يخفف مضادات مستقبلات الجريلين (GHS-R1A) الخصائص المجزية للمورفين ويزيد من مستويات الببتيد الأفيوني في مناطق المكافآت في الفئران (2015)

Eur Neuropsychopharmacol. أكتوبر 2015 21. pii: S0924-977X (15) 00329-6. doi: 10.1016 / j.euroneuro.2015.10.004.

إنجل جا1, نيلاندر الأول2, Jerlhag E3.

ملخص

في الآونة الأخيرة ، اقترح أن تلعب هرمونات الأمعاء مثل الجريلين دورًا في تنظيم المكافآت. كان من المعروف تقليديا Ghrelin لتنظيم تناول الطعام ووزن الجسم توازن التوازن. بالإضافة إلى ذلك ، أشار العمل الأخير إلى أن هذا الببتيد له دور جديد في المكافأة التي يسببها المخدرات ، بما في ذلك الزيادة التي يسببها المورفين في مستويات خارج الخلية من الدوبامين أكومبل في الفئران. هنا تم بحث تأثير مضادات مستقبل الجريلين (GHS-R1A) ، JMV2959 ، على التنشيط الناجم عن المورفين لنظام الدوبامين ميزوليمبيك في الفئران. بالإضافة إلى ذلك ، تم التحقيق في آثار إدارة JMV2959 على مستويات الببتيد الأفيونية في المجالات المتعلقة بالمكافأة. في السلسلة الحالية من التجربة ، أظهرنا أن إدارة JMV2959 الطرفية ، بجرعة دون أي تأثير في حد ذاته ، يخفف من قدرة المورفين على التسبب في تحفيز الحركية ، وزيادة مستويات خارج الخلية من الدوبامين العكسي ولتحديد تفضيل المكان في الفئران. إدارة JMV2959 زيادة كبيرة في مستويات الأنسجة من Met-enkephalin-Arg6الفنيل ألانين7 في منطقة tegmental البطنية ، dynorphin B في الحصين و Leu-enkephalin-Arg6 في المخطط. لذلك نحن نفترض أن JMV2959 يمنع المكافأة المستحثة بالمورفين عن طريق تحفيز الببتيدات النشطة لمستقبلات الدلتا في مناطق السقالات المخاطية والبطينية. بالإضافة إلى ذلك ، قد تشارك الببتيدات الحصين التي تنشط مستقبلات kappa في قدرة JMV2959 to على تنظيم تكوين الذاكرة من المكافأة. بالنظر إلى أن تطور إدمان المخدرات يعتمد ، على الأقل جزئيًا ، على تأثيرات العقاقير التي تسبب الإدمان على نظام الدوبامين mesolimbic ، تشير البيانات الحالية إلى أن مضادات GHS-R1A تستحق أن يتم توضيحها كاستراتيجيات علاجية جديدة لإدمان الأفيونيات.

 

 

 

 
   

ملخص

في الآونة الأخيرة ، اقترح أن تلعب هرمونات الأمعاء مثل الجريلين دورًا في تنظيم المكافآت. كان من المعروف تقليديا Ghrelin لتنظيم تناول الطعام ووزن الجسم توازن التوازن. بالإضافة إلى ذلك ، أشار العمل الأخير إلى أن هذا الببتيد له دور جديد في المكافأة التي يسببها المخدرات ، بما في ذلك الزيادة التي يسببها المورفين في مستويات خارج الخلية من الدوبامين أكومبل في الفئران. هنا تم بحث تأثير مضادات مستقبل الجريلين (GHS-R1A) ، JMV2959 ، على التنشيط الناجم عن المورفين لنظام الدوبامين ميزوليمبيك في الفئران. بالإضافة إلى ذلك ، تم التحقيق في آثار إدارة JMV2959 على مستويات الببتيد الأفيونية في المجالات المتعلقة بالمكافأة. في السلسلة الحالية من التجربة أظهرنا أن إدارة JMV2959 الطرفية ، بجرعة دون أي تأثير في حد ذاته، يخفف من قدرة المورفين على التسبب في التحفيز الحركي ، وزيادة مستويات خارج الخلية من الدوبامين accumbal وحالة تفضيل مكان في الفئران. إدارة JMV2959 زيادة كبيرة في مستويات الأنسجة من Met-enkephalin-Arg6الفنيل ألانين7 في منطقة tegmental البطنية ، dynorphin B في الحصين و Leu-enkephalin-Arg6 في المخطط. لذلك نحن نفترض أن JMV2959 يمنع المكافأة الناجمة عن المورفين بواسطة تحفيز مستقبلات دلتا الببتيد النشطة في المناطق tegmental المخطط و البطني. بالإضافة إلى ذلك ، قد تشارك الببتيدات الحصين التي تنشط مستقبلات kappa في قدرة JMV2959 to على تنظيم تكوين الذاكرة من المكافأة. بالنظر إلى أن تطور إدمان المخدرات يعتمد ، على الأقل جزئيًا ، على تأثيرات العقاقير التي تسبب الإدمان على نظام الدوبامين mesolimbic ، تشير البيانات الحالية إلى أن مضادات GHS-R1A تستحق أن يتم توضيحها كاستراتيجيات علاجية جديدة لإدمان الأفيونيات.

 

 

 

 

1.المقدمة

يؤثر التعرّض الحاد والمزمن للعقاقير التي تسبب الإدمان تأثيرا عميقا على نظام الدوبامين ميزوليمبيك ، وهو دارة رئيسية مهمة لأنظمة مكافأة الدماغ (Nestler، 2005). وقد تم اقتراح هذه التأثيرات ، على الأقل جزئيًا ، لتطور إدمان المخدرات (Wise، 2004). يسبب إدمان المخدرات مجموعة واسعة من الآثار الضارة للفرد وكذلك المجتمع ، وهناك ما يبرر التدخلات الدوائية الجديدة ، علاج هذه المشكلة الرئيسية للصحة العامة (Koob و Le Moal ، 2001). من خلال توضيح أنظمة الإشارات التي تتوسط قدرة العقاقير التي تسبب الإدمان على تنشيط نظام الدوبامين mesolimbic ، يمكن تحديد استراتيجيات علاجية فريدة لاضطرابات تعاطي المخدرات.

وقد أظهرت الأبحاث أن الآليات البيولوجية العصبية الشائعة تنظم تناول ومكافأة الأغذية والعقاقير التي تسبب الإدمان (Morganstern et al.، 2011) ، مما يقترح أن دور الببتيدات المعوية التنظيمية للغذاء مثل الجريلين يشمل الوساطة في المكافأة. في البداية ، تبين أن هرمون الجريلين يتسبب في إفراز هرمون النمو (Kojima et al. ، 1999) ويسبب الشحوم لدى الفئران (Tschop et al. ، 2000). من المعروف حتى الآن أن الجريلين يزيد من تناول الطعام والجوع وكذلك يحفز الشهية بواسطة الدوائر تحت المهاد (للمراجعة ، انظر Egecioglu et al. (2011)). بالإضافة إلى منطقة ما تحت المهاد ، يتم التعبير عن مستقبلات الجريلين (GHS-R1A) في المناطق ذات الصلة بالمكافأة مثل اللوزة ، والمخطط ، وقشرة الفص الجبهي ، ومنطقة السقيفة البطنية (VTA) والحصين (للمراجعة ، انظر Engel and Jerlhag (2014)) مما يدل على ذلك يمتد الدور الفسيولوجي للجريلين إلى ما هو أبعد من تنظيم توازن الطاقة. في الواقع ، تم إثبات أن هرمون الجريلين الببتيد الأصلي هو منشط لنظام الدوبامين الوسيطي بالإضافة إلى منظم للمكافأة والتحفيز وتناول الكحول والنيكوتين والأمفيتامين والكوكايين في الفئران (للمراجعة انظر Engel and Jerlhag (2014)).

