नाभिक accumbens (2011) में opioid और कैनाबिनॉइड रिसेप्टर-मध्यस्थता संकेतन पर overFosB overexpression का प्रभाव

Neuropharmacology। 2011 Dec;61(8):1470-6. doi: 10.1016/j.neuropharm.2011.08.046.

सिम-सेलेली एलजे, कैसिडी के सांसद, स्पार्टा ए, जचारीऊ वी, नेस्टलर ईजे, सेले डे.

स्रोत

फार्माकोलॉजी और विष विज्ञान और औषधि और अल्कोहल अध्ययन विभाग, वर्जीनिया कॉमनवेल्थ यूनिवर्सिटी स्कूल ऑफ मेडिसिन, रिचमंड, VA 23298, संयुक्त राज्य अमेरिका।

सार

स्थिर प्रतिलेखन कारक osFosB नाभिक accumbens (NAc) में दुरुपयोग की कई दवाओं के क्रोनिक एक्सपोजर से प्रेरित है, और स्ट्रेटम में osFosB की ट्रांसजेनिक अभिव्यक्ति मॉर्फिन और कोकेन के पुरस्कृत गुणों को बढ़ाती हैई। हालाँकि, इन टिप्पणियों के लिए यंत्रवत आधार को अधूरा समझा जाता है। हम में BFosB की अमिट अभिव्यक्ति के साथ एक बिट्रेंजेनिक माउस मॉडल का इस्तेमाल किया डोपामाइन D (1) रिसेप्टर / dynorphin युक्त स्ट्रिपल न्यूरॉन्स opcid और cannabinoid रिसेप्टर NAc में संकेतन पर expressionFosB अभिव्यक्ति के प्रभाव को निर्धारित करने के लिए। परिणामों से पता चला है कि म्यू opioid की मध्यस्थता जी-प्रोटीन गतिविधि और adenylyl चक्रवात के निषेध wereFosB व्यक्त चूहों के NAc में बढ़ाया गया था। इसी तरह, एडीनिल साइक्लेज के कप्पा ओपिओइड निषेध को ΔFosB व्यक्त चूहों में बढ़ाया गया था. इसके विपरीत, कैनाबिनॉइड रिसेप्टर-मध्यस्थता संकेतन canFosB और नियंत्रण चूहों overexpressing चूहों के बीच अलग नहीं था। Tहेज़ निष्कर्ष बताते हैं कि ओपिओइड और कैनाबिनोइड रिसेप्टर सिग्नलिंग modFosB की अभिव्यक्ति द्वारा अलग-अलग रूपांतरित किए जाते हैं, और यह संकेत देते हैं कि osFosB अभिव्यक्ति एनएसी में बढ़ाया म्यू और कप्पो ओपियोड रिसेप्टर सिग्नलिंग के माध्यम से इसके कुछ प्रभाव पैदा कर सकता है।

कीवर्ड: जी-प्रोटीन, एडिनिल साइक्लेज, स्ट्रिएटम
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1. परिचय

ओपियोइड रिसेप्टर्स और कैनबिनोइड सीबी1 रिसेप्टर्स (सीबी)1आर) दो व्यापक रूप से इस्तेमाल की जाने वाली दवा वर्गों के लिए न्यूरोबायोलॉजिकल लक्ष्य हैं जिनमें मॉर्फिन, हेरोइन और प्रिस्क्रिप्शन ओपिओइड और मारिजुआना शामिल हैं (u9-tetrahydrocannabinol (THC)), क्रमशः। ओपिओइड और कैनाबिनोइड के तीव्र प्रभाव को जी-प्रोटीन-युग्मित रिसेप्टर्स द्वारा मध्यस्थ किया जाता है जो मुख्य रूप से जी को सक्रिय करते हैंआई / ओ प्रोटीन और डाउनस्ट्रीम प्रभावकार प्रतिक्रियाएं जैसे कि एडेनिल साइक्लेज़ का निषेध (बालकों, एक्सएनयूएमएक्स, चाइल्डर्स, एट अल।, एक्सएनयूएमएक्स, हॉवलेट, एट अल।, एक्सएनयूएमएक्स)। मोटर, मेमोरी ख़राब होना और air का साइकोएक्टिव प्रभाव9-THC CB द्वारा निर्मित हैं1आर (ह्यूस्टिस, एट अल।, एक्सएनयूएमएक्स, ज़िमर, एट अल।, एक्सएनयूएमएक्स), जो मस्तिष्क में व्यापक रूप से वितरित होते हैं, बेसल गैन्ग्लिया, हिप्पोकैम्पस और सेरिबैलम में उच्च स्तर के साथ (हेरकेनहैम, एट अल।, एक्सएनयूएमएक्स)। अधिकांश चिकित्सकीय रूप से प्रासंगिक और दुर्व्यवहार करने वाली ओपिओइड दवाओं के एनाल्जेसिक और पुरस्कृत प्रभाव मुख्य रूप से म्यू ओपियोड रिसेप्टर्स (एमओआर) (मैथ्स, एट अल।, एक्सएनयूएमएक्स), जो लिम्बिक सिस्टम और ब्रेनस्टेम में समृद्ध हैं (मंसूर, एट अल।, एक्सएनयूएमएक्स)। मेसोलेम्बिक प्रणाली, वेंट्रल टेक्टेलल क्षेत्र (वीटीए) से न्यूक्लियस एक्चुम्बेंस (एनएसी) तक डोपामिनर्जिक अनुमानों से बना, ओपिओइड और कैनाबिड्स के पुरस्कृत प्रभावों में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाता हैBozarth और समझदार, 1984, वैकारिनो, एट अल।, एक्सएनयूएमएक्स, ज़ंगेन, एट अल।, एक्सएनयूएमएक्स), साथ ही साथ दुर्व्यवहार की अन्य दवाएं (कोब और वोल्को, एक्सएनयूएमएक्स)। इसके अलावा, अंतर्जात opioid और cannabinoid सिस्टम साइकोएक्टिव दवाओं के कई वर्गों के पुरस्कृत प्रभावों में शामिल हैं (माल्डोनाडो, एट अल।, एक्सएनयूएमएक्स, ट्रिगो, एट अल।, एक्सएनयूएमएक्स)। इस प्रकार, यह तंत्र महत्वपूर्ण है जिसके द्वारा ओपिओइड और सीबी1आरए सिग्नलिंग को NAC में विनियमित किया जाता है।

नशीली दवाओं के दुरुपयोग के क्षेत्र में एक केंद्रीय सवाल उन प्रोटीनों की पहचान करने का रहा है जो साइकोएक्टिव दवाओं के तीव्र से दीर्घकालिक प्रभावों के लिए संक्रमण का मध्यस्थता करते हैं। AP-1 प्रतिलेखन कारक BFosB विशेष रूप से दिलचस्प है क्योंकि यह एक स्थिर छंटनी बंटवारे का है fosb जीन जो दुरुपयोग या प्राकृतिक पुरस्कार की दवाओं के बार-बार संपर्क में आने पर जमा होता है (McClung, et al।, 2004, नेस्लर, 2008, नेस्लर, एट अल।, एक्सएनयूएमएक्स). हमने पाया है कि ΔFosB को मॉर्फिन के बार-बार संपर्क के बाद मस्तिष्क में प्रेरित किया जाता है, Δ9-THC, कोकीन या इथेनॉल, प्रत्येक दवा के साथ ,FosB अभिव्यक्ति का एक अनूठा क्षेत्रीय पैटर्न तैयार करता है (पेरोट्टी, एट अल।, एक्सएनयूएमएक्स)। ड्रग्स के पार एक सुसंगत खोज यह थी कि स्ट्रैटम में osFosB अत्यधिक प्रेरित था, जहाँ सभी चार ड्रग्स NAC कोर में ΔFosB से प्रेरित थे और सभी को छोड़कर9एनएचसी शेल और कॉडेट-पुटमेन में -THC ने काफी प्रेरित अभिव्यक्ति दी।

