मेडियल पूर्व-ललाट कोर्टेक्स में नोरेपेनेफ्रिन खाद्य-प्रतिबंधित चूहे में केवल एक नॉवेल पैलेटेबल फूड के लिए शेल प्रतिक्रियाओं का समर्थन करता है (2018)

इमानुएल क्लाउडियो लाटग्लियाटा,¹ स्टेफानो पुग्लिसी-एलेग्रा,^1,2 रोसेला वेंचुरा,^1,2 और सिमोना कैबिब^1,2,*

इस प्रयोगशाला के पिछले निष्कर्षों से पता चलता है: (1) कि नशे की दवाओं के विभिन्न वर्गों के लिए वातानुकूलित स्थान वरीयता को बढ़ावा देने और नाभिक त्वचीय खोल में डोपामाइन (डीए) टोन को बढ़ाने के लिए औसत दर्जे का फ्रंट फ्रंटल कोर्टेक्स (एमपीएफसी) में बरकरार नोरपेनेफ्राइन (एनई) संचरण की आवश्यकता होती है। (एनएसी शेल); (2) कि केवल खाद्य-प्रतिबंधित चूहों को दूध चॉकलेट से जुड़े एक संदर्भ के लिए सशर्त वरीयता विकसित करने के लिए mpFC में बरकरार NE संचरण की आवश्यकता होती है; और (3) कि खाद्य-प्रतिबंधित चूहे पहली बार महंगे भोजन का अनुभव करते हुए तब मुफ्त खिलाए गए mpFC NE बहिर्वाह की काफी बड़ी वृद्धि दिखाते हैं। वर्तमान अध्ययन में हमने परिकल्पना का परीक्षण किया कि भोजन प्रतिबंधित चूहों में प्राकृतिक इनाम द्वारा प्राप्त ललाट कोर्टिकल एनई के केवल उच्च स्तर मेसोअकंबेन्स डीए ट्रांसमिशन को उत्तेजित करते हैं। इस उद्देश्य के लिए हमने दूध चॉकलेट के साथ पहले अनुभव की क्षमता की जांच की, ताकि शेल में सी-बहिर्वाह को बढ़ाया जा सके और खाद्य-प्रतिबंधित और घातक अंगों में सी-फॉस अभिव्यक्ति हो। बिना तैयारी के खिलाया चूहों। इसके अलावा, हमने या तो फीडिंग समूह में दोनों प्रतिक्रियाओं पर ललाट कोर्टिकल एनई के एक चयनात्मक कमी के प्रभावों का परीक्षण किया। केवल खाद्य-प्रतिबंधित चूहों में दूध चॉकलेट ने एंबुलेन्स शेल में बेसलाइन से परे डीए बहिर्वाह की वृद्धि को प्रेरित किया और एक सी-फॉस अभिव्यक्ति जो कि नाभिक accumbens में एक उपन्यास अखाद्य वस्तु द्वारा प्रचारित की तुलना में बड़ा है। इसके अलावा, ललाट कोर्टिकल एनई की कमी ने डीए बहिर्वाह की वृद्धि और भोजन-प्रतिबंधित चूहों के एनएसी शेल में दूध चॉकलेट द्वारा प्रचारित सी-फॉस की बड़ी अभिव्यक्ति दोनों को रोका। ये निष्कर्ष इस निष्कर्ष का समर्थन करते हैं कि खाद्य-प्रतिबंधित चूहों में एक उपन्यास पैलेटेबल भोजन नशे की दवाओं द्वारा लगे प्रेरक सर्किट को सक्रिय करता है और प्रेरक गड़बड़ी के नॉरएड्रेनाजिक फार्माकोलॉजी के विकास का समर्थन करता है।

पशु और आवास

प्रयोगों के समय 57-6 सप्ताह पुराने इनब्रेड C8BL / 9JIco तनाव (चार्ल्स नदी, कोमो, इटली) के पुरुष चूहों को पहले वर्णित के रूप में रखा गया था और एक 12 h / 12 h प्रकाश / अंधेरे चक्र में बनाए रखा गया था (प्रकाश) 07.00 am और 07.00 pm के बीच)। प्रत्येक प्रायोगिक समूह में 5-8 जानवर शामिल थे। सभी जानवरों का उपचार हेलसिंकी की घोषणा में व्यक्त सिद्धांतों के अनुसार किया गया था। यूरोपीय कम्युनिटी काउंसिल के निर्देशों (116 / 92 / 26 / 2014 / UE), के आधार पर अनुसंधान के लिए जानवरों के उपयोग पर इतालवी राष्ट्रीय कानून (DL 86 / 609 / DL 2010 / 63) के अनुसार सभी प्रयोग किए गए। और इतालवी स्वास्थ्य मंत्रालय की आचार समिति (लाइसेंस / अनुमोदन आईडी #: 10 / 2011-B और 42 / 2015-PR) द्वारा अनुमोदित है।

