلات GluA2 AMPA. وبالتالي ، فإن تضمين متشابك CPARs في معظم الأحيان ينطوي على المتاجرة بالنشاط متشابكة النشاط من الوحيدات GluA1 (هو وآخرون ، 2009; اسحق وآخرون ، 2007; ليو وزوكين ، 2007; Plant et al.، 2006). لتأكيد دمج متشابك CPAR بعد تدريب السكروز ، درسنا ما إذا كان تناول السكروز زيادة التعبير المشبكي من GluA1. أعطيت الفئران الوصول إلى السكروز كما هو موضح أعلاه ل 7 أيام متتالية. في أيام 1 ، 3 ، 5 ، و 7 ، عزلنا الخلية بأكملها ، وكثافة synaptosome و postynaptic (PSD) كسور من ثلاث مناطق الدماغ: المتكئة الأساسية (الأساسية) ، قذيفة المتكئين (قذيفة) والقشرة الحسية الجسدية (القشرة). قمنا بتحليل كل أجزاء الخلية وكسر PSD من خلال البقعة الغربية للتعبير عن GluA1 و GluA2.

لم نعثر على أي تغييرات في GluA1 أو GluA2 في أجزاء الخلية بأكملها من المتكاسل lysates في أيام الاختبار فحصها ، مما يشير إلى أن استهلاك السكروز المتكررة لا ينظم المستويات الإجمالية لهذه البروتينات (أرقام 4A – C). في أجزاء PSD المتكتمة ، ومع ذلك ، زاد GluA1 زيادة كبيرة في يوم 7 في جوهر ولكن ليس في الصدفة في حين لم تتغير GluA2 بشكل كبير في أي من الكسور (أرقام 4D – 4F والبيانات لا تظهر). لاحظنا أي زيادة كبيرة في GluA1 في كسور PSD الأساسية المتكثة في أيام الاختبار السابقة (أرقام 4D – F) و GluA1 أو GluA2 لم تتغير في كسور PSD القشرة في أي من أيام الاختبار (لا تظهر البيانات). زيادة GluA1 ، خاصة بالنسبة إلى GluA2 ، في المشابك PSDs الأساسية المتزامنة بعد ابتلاع السكروز المتكررة تمشيا مع زيادة التصحيح لوحظ في الخلايا العصبية الأساسية المتكافلة ، كما هو موضح أعلاه.

الشكل 4  

الكثافة بوستسينابتيك GluA1 ، ولكن ليس GluA2 ، هو زيادة في النواة المتكئة النواة بعد ابتلاع السكروز.

وقد تبين الاتجار GluA1 تعتمد على النشاط إلى المساهمة اللدونة متشابك المختبر و أيضا في الجسم الحي (لو وروش ، 2011). تم إثبات آلية سريعة ومتعددة الخطوات لتداول GluA1 المختبر (Serulle et al.، 2007; Sun et al.، 2008; Sun et al.، 2005). حتى الآن ، ومع ذلك ، فإن مساهمة هذه الآلية متعددة الخطوات لتراكم متشابك GluA1 في الجسم الحي لم يتم اختباره. ولتحديد ما إذا كان تدريب السكروز يحث على الاتجار بالـ GluA1 بشكل حاد من خلال الآلية متعددة الخطوات ، قمنا بترجمة GluA1 في نواة synumbes nucleus accumbens من حيوانات السكروز والماء المدربة بواسطة المجهر الإلكتروني الكمي. تم حصاد النسيج المتجانس في اليوم السابع من تدريب السكروز من مجموعات اختبار 3 من الفئران. كانت هذه الفئران التي: 1) تستهلك المياه أيام 7 (الماء) ، 2) المستهلكة السكروز للأيام 7 (السكروز) ، و 3) استهلكت السكروز أيام 6 والمياه في يوم 7 (السكروز / الماء). تمت التضحية بالفئران على 7th اليوم ، دقائق 5 بعد استهلاك السكروز أو الماء. وهكذا ، كشفت المقارنة بين مجموعتين من مجموعات الاختبار ، حيوانات السكروز / الماء والسكروز ، لبعضهما البعض والحيوانات المائية ، المقياس الزمني للتغيرات بعد المشبكية الناجم عن استهلاك السكروز في الجرذان المدربة على السكروز. قمنا بقياس immunogold immunogold (PEG) -Labeled GluA1 في 5 مختلف مقصورات ما بعد الشبكية: العصب الشوكي cytosol (intraspinous) ، غشاء البلازما خارج الشبكية (الغشاء) ، PSD ، بالقرب من PSD ، والشق متشابك ، مع تجميع الأجزاء الثلاثة الأخيرة معا كـ PSD "(الشكل. 5A). للقضاء على التحيز التجريبي ، كانت هويات مجموعة اختبار مجهرية الإلكترون من الثلاثي أعمى.

الشكل 5  

يكشف الفحص المجهري الإلكتروني تحريض المتاجرة متعددة الخطوات GluA1 عن طريق تناول السكروز.

أظهرت كل من حيوانات السكروز والسكروز والحيوان ارتفاعًا ملحوظًا في الغلوكينومكس في الوتر بالنسبة إلى الحيوانات المائية (الشكل. 5B و 5C). وهذا يشير إلى أن استهلاك السكروز المزمن يزيد من تجمع داخل الخلايا لمستقبلات AMPA تحتوي على GluA1 ملاصقة للمواقع المشبكية ، والمستقبلات التي قد تكون متاحة بسهولة للاتجار المتشابك ، والأهم من ذلك ، أن هذا المجمع الخلوي يمكن أن يستمر لساعات 24 بعد الاستهلاك النهائي للسكروز . ثم قمنا باستكشاف السؤال المهم حول ما إذا كان حافز السكروز الحاد يمكن أن يحفز الاتجار GluA1 السريع. لاحظنا أن غشاء البلازما خارج الشبكية GluA1 قد زاد بشكل كبير في حيوانات السكروز مقارنة مع كل من حيوانات السكروز / الماء والماء (أرقام 5B و 5D). تشير هذه الملاحظة إلى أن المكافأة الطبيعية أو الحسية التي يقدمها محفز سكروز واحد يمكن أن تؤدي بسرعة (أقل من 5 دقائق) ولكن بشكل عابر (وقت الاضمحلال أقل من 24 ساعة) إلى زيادة عدد السكان خارج المشبكي لمستقبلات AMPA المحتوية على GluA1 ، مما يؤدي إلى تكوين تجمع قابل للتغير من خلاله المستقبلات قد المرور إلى المشبك.