औषधीय अध्ययनों से पता चला कि डोपामाइन डी का सह-प्रशासन1 रिसेप्टर (D)1R) प्रतिपक्षी SCH 23390 ने NA और caudate-putamen में आंतरायिक कोकेन या मॉर्फिन प्रशासन के बाद osFosB इंडक्शन को अवरुद्ध किया, डी के संभावित महत्व का सुझाव दिया।1आर-व्यक्त न्यूरॉन्स (मुलर और अनटेरवल्ड, एक्सएनयूएमएक्स, एनईई, एट अल।, एक्सएनयूएमएक्स)। ड्रग-मध्यस्थ व्यवहारों पर BFosB प्रेरण के प्रभाव की जांच बिट्रैसजेनिक चूहों का उपयोग करके की गई है जो andFosB को NAc और पृष्ठीय स्ट्रिएटम की विशिष्ट न्यूरोनल आबादी में व्यक्त करते हैं (चेन, एट अल।, एक्सएनयूएमएक्स)। चूहे जो dynorphin / D में osFosB व्यक्त करते हैं1NAc और पृष्ठीय स्ट्रिएटम (लाइन 11A) में सकारात्मक न्यूरॉन्स दुरुपयोग की दवाओं के लिए परिवर्तित प्रतिक्रियाएं दिखाते हैं, कोकीन या मॉर्फिन के पुरस्कृत प्रभावों के लिए उल्लेखनीय रूप से बढ़ाया संवेदनशीलता (कोल्बी, एट अल।, एक्सएनयूएमएक्स, केलज़, एट अल।, एक्सएनयूएमएक्स, ज़चारीउ, एट अल।, एक्सएनयूएमएक्स)। ये परिवर्तन एमओआर या विभिन्न जी-प्रोटीन सबयूनिट्स के स्तरों में परिवर्तन के अभाव में हुए। हालांकि, चूहों को व्यक्त करने वाले ynFosB के NAc में डायनोर्फिन mRNA का स्तर कम हो गया था औरज़चारीउ, एट अल।, एक्सएनयूएमएक्स), सुझाव है कि osFosB का एक लक्ष्य एक अंतर्जात opioid पेप्टाइड एन्कोडिंग जीन है। ΔFosB इंडक्शन NAC में रिसेप्टर सिग्नलिंग को विनियमित करके व्यवहार परिवर्तन भी कर सकता है, लेकिन इस संभावना की जांच नहीं की गई है। इसलिए, वर्तमान अध्ययनों ने बिट्रोजेनिक माउस मॉडल का उपयोग यह निर्धारित करने के लिए किया कि क्या डायनोरिन / डी में BFosB का ओवरएक्प्रेशन है1स्ट्राइटल न्यूरॉन्स युक्त MOR- मध्यस्थता G- प्रोटीन गतिविधि और MOR- और KOR-मध्यस्थता वाले एडेनिल चक्रवात निषेध को NAc में बदल देता है। सीबी पर BFosB का प्रभाव1आर-मध्यस्थता जी-प्रोटीन गतिविधि का भी मूल्यांकन किया गया क्योंकि G9-CC प्रशासन NAC में BFosB को प्रेरित करता है (पेरोट्टी, एट अल।, एक्सएनयूएमएक्स) और ब्रेन रिवार्ड सर्किट को विनियमित करने के लिए एंडोकैनाबिनॉइड सिस्टम को जाना जाता है (गार्डनर, एक्सएनयूएमएक्स, माल्डोनाडो, एट अल।, एक्सएनयूएमएक्स), लेकिन एंडोकैनाबिनोइड सिस्टम पर BFosB के प्रभाव की जांच नहीं की गई है।

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2। सामग्री और तरीके

2.1। अभिकर्मकों

[35S] GTP mmS (1250 Ci / mmol), [α-32P] ATP (800 Ci / mmol) और [3H] cAMP (26.4 Ci / mmol) PerkinElmer (शेल्टन, CT) से खरीदे गए थे। एटीपी, जीटीपी, जीडीपी, सीएमपी, गोजातीय सीरम एल्ब्यूमिन, क्रिएटिन फॉस्फोकाइनेज, पैपावेरिन, इमिडाज़ोल और विन-एक्सएनयूएमएक्स-एक्सएनयूएमएक्स को सिग्मा एल्ड्रिच (सेंट लुइस, एमओ) से खरीदा गया था। GTP GS को Roche Diagnostic Corporation (Chicago, IL) से खरीदा गया था। DAMGO को ड्रग एब्यूज़ (रॉकविले, एमडी) के राष्ट्रीय संस्थान के ड्रग सप्लाई प्रोग्राम द्वारा प्रदान किया गया था। फिशर साइंटिफिक (नॉरक्रॉस, जीए) से इकोनो-एक्सएनयूएमएक्स स्किन्टिलेशन तरल पदार्थ प्राप्त किया गया था। इकोलाइट स्किन्टिलेशन तरल पदार्थ ICN (कोस्टा मेसा, CA) से प्राप्त किया गया था। अन्य सभी रसायन सिग्मा एल्ड्रिच या फिशर साइंटिफिक से प्राप्त किए गए थे।

2.2। चूहे

NSE-tTA (लाइन A) × TetOp-ΔFosB (लाइन 11) से प्राप्त पुरुष बिट्रेंजेनिक चूहों को केल्ज़ एट अल में वर्णित किया गया था। (केलज़, एट अल।, एक्सएनयूएमएक्स)। बिट्रेजेनिक चूहों की कल्पना की गई और ट्रांसजीन अभिव्यक्ति को दबाने के लिए डॉक्सीसाइक्लिन (पीने के पानी में 100 ing) पर उठाया गया। 8 सप्ताह की उम्र में, डॉक्सीसाइक्लिन को ट्रांसजीन अभिव्यक्ति की अनुमति देने के लिए चूहों के आधे हिस्से के लिए पानी से छोड़ा गया था, जबकि शेष चूहों को ट्रांसजेन को दबाने के लिए डॉक्सीसाइक्लिन पर बनाए रखा गया था। सप्ताह बाद 8 को एकत्र किया गया, जिस समय collectedFosB के पारगमन प्रभाव अधिकतम होते हैं (मैकक्लब और नेस्लर, एक्सएनयूएमएक्स)। एक दूसरी ट्रांसजेनिक माउस लाइन का उपयोग किया गया था जिसमें Junc-Jun, सी-जून के एक प्रमुख नकारात्मक विरोधी, डी में व्यक्त किया गया है।1आर / डायनोर्फिन और डी2स्ट्रेटम, हिप्पोकैम्पस और पार्श्विका कॉर्टेक्स के आर / एन्केफालिन कोशिकाएंपीकमैन, एट अल।, एक्सएनयूएमएक्स)। सी-जून और संबंधित जून परिवार के प्रोटीन फॉस परिवार के प्रोटीन के साथ मंद हो जाते हैं और प्रतिलेखन को विनियमित करने के लिए लक्ष्य जीन के एपी-एक्सएनयूएमएक्स साइट से जुड़ जाते हैं। हालांकि, c-Jun (Junc-Jun) के एन-टर्मिनस का ट्रंकेशन जटिल ट्रांसक्रिप्शनल रूप से निष्क्रिय है और सक्रिय AP-1 परिसरों के डीएनए बाइंडिंग को बाधित करने में सक्षम है। NSE-tTA (लाइन A) × TetOp-FLAG-Δc-Jun (लाइन ई) से प्राप्त पुरुष बिट्रान्सजेनिक चूहों को पीकमान एट अल में वर्णित के रूप में उत्पन्न किया गया था। (पीकमैन, एट अल।, एक्सएनयूएमएक्स)। बिट्रेजेनिक चूहों की कल्पना की गई और ट्रांसजीन अभिव्यक्ति को दबाने के लिए डॉक्सीसाइक्लिन (पीने के पानी में 100 ing) पर उठाया गया। पिल्ले 3 सप्ताह में जीनोटाइप किए गए, और समूहों में अलग हो गए, जिनमें से आधा डॉक्साइक्लिन युक्त पानी पर और आधा नियमित पीने के पानी पर बनाए रखने के लिए FLAG--c-Jun अभिव्यक्ति को प्रेरित करता है। सप्ताह बाद 6 को एकत्र किया गया, जिस समय FLAG--c-Jun का अधिकतम स्तर मापा गया है (पीकमैन, एट अल।, एक्सएनयूएमएक्स)। प्रयोगशाला जानवरों की देखभाल और उपयोग के लिए राष्ट्रीय पशु स्वास्थ्य गाइड के अनुसार सभी पशु प्रक्रियाओं का संचालन किया गया था।