المواد الأفيونية ، مثل غيرها من العقاقير التي تسبب الإدمان ، تقوم بتنشيط نظام الدوبامين ميزوليمبيك مما تسبب في إطلاق الدوبامين accumbal بواسطة تنشيط مستقبلات μ- و / أو δ- أفيونية في النواة المتكئة (NAc) (Hirose et al. ، 2005 ، Murakawa et al. ، 2004 ، Yoshida et al. ، 1999) وفي VTA ، على الأرجح عن طريق تقليل GABA - منع الخلايا العصبية الدوبامين (جونسون والشمال ، 1992). علاوة على ذلك ، تنظم مستقبلات الأفيون acc opumbid نشاط نظام الدوبامين mesolimbic (Chefer et al. ، 2005 ، Spanagel et al.، 1992). يؤدي التعرض المتكرر للأفيونيات إلى حدوث تغييرات متكيفة للعديد من الناقلات العصبية ، بما في ذلك الببتيدات الأفيونية ، في مناطق المكافآت ، والتي تساهم في تطور الإدمان (De Vries and Shippenberg، 2002). في الفئران ، يثبط القمع الدوائي لـ GHS-R1A إطلاق الدوبامين أكومبال الناجم عن المورفين وكذلك السلوكيات النمطية (Sustkova-Fiserova et al.، 2014). كان الهدف من الجزء الأول من سلسلة التجارب الحالية هو التحقيق في التأثير الحاد لمضاد GHS-R1A ، JMV2959 ، على قدرة المورفين على التسبب في تحفيز الحركي ، وإطلاق الدوبامين العكسي ، وتفضيل تفضيل المكان في الفئران. كان الهدف من الجزء الثاني من هذه الدراسة هو تقييم تأثير العلاج المتكرر JMV2959 أو الجريلين على مستويات الببتيد الأفيونية (Met-enkephalin-Arg6الفنيل ألانين7 (MEAP) ، dynorphin B (DynB) و Leu-enkephalin-Arg6 (LeuArg)) في المجالات المتعلقة بالمكافآت بما في ذلك اللوزة ، المخطط ، قشرة الفص الجبهي ، VTA والحصين.

 

 

2. إجراءات تجريبية

 

 

2.1. الحيوانات

واستخدمت الفئران الذكور NMRI المتطابقة بعد سن البلوغ (8 – 12 أسابيع و 25-40 ز وزن الجسم ؛ تشارلز ريفر ، سولزفيلد ، ألمانيا). باختصار ، تم تجميع جميع الفئران وصيانتها في دورة الضوء / الظلام 12 / 12 (مضاءة في السابعة صباحًا). تم توفير مياه الصنبور والغذاء (تشاو عادي ؛ هارلان تيكليد ، نورفولك ، إنجلترا) ad libitum، إلا خلال الاجهزة التجريبية. واستخدمت الفئران الجديدة لكل اختبار السلوكية وكذلك لتحليل الببتيد الأفيونية. تمت الموافقة على التجارب من قبل اللجنة الأخلاقية السويدية للبحوث الحيوانية في غوتنبرغ. بذلت كل الجهود لتقليل معاناة الحيوانات وتقليل عدد الحيوانات المستخدمة. تم السماح لجميع الحيوانات بالتأقلم قبل أسبوع واحد على الأقل من بدء التجارب.

 

 

2.2. المخدرات

تم إذابة المورفين هيدروكلوريد (مستشفى Apoteksbolaget Sahlgrenska ؛ غوتنبرغ ، السويد) في السيارة (محلول كلوريد الصوديوم 0.9٪) وتم إعطاؤه IP بجرعة 20 mg / kg 10 min قبل بدء التجربة. تم اختيار هذه الجرعة لأن الجرعة الأقل (10 mg / kg ، ip) لم تسبب تحفيزًا حركيًا في الفئران لدينا (البيانات غير معروضة). تم تحديد الجرعة المحددة (6 mg / kg ، ip) من JMV2959 (التي تم توليفها في معهد الكيمياء الحيوية Max Mousseron (IBMM) ، UMR5247 ، CNRS ، Montpellier 1 و 2 ، فرنسا) ، وهو مضاد GHS-R1A ، أي تأثير على النشاط الحركي ، والإفراج عن الدوبامين accumbal وتفضيل المكان مشروط في الفئران (Jerlhag وآخرون ، 2009). تم إذابة JMV2959 في السيارة (محلول كلوريد الصوديوم 0.9 ٪) وكان يدار دائما قبل عشرين دقيقة من التعرض للمورفين أو قطع الرأس لتحليل مستويات الببتيد الأفيونية. لم تؤثر الجرعة المحددة من JMV2959 على السلوك الإجمالي للفئران في أي تجربة. بالنسبة للاختبارات السلوكية ، تم إعطاء JMV2959 بشكل حاد منذ أن أظهرت دراساتنا السابقة أن حقنة واحدة من JMV2959 تخفف المكافأة المستحثة بالعقاقير (للاطلاع على المراجعة ، انظر إنجل وجرلهاج (2014)). كانت تدار JMV2959 دون مزمن لمدة خمسة أيام لاحقة لتحليل الببتيد الأفيونية لزيادة إمكانية اكتشاف تأثير قوي. بالإضافة إلى ذلك ، مع الحقن المتكرر ، يمكنك تجنب التأثير المربك المحتمل لإجهاد الحقن الحاد على الببتيدات. تم تمييع جريلين الأسيلات (Bionuclear ؛ بروما ، السويد) في كلوريد الصوديوم 0.9٪ والجرعة المحددة من جريلين (0.33 mg / kg ، ip) سبق أن تسببت في مكافأة الفئران (Jerlhag، 2008). تم استخدام تصميم متوازن لجميع التحديات المخدرات.

 

 

2.3. تجارب النشاط الحركي

وقد أظهرت الدراسات السابقة أن المورفين يسبب تحفيز الحركية في القوارض (Wise و Bozarth، 1987). تم تسجيل النشاط الحركي في ثمانية صناديق صوتية موهنة ومهيفة وخافتة الإضاءة (420 × 420 × 200 mm ، Kungsbacka mät- och reglerteknik AB ؛ Fjärås ، السويد). من خمسة إلى خمسة صفوف من عوارض الخلية الكهروضوئية ، على مستوى الأرضية من الصندوق ، سمح إنشاء الكشف عن الخلية الكهروضوئية للنظام القائم على الكمبيوتر بتسجيل نشاط الفئران. تم تعريف النشاط الحركي على أنه العدد المتراكم لحزم الخلايا الضوئية الجديدة التي تمت مقاطعتها خلال فترة 60- دقيقة. في جميع التجارب ، سُمح للفئران بالعودة إلى صندوق النشاط الحركي قبل ساعة واحدة من التحديات الدوائية. لم تكن هناك فروق بين التعود في أي من مجموعات العلاج (لا تظهر البيانات).

في السلسلة الأولى من التجربة ، تم فحص آثار JMV2959 (6 mg / kg ، ip) على التحفيز الحركي الناجم عن المورفين (20 mg / kg ، ip). كانت تدار JMV2959 20 دقيقة قبل المورفين وبدأ تسجيل النشاط بعد عشر دقائق من الحقن الماضي. تلقى كل ماوس مجموعة علاج واحدة (مركبة / مركبة ، JMV2959 / مركبة ، مورفين / مركبة أو JMV2959 / مورفين ؛ n= 8 لكل مجموعة علاج) وتعرضت فقط لتجربة واحدة تجريبية.

 

 

2.4. تفضيل المكان المشروط

لتقييم آثار JMV2959 على الآثار المجزية للمورفين في الفئران الجديدة ، تم إجراء اختبارات تفضيل المكان المكيف في الفئران كما هو موضح سابقًا (Jerlhag، 2008). باختصار ، تم استخدام جهاز CPP المؤلف من غرفتين ، مع إضاءة 45 lx والإشارات البصرية واللمسية المتميزة. تم تعريف إحدى الحجرات بجدران مخططة بالأبيض والأسود وبأرضية مظلمة داكنة بينما كان للأرضية أرضية خشبية مطلية باللون الأبيض وجدران ذات نسيج خشبي. يتكون الإجراء من التكييف المسبق (يوم 1) ، والتكييف (الأيام 2 – 5) ، والتكييف اللاحق (اليوم 6). في الشروط المسبقة ، تم حقن الفئران الملكية الفكرية مع السيارة ووضعها في الغرفة مع حرية الوصول إلى كل من المقصورات خلال 20 دقيقة لتحديد تفضيل المكان (أو الجانب) الأولي. تم إجراء التكييف (20 دقيقة لكل جلسة) باستخدام إجراء متحيز حيث تم إرفاق المورفين (20 mg / kg) مع المقصورة والمركبة الأقل تفضيلًا مع المقصورة المفضلة. تلقت جميع الفئران حقنة واحدة من المورفين وكذلك في السيارة كل يوم وتم تغيير الحقن بين الصباح وبعد الظهر في تصميم أرصدة. في مرحلة ما بعد تكييف الفئران (nتم حقن = 16) باستخدام JMV2959 (6 mg / kg ، ip) أو حجم مساوٍ من محلول السيارة و 20 min تم وضعهما لاحقًا على خط الوسط بين الجزأين مع إمكانية الوصول المجاني إلى كلتا المقصورتين لـ 20 min (إنشاء مجموعات العلاج التالية ؛ Morph-Veh و Morph-JMV2959).

