COMENTARIS: Tot i que tant l'estrès, les drogues d'abús com certs beneficis naturals provoquen una acumulació de DeltaFosB, l'estrès activa diferents cèl·lules descendents i posteriors diferents receptors i gens. En altres paraules, les addiccions i la resistència a l’estrès es basen en mecanismes fonamentalment diferents
J Neurosci. 2010 Oct 27; 30 (43): 14585-92.
Vialou V, Maze I, Renthal W, LaPlant QC, Watts EL, Mouzon E, Ghose S, Tamminga CA, Nestler EJ.
font
Fishberg Department of Neuroscience, Mount Sinai School of Medicine, Nova York, Nova York 10029, USA.
abstracte
Els mecanismes moleculars subjacents a les adaptacions neuronals induïdes per l’estrès i els fàrmacs no es coneixen completament. Una molècula implicada en aquestes adaptacions és ΔFosB, un factor de transcripció que s'acumula al nucli del roent accumbens (NAc), una regió clau de recompensa del cervell, en resposta a l'estrès crònic o l'exposició repetida a drogues d'abús. TEls mecanismes transcripcionals ascendents que controlen la inducció de ΔFosB per aquests estímuls ambientals continuen sent esquius. Aquí, identificem el factor de transcripció dependent de l’activitat, el factor de resposta en sèrum (SRF), com a nou mediador d’estrès de l’estrès, però no la cocaïna-, ΔFosB induït. El SRF es regula a la baixa en el NAc dels dos pacients humans deprimits i en ratolins exposats crònicament a l'estrès de la derrota social. Aquesta baixa regulació de SRF està absent en animals resistents. Mitjançant l’ús de mutagènesi inducible, mostrem que la inducció mediada per estrès de ΔFosB, que es produeix predominantment en ratolins elàstics, depèn de l’expressió de SRF en aquesta regió cerebral.. A més, la supressió genètica de SRF específica de NAc promou una varietat de fenotips similars als propressors i proanxietats i fa que els animals siguin més sensibles als efectes nocius de l'estrès crònic. Per contra, demostrem que SRF no juga un paper en l'acumulació de BFosB en NAc en resposta a l'exposició crònica a cocaïna. A més, la eliminació de SRF específica de NAc no té cap efecte sobre els comportaments induïts per la cocaïna, el que indica que l'estrès crònic per derrota social i l'exposició repetida de cocaïna regulen l'acumulació de BFosB i la sensibilitat del comportament a través de mecanismes independents.
introducció
El nucli accumbens (NAc), una regió clau per a la recompensa del cervell, és important per integrar entrades sensorials i cognitives que impulsen comportaments rellevants de manera motivacional en resposta a estímuls ambientals (Nestler i Carlezon, 2006; Sesack i Grace, 2010). El NAc també s'ha implicat en anomalies del comportament associades a la toxicomania i la depressió. En conseqüència, s'ha demostrat que dirigir el NAc amb estimulació cerebral profunda alleuja els comportaments de depressió i de dependència tant en humans com en rosegadors (Schlaepfer et al., 2008; Vassoler et al., 2008; Heinze et al., 2009; Kuhn et al., 2009).
L'exposició repetida a fàrmacs d'abús o estrès indueix patrons alterats d'expressió gènica a NAc, potencialment subjacent a la cronicitat de l'addicció i la depressió (Berton et al., 2006; Krishnan et al., 2007; Maze et al., 2010; Vialou et al., ., 2010). Curiosament, el factor de transcripció BFosB, un producte d’empara del gen fosB, s’acumula en NAc en resposta a l’exposició repetida al fàrmac o a l’estrès (Nestler, 2008; Perrotti et al., 2008; Vialou et al., 2010). ΔFosB ha estat proposat com un potencial commutador molecular que guia la transició entre l’ús de drogues recreatives i l’estat crònic addicte (Nestler et al., 1999; McClung et al., 2004; Renthal et al., 2009), ja que la seva acumulació en NAc millora respostes gratificants a diverses drogues d'abús. Més recentment, el paper de la inducció de FosB en el NAc després de la crisi social per derrota social (Nikulina et al., 2008; Vialou et al., 2010) ha estat diligent: ΔFosB promou les respostes actives de fer front als estímuls estressants i augmenta la resiliència. Tot i que la inducció de FosB es produeix de manera dependent de l'estímul, els mecanismes responsables de l’acumulació de BFosB induïts per drogues i estrès segueixen sent desconeguts.
El factor de resposta sèrica (SRF) és un factor de transcripció necessari per a l’activació transcripcional que depèn de l’activitat de diversos gens primers immediats, inclosos c-fos, fosb, Egr1 i Arc (Knöll i Nordheim, 2009). Estudis recents han demostrat els efectes de SRF sobre les propietats morfològiques i citoarquitectòniques de les neurones, inclosa la regulació de l'activitat sinàptica i la formació de circuits en el cervell adult (Knöll i Nordheim, 2009). Aquestes troballes ens van impulsar a investigar si el SRF està regulat funcionalment per l’exposició crònica a drogues d’abús o estrès, així com l’impacte potencial d’aquesta regulació sobre la inducció de osFosB en aquestes condicions.
Aquí descrivim un nou mecanisme mitjançant el qual la regulació descendent de SRF a NAc promou fenotips prodepressius i ansiogènics, augmentant en última instància la vulnerabilitat d’un animal als efectes nocius de l’estrès crònic.. Aquests efectes es produeixen, en part, per la pèrdua d’inducció de osFosB en NAc d’animals estressats. Les disminucions observades en l’expressió de SRF i ΔFosB en teixits NAc postmortem obtinguts de pacients deprimits donen suport a la rellevància dels nostres resultats per a la depressió humana. Curiosament, aquest mecanisme que controla l'acumulació de ΔFosB sembla ser específic de l'estrès: l'exposició crònica a la cocaïna no té cap efecte sobre l'expressió de SRF, la supressió de SRF del NAc no té cap impacte en l'acumulació de osFosB després de l'exposició crònica a cocaïna i aquesta supressió de SRF no té cap efecte sobre la cocaïna. comportaments induïts. Aquesta nova interacció entre SRF i ΔFosB, en el context de l’estrès, pot representar un important mecanisme homeostàtic que regula la sensibilitat d’un individu a l’estrès crònic.
Materials i mètodes
Animals
S'han utilitzat ratolins mascles C57BL / 6J de vint setmanes (Laboratori Jackson) en tots els experiments conductuals i bioquímics. Tots els animals estaven habituats a la instal·lació dels animals durant almenys setmanes 1 abans de les manipulacions experimentals i es van mantenir a 23-25 ° C en un cicle de llum / fosc 12 h (s'encén de 7: 00 AM a 7: 00 PM) amb ad libitum accés a menjar i aigua. Els experiments es van dur a terme de conformitat amb les directrius de la Societat per a la Neurociència i el comitè institucional de cura i ús d’animals a l’Escola de Medicina de Mount Sinai.
Per als experiments de cocaïna [Western blotting i quantitative chromatatin immunoprecipitation (ChIP)], es van utilitzar ratolins C8BL / 10J de la setmana anterior a 57-6. Els animals van rebre set injeccions intraperitoneals diàries de salina o cocaïna (20 mg / kg cocaïna-HCl; Sigma). S'han utilitzat ratolins 24 h després del tractament final. Per a experiments de conducta, els ratolins es van allotjar individualment i es van tractar amb cocaïna-HCl intraperitoneal de 10 mg / kg (sensibilització locomotora) o 7.5 mg / kg (preferit de lloc), tal com es descriu a continuació.