2.3। झिल्ली तैयार करना

परख के दिन तक दिमाग were80 ° C पर जमा हो जाता था। परख से पहले, प्रत्येक मस्तिष्क को पिघलाया गया था, और NAc को बर्फ पर विच्छेदित किया गया था। प्रत्येक नमूने को 50 mM Tris-HCl, 3 mM MgCl में समरूप किया गया था2, एक्सएनयूएमएक्स एमएम ईजीटीए, पीएच एक्सएनयूएमएक्स (झिल्ली बफर) एक्सएनयूएमएक्स डिग्री सेल्सियस पर एक ग्लास होमोजिनेज़र से स्ट्रोक करता है। समरूप 1 × पर अपकेंद्रित्र किया गया था g 4 ° C के लिए 10 मिनट पर, झिल्ली बफ़र में resuspended, 48,000 × पर फिर से centrifuged g 4 ° C के लिए 10 मिनट और 50 mM ट्रिस-एचसीएल, 3 mM MgCl में resuspended2, 0.2 mM EGTA, 100 mM NaCl, pH 7.4 (परख बफर)। ब्रैडफोर्ड की विधि द्वारा प्रोटीन का स्तर निर्धारित किया गया था (ब्रैडफोर्ड, एक्सएनयूएमएक्स) मानक के रूप में गोजातीय सीरम एल्ब्यूमिन (बीएसए) का उपयोग करना।

2.4। एगोनिस्ट-उत्तेजित35S] GTPγ बाइंडिंग

झिल्ली परख बफर में adenosine deaminase (10 म्यू / एमएल) के साथ 30 डिग्री सेल्सियस पर 3 मिनट के लिए पूर्व-ऊष्मायन किया गया था। मेम्ब्रेंस (5-10 )g प्रोटीन) तब 2 ° C पर 30 ° C के लिए ऊष्मायन किया गया था जिसमें 0.1% (w / v) BSA, 0.1 nM [35S] GTPµS, 30 andM जीडीपी और एडेनोसिन डेमिनमिनस (3 mU / ml) DAMGO या WIN55,212-2 की उचित सांद्रता के साथ और बिना। गैर-बाध्यकारी बाइंडिंग को 20 γM GTP .S के साथ मापा गया था। ऊष्मायन को GF / B ग्लास फाइबर फिल्टर के माध्यम से निस्पंदन द्वारा समाप्त किया गया था, इसके बाद 3 washes के साथ 3 मिलीलीटर बर्फ-ठंडा 50 mM ट्रिस-एचसीएल, पीएच 7.4। Econo-1 जगमगाहट तरल पदार्थ में रातोंरात निष्कर्षण के बाद तरल रेडियोधर्मी स्पेक्ट्रोफोटोमेट्री द्वारा बाध्य रेडियोधर्मिता का निर्धारण किया गया था।

2.5। एडेनिल साइक्लस परख

मेम्ब्रेंस (5 – 25 wereg प्रोटीन) को ऊपर वर्णित के अनुसार एडेनोसाइन डेमिनमिन के साथ पूर्वनिर्धारित किया गया था, फिर 15 ° C पर 30 मिनट के लिए ऊष्मायन या 1µM forskolin की अनुपस्थिति में, DAMGO, U50,488H या Win55,212 या Win2N की उपस्थिति या अनुपस्थिति में 50 ATM एटीपी, [α-32P] ATP (1.5 ATCi), 0.2 mM DTT, 0.1% (w / v) BSA, 50 licM चक्रीय AMP, 50 G GTP, 0.2 mM पापोफरीन, 5 mM फॉस्फोसिन, 20, 3 / एमएल) 100 .l के एक अंतिम मात्रा में। इन शर्तों के तहत, कुल [α-32पी] सीएमपी बरामद आम तौर पर जोड़े गए [α- की कुल राशि के 1% से कम था32पी] प्रत्येक नमूने में एटीपी। 3 मिनट और के लिए उबालने से प्रतिक्रिया समाप्त हो गई थी [32पी] चक्रीय एएमपी को सॉलोमन की दोहरी कॉलम (डॉवेक्स और एल्यूमिना) विधि द्वारा अलग किया गया था (सॉलोमन, एक्सएनयूएमएक्स)। [3H] cAMP (10,000 dpm) को कॉलम क्रोमैटोग्राफी से पहले प्रत्येक ट्यूब में आंतरिक मानक के रूप में जोड़ा गया था। रेडियोधर्मिता का निर्धारण तरल स्किन्टिलेशन स्पेक्ट्रोफोटोमेट्री (45% दक्षता) के लिए किया गया था 3एच) के बाद एक्सान के एक्सएनयूएमएक्स मिलीलीटर को इकोलाइट स्किन्टिलेशन तरल पदार्थ के एक्सएनयूएमएक्स एमएल में भंग कर दिया गया था।