تم حساب تفضيل مكان الشرط على أنه الفرق في النسبة المئوية من إجمالي الوقت الذي يقضيه في الدواء المقترن (أي. الأقل تفضيلاً) مقصورة خلال مرحلة ما بعد التكييف وجلسة التكييف المسبق.

2.5 في الجسم الحي القياسات الدقيقة وإفراز الدوبامين

بالنظر إلى أن JMV2959 يخفف من تحفيز الحركية المورفين المستحث وتفضيل المكان المشروط في الفئران ، تم دراسة تأثير JMV2959 (6 mg / kg ، ip) على إطلاق الدوبامين المستحث بالإستعمال (20 mg / kg ، ip). في الجسم الحي غسيل الكلى في الفئران تتحرك بحرية. لقياسات مستويات الدوبامين خارج الخلوي ، تم زرع الفئران من جانب واحد مع التحقيق في غسيل الكلى وضعه في النواة المتكئة. لذلك ، تم تخدير الفئران باستخدام isofluran (Isofluran Baxter ، وحدة التخدير Univentor 400 ، Univentor Ldt. ، Zejtun ، مالطا) ، وضعت في إطار التجسيمي (David Kopf Instruments ؛ Tujunga ، CA ، الولايات المتحدة الأمريكية) انخفاض حرارة الجسم. تم استخدام Xylocain adrenalin (5 μg / ml؛ Pfizer Inic؛ New York، USA) كأدوية تخدير موضعي و carprofen (Rimadyl، 5 mg / kg ip) (Astra Zeneca؛ Gothenburg، Sweden) تم استخدامه لتخفيف أي ألم محتمل. تعرض عظم الجمجمة وحفر ثقب واحد للمسبار وثقب للمثبت. تم تبديل المجس بشكل عشوائي إما إلى الجانب الأيسر أو الأيمن من الدماغ. تم استخدام إحداثيات 1.5 مم الأمامية لل bregma ، ± 0.7 الجانبي إلى خط الوسط و 4.7 ملم تحت سطح سطح الدماغ للنواة المتكئة (فرانكلين و Paxinos ، 1997). الطرف المكشوف من غشاء غسيل الكلى (20,000 kDa مقطوع بمعرف / معرف 310 / 220 μm ، HOSPAL ، Gambro ، Lund ، السويد) للمسبار كان 1 mm. تم زرع جميع التحقيقات جراحيا قبل يومين من التجربة. بعد الجراحة ، تم الاحتفاظ الفئران في أقفاص فردية حتى يوم الاختبار (ماكرولون الثالث).

في يوم الاختبار ، تم توصيل المجس بمضخة ضخ دقيقة (U-864 Syringe Pump ؛ AgnThós AB) ومنسوب بمحلول Ringer بمعدل 1.5 μl / min. بعد ساعة واحدة من التعود على إعداد التحليل الجزئي ، تم جمع عينات التروية كل دقيقة من 20. تم تعريف مستوى الدوبامين الأساسي على أنه متوسط ​​ثلاث عينات متتالية قبل التحدي الأول للعقاقير / المركبات ، وتم حساب الزيادة في الدوبامين أكومال كزيادة في المئة من خط الأساس. بعد عينات خط الأساس (−40 دقيقة حتى دقيقة 0) ، تم حقن الفئران باستخدام JMV2959 أو مركبة (في 0 دقيقة) ، والتي أعقبها حقن المورفين أو مركبة (عند 20 دقيقة). بعد هذه الإدارات المخدرات تم جمع ثماني عينات دقيقة 20. جماعيا مجموعات العلاج التالية (nتم إنشاء = 8 في كل مجموعة: مركبة - مركبة (Veh – Veh) ، مركبة - مورفين (Veh-Morph) ، JMV2959- مركبة (JMV2959-Veh) و JMV2959-morphine (JMV2959-Morph).

تم تحديد مستويات الدوبامين في الدياليات بواسطة HPLC مع الكشف الكهروكيميائي. مضخة (Gyncotec P580A ؛ Kovalent AB ؛ V. Frölunda ، السويد) ، عمود تبادل الأيونات (2.0 × 100 mm ، Prodigy 3 μm SA ؛ Skandinaviska GeneTec AB ؛ Kungsbacka ، السويد) وجهاز كاشف (Antec Decade ، Antec Loude) ، هولندا) مجهزة بخلايا التدفق VT-03 (Antec Leyden). الطور المتحرك (pH 5.6) ، الذي يتكون من حمض السلفونيك 10 mM ، حامض الستريك 200 mM ، سترات الصوديوم 200 mM ، 10٪ EDTA ، 30٪ MeOH ، تم ترشيحه باستخدام فراغ باستخدام مرشح غشاء 0.2 ؛ ميكرولتر PALL Gelman ؛ لوند ، السويد). تم تسليم الطور المتحرك بمعدل تدفق 0.2 مل / دقيقة يمر ديغازر (Kovalent AB) ، وتم تأكسد الحليلة عند + 0.4 V.

بعد الانتهاء من تجارب التحليل الجزئي ، تم قطع رأس الفئران ، وتم إخماد المجسات باستخدام 6BX البونتامين السماء الزرقاء لتسهيل توطين المسبار. تم تركيب العقول على جهاز vibroslice (752 M Vibroslice؛ Campden Instruments Ltd. ، لوبورو ، المملكة المتحدة) ومقطعة في أقسام 50 μm. تم تحديد موقع التحقيق بواسطة الملاحظة الإجمالية باستخدام المجهر الضوئي. تم التحقق من الموقع الدقيق للتحقيق (فرانكلين وباكسينوس ، 1997) وفئران فقط مع المواضع الصحيحة استخدمت في التحليل الإحصائي.

 

 

2.6. العلاج والتشريح

تم التحقيق في آثار العلاج JMV2959 على مستويات MEAP ، DynB و LeuArg في المجالات المتعلقة بالمكافأة. تم حقن الفئران باستخدام JMV2959 (6 mg / kg ، ip ، n= 8) أو نفس حجم السيارة (ip ، n= 8) لمدة خمسة أيام لاحقة. 20 دقيقة بعد الحقن الأخير تم التضحية الفئران وجمع العقول من هذه الفئران. تم حقن الفئران المنفصلة بأي من الجريلين (0.33 mg / kg ، ip ، n= 8) أو نفس حجم السيارة (ip ، n= 8) لمدة خمسة أيام لاحقة. بعد خمس دقائق من الحقن الأخير تم التضحية بالفئران وتم جمع أدمغة هذه الفئران. تم تشريح اللوزة ، المخطط ، قشرة الفص الجبهي ، VTA وحصن الحصن بسرعة ووضعها على الفور على الثلج الجاف ثم تخزينها في −80 ° C حتى إجراء مزيد من المعالجة.

 

 

2.7. تحليل مستويات الببتيد الأفيونية

اتبعت إجراءات التجانس واستخراج الببتيد إجراءً قياسيًا تم وصفه مسبقًا بالتفصيل (Nylander et al.، 1997). باختصار ، تمت إضافة حمض الأسيتيك الساخن (95 ° C) (1 M) إلى العينات المجمدة. تم تسخين العينات في حمام مائي (95 ° C) لمدة 5 min ، وتم تبريدها على الجليد ثم تجانسها مع جهاز Branson Sonifier (Danbury ، CT ، الولايات المتحدة الأمريكية). تم إعادة تسخين المتجانسة عند 95 ° C لمدة 5 min وتم تبريده على الجليد قبل الطرد المركزي لـ 15 min عند 4 ° C و 12,074 ×g في جهاز الطرد المركزي Beckman GS-15R (فوليرتون ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية). تم تنقية المستخلصات أيضًا وفقًا لإجراء تم وصفه مسبقًا (Nylander et al.، 1997). تم جمع جزئين: الكسر III (Leu-Arg و MEAP) والكسر V (DynB). تم تجفيف العينات في جهاز طرد مركزي مفرغ (Savant SpeedVac Plus SC210A؛ Thermo Scientific Inc.، Waltham، MA USA) وتخزينها في الثلاجة (−20 ° C) حتى تحليل الببتيد.