Els ratolins Srffl / fl es van generar com es va descriure anteriorment (Ramanan et al., 2005). L’obtenció de Srf de NAc específica es va aconseguir mitjançant la injecció estereotàxica i la consegüent sobreexpressió viral de Cre recombinase (Cre) fusionada a proteïna fluorescent verda (GFP) mitjançant vectors de virus adeno-associats (AAV). Es va utilitzar un Cre sense supressió. AAV-GFP es va injectar en lloc d'AAV-Cre-GFP en ratolins Srffl / fl com a control. En poques paraules, els ratolins s’han anestesitzat utilitzant una barreja de ketamina (10 mg / kg) i xilazina (10 mg / kg), amb les següents coordenades estereotàxiques per al lliurament viral: + 1.6 (anterior / posterior), + 1.5 (lateral), - 4.4 (dorsal / ventral) en un angle de 10 ° des de la línia mitjana (en relació amb bregma). Un total de 0.5 μl de virus purificat es va lliurar bilateralment durant un període mínim de 5 (0.1 μl / min), seguit de 5 min de descans. Es van provar ratolins 2 setmanes després de la cirurgia, quan l’expressió viral era màxima i es van confirmar els llocs d’injecció viral de tots els animals utilitzant mètodes histològics estàndard. L’eficiència de l’expressió Cre mediada per viral va ser validada per immunohistoquímica i per PCR de transcriptasa inversa per a Srf realitzada en punxons NAc microdisserts procedents d’animals donats AAV-Cre-GFP i AAV-GFP al NAc. Els virus AAV-GFP i AAV-Cre-GFP es van generar com es va descriure anteriorment (Maze et al., 2010).
Procediments de comportament
Estrès de derrota social.
Els ratolins C57BL / 6J van ser sotmesos a un estrès de crisi social crònica per a dies consecutius de 10, tal i com es va descriure anteriorment (Berton et al., 2006; Krishnan et al., 2007; Vialou et al., 2010). En poques paraules, cada ratolí va estar exposat a un ratolí reproductor retirat masculí CD1 desconegut i agressiu per a un mínim de 5 al dia. Després de la interacció directa amb l'agressor de CD1, els animals es van col·locar en un compartiment adjacent de la mateixa gàbia per al següent 24 h amb contacte sensorial però no físic. Els animals de control es van allotjar en gàbies equivalents però amb membres de la mateixa soca. Les proves d’interacció social es van realitzar 24 h després de l’últim dia de la derrota.
L’evitació social a un ratolí mascle CD1 desconegut es va avaluar segons els protocols publicats (Berton et al., 2006; Krishnan et al., 2007; Vialou et al., 2010). El ratolí experimental es va introduir per primera vegada en un camp obert que contenia una gàbia de malla de filferro buida durant 2.5 minuts. Durant una segona sessió, es va introduir un ratolí mascle CD1 desconegut a la gàbia cablejada. Es va mesurar el temps passat a la zona d'interacció (un passadís de 8 cm d'ample que envoltava la gàbia). La segregació de ratolins derrotats en subpoblacions susceptibles i resistents es va realitzar tal com es va descriure anteriorment (Krishnan et al., 2007; Vialou et al., 2010). Atès que la majoria dels ratolins de control passaven més temps interactuant amb un objectiu social que amb un recinte objectiu buit, es va establir una proporció d’interacció de 100 (temps igual passat a la zona d’interacció en presència versus absència d’un objectiu social). Els ratolins amb puntuacions <100 es van etiquetar com a susceptibles i els que van obtenir puntuacions ≥100 es van etiquetar com a resistents. Àmplies anàlisis conductuals, bioquímiques i electrofisiològiques donen suport a la validesa d’aquestes subpoblacions susceptibles i resistents (Krishnan et al., 2007; Wilkinson et al., 2009; Vialou et al., 2010).
Per examinar la vulnerabilitat dels ratolins Srffl / fl a l'estrès de la derrota social, els ratolins, injectats bilateralment amb AAV-GFP o AAV-Cre-GFP, van ser sotmesos a tres derrotes consecutives el mateix dia i després van provar la interacció social 24 h més tard. Aquest procediment de derrota submàxima s'ha validat prèviament per revelar fenotips de prosusceptibilitat després de manipulacions genètiques (Krishnan et al., 2007; Vialou et al., 2010).
Impotència coneguda.
Els ratolins Srffl / fl que sobreexpressen bé AAV-GFP o AAV-Cre-GFP van ser sotmesos al procediment d'aplicació indefensa tal com es va descriure anteriorment (Berton et al., 2007). En poques paraules, els ratolins estaven exposats a xocs de peu intermitents i ineludibles per a 1 h durant dies consecutius 2 (0.45 mA, durada de 5). El dia de la prova, els ratolins es van reintroduir a la caixa per a assajos d’escapament consecutius de 15. Durant cada assaig, es va produir un xoc continu i es va donar als ratolins l'oportunitat d'escapar accedint al compartiment no electrificat adjacent. Després d'una fuita exitosa, la porta es va tancar automàticament i es va registrar la latència d'escapament. Quan els ratolins no van escapar dins de 25, el judici es va acabar i es va registrar com un error. Estudis previs han demostrat que l’expressió viral en NAc i en altres regions no té cap efecte sobre el comportament de l’escapament basal en absència d’estrès (Newton et al., 2002; Berton et al., 2007).
Sensibilització locomotora.
Dues setmanes després de les injeccions intra-NAc de AAV-GFP o AAV-Cre-GFP, els ratolins Srffl / fl van ser sotmesos a sensibilització locomotora. Els ratolins estaven habituats a l’arena locomotora durant 30 minuts al dia durant 4 dies. Després de l’habituació, als animals se’ls va injectar intraperitonealment 10 mg / kg de cocaïna-HCl i es van col·locar a les caixes locomotores. Les activitats locomotores dels animals es van enregistrar mitjançant un sistema de feix fotogràfic (San Diego Instruments) com a rotors de feixos ambulatoris durant 30 minuts al dia. La sensibilització locomotora es va registrar durant un període de 6 dies.
Preferència de lloc condicionada.
El procediment de condicionament del lloc es va dur a terme tal com s’ha descrit anteriorment (Maze et al., 2010), amb les següents modificacions. Breument, 18 dies després de les infusions intra-NAc d’AAV-GFP o AAV-Cre-GFP en ratolins Srffl / fl, els animals es van col·locar a les cambres de condicionament, que consistien en tres entorns contextualment diferents. Es van excloure de l’estudi els ratolins que presentaven una preferència significativa per qualsevol de les dues cambres condicionants (<10% de tots els animals). Els grups de condicionament es van equilibrar per ajustar-se a qualsevol biaix de cambra que encara pogués existir. Els dies següents, als animals se'ls va injectar sèrum fisiològic i es va confinar a una cambra a la tarda durant 30 min i després se'ls va injectar cocaïna (7.5 mg / kg, ip) i es va confinar durant 30 minuts a l'altra cambra l'endemà, igualant un total de dues rondes d’entrenament associatiu per tractament (dos marins salins i dos de cocaïna). El dia de la prova, els ratolins es van tornar a col·locar a l'aparell sense tractament durant 20 minuts i es van provar per avaluar la preferència lateral. Les respostes locomotores a la cocaïna es van avaluar mitjançant trencaments de llum a les cambres aparellades amb cocaïna per garantir l’eficàcia del tractament de les drogues. Per a tots els grups, es va avaluar la locomoció basal en resposta a sèrum fisiològic per assegurar que la locomoció no es veia afectada pel tractament viral.
Altres proves de comportament.
Els ratolins Srffl / fl es van provar en proves de camp obert, clar / fosc i de natació forçada basant-se en protocols publicats (Vialou et al., 2010). L’activitat de ratolins en camp obert es va registrar per a 5 min mitjançant un sistema de seguiment de vídeo (Ethovision) sota condicions de llum vermella. Per a la prova fosca / fosca, es va permetre als ratolins explorar lliurement un quadre de dues cambres compost per una gran àrea il·luminada connectada a un escenari tancat més petit. Els ratolins es van provar durant un període de 5 min per avaluar la quantitat de temps que passaven en qualsevol dels tancaments. A les proves de camp obert i clar / fosc, es va avaluar el temps dedicat al centre i al camp lleuger, respectivament, com un índex invers de respostes relacionades amb l’ansietat. Es va realitzar una prova de natació forçada 1 d durant un període de 5 min. L’augment del temps d’immobilitat durant la prova de natació forçada es va interpretar com un comportament semblant a un productor. La prova de natació forçada de 1 d s'ha utilitzat àmpliament en ratolins i s'ha validat com a mesura de validesa predictiva, ja que les teràpies antidepressives redueixen els temps d’immobilitat.