2.6। डेटा विश्लेषण

जब तक अन्यथा संकेत नहीं दिया जाता है, तब तक डेटा को मीन वैल्यू के रूप में सूचित किया जाता है X SE ऑफ 4-8 अलग-अलग प्रयोग, जिनमें से प्रत्येक को तीन प्रतियों में किया गया था। नेट-उत्तेजित [35S] GTP -S बाइंडिंग की गणना एगोनिस्ट-स्टिमुलेटेड बाइंडिंग माइनस बेसल बाइंडिंग के रूप में की जाती है। नेट फोरस्कॉलिन-उत्तेजित एडेनिल साइक्लेज़ गतिविधि को फ़ोरस्कॉलिन-उत्तेजित गतिविधि - बेसल गतिविधि (pmol / mg / min) के रूप में परिभाषित किया गया है। फोरस्किन-उत्तेजित एडेनिल साइक्लेज़ गतिविधि का प्रतिशत निषेध परिभाषित किया गया है (एगोनिस्ट की अनुपस्थिति में नेट फोरस्किन-उत्तेजित गतिविधि - एगोनिस्ट की अनुपस्थिति में एगोनिस्ट या नेट टॉस्कोलिन-उत्तेजित गतिविधि की उपस्थिति में नेट फोरस्किन-उत्तेजित गतिविधि × एक्सन्यूम्एक्स)। प्रिज्म 100c (ग्राफपैड सॉफ्टवेयर, इंक।, सैन डिएगो, सीए) का उपयोग करके सभी वक्र-फिटिंग और सांख्यिकीय विश्लेषण किए गए थे। चुनाव आयोग द्वारा प्राप्त करने के लिए गैर-रेखीय प्रतिगमन द्वारा एकाग्रता-प्रभाव घटता का विश्लेषण किया गया था50 और ईमैक्स मान। एकाग्रता-प्रभाव डेटा का सांख्यिकीय महत्व मुख्य कारकों के रूप में एगोनिस्ट खुराक और जीन प्रेरण (ऑन या ऑफ) का उपयोग करके विचरण (एनोवा) के दो-तरफा विश्लेषण द्वारा निर्धारित किया गया था। वक्र-फिट मानों का सांख्यिकीय महत्व (ईमैक्स या ईसी50) गैर-युग्मित दो-पूंछ वाले छात्र के टी-टेस्ट द्वारा निर्धारित किया गया था, ईसी में वेल्च सुधार या डेटा के वर्गमूल परिवर्तन का उपयोग करके जहां असमान भिन्नताओं (एफ-टेस्ट द्वारा पता लगाया गया) के लिए सही करना आवश्यक था।50 मूल्यों.

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3. परिणाम

3.1। ओपिओइड और कैनाबिनोइड रिसेप्टर-मध्यस्थता जी-प्रोटीन सक्रियण पर ofFBB अभिव्यक्ति का प्रभाव

यह निर्धारित करने के लिए कि एमओआर- या सीबी1आर-मध्यस्थता जी-प्रोटीन सक्रियण को NAC, एगोनिस्ट-उत्तेजित [BFosB में ciFosB की प्रेरक ट्रांसजेनिक अभिव्यक्ति द्वारा बदल दिया गया था]35S] GTPranS बाइंडिंग की जांच इस क्षेत्र के बिट्रेनजेनिक चूहों के सशर्त रूप से व्यक्त (esFosB पर) या नहीं व्यक्त ()FosB) BFosB ट्रांसजेन के इस क्षेत्र से तैयार की गई झिल्ली में की गई। MOR- चयनात्मक enkephalin अनुरूप DAMGO का उपयोग MOR को सक्रिय करने के लिए किया गया था और कैनबिनोइड अमीनोआकैलिंडोल Win55,212-2 का उपयोग CB को सक्रिय करने के लिए किया गया था1आर। इन ligands को पहले MOR और CB में पूर्ण एगोनिस्ट के रूप में दिखाया गया था1आर, क्रमशः (ब्रेवोगेल, एट अल।, एक्सएनयूएमएक्स, सेले, एट अल।, एक्सएनयूएमएक्स)। KOR की मध्यस्थता वाली G- प्रोटीन गतिविधि की जांच करना संभव नहीं था क्योंकि कृंतक मस्तिष्क में संकेत बहुत कम है (चाइल्डर्स, एट अल।, एक्सएनयूएमएक्स)। परिणामों ने DAMGO और WIN55,122-2 दोनों में G-प्रोटीन गतिविधि की एकाग्रता-निर्भर उत्तेजना को NAC में osFosB ऑफ और BFosB पर चूहों (चित्रा 1)। DAMGO- उत्तेजित गतिविधि के लिए (चित्रा 1A), एकाग्रता-प्रभाव डेटा के दो-तरफ़ा एनोवा ने -FosB स्थिति (p <0.0001, F = 22.12, df = 1) और DAMGO एकाग्रता (p <0.0001, F = 29.65 = .5, df = 0.857) का कोई प्रभाव नहीं होने के महत्वपूर्ण प्रभावों का पता लगाया। महत्वपूर्ण बातचीत (पी = 0.387, एफ = 5, डीएफ = XNUMX)। एकाग्रता-प्रभाव घटता के nonlinear प्रतिगमन विश्लेषण से काफी अधिक DAMGO E का पता चलामैक्स चूहों पर inFosB में मूल्य (ईमैक्स = 73 N 5.2% उत्तेजना) चूहों (ई) से offFosB के सापेक्षमैक्स = 56 ± 4.1% उत्तेजना; p <0.05 स्टूडेंट के टी-टेस्ट द्वारा चूहों पर BFosB से अलग)। DAMGO चुनाव आयोग50 मान wereFosB पर और osFosB बंद चूहों (302 N 72 nM बनाम 212 N 56 nM, क्रमशः, p = 0.346) के बीच भिन्न नहीं थे।

चित्रा 1 

एगोनिस्ट-उत्तेजित [osFBB अभिव्यक्ति पर प्रभाव]35S] एनटीपी में GTP .S बाइंडिंग। BFosB- व्यक्त (osFosB पर) या नियंत्रण (osFosB बंद) चूहों से झिल्ली अलग सांद्रता का उपयोग कर तरीकों में वर्णित के रूप में स्वीकार किए जाते हैं ...

MOR एगोनिस्ट DAMGO के साथ प्राप्त परिणामों के विपरीत, जी-प्रोटीन सक्रियण में कोई BFosB स्थिति-निर्भर अंतर कैनबिनोइड एगोनिस्ट Win55,212-2 (चित्रा 1B)। WIN55,212-2 एकाग्रता-प्रभाव डेटा के दो-तरफ़ा एनोवा Win55,212-2 एकाग्रता (पी <0.0001, एफ = 112.4, डीएफ = 7) के एक महत्वपूर्ण मुख्य प्रभाव का पता चला, लेकिन osFosB स्थिति (पी = 0.172) का नहीं , एफ = 1.90, डीएफ = 1) और कोई बातचीत नहीं थी (पी = 0.930, एफ = 0.346, डीएफ = 7)। इसी तरह, Win55,212-2 E पर BFosB की स्थिति का कोई प्रभाव नहीं थामैक्स मान (103 N 6% बनाम 108 UM 8% उत्तेजना ,FosB में और क्रमशः चूहों, छात्र के टी-टेस्ट द्वारा p = 0.813) या EC50 मान (103 N 20 nM बनाम 170 UM 23 nM onFosB में और क्रमशः चूहों पर, p = 0.123)।

