ΔFosB: n yli-ilmentymisen vaikutus opioidi- ja kannabinoidireseptorivälitteiseen signalointiin ydinkohdissa (2011)

Neuropharmacology. 2011 Dec;61(8):1470-6. doi: 10.1016/j.neuropharm.2011.08.046.

Sim-Selley LJ, Cassidy MP, Sparta A, Zachariou V, Nestler EJ, Selley DE.

lähde

Farmakologian ja toksikologian laitos sekä huume- ja alkoholitutkimuslaitos, Virginia Commonwealth University of Medicine, Richmond, VA 23298, USA.

Abstrakti

Vakaa transkriptiotekijä AFosB indusoituu ydinasemassa (NAc) kroonisella altistumisella usealle väärinkäytön lääkkeelle, ja ΔFosB: n siirtogeeninen ilmentyminen striatumissa parantaa morfiinin ja kokaiinin palkitsevia ominaisuuksia.e. Näiden havaintojen mekanistinen perusta on kuitenkin täysin ymmärretty. Käytimme bitransgeenistä hiirimallia, jossa oli indusoituva AFosB: n ilmentyminen dopamiini D (1) -reseptori / dynorfiinia sisältävä striatauronit määrittämään AFosB: n ilmentymisen vaikutuksen opioidi- ja kannabinoidireseptorin signalointiin NAc: ssä. Tulokset osoittivat, että mu-opioidivälitteinen G-proteiiniaktiivisuus ja adenylyylisyklaasin inhibitio lisääntyivät AFosB: tä ilmentävien hiirien NAc: ssä. Samoin adenylyylisyklaasin kappa-opioidien inhibitio tehostui AFosB: tä ilmentävissä hiirissä. Sitä vastoin kannabinoidireseptorivälitteinen signalointi ei eronnut AFosB: tä ja kontrollihiiriä yliekspressoivien hiirien välillä. Tnämä havainnot viittaavat siihen, että opioidi- ja kannabinoidireseptorien signalointi moduloidaan AFosB: n ilmentymisellä, ja osoittavat, että AFosB: n ilmentyminen saattaa tuottaa joitakin sen vaikutuksia parannetun mu- ja kappa-opioidireseptorisignaloinnin kautta NAc: ssä.

Avainsanat: G-proteiini, adenylyylisyklaasi, striatum

1. Esittely

Opioidireseptorit ja kannabinoidi-CB₁ reseptorit (CB₁R) ovat neurobiologiset kohteet kahdelle laajalti käytetylle lääkeryhmälle, joihin kuuluvat morfiini, heroiini ja reseptiopioidit, ja marihuana (Δ⁹-tetrahydrokannabinoli (THC)). Opioidien ja kannabinoidien akuutteja vaikutuksia välittävät G-proteiiniin kytketyt reseptorit, jotka aktivoivat pääasiassa G: tä_{i / o} proteiineja ja tuottavat alavirran efektorivasteita, kuten adenylyylisyklaasin inhibitiota (Lapset, 1991, Childers et ai., 1992, Howlett et ai., 2002). A: n moottori, muistin heikkeneminen ja psykoaktiiviset vaikutukset⁹-THC: n tuottavat CB₁R (Huestis et ai., 2001, Zimmer et ai., 1999), jotka ovat laajalti jakautuneita aivoihin ja joilla on korkeat tasot basaaliganglioneissa, hippokampuksessa ja \ tHerkenham et ai., 1991). Useimpien kliinisesti merkittävien ja väärinkäytettyjen opioidilääkkeiden analgeettisia ja palkitsevia vaikutuksia välittävät pääasiassa mu-opioidireseptorit (MOR) (Matthes et ai., 1996), jotka ovat rikastuneet limbiseen järjestelmään ja aivorunkoon (Mansour et ai., 1994). Mesolimbisella systeemillä, joka koostuu dopaminergisista ulokkeista ventral tegmental -alueelta (VTA) ytimelle accumbens (NAc), on tärkeä rooli opioidien ja kannabinoidien palkitsevissa vaikutuksissa (Bozarth ja Wise, 1984, Vaccarino et ai., 1985, Zangen et ai., 2006) sekä muut väärinkäytökset (Koob ja Volkow, 2010). Lisäksi endogeeniset opioidi- ja kannabinoidijärjestelmät osallistuvat useiden psykoaktiivisten lääkkeiden luokkien palkitseviin vaikutuksiin (Maldonado et ai., 2006, Trigo, et ai., 2010). Siten on tärkeää selvittää mekanismit, joilla opioidi ja CB ovat₁R-signalointi on säädetty NAc: ssä.

Keskeinen kysymys huumeiden väärinkäytön alalla on ollut sellaisten proteiinien tunnistaminen, jotka välittävät siirtymistä akuuteista pitkäaikaisista psykoaktiivisten lääkkeiden vaikutuksista. AP-1-transkriptiotekijä AFosB on erityisen mielenkiintoinen, koska se on stabiili lyhennetty splice-varianttituote. FosB geeni, joka kerääntyy toistuvassa altistumisessa väärinkäytöksille tai luonnollisilleMcClung et ai., 2004, Nestler, 2008, Nestler et ai., 1999). Olemme havainneet, että AFosB indusoidaan aivoissa toistuvan altistumisen jälkeen morfiinille, A⁹-THC, kokaiini tai etanoli, jolloin jokainen lääke tuottaa ainutlaatuisen alueellisen ΔFosB-ekspressiomallin (Perrotti et ai., 2008). Yhdenmukainen löydös huumeiden välillä oli, että ΔFosB indusoitui voimakkaasti striatumiin, jossa kaikki neljä lääkettä indusoivat ΔFosB: n NAc-ytimessä ja kaikki paitsi Δ⁹-THC indusoi merkittävästi ilmentymistä NAc-kuoressa ja caudate-putamen.

Farmakologiset tutkimukset osoittivat, että dopamiini D: n samanaikainen käyttö₁ reseptori (D₁R) antagonisti SCH 23390 estänyt FosB: n induktion NAc: ssä ja caudate-putamenissa jaksottaisen kokaiinin tai morfiinin antamisen jälkeen, mikä viittaa D: n mahdolliseen merkitykseen.₁R-ilmentävät neuronit (Muller ja Unterwald, 2005, Nye et ai., 1995). AFosB: n induktion vaikutus lääkeainetta aiheuttavaan käyttäytymiseen on tutkittu käyttäen bittransgeenisiä hiiriä, jotka ilmentävät AFosB: tä NAc: n ja dorsaalisen striatumin spesifisissä neuronaalisissa populaatioissa (Chen et ai., 1998). Hiiret, jotka ilmentävät AFosB: tä dynorfiinissa / D: ssä₁R-positiiviset neuronit NAc- ja dorsal-striatumissa (linja 11A) osoittavat muuttuneita vasteita huumeiden väärinkäyttöön, erityisesti lisääntynyttä herkkyyttä kokaiinin tai morfiinin palkitseviin vaikutuksiin (Colby et ai., 2003, Kelz et ai., 1999, Zachariou et ai., 2006). Nämä muutokset tapahtuivat ilman MOR- tai eri G-proteiinialayksiköiden tasojen muutoksia. Dinorfiinin mRNA-tasot kuitenkin vähenivät AFosB: tä ilmentävien hiirien NAc: ssä (Zachariou et ai., 2006), mikä viittaa siihen, että yksi FosB: n kohde on geeni, joka koodaa endogeenistä opioidipeptidiä. ΔFosB-induktio voi myös aiheuttaa käyttäytymismuutoksia säätämällä reseptorisignalointia NAc: ssä, mutta tätä mahdollisuutta ei ole tutkittu. Siksi esillä olevat tutkimukset käyttivät bitransgeenistä hiirimallia sen määrittämiseksi, onko ΔFosB: n yliekspressio dynorfiinissa / D₁R: tä sisältävät striattuuronit muuttavat MOR-välitteistä G-proteiiniaktiivisuutta ja MOR- ja KOR-välitteistä adenylyylisyklaasin inhibitiota NAc: ssä. ΔFosB: n vaikutus CB: hen₁R-välitteistä G-proteiiniaktiivisuutta arvioitiin myös siksi, että A⁹-THC-antaminen indusoi ΔFosB: tä NAc: ssä (Perrotti et ai., 2008) ja endokannabinoidijärjestelmän tiedetään säätelevän aivojen palkitsemispiirejä (Gardner, 2005, Maldonado et ai., 2006), mutta ΔFosB: n vaikutusta endokannabinoidijärjestelmään ei ole tutkittu.