بشكل كبير، المختبر وقد اقترحت الدراسات أن إدراج متشابك لمستقبلات AMPA يحدث في خطوات 2. في الحالة الأولى ، يرفع الفسفرة Ser 845 التي تعتمد على الغلوتامات أو الدوبامين مستويات المستقبلات في المواقع خارج الشبكية في غشاء البلازما (Esteban وآخرون ، 2003; Serulle et al.، 2007; Sun et al.، 2008; Sun et al.، 2005) ، بينما في المرحلة الثانية ، يعزز فسفرة 818 Sern دمج synaptic (Boehm et al.، 2006). توضح مقارنةنا المجهرية الإلكترونية لحيوانات Sucrose مع حيوانات Sucrose / Water و Water أن الخطوة الأولى من الاتجار GluA1 لوحظت المختبر (ماكينو ومالينو ، 2009) ، والاتجار السريع للغشاء extrasynaptic ، كما يحدث في الجسم الحي بعد تقديم مكافأة أوزاسينسي.

تماشيًا مع النتائج الكهربية والكيميائية الحيوية الموضحة أعلاه ، أثبتت PEG EM أن تناول السكروز أدى أيضًا إلى الخطوة الثانية في دخول GluA1 المتجول لدخول GluA1 إلى المشبك لأن مستوى GluA1-immunoreactivity في PSD كان أكبر بكثير بالنسبة إلى السكروز مقارنة بجرذان الماء ، وكان هناك اتجاه نحو زيادة GluA1 في السكروز / المياه مقارنة مع فئران المياه (أرقام 5B و 5E). تتوافق الزيادة في حيوانات Sucrose / Water مع الدمج السريع لـ GluA1 الذي يتحلل مع نصف عمر متشابك لـ ~ 24 hr ، أو الإدراج السريع لـ GluA1 واستبداله بواسطة GluA1 / 2 المتشابك خلال فترة زمنية مماثلة. كانت نسبة نقاط الاشتباك العصبي التي تعبر عن GluA1 في PSD أكبر أيضًا في فئران السكروز مقارنة بجرذان الماء (الشكل 5F) ، مما يشير إلى أن GluA1 ينتقل إلى نقاط الاشتباك العصبي التي كانت تفتقر سابقًا إلى GluA1. يشير هذا أيضًا إلى أن الزيادة في سعة mEPSC التي لوحظت في فئران السكروز ناتجة عن زيادة في GluA1 المشبكي ، وأن الزيادة في تردد mEPSC قد تنجم عن توظيف GluA1 إلى المشابك المتكئة الصامتة سابقًا ، على الرغم من أنه لا يمكن استبعاد تقوية إطلاق الغلوتامات. قمنا أيضًا بقياس عدد نقاط الاشتباك العصبي في كل مجموعة من مجموعات الاختبار الثلاث لتحديد ما إذا كان تناول السكروز قد تسبب في حدوث التشابك العصبي ؛ لم تكن هناك فروق بين مجموعات الاختبار الثلاث (البيانات غير معروضة). نستنتج أن تناول السكروز المتكرر يرفع من تجمع مستقر داخل الشوكة (> 24 ساعة) من GluA1 ، وأن حافز السكروز الفردي لفأر سكروز مدرب (6 أيام) كافٍ لرفع GluA5 بسرعة (1 دقائق) في غشاء البلازما خارج المشبكي ، ومن المحتمل سحب المستقبلات من البركة داخل الشوكة. نقترح أن يتم دمج جزء من هذه المستقبلات خارج المشبك بثبات في PSD ، مما يؤدي إلى مؤشر التصحيح المرصود وتغييرات PSD GluA1 ، قبل أن يعود التجمع خارج المشبكي إلى خط الأساس في 24 ساعة بعد التحفيز. تكشف هذه النتائج أن المكافأة الطبيعية يمكن أن تحفز بشدة الاتجار السريع بـ GluA1 في حيوان مدرب.

مطلوب نشاط CPAR للتنقل المرتفع بعد تناول السكروز

الخلايا العصبية الشوكية المتوسطة تستقبل كل من مدخلات الدوبامين والجلوتاميرات (Calabresi، et al.، 1992). من أجل تقييم مشاركة إشارات الغلوتامات في الحركة العفوية المرتفعة التي لاحظناها بعد تناول السكروز في الفئران المدربة على السكروز ، قمنا بزرع القنيات في قلب الفئران المتكئة ، والحيوانات المدربة في غرف القياس الحركية كما هو موصوف أعلاه. في اليوم 8 من تدريب السكروز ، نحن microinjected Naspm في جوهر قبل التنسيب في غرفة الاختبار الحركي. الحقن انخفض إجمالي المسافة المقطوعة من الحيوانات السكروز والقضاء على الفرق بين السكروز والحيوانات المائية ينظر إليها على الفور بعد إزالة الزجاجة (الشكل شنومكسا). للتحقق من أن الإجهاد الناجم عن التعامل مع الحيوانات لم يؤثر على استجابة السكروز ، قمنا بحقن محلول ملحي في القلب في اليوم التالي (اليوم 9 من تدريب السكروز) ؛ مرة أخرى لوحظ فرط النشاط الكبير في حيوانات السكروز مباشرة بعد إزالة الزجاجة (الشكل شنومكسب). هذا يدل على أن Naspm قد عرقل على وجه التحديد الارتفاع الناجم عن السكروز في الحركة. كما أن حقن المضاد NMDAR ، APV ، في القلب في الأيام التالية ، أزال أيضًا الفرق بين السكروز والحيوانات المائية (الشكل شنومك) ، مما يدل على أن NMDARs مطلوبة أيضًا لرفع الحركة التلقائية بعد تناول السكروز. من أجل تحديد ما إذا كانت استجابة مشروطة لغرفة الاختبار لعبت دورًا في تحريض النشاط الزائد ، تم وضع الحيوانات في الغرفة لـ 35 min بدون إدخال الزجاجة ؛ لم يلاحظ أي فروق في المسافة المقطوعة بين السكروز والحيوانات المائية (الشكل 6D). لم تؤثر Naspm و APV على استهلاك السكروز (الشكل 6E) ، مما يدل على أن CPARs الأساسية و NMDARs ليست مطلوبة من أجل تناول السكروز بقوة. الحيوانات التي لم توضع فيها القنيات في قلب المتكئة (2 من حيوانات 15) ، كما تم تقييمها بعد التضحية (الشكل 6F) ، لم تدرج في الدراسة. في الختام ، تُظهر هذه البيانات معًا أن استهلاك السكروز بواسطة فئران مُدربة بواسطة السكروز يحث على الاتجار المتشابك في GluA1 في دقائق 5 ، وأن حظر آليات التشوير التي تتحكم في هذا الإتجار يحول دون ارتفاع النشاط الحركي التلقائي بعد السكروز.