घटता के आकार और इस तथ्य के आधार पर कि हमारे पिछले अध्ययनों ने मस्तिष्क में द्विभाजक Win55,212-2 एकाग्रता-प्रभाव घटता दिखाया है (ब्रेवोगेल, एट अल।, एक्सएनयूएमएक्स, ब्रेवोगेल, एट अल।, एक्सएनयूएमएक्स), WIN55,212-2 घटता का विश्लेषण दो-साइट मॉडल का उपयोग करके भी किया गया था। औसत डेटा के विश्लेषण ने दो-साइट मॉडल (आर) का उपयोग करके फिट की भलाई में थोड़ा सुधार दिखाया2 एकल साइट मॉडल की तुलना में 0.933 और 0.914, वर्गों का योग = 3644 और UMFosB में 5463 क्रमशः और बंद चूहों की तुलना में)2 = 0.891 और 0.879, वर्गों का योग = 6561 और 6628 क्रमशः andFosB में और चूहों से दूर)। हालांकि, या तो ई में बंद चूहों पर noFosB के बीच कोई महत्वपूर्ण अंतर नहीं पाया गयामैक्स या ईसी50 उच्च या निम्न पोटेंसी साइट्स के मान (अनुपूरक तालिका 1), हालांकि कम ईसी की ओर रुझान था50 (ईसी) पर ECFosB के साथ चूहों में उच्च शक्ति स्थल पर मूल्य50उच्च = 28.0 N 10.6 nM) osFosB बंद (EC) वाले लोगों की तुलना में50उच्च = 71.5 N 20.2 nM; p = 0.094)। इसके अलावा, बेसल पर osFosB की स्थिति का कोई प्रभाव नहीं था [35S] GTP (S बाइसिक झिल्ली (253 UM 14 बनाम 226 f 14 fmol / mg ΔFosB में और चूहों पर क्रमशः, p = 0.188) में बाइंडिंग। इन आंकड़ों से संकेत मिलता है कि चूहों के NAc में BFosB की अमिट ट्रांसजेनिक अभिव्यक्ति ने CB को प्रभावित किए बिना MOR की मध्यस्थता वाले G- प्रोटीन सक्रियण को बढ़ा दिया।1आर-मध्यस्थता या बेसल जी-प्रोटीन गतिविधि।

3.2। ओपियोड और कैनाबिनोइड रिसेप्टर की मध्यस्थता पर प्रभाव का प्रभाव

आईओआरबी और सीबी द्वारा डाउनस्ट्रीम इफ़ेक्टर गतिविधि के मॉड्यूलेशन पर osFosB की अमिट ट्रांसजेनिक अभिव्यक्ति के प्रभाव का मूल्यांकन करने के लिए1आर, एक्सएनयूएमएक्स inhibM फॉर्क्सोलिन-उत्तेजित एडेनिल चक्रवात गतिविधि का निषेध NAc झिल्ली में जांच की गई थी। एमओआर- और सीबी के अलावा1एडेनिल साइक्लेज़ गतिविधि के आर-मध्यस्थता निषेध, KOR-चयनात्मक पूर्ण एगोनिस्ट U50,488 (का उपयोग करके KOR गतिविधि के प्रभावों की भी जांच की गई थी)झू, एट अल।, एक्सएनयूएमएक्स), क्योंकि पिछले परिणामों से पता चला है कि डायनॉर्फिन mRNA बिट्रोजेनिक मॉडल में osFosB का एक लक्ष्य था (ज़चारीउ, एट अल।, एक्सएनयूएमएक्स)। परिणामों से पता चला है कि DAMGO, U50,488 और WIN55,212-2 दोनों ने concentrationFosB बंद और चूहों के साथ BFosB में एडेनिल साइक्लेज गतिविधि का एकाग्रता-निर्भर अवरोध उत्पन्न किया।चित्रा 2)। DAMGO एकाग्रता-प्रभाव डेटा के दो-तरफ़ा एनोवा (चित्रा 2A) ने osFosB स्थिति (p = 0.0012, F = 11.34, df = 1) और DAMGO एकाग्रता (p <0.0001, F = 29.61, df = 6) के महत्वपूर्ण प्रभावों का पता लगाया, लेकिन कोई महत्वपूर्ण बातचीत (p = 0.441, F = 0.986) , df = 6)। DAMGO एकाग्रता-प्रभाव घटता के nonlinear प्रतिगमन विश्लेषण से काफी कम DAMGO EC का पता चला50 चूहों पर inFosB में मूल्य (101 M 11 nM) चूहों के osFosB की तुलना में (510, 182 nM, p <0.05 छात्र के टी-टेस्ट द्वारा)। हालाँकि, DAMGO E में कोई महत्वपूर्ण अंतर नहीं थामैक्स मान (20.9 N 1.26% बनाम 19.8 UM 1.27% ,FosB में क्रमशः और बंद चूहों पर, p = 0.534)।

चित्रा 2 

NAC में एडेनिल साइक्लिस गतिविधि के निषेध पर activityFosB अभिव्यक्ति का प्रभाव। UMFosB- व्यक्त (osFosB पर) या नियंत्रण (osFosB बंद) चूहों से झिल्ली 1 µM ​​की उपस्थिति में विधियों में वर्णित के रूप में स्वीकार किए जाते हैं ...

कोर-मध्यस्थता वाले एडेनिलल साइक्लेज अवरोधन को expressionFosB (ciFosB) की प्रेरक ट्रांसजेनिक अभिव्यक्ति के एक कार्य के रूप में भी अलग किया गया हैचित्रा 2B)। U50,488 एकाग्रता-प्रभाव डेटा के दो-तरफ़ा एनोवा ने ANFosB स्थिति (पी = 0.0006, एफ = 14.53, डीएफ = 1) और यू 50,488 एकाग्रता (पी <0.0001, एफ = 26.48, डीएफ = 3) के महत्वपूर्ण मुख्य प्रभाव दिखाए। , जिसका कोई महत्वपूर्ण संपर्क नहीं है (p = 0.833, F = 0.289, df = 3)। एकाग्रता-प्रभाव घटता के nonlinear प्रतिगमन विश्लेषण से अधिक U50,488 ई का पता चलामैक्स चूहों पर ±FosB में मूल्य (18.3% 1.14% निषेध) चूहों की तुलना में BFosB (12.5 2.03 0.05% निषेध; पी <50,488 छात्र के टी-टेस्ट द्वारा'sFosB से अलग), UXNUMX EC में कोई महत्वपूर्ण अंतर नहीं है;50 मान (310 N 172 nM बनाम 225 UM 48 nM onFosB में और क्रमशः चूहों पर, p = 0.324)।

एमओआर और कोरे के साथ देखे गए प्रभावों के विपरीत, कैनबिनोइड एगोनिस्ट विनएक्सएएनएक्सएक्स-एक्सएनयूएमएक्स द्वारा एडेनिलल साइक्लेज के निषेध पर इंडुसिबल ट्रांसजेनिक onFosB अभिव्यक्ति का कोई महत्वपूर्ण प्रभाव नहीं था (प्रभाव में)चित्रा 2C)। Win55,212-2 एकाग्रता-प्रभाव डेटा के दो-तरफ़ा एनोवा ने दवा एकाग्रता (पी <0.0001, एफ = 23.6, डीएफ = 2) का एक महत्वपूर्ण प्रभाव दिखाया, लेकिन osFosB स्थिति का नहीं (पी = 0.735, एफ 0.118, डीएफ) = 1) और न ही एक महत्वपूर्ण बातचीत थी (पी = 0.714, एफ = 0.343, डीएफ = 2)। इसके अलावा, किसी भी एगोनिस्ट की अनुपस्थिति में बेसल या फोरस्किन-उत्तेजित एडेनिल साइक्लेज गतिविधि पर BFosB स्थिति का कोई प्रभाव नहीं था। बेसल एडेनिल साइक्लेज़ गतिविधि चूहों पर 491 in 35 की तुलना में चूहों पर ±FosB में 546 ol 44 pmol / mg / मिनट थी (चूहों में टी = 0.346 छात्र के टी-टेस्ट द्वारा)। इसी तरह, 1 माइक्रोन forskolin की उपस्थिति में adenylyl चक्रवात गतिविधि 2244 mg 163 pmol / mg / मिनट में चूहों पर ±FosB बनाम 2372 mice 138 pmol / mg / मिनट में miceFosB बंद चूहों (पी = 0.555) था।