चूहे व्यक्तिगत रूप से रखे गए थे और उन्हें अलग-अलग खिलाए गए आहार दिए गए थे, अर्थात या तो भोजन प्राप्त करना बिना तैयारी के (एफएफ) या खाद्य प्रतिबंध प्रतिबंध (एफआर) के अधीन। मूल शरीर के वजन के 07.00% का नुकसान उत्पन्न करने के लिए समायोजित मात्रा में FR चूहों को एक बार दैनिक (15 दोपहर) भोजन मिला। FF स्थिति में, दैनिक खपत (07.00 pm) को दैनिक खपत (XUMUMX g; Ventura और Puglisi-Allegra) से अधिक मात्रा में एक बार भोजन दिया जाता था। 2005; वेंचुरा एट अल।, 2008)। प्रयोगों से पहले डिफरेंशियल फीडिंग रिमेन ने 4 दिन शुरू किए।

औषध

Zoletil 100, Virbac, Milano, इटली (tiletamine HCl 50 mg / ml + zolazepam HCl 50 mg / ml) और रोमपुन 20, BPA SpA मिलानो, इटली (xylazine 20 mg / ml), व्यावसायिक रूप से, एनेस्थेटिक्स के रूप में उपयोग किया जाता है। hydroxydopamine (6-OHDA) और GBR 6 (GBR), सिग्मा (सिग्मा Aldrich, मिलान, इटली) से खरीदे गए थे। Zoletil (12909 mg / kg), Rompun (30 mg / kg) और GBR (12 mg / Kg) को खारा (15% NaCl) में भंग कर दिया गया और 0.9 ml / kg की मात्रा में इंट्रापेरिटोनियल (IP) इंजेक्ट किया गया। X -UMX-OHDA को खारे में घोलकर Na-metabisulfite (10 M) से युक्त किया गया था।

उत्तेजनाओं

मिल्क चॉकलेट का एक टुकड़ा (1 g, Milka ©: Fat = 29.5%; कार्ब्स XUMUMX%; प्रोटीन 58.5%) का प्रयोग सभी प्रयोगों (MC) में स्वादिष्ट भोजन के रूप में किया गया था। फोस प्रयोगों में उत्तेजना नवीनता के लिए नियंत्रित करने के लिए और उसी स्थान पर वरीयता (CPP; OBJ) में लेगो © का एक टुकड़ा इस्तेमाल किया गया था। FF चूहों ने MC और FR चूहों के 6.6 mice 0.1 g और 0.05 (0.7 (p <0.01, tप्रायोगिक स्थिति की परवाह किए बिना एक्सपोज़र के एक्सएनएक्सएक्स मिनट में -स्टेस्ट)।

एमपीएफसी में एनई डिप्लेशन

जानवरों को ज़ोलेट और रोमपुन के साथ संवेदनाहारी किया गया था, फिर एक माउस एडेप्टर से सुसज्जित एक स्टीरियोटैक्सिक फ्रेम (डेविड कोफ इंस्ट्रूमेंट्स, तुजंगा, सीए, यूएसए) में रखा गया था। डोपामिनर्जिक न्यूरॉन्स की सुरक्षा के लिए 15-OHDA माइक्रो-इंजेक्शन से पहले Mice को GBR (30 mg / Kg, ip) 6 मिन के साथ इंजेक्ट किया गया था। 6-OHDA (1.5 μg / 0.1 ml / 2 मिनट प्रत्येक पक्ष के लिए) का द्विपक्षीय इंजेक्शन mpFC में बनाया गया था (निर्देशांक: + 2.52 AP; N 0.6 L; −2.0 V) ब्रेग्मा (फ्रैंकलिन और पैक्सिनो, के संबंध में) 2001), एक स्टेनलेस स्टील प्रवेशनी (0.15 मिमी बाहरी व्यास, UNIMED, स्विट्जरलैंड) के माध्यम से, एक पॉलीइथाइलीन ट्यूब द्वारा 1 μl सिरिंज से जुड़ा हुआ है और एक CMA / 100 पंप (NEpleted group) द्वारा संचालित है। प्रवेश के बाद अतिरिक्त 2 मिनट के लिए प्रवेशनी को छोड़ दिया गया था। शाम के जानवरों को एक ही उपचार के अधीन किया गया था, लेकिन इंट्राकेरेब्रल वाहन प्राप्त किया गया था। ध्यान दें कि पिछले प्रयोगों में हमने बेसल या औषधीय / प्राकृतिक उत्तेजना-प्रेरित प्रीफ्रंटल एनई या डीए बहिर्वाह में या सीपीपी या वातानुकूलित स्थान एवर्सन (सीपीए) परीक्षण (वेंटिलेशन एट अल) में शाम-इलाज और भोले जानवरों के बीच कोई महत्वपूर्ण अंतर नहीं देखा। 2005, 2007; पास्कुची एट अल।) 2007), इस प्रकार वर्तमान प्रयोगों में देखे गए प्रभावों पर GBR की कार्रवाई को खारिज कर रहा है।

