DeltaFosB al nucli Accumbens és crític per reforçar els efectes de la recompensa sexual. (2010)

COMENTARIS: Delta FosB és un marcador per a totes les addiccions, tant conductuals com químiques. A mesura que aquesta molècula augmenta en el circuit de recompensa, també augmenten les conductes addictives. És una de les molècules implicades en els canvis neuroplàstics. Aquest experiment demostra que augmenta amb l'experiència sexual, de manera similar a com ho fa amb les addiccions a les drogues. En l'experiment, van utilitzar l'enginyeria genètica per augmentar els seus nivells més enllà del "normal". Això va resultar en una facilitació millorada de l'activitat sexual. Creiem que això passa amb l'addicció al porno.

ESTUDI COMPLET

Pitchers KK, Frohmader KS, Vialou V, Mouzon E, Nestler EJ, Lehman MN, Coolen LM.

Genes Brain Behav. 2010 Oct; 9 (7): 831-40 doi: 10.1111 / j.1601-183X.2010.00621.x. Epub 2010 ag 16.

Departament d'Anatomia i Biologia Cel·lular, Escola de Medicina i Odontologia de Schulich, Universitat de Western Ontario, Londres, Ontario, Canadà.

RESUM

La conducta sexual a les rates masculines és gratificant i reforçant. Tanmateix, se sap poc sobre els mecanismes cel·lulars i moleculars específics que intervinguin en la recompensa sexual o els efectes de reforç de la recompensa en l'expressió posterior del comportament sexual. Aquest estudi prova la hipòtesi que ΔFosB, la forma truncada expressada de manera estable de FosB, juga un paper crític en el reforç del comportament sexual i en la facilitació de la motivació i el rendiment sexuals.

Es va demostrar que l'experiència sexual causava una acumulació de BFosB en diverses regions del cervell límbic, incloent-hi el nucli accumbens (NAc), l'escorça prefrontal medial, l'àrea tegmental ventral i el putamen caudat, però no el nucli preoptic medial.

A continuació, es va mesurar la inducció de c-Fos, un objectiu de baixada (reprimida) de ΔFosB en animals amb experiència sexual i naïve. El nombre de cèl·lules c-Fos-immunoleactives induïdes per aparellament es va reduir significativament en animals amb experiència sexual, en comparació amb els controls sexualment naïfs.

Finalment, els nivells de ΔFosB i la seva activitat al NAc es van manipular utilitzant la transferència de gens mediada per virus per estudiar el seu paper potencial en la mediació de l’experiència sexual i la facilitació de l’experiència sexual provocada per l’experiència. Els animals amb sobreexpressió de FosB van mostrar una millora de la rendibilitat sexual amb experiència sexual relativa als controls. Per contra, l’expressió de ΔJunD, un soci dominant d’un vincle negatiu de FosB, va atenuar la facilitat d’execució de l’experiència sexual i va mantenir un manteniment retardat de la facilitació a llarg termini en comparació de la proteïna de fluorescència verda i els grups sobreexpressos de BFosB.

Junts, aquestes troballes donen suport a un paper crític de l’expressió de FosB al NAc per als efectes reforçants del comportament sexual i la facilitació de l’exercici sexual provocada per l’experiència sexual.

INTRODUCCIÓ

El comportament sexual és molt gratificant i reforçador per a rosegadors masculins (Coolen et al. 2004; Pfaus et al. 2001). A més, l’experiència sexual altera el comportament i la recompensa sexual posteriors (Tenk et al. 2009). Amb una experiència d’acoblament repetida, es facilita o es reforça el comportament sexual, evidenciat per la disminució de les latències per iniciar l’aparellament i la facilitació del rendiment sexual (Balfour et al. 2004; Pfaus et al. 2001). No obstant això, els mecanismes cel·lulars i moleculars subjacents de la recompensa i el reforç sexual no són ben entesos. S'ha demostrat que el comportament sexual i els senyals condicionats que prediuen l'aparellament indueixen de forma transitòria l'expressió del gen immediata-primerenc c-fos en el sistema mesolímbic de les rates masculines (Balfour et al. 2004; Pfaus et al. 2001). A més, recentment es va demostrar que l'experiència sexual indueix una neuroplasticitat de llarga durada en el sistema mesolímbic de rata masculina (Frohmader et al. 2009; Piches et al. 2010). A més, a les rates mascles s’ha demostrat que l’experiència sexual indueix FOSB, a Membre de la família Fos, al nucli accumbens (NAc) (Wallace et al. 2008). ΔFosB, una variant d'aplicació truncada de FosB, és un membre únic de la família Fos a causa de la seva major estabilitat (Carle et al. 2007; Ulery-Reynolds et al. 2008; Ulery et al. 2006) i juga un paper en la millora de la motivació i la recompensa per les drogues d'abús i la addició a la mediació de la plasticitat neural a llarg terminiNestler et al. 2001). ΔFosB forma un complex heteromèric de factor de transcripció (activador proteïna-1 (AP-1)) amb proteïnes Jun, preferiblement JunD (Chen et al. 1995; Hiroi et al. 1998). A través d’una sobreexpressió inducible de FosB, principalment restringida a l’estriat utilitzant ratolins bi-transgènics, es produeix un fenotip conductual semblant a un fàrmac malgrat l’absència d’exposició prèvia a medicaments. (McClung et al. 2004). Aquest fenotip comportamental inclou una resposta locomotora sensibilitzada a la cocaïna (Kelz et al. 1999), augment de la preferència per la cocaïna (Kelz et al. 1999) i la morfina (Zachariou et al. 2006), i augment de l’autogestió de la cocaïna (Colby et al. 2003).

Similar a la recompensa de fàrmacs, ΔFosB està regulat per comportaments naturals gratificants i media en l’expressió d’aquests comportaments. La sobreexpressió de FosB al NAc amb models de rosegadors augmenta el funcionament de la roda voluntària (Werme et al. 2002), resposta instrumental per al menjar (Olausson et al. 2006), ingesta de sacarosa (Wallace et al. 2008), i facilita el mascle (Wallace et al. 2008) i femella (Bradley et al. 2005) comportament sexual. Per tant, ΔFosB pot estar implicat en la mediació dels efectes d’experiències naturals gratificants. TL’estudi actual amplia estudis previs investigant específicament el paper de BFosB en el NAc en els resultats a llarg termini de l’experiència sexual en un comportament d’aparellament posterior i en l’activació neuronal del sistema mesolímbic.

  • En primer lloc, es va establir quines regions del cervell implicades en els circuits de recompensa i en el comportament sexual expressen BFosB de la experiència sexual.
  • A continuació, l’efecte de la BFosB induïda per l’experiència sexual a l’expressió induïda per l’aparellament de c-Fos, un objectiu de baixada reprimit per ΔFosB (Renthal et al. 2008), es va investigar.
  • Finalment, es va determinar l’efecte de la manipulació de l’activitat de FosB en el NAc (expressió excessiva del gen i expressió d’un soci dominant d’enllaç negatiu) sobre la conducta sexual i la facilitació de la motivació i el rendiment sexuals mitjançant la tecnologia de lliurament de vectors virals.

MÈTODES

Animals

Les rates adultes Sprague Dawley (grams 200 – 225) es van obtenir de Charles River Laboratories (Senneville, QC, Canadà). Els animals van ser allotjats en gàbies de plexiglàs amb un tub de túnel en parelles del mateix sexe durant les experiències. La sala de la colònia estava regulada per temperatura i es va mantenir en un cicle fosc de llum fosca 12 / 12 amb aliments i aigua disponibles ad libitum excepte durant les proves de comportament. Les femelles d’estimulació (210 – 220 grams) per a les sessions d’acoblament van rebre un implante subcutani que contenia 5% benzoat d’estradiol i 95% de colesterol després d’ovariectomia bilateral sota anestèsia profunda (0.35g ketamina / 0.052g Xylazine). La receptivitat sexual va ser induïda per l'administració de 500µg progesterona en l'oli 0.1 mL de sèsam aproximadament 4 hores abans de la prova. Tots els procediments van ser aprovats pels Comitès d'ús i cura dels animals de la Universitat d'Occident de l'Ontario i es van conformar a les directrius del CCAC sobre animals vertebrats en investigació.