Immunohistoquímica
Els ratolins Srffl / fl es van anestesiar i es van perfondre intracardialment amb 4% paraformaldehid / PBS. Es van eliminar els cervells i es van crioprotegir en 30% sacarosa / PBS. Les seccions coronals (30 μm) es van tallar en un micròtom de congelació i es van processar per realitzar anàlisis immunohistoquímiques. La validació de knock-out Srffl / fl es va realitzar mitjançant un anticòs policlonal dirigit contra SRF (1 / 2000; Santa Cruz Biotechnology). L’expressió Cre es va confirmar mitjançant l’expressió GFP (pollastre policlonal, 1 / 8000, Aves Labs) en cervells disseccionats, ja que la Cre es fusiona amb GFP. Per quantificar l’inducció de FosB després de l’estrès de la derrota social en ratolins Srffl / fl, es va detectar ΔFosB usant un anticòs policlonal de conill enfortit a la regió N-terminal de la proteïna (1 / 1000; Santa Cruz Biotechnology). Les imatges es van prendre amb un microscopi confocal (ampliació 20 ×; Zeiss). El nombre de cèl·lules immunopositives amb GFP comptades com a negatives i positives per a la immunoreactivitat ΔFosB es va quantificar en múltiples imatges per a cada animal, amb els valors mitjans calculats posteriorment per a cada animal. Cada animal es considerava una observació individual per a l’anàlisi estadística.
Teixit NAm postmortem humà
El teixit cerebral humà postmortem es va obtenir de la Dallas Brain Collection, on es recullen teixits de l’oficina d’examinadors mèdics de Dallas i del programa de trasplantament de teixits de la Universitat de Texas (UT), després del consentiment dels familiars més propers. Es va analitzar el teixit tant de mascles com de dones, segons l’edat, l’interval postmortem, el nombre d’integritat de l’ARN (RIN) i el pH. Factors agonals específics, com ara coma, hipòxia, pirèxia, convulsions, deshidratació, hipoglucèmia, insuficiència d'òrgans múltiples i ingestió de substàncies neurotòxiques en el moment de la mort influeixen en la integritat de l'ARN en teixits cerebrals postmortem (Tomita et al., 2004). Hem utilitzat una escala de factors agonals (AFS) per caracteritzar mostres de teixit en cadascuna d’aquestes vuit afeccions. A l'absència d'un factor agonal se li va assignar una puntuació de 0 i la seva presència es va puntuar com a 1 per proporcionar una puntuació AFS total entre 0 i 8. El teixit amb puntuacions agonals de 0 o 1 reflecteix mostres de bona qualitat; la demografia del cas es dóna a la taula 1. La qualitat dels teixits excepcionals es va confirmar amb valors RIN elevats. Els casos es van sotmetre a una dissecció estàndard abans de la congelació instantània a -40 ° C isopentà i l’emmagatzematge a -80 ° C; es va realitzar una dissecció addicional de NAc en teixits congelats. El comitè de revisió institucional UT Southwestern va revisar i va aprovar la recol·lecció d’aquest teixit per a ús investigador. Es va realitzar una entrevista amb informants directes per a cada cas de depressió en una data posterior, on es va documentar la informació sobre la malaltia del cas; dos psiquiatres investigadors van realitzar un diagnòstic consensual de trastorn depressiu major mitjançant criteris DSM-IV. Cap dels casos inclosos en aquest estudi va tenir proves de toxicologia sanguínia positives per a drogues d'abús, alcohol o medicaments amb recepta que no fossin antidepressius. Tot i el tractament antidepressiu, tots els subjectes tenien una depressió clínica en el moment de la mort. Les mostres de teixits es van dispensar de manera cega per a l'anàlisi.
Taula 1.
Dades demogràfiques per a l'estudi postmortem humà
Western blotting
Els exemplars de NAc humans i de ratolí es van processar tal com es va descriure anteriorment (Maze et al., 2010). El teixit congelat va ser sonicat en un tampó de lisi 5 mP HEPES que contenia SDN 1% amb proteasa (Roche) i inhibidors de fosfatasa (Sigma). Les concentracions de proteïnes es van determinar mitjançant l’assaig de proteïna Dc (Bio-Rad). Les quantitats iguals de mostres de proteïnes van ser sotmeses a SDS-PAGE i Western blotting. Es van sondar western blot mitjançant un anticòs de SRF (1 / 2000; Santa Cruz Biotechnology) o GAPDH (1 / 1500; Abcam) i es van escanejar i quantificar mitjançant el sistema d’imatges Odyssey (Licor).
Aïllament d'ARN i PCR quantitativa
L’aïllament d’ARN, la PCR quantitativa (qPCR) i l’anàlisi de dades es van realitzar tal com es descrivia anteriorment (Maze et al., 2010; Vialou et al., 2010). Breu, es va aïllar l’ARN amb el reactiu TriZol (Invitrogen) i es va purificar posteriorment amb micro-kits RNAeasy de Qiagen. Es van determinar que totes les mostres d’ARN tenien valors 260 / 280 i 260 / 230 ≥1.8. La transcripció inversa es va realitzar amb iScript (Bio-Rad). El qPCR que utilitza SYBR green (Quanta) es va realitzar amb un sistema de PCR 7900HT RT de Applied Biosystems amb els següents paràmetres de cicle: 2 min a 95 ° C; 40 cicles de 95 ° C per a 15 s, 59 ° C per 30 s, 72 ° C per a 33 s; i es va classificar la calefacció a 95 ° C per generar corbes de dissociació per confirmar els productes de PCR únics. Es van analitzar les dades comparant els valors de C (t) de la condició de tractament (control contra ratolins susceptibles o resistents o controls humans contra pacients deprimits) amb el mètode ΔΔC (t) (Tsankova et al., 2006). :FosB qPCR primers: foward, AGGCAGAGCTGGAGTCGGAGAT i revers, GCCGAGGACTTGAACTTCACTACTGG.
CHIP
El ChIP es va realitzar tal i com es va descriure anteriorment (Maze et al., 2010) en punxons NAC bilaterals agrupats a partir de ratolins de control, susceptibles i resistents (quatre cops / ratolí de calibre 14) 1 h després de l'última experiència de derrota i de solució salina i de cocaïna animals tractats 24 h després del tractament final. El teixit estava reticulat a Xnumx% formaldehid. La fixació es va interrompre posteriorment mitjançant l'aplicació de glicina i el teixit es va rentar i es va mantenir a −1 ° C fins que es va utilitzar. La cromatina tallada es va incubar durant la nit amb un anticòs anti-SRF (Santa Cruz Biotechnology) anteriorment lligat a comptes magnètiques (Dynabeads M-80; Invitrogen). Després de la reticulació inversa i la purificació de l’ADN, la unió de SRF al promotor fosb va ser determinada per qPCR usant primers que abastaven una regió del promotor fosb que contenia dos llocs d’unió a elements de resposta de sèrum. Els desviadors de SRF es van enriquir significativament en comparació amb controls sense anticorps. Primers promotors del gen fosb del ratolí: endavant, CCCTCTGACGTAATTGCTAGG i revers, ACCTCCCAAACTCTCCCTTC.
Anàlisi estadística
Es van utilitzar ANOVA d’unidireccionals per comparar mitjanes entre ratolins controlats, susceptibles i resistents en anàlisis bioquímiques i de comportament. Es van utilitzar ANOVA bidireccionals per comparar la inducció de ΔFosB per derrota social en ratolins eliminats locals de Srf, així com per comparar l’efecte de la eliminació de Srf en els protocols d’indefensió i sensibilització locomotora apresos. Les proves de t d’estudiant es van utilitzar per comparar les mitjanes de l’efecte del knock-out de Srf en la inducció de osFosB i entre grups en anàlisi ChIP de teixit postmortem humà i ratolí. Les diferències entre les condicions experimentals es van considerar estadísticament significatives quan p ≤ 0.05.