وقد تم تحليل مستويات المناعة (ir) من DynB ، LeuArg و MEAP مع المقايسات الإشعاعية الراسخة وقد وصفت البروتوكولات بالتفصيل في مكان آخر (Nylander وآخرون ، 1997). في اختبار DynB ، تم استخدام مفتش الماعز المضاد للأرنب (GARGG ؛ Bachem ، Bubendorf ، سويسرا) لفصل الببتيد الحر والمضاد للأجسام المضادة. تم استخدام مضاد ant (113 +) Dyn في التخفيف النهائي لـ 1: 600000. كان التفاعل التبادلي مع Dyn كبير 100٪ و DynB (1 – 29) 1٪. لم يلاحظ أي تفاعل عبر مع الببتيدات الأفيونية الأخرى. في المقايسات LeuArg و MEAP ، تم استخدام تعليق الفحم لفصل الببتيد الحر والمضاد للجسم المضاد. بالنسبة لعقار LeuArg antiserum (91: 6D + ، التخفيف النهائي 1: 60000) ، كان التفاعل التبادلي أقل من 0.01٪ لـ Leu-enkephalin و MEAP ، 0.02٪ لـ DynB ، 0.04٪ لـ DynA ، و 0.08٪ لـ DynA ، و 90٪ لـ DynA. تم استخدام المضاد الحيوي MEAP 3: 1D (II) في التخفيف النهائي لـ 160: 000 XNUMX. تفاعل تفاعلي مع Met-enkephalin ، Met-enkephalin-Arg6، Met-enkephalin-Arg6الغليسين7بادئة معناها أبيض8، ليو إنكيفالين وليو إنكيفالين أرج6 كان <0.1٪

 

 

 

2.8. تحليل احصائي

تم تقييم بيانات النشاط الحركي بواسطة ANOVA في اتجاه واحد متبوعة باختبارات Bonferroni اللاحقة. تم تقييم بيانات تفضيلات مكان الشرط من قبل غير متزاوج t-اختبار. تم تقييم تجارب التحليل الجزئي عن طريق ANOVA ثنائي الاتجاه متبوعًا باختبار Bonferroni اللاحق لمقارنات بين العلاجات المختلفة وبالتحديد في نقاط زمنية معينة. وقد تم تحليل مستويات الببتيد مع غير زوج t-اختبار. يتم تقديم البيانات على النحو يعني EM SEM. قيمة الاحتمال لـ P<0.05 اعتبرت ذات دلالة إحصائية.

 

 

 

3. النتائج

 

 

3.1. آثار JMV2959 على التحفيز الحركي الناجم عن المورفين ، وإطلاق الدوبامين أكومب وتفضيل المكان المشروط في الفئران

تم العثور على التأثير الرئيسي العام للعلاج على النشاط الحركي في الفئران بعد الإعطاء الجهازي للمورفين (20 mg / kg) و JMV2959 (6 mg / kg) (F (3,27) = 7.409 ، P= 0.0009؛ n= 8 لـ Veh – Veh و JMV2959-Veh و JMV2959-Morph و n= 7 لـ Veh-Morph). كما هو موضح في الشكل 1A ، تحليل posthoc كشف أن ما قبل المعالجة مع حقن واحد من JMV2959 (P<0.001) يخفف بشكل كبير من التحفيز الحركي الناجم عن المورفين (P<0.01 وهبة vs للمركبة، مورف). لم يكن للجرعة المحددة من JMV2959 أي تأثير على النشاط الحركي مقارنةً بمعالجة السيارة (P> 0.05). لم يكن هناك اختلاف في استجابة النشاط الحركي في الفئران المعالجة بالمركبة والفئران المعالجة JMV2959-morhpine (P> 0.05).

الشكل. 1. يفتح صورة كبيرة  

الشكل 1

يخفف مضاد GHS-R1A المضاد لـ JMV2959 التحفيز الحركي الناجم عن المورفين وإطلاق الدوبامين العكسي وتفضيل المكان المشروط في الفئران. (A) تم تحفيز التحفيز الحركي الناجم عن المورفين (20 mg / kg ip) عن طريق حقنة واحدة من JMV2959 (6 mg / kg ip) (n= 7 – 8 في كل مجموعة ؛ **P<0.01 ، ***P<0.001 ANOVA أحادي الاتجاه متبوعًا باختبار Bonferroni اللاحق). (ب) تم تخفيف تفضيل مكان الحالة الناجم عن المورفين (20 مجم / كجم في البوصة) عن طريق حقنة مفردة حادة من JMV2959 (6 مجم / كجم في البوصة) في الفئران (n= 8 في كل مجموعة ، *P<0.05 ، اختبار t غير مقترن). (ج) أولاً أظهرنا تأثيرًا مهمًا للمورفين (20 مجم / كجم في البوصة) لزيادة إفراز الدوبامين مقارنةً بمعالجة المركبات (الفاصل الزمني 40-180 دقيقة (P<0.001) ، فيه vs للمركبة، مورف). كما هو موضح في (C) ما قبل المعالجة باستخدام JMV2959 (6 mg / kg ip) ، فقد أضعفت الزيادة التي يسببها المورفين في إطلاق الدوبامين مقارنة مع المعالجة المسبقة للمركبة في الفترة الزمنية 40 – 100 و 140 min (##P<0.01 ، # # #P <0.001 ، JMV2959-Morph مقارنةً بمعاملة Va-Morph). لم يكن للجرعة المختارة من JMV2959 تأثير كبير على إطلاق الدوبامين المتراكم مقارنةً بعلاج السيارة في أي فترة زمنية (P> 0.05 ، فيه vs JMV2959-للمركبة). تم تخفيض JMV2959 ، ولكن لم يمنع بشكل كامل ، إطلاق المورفين المستحث بالدوبامين في الفاصل الزمني 60-140 (*P<0.05 ، **P<0.01 ، ***P <0.001 ، JMV2959-Morph مقارنةً بمعاملة Va-Morph). تمثل الأسهم النقاط الزمنية لحقن JMV2959 والمركبة والمورفين. تم تحليل البيانات باستخدام ANOVA ثنائي الاتجاه متبوعًا باختبار Bonferroni اللاحق (n= 8 في كل مجموعة). Veh-veh (مربع) ، Veh – Morph (rhomb) ، JMV2959-Veh (Triangle) ، JMV2959-Morph (دائرة). تمثل جميع القيم متوسط ​​EM SEM.

تم التخفيف بشكل كبير من تفضيل المكان المشروط الناجم عن المورفين (20 mg / kg) (Morph-Veh) عن طريق الحقن المفرد الحاد لـ JMV2959 (6 mg / kg) (Morph-JMV2959) في يوم ما بعد التكييف (P= 0.025، n= 8 في كل مجموعة ؛ الشكل 1B).

كشفت قياسات الدميامين العكسي في الدوبامين في الفئران عن التأثير الرئيسي العام للعلاج (F(3,33) = 24.15، P<0.0001) ، الوقت F(11,308) = 7.05، P<0.0001) والعلاج × التفاعل الزمني (F(11,308) = 8.63، P<0.0001) (الشكل 1C; n= 8 في كل مجموعة). زاد المورفين من إطلاق الدوبامين العكسي نسبة إلى معالجة السيارة في الفاصل الزمني 40 – 180 min (P<0.001). كما هو موضح في الشكل 1تم تقليل هذا التأثير عن طريق المعالجة المسبقة مع JMV2959 في الفاصل الزمني 40 – 80 (P<0.01) ، 100 (P<0.001) ، 140 (P<0.01) و 160-180 دقيقة (P<0.001). قلل JMV2959 ، لكنه لم يمنع تمامًا ، إطلاق الدوبامين المتراكم الناجم عن المورفين نظرًا لوجود اختلاف بين علاج السيارة وعلاج المورفين JMV2959 في الفاصل الزمني 60-80 (P<0.01) ، 100 (P<0.001) ، 140 (P<0.01) و 160 دقيقة (P<0.05). لم يكن للجرعة المختارة من JMV2959 تأثير كبير على إطلاق الدوبامين المتراكم مقارنةً بعلاج السيارة في أي فترة زمنية (P> 0.05).

 

 

 

3.2. آثار شبه المزمنة JMV2959 أو العلاج جريلين على مستويات الببتيد الأفيونية

يمكن العثور على مستويات المناعة (ir) المناعية للببتيدات الثلاثة في مناطق المخ التي تم قياسها الجدول 1, الجدول 2. العلاج JMV2959 دون المزمن زاد بشكل كبير من مستويات MEAP في VTA ، DynB في الحصين و LeuArg في المخطط (الجدول 1). لم تكن هناك اختلافات في أي مجالات أخرى تم التحقيق فيها وهي اللوزة وقشرة الفص الجبهي. لم يغير علاج الجريلين دون المزمن بشكل كبير من مستويات MEAP أو DynB أو LeuArg (الجدول 2).