Comportament sexual

Les sessions d'aparellament es van produir durant la primera fase fosca (entre 2 – 6 hores després de l'inici del període fosc) sota una il·luminació de color vermell fosc. Abans de començar l’experiment, els animals van ser dividits aleatòriament en grups. Durant les sessions d’aparellament es va permetre que les rates masculines copulessin a l’ejaculació o a l’hora de 1, i es van registrar paràmetres per al comportament sexual, incloent: latència de muntatge (ML; temps des de la introducció de la femella fins al primer muntatge), latència d’intromissions (IL; temps des de la introducció de la femella fins a la primera muntura amb penetració vaginal), latència de l'ejaculació (EL, temps des de la primera intromissió a l'ejaculació), interval de post ejaculació (PEI; temps de la ejaculació a la primera intromissió posterior), nombre de muntatges (M; empenta pèlvic sense vagina penetració), nombre d’intromissions (IM, muntatge incloent penetració vaginal) i eficiència de la copulació (CE = IM / (M + IM)) (Agmo 1997). No s’inclouen els números de muntatges i intromissions a l’anàlisi d’animals que no presentaven ejaculació. Les latències de muntatge i d'intromissió són paràmetres indicatius de la motivació sexual, mentre que la latència de l'ejaculació, el nombre de muntatges i l'eficàcia de la còpula reflecteixen el rendiment sexual (Hull 2002).

Experiment 1: expressió de ΔFosB

Es va permetre a les rates masculines sexualment naïves aparellar-se en gàbies de prova neta (60 × 45 × 50 cm) per a sessions d’aparellament consecutives, diaris 5 o es va quedar sexualment ingenu. Taula suplementària 1 descriu el paradigma del comportament dels grups experimentals: no sexe sense (NNS; n = 5), sexe ingenu (NS; n = 5), sense sexe (ENS; n = 5) i sexe experimentat (ES; n = 4). Els animals NS i ES van ser sacrificats 1 hores després de l'ejaculació en l'últim dia de l'aparellament per investigar l'expressió c-Fos induïda per l'aparellament. Els animals NNS van ser sacrificats simultàniament amb animals ENS 24 hores després de la sessió d'aparellament final per examinar BFosB de la experiència sexual. Els grups sexualment experimentats es van combinar amb el comportament sexual abans de realitzar proves posteriors. No s’ha detectat cap diferència significativa entre els grups per a mesures de comportament dins de la sessió d’aparellament adequada i els dos grups experimentats van mostrar la facilitació de comportament sexual induïda per l’experiència sexual.Taula suplementària 2). Els controls van incloure mascles sexualment naïfs tractats simultàniament amb animals d’aparellament que asseguraven l’exposició a olors i vocalitzacions femenines sense contacte directe amb les dones.

Per al sacrifici, els animals van ser profundament anestèsia utilitzant pentobarbital sòdic (270mg / kg; ip) i perfusats intracardialment amb 50 mL de solució salina 0.9%, seguit de 500 mL de paraformaldehid 4% en tampó fosfat 0.1 M (PB). Els cervells es van retirar i es van fixar posteriorment per a 1 h a temperatura ambient en el mateix fixador, i després es van submergir en 20% de sacarosa i 0.01% de sòdica a Xide X PBX i es van emmagatzemar a 0.1 ° C. Les seccions coronals (4 µm) es van tallar amb un micròtom de congelació (H35R, Micron, Alemanya), recollits en quatre sèries paral·leles en solució crioprotectora (400% de sacarosa i 30% etilenglicol a 30 M PB) i emmagatzemades a −0.1 ° C. Les seccions flotants lliures es van rentar àmpliament amb solució salina tamponada amb fosfat 20 M (PBS; pH 0.1 – 7.3) entre incubacions. Les seccions es van exposar a 7.4% H2O2 per a 10 min a temperatura ambient per destruir peroxidases endògenes, llavors bloquejat en solució d'incubació de PBS +, que és PBS que conté albumina de sèrum boví 0.1% (article del catàleg 005-000-121; Laboratoris de ImmunoResearch de Jackson, West Grove, PA) i 0.4% Triton X -100 (article del catàleg BP151-500; Sigma-Aldrich) per a 1 h. Les seccions es van incubar durant la nit a 4 ° C en un anticòs policlonal de conill pan-FosB (1: 5K; sc-48 Biotechnology Santa Cruz, Santa Cruz, CA, EUA). L’anticòs pan-FosB es va plantejar contra una regió interna compartida per FosB i ΔFosB. Les cèl·lules BFosB-IR eren específicament ΔFosB-positives, ja que en el temps post-estímul (hores 24) es va degradar tot el FosB induït per l'estímul detectable (Perrotti et al. 2004; Perrotti et al. 2008). A més, en aquest experiment, els animals que es van aparellant el dia final (NS, ES) es van sacrificar 1 h després de l'aparellament, per tant, abans de l'expressió de FosB. L’anàlisi de Western blot va confirmar la detecció de ΔFosB aproximadament 37 kD. Després de la incubació d'anticossos primaris, es van incubar seccions per a 1 h en IgG anti-conill de cabra conjugada amb biotina (1: 500 en PBS +; Laboratoris vectorials, Burlingame, CA, EUA) i després 1 h en peroxidasa avidina-biotina-hoseradish (elit ABC) ; 1: 1K a PBS; Vector Laboratories, Burlingame, CA, EUA). Després d’aquestes seccions d’incubació s’ha processat d’una de les maneres següents:

1. Etiquetatge peroxidasa única

Les seccions d’animals NNS i ENS es van utilitzar per a una anàlisi cerebral d’una acumulació BFosB induïda per l’experiència sexual. Després de la incubació ABC, es va visualitzar el complex peroxidasa després del tractament de minuts 10 a una solució de cromogen que contenia 0.02% 3,3'-diaminobenzidina tetrahidrocloruro (DAB; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) millorada amb sulfat de níquel 0.02% en 0.1 M PB amb peròxid d'hidrogen (0.015%). Les seccions es van rentar a fons en 0.1 M PB per acabar la reacció i es van muntar en diapositives superfrostes més de vidre codificades (Fisher, Pittsburgh, PA, EUA) amb gelatina 0.3% a ddH20. Després de la deshidratació, totes les diapositives estaven tapades amb DPX (xilil ftalat de dibutil).

2. Immunofluorescència dual

Per analitzar ΔFosB i c-Fos es van utilitzar seccions dels quatre grups experimentals que contenien NAc i mPFC. Després de la incubació ABC, es van incubar seccions per a 10 min amb tiramida biotinilada (BT; 1: 250 en PBS + 0.003% H2O2 Kit d'amplificació de senyals Tyramid, NEN Life Sciences, Boston, MA) i per a 30 min amb estrepavidina conjugada Alexa 488 (1: 100; Laboratoris Immunoresearch de Jackson, West Grove, PA). Després es van incubar seccions durant la nit amb un anticòs policlonal de conill que reconeix específicament c-Fos (1: 150; sc-52; Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA), seguit per una incubació de 30 amb anticossos conjugats conjuntament amb Cy3 de cabra. (1: 200; Jackson Immunoresearch Laboratories, West Grove, PA, EUA). Després de la tinció, les seccions es van rentar a fons a 0.1 M PB, muntades en diapositives de vidre codificades amb gelatina 0.3% a ddH20 i coberta lliscada amb un mitjà de muntatge aquós (Gelvatol) que conté l'agent antienvelliment 1,4-diazabiciclo (2,2) octanat (DABCO; 50 mg / ml, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO). Els controls immunohistoquímics incloïen l’omissió d’un o dos anticossos primaris, resultant en l’absència d’etiquetatge en la longitud d’ona adequada.