الشكل 6  

يتطلب التحرك التلقائي المرتفع بعد تناول السكروز CPAR و NMDARs.

يمكن تصور مسارين للإشارة إلى السكروز. واحد ، هو مسار كيميائي دقيق أو غير مباشر ، يبدأ من ارتباط السكروز لمستقبل الذوق الحلو ، والذي يتوافق مع مجمع مستقبلات البروتين المتقارن G ، T1R2 / T2R3 (Kitagawa et al.، 2001; ماكس وآخرون ، 2001; نيلسون وآخرون ، 2001; ساينز وآخرون ، 2001). يمكن للمغذيات الغنية بالسعرات الحرارية أيضًا تنظيم وظيفة المخ عن طريق المسارات الأيضية المستقلة عن الذوق ، على الرغم من أن الآليات غير مفهومة بشكل جيد (de Araujo et al.، 2008). للتمييز بين هذين البديلين لمسار الإتجار GluA1 الناجم عن السكروز ، كررنا بروتوكول التدريب مع ثلاث مجموعات من الفئران (4 الجرذان / المجموعة) التي تم منحها حق الوصول لدقائق 5 إلى زجاجات تحتوي على ، الماء ، حل 25٪ السكروز أو السكرين 3٪ (الحلو والمنخفض). تمت إزالة الزجاجات وظلت الفئران لفترة أطول 15 في قفص التدريب. تم تكرار التدريب لأيام 7. لم تكن أحجام السوائل التي استهلكتها مجموعات اختبار السكروز والسكرين مختلفة بشكل كبير عن بعضها البعض وكلاهما كانا أكبر من الاستهلاك من قبل مجموعة المياه ، بما يتفق مع المكافأة من كل من المواد الحلوة (الشكل شنومكسا). في يوم 7th من الشرب ، مباشرة بعد إزالة الزجاجة ، تمت التضحية بالفئران ، تم حصاد الأنسجة الأساسية المتجمعة وتجميعها لكل مجموعة اختبار ، عزل جزء PSD ومستويات GluA1 بواسطة لطخة غربية (الشكل شنومكسب). كما في السابق ، أظهرت الحيوانات التي تناولت السكروز ارتفاع GluA1 في جزء PSD بالنسبة لمجموعة المياه (الشكل شنومك). إلى حد كبير ، كان GluA1 أيضا مرتفعة في جزء PSD من الحيوانات التي تستهلك السكرين. لم يكن هناك اختلاف كبير في مستويات GluA1 في أجزاء الخلية بأكملها من قلب المتكئين من الماء ، و السكروز وحيوانات السكرين ، مما يشير إلى أن الزيادة GluA1 كانت محددة لكسر متشابك (الشكل 7D). لأن السكرين يحفز نفس مستقبلات الذكاء البروتيني المرتبط بالبروتين G مثل السكروز (Masuda وآخرون ، 2012; نيلسون وآخرون ، 2001) ، ولكن يفتقر إلى القيمة الحرارية ، نستنتج أن تحفيز مستقبل الذوق الحلو يكفي لبدء الإشارات التي ترتقي بمستويات GluA1 في النواة المتكئة المشابك الأساسية.

الشكل 7  

تدريب السكرين يحفز على زيادة في GluA1 متشابك مماثلة لتدريب Sucrose.

مناقشة

لقد أظهرنا أن المكافأة الثاقبة للاستعمال ، وهي تكرار استهلاك السكروز ، يمكن أن تحفز بشكل حاد على دمج GluA1 synaptic من خلال آلية متعددة الإتجار بالبشر تم وصفها سابقًا المختبر. استهلاك السكروز المتكرر خلال أيام 6-7 potentiated المتكئين المشابك الأساسية الكهربية من خلال إدخال CPARs. كان هذا التأثير مصحوبًا بتراكم GluA1 ولكن ليس GluA2 في PSD للنواة ، وكان محددًا إقليميًا ودوليًا ، حيث لم تلاحظ أي تغييرات قبل يوم التدريب 7 في القلب ، ولم يلاحظ أي تغيير في القشرة المتكئة أو في القشرة الحسية الجسدية. وكشف التحليل المجهري الإلكتروني أن ابتلاع السكروز المتكرر ارتفع بشكل ثابت نسبيًا (t1/2 > 24 ساعة) مجموعة المستقبلات المحتوية على GluA1 داخل الشوكة. السكروز أيضا بسرعة (5 دقائق) وعابر (ر1/2 <24 ساعة) مستويات مرتفعة من المستقبلات المحتوية على GluA1 في مواقع خارج المشبكي في الحيوانات المدربة على السكروز ، مما يزيد من عدد AMPARs القادرة على الانتشار جانبًا في المشبك. تم زيادة Synaptic GluA1 ، على حد سواء كما تم تمثيله بواسطة جزء PSD وكما تم اكتشافه بواسطة PEG-EM ، بشكل ملحوظ في السكروز مقارنة بالحيوانات المائية. من هذه النتائج نقترح أن آلية من خطوتين لإخراج الخلايا خارج المشبك متبوعة بالاتجار المشبكي لإدخال AMPAR المتشابك الموصوف سابقًا المختبر (Boehm et al.، 2006; ماكينو ومالينو ، 2009; أوه وآخرون ، 2006; Serulle et al.، 2007; Sun et al.، 2005) يمكن البدء بسرعة في الجسم الحي بمكافأة طبيعية كبيرة.