2. Materiaalit ja menetelmät

2.1. reagenssit

[³⁵S] GTPyS (1250 Ci / mmol), [a-³²P] ATP (800 Ci / mmol) ja [³H] cAMP (26.4 Ci / mmol) ostettiin PerkinElmeriltä (Shelton, CT). ATP, GTP, BKT, cAMP, naudan seerumin albumiini, kreatiinifosfokinaasi, papaveriini, imidatsoli ja WIN-55212-2 ostettiin Sigma Aldrichiltä (St. Louis, MO). GTPyS ostettiin Roche Diagnostic Corporationilta (Chicago, IL). DAMGOn toimittivat huumeiden väärinkäytön kansallisen instituutin huumausaineiden hankintaohjelma (Rockville, MD). Econo-1-tuikeneste saatiin Fisher Scientificiltä (Norcross, GA). Ecolite-tuikenestettä saatiin ICN: ltä (Costa Mesa, CA). Kaikki muut kemikaalit saatiin Sigma Aldrichilta tai Fisher Scientificiltä.

2.2. hiiret

NSE-tTA: sta (linja A) peräisin olevat urospuoliset bransgeeniset hiiret (linja 11) muodostettiin, kuten on kuvattu julkaisussa Kelz et ai. (Kelz et ai., 1999). Bitransgeeniset hiiret otettiin käyttöön ja niitä kasvatettiin doksisykliinillä (100 ug juomavedessä) siirtogeenin ilmentymisen tukahduttamiseksi. 8-viikon iässä doksisykliini jätettiin pois vedestä puolet hiiristä transgeenin ilmentymisen sallimiseksi, kun taas jäljellä olevat hiiret säilytettiin doksisykliinillä transgeenin tukahduttamiseksi. Aivot kerättiin 8-viikkoa myöhemmin, jolloin AFosB: n transkriptiovaikutukset ovat maksimaalisia (McClung ja Nestler, 2003). Käytettiin toista siirtogeenistä hiirilinjaa, jossa Δc-Jun, joka on dominoiva negatiivinen c-Jun-antagonisti, ilmaistaan D: ssä₁R / dynorfiini ja D₂Striatumin, hippokampuksen ja parietaalisen kuoren R / enkefaliinisolut (Peakman et ai., 2003). C-Jun ja siihen liittyvät Jun-proteiinit dimerisoituvat Fos-perheen proteiineilla ja sitoutuvat kohdegeenien AP-1-kohtaan transkription säätämiseksi. C-Junin N-terminaalin lyhentäminen (Ac-Jun) tekee kompleksista transkriptionaalisesti inaktiivisen ja kykenee estämään aktiivisten AP-1-kompleksien DNA-sitoutumisen. NSE-tTA: sta (linja A) peräisin olevat urospuoliset bransgeeniset hiiret TetOp-FLAG-Ac-Jun (linja E) muodostettiin, kuten on kuvattu julkaisussa Peakman et ai. (Peakman et ai., 2003). Bitransgeeniset hiiret otettiin käyttöön ja niitä kasvatettiin doksisykliinillä (100 ug juomavedessä) siirtogeenin ilmentymisen tukahduttamiseksi. Pennut vieroitettiin 3-viikolla, genotyyppiä ja eroteltiin ryhmiin, puolet säilytettiin doksisykliiniä sisältävässä vedessä ja puolet tavallisella juomavedellä FLAG-Δc-Jun -ilmaisun indusoimiseksi. Aivot kerättiin 6-viikkoa myöhemmin, jolloin aika, jolloin FLAG-Δc-Junin maksimitasot on mitattu (Peakman et ai., 2003). Kaikki eläinkäsittelyt suoritettiin laboratorioeläinten hoitoa ja käyttöä koskevien kansallisten terveysoppaiden mukaisesti.

2.3. Membraanivalmistus

Aivot säilytettiin -80 ° C: ssa määrityspäivään saakka. Ennen määritystä jokainen aivot sulatettiin ja NAc hajotettiin jäällä. Kukin näyte homogenisoitiin 50 mM Tris-HCl: ssä, 3 mM MgCl: ssä₂, 1 mM EGTA, pH 7.4 (kalvopuskuri), jossa 20-iskut lasihomogenisaattorista 4 ° C: ssa. Homogenaatti sentrifugoitiin 48,000: ssa x g 4 ° C: ssa 10 min, suspendoitiin uudelleen kalvopuskuriin, sentrifugoitiin jälleen 48,000: ssä × g 4 ° C: ssa 10 min ja suspendoitiin uudelleen 50 mM Tris-HCl: iin, 3 mM MgCl: iin₂, 0.2 mM EGTA, 100 mM NaCl, pH 7.4 (määrityspuskuri). Proteiinitasot määritettiin Bradfordin menetelmällä (Bradford, 1976) käyttäen standardina naudan seerumin albumiinia (BSA).

2.4. Agonisti-stimuloitu [³⁵S] GTPyS-sidonta

Kalvoja esi- inkuboitiin 10-minuuttia 30 ° C: ssa adenosiinideaminaasilla (3 mU / ml) määrityspuskurissa. Kalvoja (5-10 ug proteiinia) inkuboitiin sitten 2 h: n ajan 30 ° C: ssa määrityspuskurissa, joka sisälsi 0.1% (paino / tilavuus) BSA, 0.1 nM [³⁵S] GTPyS, 30 uM BKT ja adenosiinideaminaasi (3 mU / ml) DAMGO: n tai WIN55,212-2: n sopivilla pitoisuuksilla ja ilman niitä. Epäspesifinen sitoutuminen mitattiin 20 uM GTPyS: llä. Inkubointi lopetettiin suodattamalla GF / B-lasikuitusuodattimien läpi, mitä seurasi 3-pesut 3 ml: lla jääkylmää 50 mM Tris-HCl: a, pH 7.4. Sitoutunut radioaktiivisuus määritettiin nestetuikelaspektrofotometrialla suodattimien uuttamisen yön yli Econo-1-tuikenesteessä.