Anàlisi de Dades

Anàlisi del cervell de ΔFosB

Dos experimentadors cecs al tractament van realitzar l'escaneig del cervell en diapositives codificades. Les cèl·lules )FosB-immunoreactivas (-IR) a tot el cervell van ser analitzades semi-quantitativament utilitzant una escala per representar el nombre de cèl·lules ΔFosB-positives tal com es descriu a Taula 1. A més, sobre la base de resultats semicuantitatius, es va comptar el nombre de cèl·lules ΔFosB-IR utilitzant àrees d’anàlisi estàndard en àrees cerebrals implicades en la recompensa i el comportament sexual mitjançant una càmera de dibuix lúcida connectada a un microscopi Leica DMRD (Leica Microsystems GmbH, Wetzlar , Alemanya): NAc (nucli (C) i shell (S); 400 × 600µm) analitzats a tres nivells rostrals-caudals (Balfour et al. 2004); àrea tegmental ventral (VTA; 1000 × 800µm) analitzada a tres nivells rostrals-caudals (Balfour et al. 2004) i cua VTA (Perrotti et al. 2005); escorça prefrontal (àrea de cinglulació anterior (ACA); escorça prelímbica (PL); escorça infralímbica (IL); 600 × 800µm cadascun); putamen caudat (CP; 800 × 800µm); i nucli preoptic medial (MPN; 400 × 600 µm) (Xifres complementàries 1 – 3). Es van comptar dues seccions per subregió i es va fer una mitjana per animal per al càlcul de la mitjana del grup. Les mitjanes de grup sexualment experimentades i experimentades de cèl·lules BFosB-IR es van comparar per a cada subregió utilitzant proves de t no aparellades.

Taula 1     

Resum de l'expressió FosB en animals sexualment ingenus i experimentats
Anàlisi de ΔFosB i c-Fos

Les imatges es van capturar utilitzant una càmera CCD refredada (Microfire, Optronics) connectada a un microscopi Leica (DM5000B, Leica Microsystems; Wetzlar, Alemanya) i el programari Neurolucida (MicroBrightfield Inc) amb configuració fixa de la càmera per a tots els subjectes (amb objectius 10x). Nombre de cèl·lules que expressen c-Fos-IR o ΔFosB-IR a les àrees estàndard d'anàlisi en nucli de NAc i shell (400 × 600µm cadascun; Figura complementària 1) i ACA del mPFC (600 × 800µm; Figura complementària 3) es van comptar manualment per un observador encegat als grups experimentals, en seccions 2 per animal utilitzant el programari Neurolucida (MBF Bioscience, Williston, VT) i una mitjana per animal. Es van comparar les mitjanes de grup de cèl·lules c-Fos o ΔFosB utilitzant ANOVA de dos sentits (Factors: experiència sexual i activitat sexual) i Fisher LSD per a comparacions post hoc a un nivell de significació de 0.05.

Experiment 2: manipulació de l'expressió BFosB

Transferència de gens mediada per vector viral

Les rates sexuals Sprague Dawley de sexe naïf es van dividir aleatòriament en grups abans de la cirurgia estereotàxica. Tots els animals van rebre microinjeccions bilaterals de vectors virals (rAAV) recombinants associats a la codificació de GFP (control; n = 12), ΔFosB de tipus salvatge (n = 11) o un soci vinculant dominant negatiu de ΔFosB denominat ΔJunD (n = 9) al NAc. DJunD disminueix la transcripció mediada per ΔFosB per heterodimerització competitiva amb ΔFosB abans de lligar la regió AP-1 en promotors de gens (Winstanley et al. 2007). El valor de virus es va determinar mitjançant qPCR i es va avaluar in vivo abans de l’inici de l’estudi. El títol era 1 – 2 × 1011 partícules infeccioses per ml. Els vectors de rAAV van ser injectats en un volum de 1.5 µL / costat durant minuts 7 (coordenades: AP + 1.5, ML +/− 1.2 de Bregma; DV −7.6 de la superfície del crani segons Paxinos i Watson, 1998) utilitzant una xeringa Hamilton (5µL ; Aparell de Harvard, Holliston, MA, EUA). Els vectors no produeixen toxicitat més gran que les infusions de control sol (Winstanley et al, 2007; per obtenir informació detallada sobre la preparació d’AAV, vegeu Hommel et al., 2003). Els experiments de comportament van iniciar 3 setmanes després d'injeccions vectorials que permetien una infecció viral estable i òptima (Wallace et al. 2008). L’expressió transgènica en espècies murines s’alça als dies 10 i es manté elevada durant almenys mesos 6 (Winstanley et al. 2007). Al final de l’experiment, els animals es van perfondar de manera transcardial i les seccions de NAc van ser immuno-processades per GFP (anticossos anti-GFP 1: 20K; sondes moleculars) utilitzant una reacció ABC-peroxidasa-DAB (tal com es va descriure anteriorment) per histologia verifiqueu els llocs d'injecció que utilitzen GFP com a marcador (Figura complementària 4). Els vectors ΔFosB i ΔJunD també contenen un segment que expressa GFP separat per un lloc d’entrada d’un ribosoma intern, permetent la verificació del lloc d’injecció mitjançant la visualització de GFP en tots els animals. Només els animals amb llocs d'injecció i la propagació del virus restringit al NAc es van incloure en anàlisis estadístiques. L'ampliació del virus generalment es va limitar a una porció del NAc i no es va estendre rostral-caudalment a tot el nucli. A més, la propagació del virus va aparèixer en gran part restringida a petxina o nucli. No obstant això, la variació dels llocs d’injecció i la propagació al NAc no van influir en els efectes sobre el comportament. Finalment, les injeccions de GFP no van afectar el comportament sexual ni la facilitació de comportament sexual induïda per l’experiència en comparació amb els animals sense cirurgia d’estudis anteriors (Balfour et al. 2004).

Comportament sexual

Tres setmanes després del lliurament del vector viral, els animals es van unir a una ejaculació (o per a 1 hora) per a sessions d’aparellament diàries consecutives de 4 per obtenir experiència sexual (sessions d’experiència) i posteriorment es van provar per expressar a llarg termini l’experiència facilitadora de la conducta sexual 1 i setmanes de 2 (sessions de proves 1 i 2) després de la sessió d’experiència final. Els paràmetres de comportament sexual es van registrar durant totes les sessions d'aparellament tal com es va descriure anteriorment. Les diferències estadístiques per a tots els paràmetres durant cada sessió d’acoblament es van comparar dins i entre grups mitjançant ANOVAs de mesures repetides de dos sentits (Factors: tractament i sessió d’acoblament) o ANOVA unidireccionals (latència de l’ejaculació, nombre de muntatges i intromissions; Factor: tractament o aparellament; sessió) seguit per les proves LSD o Newman-Keuls de Fisher per a comparacions post hoc a un nivell de significació de 0.05. Concretament, es van comparar els efectes facilitadors de l’experiència sexual sobre paràmetres d’acoblament entre les sessions d’experiència 1 (naïf) i les sessions d’experiència 2, 3 o 4 cadascuna, així com entre grups experimentals dins de cada sessió d’experiència. A més, per analitzar els efectes del tractament (vector) en la facilitació a llarg termini del comportament sexual, es van comparar paràmetres d'aparellament entre la sessió d'experiència 4 i la sessió de prova 1 i 2 dins de cada grup de tractament i es van comparar entre grups experimentals dins de cada sessió de prova.