सभी प्रयोगों में सर्जरी के बाद जानवरों का उपयोग 7 किया गया था।

एमपीएफसी में एनई और डीए ऊतक के स्तर का मूल्यांकन किया गया था, जैसा कि पहले वर्णित (वेंचुरा एट अल। 2003, 2005, 2007), कमी की सीमा का मूल्यांकन करने के लिए। माइक्रोडायलिसिस प्रयोगों में चूहों को mpFC से ऊतक के नमूने एकत्र करने के लिए विघटन द्वारा मार दिया गया था जब NA शैल में डीए का स्तर आधारभूत में लौटा था (पहले नमूने के बाद 120 मिनट)। सी-फोस प्रयोगों के मामले में, ललाट ध्रुव को औपचारिक रूप से मस्तिष्क के विसर्जन से पहले औपचारिक रूप से उत्सर्जित किया गया था (देखें "इम्यूनॉस्टिंग एंड इमेज एनालिसिस" अनुभाग)। अंत में, दो समूहों (sham-depleted और NE-depleted) unhandled चूहों की सर्जरी के बाद 10 दिनों का बलिदान किया गया था ताकि दोनों mpFC और NAc Shell में NE और DA ऊतक स्तर का मूल्यांकन किया जा सके। चूहों के उत्तरार्द्ध समूह को न्यूरोटॉक्सिन के उप-भाग पर फैलाने के लिए जोड़ा गया था।

microdialysis

एनेस्थीसिया और सर्जिकल सेट एनई कमी के रूप में वर्णित हैं। एनएसी शेल (वेंचुरा एट अल।) में एक गाइड कैन्यूला (स्टेनलेस स्टील, शाफ़्ट ओडी एक्सएनयूएमएक्स मिमी, मेटलेंट एबी, स्टॉकहोम, स्वीडन) के साथ चूहे को एकतरफा प्रत्यारोपित किया गया था। 2003, 2005, 2007)। 4.5 मिमी-लंबी मार्गदर्शिका प्रवेशनी को एपॉक्सी गोंद के साथ तय किया गया था; दंत सीमेंट को अधिक स्थिरता के लिए जोड़ा गया था। ब्रैग्मा से निर्देशांक (फ्रैंकलिन और पैक्सिनो के अनुसार मापा जाता है, 2001) थे: + 1.60 एथोरोपोस्टेरियर और 0.6 पार्श्व। जांच (डायलिसिस झिल्ली की लंबाई 1 मिमी, od 0.24 मिमी, MAB 4 कप्रोफेन माइक्रोडायलिसिस जांच, मेटलेंट एबी) को माइक्रोडायलिसिस प्रयोगों से पहले 24 h पेश किया गया था। गाइड कैनुला में माइक्रोडायलिसिस जांच के मैनुअल सम्मिलन की सुविधा के लिए जानवरों को हल्के से संवेदनाहारी किया गया था और फिर उनके घर के पिंजरों में वापस कर दिया गया था। आउटलेट और इनलेट जांच टयूबिंग को स्थानीय रूप से लागू पैराफिल्म द्वारा संरक्षित किया गया था। झिल्लियों का परीक्षण किया गया इन विट्रो में वसूली को सत्यापित करने के लिए उपयोग करने से पहले दिन पर DA (सापेक्ष वसूली (%): 10.7 UM 0.82%) की वसूली।