2.5. Adenylyylisyklaasimääritys

Membraanit (5-25 µg -proteiini) esi-inkuboitiin adenosiinideaminaasin kanssa, kuten edellä on kuvattu, sitten inkuboitiin 15 min: n ajan 30 ° C: ssa 1uM forskoliinin läsnä ollessa tai ilman DAMGO: ta, U50,488H: ta tai WIN55,212-2: ää, määrityspuskurissa, joka sisälsi 50 µM ATP, [α-³²P] ATP (1.5 µCi), 0.2 mM DTT, 0.1% (paino / tilavuus) BSA, 50 uM syklinen AMP, 50 uM GTP, 0.2 mM papaveriini, 5 mM -fosfosfiini, 20-yksiköt / ml kreatiinifosfokinaasia ja adenosiinideaminaasi (3 mU / ml) 100 µl: n lopullisessa tilavuudessa. Näissä olosuhteissa yhteensä [α-³²Talteen otettu P] cAMP oli yleensä vähemmän kuin 1% lisätystä [a-³²P] ATP jokaisessa näytteessä. Reaktio lopetettiin kiehuttamalla 3 min ja [³²P] Syklinen AMP eristettiin Salomonin (Dowex ja alumiinioksidi) kaksoispylväsmenetelmällä (Salomon, 1979). [³H] cAMP (10,000 dpm) lisättiin kuhunkin putkeen ennen pylväskromatografiaa sisäisenä standardina. Radioaktiivisuus määritettiin nestetuikelaspektrofotometrialla (45%: n hyötysuhde. \ T ³H) sen jälkeen, kun eluaatti oli 4.5 ml, liuotettiin 14.5 ml: aan Ecolite-tuikenestettä.

2.6. Tietojen analysointi

Ellei toisin ilmoiteta, tiedot raportoidaan 4-8-erilliskokeiden keskiarvoina ± SE, joista kukin suoritettiin kolmessa koossa. Net-stimuloitu [³⁵S] GTPyS-sitoutuminen lasketaan agonistilla stimuloiduksi sitoutumiseksi miinus perussitoutuminen. Neste forskoliinilla stimuloitu adenylyylisyklaasin aktiivisuus määritellään forskoliinilla stimuloiduksi aktiivisuudeksi - basaaliaktiivisuus (pmol / mg / min). Forskoliinilla stimuloidun adenylyylisyklaasin aktiivisuuden prosentuaalinen inhibitio määritellään (netto forskoliinilla stimuloitu aktiivisuus agonistin puuttuessa - netto forskoliinilla stimuloitu aktiivisuus agonistin / netto forskoliinilla stimuloidun aktiivisuuden läsnä ollessa ilman agonistia) × 100. Kaikki käyrän sovitus- ja tilastolliset analyysit suoritettiin käyttäen Prism 4.0c: ää (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA). Konsentraatio-vaikutus-käyrät analysoitiin iteratiivisella epälineaarisella regressiolla, jotta saatiin EC₅₀ ja E_max arvot. Konsentraatiovaikutusdatan tilastollinen merkitsevyys määritettiin kaksisuuntaisella varianssianalyysillä (ANOVA) käyttäen agonistiannosta ja geenin induktiota (päälle tai pois) tärkeimpinä tekijöinä. Käyrän sovitusarvojen tilastollinen merkitsevyys (E_max tai EY₅₀) määritettiin parittamattomalla kaksisuuntaisella Studentin t-testillä käyttäen Welchin korjausta tai tietojen neliöjuurimuunnosta tarvittaessa korjaamaan epäyhtenäiset (F-testillä havaitut) varianssit₅₀ arvot.

3. tulokset

3.1. AFosB: n ilmentymisen vaikutus opioidi- ja kannabinoidireseptorivälitteiseen G-proteiinin aktivaatioon

Voit määrittää, onko MOR- tai CB₁R-välitteinen G-proteiinin aktivaatio muutettiin indusoituvalla AFosB: n transgeenisellä ilmentämisellä NAc: ssä, agonistilla stimuloitu [³⁵S] GTPyS: n sitoutumista tutkittiin eristetyissä kalvoissa, jotka oli valmistettu tästä bransgeenisten hiirien alueesta, jotka ekspressoivat (AFosB on) tai eivät ekspressoineet (AFosB pois) AFosB-siirtogeeniä. MOR: n aktivoimiseksi käytettiin MOR-selektiivistä enkefaliinianalogia DAMGO ja CB: n aktivoimiseksi käytettiin kannabinoidiamino- alkyyli-indolia WIN55,212-2.₁R. Nämä ligandit osoitettiin aiemmin olevan täydelliset agonistit MOR: ssa ja CB: ssä₁R, vastaavasti (Breivogel et ai., 1998, Selley et ai., 1997). KOR-välitteistä G-proteiiniaktiivisuutta ei voitu tutkia, koska signaali on liian pieni jyrsijän aivoissa (Childers et ai., 1998). Tulokset osoittivat, että sekä DAMGO että WIN55,122-2 stimuloivat G-proteiinin aktiivisuutta NAc: ssä AFosB: stä ja AFosB: stä hiirillä (Kuva 1). DAMGO-stimuloidulle toiminnalle (Kuva 1A), pitoisuus-vaikutustietojen kaksisuuntainen ANOVA paljasti ΔFosB-tilan (p <0.0001, F = 22.12, df = 1) ja DAMGO-pitoisuuden (p <0.0001, F = 29.65, df = 5) merkittävät päävaikutukset ilman merkittävä vuorovaikutus (p = 0.857, F = 0.387, df = 5). Pitoisuuden ja vaikutuksen käyrien epälineaarinen regressioanalyysi paljasti merkittävästi suuremman DAMGO E: n_max arvo AFosB: ssä hiirillä (E_max = 73 ± 5.2% stimulaatio) suhteessa AFosB: n pois hiiristä (E_max = 56 ± 4.1% stimulaatio; p <0.05, erilainen kuin AFosB hiirillä Studentin t-testillä). DAMGO EC₅₀ arvot eivät eronneet AFosB: n ja AFosB: n pois hiirten välillä (302 ± 72 nM vs. 212 ± 56 nM, vastaavasti p = 0.346).

AFosB: n ilmentymisen vaikutus agonistilla stimuloituun [³⁵S] GTPyS sitoo NAc: ssä. Kalvot AFosB: tä ilmentävistä (AFosB on) tai kontrolli- (AFosB off) hiiristä määritettiin kuten on kuvattu menetelmissä, joissa käytetään vaihtelevia pitoisuuksia ...

Toisin kuin MOR-agonistilla DAMGO saaduilla tuloksilla, kannabinoidiagonistilla WIN55,212-2 ei havaittu AFosB-tilasta riippuvia eroja G-proteiinin aktivaatiossa.Kuva 1B). WIN55,212-2-pitoisuus-vaikutustietojen kaksisuuntainen ANOVA paljasti WIN55,212-2-konsentraation merkittävän päävaikutuksen (p <0.0001, F = 112.4, df = 7), mutta ei ΔFosB-tilan (p = 0.172) , F = 1.90, df = 1) eikä vuorovaikutusta ollut (p = 0.930, F = 0.346, df = 7). Vastaavasti AFosB-tilalla ei ollut vaikutusta WIN55,212-2 E: hen_max arvot (103 ± 6% vs. 108 ± 8% stimulaatio AFosB: ssä ja hiirissä, p = 0.813 opiskelijan t-testillä) tai EC₅₀ arvot (103 ± 20 nM vs. 170 ± 23 nM AFosB: ssä ja hiirissä, p = 0.123).