RESULTATS

L’experiència sexual provoca l’acumulació de la FOSB

Inicialment, es va dur a terme una investigació semi-quantitativa sobre l’acumulació de FosB a tot el cervell en homes amb experiència sexual, en comparació amb els controls sexualment naïfs. Es proporciona un resum de les conclusions generals a Taula 1. L’anàlisi de osFosB-IR es va ampliar mitjançant la determinació del nombre de cèl·lules ΔFosB-IR a diverses regions del cervell associades amb límbic utilitzant àrees estàndard d’anàlisi. figura 1 mostra imatges representatives de DAB-Ni tinc el NAc d’animals sexualment ingenus i experimentats. Es va trobar una elevada regulació de FosB significativa a les subregions de mPFC (Figura 2A), Nucli NAC i shell (2B), putamen caudat (2B) i VTA (2C). A NAc, hi havia diferències significatives a tots els nivells rostralsudals en el nucli de NAc i en la closca i les dades mostrades a figura 2 és la mitjana en tots els nivells rostro-caudals. En canvi, no hi va haver un augment significatiu de inFosB-IR en el nucli preòptic medial hipotalàmic (NNS: Avançat 1.8 +/− 0.26; ENS: Avg 6.0 +/− 1.86).

figura 1    

 

Imatges representatives que mostren cèl·lules BFosB-IR (negre) en el NAc de persones que no tenen sexe (A) i no experimenten grups de sexe (B). aco: la comissura anterior La barra de l'escala indica 100 µm.
figura 2      

Nombre de cèl·lules ΔFosB-IR a: subregions A. infralimbic (IL), prelimbic (PL) i còrtex cingulat anterior (ACA) de l'escorça prefrontal medial; B. Nucleus accumbens core and shell i caudate putamen (CP); C. Rostral, mitjà, caudal i cua ...

L’experiència sexual atenu els c-Fos induïts per l'aparellament

L’efecte de l’experiència sexual en els nivells de BFosB al NAc es va confirmar mitjançant tècniques de tinció de fluorescència. A més, es van analitzar els efectes de l’experiència sexual sobre l’expressió de c-Fos. figura 3 mostra imatges representatives de inFosB- (verd) i c-Fos (cèl·lules vermelles) -IR en tots els grups experimentals (A, NNS; B, NS; C, ENS; D, ES). L'experiència sexual va augmentar significativament l'expressió de BFosB en el nucli de NAc (Figura 4A: F1,15 = 12.0; p = 0.003) i el shell (Figura 4C: F1,15 = 9.3; p = 0.008). Per contra, l’aparellament de l’hora 1 abans de la perfusió no va afectar l’expressió de FosB (Figura 4A, C) i no es va detectar cap interacció entre l’experiència sexual i l’aparellament immediatament abans de la perfusió. Hi va haver un efecte general de l’aparellament abans de la perfusió en l’expressió c-Fos tant en el nucli de NAc (Figura 4B: F1,15 = 27.4; p <0.001) i shell (Figura 4D: F1,15 = 39.4; p <0.001). A més, es va detectar un efecte global de l’experiència sexual al nucli de NAc (Figura 4B: F1,15 = 6.1; p = 0.026) i el shell (Figura 4D: F1,15 = 1.7; p = 0.211) i es va detectar una interacció entre l'experiència sexual i l'aparellament abans de la perfusió al nucli de NAc (F.)1,15 = 6.5; p = 0.022), amb una tendència a la closca (F.)1,15 = 1.7; p = 0.211; F1,15 = 3.4; p = 0.084). Les anàlisis post hoc demostren l’expressió c-Fos induïda per l'aparellament en el nucli i la closca de mascles sexualment naïfs (Figura 4B, D). No obstant això, en els homes amb experiència sexual, el c-Fos no va augmentar significativament en el nucli de NAc (Figura 4B) i significativament atenuada a la closca (Figura 4D). Per tant, l’experiència sexual va provocar una reducció de l’expressió c-Fos induïda per l'aparellament. Els valors-P per a comparacions específiques entre parells es troben a la figura de les llegendes.

figura 3      

Imatges representatives que mostren ΔFosB (verd) i c-Fos (vermell) a NAc per a cada grup experimental. La barra d’escala indica 100 µm.
figura 4      

ΔFosB i c-Fos induïts per l’aparellament per experiència sexual. Nombre de cèl·lules ΔFosB (cèl·lules, nuclis A, Shell, C; ACA, E) o c-Fos (Core, B; Shell, D; ACA, F) per a cada grup: NNS (n = 5), NS (n = 5), ENS (n = 5) o ES (n = 4). S'expressen dades ...

L’efecte de l’experiència sexual sobre els nivells de c-Fos induïts per aparellament no es va limitar al NAc. Es va observar una atenuació similar de l’expressió c-Fos a l’ACA en animals amb experiència sexual, en comparació amb els controls sexualment naïfs. L'experiència sexual va tenir un efecte significatiu sobre l'expressió de BFosB a l'ACA (Figura 4E: F1,15 = 154.2; p <0.001). L’aparellament abans de la perfusió no va tenir cap efecte sobre l’expressió de osFosB (Figura 4C), però augmenten significativament c-Fos (Figura 4F: F1,15 = 203.4; p <0.001) a l’ACA. A més, l'expressió de c-Fos induïda per l'aparellament a l'ACA va disminuir significativament per l'experiència sexual (Figura 4F: F1,15 = 15.8; p = 0.001). Es va detectar una interacció bidireccional entre l'experiència sexual i l'aparellament abans de la perfusió per a l'expressió c-Fos (Figura 4F: F1,15 = 15.1; p <0.001). Els valors P per a comparacions específiques per parelles es troben a les llegendes de la figura. Finalment, no hi va haver una reducció significativa en l’expressió de c-Fos induïda per l’aparellament al nucli preòptic medial (NS: Avg 63.5 +/− 4.0; ES: Avg 41.4 +/− 10.09), un àmbit on l’experiència de l’aparellament no va causar augment de l’expressió de osFosB, que indica que l’expressió de c-Fos induïda per l’aparellament no es va veure afectada en totes les àrees cerebrals.

ΔFosB al NAc media en el reforç del comportament sexual

Per explorar un mecanisme molecular potencial per reforçar el comportament sexual, com es va demostrar a través de la facilitació del comportament sexual induït per l'experiència, es van determinar els efectes de la manipulació local dels nivells de BFosB i la seva activitat transcripcional. L’experiència sexual durant les quatre sessions d’experiència consecutives va tenir un efecte significatiu en la latència de muntatge (Figura 5A: F1,23 = 13.8; p = 0.001), latència de la intromissió (Figura 5B: F1,23 = 18.1; p <0.001) i latència de l’ejaculació (Figura 5C: GFP, F11,45 = 3.8; p = 0.006). Els animals de control de GFP mostren la facilitació esperada de la conducta sexual provocada per l'experiència i mostren latències significativament més baixes a la primera instal·lació, primera intromissió i ejaculació durant la sessió d'experiència 4 en comparació amb l'experiència de la sessió 1 (Figura 5A – C; vegeu la llegenda de la figura per als valors p). Aquesta facilitat de comportament sexual induïda per l’experiència també es va observar al grup FosB per a latències de muntatge i de intromissió, però no es va detectar una diferència significativa en la latència de l’ejaculació (Figura 5A – C). Per contra, els displayedJunD animals mostren una facilitat de retard; tot i que les latències per a muntatges, intromissions i ejaculacions van disminuir amb sessions d’acoblament repetides, cap d’aquests paràmetres va aconseguir significació estadística si es comparen entre les sessions d’experiència 1 i 4 (Figura 5A – C). Entre les comparacions entre grups per a cada sessió d’experiència, es mostra que DJunD va tenir latències significativament més llargues per muntar, integrar i ejacular durant sessions d’experiència en comparació amb ΔFosB i GFP (Figura 5A – C). A més, tant l’experiència sexual com el tractament van tenir efectes significatius sobre l’eficàcia de la copulació (Figura 5F: experiència sexual, F1,12 = 22.5; p <0.001; tractament, F1,12 = 3.3; p = 0.049). Els homes de malFosB van augmentar l'eficiència de la còpula durant la sessió d'experiència 4 en comparació amb l'experiència de la sessió 1 (Figura 5F). A més, els animals de FosB van tenir significativament menys muntatges abans de l’ejaculació durant el dia de sessió d’experiència 4, comparat amb l’experiència de la sessió 1 (Figura 5D: F10,43 = 4.1; p = 0.004), i que els unJunD tenien muntatges significativament més elevats abans de l'ejaculació, de manera que va disminuir significativament l'eficàcia de la copulació, que cap dels altres dos grups (Figura 5D i F). Per tant, els animals GFP i ΔFosB van mostrar la facilitació de la iniciació del comportament sexual i el rendiment sexual induïts per l'experiència, mentre que did els animalsDJD no ho van fer.