تمت ملاحظة التغييرات في مستويات GluA1 متشابكة فقط بعد جلسات تدريب 7 ، مما يوحي بأن هناك حاجة لعدة ساعات من أجل التعزيز. في التجارب البيوكيميائية في الجسم الحي، لم نلاحظ زيادة ملحوظة في مستويات متلازمة PSD GluA1 الأساسية في أيام 1 و 3 و 5 لتدريب السكروز ؛ فقط بعد 7 أيام من تدريب السكروز كان GluA1 في PSD مرتفعة بشكل ملحوظ. في تجارب المجهر الإلكتروني ، لاحظنا أن حيوانات Sucrose / Water ، التي كان قد تم تدريبها على السكروز في الأيام 6 ولكنها لم تتلق محفز السكروز في ساعات 24 ، أظهرت اتجاها نحو زيادة PSD GluA1. كما أظهرت هذه الحيوانات ارتفاع GluA1 intraspinous مقارنة مع الحيوانات المائية ، ولكن لم يلاحظ أي تغيير في غشاء extrasynaptic GluA1. من هذه النتائج نستخلص ثلاثة استنتاجات. أولا ، تتراكم مستقبلات AMPA المحتوية على GluA1 intraspinously مع تحفيز السكروز المتتالية. بالنظر إلى أن الدراسات السابقة قد أظهرت أن تناول السكروز يحفز إطلاق الدوبامين في المتكئين (Cacciapaglia et al.، 2012; McCutcheon وآخرون ، 2012; رادا وآخرون ، 2005) ، ويمكن لـ D1Rs تشغيل ترجمة GluA1 المحلية في dendrites (سميث وآخرون ، 2005) ، الإفراج عن الدوبامين بعد ابتلاع السكروز قد يؤدي إلى تخليق GluA1 المحلي الذي يؤدي إلى تراكم GluA1 داخل الصبغي. بدلا من ذلك قد تعكس الزيادة داخل الصفاق الاتجار في GluA1 من المواقع البعيدة. من المحتمل أن يساهم الاتّجار الخلويّ من هذا البركة الذاهبة داخل النخاع في البركة خارج الشبكية في غشاء البلازما. وثانياً ، إن ملاحظة زيادة الغشاء الخارج عن الغشاء GluA1 في السكروز ، ولكن ليس في حيوانات Sucrose / Water أو Water تشير إلى أن المستقبلات خارج الشبكية تتحرك إما عبر خطوة ثانية إلى المشبك أو يتم إشباعها داخل 24 hr بعد استهلاك السكروز ، مما يجعل تجمع خارج extrasynaptic. وثالثاً ، يشير ارتفاع سكوروز الحيوانية PSD GluA1 مقارنة بحيوانات الماء ، ولكن ليس حيوانات سكروز / حيوانات ، إلى أنه بعد كل حافز سكروز ، تتحرك المستقبلات بشكل جانبي إلى المشبك من مجموعة المستقبلات التي يتم الاتجار بها بسرعة إلى غشاء البلازما خارج الشبكية. لا يمكننا استبعاد أن GluA1 يتاجر مباشرة من تجمع intraspinous إلى المشبك. لكن يبدو أن مثل هذا المسار غير محتمل بالنظر إلى أن الدراسات التي تُظهِر GluA1 قد تم إدراجها خارجًا بشكل إضافي (Boehm et al.، 2006; ماكينو ومالينو ، 2009; أوه وآخرون ، 2006; Serulle et al.، 2007; Sun et al.، 2005). تمثل هذه النتائج أول دليل على أن الدورة الزمنية لتهريب GluA1 (أقل من 5 دقائق) والمسار لوحظت المختبر كما لوحظت في الجسم الحي. بالإضافة إلى ذلك ، تشير نتائجنا إلى أن المثيرات المكافئة المتكررة تعدل القدرة على تقوية المشبك من خلال رفع مجموعة المستقبلات السائجة القادرة على الاتجار.

لأن السكرين يسبب GluA1 الاتجار بالمثل على السكروز ، ليس مطلوبا محتوى السعرات الحرارية من السكروز. السكرين يحفز نفس مستقبل الذوق الحلو ، T1R2 / T2R3 ، كما السكروز (Masuda وآخرون ، 2012; نيلسون وآخرون ، 2001) ، قمن المحتمل أن يؤدي تفعيل تفعيل هذا المستقبل إلى دمج GluA1 في مشابك MSN. السكروز يرفع إطلاق الدوبامين في المتكئفين من الخلايا العصبية VTA (Cacciapaglia et al.، 2012; McCutcheon وآخرون ، 2012; رادا وآخرون ، 2005) لeading إلى GluA1 الاتجار السطحي. وبالتالي ، فإن المسار الذي يربط مستقبل الذوق الحلو مع VTA من المرجح أن يكون محوراً للمرونة التي تمت دراستها هنا.