PE-100 टयूबिंग और एक अल्ट्रा-लो टॉर्क डुअल चैनल लिक्विड कुंडा (मॉडल 20 / D / 375QM, Instech Laboratories, Inc.), प्लायमाउथ मीटिंग के माध्यम से माइक्रोडायलिसिस जांच CMA / 22 पंप (कार्नेगी मेडिसिन स्टॉकहोम, स्वीडन) से जुड़ी थी। पीए, यूएसए) मुक्त आंदोलन की अनुमति देने के लिए। कृत्रिम CSF (147 mM NaCl, 1 mM MgCl, 1.2 mM NaCl₂ और 4 mM KCl) को 2 μl / मिनट की निरंतर प्रवाह दर पर डायलिसिस जांच के माध्यम से पंप किया गया था। जाँच प्लेसमेंट के बाद 22 – 24 h का प्रयोग किया गया। प्रत्येक जानवर को माइक्रोडायलिसिस उपकरण (इंस्टेक लेबोरेटरीज, इंक) से सुसज्जित एक परिपत्र पिंजरे में रखा गया था और फर्श पर घर के पिंजरे के बिस्तर के साथ। बाद में 1 h को डायलिसिस छिड़काव शुरू किया गया था, उस समय बेसलाइन नमूने एकत्र किए जाने से पहले लगभग 2 h के लिए चूहों को अछूता छोड़ दिया गया था। परीक्षण (10% भिन्नता से कम) से पहले एकत्र किए गए तीन नमूनों की औसत एकाग्रता को बेसल एकाग्रता के रूप में लिया गया था।

तीन आधारभूत नमूनों के संग्रह के तुरंत बाद पिंजरे के लिए चॉकलेट (एमसी) का टुकड़ा पेश किया गया था। एक CPP प्रशिक्षण सत्र की समय सीमा के भीतर अनुभव रखने के लिए 40 मिनट परीक्षण के दौरान दो बार डायलेट एकत्र किया गया था। केवल सही ढंग से रखे गए कैन्यूला वाले चूहों के डेटा की सूचना दी जाती है। नियुक्तियों को मिथाइलीन ब्लू धुंधला द्वारा आंका गया था। उच्च प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफी (एचपीएलसी) द्वारा डायलिसेट नमूनों के बीस माइक्रोलिट्स का विश्लेषण किया गया था। शेष 20 μl संभव बाद के विश्लेषण के लिए रखा गया था। जांच वसूली के लिए सांद्रता (पीजी / 20 μl) को ठीक नहीं किया गया था। HPLC प्रणाली में एक एलायंस (वाटर्स कॉर्पोरेशन, मिलफोर्ड, MA, यूएसए) सिस्टम और एक कूपोमेट्रिक डिटेक्टर (ESA Model 5200A Coulochem II) शामिल था, जो एक कंडीशनिंग सेल (M 5021) और एक विश्लेषणात्मक सेल (M 5011) प्रदान करता था। कंडीशनिंग सेल को 400 mV, इलेक्ट्रोड 1 पर 200 mV और इलेक्ट्रोड 2 पर N150 mV पर सेट किया गया था। एक नोवा-पैक C18 स्तंभ (3.9 × 150 मिमी, वाटर) 30 ° C पर बनाए रखा गया था। प्रवाह की दर 1.1 मिलीलीटर / मिनट थी। मोबाइल चरण पहले जैसा वर्णित था (वेंचुरा एट अल।) 2007, 2008)। परख का पता लगाने की सीमा 0.1 pg थी।

इम्यूनॉस्टिंग और इमेज एनालिसिस

एफएफ और एफआर चूहों, या तो शम या एनई-हटाए गए, व्यक्तिगत रूप से घर के पिंजरे के समान एक खाली पिंजरे के संपर्क में थे, लेकिन भोजन या पानी के बिना, एक्सएनयूएमएक्स लगातार चार दिनों तक उपन्यास पर्यावरण को बढ़ावा देने वाले सी-फॉस सक्रियण को कम करने के लिए। 1th दिन एक उपन्यास उत्तेजना (MC या OBJ, देखें "स्टिमुली" विवरण के लिए अनुभाग) माउस के सामने परीक्षण पिंजरे में रखा गया था। एक्सपीयूएमएक्स मिनट के लिए चूहे को उत्तेजना के साथ छोड़ दिया गया, सीपीपी और डायलेसेट संग्रह में प्रशिक्षण सत्रों की अवधि का मिलान करने के लिए, फिर हटा दिया गया और उनके घर के पिंजरों में छोड़ दिया गया जो कि निरोध से हत्या करने से पहले निम्नलिखित एक्सएनएक्सएक्स मिनट के लिए अपने घर के पिंजरों में छोड़ दिया गया था। यह प्रक्रिया पिछले और प्रारंभिक आंकड़ों के कारण अपनाई गई थी, जो यह दर्शाता है कि चूहों में एक्स-एनयूएमएक्स मिनट को सी-फॉस प्रोटीन (कन्वर्सि एट अल।) के प्रेरित संचय के लिए आवश्यक है। 2006; कोलेलि एट अल।) 2010, 2014).