Resultats
Expressió SRF i ΔFosB en depressió humana i ratolins derrotats socialment
Per explorar un paper potencial de SRF en el desenvolupament de conductes depressives, primer vam avaluar l’expressió de proteïnes SRF en NAc de pacients humans amb depressió postmortem. Els subjectes deprimits van mostrar nivells de SRF significativament reduïts a NAc en comparació amb els seus controls coincidents amb l’edat (t (19) = 1.9; p <0.05) (Fig. 1A). Donat el paper de SRF en la regulació de l’expressió gènica immediata immediata dependent de l’activitat (Ramanan et al., 2005), vam plantejar la hipòtesi que SRF podria estar implicat en el control de l’expressió de osFosB en aquesta regió cerebral. En suport d’aquesta hipòtesi, vam observar que els nivells d’ARNm de osfosb també es reduïen significativament en el NAc dels humans deprimits (t (16) = 1.8; p <0.05) (figura 1B). Això és coherent amb els descobriments recents de disminució dels nivells de proteïna osFosB en aquestes condicions (Vialou et al., 2010).
Figura 1.
La repressió crònica de SRF induïda per l’estrès es correlaciona amb la disminució de la transcripció de osFosB a NAc. Els pacients amb depressió humana A, B, postmortem presenten nivells reduïts de proteïna SRF (n = 10 / grup; A) i expressió d’ARNm de osfosb a NAc (n = 8 / grup; B). C, els ratolins sotmesos a estrès de derrota social crònica (10 dies) es van agrupar en subpoblacions susceptibles i resistents. D, l’estrès de derrota social crònica redueix els nivells de proteïna SRF en NAc de ratolins susceptibles, però no en ratolins resistents, en comparació amb els controls 24 hores després de la prova d’interacció social mostrada a C. regulats a l'alça en animals resistents (n = 7-15 / grup). La proteïna F, SRF mostra una major unió al promotor del gen fosb després de l'estrès de la derrota social crònica només en ratolins resistents i no en ratolins susceptibles (n = 5 / grup). Les dades mostrades s’expressen com a mitjana ± SEM (representada com a barres d’error). Con., Control; Dep., Deprimit; Sus., Susceptible; Res., Resistent. * p <0.05 versus control; *** p <0.001 versus control; #p <0.05 versus susceptible; ## p <0.01 versus susceptible; ### p <0.001 versus susceptible.
Per ampliar aquestes troballes, hem utilitzat el protocol d’estrès per derrota social crònica en ratolins. Es van aparèixer dos grups distingibles de ratolins vençuts, susceptibles i resistents (Krishnan et al., 2007) basats en una mesura d’evitació social, en què els animals susceptibles presentaven una interacció social significativament reduïda en comparació amb els animals control i resistents (F (2,23 157.2) = 0.001; p <0.001; proves t amb una correcció de Bonferroni, susceptible contra control, p <0.05; resistent contra control, p <0.01; resistent contra susceptible, p <1) (Fig. 2,32C). Dos dies després de l'últim episodi de derrota, es van analitzar l'expressió de SRF a NAc en ratolins control susceptibles, resistents i no derrotats. De manera similar a les troballes en depressió humana, els nivells de proteïna SRF es van reduir significativament en NAc de ratolins susceptibles en comparació amb els controls, mentre que els nivells de SRF no es van veure afectats en NAc de ratolins resistents (F (4.7) = 0.05; p <0.05; proves de t amb un Correcció de Bonferroni, susceptible vs control, p <0.05; resistent vs susceptible, p <1) (Fig. XNUMXD).
A continuació, vam examinar l'expressió d'ARNm de osfosb en NAc d'aquests tres grups d'animals i vam observar un augment significatiu de l'expressió d'Δfosb en animals resistents només, amb una tendència però sense augment significatiu observat en ratolins susceptibles (t (14) = 2.1; p <0.05 ) (Fig. 1E). Per investigar més a fons les possibles interaccions entre els nivells de SRF i la transcripció de osfosb, vam utilitzar ChIP per examinar si la unió de SRF al promotor del gen fosb es va alterar després de l'estrès de derrota social crònica en cohorts separades de ratolins susceptibles i resistents. Els animals resistents van mostrar una unió SRF millorada significativament al promotor de fosb a NAc en comparació amb controls (t (8) = 2.1; p <0.05), així com en comparació amb ratolins susceptibles (t (8) = 2.0; p <0.05). No es va observar cap diferència entre els controls i els ratolins susceptibles, que probablement reflecteix la manca d’inducció de SRF en els ratolins susceptibles (figura 1F).
Per confirmar el paper de SRF en la regulació de ΔFosB després de l'estrès de derrota social crònica, es van utilitzar ratolins Srffl / fl per examinar l'efecte d'una supressió selectiva de SRF del NAc sobre la inducció de l'estrès de osFosB. Els ratolins Srffl / fl es van injectar intra-NAc estereotàxicament amb vectors AAV que expressaven GFP o Cre-GFP. Es va confirmar immunohistoquímicament un knock-out específic de NAc de SRF induït per AAV-Cre-GFP (Fig. 2A). De fet, no hi va haver cap superposició entre la tinció de SRF i l’expressió de Cre, que demostrava l’eficàcia del knock-out. En els cops de NAc microdissecats, es va detectar una disminució significativa del 50% en els nivells de proteïna SRF (t (11) = 4.3; p <0.001). La magnitud probablement reflecteix el fet que una fracció de teixit en aquestes microdisseccions no està infectada per virus.
Figura 2.
SRF media la inducció de ΔFosB per estrès de derrota social crònica. A, la injecció d'AAV-Cre-GFP al NAc de ratolins Srffl / fl dóna lloc a la eliminació de la proteïna SRF a les neurones que expressen Cre. La injecció d'AAV-GFP no va tenir efectes perceptibles. B, aquesta eliminació selectiva de SRF del NAc bloqueja completament la inducció de ΔFosB en NAc després de l'estrès de derrota social crònica (n = 4 / grup). Les dades mostrades s’expressen com a mitjana ± SEM (representada com a barres d’error). * p <0.05 versus control AAV-GFP; ** p <0.01 enfront de la derrota AAV-GFP.
A continuació, vam realitzar una immunohistoquímica quantitativa per ΔFosB en NAc de ratolins Srffl / fl vençuts injectats intra-NAc amb AAV-Cre-GFP o AAV-GFP. Després de l’estrès de derrota social crònica, l’expressió de osFosB es va induir significativament en NAc d’animals injectats amb AAV-GFP (interacció virus × tractament, F (1,12) = 6.4; proves t amb correcció de Bonferroni, control vs derrota, p <0.05; AAV-Cre vs AAV-GFP, p <0.01). Tanmateix, aquesta inducció no es va observar en ratolins Srffl / fl que rebien AAV-Cre-GFP (Fig. 2B), demostrant que la inducció de osFosB en NAc per estrès crònic requereix SRF.