figura 5      

Comportaments sexuals dels animals GFP (n = 12), ΔFosB (n = 11) i ΔJunD (n = 9): latència de muntatge (A), latència de la intromissió (B), latència de l'ejaculació (C), nombre de muntatges (D), nombre d’intromissions (E) i eficiència de copulació (F). S'expressen dades ...

Per provar la hipòtesi que l'expressió FosB és fonamental per a l'expressió a llarg termini de la facilitació de la conducta sexual induïda per l'experiència, es van provar els animals de la setmana 1 (sessió de prova 1) i setmanes de 2 (sessió de prova 2) després de la sessió final d'experiència. De fet, el comportament sexual facilitat es va mantenir tant en els grups GFP com en ΔFosB, ja que cap dels paràmetres de comportament diferien entre les sessions d’examen 1 o 2 i la sessió d’experiència final 4, dins dels grups GFP i ΔFosB (Figura 5A – C; a excepció de la latència de l'ejaculació i de l'eficàcia de la copulació en la sessió de proves 1 per a ΔFosB animals). Es van detectar diferències significatives entre els grups unJunD i GFP o ΔFosB en ambdues sessions de prova per a tots els paràmetres de comportament sexual (Figura 5A – F). No s’han detectat diferències entre o dins dels grups en comparar el nombre d’intromissions, PEI o percentatges d’animals que van ejacular (100% dels homes en tots els grups ejaculat durant les últimes quatre sessions d’aparellament).

DISCUSSIÓ

L’estudi actual va demostrar que l’experiència sexual provoca una acumulació de ΔFosB en diverses regions del cervell associades al límbic, incloent el nucli de NAc i la closca, mPFC, VTA i putamen caudat. A més, l’experiència sexual va atenuar l’expressió induïda per l’aparellament de c-Fos al NAc i ACA. Finalment, es va demostrar que ΔFosB al NAc era crític en la mediació de la facilitació de l'aparellament durant l’adquisició d’experiència sexual i l’expressió a llarg termini de la facilitació induïda per l’experiència del comportament sexual.. En concret, reduir la transcripció mediada per -FosB va atenuar la facilitació induïda per l’experiència de la motivació i el rendiment sexual, mentre que la sobreexpressió de BFosB a el NAc va provocar una major facilitació del comportament sexual, en termes d’augment del rendiment sexual amb menys experiència. Junts, els resultats actuals donen suport a la hipòtesi que ΔFosB és un mediador molecular crític per a la plasticitat neuronal i conductual a llarg termini induïda per l’experiència sexual.

Els resultats actuals amplien estudis anteriors que mostren BFosB de la experiència sexual sexual en la NAc de les rates mascles (Wallace et al. 2008) i hàmsters femenins (Cobertures et al. 2009). Wallace et al. (2008) va mostrar que rAAV-La sobreexpressió de BFosB en el NAc va millorar el comportament sexual en animals sexualment naïfs durant la primera sessió d'aparellament, com es demostra per menys intromissions a l’ejaculació i per intervals post-ejaculadors més curts, però no va tenir cap efecte en homes amb experiència sexual (Wallace et al. 2008).

En contrast, l’estudi actual no va demostrar efectes de la sobreexpressió de FosB en mascles sexualment naïfs durant la primera prova, sinó durant i després de l’adquisició d’experiència sexual. Els orsFosB sobreexpressors van demostrar un augment del rendiment sexual (augment de l'eficiència de la copulació) en comparació amb els animals GFP.

A més, l'estudi actual va provar el paper de ΔFosB bloquejant la transcripció mediada per ΔFosB utilitzant un vector viral que expressava "júnior". La prevenció de l'augment de l'expressió ΔFosB induïda per l'experiència inhibeix la facilitació de la motivació sexual induïda per l'experiència (augment de les latències de muntatge i d'introducció), així com el rendiment sexual (augment de la latència de l'ejaculació i el nombre de muntatges) i la posterior expressió a llarg termini del comportament sexual facilitat.

Per tant, aquestes dades són les primeres a indicar un paper obligatori per a ΔFosB en l’adquisició d’una facilitat de comportament sexual induïda per l’experiència. A més, aquestes dades mostren que ΔFosB també està involucrat de manera crítica en l'expressió a llarg termini del comportament facilitat que indueix l'experiència. Proposem que aquesta expressió a llarg termini del comportament facilitat representa una forma de memòria per a la recompensa natural, per la qual cosa ΔFosB a NAc és un mediador de la memòria de recompensa. L'experiència sexual també va augmentar els nivells de BFosB a VTA i mPFC, àrees implicades en la recompensa i la memòria (Balfour et al. 2004; Phillips et al. 2008). Els estudis futurs s’exigeixen per esbrinar la importància potencial d’una regulació de BFosB en aquestes àrees per a la memòria de recompensa.

L’expressió osFosB és altament estable, de manera que té un gran potencial com a mediador molecular d’adaptacions persistents del cervell després de les pertorbacions cròniques (Nestler et al. 2001). S'ha demostrat que BFosB augmenta gradualment el NAc a través de múltiples injeccions de cocaïna i persisteix fins a diverses setmanes (Esperança et al. 1992; Esperança et al. 1994). Aquests canvis en l’expressió NAc osFosB estan associats amb la sensibilització i l’addicció a la recompensa de medicaments (Chao i Nestler 2004; McClung & Nestler 2003; McClung et al. 2004; Nestler 2004, 2005, 2008; Nestler et al. 2001; Zachariou et al. 2006). En canvi, el paper de BFosB en la recompensa natural mediadora ha estat subestimat. Hi ha hagut evidències recents que suggereixen que la inducció de BFosB al NAc està implicada en la recompensa natural. Els nivells de FosB s'incrementen de la mateixa manera en el NAc després de la ingesta de sacarosa i de la roda. La sobreexpressió de ΔFosB a l’estític mitjançant ratolins bitransgènics o vectors virals a les rates provoca un augment de la ingesta de sacarosa, motivació millorada per al menjar i augment de la roda espontània (Olausson et al. 2006; Wallace et al. 2008; Werme et al. 2002). Les dades actuals se sumen substancialment a aquests informes i donen suport a la idea que BFosB és un mediador crític per al reforç de recompensa i la memòria de recompensa natural.

