जे न्यूरोकैम। 2014 जनवरी; 128 (1): 173-85। doi: 10.1111 / jnc.12381। एपब एक्सएनयूएमएक्स एक्स एक्सएनयूएमएक्स।
लियू क्यूआर1, रुबियो एफ.जे., बोसटर जे.एम., मर्चेंट एनजे, फैन एस, होउ एक्स, शहम य, आशा है कि बी.टी..
सार
मेथमफेटामाइन और अन्य दवाएं मस्तिष्क में सभी न्यूरॉन्स के एक छोटे से अनुपात को सक्रिय करती हैं। हमने पहले एक प्रतिदीप्ति-सक्रिय सेल छँटाई (एफएसीएस)-आधारित विधि विकसित की, जो सक्रिय न्यूरॉन्स में चुनिंदा रूप से प्रेरित आणविक परिवर्तनों को चिह्नित करने के लिए तंत्रिका गतिविधि मार्कर फॉस को व्यक्त करता है। हालांकि, इस विधि में कई चूहों से पूलिंग नमूनों की आवश्यकता होती है। अब हम एक मल्टीप्लेक्स पूर्व-प्रवर्धन रणनीति का उपयोग करके एक ही चूहे से फॉस-एक्सप्रेसिंग पृष्ठीय स्ट्राइटल न्यूरॉन्स में आणविक परिवर्तनों को चिह्नित करने के लिए एक संशोधित एफएसीएस-आधारित विधि का वर्णन करते हैं।
Fos और NeuN (एक न्यूरोनल मार्कर) इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री से संकेत मिलता है कि पृष्ठीय स्ट्रेटम न्यूरॉन्स का 5-6% तीव्र मेथामफेटामाइन इंजेक्शन (90 मिलीग्राम / किग्रा, आईपी) के बाद 5 मिनट सक्रिय किया गया था, जबकि 0.5% से कम न्यूरॉन्स का XNUMX% खारा इंजेक्शन द्वारा सक्रिय किया गया था।
हमने FACS का उपयोग न्यूरो-लेबल वाले न्यूरॉन्स को फॉस-पॉजिटिव और फॉस-नेगेटिव न्यूरॉन्स में अलग करने के लिए किया और आरटी-क्यूपीसीआर का उपयोग करते हुए mRNA अभिव्यक्ति का मूल्यांकन किया, जिसमें से पांच फोज पॉजिटिव न्यूरॉन्स थे। मेथमफेटामाइन प्रेरित 3-20- गुना प्रारंभिक प्रारंभिक जीन आर्क, होमर-एक्सएनयूएमएक्स, सी-फॉस, एफओएसबी और इसके आइसोफॉर्म (ΔfosB और एक उपन्यास isoform osfosB-2) फॉस-पॉजिटिव में लेकिन फॉस-नेगेटिव न्यूरॉन्स नहीं। तत्काल प्रारंभिक जीन एमआरएनए इंडक्शन एक्सएनयूएमएक्स-गुना कम या अनुपस्थित था, जब एकल पृष्ठीय स्ट्रेटम होमोजिनेट्स से अनसोल्ड नमूनों में मूल्यांकन किया गया था। हमारा संशोधित तरीका जटिल नशे के मॉडल में ड्रग्स या ड्रग से जुड़े संकेतों द्वारा सक्रिय न्यूरॉन्स में अद्वितीय आणविक परिवर्तनों का अध्ययन करने के लिए संभव बनाता है।
मेथमफेटामाइन और अन्य दवाएं मस्तिष्क में सभी न्यूरॉन्स के एक छोटे से अनुपात को सक्रिय करती हैं। हम यहां सक्रिय न्यूरॉन्स में चुनिंदा रूप से प्रेरित आणविक परिवर्तनों को चिह्नित करने के लिए एक बेहतर विधि की रिपोर्ट करते हैं जो तंत्रिका गतिविधि मार्कर Fos को व्यक्त करते हैं। हमने एक ही चूहे पृष्ठीय स्ट्रेटम से 5 Fos-expressing न्यूरॉन्स के रूप में कुछ से तीव्र methamphetamine प्रेरित जीन अभिव्यक्ति का आकलन करने के लिए लक्षित PCR पूर्व प्रवर्धन के साथ FACS का इस्तेमाल किया। Methamphetamine ने 3-20- गुना को फॉस-पॉजिटिव नहीं बल्कि फॉस-पॉजिटिव न्यूरॉन्स में तत्काल प्रारंभिक जीन (IEG) की वृद्धि को प्रेरित किया। लक्षित पीसीआर पूर्व-प्रवर्धन जटिल लत वाले मॉडल में दवाओं या ड्रग से जुड़े संकेतों द्वारा सक्रिय न्यूरॉन्स में अद्वितीय आणविक परिवर्तनों का अध्ययन करने के लिए संभव बनाता है।
प्रकाशित 2013 यह लेख यूएस सरकार का काम है और यूएसए में सार्वजनिक डोमेन में है।
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