El knock-out de SRF a NAc promou fenotips similars a la propressió i la proanxietat
Atès que s’ha demostrat que la inducció de ΔFosB per estrès de derrota social crònica media la resiliència (Vialou et al., 2010), vam plantejar la hipòtesi que la regulació descendent de SRF i la pèrdua resultant d’inducció de osFosB en animals susceptibles poden representar una adaptació negativa que en última instància fa que animals més vulnerables als efectes nocius de l’estrès. Per provar aquesta hipòtesi, es va induir una supressió local específica de NAc del gen Srf en ratolins Srffl / fl adults tal com es va descriure anteriorment, i els ratolins resultants i els seus controls es van provar en una bateria de paradigmes conductuals per avaluar la depressió i l’ansietat basals. com el comportament. La supressió local de NAc de SRF va promoure un efecte similar a la prodepressió mesurat mitjançant la prova de nedació forçada (t (30) = 2.5; p <0.05), així com un efecte ansiogènic mesurat al camp obert (t (38) = 1.9; p <0.05) i proves clar / fosc (t (8) = 1.9; p <0.05). Per tant, els ratolins Srffl / fl que rebien AAV-Cre-GFP al NAc presentaven una latència disminuïda a la immobilitat en la prova de nedació forçada, menys temps al centre d’un camp obert i menys temps al compartiment de llum d’un quadre clar / fosc en comparació amb animals injectats amb AAV-GFP (Fig. 3A-C). Tanmateix, la supressió intra-NAc de SRF no va alterar els nivells basals de locomoció, cosa que suggereix que els efectes de comportament observats en animals eliminats de SRF no es devien a anomalies en l'activitat locomotora general (Fig. 3D). Aquestes dades són interessants a la llum d’informes anteriors que suggereixen que, tot i que ΔFosB a NAc regula conductes depressives, no sembla que estigui implicat en respostes relacionades amb l’ansietat (Vialou et al., 2010). Les nostres troballes actuals que la pèrdua de SRF indueix respostes ansiogèniques suggereixen que ho fa a través d’objectius diferents de ΔFosB.
Figura 3.
El knock-out SRF del NAc promou fenotips semblants a la prodepressió i la proanxietat. A – C, eliminació selectiva de SRF del NAc, aconseguida mitjançant injecció AAV-Cre-GFP al NAc de ratolins Srffl / fl, redueix la latència a la immobilitat en la prova de nedar forçat (n = 14-18 / grup; A) i redueix el temps passat al centre i el temps passat al compartiment de llum a les proves de camp obert (B) i clar / fosc (C), respectivament (n = 5-15 / grup). D, No es va observar cap diferència en l’activitat locomotora basal al camp obert de ratolins que van rebre injeccions intra-NAc d’AAV-GFP o AAV-Cre-GFP. E, F, augment de la susceptibilitat a la indefensió apresa (n = 7-8 / grup; E) i a l'estrès de derrota social (n = 5-6 / grup; F), mesurat, respectivament, per la latència d'escapament i el temps d'interacció social . Les dades mostrades s’expressen com a mitjana ± SEM (representada com a barres d’error). * p <0.05 versus GFP o versus objectiu absent; ** p <0.01 versus GFP; *** p <0.001 versus GFP.
A continuació, vam estudiar si la supressió de SRF a NAc també augmenta la vulnerabilitat d’un animal als efectes perjudicials de l’estrès repetit. Els ratolins Srffl / fl, injectats amb AAV-Cre-GFP o AAV-GFP al NAc, van ser examinats en dos models de depressió, van aprendre impotència i estrès de derrota social crònica. En la indefensió apresa, els animals Srffl / fl que rebien AAV-Cre-GFP van mostrar una latència augmentada per escapar d’un xoc del peu després d’una exposició prèvia a l’estrès de xoc del peu ineludible (interacció del tractament × assajos, F (14,180) = 10.2; proves t amb una correcció de Bonferroni, p <0.001; AAV-Cre vs AAV-GFP, p <0.01), que indica una major susceptibilitat als dèficits de comportament induïts per l’estrès (Fig. 3E). De la mateixa manera, la supressió local de SRF de NAc també va augmentar l'aversió social (t (10) = 1.8; p <0.05) en comparació amb els animals control controlats per AAV-GFP després de l'estrès de derrota social crònica (Fig. 3F), un efecte similar a la prodepressió.
Falta de participació de SRF en la inducció de BFosB i en les respostes conductuals a la cocaïna
Tenint en compte que el osFosB també s’indueix a NAc en resposta a drogues d’abús com la cocaïna, era interessant examinar un paper potencial de l’SRF en l’acció de la cocaïna. A diferència de l'estrès crònic de derrota social, l'exposició repetida a la cocaïna no va alterar l'expressió de proteïna SRF a NAc (t (14) = 0.8; p> 0.05) (Fig. 4A) i no va tenir cap efecte sobre la unió de SRF al promotor del gen fosB en aquesta regió cerebral (t (4) = 0.7; p> 0.05) (figura 4B). Això suggereix que, contràriament a l'estrès, la inducció de osFosB després de la cocaïna crònica no està mediada per SRF. Ho hem provat directament examinant si s’aconsegueix alterar l’acumulació de osFosB després de la cocaïna crònica en animals Srffl / fl que reben AAV-Cre-GFP versus AAV-GFP a NAc. Vam trobar que la supressió de SRF no tenia cap efecte sobre l'acumulació de osFosB induïda per la cocaïna en aquesta regió cerebral (figura 4C).
Figura 4.
La pèrdua de SRF no va tenir cap efecte sobre la inducció de cocaïna de comportaments ΔFosB o regulats per la cocaïna. A, B, l’exposició repetida de cocaïna (7 d, 20 mg / kg cocaïna-HCl) no va tenir cap efecte sobre l’expressió de la proteïna SRF en NAc (A) o en la unió de SRF al promotor del gen fosB en aquesta regió cerebral (B) 24 h after exposició a medicaments (n = 5 / grup). L'acumulació de C, ΔFosB, mesurada immunocitochimicamente, després de l'exposició crònica a la cocaïna no es veu afectada per la sortida de SRF específica de NAc. D, E, la supressió local de SRF de la NAc tampoc va tenir efecte sobre l’activitat locomotora després d’una injecció salina (d 1) sobre l’activitat locomotora induïda per la cocaïna (n = 8 / group) (d 1 – 7; D) o sobre preferència de lloc condicionada per la cocaïna (n = 8 / grup; E). Les dades mostrades s'expressen com a mitjana ± SEM (representada com a barres d’error).
Per fer un seguiment d'aquesta sorprenent troballa, vam investigar si un knock-out selectiu de SRF de NAc altera les respostes de comportament a la cocaïna. En coherència amb la manca de regulació de SRF de la inducció de osFosB per cocaïna, el knock-out específic de NAc de SRF no va tenir cap efecte sobre l’activitat locomotora induïda per la cocaïna aguda o la sensibilització locomotora observada després d’exposicions repetides a cocaïna (tractament × interacció temporal, F (4,80) = 0.3; p> 0.05) (Fig. 4D). De la mateixa manera, el knock-out específic de NAc de SRF no va tenir cap efecte sobre la preferència de lloc condicionada per la cocaïna (t (14) = 0.1; p> 0.05) (figura 4E), que proporciona una mesura indirecta de la recompensa de la cocaïna.
Discussion
Aquest estudi va identificar SRF com un nou mediador d’avantatge de ΔFosB a NAc després d’estrès crònic per derrota social i implica a SRF en el desenvolupament de comportaments de depressió i ansietat. Proporcionem evidència directa que l'estrès crònic de la derrota social disminueix els nivells de SRF en els NAc d'animals susceptibles, però no resistents, i que aquesta regulació baixa impedeix la inducció de ΔFosB en aquesta regió cerebral, que hem demostrat que és necessària per fer front a l'estrès crònic eficaç, és a dir, resiliència (Vialou et al., 2010). Es va trobar una reducció similar en l’expressió de SRF en el NAc d’home deprimit, on l’expressió de la proteïna ΔFosB i la proteïna també es va reduir. En canvi, els nivells de FosB no es van reduir en el NAc de ratolins susceptibles, malgrat una baixa regulació de SRF, que implica altres mecanismes transcripcionals, encara desconeguts, en el control de l'expressió FosB. Es va establir un paper causal per al SRF en la inducció de la inducció de ΔFosB en la NAc després de l'estrès crònic mitjançant l’ús de la supressió genètica inducible de SRF d’aquesta regió cerebral. L’anàlisi del comportament de ratolins amb aquesta eliminació de SRF específica de NAc implica més a SRF que juga un paper clau en el desenvolupament de conductes basades en depressió i ansietat de depressió i de base. En contrast notable, la supressió de SRF no va tenir cap efecte sobre la inducció de BFosB en resposta a l'administració crònica de cocaïna o sobre els efectes conductuals de la cocaïna. Aquestes troballes donen suport a un nou paper específic per a l'estímul de la SRF en la regulació de la inducció de BFosB i de les respostes conductuals a diferents pertorbacions ambientals.