ΔFosB pot mediar el reforçament del comportament sexual induït per l'experiència mitjançant la inducció de la plasticitat en el sistema mesolímbic. De fet, l’experiència sexual provoca una sèrie de canvis duradors en el sistema mesolímbic (Bradley i Meisel 2001; Frohmader et al. 2009; Piches et al. 2010). LaEn el nivell de comportament s’ha demostrat una resposta locomotora sensibilitzada a l’amfetamina i una millor recompensa d’anfetamina en rates mascles amb experiència sexual (Piches et al. 2010); també s'ha observat una resposta locomotora alterada a l’amfetamina amb hàmsters femenins (Bradley i Meisel 2001). A més, s'han observat increments en el nombre d’espines dendrítiques i la complexitat d’arbres dendrítiques després d’un període d’abstinència de l’experiència sexual de rates mascles (Piches et al. 2010). L’estudi actual suggereix que BFosB pot ser un mediador molecular específic dels resultats a llarg termini de l’experiència sexual. D'acord, s'ha demostrat recentment que ΔFosB és important per induir canvis dendrítics de la columna vertebral en resposta a l'administració crònica de cocaïna (Dietz et al. 2009; Laberint et al. 2010).

No està clar quins són els neurotransmissors ascendents responsables d’induir BFosB al NAc, però la DA ha estat proposada com a candidata (Nye et al. 1995). Pràcticament tots els fàrmacs d’abús, incloses la cocaïna, l’anfetamina, els opiacis, els cannabinoides i l’etanol, així com les recompenses naturals, augmenten ΔFosB al NAc (Perrotti et al. 2005; Wallace et al. 2008; Werme et al. 2002). Tant les drogues d'abús com les recompenses naturals augmenten la concentració sinàptica de DA al NAc (Damsma et al. 1992; Hernàndez i Hoebel 1988a, b; Jenkins i Becker 2003). S'ha demostrat que la inducció de ofFosB per fàrmacs d’abús s’ha trobat a les cèl·lules que contenen el receptor DA i la ΔFosB induïda per la cocaïna està bloquejada per un antagonista del receptor D1 DA.t (Nye et al. 1995). Per tant, es fa una hipòtesi sobre la publicació de DA per estimular l’expressió de FosB i, per tant, mediar la neuroplasticitat relacionada amb la recompensa. Donant més suport a la idea que els nivells de BFosB són dependents de DA és la conclusió que les àrees del cervell en què els nivells d’experiència sexual alterats BFosB reben una forta aportació dopaminèrgica de la VTA, inclosa l’escorta prefrontal medial i l’amígdala basolateral.

No obstant això, en canvi, ΔFosB no augmenta a la zona preoptica medial, tot i que aquesta àrea rep entrada dopaminèrgica, encara que sigui a partir de fonts hipotàlames (Miller i Lonstein 2009). Els estudis futurs són necessaris per comprovar si l’expressió BFosB induïda per l’aparellament i els efectes de l’experiència sexual sobre la motivació i el rendiment sexual depenen de l’acció de DA. El paper de la DA en la recompensa sexual a les rates masculines actualment no està del tot clar (Agmo i Berenfeld, 1990; Pfaus 2009). Hi ha prou evidència que la DA és alliberada al NAc durant l’exposició a una femella o aparellament (Damsma et al. 1992) i les neurones DA s'activen durant el comportament sexual (Balfour et al. 2004). No obstant això, les injeccions sistèmiques d’antagonista del receptor DA no impedeixen la preferència de lloc condicionada per la recompensa sexual (Agmo i Berenfeld, 1990) i la hipòtesi que la DA és fonamental per al reforçament de l’aparellament induïda per l’experiència no està provada.

Tampoc està clar quant a quins són els mediadors descendents dels efectes de BFosB sobre el comportament sexual. S'ha demostrat que BFosB actua com a activador transcripcional i repressor a través d’un mecanisme dependent de AP-1 (McClung & Nestler 2003; Peakman et al. 2003). S'han identificat nombrosos gens d’orientació, incloent el gen immediat primerenc c-fos (Esperança et al. 1992; Esperança et al. 1994; Morgan i Curran, 1989; Renthal et al. 2008; Zhang et al. 2006), cdk5 (Bibb et al. 2001), dynorphin (Zachariou et al. 2006), sirtuin-1 (Renthal et al. 2009), Subunitats NFκB (Ang et al. 2001), Ii la subunitat GluR2 del receptor de glutamat AMPA (Kelz et al. 1999). Els resultats actuals demostren que els nivells de c-Fos induïts per l'aparellament es van reduir per l'experiència sexual en àrees cerebrals amb un augment de ΔFosB (NAc i ACA). La supressió de c-Fos apareix depenent del període transcorregut des de l’últim aparellament i de les sessions d’acoblament repetides, com en estudis anteriors, no es va detectar aquesta disminució de c-Fos en rates mascles testades 1 setmanes després de la sessió d’acoblament final (Balfour et al. 2004) o després d’experiència sexual que consisteix en només una sessió d’acoblament (Lopez i Ettenberg 2002). A més, la conclusió actual és coherent amb les proves que ΔFosB reprimeix el gen c-fos després de l'exposició crònica a les amfetamines (Renthal et al. 2008). En línia amb aquestes troballes, es va reduir la inducció de diversos ARNm genètic immediatament primerenc (c-fos, fosB, c-jun, junB i zif268) després de les injeccions repetides de cocaïna en comparació amb les injeccions agudes de medicaments (Esperança et al. 1992; Esperança et al. 1994), i el c-fos induït per l'anfetamina es va suprimir després de la retirada de l’amfetamina crònica (Jaber et al. 1995; Renthal et al. 2008). La rellevància funcional de la baixa regulació de l’expressió c-Fos després del tractament farmacèutic crònic o de l’experiència sexual no és clara i s’ha suggerit que és un mecanisme homeostàtic important per regular la sensibilitat d’un animal a l’exposició a la recompensa repetida (Renthal et al. 2008).

En conclusió, l’estudi actual demostra que ΔFosB al NAc juga un paper integral en la memòria de la recompensa sexual, donant suport a la possibilitat que ΔFosB sigui important per al reforç i la memòria de recompensa general. Els resultats de l’estudi actual clarifiquen encara més la nostra comprensió dels mecanismes cel·lulars i moleculars que intervenen en la recompensa i la motivació sexual, i afegeixen a un conjunt de literatura que mostra que BFosB és un jugador important en el desenvolupament de l’addicció. reforç.

Material complementari

Suposem Fig S1-S4 i Taula S1-S2

Agraïments

Aquesta investigació va comptar amb el suport de subvencions dels Instituts de Recerca en Salut del Canadà a LMC, Institut Nacional de Salut Mental a EJN, i Consell de Recerca de Ciències Naturals i Enginyeria de Canadà a KKP i LMC.