الجدول 1Sub المزمن JMV2959 العلاج زيادة كبيرة في مستويات الأشعة تحت الحمراء من Met5-enkephalin-الارجنتين6الفنيل ألانين7 (MEAP) في منطقة tegmental البطنية (VTA) ، ومستويات الأشعة تحت الحمراء من Dynorphin B (DynB) في الحصين (HC) وكذلك مستويات ir و Leu-enkephalin-Arg6 (LeuArg) في المخطط (STR) مقارنة بمعالجة المركبات. لم تكن هناك اختلافات في أي مجالات أخرى تم التحقيق فيها. تمثل جميع القيم متوسط ​​EM SEM. (اللوزة (AMY) ، وقشرة الفص الجبهي (PFC)).
 JMV2959مركبةp-القيمة
 مستويات IR MEAP
AMY14.52 3.91 ±15.61 4.37 ±0.838
STR43.47 5.54 ±47.60 7.94 ±0.754
PFC3.61 0.90 ±2.94 0.41 ±0.450
VTA8.69 0.75 ±4.63 0.42 ±0.003
HC4.52 0.80 ±2.56 0.23 ±0.170
 مستويات الأشعة تحت الحمراء DynB
AMY2.56 0.41 ±1.90 0.25 ±0.759
STR8.69 0.89 ±10.17 0.91 ±0.547
PFC2.24 0.36 ±1.60 0.20 ±0.169
VTA8.89 0.55 ±5.98 0.21 ±0.079
HC3.70 0.41 ±2.36 0.19 ±0.042
 مستويات Ir LeuArg
AMY13.46 1.69 ±11.07 1.45 ±0.270
STR14.50 0.89 ±12.12 0.93 ±0.046
PFC11.21 1.32 ±10.80 1.44 ±0.776
VTA12.96 1.63 ±10.96 1.39 ±0.245
HC5.29 0.75 ±5.67 0.72 ±0.663
 
لم الجدول 2Sub المزمن علاج الجريلين لا يغير مستويات الأشعة تحت الحمراء من ميت5-enkephalin-الارجنتين6الفنيل ألانين7 (MEAP) أو dynorphin B (DynB) أو Leu-enkephalin-Arg6 (LeuArg) في أي من المجالات المتعلقة بالمكافأة التي تم التحقيق فيها ، أي. منطقة tegmental البطني (VTA) ، اللوزة (AMY) ، المخطط (STR) ، قشرة الفص الجبهي (PFC) والحصين (HC). تمثل جميع القيم متوسط ​​EM SEM.
 جريلينمركبةp-القيمة
 مستويات IR MEAP
AMY12.00 3.91 ±15.46 3.02 ±0.517
STR43.59 7.24 ±61.15 12.46 ±0.176
PFC3.75 0.46 ±3.17 0.64 ±0.550
VTA11.96 1.03 ±10.60 0.91 ±0.249
HC6.75 1.88 ±5.20 1.01 ±0.314
 مستويات الأشعة تحت الحمراء DynB
AMY3.97 1.09 ±5.42 2.27 ±0.488
STR11.15 0.89 ±13.03 2.41 ±0.434
PFC3.23 0.50 ±2.38 0.18 ±0.072
VTA5.11 0.15 ±8.25 1.59 ±0.070
HC4.32 0.87 ±3.19 0.29 ±0.095
 مستويات Ir LeuArg
AMY9.67 1.53 ±9.47 1.29 ±0.928
STR8.69 0.87 ±8.87 0.44 ±0.875
PFC4.61 0.47 ±4.47 0.39 ±0.921
VTA8.35 1.04 ±6.99 0.42 ±0.407
HC4.97 0.50 ±3.47 0.41 ±0.086
 

 

 

 

4. نقاش

الدراسة الحالية تدعم كذلك الفرضية القائلة بأن الدور الفسيولوجي للببتيد orexigenic يشمل تنظيم المكافآت. في الواقع ، لقد أظهرنا أن الإعطاء المحيطي لمضاد GHS-R1A يخفف من قدرة المورفين على التسبب في تحفيز حركي ، وزيادة مستويات الدوبامين في NAc والحث على تفضيل مكان مشروط في الفئران. وجدنا أيضًا أن JMV2959 شبه المزمن ، ولكن ليس الجريلين ، زاد العلاج من مستويات أنسجة الأشعة تحت الحمراء في MTA في VTA و DynB في الحصين و LeuArg في المخطط ، مما يوفر أول دليل على أن قدرة إشارة جريلين على تنظيم التعزيز قد تتضمن الببتيدات الأفيونية .

تظهر البيانات المقدمة هنا أن عداء GHS-R1A يؤثر على قدرة المورفين على تنشيط نظام الدوبامين الميزوليفي في الفئران. وفقًا للنتائج التي تظهر أن JMV2959 يعيق قدرة المورفين على زيادة المستويات خارج الخلية من الدوبامين المتراكم والتسبب في سلوك نمطي في الفئران (Sustkova-Fiserova et al. ، 2014). بشكل داعم ، تزيد إدارة الجريلين المركزية من نقطة التوقف ، ولكن ليس عدد مكابس الرافعة النشطة ، في جدول تعزيز النسبة التدريجية في الهيروين ذاتي الإدارة للفئران ، (ماريك وآخرون ، 2012). يتم دعم الزعم القائل بأن إشارات الجريلين تكمن وراء إدمان المخدرات بشكل أكبر من خلال النتائج التي تظهر أن JMV2959 يقلل من المدخول وكذلك الدافع لاستهلاك الكحول في الفئران وأن المكافأة التي يسببها الأمفيتامين والكوكايين والنيكوتين يتم حظرها بواسطة عداء GHS-R1A في القوارض ( للمراجعة ، انظر Engel and Jerlhag (2014)) وأن تعدد الأشكال في الجينات المرتبطة بالغريلين يرتبط بتناول الكحول والتدخين والأمفيتامين (للمراجعة انظر Engel and Jerlhag (2014)).

النتائج الحالية مع زيادة مستويات الببتيدات الأفيونية في المخطط ، VTA والحصين بعد علاج JMV2959 دون المزمن تشير إلى التفاعلات لأول مرة بين الببتيدات الأفيونية وإشارة الجريلين. إن المواد الأفيونية الذاتية متورطة في تأثيرات مجزية ، ليس فقط بسبب المواد الأفيونية ولكن أيضًا من أدوية سوء المعاملة والمكافآت الطبيعية ، وفي العمليات التكيفية التي تظهر بعد التعرض المتكرر للعقاقير (Trigo et al. ، 2010 ، Van Ree et al. ، 2000). في الواقع يتم تنظيم نشاط نظام الدوبامين ميزوليمبيك من خلال المواد الأفيونية الذاتية في كل من مستوى VTA و NAc (Hirose et al. ، 2005 ، Spanagel et al. ، 1992) وقد ثبت أن الإجراءات إما مباشرة أو غير مباشرة من خلال تعديل أجهزة الإرسال الأخرى (Charbogne et al.، 2014).

وجدنا هنا أن علاج JMV2959 شبه المزمن زاد من مستويات MEAP في VTA. مشتق MEAP حصرا من proenkephalin وكان يستخدم كعلامة على ببتيدات proenkephalin التي تنشط مستقبلات الأفيونيات بشكل رئيسي. نحن نفترض أن زيادة مستويات MEAP الذاتية في VTA بعد علاج JMV2959 قد يمنع قدرة المورفين على تقليل تثبيط GABA لتثبيط الخلايا العصبية الدوبامين mesoaccumbal (جونسون وشمال ، 1992) ، والتي قد تساهم في تقليل الآثار الناجمة عن المورفين التي نشأت بعد JMV2959. يوجد دعم GHS-R1A على GABAergic interneurons في VTA (Abizaid et al.، 2006). وعلاوة على ذلك ، أظهرت الدراسات السابقة أن ضخ VM-JTA من JMV2959 ، بواسطة آليات غير معروفة ، تخفف المكافأة التي يسببها الجريلين (Jerlhag et al. ، 2011) وكذلك تناول السكروز بوساطة الجريلين في القوارض (Skibicka et al. ، 2011) ، تشير إلى أن GHS-R1A مهم ، من أجل تنظيم المكافآت. دعما لمثل هذا الخلاف ، تظهر النتائج أن الببتيدات الأخرى التي تنظم الجوع ، مثل الجالانين والأوركسين ، تتوسط في الخصائص المجزية للمورفين. بواسطة الآليات المحلية داخل VTA (ناريتا وآخرون ، 2006 ، ريتشاردسون وأستون جونز ، 2012).