La transcripció mediada per SRF s'ha demostrat que anteriorment respon a l’activitat sinàptica, provocada en gran mesura per l’augment de l’afluència de calci, així com per la millora de l’activitat neurotròfica, especialment en el cas del factor neurotròfic derivat del cervell (BDNF) (Bading et al., 1993; Xia et al., 1996; Johnson et al., 1997; Chang et al., 2004; Kalita et al., 2006; Knöll i Nordheim, 2009). Això planteja la qüestió interessant de per què la SRF està regulada a la baixa en NAc de ratolins susceptibles, però no resistents, després d’estrès crònic per derrota social. És probable que aquesta regulació diferencial no estigui mediada per la senyalització de dopamina o BDNF, ja que els ratolins susceptibles mostren nivells de proteïna BDNF augmentats i augmenten la senyalització de BDNF a la part inferior de la NAC, així com la intensificació de la ruptura de les neurones de la dopamina de l'àrea ventral tegmental (VTA), que innerven el NAc, mentre que els animals resistents mostren nivells normals de senyalització de BDNF i de velocitat de tret VTA (Krishnan et al., 2007). Una possibilitat alternativa és que l’expressió de SRF quedi suprimida en NAc en resposta a la inervació glutamatèrgica alterada d’aquesta regió cerebral, que hem demostrat que està regulada diferencialment en ratolins susceptibles versus resistents (Vialou et al., 2010). Cal treballar més per estudiar directament aquest i altres possibles mecanismes.
Estudis recents utilitzant mètodes per a tot el genoma i altres mètodes suggereixen que N5-10% dels gens objectius de SRF a les neurones són gens primerencs immediats (Philippar et al., 2004; Ramanan et al., 2005; Etkin et al., 2006; Knöll i Nordheim, 2009). Això és coherent amb les nostres dades que demostren un paper crític per al SRF en la inducció de ΔFosB, un producte truncat del gen precoç primordial fosb, per estrès crònic. Curiosament, nombrosos gens objectius SRF identificats en aquests diversos estudis també representen dianes conegudes de ΔFosB a NAc (Kumar et al., 2005; Renthal et al., 2008, 2009; Maze et al., 2010). Entre aquests gens regularment regulats hi ha diversos que se sap que regulen el citosquelet neuronal (per exemple, Cdk5, Arc i Actb). Això, al seu torn, és consistent amb els informes que SRF influeix en la dinàmica de l'actina i la motilitat neuronal en diversos tipus de cèl·lules neuronals (Alberti et al., 2005; Ramanan et al., 2005; Knöll et al., 2006), mentre que ΔFosB és conegut per afecten el creixement dendrític de la columna vertebral de les neurones NAc (Maze et al., 2010). Aquests punts finals funcionals comuns poden reflectir els efectes concertats del SRF, combinats amb la seva inducció de ΔFosB, que actuen sobre una sèrie de gens objectiu comuns per influir en la morfologia neuronal i, en última instància, en un comportament complex.
També s'ha demostrat que el SRF juga un paper crític en la regulació de la plasticitat sinàptica i de la seva expressió i comportament. Per exemple, la pèrdua de la inducció depenent de SRF de gens primerencs immediats en resposta a l’exploració voluntària d’un nou entorn o l’activació neuronal per convulsions electroconvulsives s’ha associat a una potenciació sinàptica alterada a llarg termini en l’hipocamp dels mutants Srf (Ramanan et al. , 2005; Etkin et al., 2006). A més, s'ha demostrat que l'esgotament de SRF en l'hipocamp provoca dèficits de depressió sinàptica a llarg termini, expressió gènica immediata induïda per un context nou i una habituació alterada durant l'exploració d'un nou entorn (Etkin et al., 2006). Aquestes dades estableixen la importància del SRF en la capacitat d’un animal per adaptar-se adequadament a les pertorbacions ambientals, com en el cas esmentat d’aprendre a habituar-se a un nou entorn o, en el cas d’adaptar-se a estímuls estressants negatius, per evitar la promulgació de l’estrès. -dèficits de comportament induïts, com en el nostre estudi actual. Per tant, observem que els animals que presenten dèficits en l’expressió del SRF, ja sigui en resposta a l’estrès de la derrota social en individus susceptibles o mitjançant l’anul·lació directa del SRF, presenten comportaments depressius i d’ansietat augmentats. Tenint en compte que els subjectes humans deprimits també presenten nivells de SRF disminuïts al NAc, és concebible que el SRF tingui un paper fonamental en la regulació de la capacitat d’un individu per adaptar-se positivament als estímuls ambientals negatius, en part mitjançant la regulació de l’expressió de osFosB al NAc.
MECANISMES DIFERENTS: ADDICCIÓ I RESISTÈNCIA D'ESTRÈS
Un resultat sorprenent del present estudi és que, tot i que es requereix SRF per a l’acumulació de ΔFosB en NAc com a resposta a l’estrès crònic, no s’exigeix per a la inducció de ΔFosB a la mateixa regió cerebral en resposta a la cocaïna crònica. De la mateixa manera, SRF no és necessari per a respostes normals del comportament del medicament. Aquestes dades mostren que, tot i que edFosB és induït en NAc en resposta a molts tipus d'estímuls (Nestler et al., 1999; Nestler, 2008), sembla que hi ha vies moleculars diferents que porten a la inducció de ΔFosB. Una possible explicació d’aquestes troballes són els tipus de cèl·lules parcialment diferents que mostren una acumulació de BFosB en resposta a l’estrès versus la cocaïna. L'estrès crònic indueix ΔFosB aproximadament igual a les dues subpoblacions principals de neurones espinoses mitjanes NAc, aquelles que expressen predominantment receptors de dopamina D1 versus D2, mentre que la cocaïna crònica indueix ΔFosB predominantment a les neurones D1 + (Kelz et al., 1999; Perrotti et al., 2004) . Per tant, és possible que les vies dependents de SRF puguin ser importants per a la inducció de BFosB en neurones D2 +. Tanmateix, això no explicaria la pèrdua completa de la inducció de ΔFosB en ratolins knock-out de SRF després de l'estrès crònic, ja que la inducció es produeix tant en els subtipus neuronals. Una explicació alternativa és que l'estrès crònic i la cocaïna crònica afecten diferents cascades de senyalització intracel·lular, en virtut de les seves diferents maneres d'actuació sobre les neurones NAc, amb estrès crònic potser treballant a través de la transmissió glutamatergica alterada, com es va assenyalar anteriorment, i la cocaïna crònica treballant principalment a través de D1. senyalització del receptor (Nestler, 2008). Una altra possibilitat és que la inducció de BFosB per estrès crònic versus cocaïna crònica depèn de diferents mecanismes de transcripció que són controlats diferencialment per diferents entrades neuronals que inerven el NAc de diverses regions de projecció glutamatergiques, per exemple, diverses regions de l'escorça prefrontal, l'hipocamp i l'amígdala. Cal treballar molt més per explorar aquestes possibilitats i alternatives.
Junts, els nostres resultats identifiquen un nou mecanisme de transcripció a través del qual s’indueix ΔFosB en el NAc per mediar les respostes de proresilience als estímuls estressants. Aquest estudi també proporciona una nova informació important sobre el paper que juga SRF al nivell del NAc en la regulació de la depressió i els comportaments semblants a l’ansietat.. Obtenir una millor comprensió del paper transcripcional de l’SRF en la regulació d’aquestes conductes ajudarà a la identificació de nous objectius gènics implicats en la resiliència a trastorns relacionats amb l’estrès i pot facilitar el desenvolupament futur de teràpies antidepressives més eficaces.
Aquest treball va comptar amb el suport de subvencions de l’Institut Nacional de Salut Mental i l’Institut Nacional sobre l’abús de drogues i una aliança de recerca amb AstraZeneca. Agraïm a David D. Ginty per proporcionar els ratolins Srffl / fl.