REFERÈNCIES

  1. Agmo A. Comportament sexual masculí de rata. Brain Res Brain Res Protoc. 1997; 1: 203 – 209. [PubMed]
  2. Agmo A, Berenfeld R. Propietats de reforç de l'ejaculació en la rata masculina: paper dels opiacis i dopamina. Behav Neurosci. 1990; 104: 177 – 182. [PubMed]
  3. Ang E, Chen J, P Zagouras, Magna H, Holanda J, E Schaeffer, EJ de Nestler. Inducció del factor nuclear-kappaB al nucli accumbens per administració crònica de cocaïna. J Neurochem. 2001; 79: 221 – 224. [PubMed]
  4. Balfour ME, Yu L, Coolen LM. El comportament sexual i els senyals ambientals associats al sexe activen el sistema mesolímbic de les rates mascles. Neuropsicofarmacologia. 2004; 29: 718 – 730. [PubMed]
  5. Bibb JA, Chen J, Taylor JR, Svenningsson P, Nishi A, Snyder GL, Yan Z, Sagawa ZK, Ouimet CC, Nairn AC, Nestler EJ, Greengard P. Els efectes de l'exposició crònica a la cocaïna estan regulats per la proteïna neuronal Cdk5. Naturalesa. 2001; 410: 376 – 380. [PubMed]
  6. Bradley KC, Haas AR, Meisel RL. Les lesions 6-Hydroxydopamine en hàmsters femenines (Mesocricetus auratus) suprimeixen els efectes sensibilitzats de l’experiència sexual sobre les interaccions copuladores amb els homes. Behav Neurosci. 2005; 119: 224 – 232. [PubMed]
  7. Bradley KC, Meisel RL. La inducció de la conducta sexual de c-Fos al nucli accumbens i l’activitat locomotora estimulada per anfetamina s’han sensibilitzat per l’experiència sexual anterior en hàmsters sirians. J Neurosci. 2001; 21: 2123 – 2130. [PubMed]
  8. Carle TL, Ohnishi YN, Ohnishi YH, Alibhai IN, Wilkinson MB, Kumar A, Nestler EJ. Mecanismes dependents i independents del proteasoma per a la desestabilització de FosB: identificació de dominis de degrons FosB i implicacions per a l'estabilitat de DeltaFosB. Eur J Neurosci. 2007; 25: 3009 – 3019. [PubMed]
  9. Chao J, Nestler EJ. Neurobiologia molecular de les drogodependències. Annu Rev Med. 2004; 55: 113 – 132. [PubMed]
  10. Chen J, Nye HE, Kelz MB, Hiroi N, Nakabeppu I, Hope BT, Nestler EJ. Regulació de les proteïnes delta FosB i FosB mitjançant tractaments electroconvulsius i tractaments de cocaïna. Farmacologia molecular. 1995; 48: 880 – 889. [PubMed]
  11. Colby CR, Whisler K, Steffen C, Nestler EJ, Self DW. La sobreexpressió específica del tipus de cèl·lules estriatals de DeltaFosB millora els incentius per a la cocaïna. J Neurosci. 2003; 23: 2488 – 2493. [PubMed]
  12. Coolen LM, Allard J, Truitt WA, Mckenna KE. Regulació central de l'ejaculació. Physiol Behav. 2004; 83: 203 – 215. [PubMed]
  13. Damsma G, Pfaus JG, Wenkstern D, Phillips AG, Fibiger HC. El comportament sexual augmenta la transmissió de la dopamina al nucli accumbens i als estriat de les rates masculines: comparació amb la novetat i la locomoció. Behav Neurosci. 1992; 106: 181 – 191. [PubMed]
  14. Dietz DM, Maze I, Mecànic M, Vialou V, Dietz KC, Iniguez SD, Laplant Q, Russo SJ, Ferguson D, Nestler EJ. El paper essencial de ΔFosB en la regulació de la cocaïna de les espines dendrítiques del nucli accumbens les neurones. Resum de la Societat per a la Neurociència. 2009
  15. Frohmader KS, Pitchers KK, Balfour ME, Coolen LM. Mescles plaers: revisió dels efectes de les drogues sobre el comportament sexual en humans i models animals. Horm Behav. 2009 En premsa.
  16. Hedges VL, Chakravarty S, Nestler EJ, Meisel RL. La sobreexpressió de Delta FosB al nucli accumbens millora la recompensa sexual en hàmsters sirians femenines. Genes Brain Behav. 2009; 8: 442 – 449. [Article gratuït de PMC] [PubMed]
  17. Hernández L, Hoebel BG. L'alimentació i l'estimulació hipotalàmica augmenten la facturació de la dopamina als accumbens. Physiol Behav. 1988a; 44: 599 – 606. [PubMed]
  18. Hernández L, Hoebel BG. La recompensa alimentària i la cocaïna augmenten la dopamina extracel·lular al nucli accumbens, mesurada mitjançant microdiàlisi. Life Sci. 1988b; 42: 1705 – 1712. [PubMed]
  19. Hiroi N, Marek GJ, Brown Brown, Ye H, Saudou F, Vaidya VA, Duman RS, Greenberg ME, Nestler EJ. Paper essencial del gen fosB en les accions moleculars, cel·lulars i conductuals de les crisis cròniques electroconvulsives. J Neurosci. 1998; 18: 6952 – 6962. [PubMed]
  20. Hommel JD, Sears RM, Georgescu D, Simmons DL, DiLeone RJ. Eliminació de gens locals al cervell mitjançant interferències d'ARN de mediació viral. Nat Med. 2003; 9: 1539 – 1544. [PubMed]
  21. Hope B, Kosofsky B, Hyman SE, Nestler EJ. Regulació de l'expressió gènica immediata i de la unió AP-1 al nucli de la rata accumbens per cocaïna crònica. Proc Natl Acad Sci EUA A. 1992; 89: 5764 – 5768. [Article gratuït de PMC] [PubMed]
  22. Hope BT, Nye HE, Kelz MB, Self DW, MJ Iadarola, Nakabeppu Y, Duman RS, EJ de Nestler. Inducció d'un complex AP-1 de llarga durada format per proteïnes similars a Fos en el cervell per cocaïna crònica i altres tractaments crònics. Neurona. 1994; 13: 1235 – 1244. [PubMed]
  23. Hull EM, Meisel RL, Sachs BD. Comportament sexual masculí. Horm Behav. 2002; 1: 1 – 139.
  24. Jaber M, Cador M, Dumartin B, Normand E, Stinus L, Bloch B. Els tractaments d'anfetaminas agudes i cròniques regulen de manera diferent els nivells d'ARN de missatger de neuropèptid i la immunoreactivitat de Fos en neurones estriatals de rata. Neurociència. 1995; 65: 1041 – 1050. [PubMed]
  25. Jenkins WJ, Becker JB. Augments dinàmics de la dopamina durant la copulació del ritme en la rata femenina. Eur J Neurosci. 2003; 18: 1997 – 2001. [PubMed]
  26. Kelz MB, Chen J, Carlezon WA, Jr, Whisler K, Gilden L, Beckmann AM, Steffen C, Zhang YJ, Marotti L, DW, Tkatch T, Baranauskas G, DJ Surmeier, Neve RL, Duman RS, Picciotto MR, Nestler EJ. L'expressió del factor de transcripció deltaFosB al cervell controla la sensibilitat a la cocaïna. Naturalesa. 1999; 401: 272 – 276. [PubMed]
  27. López HH, Ettenberg A. L’exposició a rates femenines produeix diferències en la inducció de c-fos entre rates sexes i innocents. Brain Res. 2002; 947: 57 – 66. [PubMed]
  28. Maze I, Covington HE, 3rd, Dietz DM, LaPlant Q, Renthal W, Russo SJ, Mecànic M, Mouzon E, Neve RL, SJ Haggarty, Ren Y, Sampath SC, Hurd YL, Greengard P, Tarakhovsky A, Schaefer A, Nestler EJ. Paper essencial de la histona metiltransferasa G9a en la plasticitat induïda per la cocaïna. Ciència. 2010; 327: 213 – 216. [Article gratuït de PMC] [PubMed]