3.3। ओपियोड और कैनाबिनॉइड रिसेप्टर की मध्यस्थता पर प्रभाव एडेनिल साइक्लेज़ का निषेध

क्योंकि andFosB की प्रेरक ट्रांसजेनिक अभिव्यक्ति MOR और KOR से एनएसी में एडेनिल्ल साइक्लेज के लिए निरोधात्मक सिग्नल ट्रांसडक्शन को बढ़ाती है, यह निर्धारित करने के लिए रुचि थी कि क्या ΔFosB-मध्यस्थता प्रतिलेखन के एक प्रमुख नकारात्मक अवरोधक एक विपरीत तरीके से opioid रिसेप्टर सिग्नलिंग को संशोधित करेगा। इस प्रश्न को संबोधित करने के लिए, DAMGO और U50,488 द्वारा फोरस्किन-उत्तेजित एडेनिल साइक्लेज़ गतिविधि के निषेध को बिट्रोजेनिक चूहों के NAc से सशर्त रूप से ΔcJun व्यक्त करने वाले झिल्ली में जांच की गई थी। परिणाम एमओआर / केएआर द्वारा एडेनिल्ल साइक्लेज गतिविधि के निषेध पर uncJun अभिव्यक्ति का कोई महत्वपूर्ण प्रभाव नहीं दिखाया गया है (चित्रा 3)। DAMGO एकाग्रता-प्रभाव घटता के दो-तरफ़ा एनोवा ने DAMGO एकाग्रता (p <0.0001, F = 20.26, df = 6) का एक महत्वपूर्ण मुख्य प्रभाव दिखाया, लेकिन uncJun स्थिति का नहीं (पृष्ठ 0.840, F = 0.041, df = 1) और कोई महत्वपूर्ण बातचीत नहीं थी (पी = 0.982, एफ = 0.176, डीएफ = 6)। इसी तरह, ई में कोई महत्वपूर्ण अंतर नहीं थामैक्स या ईसी50 (ई पर uncJun के साथ चूहों के बीच का मानमैक्स = 23.6 N 2.6%; चुनाव आयोग50 = 304 N 43 nM) या offcJun बंद (E)मैक्स = 26.1 N 2.5%, p = 0.508; चुनाव आयोग50 = 611 176 0.129 एनएम, पी = 50,488)। इसी तरह के परिणाम U0.0001 के साथ देखे गए थे, जैसे कि सघनता-प्रभाव वक्रों के दो-तरफ़ा एनोवा ने सघनता का महत्वपूर्ण प्रभाव दिखाया (p <11.94, F = 6, df = 0.127), लेकिन uncJ2.391 स्टेटस का नहीं (p = 1) , एफ = 0.978, डीएफ = 0.190) और कोई महत्वपूर्ण बातचीत नहीं थी (पी = 6, एफ = XNUMX, डीएफ = XNUMX)। इसी तरह, ई में कोई महत्वपूर्ण अंतर नहीं थेमैक्स या ईसी50 (ई पर uncJun के साथ चूहों के बीच का मानमैक्स = 14.8 N 2.9%; चुनाव आयोग50 = 211 N 81 nM) या बंद (E)मैक्स = 16.7 N 1.8%, p = 0.597; चुनाव आयोग50 = 360 N 151 nM, p = 0.411)।

चित्रा 3 

.CJun की अभिव्यक्ति का प्रभाव NAc में एडेनिल साइक्लिस गतिविधि के निषेध पर। UncJun- एक्सप्रेसिंग (oncJun पर) या नियंत्रण (JcJun बंद) चूहों से झिल्ली DAMGO (A), U50,488H (B) या WIN55,212-2 की उपस्थिति में लगाए गए थे ...

ItioncJun अभिव्यक्ति ने भी कैनबिनोइड एगोनिस्ट द्वारा NAc में एडेनिल्ल साइक्लेज के निषेध को काफी प्रभावित नहीं किया। WIN55,212-2 सेंसिटिव कर्व्स के दो-तरफ़ा एनोवा ने Win55,212-2 एकाग्रता (p <0.0001, F = 15.53, df = 6) का एक महत्वपूर्ण मुख्य प्रभाव दिखाया, लेकिन जीनोटाइप का नहीं (पृष्ठ 0.066, F =) 3.472, डीएफ = 1) और कोई महत्वपूर्ण बातचीत नहीं थी (पी = 0.973, एफ = 0.208, डीएफ = 6)। इसी तरह, Win55,212-2 E में कोई महत्वपूर्ण अंतर नहीं थेमैक्स मान (13.0 N 2.3% और 13.6 UM XJUMX% ,cJun में बनाम चूहों पर क्रमशः, p = 0.9) और EC50 मान (208 N 120 nM और 417 UMcJun में 130 nM बनाम बंद चूहों पर क्रमशः, p = 0.270)। इस प्रकार, हालांकि transcJun को व्यक्त करने वाले चूहों में WIN55,212-2 की घटी हुई क्षमता की ओर थोड़ा रुझान था, ट्रांसजेन ने एडेनिलल साइक्लेज के कैनबिनोइड निषेध को महत्वपूर्ण रूप से नहीं बदला। इसके अलावा, बेसल या फोरस्किन-उत्तेजित एडेनिल चक्रवात गतिविधि पर uncJun स्थिति का कोई प्रभाव नहीं था। बेसल एडेनिल साइक्लेज़ गतिविधि 1095 UM 71 pmol / mg / min और 1007 N 77 pmol / mg / min (p = 0.403) चूहों पर ΔcJun के साथ या बंद क्रमशः थी। 1 skM forskolin द्वारा उत्तेजित एडेनिल साइक्लेज़ गतिविधि 4185 pm 293 pmol / mg / min बनाम 4032 ± 273 pmol / mg / min (p = 0.706) चूहों पर ΔcJun के साथ या बंद, क्रमशः थी।

3.4। विचार-विमर्श

इस अध्ययन के परिणामों से पता चला कि MOR की मध्यस्थता वाले G- प्रोटीन सक्रियण और चूहों में NAc में एडेनिल साइक्लेज़ को रोकना, dynorphin / D में BFosB की अमिट ट्रांसजेनिक अभिव्यक्ति के साथ है।1आर न्यूरॉन्स युक्त। -FosB व्यक्त चूहों के NAc में adenylyl cyclase गतिविधि के KOR की मध्यस्थता निषेध भी बढ़ाया गया था, यह सुझाव देते हुए कि osFosB NAc में अंतर्जात opioid प्रणाली को नियंत्रित करता है। DAMGO ईमैक्स MOR- उत्तेजित के लिए मूल्य अधिक था [35S] GTPγS बाइंडिंग, और इसके ईसी50 मान नियंत्रण चूहों की तुलना में osFosB ओवर-एक्सप्रेसिंग चूहों में एडेनिल साइक्लेज़ निषेध के लिए कम था। इन निष्कर्षों से प्रभाव मॉडुलन के लिए रिसेप्टर रिजर्व की संभावना का पता चलता है, लेकिन परख की गई शर्तों के तहत जी-प्रोटीन सक्रियण नहीं। KOR एगोनिस्ट द्वारा एडेनिल साइक्लिस का अधिकतम निषेध FosB अभिव्यक्ति से प्रभावित पाया गया था, जो KOR की मध्यस्थता प्रतिक्रिया के लिए कम रिसेप्टर रिजर्व का सुझाव देता है, जो माउस मस्तिष्क में KOR साइटों के निम्न स्तर के अनुरूप है (Unterwald, et al।, 1991)। इसके विपरीत सी.बी.1आर-मध्यस्थता जी-प्रोटीन गतिविधि और एडेनिल चक्रवात के निषेध GFFBB द्वारा अप्रभावित थे, यह सुझाव देते हुए कि opioid और cannabinoid सिस्टम इन NAc न्यूरॉन्स में osFosB की प्रतिक्रिया में भिन्न होते हैं।