La correspondència s'hauria d’adreçar a Eric J. Nestler, Departament de Neurociència de Fishberg, Escola de Medicina Mount Sinai, Un lloc de Gustave L. Levy, Caixa 1065, Nova York, NY 10029-6574. [protegit per correu electrònic]
Copyright © 2010 els autors 0270-6474 / 10 / 3014585-08 $ 15.00 / 0
referències
1. ↵
1. Alberti S,
2. Krause SM,
3. Kretz O,
4. Philippar U,
5. Lemberger T,
6. Casanova E,
7. Wiebel FF,
8. Schwarz H,
9. Frotscher M,
10. Schütz G,
11. Nordheim A
(2005) La migració neuronal a la corriente migratoria rostral murina requereix un factor de resposta sèrica. Proc Natl Acad Sci EUA 102: 6148 – 6153.
Text complet abstracte / GRATUÏT
2. ↵
1. Bading H,
2. Ginty DD,
3. Greenberg ME
(1993) Regulació de l’expressió gènica en neurones de l’hipocamp mitjançant diferents vies de senyalització de calci. Ciència 260: 181 – 186.
Text complet abstracte / GRATUÏT
3. ↵
1. Berton O,
2. McClung CA,
3. Dileone RJ,
4. Krishnan V,
5. Renthal W,
6. Russo SJ,
7. Graham D,
8. Tsankova NM,
9. Bolanos CA,
10. Rios M,
11. Monteggia LM,
12. Self DW,
13. Nestler EJ
(2006b) Paper essencial del BDNF en la via de la dopamina mesolímbica en estrés de derrota social. Ciència 311: 864 – 868.
Text complet abstracte / GRATUÏT
4. ↵
1. Berton O,
2. Covington HE 3rd.,
3. Ebner K,
4. Tsankova NM,
5. Carle TL,
6. Ulery P,
7. Bhonsle A,
8. Barrot M,
9. Krishnan V,
10. Singewald GM,
11. Singewald N,
12. Birnbaum S,
13. Neve RL,
14. Nestler EJ
(2007) La inducció de ΔFosB al gris periaqueductal per estrès promou respostes actives de coping. Neuron 55: 289 – 300.
CrossRefMedline
5. ↵
1. Chang SH,
2. Poser S,
3. Xia Z
(2004) Un nou paper per al factor de resposta sèrica en la supervivència neuronal. J Neurosci 24: 2277 – 2285.
Text complet abstracte / GRATUÏT
6. ↵
1. Etkin A,
2. Alarcón JM,
3. Weisberg SP,
4. Touzani K,
5. Huang YY,
6. Nordheim A,
7. Kandel ER
(2006) Un paper en l'aprenentatge de SRF: la supressió en el cervell forebut adult pertorba LTD i la formació d'una memòria immediata d'un context nou. Neuron 50: 127 – 143.
CrossRefMedline
7. ↵
1. Heinze HJ,
2. Heldmann M,
3. Voges J,
4. Hinrichs H,
5. Marco-Pallares J,
6. Hopf JM,
7. Müller UJ,
8. Galazky I,
9. Sturm V,
10. Bogerts B,
11. Münte TF
(2009) Contrarestar la sensibilització per incentius en la dependència alcohòlica severa mitjançant l'estimulació cerebral profunda del nucli accumbens: aspectes clínics i bàsics de la ciència. Front Hum Neurosci 3: 22.
Medline
8. ↵
1. Johnson CM,
2. Hill CS,
3. Chawla S,
4. Treisman R,
5. Bading H
(1997) El calci controla l'expressió gènica a través de tres vies diferents que poden funcionar independentment de la cascada de senyalització de les proteïnes quinases Ras / mitogen activades (ERK). J Neurosci 17: 6189 – 6202.
Text complet abstracte / GRATUÏT
9. ↵
1. Kalita K,
2. Kharebava G,
3. Zheng JJ,
4. Hetman M
(2006) Paper de la leucèmia aguda megakarioblàstica-1 en l'estimulació dependent de ERK1 / 2 de la transcripció impulsada per factors de la resposta de sèrum per BDNF o augment de l'activitat sinàptica. J Neurosci 26: 10020 – 10032.
Text complet abstracte / GRATUÏT
10. ↵
1. Kelz MB,
2. Chen J,
3. Carlezon WA Jr.,
4. Whisler K,
5. Gilden L,
6. Beckmann AM,
7. Steffen C,
8. Zhang YJ,
9. Marotti L,
10. Self DW,
11. Tkatch T,
12. Baranauskas G,
13. Surmeier DJ,
14. Neve RL,
15. Duman RS,
16. Picciotto MR,
17. Nestler EJ
(1999) L'expressió del factor de transcripció BFosB al cervell controla la sensibilitat a la cocaïna. Natura 401: 272 – 276.
CrossRefMedline
11. ↵
1. Knöll B,
2. Nordheim A
(2009) Versatilitat funcional dels factors de transcripció en el sistema nerviós: el paradigma SRF. Tendències Neurosci 32: 432 – 442.
CrossRefMedline
12. ↵
1. Knöll B,
2. Kretz O,
3. Fiedler C,
4. Alberti S,
5. Schütz G,
6. Frotscher M,
7. Nordheim A
(2006) El factor de resposta sèric controla l'assemblatge del circuit neuronal a l'hipocamp. Nat Neurosci 9: 195 – 204.
CrossRefMedline
13. ↵
1. Krishnan V,
2. Han MH,
3. Graham DL,
4. Berton O,
5. Renthal W,
6. Russo SJ,
7. Laplant Q,
8. Graham A,
9. Lutter M,
10. Lagace DC,
11. Ghose S,
12. Reister R,
13. Tannous P,
14. Green TA,
15. Neve RL,
16. Chakravarty S,
17. Kumar A,
18. Eisch AJ,
19. Self DW,
20. Lee FS,
21. et al.
(2007) Adaptacions moleculars subjacents a la susceptibilitat i resistència a la derrota social a les regions de recompensa del cervell. Cel·la 131: 391 – 404.
CrossRefMedline
14. ↵
1. Kuhn J,
2. Bauer R,
3. Pohl S,
4. Lenartz D,
5. Huff W,
6. Kim EH,
7. Klosterkoetter J,
8. Sturm V
(2009) Observacions per deixar de fumar sense ajuda després d’una estimulació cerebral profunda del nucli accumbens. Addict Eur Res 15: 196 – 201.
CrossRefMedline
15. ↵
1. Kumar A,
2. Choi KH,
3. Renthal W,
4. Tsankova NM,
5. Theobald DE,
6. Truong HT,
7. Russo SJ,
8. Laplant Q,
9. Sasaki TS,
10. Whistler KN,
11. Neve RL,
12. Self DW,
13. Nestler EJ
(2005) La remodelació de la cromatina és un mecanisme clau que subjecta a la plasticitat induïda per la cocaïna en l'estria. Neuron 48: 303 – 314.
CrossRefMedline
16. ↵
1. Maze I,
2. Covington HE 3rd.,
3. Dietz DM,
4. LaPlant Q,
5. Renthal W,
6. Russo SJ,
7. Mecànic M,
8. Mouzon E,
9. Neve RL,
10. Haggarty SJ,
11. Ren Y,
12. Sampath SC,
13. Hurd YL,
14. Greengard P,
15. Tarakhovsky A,
16. Schaefer A,
17. Nestler EJ
(2010) Paper essencial de la histona metiltransferasa G9a en la plasticitat induïda per la cocaïna. Ciència 327: 213 – 216.
Text complet abstracte / GRATUÏT
17. ↵
1. McClung CA,
2. Ulery PG,
3. Perrotti LI,
4. Zachariou V,
5. Berton O,
6. Nestler EJ
(2004) DeltaFosB: un interruptor molecular per a l'adaptació a llarg termini al cervell. Resum cerebral Mol cervell Res 132: 146 – 154.