فمن المرجح أن الاتجار GluA1 السريع بعد ابتلاع السكروز يلعب دورا في تنظيم الحركة العفوية. في الواقع ، في الحيوانات المدربة على السكروز ، منع تثبيط CPARs ارتفاع النشاط الحركي التلقائي تلقائيا بعد ابتلاع السكروز. إجمالي المسافة التي قطعتها الجرذان بعد استهلاك السكروز المقاس في أيام متتالية كانت مرتفعة بشكل كبير فقط لفترة 3 دقيقة مباشرة بعد استهلاك السكروز في اليوم السابع من التدريب. زيادة النشاط مباشرة بعد ملاحظة السكروز بدءا من اليوم 3 من التدريب ، ولكن لم تصبح مختلفة بشكل ملحوظ حتى اليوم 7. ويرتبط هذا الوقت من النشاط مع المسار الزمني لتراكم GluA1 في dendrites الأساسية المتكافلة. كانت الحركة المتزايدة نتيجة وظيفية لاتجار CPAR إلى نقاط الاشتباك العصبي في MSN في القلب المتكثف لأن حقن Naspm في القلب يثبط الزيادات في النشاط. أظهرت الوقاية من الحركة المرتفعة بواسطة مثبطات مستقبل NMDA أن إشارات الغلوتامات عبر مستقبلات NMDA وكذلك CPR كانت ضرورية لرفع النشاط الحركي. غير أن تناول السكروز لم يتأثر بحصار إشارات الغلوتامات ، تماشيا مع الدراسات السابقة التي تدل على أن النواة المتكافلة تشارك في تنسيق استجابات المحركات المتعلقة بالمكافأة المحسوبية ولكنها ليست نفسها (سميث ، 2004). تم الإبلاغ عن دورة زمنية مماثلة لتطوير hyperlocomotion لتطوير فرط النشاط مشروطة في الحيوانات تغذية وجبة يوميا في بيئة مميزة (ماثيوز وآخرون ، 1996). إذا كانت الاستجابة الحالية هي فرط نشاط مشروط ناجم عن اقتران السياق والسكروز ، ومع ذلك ، كان من شأنه أن يسبق تسليم السكروز ، والذي لم يلاحظ. من الممكن أن تكون الموضوعات التي تعرض الاستثارة الاستكشافية. سيكون من الضروري إجراء المزيد من التجارب للتمييز بين ما إذا كان التنقل المرتفع بعد ابتلاع السكروز يثير الاستكشاف مقارنةً بنوع من التوعية الحركية أو السلوكيات الأخرى. في أي حال ، فإن ارتفاع الحركة التلقائية يتطلب الإشارة إلى الغلوتامات ، وينتج ، على الأقل جزئيا ، من دمج CPARs في النواة المتكئة.

قد ينتج النشاط الحركي المتزايد بعد تناول السكروز مباشرة من التقوية الملحوظة للمشابك الأساسية المتكئة ، حيث أن زيادة الإنتاج من مسار العقد القاعدية المباشر يعزز الحركة من خلال التخلص من المهاد المحرك (Sesack و Grace ، 2010). تيعلى الأرجح ، توجد نقاط الاشتباك العصبي القوية على المسارات المباشرة المترابطة في الخلايا العصبية ، والتي تعبر عن D1R. سوف تنبع من المشابك العصبية المسار المباشر سينتج إذا كان النشاط D1R يسبب الاتجار AMPAR المحتوية على GluA1 إلى المشابك في هذه الخلايا العصبية بعد إطلاق الدوبامين قوية. سيزيد التكاثف الناتج من النشاط في الإسقاطات المثبطة للخلايا العصبية للمسار المباشر إلى نواة خرج العقد القاعدي ، وبالتالي يعطل المهاد الحركي ويروج لنشاط القشرة الحركية (Gerfen و Surmeier ، 2011; كرافيتز وآخرون ، 2010; Sesack و Grace ، 2010). لوحظ التحريض المتشابك بعد أن يحدث تناول السكروز المتكرر على وجه التحديد في عصبونات المسار المباشر لأن الدوبامين الذي يتصرف من خلال مستقبلات D1 يمكن أن يحفز فسفرة GluA1 S845 ، مما يؤدي إلى الاتجار السطحي.

قام عدد من الدراسات بفحص تأثيرات التحفيز المتكرر مع الكوكايين متبوعًا بالانسحاب ، وهو علاج يمارس تأثيرات عميقة على وظيفة نظام المكافأة ويؤدي في نهاية المطاف إلى توعية الكوكايين ، والذي يتميز بالاستجابة الحركية المرتفعة للكوكايين ، وشغف المخدرات وانتكاسها. (كاليفاس وآخرون ، 1998). نتج عن تكرار حقن IP مع الكوكايين لـ 5-10 أيام متبوعًا بالانسحاب زيادة تدريجية خلال أيام 14 في مستقبلات AMPA السطحية التي تحتوي على GluA2 (Boudreau وآخرون ، 2007; Kourrich et al.، 2007). ومع ذلك ، في 45 أيام من الانسحاب بعد 10 د من الإدارة الذاتية ، لوحظت زيادة كبيرة في مؤشر تصحيح في الفئران MSN (McCutcheon وآخرون ، 2011b) مما يشير إلى زيادة في CPARs. وهكذا ، لوحظ الاتجار في CPAR بعد كل من تناول السكروز ، في العمل الحالي ، والإدارة الذاتية للكوكايين ، وإن كان ذلك في ظل ظروف علاج مختلفة للغاية. بما أن النتائج الفورية للإدارة الذاتية للكوكايين أو الحقن (على سبيل المثال ، في مرحلة ما بعد دقائق 5) غير معروفة ، فإن عمل الكوكايين لا يمكن مقارنته مباشرة بالعمل الحالي للسكروز. وبالمثل ، فإنه من غير المعروف ما إذا كانت CPARs تستمر في مشابك MSN للحيوانات المدربة على السكروز بعد التوقف عن تدريب السكروز أو إذا أظهرت هذه الحيوانات حساسية السكروز بعد الانسحاب المطول.

إن فهم كيفية تنظيم المحفزات المجزية اللدونة والسلوك المترابط أمران أساسيان لمعالجة الإدمان ، والفرط ، والمقامرة المرضية ، وغير ذلك من الاضطرابات السلوكية (باسار وآخرون ، 2010; Berridge ، 2009; Luscher and Malenka، 2011). الاستهلاك المفرط للسكر يسهم في وباء السمنةهو ومالك ، 2010) ، وعلى الرغم من احتمال تشابهها مع تعاطي المخدرات (Avena et al.، 2008) ، لم يتم استكشاف آليته على نطاق واسع. وتضع النتائج الحالية العناصر الأساسية لللدونة الناتجة عن المكافأة والتي يمكن من خلالها أن تتناول الدراسات المستقبلية تنظيم السلوك المعقد ، مما قد يوفر طرقًا جديدة لمواجهة الأمراض المرتبطة بالمكافئات.