في المخطط ، وجدنا أن JMV2959 شبه المزمن يزيد من مستويات الأشعة تحت الحمراء لـ LeuArg ، مما يوحي بأن قدرة JMV2959 على تخفيف تفضيل المكان المكيف الناجم عن المورفين وإطلاق الدوبامين والتحفيز الحركي تعتمد ، على الأقل جزئيًا ، على نشاط مستقبلات المواد الأفيونية. زيادة مستويات LeuArg قد تنجم عن زيادة التحويل الأنزيمي للببتيد dynorphin إلى enkephalins أو من إطلاق Dyn المحسن في NAc كاستجابة لزيادة الدوبامين ، يليه التحلل إلى LeuArg. وإن كانت الدراسات السابقة قد أظهرت أن نشاط نظام الدوبامين ميزوليمبيك ينظم بواسطة توفر مستقبلات op-opioid في NAc (Spanagel et al.، 1992) ومستقبلات op-opioid الذاتية تثبيط منشط للإرسال العصبي الدوبامين mesoaccumbal وتخفيف إطلاق الدوبامين الناجم عن الكوكايين في NAc (Chefer et al.، 2005) تبين أن JMV2959 يغير مستويات IR DynB في المخطط. لذلك ، هناك ما يبرر إجراء مزيد من الدراسات على ببتيدات بروديرينورفين لتوضيح التفاعلات بين خصوم GHS-R1A والدينورفين.

في الدراسة الحالية ، أظهرنا أيضًا أن علاج JMV2959 يزيد بشكل كبير من مستويات DynB الحصين. Ghrelin يزيد من توحيد الذاكرة وكذلك تشكيل العمود الفقري شجيري ، يولد تقوية على المدى الطويل ويحث على تسهيل الذاكرة بواسطة الحصين GHS-R1A في القوارض (Carlini et al.، 2010، Diano et al.، 2006). علاوة على ذلك ، تعرض فئران خروج المغلوب GHS-R1A ذاكرة مكانية مُحسَّنة في اختبار متاهة مياه موريس وذاكرة سياقية مُعطلة في نموذج تكييف الخوف مقارنة بفئران من النوع البري (Albarran-Zeckler et al.، 2012). توجد ببتيدات Dynorphin ، بما في ذلك DynB ، في الحصين وتخفف من الجهد طويل المدى (Chavkin et al. ، 1985 ، Wagner et al. ، 1993) ، فضلاً عن ضعف التعلم المكاني لدى الفئران (Sandin et al. ، 1998). لذلك نحن نفترض أن مضادات GHR-R1A قد تخفف من ذاكرة المكافأة عن طريق تثبيط تقوية الحصين على المدى الطويل بواسطة تفعيل DynB. مجتمعة ، توفر هذه البيانات آلية محتملة جديدة من خلالها JMV2959 بواسطة الببتيدات الأفيونية قد تغير التعزيز. ومع ذلك ، يتم توزيع مستقبلات المواد الأفيونية على نطاق واسع في المخ ، مما يشير إلى أن المناطق الأخرى ، غير المدرجة في هذه الدراسة ، قد تشارك في المكافأة التي ينظمها المورفين التي ينظمها GHS-R1A. على سبيل المثال ، يتم تقليل تناول الطعام الناجم عن هرمون الجريلين وكذلك الضغط على السكروز عن طريق الإعطاء المركزي أو داخل المهاد لمضاد مستقبلات الأفيونية (Romero-Pico et al. ، 2013). ومع ذلك ، فإن دور الببتيدات الأفيونية في مجالات أخرى يحتاج إلى توضيح في الدراسات القادمة.

لم يتم تحليل سلالات مستقبلات ogen الذاتية ، والإندومورفين والبيتورإندورفين ، لذا لا يمكننا استبعاد التأثير المحتمل لـ JMV2959 على هذه الببتيدات. في الواقع ، تشتمل الخصائص المجزية للمورفين على مستقبلات μ-opioid في VTA وكذلك NAc (Hirose et al. و 2005 و Johnson and North و 1992 و Murakawa et al. و 2004 و Yoshida et al. و 1999). ومع ذلك ، فإن مضادات مستقبلات μ لا تخفف من تناول الغذاء الناجم عن الجريلين (Naleid et al. ، 2005) ولا تحفيز الحرك الناجم عن ghrelin وإطلاق الدوبامين المتراكم (Jerlhag et al.، 2011) ، مما يعني أن قدرة GHSR- لا يشمل مضادات 1A لتنظيم التعزيز مستقبلات μ. من ناحية أخرى ، لم يؤثر JMV2959 على ببتيدات أفيونية مشتقة من بروينكيفالين وبرودينورفين ، مما يدل على أنهما قد يكونان متورطين في التأثيرات الناجمة عن مضادات GHSR-1A.

في حين أظهرت الدراسات السابقة أن تناول إدارة الجريلين النظامية يسبب المكافأة (Jerlhag، 2008) وكذلك يعزز الخصائص المجزية للعقاقير التي تسبب الإدمان (للاطلاع على المراجعة أنجل و Jerlhag (2014)) ، نظهر هنا أن علاج الجريلين دون المزمن لم يتغير مستويات أنسجة الأشعة تحت الحمراء من الببتيدات في أي من المجالات المتعلقة بالمكافأة المدروسة. تعمل إدارة الجريلين النظامية على التعبير عن c-fos في المناطق السفلية ، ولكن ليس في المناطق mesolimbic و hippocampal (Pirnik et al.، 2011) وتجليد الجريلين المسمى fluorescently يقتصر على الخلايا العصبية التنظيمية للغذاء في المهاد (Schaeffer et al.، 2013) ). إلى جانب النتائج التي تظهر أن الجريلين ، المستثنى من الكميات الضئيلة في منطقة ما تحت المهاد ، لا يمكن اكتشافه في مناطق أعمق من الدماغ بعد تناول الجريلين المحيطي (Furness et al.، 2011، Grouselle et al.، 2008، Sakata et al.، 2009 ) ، يثير إمكانية قيام جريلين النظامي بتنشيط نظام المكافآت بواسطة آليات غير مباشرة مستقلة عن المواد الأفيونية الذاتية. بشكل داعم ، يتطلب إطلاق الدوبامين أكومبال الناجم عن الجريلين إشارات المهاد المجهري الأصل (المخروط وآخرون ، 2014) ، وإدارة الجريلين المحيطية لا تغير من تناول الكحول في الفئران (ليونونز وآخرون ، 2008) وأن تحييد الجريلين المحيطي لا يخفف الكحول - المكافأة الناجمة عن الفئران أو تناول الكحول في الفئران (Jerlhag et al. ، في الصحافة). ينبغي أن تؤخذ في الاعتبار إمكانية أن تناول الجريلين دون المزمنة يزيد من مستويات أنسجة الأشعة تحت الحمراء من ببتيدات الأفيونيات ، لكن هذا الأمر يحتاج إلى التحقيق بالتفصيل في الدراسات القادمة.

ترتبط ارتباطًا وثيقًا بقدرة العقاقير التي تسبب الإدمان على التسبب في التحفيز وإطلاق الدوبامين والحث على تفضيل المكان المشروط مع الخصائص المعززة للعقاقير التي تسبب الإدمان وتعتبر هذه المعلمات جزءًا من عملية الإدمان (Wise، 2004). نظرًا لأننا وجدنا هنا أن JMV2959 يخفف من معاملات المكافأة هذه في الفئران ، فإننا نفترض أن GHS-R1A قد تلعب دورًا مهمًا في عمليات الإدمان ، وأن المواد الأفيونية الداخلية تشارك في هذه العمليات. تشير هذه البيانات مجتمعةً إلى أنه ينبغي توضيح مضادات GHS-R1A كعلاج للاعتماد على المخدرات.

دور مصدر التمويل

يتم دعم JE و EJ بواسطة منح من مجلس البحوث السويدي (منحة رقم 2011-4646 و 2009-2782 و 2011-4819) ، مؤسسة الدماغ السويدية ، LUA / ALF (منحة رقم 148251) من مستشفى Sahlgrenska الجامعي ، Alcohol مجلس أبحاث احتكار تجارة الكحول السويدية وأسس أدليربرتسكا وفريدريك وإنغريد تورينج وتوري نيلسون ولانجمانسكا وتورستن وراغنار سودربيرج وويلهيلم ومارتينا لوندغرين ونوفونورديسك وكنوت وأليس والينبرج ونغنيس بيرغسون ، الجمعية السويدية للطب ، الجمعية السويدية للبحوث الطبية ومؤسسة غوتنبرغ لبحوث الطب النفسي. مجلس أبحاث الكحول التابع لاحتكار تجارة الكحول السويدية ومجلس الأبحاث السويدي (K2012-61X-22090-01-3) مدعومان بـ IN. لم يكن لمصادر التمويل دور في تصميم الدراسة ، وفي جمع البيانات وتحليلها وتفسيرها ، وفي كتابة التقرير ، وفي قرار نشر البيانات.

 

 

 

المساهمين

صممت JAE الدراسة وكتبت المخطوطة. في أداء جزء من الأيدي على العمل ، وتحليل البيانات ، وكتب المخطوط. صمم EJ الدراسة ، وكتب البروتوكول ، وأدار بحثا في الأدب ، وتحليلها وإجراء تحليل إحصائي وكتب المسودة الأولى للمخطوطة. ساهم جميع المؤلفين في المخطوطة النهائية ووافقوا عليها.