Medline
18. ↵
1. Nestler EJ
(2008) Mecanismes de transcripció de l'addicció: paper de deltaFosB. Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci 363: 3245-3255.
Text complet abstracte / GRATUÏT
19. ↵
1. Nestler EJ,
2. Carlezon WA Jr.
(2006) El circuit de recompensa de dopamina mesolímbica en depressió. Psiquiatria biològica 59: 1151-1159.
CrossRefMedline
20. ↵
1. Nestler EJ,
2. Kelz MB,
3. Chen J
(1999) ΔFosB: un mediador molecular de la plasticitat neuronal i conductual a llarg termini. Resum cerebral 835: 10 – 17.
CrossRefMedline
21. ↵
1. Newton SS,
2. Thome J,
3. Wallace TL,
4. Shirayama Y,
5. Schlesinger L,
6. Sakai N,
7. Chen J,
8. Neve R,
9. Nestler EJ,
10. Duman RS
(2002) La inhibició de la proteïna que uneix l'element de resposta de cAMP o la dinorfina al nucli accumbens produeix un efecte semblant a un antidepressiu. J Neurosci 22: 10883 – 10890.
Text complet abstracte / GRATUÏT
22. ↵
1. Nikulina EM,
2. Arrillaga-Romany I,
3. Miczek KA,
4. Hammer RP Jr.
(2008) Alteració de llarga durada en les estructures mesocorticolímbiques després de l'estrès de la derrota social repetida en les rates: temps transcorregut per l'ARNm del receptor opioide-mu i la immunoreactivitat FosB / DeltaFosB. Eur J Neurosci 27: 2272 – 2284.
CrossRefMedline
23. ↵
1. Perrotti LI,
2. Hadeishi Y,
3. Ulery PG,
4. Barrot M,
5. Monteggia L,
6. Duman RS,
7. Nestler EJ
(2004) Inducció de ΔFosB en estructures cerebrals relacionades amb la recompensa després de l'estrès crònic. J Neurosci 24: 10594 – 10602.
Text complet abstracte / GRATUÏT
24. ↵
1. Perrotti LI,
2. Weaver RR,
3. Robison B,
4. Renthal W,
5. Maze I,
6. Yazdani S,
7. Elmore RG,
8. Knapp DJ,
9. Selley DE,
10. Martin BR,
11. Sim-Selley L,
12. Bachtell RK,
13. Self DW,
14. Nestler EJ
(2008) Patrons distintius d'inducció de DeltaFosB en el cervell per drogues d'abús. Sinapsis 62: 358 – 369.
CrossRefMedline
25. ↵
1. Philippar U,
2. Schratt G,
3. Dieterich C,
4. Müller JM,
5. Galgóczy P,
6. Engel FB,
7. Keating MT,
8. Gertler F,
9. Schüle R,
10. Vingron M,
11. Nordheim A
(2004) El gen objectiu SRF Fhl2 antagonitza l'activació de SRF dependent de RhoA / MAL. Mol Cell 16: 867 – 880.
CrossRefMedline
26. ↵
1. Ramanan N,
2. Shen Y,
3. Sarsfield S,
4. Lemberger T,
5. Schütz G,
6. Linden DJ,
7. Ginty DD
(2005) SRF media l’expressió dels gens induïda per l’activitat i la plasticitat sinàptica, però no la viabilitat neuronal. Nat Neurosci 8: 759 – 767.
CrossRefMedline
27. ↵
1. Renthal W,
2. Carle TL,
3. Maze I,
4. Covington HE 3rd.,
5. Truong HT,
6. Alibhai I,
7. Kumar A,
8. Montgomery RL,
9. Olson EN,
10. Nestler EJ
(2008) Delta FosB medeix la desensibilització epigenètica del gen c-fos després de l'exposició crònica a l'anfetamina. J Neurosci 28: 7344 – 7349.
Text complet abstracte / GRATUÏT
28. ↵
1. Renthal W,
2. Kumar A,
3. Xiao G,
4. Wilkinson M,
5. Covington HE 3rd.,
6. Maze I,
7. Sikder D,
8. Robison AJ,
9. LaPlant Q,
10. Dietz DM,
11. Russo SJ,
12. Vialou V,
13. Chakravarty S,
14. Kodadek TJ,
15. Pila A,
16. Kabbaj M,
17. Nestler EJ
(2009) L'anàlisi generalitzada de la regulació de la cromatina per part de la cocaïna revela un paper important per a les sirtuines. Neuron 62: 335 – 348.
CrossRefMedline
29. ↵
1. Schlaepfer TE,
2. Cohen MX,
3. Frick C,
4. Kosel M,
5. Brodesser D,
6. Axmacher N,
7. Joe AY,
8. Kreft M,
9. Lenartz D,
10. Sturm V
(2008) L'estimulació cerebral profunda per recompensar els circuits alleuja l'anedònia en una depressió major refractària. Neuropsicofarmacologia 33: 368 – 377.
CrossRefMedline
30. ↵
1. Sesack SR,
2. Grace AA
(2010) Xarxa cortico-basal recompensa a la xarxa: microcircuitry. Neuropsicofarmacologia 35: 27 – 47.
CrossRefMedline
31. ↵
1. Tomita H,
2. Vawter MP,
3. Walsh DM,
4. Evans SJ,
5. Choudary PV,
6. Li J,
7. Overman KM,
8. Atz ME,
9. Myers RM,
10. Jones EG,
11. Watson SJ,
12. Akil H,
13. Bunney WE Jr.
(2004) Efecte dels factors agonals i postmortemos en el perfil d'expressió gènica: control de qualitat en anàlisis de microarrays o cervell humà postmortem. Biol Psychiatry 55: 346 – 352.
CrossRefMedline
32. ↵
1. Tsankova NM,
2. Berton O,
3. Renthal W,
4. Kumar A,
5. Neve RL,
6. Nestler EJ
(2006) Regulació de la cromatina de l'hipocamp sostinguda en un model de ratolí de depressió i acció antidepressiva. Nat Neurosci 9: 519 – 525.
CrossRefMedline
33. ↵
1. Vassoler FM,
2. Schmidt HD,
3. Gerard ME,
4. Famós KR,
5. Ciraulo DA,
6. Kornetsky C,
7. Knapp CM,
8. Pierce RC
(2008) L'estimulació cerebral profunda del nucli accumbens de la closca atenua la restabliment de la recerca de fàrmacs a les rates amb induir la cocaïna. J Neurosci 28: 8735 – 8739.
Text complet abstracte / GRATUÏT
34. ↵
1. Vialou V,
2. Robison AJ,
3. Laplant QC,
4. Covington HE 3rd.,
5. Dietz DM,
6. Ohnishi YN,
7. Mouzon E,
8. Rush AJ 3rd.,
9. Watts EL,
10. Wallace DL,
11. Iñiguez SD,
12. Ohnishi YH,
13. Steiner MA,
14. Warren BL,
15. Krishnan V,
16. Bolaños CA,
17. Neve RL,
18. Ghose S,
19. Berton O,
20. Tamminga CA,
21. Nestler EJ
(2010) ΔFosB en circuits de recompensa cerebral media la resiliència a les respostes de tensió i antidepressius. Nat Neurosci 13: 745 – 752.
CrossRefMedline
35. ↵
1. Wilkinson MB,
2. Xiao G,
3. Kumar A,
4. LaPlant Q,
5. Renthal W,
6. Sikder D,
7. Kodadek TJ,
8. Nestler EJ
(2009) El tractament i la resistència de l'imipramina presenten una regulació similar de la cromatina en una regió clau de recompensa del cervell. J Neurosci 29: 7820 – 7832.
Text complet abstracte / GRATUÏT
36. ↵
1. Xia Z,
2. Dudek H,
3. Miranti CK,
4. Greenberg ME
(1996) L'afluència de calci a través del receptor NMDA indueix la transcripció immediata immediata de gens mitjançant un mecanisme dependent de la quinasa MAP / ERK. J Neurosci 16: 5425 – 5436.
Text complet abstracte / GRATUÏT
;