شكر وتقدير

نشكر أعضاء مختبر Ziff ، في الماضي والحاضر ، على المساعدة التقنية والمناقشات المفيدة ، بما في ذلك H. Girma و L. Lee و Drs. فيرنهولز ، بي جوردان ، دبليو لو ، جي راميو ، إس ريستيتويتو وإي. سيرول. تم دعم هذا العمل من قبل المعهد الوطني للصحة العقلية زمالة ما قبل الدكتوراه F31MH76617-01 و NIH Training Grant 5T32DC000063 لبرنامج تدريب جامعة نيويورك في العلوم العصبية (DST) ، R01NS061920 من المعهد الوطني للاضطرابات العصبية والسكتة الدماغية (EBZ) ، 1R21MH091445- 01 من المعهد الوطني للصحة العقلية ومكتب أبحاث صحة المرأة ، برنامج منح مؤسسة عائلة كلارمان في أبحاث اضطرابات الأكل ، صندوق تحدي أبحاث جامعة نيويورك و P30EY13079 (CA) ، منحة المعهد الوطني لتعاطي المخدرات DA003956 وجائزة محقق مستقل من NARSAD (KDC) والمعهد الوطني للصمم واضطرابات الاتصالات الأخرى يمنح DC009635 إلى RCF ومنحة أولية في مركز التميز في الإدمان من مركز لانجون الطبي بجامعة نيويورك.

الحواشي

تضارب المصالح: لا يعلن المؤلفون عن أي مصالح مالية متنافسة.