Käyrän muodon ja sen perusteella, että aiemmat tutkimuksemme ovat osoittaneet kaksivaiheisia WIN55,212-2-konsentraatio-vaikutus-käyrät aivoissa (Breivogel et ai., 1999, Breivogel et ai., 1998), WIN55,212-2-käyrät analysoitiin myös käyttämällä kaksisuuntaista mallia. Keskiarvotutkimusten analyysi osoitti, että sovituksen hyvyys parani hieman kahden paikan mallin avulla (R² = 0.933 ja 0.914, neliöiden = 3644 ja 5463 summa ΔFosB: ssä ja hiirissä, vastaavasti) verrattuna yhden paikan malliin (R² = 0.891 ja 0.879, ruutujen summa = 6561 ja 6628 ΔFosB: n päälle ja pois hiirissä, vastaavasti). Merkittäviä eroja ei kuitenkaan löydetty AFosB: n ja hiirien välillä joko E: ssä_max tai EY₅₀ korkean tai matalan potenssin sivustojen arvot (Lisätaulukko 1), vaikka suuntaus kohti matalampaa EY: tä₅₀ arvo ΔFosB on (EC₅₀korkea = 28.0 ± 10.6 nM) verrattuna ΔFosB: n pois päältä (EC₅₀korkea = 71.5 ± 20.2 nM; p = 0.094). Lisäksi ΔFosB-tilan vaikutusta basaaliin ei ollut [³⁵S] GTPyS: n sitoutuminen NAc-kalvoihin (253 ± 14 vs. 226 ± 14 fmol / mg AFosB: ssä ja hiirissä, p = 0.188). Nämä tiedot osoittavat, että AFosB: n indusoituva transgeeninen ilmentyminen hiirien NAc: ssä lisäsi MOR-välitteistä G-proteiinin aktivaatiota vaikuttamatta merkittävästi CB: hen₁R-välitteinen tai basaalinen G-proteiiniaktiivisuus.

3.2. ΔFosB: n vaikutus opioidi- ja kannabinoidireseptorivälitteiseen adenylyylisyklaasin estoon

Arvioida AFosB: n indusoituvan transgeenisen ilmentymisen vaikutusta MOR: n ja CB: n alavirran efektoriaktiivisuuden modulointiin₁R, 1 uM: n forskoliinilla stimuloidun adenylyylisyklaasin aktiivisuuden inhibitiota tutkittiin NAc-kalvoissa. MOR- ja CB: n lisäksi₁Adenylyylisyklaasin aktiivisuuden R-välitteistä inhibitiota, KOR-aktiivisuuden vaikutuksia tutkittiin myös käyttämällä KOR-selektiivistä täyttä agonistia U50,488 (Zhu et ai., 1997), koska aiemmat tulokset osoittivat, että dynorfiini-mRNA oli ΔFosB: n kohde bitransgeenisessä mallissa (Zachariou et ai., 2006). Tulokset osoittivat, että DAMGO, U50,488 ja WIN55,212-2 tuottivat kumpikin adenylyylisyklaasin aktiivisuuden inhibitiota, joka oli sekä AFosB: n että AFosB: n suhteen hiirillä (Kuva 2). DAMGO-pitoisuus-vaikutuksen tietojen kaksisuuntainen ANOVA (Kuva 2A) paljasti ΔFosB-tilan (p = 0.0012, F = 11.34, df = 1) ja DAMGO-pitoisuuden (p <0.0001, F = 29.61, df = 6) merkittävät päävaikutukset, mutta ei merkittävää vuorovaikutusta (p = 0.441, F = 0.986 , df = 6). DAMGO-pitoisuus-vaikutus-käyrien epälineaarinen regressioanalyysi paljasti merkittävästi pienemmän DAMGO EC -arvon₅₀ arvo A FosB: ssä hiirillä (101 ± 11 nM) verrattuna AFosB: n pois hiiriin (510 ± 182 nM, p <0.05 opiskelijan t-testillä). DAMGO E: ssä ei kuitenkaan ollut merkittävää eroa_max arvot (20.9 ± 1.26% vs. 19.8 ± 1.27% inhibitio AFosB: ssä ja hiirissä, p = 0.534).

AFosB: n ilmentymisen vaikutus adenylyylisyklaasin aktiivisuuden inhibitioon NAc: ssä. Kalvot AFosB: tä ilmentävistä (AFosB on) tai kontrolli (AFosB off) hiiristä analysoitiin kuten on kuvattu menetelmissä 1 uM: n läsnä ollessa. ...

KOR-välitteinen adenylyylisyklaasin esto poikkesi myös AFosB: n indusoituvan transgeenisen ilmentymisen funktiona (Kuva 2B). U50,488 0.0006 pitoisuus-vaikutustietojen kaksisuuntainen ANOVA osoitti merkittäviä ΔFosB-tilan (p = 14.53, F = 1, df = 50,488) ja U0.0001-pitoisuuden (p <26.48, F = 3, df = 0.833) merkittäviä päävaikutuksia ilman merkittävää vuorovaikutusta (p = 0.289, F = 3, df = 50,488). Pitoisuus-vaikutus-käyrien epälineaarinen regressioanalyysi paljasti suuremman UXNUMX XNUMX E: n_max arvo ΔFosB: ssä hiirillä (18.3 ± 1.14% inhibitio) verrattuna ΔFosB: n pois hiiriin (12.5 ± 2.03% esto; p <0.05 eroaa ΔFosB: stä Studentin t-testillä), ilman merkittävää eroa U50,488 XNUMX EC: ssä₅₀ arvot (310 ± 172 nM vs. 225 ± 48 nM AFosB: ssä ja hiirissä, p = 0.324).

Toisin kuin MOR: lla ja KOR: lla havaitut vaikutukset, kannabinoidiagonisti WIN55212-2 ei aiheuttanut merkittävää vaikutusta indusoitavan transgeenisen AFosB: n ilmentymisen vaikutuksesta adenylyylisyklaasin estoon.Kuva 2C). WIN55,212-2-pitoisuus-vaikutustietojen kaksisuuntainen ANOVA osoitti lääkepitoisuuden merkittävän vaikutuksen (p <0.0001, F = 23.6, df = 2), mutta ei AFosB-tilalla (p = 0.735, F = 0.118, df = 1) eikä myöskään ollut merkittävää vuorovaikutusta (p = 0.714, F = 0.343, df = 2). Lisäksi AFosB-tilalla ei ollut vaikutusta perus- tai forskoliinilla stimuloidun adenylyylisyklaasin aktiivisuuteen ilman agonistia. Adenylyylisyklaasin basaaliaktiivisuus oli 491 ± 35 pmol / mg / min AFosB: ssä hiirillä verrattuna 546 ± 44: een AFosB: n pois hiirillä (p = 0.346 Studentin t-testillä). Samoin adenylyylisyklaasiaktiivisuus 1 uM forskoliinin läsnä ollessa oli 2244 ± 163 pmol / mg / min AFosB: ssä hiirillä verrattuna 2372 ± 138 pmol / mg / min AFosB: n pois hiiriin (p = 0.555).

3.3. ACJunin vaikutus opioidi- ja kannabinoidireseptorivälitteiseen adenylyylisyklaasin estoon

Koska AFosB: n indusoituva transgeeninen ilmentyminen MOR: sta ja KOR: sta inhiboivaa signaalia transduktiota NAc: ssä adenlyylisyklaasiin, oli mielenkiintoista määrittää, johtaisiko AFosB-välitteisen transkription hallitseva negatiivinen inhibiittori opioidireseptorin signalointia vastakkaisella tavalla. Tämän kysymyksen ratkaisemiseksi DAMGO: n ja U50,488: n forskoliinilla stimuloiman adenylyylisyklaasin aktiivisuuden estämistä tutkittiin kalvoissa, jotka oli valmistettu NAc: stä bittransgeenisistä hiiristä, jotka ehdottomasti ekspressoivat AJJun. Tulokset eivät osoittaneet, että AJJun-ilmentyminen vaikutti merkittävästi MOR: n tai KOR: n adenylyylisyklaasin aktiivisuuden estoon (Kuva 3). DAMGO-pitoisuus-vaikutus-käyrien kaksisuuntainen ANOVA osoitti DAMGO-pitoisuuden merkittävän päävaikutuksen (p <0.0001, F = 20.26, df = 6), mutta ei ΔcJun-tilaa (p = 0.840, F = 0.041, df = 1) eikä merkittävää vuorovaikutusta ollut (p = 0.982, F = 0.176, df = 6). Samoin E: ssä ei ollut merkittävää eroa_max tai EY₅₀ arvot hiirten välillä ΔcJun on (E_max = 23.6 ± 2.6%; EY₅₀ = 304 ± 43 nM) tai ΔcJun pois päältä (E_max = 26.1 ± 2.5%, p = 0.508; EY₅₀ = 611 ± 176 nM, p = 0.129). Samankaltaisia tuloksia havaittiin U50,488 0.0001: lla, niin että pitoisuus-vaikutus-käyrien kaksisuuntainen ANOVA osoitti merkittävää pitoisuuden vaikutusta (p <11.94, F = 6, df = 0.127), mutta ei ΔcJun-tilaa (p = 2.391 , F = 1, df = 0.978) eikä merkittävää vuorovaikutusta ollut (p = 0.190, F = 6, df = XNUMX). Samoin E: ssä ei ollut merkittäviä eroja_max tai EY₅₀ arvot hiirten välillä ΔcJun on (E_max = 14.8 ± 2.9%; EY₅₀ = 211 ± 81 nM) tai pois päältä (E_max = 16.7 ± 1.8%, p = 0.597; EY₅₀ = 360 ± 151 nM, p = 0.411).