 

 

 

 

تضارب المصالح

تلقت EJ دعما ماليا من مؤسسة نوفو نورديسك. هذا لا يغير التزام المؤلفين بأي من سياسات المجلات الخاصة بمشاركة البيانات والمواد. الكتاب المتبقية تعلن أي تضارب في المصالح.

 

 

شكر وتقدير

بريت ماري لارسون ، كين يوهانسن ، كين زهو ولوفا سيغرستروم معترف بهم بامتنان للمساعدة الفنية والخبيرة القيمة. تم توفير خصم GHS-R1A JMV2959 بواسطة Æterna Zentaris. البروفيسور جان مارتينيز والدكتور جان ألين فرينتز معروفان بتوليفهما JMV2959

 

مراجع حسابات

  1. أبي زيد ، أ. ، ليو ، زد. دبليو ، أندروز ، زد ، شانابرو ، م. ، بوروك ، إ. ، إلسورث ، دينار أردني ، روث ، ر. هـ. ، سليمان ، ميو ، بيكتوتو ، م. ر. TL Ghrelin ينظم النشاط وتنظيم المدخلات متشابك من الخلايا العصبية الدوبامين الدماغ المتوسط ​​مع تعزيز الشهية. جيه كلين Investig. 2006. 116: 3229 – 3239
  2. Albarran-Zeckler، RG، Brantley، AF، and Smith، RG الفئران خروج المغلوب هرمون النمو (GHS-R1a) خروج المغلوب تظهر الذاكرة المكانية والعجز في الذاكرة السياقية. Behav. الدماغ الدقة. 2012. 232: 13 – 19
  3. عرض في المادة 
  4. عرض في المادة 
  5. عرض في المادة 
  6. عرض في المادة 
  7. عرض في المادة 
  8. عرض في المادة 
  9. عرض في المادة 
  10. عرض في المادة 
  11. عرض في المادة 
  12. عرض في المادة 
  13. عرض في المادة 
  14. عرض في المادة 
  15. عرض في المادة 
  16. عرض في المادة 
  17. عرض في المادة 
  18. عرض في المادة 
  19. عرض في المادة 
  20. عرض في المادة 
  21. عرض في المادة 
  22. عرض في المادة 
  23. عرض في المادة 
  24. عرض في المادة 
  25. عرض في المادة 
  26. عرض في المادة 
  27. عرض في المادة 
  28. عرض في المادة 
  29. عرض في المادة 
  30. عرض في المادة 
  31. عرض في المادة 
  32. عرض في المادة 
  33. عرض في المادة 
  34. عرض في المادة 
  35. عرض في المادة 
  36. عرض في المادة 
  37. عرض في المادة 
  38. عرض في المادة 
  39. عرض في المادة 
  40. عرض في المادة 
  41. عرض في المادة 
  42. عرض في المادة 
  43. عرض في المادة 
  44. عرض في المادة 
  45. عرض في المادة 
  46. عرض في المادة 
  47. عرض في المادة 
  48. Carlini و VP و Perez و MF و Salde و E. و Schioth و HB و Ramirez و OA و de Barioglio ، SR يتضمن تسهيل الذاكرة الناجم عن Ghrelin تنشيط سينثاز أكسيد النيتريك وانخفاضًا في العتبة لتعزيز LTP في التلفيف المسنن الحصين. الفيزيولوجيا. Behav. 2010. 101: 117 – 123
  49. Charbogne، P.، Kieffer، BL، and Befort، K. سنوات 15 من الأساليب الوراثية في الجسم الحي لبحوث الإدمان: مستقبلات الأفيونيات وتوقف الجينات الببتيدية في نماذج الفأر من تعاطي المخدرات. الفارماكولوجيا العصبية. 2014. 76: 204 – 217
  50. Chavkin، C.، Shoemaker، WJ، McGinty، JF، Bayon، A.، and Bloom، FE توصيف نظم نيوببتيد برودينورفين وبروينكيفالين في الحصين الفئران .. J. Neurosci. 1985. 5: 808 – 816
  51. Chefer، VI، Czyzyk، T.، Bolan، EA، Moron، J.، Pintar، JE، and Shippenberg، TS نظم مستقبلات كابا الأفيونية الذاتية تنظم ديناميات الدوبامين mesoaccumbal والتعرض للكوكايين. ج. نيوروسي 2005. 25: 5029 – 5037
  52. Cone، JJ، McCutcheon، JE، and Roitman، MF يعمل جريلين كواجهة بين الحالة الفسيولوجية وإشارة الدوبامين المرحلية. ج. نيوروسي 2014. 34: 4905 – 4913
  53. De Vries، TJ and Shippenberg، TS النظم العصبية الكامنة وراء إدمان الأفيون. ج. نيوروسي 2002. 22: 3321 – 3325
  54. Diano، S.، Farr، SA، Benoit، SC، McNay، EC، da Silva، I.، Horvath، B.، Gaskin، FS، Nonaka، N.، Jaeger، LB، Banks، WA، Morley، JE، Pinto و S. و Sherwin و RS و Xu و L. و Yamada و KA و Sleeman و MW و Tschop و MH و Horvath ، TL Ghrelin يتحكم كثافة المشبك العمود الفقري وأداء الذاكرة. نات. Neurosci. 2006. 9: 381 – 388
  55. Egecioglu، E.، Skibicka، KP، Hansson، C.، Alvarez-Crespo، M.، Friberg، PA، Jerlhag، E.، Engel، JA، and Dickson، SL إشارات المتعة والحوافز للسيطرة على وزن الجسم. القس Endocr. متعب. Disord. 2011. 12: 141 – 151
  56. Engel، JA and Jerlhag، E. دور هرمونات القناة الهضمية في الفسيولوجيا المرضية لإدمان الكحول: الآثار المترتبة على العلاج الدوائي. المخدرات CNS. 2014. 28: 875 – 886
  57. فرانكلين ، KBJ و Paxinos ، G. الدماغ الفأر في الإحداثيات التجسيمي. مطبعة أكاديمية ، سان دييغو ؛ 1997
  58. Furness، JB، Hunne، B.، Matsuda، N.، Yin، L.، Russo، D.، Kato، I.، Fujimiya، M.، Patterson، M.، McLeod، J.، Andrews، ZB، and Bron ، ر. التحقيق في وجود الجريلين في الجهاز العصبي المركزي للجرذ والفأر. علم الأعصاب. 2011. 193: 1 – 9
  59. Grouselle، D.، Chaillou، E.، Caraty، A.، Bluet-Pajot، MT، Zizzari، P.، Tillet، Y.، and Epelbaum، J. السائل النخاعي النخاعي وجريلين البلازما فيما يتعلق بإفراز هرمون النمو وتناول الطعام في الأغنام. J. الغدد الصم العصبية. 2008. 20: 1138 – 1146
  60. Hirose، N.، Murakawa، K.، Takada، K.، Oi، Y.، Suzuki، T.، Nagase، H.، Cools، AR، and Koshikawa، N. التفاعلات بين مستقبلات mu و delta-opioid ، وخاصة مستقبلات delta1 المفترضة و delta2 ، تعزز إطلاق الدوبامين في النواة المتكئة. علم الأعصاب. 2005. 135: 213 – 225
  61. جيرلهاج ، إ. الإدارة المنهجية للجبريلين تستحث الأفضلية المشروطة للمكان وتحفز الدوبامين المتواضع. مدمن. بيول. 2008. 13: 358 – 363
  62. Jerlhag، E.، Egecioglu، E.، Dickson، SL، and Engel، JA تنظيم الجلوتاماتريك للتفعيل الناجم عن هرمون الجريلين لنظام الدوبامين ميزوليمبيك. مدمن. بيول. 2011. 16: 82 – 91
  63. Jerlhag، E.، Egecioglu، E.، Landgren، S.، Salome، N.، Heilig، M.، Moechars، D.، Datta، R.، Perrissoud، D.، Dickson، SL، and Engel، JA اشتراط إشارة جريلين المركزية لمكافأة الكحول. بروك. NATL. أكاد. الخيال العلمي. الولايات المتحدة الأمريكية. 2009. 106: 11318 – 11323
  64. Jerlhag، E.، Ivanoff، L.، Vater، A.، and Engel، JA لا يتوسط هرمون الجريلين المحيطي المكافأة التي يسببها الكحول وتناول الكحول في القوارض. الكحول. كلين. إكسب. احتياط 2014. 38: 959 – 968
  65. جونسون ، جنوب غرب وشمال ، ر الأفيونيات تثير الخلايا العصبية الدوبامين عن طريق فرط الاستقطاب من interneurons المحلية. ج. نيوروسي 1992. 12: 483 – 488