ओपिओइड रिसेप्टर-मध्यस्थता सिग्नलिंग पर effectFosB का प्रभाव हमारी पिछली रिपोर्ट के अनुरूप है कि स्ट्रेटम में theFosB अभिव्यक्ति मॉर्फिन के तीव्र और जीर्ण प्रभाव को बदल देती है (ज़चारीउ, एट अल।, एक्सएनयूएमएक्स)। उस अध्ययन की एक खोज यह थी कि डायनोर्फिन / डी में BFosB की ट्रांसजेनिक अभिव्यक्ति के साथ चूहों1स्ट्रिपेटल न्यूरॉन्स प्लेस कंडीशनिंग में नियंत्रण की तुलना में मॉर्फिन के प्रति अधिक संवेदनशील थे। इसके अलावा, NAC में साइट-विशिष्ट इंजेक्शन द्वारा iFosB की वायरल मध्यस्थता अभिव्यक्ति द्वारा इस आशय की नकल की गई थी। ये अवलोकन वर्तमान परिणामों के अनुरूप हैं जो एनएआर में एमओआर सिग्नलिंग को बढ़ाते हैं।

हमने पहले जीन एन्कोडिंग की पहचान की थी डायनॉर्फिन orFosB के एक लक्ष्य के रूप में, और प्रस्तावित किया गया है कि कम किया गया डायनोर्फिन BFosB बिट्रैन्सजेनिक चूहों में मॉर्फिन के बढ़े हुए पुरस्कृत गुणों के अनुरूप होगा। (ज़चारीउ, एट अल।, एक्सएनयूएमएक्स)। वर्तमान परिणामों से पता चलता है कि एनओआर में एडेनिल्ल साइक्लेज के KOR-मध्यस्थता निषेध ,FosB में चूहों को व्यक्त करने में वृद्धि हुई है, जो कम डाइनोर्फिन के बाद KOR संवेदनशीलता में प्रतिपूरक वृद्धि को दर्शा सकता है। पिछले अध्ययनों से पता चला है कि एनओआर सहित प्रोएडोनॉर्फिन नॉकआउट चूहों के मस्तिष्क के कुछ क्षेत्रों में KOR को अपघटित किया गया था (क्लार्क, एट अल।, एक्सएनयूएमएक्स).

BFosB के विपरीत, ,cJun की प्रेरक ट्रांसजेनिक अभिव्यक्ति, osFosB बाइंडिंग पार्टनर cJun के प्रमुख नकारात्मक छंटनी उत्परिवर्ती, MOR या KOR एगोनिस्ट द्वारा एडेनिलल साइक्लेज अवरोधन को परिवर्तित नहीं किया। ये परिणाम बताते हैं कि suggestFosB अभिव्यक्ति के आधारभूत स्तर, जो अपेक्षाकृत कम हैं, NAC में सिग्नल ट्रांसडक्शन के इस स्तर पर opioid रिसेप्टर सिग्नलिंग को बनाए रखने में महत्वपूर्ण भूमिका नहीं निभाते हैं। तथ्य यह है कि मॉर्फिन के वातानुकूलित पुरस्कृत प्रभाव को हमारे पिछले अध्ययन में expressioncJun अभिव्यक्ति द्वारा कम किया गया था (ज़चारीउ, एट अल।, एक्सएनयूएमएक्स) या तो सुझाव देता है कि कंडीशनिंग प्रक्रिया के दौरान eitherFosB के मॉर्फिन प्रेरण दवा के लिए व्यवहार प्रतिक्रियाओं को विनियमित करने में महत्वपूर्ण है या ओपिओइड रिसेप्ट द्वारा समीपस्थ संकेतन को प्रभावित करने वाले लोगों के अलावा ΔFosB के ट्रांसक्रिप्शनल प्रभाव opioid इनाम को प्रभावित कर सकते हैं। किसी भी घटना में, वर्तमान अध्ययन के परिणाम स्पष्ट रूप से दिखाते हैं कि, जब ynFosB की अभिव्यक्ति स्ट्राइटल डायनोर्फिन / डी में बेसल स्तरों से ऊपर उठ जाती है1आर-व्यक्त न्यूरॉन्स, एमओआर और केओआर के युग्मन में एक मजबूत वृद्धि है एनएसी में एडेनिलिल साइक्लेज के निषेध के लिए।

MOR- और KOR की मध्यस्थता सिगनलिंग FosB ओवरएक्प्रेशन द्वारा तंत्र को स्पष्ट किया जाता है, लेकिन हमने पहले दिखाया है कि MOR के स्तर, द्वारा मूल्यांकन [3H] नालोक्सोन बाइंडिंग, oxFosB के NAC में अलग-अलग नहीं हैं।ज़चारीउ, एट अल।, एक्सएनयूएमएक्स)। एक ही अध्ययन में पाया गया कि Gαi1 और 2 प्रोटीन का स्तर इस क्षेत्र में expressionFosB अभिव्यक्ति से प्रभावित नहीं था। हालांकि, पिछले जीन अभिव्यक्ति सरणी विश्लेषण से पता चला है कि Gαo चूहों पर mFosB के NA में mRNA को अपग्रेड किया गया था (मैकक्लब और नेस्लर, एक्सएनयूएमएक्स)। भविष्य के अध्ययनों में यह दिलचस्पी होगी कि जी-प्रोटीन सबयूनिट अभिव्यक्ति पर ट्रांसजेनिक BFosB अभिव्यक्ति के प्रभाव की जांच प्रोटीन स्तर पर और साथ ही कई जी-प्रोटीन modulatory प्रोटीन की अभिव्यक्ति पर भी होगी।