AJJun-ilmentymisen vaikutus adenylyylisyklaasin aktiivisuuden inhibitioon NAc: ssä. AJJun-ilmentäviä (AJJun on) tai kontrollia (AJJun off) -hiiriä olevia membraaneja inkuboitiin DAMGO: n (A), U50,488H (B) tai WIN55,212-2 läsnä ollessa ...

ΔcJun-ilmentyminen ei myöskään vaikuttanut merkittävästi kannabinoidiagonistin aiheuttamaan adenylyylisyklaasin inhibitioon NAc: ssä. WIN55,212-2-pitoisuusvaikutuskäyrien kaksisuuntaisella ANOVA: lla oli WIN55,212-2-pitoisuuden merkittävä päävaikutus (p <0.0001, F = 15.53, df = 6), mutta ei genotyyppiin (p = 0.066, F = 3.472, df = 1) eikä merkittävää vuorovaikutusta ollut (p = 0.973, F = 0.208, df = 6). Samoin WIN55,212-2 E: ssä ei ollut merkittäviä eroja_max arvot (13.0 ± 2.3% ja 13.6 ± 0.9% inhibitio ΔcJun: ssa vastaavasti hiiriä vastaan, p = 0.821) ja / tai EC₅₀ arvot (208 ± 120 nM ja 417 ± 130 nM ΔcJun: ssa vastaavasti hiiriä vastaan, p = 0.270). Täten, vaikka WIN55,212-2: n tehokkuuden heikkeneminen oli pieni AcJunia ilmentävissä hiirissä, transgeeni ei muuttanut merkittävästi adenylyylisyklaasin kannabinoidin inhibitiota. Lisäksi AJJun-tilan vaikutusta basaaliseen tai forskoliinilla stimuloituun adenylyylisyklaasin aktiivisuuteen ei ollut. Basaalinen adenylyylisyklaasin aktiivisuus oli 1095 ± 71 pmol / mg / min ja 1007 ± 77 pmol / mg / min (p = 0.403) hiirissä, joissa oli ΔcJun päällä tai pois päältä. 1 uM forskoliinilla stimuloitu adenylyylisyklaasin aktiivisuus oli 4185 ± 293 pmol / mg / min versus 4032 ± 273 pmol / mg / min (p = 0.706) hiirissä, joissa oli ΔcJun päälle tai pois, vastaavasti.

3.4. keskustelu

Tämän tutkimuksen tulokset osoittivat lisääntyneen MOR-välitteisen G-proteiinin aktivaation ja adenylyylisyklaasin inhiboinnin hiirien NAc: ssä, jossa oli indusoitavaa AFosB: n transgeenistä ilmentymistä dynorfiinissa / D₁R sisältää neuroneja. KOR-välitteinen adenylyylisyklaasiaktiivisuuden inhibitio lisääntyi myös AFosB: tä ilmentävien hiirien NAc: ssä, mikä viittaa siihen, että ΔFosB säätelee endogeenista opioidijärjestelmää NAc: ssä. DAMGO E_max arvo oli suurempi MOR-stimuloidulla [³⁵S] GTPyS-sitoutuminen ja sen EY₅₀ arvo oli alhaisempi adenylyylisyklaasin inhibitiossa AFosB: n ylimääräekspressoivissa hiirissä verrattuna kontrollihiiriin. Nämä havainnot viittaavat siihen, että reseptorireservi on mahdollista efektorimodulaatiolle, mutta ei G-proteiinin aktivaatiota tutkituissa määritysolosuhteissa. Havaitseminen, että AFosB-ekspressio vaikutti KOR-agonistin adenylyylisyklaasin maksimaaliseen inhibitioon, viittaa pieneen reseptorireserviin KOR-välitteiseen vasteeseen, mikä vastaa KOR-sitoutumiskohtien alhaisia määriä hiiren aivoissa (Unterwald et ai., 1991). Sitä vastoin CB₁AFosB: n ilmentyminen ei vaikuttanut R-välitteiseen G-proteiiniaktiivisuuteen ja adenylyylisyklaasin inhibitioon, viittaavat siihen, että opioidi- ja kannabinoidijärjestelmät eroavat toisistaan näissä NAc-neuroneissa AFosB-vasteessa.

ΔFosB: n vaikutus opioidireseptorivälitteiseen signalointiin on yhdenmukainen edellisen raporttimme kanssa, että ΔFosB: n ilmentyminen striatumissa muutti akuuttia ja kroonista morfiinin vaikutusta (Zachariou et ai., 2006). Yksi havainto tästä tutkimuksesta oli se hiiri, jolla oli AFosB: n transgeeninen ilmentyminen dynorfiinissa / D₁R striataaliset neuronit olivat herkempiä morfiinille paikallaan olevissa kondensaatioissa kuin kontrollit. Lisäksi tämä vaikutus jäljitettiin ΔFosB: n viruksen välityksellä välittyneellä ilmentymisellä paikan mukaan spesifisellä injektiolla NAc: hen. Nämä havainnot ovat yhdenmukaisia nykyisten tulosten kanssa, jotka osoittavat parannettua MOR-signalointia NAc: ssä.

Olemme aiemmin tunnistaneet geenin koodauksen dinorfiini AFosB: n kohteena, ja ehdotti, että pelkistetty dynorfiini olisi johdonmukainen morfiinin lisääntyneiden palkitsevien ominaisuuksien kanssa AFosB-bitransgeenisissä hiirissä (Zachariou et ai., 2006). Esillä olevat tulokset osoittavat, että KOR-välitteinen adenylyylisyklaasin inhibitio NAc: ssä paranee AFosB: tä ilmentävissä hiirissä, mikä saattaa heijastaa KOR: n herkkyyden kompensointia lisääntyneen dynorfiinin jälkeen. Aikaisemmat tutkimukset ovat osoittaneet, että KOR on säädetty ylöspäin tietyissä prodynorfiini-knockout-hiirten aivoissa, mukaan lukien NAc (Clarke et ai., 2003).