  29. McClung CA, Nestler EJ. Regulació de l’expressió gènica i la recompensa de cocaïna per CREB i DeltaFosB. Nat Neurosci. 2003; 6: 1208 – 1215. [PubMed]
  30. McClung CA, Ulery PG, Perrotti LI, Zachariou V, Berton O, Nestler EJ. DeltaFosB: un interruptor molecular per a l'adaptació a llarg termini al cervell. Brain Res Mol Brain Res. 2004; 132: 146 – 154. [PubMed]
  31. Miller SM, Lonstein JS. Projeccions dopaminèrgiques a la zona preoptica medial de rates postpart. Neurociència. 2009; 159: 1384 – 1396. [Article gratuït de PMC] [PubMed]
  32. Morgan JI, Curran T. Acoblament d’estímul-transcripció a les neurones: paper dels gens cel·lulars immediats-primers. Tendències Neurosci. 1989; 12: 459 – 462. [PubMed]
  33. Nestler EJ. Mecanismes moleculars de l'addicció a les drogues. Neurofarmacologia. 2004; 47 Suppl 1: 24 – 32. [PubMed]
  34. Nestler EJ. La neurobiologia de l'addicció a la cocaïna. Perspectiva de ciència pràctica. 2005; 3: 4 – 10. [Article gratuït de PMC] [PubMed]
  35. Nestler EJ. Revisió. Mecanismes de transcripció de l'addicció: paper de DeltaFosB. Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci. 2008; 363: 3245 – 3255. [Article gratuït de PMC] [PubMed]
  36. Nestler EJ, Barrot M, Self DW. DeltaFosB: un interruptor molecular sostingut per a l'addicció. Proc Natl Acad Sci EUA A. 2001; 98: 11042 – 11046. [Article gratuït de PMC] [PubMed]
  37. Nye HE, Hope BT, Kelz MB, Iadarola M, EJ Nestler. Estudis farmacològics sobre la regulació de la inducció crònica d'antígens relacionats amb FOS per cocaïna a l'estriat i al nucli accumbens. J Pharmacol Exp Ther. 1995; 275: 1671 – 1680. [PubMed]
  38. Olausson P, Jentsch JD, Tronson N, Neve RL, Nestler EJ, Taylor JR. DeltaFosB al nucli accumbens regula el comportament i la motivació instrumentals reforçats pels aliments. J Neurosci. 2006; 26: 9196 – 9204. [PubMed]
  39. Peakman MC, Colby C, Perrotti LI, Tekumalla P, Carle T, Ulery P, Chao J, Duman C, Steffen C, Monteggia L, Allen MR, Stock JL, Duman RS, McNeish JD, Barrot M, Self DW, Nestler EJ , Schaeffer E. L'expressió específica específica de la regió cerebral d'un mutant dominant negatiu de c-Jun en ratolins transgènics disminueix la sensibilitat a la cocaïna. Brain Res. 2003; 970: 73 – 86. [PubMed]
  40. Perrotti LI, Bolanos CA, Choi KH, Russo SJ, Edwards S, Ulery PG, Wallace DL, Self DW, Nestler EJ, Barrot M. DeltaFosB s'acumula en una població de cèl·lules GABAergic a la cua posterior de l'àrea tegmental ventral després del tractament psicoestimulant. Eur J Neurosci. 2005; 21: 2817 – 2824. [PubMed]
  41. Perrotti LI, Hadeishi Y, Ulery PG, Barrot M, Monteggia L, Duman RS, Nestler EJ. Inducció de deltaFosB en estructures cerebrals relacionades amb la recompensa després de la crisi. J Neurosci. 2004; 24: 10594 – 10602. [PubMed]
  42. Perrotti LI, Weaver RR, Robison B, Renthal W, Maze I, Yazdani S, Elmore RG, Knapp DJ, Selley DE, Martin BR, Sim-Selley L, Bachtell RK, Self DW, Nestler EJ. Patrons diferents de la inducció de DeltaFosB en el cervell per drogues d'abús. Sinapsis. 2008; 62: 358 – 369. [Article gratuït de PMC] [PubMed]
  43. Pfaus JG. Camins del desig sexual. J Sex Med. 2009; 6: 1506 – 1533. [PubMed]
  44. Pfaus JG, Kippin TE, Centeno S. Condicionament i comportament sexual: una revisió. Horm Behav. 2001; 40: 291 – 321. [PubMed]
  45. Phillips AG, Vacca G, Ahn S. Una perspectiva de dalt a baix sobre dopamina, motivació i memòria. Pharmacol Biochem Behav. 2008; 90: 236 – 249. [PubMed]
  46. Pitchers KK, Balfour ME, Lehman MN, Richtand NM, Yu L, Coolen LM. Neuroplasticitat en el sistema mesolímbic induït per recompensa natural i recompensa posterior per l'abstinència. Psiquiatria Biol. 2010; 67: 872 – 879. [Article gratuït de PMC] [PubMed]
  47. Renthal W, Carle TL, Maze I, Covington HE, 3rd, Truong HT, Alibhai I, Kumar A, Montgomery RL, Olson EN, Nestler EJ. Delta FosB media la desensibilització epigenètica del gen c-fos després de l'exposició crònica a l'anfetamina. J Neurosci. 2008; 28: 7344 – 7349. [Article gratuït de PMC] [PubMed]
  48. Renthal W, Kumar A, Xiao G, Wilkinson M, Covington HE, 3rd, Maze I, Sikder D, Robison AJ, LaPlant Q, Dietz DM, Russo SJ, Vialou V, Chakravarty S, Kodadek TJ, Stack A, Kabbaj M, Nestler EJ. L’anàlisi genòmica de la regulació de la cromatina per cocaïna revela un paper important per a les sirtuines. Neurona. 2009; 62: 335 – 348. [Article gratuït de PMC] [PubMed]
  49. Tenk CM, Wilson H, Zhang Q, Gerra KK, Coolen LM. Recompensa sexual en rates masculines: efectes de l’experiència sexual en preferències de llocs condicionats associats a l’ejaculació i les intromissions. Horm Behav. 2009; 55: 93 – 97. [Article gratuït de PMC] [PubMed]
  50. Ulery-Reynolds PG, Castillo MA, Vialou V, Russo SJ, Nestler EJ. La fosforilació de DeltaFosB media la seva estabilitat in vivo. Neurociència. 2008
  51. Ulery PG, Rudenko G, Nestler EJ. Regulació de l'estabilitat DeltaFosB per fosforilació. J Neurosci. 2006; 26: 5131 – 5142. [PubMed]
  52. Wallace DL, Vialou V, Rios L, Carle-Florence TL, Chakravarty S, Kumar A, Graham DL, Green TA, Kirk A, Iniguez SD, Perrotti LI, Barrot M, DiLeone RJ, Nestler EJ, Bolanos-Guzman CA. La influència de DeltaFosB al nucli accumbens en un comportament relacionat amb la recompensa natural. J Neurosci. 2008; 28: 10272 – 10277. [Article gratuït de PMC] [PubMed]
  53. Werme M, Messer C, Olson L, Gilden L, Thoren P, Nestler EJ, Brene S. Delta FosB regula el funcionament de la roda. J Neurosci. 2002; 22: 8133 – 8138. [PubMed]
  54. Winstanley CA, LaPlant Q, Theobald DE, Green TA, Bachkell ​​RK, Perrotti LI, DiLeone RJ, Russo SJ, Garth WJ, Self DW, Nestler EJ. La inducció de DeltaFosB en l'escorça orbitofrontal media la tolerància a la disfunció cognitiva induïda per la cocaïna. J Neurosci. 2007; 27: 10497 – 10507. [PubMed]
  55. Zachariou V, CA Bolanos, Selley DE, Theobald D, MP de Cassidy, Kelz MB, T Shaw-Lutchman, Berton O, LJ de Sim-Selley, RJ de Dileone, Kumar A, EJ de Nestler. Un paper essencial per al DeltaFosB al nucli accumbens en l'acció de la morfina. Nat Neurosci. 2006; 9: 205 – 211. [PubMed]
  56. Zhang J, Zhang L, Jiao H, Zhang Q, Zhang D, Lou D, Katz JL, Xu M. c-Fos facilita l'adquisició i l'extinció dels canvis persistents induïts per la cocaïna. J Neurosci. 2006; 26: 13287 – 13296. [PubMed]