यह दिलचस्प है कि osFosB अभिव्यक्ति ने सीबी को नहीं बढ़ाया1NA- आरसी में आर-मध्यस्थता संकेत। यह संभव है कि सीबी में परिवर्तन1सिग्नलिंग न्यूरॉन्स की एक असतत आबादी में होती है जो पूरे एनएसी की तैयारी में अस्पष्ट है। उदाहरण के लिए, Δ का प्रशासन9- THC ने मूल रूप से ΔFosB को मूल रूप से प्रेरित किया, लेकिन शेल नहीं, NAC (पेरोट्टी, एट अल।, एक्सएनयूएमएक्स)। मैंndeed, यह दिखाया गया है कि eed के साथ चुनौती9-THC TH के दोहराया प्रशासन के बाद9-सीटीसी ने एनएसी कोर में डोपामाइन रिलीज को बढ़ाया, लेकिन शेल में रिलीज में कमी आई (कैडोनी, एट अल।, एक्सएनयूएमएक्स)। यह नोट करना भी महत्वपूर्ण है कि बिट्रेनजेनिक चूहों की 11A लाइन /FosB को केवल dynorphin / D में व्यक्त करती है1धारीदार माध्यम के सकारात्मक मध्यम चमकदार न्यूरॉन्स, लेकिन सी.बी.1R दोनों डायनोर्फिन / डी में व्यक्त किए जाते हैं1आर और एनकेफेलिन / डी2सकारात्मक स्ट्राइटल न्यूरॉन्स (होहमन और हर्केनहम, एक्सएनयूएमएक्स), और साथ ही कोर्टिकल एफर्ट के टर्मिनलों पर (रोबे, एट अल।, एक्सएनयूएमएक्स)। -FosB की मध्यस्थता प्रतिलेखन, uncJun के प्रमुख नकारात्मक नियामक की अभिव्यक्ति, भी कैनबिनोइड रिसेप्टर सिग्नलिंग पर कोई महत्वपूर्ण प्रभाव नहीं था, हालांकि uncJun दोनों डी में व्यक्त स्वैच्छिक है1 और डी2इन चूहों में मध्यम रीढ़ की न्यूरॉन्स की बढ़ती आबादी (पीकमैन, एट अल।, एक्सएनयूएमएक्स)। यह संभव है, हालांकि, यह कि बेसल possibleFosB अभिव्यक्ति पर्याप्त रूप से कम है कि uncJun रिसेप्टर सिग्नलिंग को प्रभावित नहीं करेगा, जैसा कि MOR और KOR के साथ परिणामों द्वारा सुझाया गया है। यह भी संभव है कि सी.बी.1R सिग्नलिंग को बेसल osFosB अभिव्यक्ति द्वारा मामूली बढ़ाया जाता है, जैसे कि ΔFosB अभिव्यक्ति को बढ़ाना या uncJun के साथ अपने कार्यों को रोकना केवल मामूली प्रभाव थे जो सांख्यिकीय महत्व के स्तर तक नहीं पहुंचे थे। इस व्याख्या के लिए अप्रत्यक्ष समर्थन को Win55,212-2 EC से तुलना करके देखा जा सकता है50 uncJun बनाम BFosB को व्यक्त करने वाले चूहों के बीच का मान। WIN55,212-2 EC का अनुपात50 अपने ईसी के लिए tocJun की प्रेरित अभिव्यक्ति के साथ चूहों में adenylyl चक्रवात निषेध के लिए मूल्य50 BFosB की प्रेरित अभिव्यक्ति के साथ चूहों में जी-प्रोटीन सक्रियण के लिए मूल्य 4.0 था, जबकि transgene के प्रेरण के बिना चूहों में एक ही अनुपात 1.2 था।

वैकल्पिक रूप से, कैनबिनोइड्स सीबी पर किसी भी प्रत्यक्ष प्रभाव के बिना BFosB अभिव्यक्ति को प्रेरित कर सकते हैं1संकेत दे रहा है। इस परिदृश्य में, कैनबिनोइड्स ,FosB-मध्यस्थता प्रतिलेखीय विनियमन के माध्यम से अन्य दवाओं के मनोवैज्ञानिक प्रभाव को जवाबदेही को संशोधित कर सकते हैं। मैंn तथ्य, प्रशासन Δ9-THC opioids और एम्फ़ैटेमिन के लिए क्रॉस-संवेदीकरण पैदा करता है (कैडोनी, एट अल।, एक्सएनयूएमएक्स, लैमार्क, एट अल।, एक्सएनयूएमएक्स), इस परिकल्पना के अनुरूप। इसके अलावा, कैनबिनोइड एगोनिस्ट CP55,940 के बार-बार प्रशासन को एनओसी में MOR की मध्यस्थता वाले जी-प्रोटीन सक्रियण को बढ़ाने के लिए सूचित किया गया था, इसी तरह चूहों ने वर्तमान अध्ययन या अध्ययन में BFosB को व्यक्त किया।विगानो, एट अल।, एक्सएनयूएमएक्स)। BFosB अभिव्यक्ति का प्रभाव Δ पर9-THC की मध्यस्थता वाले व्यवहारों का मूल्यांकन नहीं किया गया है, लेकिन वर्तमान परिणाम एक अंतःक्रिया को प्रभावित नहीं करते हैं। इसके परिणाम और हमारे पिछले अध्ययन (ज़चारीउ, एट अल।, एक्सएनयूएमएक्स) स्ट्रेटम में MOR और KOR / dynorphin में showFosB- प्रेरित परिवर्तन दिखाएं। Δ के पुरस्कृत प्रभाव9-THC, जैसा कि स्थान वरीयता द्वारा मापा जाता है, MOR अशक्त चूहों में समाप्त कर दिया जाता है, जबकि KOR को हटा दिया जाता है measured9-CC स्थान पर विक्षेपण और प्रकट ersion9-CC स्थान वरीयता (घोज़लैंड, एट अल।, एक्सएनयूएमएक्स)। इसी तरह, वातानुकूलित स्थान को av से अलग रखा जाए9-THC जंगली-प्रकार के चूहों की तुलना में प्रो-डायनोर्फिन नॉकआउट में अनुपस्थित है (ज़िमर, एट अल।, एक्सएनयूएमएक्स)। ये आंकड़े बताते हैं कि Δ9-इनकोस CFosB इंडक्शन के बाद और dORorphin एक्सप्रेशन में कमी के साथ MOR सिग्नलिंग के परिणामस्वरूप अधिक पुरस्कृत हो सकता है।

संक्षेप मेंy, इस अध्ययन के परिणामों से पता चला कि thisFosB की अभिव्यक्ति D में है1R / dynorphin पॉजिटिव स्ट्राइटल न्यूरॉन्स ने MOR- और KOR-मध्यस्थता संकेतन को एनएसी में जी-प्रोटीन मध्यस्थता अवरोधन के स्तर पर बढ़ाया। यह खोज उन अध्ययनों के अनुरूप है जिन्होंने इनाम में अंतर्जात opioid प्रणाली के लिए एक भूमिका का प्रदर्शन किया है (ट्रिगो, एट अल।, एक्सएनयूएमएक्स), और इनाम पर andFosB की मध्यस्थता प्रभाव के लिए एक संभावित तंत्र प्रदान करते हैं। इसके विपरीत सी.बी.1एनएसी में आर-मध्यस्थता संकेतन की जांच की गई शर्तों के तहत स्ट्राइटल signalFosB अभिव्यक्ति द्वारा महत्वपूर्ण रूप से प्रभावित नहीं हुई थी, हालांकि एंडोकैनाबिनोइड सिस्टम पर ΔFosB प्रेरण के प्रभाव को निर्धारित करने के लिए आगे के अध्ययनों को वारंट किया जाता है।

अनुसंधान की मुख्य विशेषताएं

  • MOR सिग्नलिंग चूहों के नाभिक accumbens में बढ़ाया जाता है जो theFosB को व्यक्त करते हैं
  • YFosB को व्यक्त करने वाले चूहों में एडेनिल साइक्लेज के KOR निषेध को भी बढ़ाया जाता है
  • RessionFosB की अभिव्यक्ति सीबी में परिवर्तन नहीं करती है1नाभिक में आर संकेत
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आभार

लेखकों के साथ तकनीकी सहायता के लिए हेंगजुन हे, जॉर्डन कॉक्स और आरोन टोमार्चियो को धन्यवाद देता है।35एस] GTPγS बाध्यकारी assays। यह अध्ययन USPHS अनुदान DA014277 (LJS), DA10770 (DES) और P01 DA08227 (EJN) द्वारा समर्थित था।

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फुटनोट

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