Päinvastoin kuin AFosB, AJJunin, joka on AFosB: n sitovan kumppanin cJun: n hallitsevan negatiivisen katkaistun mutantin, indusoituva transgeeninen ekspressio ei muuttanut MOR- tai KOR-agonistien adenylyylisyklaasin inhibitiota. Nämä tulokset viittaavat siihen, että suhteellisen alhaiset ΔFosB-ekspressiota koskevat perusarvot eivät vaikuta merkittävästi opioidireseptorien signaloinnin ylläpitämiseen tällä signaalinsiirron tasolla NAc: ssä. Se, että morfiinin ilmastoitu palkitseva vaikutus väheni ΔcJun-ilmentymällä edellisessä tutkimuksessamme (Zachariou et ai., 2006) ehdottaa, että AFosB: n morfiini-induktio hoitomenetelmän aikana on tärkeää säätelemällä käyttäytymisvasteita lääkkeelle tai että FosB: n transkriptiovaikutukset kuin ne, jotka vaikuttavat opioidireseptorien proksimaaliseen signalointiin, voivat vaikuttaa opioidipalkkioon. Joka tapauksessa tämän tutkimuksen tulokset osoittavat selvästi, että \ t kun ΔFosB-ekspressio on kohonnut basaalitasojen yläpuolelle striatynforfiinissa / D: ssä₁R-ilmentävät neuronit lisäävät voimakkaasti MOR: n ja KOR: n kytkentää adenylyylisyklaasin estoon NAc: ssä.

MOR- ja KOR-välitteisen signaloinnin tehostavat mekanismit AFosB: n yli-ilmentymisellä ovat epäselviä, mutta olemme aikaisemmin osoittaneet, että MOR-tasot, joita [³H] naloksonin sitoutuminen, eivät eroa ΔFosB: n NAc: ssä verrattuna hiiriin (Zachariou et ai., 2006). Samassa tutkimuksessa havaittiin, että Gα_i1- ja 2-proteiinitasot eivät vaikuttaneet tähän alueeseen AFosB-ekspressiolla. Aiemmat geeniekspression matriisianalyysit kuitenkin osoittivat, että Ga_o mRNA: ta säädettiin AFosB: n NAc: ssä hiirillä (McClung ja Nestler, 2003). Tulevissa tutkimuksissa on mielenkiintoista tutkia kattavasti transgeenisen AFosB: n ilmentymisen vaikutusta G-proteiinin alayksikön ilmentymiseen proteiinitasolla sekä monien G-proteiinin moduloivien proteiinien ilmentymiseen.

On mielenkiintoista, että AFosB: n ilmentyminen ei parantanut CB: ää₁R-välitteinen signalointi NAc: ssä. On mahdollista, että muutokset CB: ssä₁R-signalointi tapahtuu erillisessä neuronipopulaatiossa, joka on peitetty koko NAc-valmisteessa. Esimerkiksi A: n antaminen⁹- THC indusoi merkittävästi ΔFosB: tä NAc: n ytimessä, mutta ei kuoressa (Perrotti et ai., 2008). minändeed, on osoitettu, että haaste on A⁹-THC A: n toistuvan antamisen jälkeen⁹-THC lisäsi dopamiinin vapautumista NAc-ytimessä, mutta lasku vapautui kuoressa (Cadoni et ai., 2008). On myös tärkeää huomata, että bitransgeenisten hiirien 11A-linja ekspressoi AFosB: tä vain dynorfiinissa / D₁R positiivinen keskipitkä striatumin neuroni, mutta CB₁R ilmaistaan molemmissa dynorfii- ni / D: ssä₁R ja enkefaliini / D₂R-positiiviset striattuuronit (Hohmann ja Herkenham, 2000) sekä kortikaalisten aferenttien terminaaleista (Robbe, et ai., 2001). AFosB-välitteisen transkription dominoivan negatiivisen säätäjän, AJJun, ilmentymisellä ei myöskään ollut merkittävää vaikutusta kannabinoidireseptorin signalointiin, vaikkakin ΔcJun ilmeisesti ilmaistaan molemmissa D: ssä₁ ja D₂näissä hiirissä keskipitkän pienten hermosolujen sisältämät populaatiot (Peakman et ai., 2003). On kuitenkin mahdollista, että perus-FosB-ekspressio on riittävän alhainen, että ΔcJun ei vaikuta reseptorisignalointiin, kuten MOR: n ja KOR: n tulokset osoittavat. On myös mahdollista, että CB₁R-signalointi paranee vaatimattomasti basaalilla AFosB: n ilmentymällä siten, että AFosB: n ilmentymisen lisäämisellä tai sen toimintojen estämisellä ΔcJun: lla oli vain vähäisiä vaikutuksia, jotka eivät saavuttaneet tilastollisen merkitsevyyden tasoa. Epäsuora tuki tähän tulkintaan nähdään vertaamalla WIN55,212-2 EC: ää₅₀ arvot välillä ΔcJun ja AFosB: tä ilmentävien hiirien välillä. WIN55,212-2 EC: n suhde₅₀ arvo adenylyylisyklaasin inhibitiolle hiirissä, joilla on indusoitu ΔcJun-ilmentymä sen EC: lle₅₀ G-proteiinin aktivaation arvo hiirissä, joilla oli indusoitu AFosB: n ilmentyminen, oli 4.0, kun taas sama suhde hiirissä ilman jommankumman transgeenin induktiota oli 1.2.

Vaihtoehtoisesti kannabinoidit voivat indusoida AFosB: n ilmentymistä ilman suoraa vaikutusta CB: ään₁R-signalointi. Tässä skenaariossa kannabinoidit voivat moduloida muiden lääkkeiden psykoaktiivisia vaikutuksia AFosB-välitteisen transkription säätelyn avulla. minän tosiasiallisesti A: n antaminen⁹-THC tuottaa ristiin herkistymisen opioideille ja amfetamiinille (Cadoni et ai., 2001, Lamarque et ai., 2001), tämän oletuksen mukaisesti. Lisäksi kannabinoidiagonistin CP55,940: n toistuvan annon mukaan ilmoitettiin lisäävän MOR-välitteistä G-proteiinin aktivaatiota NAc: ssä, samoin kuin hiiret, jotka ilmentävät AFosB: tä esillä olevassa tutkimuksessa (Vigano et ai., 2005). ΔFosB: n ilmentymisen vaikutus Δ: hen⁹-THC-välitteistä käyttäytymistä ei ole arvioitu, mutta nykyiset tulokset eivät estä vuorovaikutusta. Tämän ja aiemman tutkimuksen tulokset (Zachariou et ai., 2006) osoittavat ΔFosB-indusoidut muutokset MOR: ssa ja KOR / dynorfii- nissa striatumissa. A: n palkitseva vaikutus⁹-THC, mitattuna paikkatoivomuksella, poistetaan MOR null -hiirissä, kun taas KOR: n deleetio heikentyi A⁹-THC-paikan vastenmielisyys ja paljastui Δ⁹-THC-paikannus (Ghozland et ai., 2002). Samoin ilmastoidun paikan vastenmielisyys A: lle⁹-THC puuttuu pro-dynorfiinipuristuksessa verrattuna villityypin hiiriin (Zimmer et ai., 2001). Nämä tiedot viittaavat siihen, että Δ⁹-THC voi olla palkitsevampi AFosB: n induktion jälkeen ja sen seurauksena MOR-signaloinnin induktio, kun dynorfiinien ilmentyminen vähenee.

Yhteenvetonay, tämän tutkimuksen tulokset osoittivat, että ΔFosB: n ilmentyminen D: ssä₁R / dynorfiinipositiiviset striataaliset neuronit tehostivat MOR- ja KOR-välitteistä signalointia G-proteiinivälitteisen adenylyylisyklaasin aktiivisuuden eston tasolla NAc: ssä. Tämä havainto on yhdenmukainen tutkimusten kanssa, jotka ovat osoittaneet endogeenisen opioidijärjestelmän aseman palkkiona (Trigo, et ai., 2010) ja tarjoavat mahdollisen mekanismin AFosB-välitteisille vaikutuksille palkkioon. Sitä vastoin CB₁Striat-AFosB-ekspressio ei vaikuttanut merkittävästi R-välitteiseen signalointiin NAc: ssä tutkituissa olosuhteissa, vaikkakin lisätutkimukset ovat oikeutettuja määrittämään AFosB-induktion vaikutus endokannabinoidijärjestelmään.