  66. Kojima، M.، Hosoda، H.، Date، Y.، Nakazato، M.، Matsuo، H.، and Kangawa، K. جريلين هو الببتيد المؤكسد الذي ينطلق هرمون النمو من المعدة. طبيعة. 1999. 402: 656 – 660
  67. Koob، GF and Le Moal، M. إدمان المخدرات ، عدم تنظيم المكافأة ، والostostasis. Neuropsychopharmacol. إيقاف. سنة النشر. صباحا. كول. Neuropsychopharmacol. 2001. 24: 97 – 129
  68. ليون ، آم ، لوري ، EG ، سبارتا ، د آثار توافر الغذاء وإعطاء وكلاء orexigenic والشره على شرب الإيثانول مرتفعة المرتبطة الشرب في الإجراءات المظلمة. الكحول. كلين. إكسب. احتياط 2008. 32: 1962 – 1968
  69. Maric، T.، Sedki، F.، Ronfard، B.، Chafetz، D.، and Shalev، U. دور محدود للغريلين في الإدارة الذاتية للهيروين وإعادة التسبب في الحرمان من الهيروين في الفئران. مدمن. بيول. 2012. 17: 613 – 622
  70. Morganstern، I.، Barson، JR، and Leibowitz، SF تنظيم الإفراط في تناول الطعام واستهلاك الطعام عن طريق أنظمة الببتيد مماثلة. داء. تعاطي المخدرات. القس 2011 ؛ 4: 163 – 173
  71. Murakawa، K.، Hirose، N.، Takada، K.، Suzuki، T.، Nagase، H.، Cools، AR، and Koshikawa، N. يعزز Deltorphin II من مستويات الدوبامين خارج الخلية في النواة المتآكلة عبر آليات مستقبلات الأفيونيات. يورو. J. Pharmacol. 2004. 491: 31 – 36
  72. Naleid، AM، Grace، MK، Cummings، DE، and Levine، AS Ghrelin يستحث التغذية في مسار مكافأة mesolimbic بين المنطقة tegmental البطني والنواة تتكوم. الببتيدات. 2005. 26: 2274 – 2279
  73. Narita، M.، Nagumo، Y.، Hashimoto، S.، Narita، M.، Khotib، J.، Miyatake، M.، Sakurai، T.، Yanagisawa، M.، Nakamachi، T.، Shioda، S.، وسوزوكي ، ت. المشاركة المباشرة للأنظمة orexinergic في تفعيل مسار الدوبامين mesolimbic والسلوكيات ذات الصلة الناجمة عن المورفين. ج. نيوروسي 2006. 26: 398 – 405
  74. نستله ، EJ هل هناك طريق جزيئي مشترك للإدمان؟ نات. Neurosci. 2005. 8: 1445 – 1449
  75. Nylander، I.، Stenfors، C.، Tan-No، K.، Mathe، AA، and Terenius، L. مقارنة بين تشعيع الموجات الصغرية وقطع الرؤوس: المستويات القاعدية للدينورفين والإنكيفالين وتأثير علاج المورفين المزمن على الببتيدات الدينورفين. نيوروببتيد. 1997. 31: 357 – 365
  76. Pirnik، Z.، Bundzikova، J.، Holubova، M.، Pychova، M.، Fehrentz، JA، Martinez، J.، Zelezna، B.، Maletinska، L.، and Kiss، A. يؤثر ناهضات جريلين على تعبير بروتين Fos في مناطق المخ المتعلقة بتنظيم تناول الطعام لدى الفئران C57BL / 6 من الذكور. نوروتشيم. كثافة العمليات. 2011. 59: 889 – 895
  77. Richardson، KA and Aston-Jones، G. يتم تنشيط الخلايا العصبية أوكسين / hypocretin السفلية الجانبية التي تظهر على المنطقة tegmental البطني بشكل تفضيلي مع تفضيل المورفين. ج. نيوروسي 2012. 32: 3809 – 3817
  78. Romero-Pico، A.، Vazquez، MJ، Gonzalez-Touceda، D.، Folgueira، C.، Skibicka، KP، Alvarez-Crespo، M.، Van Gestel، MA، Velasquez، DA، Schwarzer، C.، Herzog، H.، Lopez، M.، Adan، RA، Dickson، SL، Dieguez، C.، and Nogueiras، R. مستقبلات كابا أفيونية المهاد تعدل التأثير الأصلي للجريلين. NeuropsychopHarmacol. إيقاف. سنة النشر. صباحا. كول. Neuropsychopharmacol. 2013. 38: 1296 – 1307
  79. Sakata، I.، Nakano، Y.، Osborne-Lawrence، S.، Rovinsky، SA، Lee، CE، Perello، M.، Anderson، JG، Coppari، R.، Xiao، G.، Lowell، BB، Elmquist، JK ، و Zigman ، JM توصيف رواية خلية مراسل جريلين الماوس. Regul. Pept. 2009. 155: 91 – 98
  80. Sandin، J.، Nylander، I.، Georgieva، J.، Schott، PA، Ogren، SO، and Terenius، L. تؤدي حقن الدينورفين ب من الحصين إلى إضعاف التعلم المكاني لدى الفئران: وهو تأثير بوساطة مستقبلات الأفيون. علم الأعصاب. 1998. 85: 375 – 382
  81. Schaeffer، M.، Langlet، F.، Lafont، C.، Molino، F.، Hodson، DJ، Roux، T.، Lamarque، L.، Verdie، P.، Bourrier، E.، Dehouck، B.، Baneres و JL و Martinez و J. و Mery و PF و Marie و J. و Trinquet و E. و Fehrentz و JA و Prevot و V. و Mollard، P. استشعار سريع للدوران الجريلين من الخلايا العصبية التي تعدل الشهية. بروك. NATL. أكاد. الخيال العلمي. الولايات المتحدة الأمريكية. 2013. 110: 1512 – 1517
  82. Skibicka، KP، Hansson، C.، Alvarez-Crespo، M.، Friberg، PA، and Dickson، SL Ghrelin يستهدف مباشرة المنطقة tegmental البطني لزيادة الدافع الغذائي. علم الأعصاب. 2011. 180: 129 – 137
  83. Spanagel، R.، Herz، A.، and Shippenberg، TS معارضة الأنظمة الأفيونية الذاتية النغمية النشطة تعدل المسار الدوباميني mesolimbic. بروك. NATL. أكاد. الخيال العلمي. الولايات المتحدة الأمريكية. 1992. 89: 2046 – 2050
  84. Sustkova-Fiserova، M.، Jerabek، P.، Havlickova، T.، Kacer، P.، and Krsiak، M. خصوم مستقبلات الجريلين الناجم عن المورفين تتسبب في إطلاق الدوبامين والتحفيز السلوكي لدى الفئران. علم الأدوية النفسية. 2014. 231: 2899 – 2908
  85. Trigo، JM، Martin-Garcia، E.، Berrendero، F.، Robledo، P.، and Maldonado، R. نظام الأفيونيات الذاتية: ركيزة شائعة في إدمان المخدرات. تعاطي الكحول المخدرات. 2010. 108: 183 – 194
  86. Tschop، M.، Smiley، DL، and Heiman، ML جريلين يدفع السمنة في القوارض. طبيعة. 2000. 407: 908 – 913
  87. Van Ree، JM، Niesink، RJ، Van Wolfswinkel، L.، Ramsey، NF، Kornet، MM، Van Furth، WR، Vanderschuren، LJ، Gerrits، MA، and Van den Berg، CL المواد الأفيونية الذاتية والمكافأة. يورو. J. Pharmacol. 2000. 405: 89 – 101
  88. فاجنر ، جيه جيه ، ترمان ، جي دبليو ، وشافكين ، سي. تمنع الديورفينات الذاتية العصبية النقل العصبي المثير وتثبيط تحريض LTP في الحصين. طبيعة. 1993. 363: 451 – 454
  89. الحكيم ، RA الدوبامين ، التعلم والتحفيز. نات. القس نيوروسي. 2004. 5: 483 – 494
  90. Wise، RA and Bozarth، MA وهناك نظرية الحركية المنشط للإدمان. Psychol. القس 1987 ؛ 94: 469 – 492
  91. Yoshida، Y.، Koide، S.، Hirose، N.، Takada، K.، Tomiyama، K.، Koshikawa، N.، and Cools، AR يؤدي الفنتانيل إلى زيادة إطلاق الدوبامين في نواة الفئران المتكئة: تورط مستقبلات mesolimbic mu و delta-2-opioid. علم الأعصاب. 1999. 92: 1357 – 1365