مراجع حسابات

  1. Avena NM، Rada P، Hoebel BG. أدلة لإدمان السكر: التأثيرات السلوكية والعصبية الكيميائية الناجمة عن تناول السكر المفرط والمتقطع. Neurosci Biobehav Rev. 2008 ؛ 32: 20 – 39. [بك المادة الحرة] [مجلات]
  2. Basar K، Sesia T، Groenewegen H، Steinbusch HW، Visser-Vandewalle V، Temel Y. Nucleus accumbens and impulsivity. بروغ Neurobiol. 2010، 92: 533-557. [مجلات]
  3. بيريدج كيه سي. "الإعجاب" و "الرغبة" في الحصول على المكافآت الغذائية: ركائز الدماغ والأدوار في اضطرابات الأكل. علم وظائف الأعضاء والسلوك. 2009 ؛ 97: 537-550. [بك المادة الحرة] [مجلات]
  4. يتم التحكم في Boehm J، Kang MG، Johnson RC، Esteban J، Huganir RL، Malinow R. Synaptic إدماج مستقبلات AMPA خلال LTP من خلال موقع phosphorylation PKC على GluR1. الخلايا العصبية. 2006، 51: 213-225. [مجلات]
  5. Boudreau AC، Reimers JM، Milovanovic M، Wolf ME. خلية مستقبلات AMPA الخلية في النواة المتكئة الفئران زيادة خلال الانسحاب الكوكايين ولكن استيعاب بعد تحدي الكوكايين بالاشتراك مع تغيير التغير في كينازات البروتين منشط mitogen. ي Neurosci. 2007، 27: 10621-10635. [بك المادة الحرة] [مجلات]
  6. Brebner K، Wong TP، Liu L، Liu Y، Campsall P، Grey S، Phelps L، Phillips AG، Wang YT. النواة متكئة على المدى الطويل من الاكتئاب والتعبير عن التحسس السلوكي. علم. 2005، 310: 1340-1343. [مجلات]
  7. Cacciapaglia F، Saddoris MP، Wightman RM، Carelli RM. تفرز ديناميكيات إطلاق الدوبامين في النواة المتكئة الأساسية وقشرة مسار الجوانب المميزة للسلوك الموجه نحو الهدف للسكروز. علم الادوية العصبية 2012 [بك المادة الحرة] [مجلات]
  8. Calabresi P، Maj R، Pisani A، Mercuri NB، Bernardi G. depression synaptic depression in the striatum: physiological and pharmacological characterization. ي Neurosci. 1992، 12: 4224-4233. [مجلات]
  9. Carr KD، Chau LS، Cabeza de Vaca S، Gustafson K، Stouffer M، Tukey DS، Restituito S، Ziff EB. وحدة فرعية مستقبلات AMPA GluR1 المصب للتحفيز D-1 مستقبلات الدوبامين في النواة المتكئة قذيفة تتوسط زيادة حجم مكافأة الدواء في الجرذان المقيدة الغذائية. علم الأعصاب. 2010، 165: 1074-1086. [بك المادة الحرة] [مجلات]
  10. Conrad KL، Tseng KY، Uejima JL، Reimers JM، Heng LJ، Shaham Y، Marinelli M، Wolf ME. تشكيل المتكئين GluR2 التي تفتقر إلى مستقبلات AMPA يتوسط حضانة حنين الكوكايين. طبيعة. 2008، 454: 118-121. [بك المادة الحرة] [مجلات]
  11. Day JJ، Carelli RM. النواة المتكئة ومكافأة بافلوفان التعلم. الأعصاب. 2007، 13: 148-159. [بك المادة الحرة] [مجلات]
  12. de Araujo IE، Oliveira-Maia AJ، Sotnikova TD، Gainetdinov RR، Caron MG، Nicolelis MA، Simon SA. مكافأة الغذاء في غياب إشارة مستقبلات الذوق. الخلايا العصبية. 2008، 57: 930-941. [مجلات]
  13. Ehlers MD، Heine M، Groc L، Lee MC، Choquet D. Diffusional trapping of GluR1 AMPA receptors by micro-specific synaptic activity. الخلايا العصبية. 2007، 54: 447-460. [بك المادة الحرة] [مجلات]
  14. Esteban JA، Shi SH، Wilson C، Nuriya M، Huganir RL، Malinow R. PKA phosphorylation of AMPA receptor subunits controls controls synaptic trade underityity. نات نيوروسكي. 2003، 6: 136-143. [مجلات]
  15. Gerfen CR، Surmeier DJ. تعديل نظم الإسقاط المخطط بواسطة دوبامين. المراجعة السنوية لعلم الأعصاب. 2011، 34: 441-466. [بك المادة الحرة] [مجلات]
  16. Grueter BA، Brasnjo G، Malenka RC. المشغل TRPV1 بوستسينابتيك يؤدي إلى نوع محدد من الاكتئاب على المدى الطويل الخلية في المتكئة نواة. علم الأعصاب الطبيعي. 2010، 13: 1519-1525. [بك المادة الحرة] [مجلات]
  17. He K، Song L، Cummings LW، Goldman J، Huganir RL، Lee HK. ثبات مستقبلات AMPA من Ca2 + في مواقع perisynaptic بواسطة phosphorylation GluR1-S845. Proc Natl Acad Sci US A. 2009؛ 106: 20033 – 20038. [بك المادة الحرة] [مجلات]
  18. هو إف بي ، مالك ضد. المشروبات المحلاة بالسكر وخطر الإصابة بالسمنة ومرض السكري من النوع 2: دليل وبائي. علم وظائف الأعضاء والسلوك. 2010 ؛ 100: 47-54. [بك المادة الحرة] [مجلات]
  19. إسحاق ج ت ، آشبي MC ، McBain CJ. دور الوحيدات GluR2 في وظيفة مستقبل AMPA ومرونة متشابك. الخلايا العصبية. 2007، 54: 859-871. [مجلات]
  20. Jordan BA، Fernholz BD، Boussac M، Xu C، Grigorean G، Ziff EB، Neubert TA. تحديد والتحقق من البروتينات الكثيرة مرحلة ما بعد الصدمة القوارض الرواية. مولدات الخلية مول. 2004، 3: 857-871. [مجلات]
  21. Kalivas PW، Pierce RC، Cornish J، Sorg BA. دور للتوعية في الرغبة والانتكاس في إدمان الكوكايين. J Pharmacol. 1998، 12: 49-53. [مجلات]
  22. Kitagawa M، Kusakabe Y، Miura H، Ninomiya Y، Hino A. تحديد جيني جزيئي لجين مستقبلات المرشح للمذاق الحلو. الكيمياء الحيوية والبيوفيزيائية تبحث في الاتصالات. 2001، 283: 236-242. [مجلات]
  23. Kourrich S، Rothwell PE، Klug JR، Thomas MJ. تتحكم تجربة الكوكايين في اللدونة المشبكية ثنائية الاتجاه في النواة المتكئة. ي Neurosci. 2007، 27: 7921-7928. [مجلات]
  24. Kravitz AV، Freeze BS، Parker PR، Kay K، Thwin MT، Deisseroth K، Kreitzer AC. تنظيم السلوكيات parkinsonian السيارات عن طريق التحكم optogenetic من الدوائر القاعدية القاعدية. طبيعة. 2010، 466: 622-626. [بك المادة الحرة] [مجلات]
  25. LaPlant Q، Vialou V، Covington HE، 3rd، Dumitriu D، Feng J، Warren BL، Maze I، Dietz DM، Watts EL، Iniguez SD، et al. ينظم Dnmt3a السلوك العاطفي والعمود الفقري في النواة المتكئة. نات نيوروسكي. 2010، 13: 1137-1143. [بك المادة الحرة] [مجلات]
  26. ليو SJ ، Zukin RS. Ca2 + AMP المستقبلات المتفوقة في اللدونة متشابك والموت العصبية. الاتجاهات في علم الأعصاب. 2007، 30: 126-134. [مجلات]
  27. Lu W، Isozaki K، Roche KW، Nicoll RA. يتم تنظيم الاستهداف المتشابك لمستقبلات AMPA بواسطة موقع CaMKII في الحلقة الأولى داخل الخلايا من GluA1. Proc Natl Acad Sci US A. 2010؛ 107: 22266 – 22271. [بك المادة الحرة] [مجلات]
  28. لو W ، روش KW. تنظيم posttranslational من AMPA مستقبلات المتاجرة والوظيفة. الرأي الحالي في علم الأعصاب 2011 [بك المادة الحرة] [مجلات]