Tutkimuskohdat

MOR-signalointi tehostuu AFosB: tä ilmentävien hiirten ytimessä
KOR-inhibitiota adenylyylisyklaasista tehostetaan myös hiirillä, jotka ilmentävät AFosB: tä
ΔFosB: n ilmentäminen ei muuta CB: ää₁R-signalointi ytimen accumbensissa

Oheismateriaali

01

Klikkaa tästä nähdäksesi.^{(45K, pdf)}

Kiitokset

Kirjoittajat kiittävät Hengjun He, Jordan Cox ja Aaron Tomarchio teknisestä avusta [³⁵S] GTPyS: n sitoutumismääritykset. Tätä tutkimusta tukivat USPHS-apurahat DA014277 (LJS), DA10770 (DES) ja P01 DA08227 (EJN).

alaviitteet

Julkaisijan vastuuvapauslauseke: Tämä on PDF-tiedosto, jota ei ole muokattu käsikirjoitus, joka on hyväksytty julkaistavaksi. Palveluna asiakkaillemme tarjoamme käsikirjoituksen tämän varhaisen version. Käsikirjoitukseen tehdään kopiointi, kirjoittaminen ja saatujen todisteiden tarkastelu, ennen kuin se julkaistaan sen lopullisessa muodossa. Huomaa, että tuotantoprosessin aikana voidaan havaita virheitä, jotka voivat vaikuttaa sisältöön, ja kaikki oikeudelliset vastuuvapauslausekkeet koskevat.

Viitteet

Bozarth MA, Wise RA. Anatomisesti erilliset opiaattireseptorikentät välittävät palkkion ja fyysisen riippuvuuden. Science. 1984;224: 516-517. [PubMed]
Bradford MM. Nopea ja herkkä menetelmä mikrogrammamäärän proteiinin kvantifioimiseksi käyttäen proteiini-väriaineen sitoutumisen periaatetta. Anaali. Biochem. 1976;72: 248-254. [PubMed]
Breivogel CS, Childers SR, Deadwyler SA, Hampson RE, Vogt LJ, Sim-Selley LJ. Krooninen delta⁹-tetrahydrokannabinolihoito saa aikaan ajasta riippuvan kannabinoidireseptorilla aktivoitujen G-proteiinien häviämisen aivoissa. J. Neurochem. 1999;73: 2447-2459. [PubMed]
Breivogel CS, Selley DE, Childers SR. Kannabinoidireseptorin agonistien teho stimuloivana [³⁵S] GTPyS: n sitoutuminen rotan aivoverenkalvoihin korreloi agonistien indusoimien BKT-affiniteetin vähenemisten kanssa. J. Biol. Chem. 1998;273: 16865-16873. [PubMed]
Kadoni C, Pisanu A, Solinas M, Acquas E, Di Chiara G. Käyttäytymisherkistys toistuvan altistumisen jälkeen Delta 9-tetrahydrokannabinolille ja ristiinherkistys morfiinilla. Psykofarmakologia (Berl) 2001;158: 259-266. [PubMed]
Cadoni C, Valentini V, Di Chiara G. Käyttäytymisen herkistyminen delta 9-tetrahydrokannabinolille ja ristiinherkistys morfiinilla: differentiaaliset muutokset akumulaarisessa kuoressa ja dopamiinin ydinsiirrossa. J. Neurochem. 2008;106: 1586-1593. [PubMed]
Chen J, Kelz MB, Zeng G, Sakai N, Steffen C, Shockett PE, Picciotto MR, Duman RS, Nestler EJ. Transgeeniset eläimet, joilla on indusoituva, kohdennettu geeniekspressio aivoissa. Mol. Pharmacol. 1998;54: 495-503. [PubMed]
Childers SR. Opioidireseptoriin kytketyt toiset sanansaattajat. Life Sci. 1991;48: 1991-2003. [PubMed]
Childers SR, Fleming L, Konkoy C, Marckel D, Pacheco M, Sexton T, Ward S. Opioidi ja kannabinoidireseptorin esto adenylyylisyklaasista aivoissa. Ann. NY Acad. Sei. 1992;654: 33-51. [PubMed]
Childers SR, Xiao R, Vogt LJ, Sim-Selley LJ. Kappa-opioidireseptorin stimulaatio [³⁵S] GTPyS: n sitoutuminen marsujen aivoihin: Kappa-todisteiden puute₂-G-proteiinien aktiivinen aktivointi. Biochem. Pharmacol. 1998;56: 113-120. [PubMed]
Clarke S, Zimmer A, Zimmer AM, Hill RG, Kitchen I. Mikro-, delta- ja kappa-opioidireseptorien alueellinen selektiivinen säätely, mutta ei opioidireseptorimaisia 1-reseptoreita enkefaliini- ja dynorfiini-knockout-hiirien aivoissa. Neuroscience. 2003;122: 479-489. [PubMed]
Colby CR, Whisler K, Steffen C, Nestler EJ, Self DW. DeltaFosB: n voimakas solutyyppinen spesifinen yli-ilmentyminen lisää kokaiinin kannustimia. J. Neurosci. 2003;23: 2488-2493. [PubMed]
Gardner EL. Endokannabinoidien merkinantojärjestelmä ja aivojen palkitseminen: painopiste dopamiinille. Pharmacol. Biochem. Behav. 2005;81: 263-284. [PubMed]
Ghozland S, Matthes HW, Simonin F, Filliol D, Kieffer BL, Maldonado R. Kannabinoidien motivoivaa vaikutusta välittävät mu-opioidi- ja kappa-opioidireseptorit. J. Neurosci. 2002;22: 1146-1154. [PubMed]
Herkenham M, Lynn AB, Johnson MR, Melvin LS, de Costa BR, Rice KC. Kannabinoidireseptorien karakterisointi ja lokalisointi rotan aivoissa: kvantitatiivinen in vitro autoradiografinen tutkimus. J. Neurosci. 1991;11: 563-583. [PubMed]
Hohmann AG, Herkenham M. Kannabinoidi-CB (1) -reseptorin mRNA: n lokalisointi rotan striatumin neuronaalisissa subpopulaatioissa: kaksoismerkintä in situ -hybridisaatiotutkimus. Synapsi. 2000;37: 71-80. [PubMed]
Howlett AC, Barth F, Bonner TI, Cabral G, Casellas P, Devane WA, Felder CC, Herkenham M, Mackie K, Martin BR, Mechoulam R, Pertwee RG. Kansainvälinen farmakologian liitto. XXVII. Kannabinoidireseptorien luokittelu. Farmakologinen katsaus. 2002;54: 161-202.
Huestis MA, Gorelick DA, Heishman SJ, Preston KL, Nelson RA, Moolchan ET, Frank RA. CB1-selektiivisen kannabinoidireseptorin antagonistin SR141716: n savustetun marihuanan vaikutusten esto. Kaari. Gen. Psychiatry. 2001;58: 322-328. [PubMed]
Kelz MB, Chen J, Carlezon WA, Jr, Whisler K, Gilden L, Beckmann AM, Steffen C, Zhang YJ, Marotti L, Self DW, Tkatch T, Baranauskas G, Surmeier DJ, Neve RL, Duman RS, Picciotto MR, Nestler EJ. Transkriptiotekijän deltaFosB: n ilmentyminen aivoissa kontrolloi herkkyyttä kokaiinille. Nature. 1999;401: 272-276. [PubMed]
Koob GF, Volkow ND. Riippuvuuden neuropiiri. Neuropsychopharmacology. 2010;35: 217-238. [PMC vapaa artikkeli] [PubMed]
Lamarque S, Taghzouti K, Simon H. Krooninen hoito Delta (9) -tetrahydrokannabinolilla parantaa liikkeen vastetta amfetamiinille ja heroiinille. Vaikutukset huumeriippuvuuteen. Neuropharmacology. 2001;41: 118-129. [PubMed]
Maldonado R, Valverde O, Berrendero F. Endokannabinoidijärjestelmän osallistuminen huumeriippuvuuteen. Trendit Neurosci. 2006;29: 225-232. [PubMed]
Mansour A, Fox CA, Thompson RC, Akil H, Watson SJ. mu-opioidireseptorin mRNA: n ilmentyminen rotan CNS: ssä: vertailu mu-reseptorin sitoutumiseen. Brain Res. 1994;643: 245-265. [PubMed]
Matthes HWD, Maldonado R, Simonin F, Valverde O, Slowe S, keittiö I, Befort K, Dierich A, LeMeur M, Dolle P, Tzavara E, Hanoune J, Roques BP, Kieffer BL. Morfiinin aiheuttaman analgesian, palkitsemisvaikutuksen ja vieroitusoireiden menetys hiirissä, joilta puuttuu µ-opioidireseptorigeeni. Nature. 1996;383: 819-823. [PubMed]
McClung CA, Nestler EJ. CREB: n ja DeltaFosB: n geenien ilmentymisen ja kokaiinipalkinnon säätäminen. Nat. Neurosci. 2003;6: 1208-1215. [PubMed]
McClung CA, Ulery PG, Perrotti LI, Zachariou V, Berton O, Nestler EJ. DeltaFosB: molekyylikytkin aivojen pitkäaikaiseen sopeutumiseen. Brain Res. Mol. Brain Res. 2004;132: 146-154. [PubMed]
Muller DL, Unterwald EM. D1-dopamiinireseptorit moduloivat deltaFosB-induktiota rotan striatumissa ajoittaisen morfiinin antamisen jälkeen. J. Pharmacol. Exp. Ther. 2005;314: 148-154. [PubMed]
Nestler EJ. Arvostelu. Riippuvuuden transkriptionaaliset mekanismit: DeltaFosB: n rooli. Philos. Trans. R. Soc. Lond. B. Biol. Sei. 2008;363: 3245-3255. [PMC vapaa artikkeli] [PubMed]
Nestler EJ, Kelz MB, Chen J. DeltaFosB: pitkäaikaisen hermoston ja käyttäytymisen plastisuuden molekulaarinen välittäjä. Brain Res. 1999;835: 10-17. [PubMed]
Nye HE, Hope BT, Kelz MB, Iadarola M, Nestler EJ. Farmakologiset tutkimukset kokaiinin kroonisen FOS: een liittyvän antigeenin induktion säätelystä striatumissa ja ytimessä. J. Pharmacol. Exp. Ther. 1995;275: 1671-1680. [PubMed]
Peakman MC, Colby C, Perrotti LI, Tekumalla P, Carle T, Ulery P, Chao J, Duman C, Steffen C, Monteggia L, Allen MR, Stock JL, Duman RS, McNeish JD, Barrot M, Self DW, Nestler EJ , Schaeffer E. Inducible, c-Junin dominoivan negatiivisen mutantin aivojen alueen spesifinen ilmentyminen siirtogeenisissä hiirissä vähentää herkkyyttä kokaiinille. Brain Res. 2003;970: 73-86. [PubMed]
Perrotti LI, Weaver RR, Robison B, Renthal W, Maze I, Yazdani S, Elmore RG, Knapp DJ, Selley DE, Martin BR, Sim-Selley L, Bachtell RK, Self DW, Nestler EJ. DeltaFosB: n induktiokohtia aivoissa väärinkäytösten avulla. Synapsi. 2008;62: 358-369. [PMC vapaa artikkeli] [PubMed]
Robbe D, Alonso G, Duchamp F, Bockaert J, Manzoni OJ. Kannabinoidireseptorien lokalisointi ja vaikutusmekanismit hiiren ytimen glutamatergisiin synapseihin. J. Neurosci. 2001;21: 109-116. [PubMed]
Salomon Y. Adenylate cyclase -määritys. Adv. Syklinen nukleotidi Res. 1979;10: 35-55. [PubMed]
Selley DE, Sim LJ, Xiao R, Liu Q, Childers SR. Mu opioidireseptorilla stimuloitu [³⁵S] GTPyS: n sitoutuminen rotan thalamukseen ja viljeltyihin solulinjoihin: Signaalin transduktiomekanismit, jotka ovat agonistin tehokkuuden taustalla. Mol. Pharmacol. 1997;51: 87-96. [PubMed]
Trigo JM, Martin-Garcia E, Berrendero F, Robledo P, Maldonado R. Endogeeninen opioidijärjestelmä: yleinen substraatti huumeriippuvuudessa. Huumeiden alkoholiriippuvuus. 2010;108: 183-194. [PubMed]
Unterwald EM, Knapp C, Zukin RS. Κ1- ja κ2-opioidireseptorien neurofysiologinen lokalisointi rotilla ja marsu-aivoissa. Brain Res. 1991;562: 57-65. [PubMed]
Vaccarino FJ, Bloom FE, Koob GF. Ydinaseiden tukkeutuminen opiaattireseptoreihin heikentää heroiinin suonensisäistä palkkiota rotalla. Psykofarmakologia (Berl) 1985;86: 37-42. [PubMed]
Vigano D, Rubino T, Vaccani A, Bianchessi S, Marmorato P, Castiglioni C, Parolaro D. Molekyylimekanismit, jotka liittyvät kannabinoidin ja opioidijärjestelmien väliseen epäsymmetriseen vuorovaikutukseen. Psykofarmakologia (Berl) 2005;182: 527-536. [PubMed]
Zachariou V, Bolanos CA, Selley DE, Theobald D, Cassidy MP, Kelz MB, Shaw-Lutchman T, Berton O, Sim-Selley LJ, Dileone RJ, Kumar A, Nestler EJ. DeltaFosB: n olennainen rooli morfiinitoiminnassa olevissa ytimissä. Nat. Neurosci. 2006;9: 205-211. [PubMed]
Zangen A, Solinas M, Ikemoto S, Goldberg SR, Wise RA. Kaksi aivosivustoa kannabinoidipalkinnon saamiseksi. J. Neurosci. 2006;26: 4901-4907. [PubMed]
Zhu J, Luo LY, Li JG, Chen C, Liu-Chen LY. Kloonatun ihmisen kappa-opioidireseptorin aktivointi agonistien avulla tehostaa [35S] GTPyS: n sitoutumista kalvoihin: ligandien voimakkuuksien ja tehokkuuksien määrittäminen. J. Pharmacol. Exp. Ther. 1997;282: 676-684. [PubMed]
Zimmer A, Valjent E, Konig M, Zimmer AM, Robledo P, Hahn H, Valverde O, Maldonado R. Delta-9-tetrahydrokannabinolin dysfooristen vaikutusten puuttuminen dynorfiinipuutteisissa hiirissä. J. Neurosci. 2001;21: 9499-9505. [PubMed]
Zimmer A, Zimmer AM, Hohmann AG, Herkenham M, Bonner TI. Lisääntynyt kuolleisuus, hypoaktiivisuus ja hypoalgesia kannabinoidin CB1-reseptorin knockout-hiirissä. Proc. Natl. Acad. Sei. Yhdysvallat 1999;96: 5780-5785. [PMC vapaa artikkeli] [PubMed]