  29. Luscher C، Malenka RC. اللدونة متشابك المخدرات أثار في الإدمان: من التغييرات الجزيئية لإعادة تصميم الدوائر. الخلايا العصبية. 2011، 69: 650-663. [بك المادة الحرة] [مجلات]
  30. Makino H، Malinow R. AMPA receptor integrating into synapses during LTP: the role of lateral movement and exocytosis. الخلايا العصبية. 2009، 64: 381-390. [بك المادة الحرة] [مجلات]
  31. Mameli M، Halbout B، Creton C، Engblom D، Parkitna JR، Spanagel R، Luscher C. Cocain-evoked synaptic plasticity: persistence in the VTA triggers adaptations in the NAc. نات نيوروسكي. 2009، 12: 1036-1041. [مجلات]
  32. Masuda K، Koizumi A، Nakajima K، Tanaka T، Abe K، Misaka T، Ishiguro M. Characterization of theeses of binding of human sweet taste receptor and low-molecular-weight sweet compounds. بلوس واحد. 2012، 7: e35380. [بك المادة الحرة] [مجلات]
  33. Matthews K، Wilkinson LS، Robbins TW. فالفصل المتكرر للأمهات من فئران ما قبل الحلاقة يضعف الاستجابات السلوكية للحوافز الأساسية والمشروطة في مرحلة البلوغ. فيسيول بيهاف. 1996، 59: 99-107. [مجلات]
  34. Max M، Shanker YG، Huang L، Rong M، Liu Z، Campagne F، Weinstein H، Damak S، Margolskee RF. Tas1r3 ، ترميز مستقبل طعم المرشح الجديد ، هو أليللوجيا إلى موضع استجابة حلوة الحويصلة. علم الوراثة الطبيعي. 2001، 28: 58-63. [مجلات]
  35. McCutcheon JE، Beeler JA، Roitman MF. تستشهد العظة التنبؤية السكروز إطلاق أكبر الدوبامين طوري من الاشارات التنبؤية السكرين. تشابك عصبى. 2012، 66: 346-351. [بك المادة الحرة] [مجلات]
  36. McCutcheon JE، Wang X، Tseng KY، Wolf ME، Marinelli M. مستقبلات AMPA قابلة للنفاذ الكالسيوم موجودة في نقاط التشابك النواة المتكئة بعد الانسحاب لفترات طويلة من تعاطي الكوكايين الذاتي ولكن ليس الكوكايين المستخلص من التجربة. مجلة علم الأعصاب: الجريدة الرسمية لجمعية علم الأعصاب. 2011a، 31: 5737-5743. [بك المادة الحرة] [مجلات]
  37. McCutcheon JE، Loweth JA، Ford KA، Marinelli M، Wolf ME، Tseng KY. يؤدي تنشيط mGluR من المجموعة الأولى إلى عكس تراكم الكوكايين الناتج عن مستقبلات AMPA القابلة للنفاذ من الكالسيوم في النواة المتتالية من خلال آلية تعتمد على البروتين C-kinase. ي Neurosci. 2011b، 31: 14536-14541. [بك المادة الحرة] [مجلات]
  38. Nedelescu H، Kelso CM، Lazaro-Munoz G، Purpura M، Cain CK، Ledoux JE، Aoki C. Endogenous GluR1-containing AMPA receptors translocate to asembmetric synapses in the lateral amygdala during the first phase of fear memory formation: an electron microscopic immunocytochemical دراسة. مجلة علم الأعصاب المقارن. 2010، 518: 4723-4739. [بك المادة الحرة] [مجلات]
  39. Nelson G، Hoon MA، Chandrashekar J، Zhang Y، Ryba NJ، Zuker CS. مستقبليات الذوق الحلو. زنزانة. 2001، 106: 381-390. [مجلات]
  40. Oh MC، Derkach VA، Guire ES، Soderling TR. ينظم الإتجار بالأغشية خارج الشبكية بواسطة GluR1 serine 845 فسفرة تمهيدي مستقبلات AMPA للتكثيف على المدى الطويل. J Biol Chem. 2006، 281: 752-758. [مجلات]
  41. Pascoli V، Turiault M، Luscher C. Reversal of cocaine-convoked compatiation potatiation resets drug-induced behaviour behavior. طبيعة. 2012، 481: 71-75. [مجلات]
  42. Plant K، Pelkey ​​KA، Bortolotto ZA، Morita D، Terashima A، McBain CJ، Collingridge GL، Isaac JT. دمج عابر للمستقبلات AMPA GluR2 تفتقر إلى الأم أثناء تقوية الحصين على المدى الطويل. نات نيوروسكي. 2006، 9: 602-604. [مجلات]
  43. Rada P، Avena NM، Hoebel BG. الإفراط في تناول السكر يوميا الإفراج عن الدوبامين في قذيفة المتكئين. علم الأعصاب. 2005، 134: 737-744. [مجلات]
  44. Roche KW، O'Brien RJ، Mammen AL، Bernhardt J، Huganir RL. توصيف مواقع الفسفرة المتعددة على الوحدة الفرعية لمستقبلات AMPA GluR1. الخلايا العصبية. 1996، 16: 1179-1188. [مجلات]
  45. Rumpel S، LeDoux J، Zador A، Malinow R. Postynaptic receptor trading under a form of associative learning. علم. 2005، 308: 83-88. [مجلات]
  46. Sainz E، Korley JN، Battey JF، Sullivan SL. تحديد عضو جديد في عائلة T1R من مستقبلات الذوق المفترض. مجلة الكيمياء العصبية. 2001، 77: 896-903. [مجلات]
  47. Serulle Y، Zhang S، Ninan I، Puzzo D، McCarthy M، Khatri L، Arancio O، Ziff EB. ينظم تفاعل GluR1-cGKII تهريب مستقبلات AMPA. الخلايا العصبية. 2007، 56: 670-688. [بك المادة الحرة] [مجلات]
  48. Sesack SR، Grace AA. شبكة مكافأة Cortico-Basal Ganglia: microcircuitry. Neuropsychopharmacology: نشر رسمي للكلية الأمريكية لعلم الأعصاب وعلم الأعصاب. 2010، 35: 27-47. [بك المادة الحرة] [مجلات]
  49. سميث GP. يتوسط الدوبامين يتوسط التأثير المكافح للتحفيز النسبي من السكروز. شهية. 2004، 43: 11-13. [مجلات]
  50. Smith WB، Starck SR، Roberts RW، Schuman EM. يعزز التحفيز الدوباميني لتخليق البروتين المحلي تعبير سطح GluR1 وانتقال متشابك في الخلايا العصبية قرن آمون. الخلايا العصبية. 2005، 45: 765-779. [مجلات]
  51. Sun X، Milovanovic M، Zhao Y، Wolf ME. التحفيز مستقبلات الدوبامين الحادة والمزمنة ينظم AMBA مستقبلات المتاجرة في الخلايا العصبية المتكئة nucleus cocultured مع الخلايا العصبية القشرة الجبهية. مجلة علم الأعصاب: الجريدة الرسمية لجمعية علم الأعصاب. 2008، 28: 4216-4230. [بك المادة الحرة] [مجلات]
  52. Sun X، Zhao Y، Wolf Me. تحفيز مستقبلات الدوبامين ينظم إدخال المشبكي AMPA في الخلايا العصبية القشرة الجبهية. ي Neurosci. 2005، 25: 7342-7351. [مجلات]
  53. Thomas MJ، Beurrier C، Bonci A، Malenka RC. الكآبة على المدى الطويل في النواة المتكئة: علاقة عصبية للتوعية السلوكية بالكوكايين. نات نيوروسكي. 2001، 4: 1217-1223. [مجلات]
  54. Ungless MA، Whistler JL، Malenka RC، Bonci A. يتسبب التعرض الوحيد للكوكايين في الجسم الحي في التقوية طويلة الأمد في الخلايا العصبية الدوبامين. طبيعة. 2001، 411: 583-587. [مجلات]
  55. Whitlock JR، Heynen AJ، Shuler MG، Bear MF. التعلم يدفع التكريس على المدى الطويل في قرن آمون. علم. 2006، 313: 1093-1097. [مجلات]