ललाट के खंभे को हटाने के बाद, NE घटाव के मूल्यांकन के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है, दिमाग को ठंडा 10% तटस्थ बफर फॉर्मेलिन में डुबोया गया और रात भर संग्रहीत किया गया और फिर 30 ° C के लिए 4 ° C के लिए क्रायोप्रोटेक्टेड घोल को 48 h (कॉनमर्सी एट अल।) के लिए घोल दिया गया। 2004; पैलोन एट अल। 2007; कोलेलि एट अल।) 2010, 2014)। जमे हुए कोरोनल सेक्शन (40 mm मोटाई) को पूरे मस्तिष्क के माध्यम से एक स्लाइडिंग माइक्रोटेम के साथ काटा गया था और फिर पहले से वर्णित (immunersoxidase) विधि के साथ इम्यूनोलेबेल्ड किया गया था। 2006; कोलेलि एट अल।) 2010, 2014)। खरगोश विरोधी c-fos (1 / 20,000; Oncogene Sciences) का उपयोग प्राथमिक एंटीबॉडी के रूप में किया गया था और द्वितीयक इम्यूनोडेटेक्शन को बायोटिनाइलेटेड एंटीबॉडी (1: 1000 बकरी विरोधी खरगोश, वेक्टर प्रयोगशालाओं इंक, बर्लिंगम, सीए, यूएसए) के साथ किया गया था। पेरोक्सीडेस लेबलिंग मानक एविडिन-बायोटिन प्रक्रिया (वेकटैस्टेन एबीसी अभिजात वर्ग किट, वेक्टर प्रयोगशालाओं, पतला एक्सएनयूएमएक्स: एक्सएनयूएमएक्स) द्वारा प्राप्त किया गया था और क्रोमोजेनिक प्रतिक्रिया धातु-वर्धित डीएबी (वेक्टर प्रयोगशालाओं) के साथ वर्गों को विकसित करके विकसित की गई थी। एफएफ और एफआर चूहों से प्राप्त ऊतक के नमूनों का इम्यूनोहिस्टोकेमिकल विश्लेषण विभिन्न बैचों में किया गया था।

पहले से वर्णित (कन्वर्सेई एट अल।) के अनुसार निकॉन डीएस-एक्सएनयूएमएक्सएम सीसीडी कैमरे से लैस निकॉन एक्लिप्स माइक्रोस्कोप का उपयोग करके अनुभागों का विश्लेषण किया गया था। 2006; कोलेलि एट अल।) 2010, 2014)। लिनक्स के लिए सार्वजनिक डोमेन छवि विश्लेषण सॉफ्टवेयर IMAGEJ 1.38 g (Abramoff et al।) का उपयोग करके मात्रात्मक छवि विश्लेषण के अधीन किया गया। 2004)। Immunoreactive नाभिक घनत्व मापा और नाभिक / 0.1 मिमी की संख्या के रूप में व्यक्त किया गया था².

स्थान कंडीशनिंग

एक जगह कंडीशनिंग उपकरण (कैबिब एट अल) का उपयोग करके व्यवहार प्रयोग किए गए थे। 2000; वेंचुरा एट अल।, 2003, 2008)। उपकरण में दो ग्रे Plexiglas कक्ष (15.6 × 15.6 × 20 सेमी) और एक केंद्रीय गली (15.6 × 5.6 × 20 सेमी) शामिल थे। दो स्लाइडिंग दरवाजे (4.6 × 20 सेमी) ने गली को कक्षों से जोड़ा। प्रत्येक कक्ष में दो त्रिकोणीय समानांतर चतुर्भुज (5.6 × 5.6 × 20 सेमी) काले Plexiglas से बने और अलग-अलग पैटर्न (हमेशा कक्ष की सतह को कवर करने) में व्यवस्थित रूप से उत्तेजनाओं के रूप में उपयोग किए जाते थे। स्थान कंडीशनिंग के लिए प्रशिक्षण प्रक्रिया पहले वर्णित की गई है (कैबिब एट अल।) 2000; वेंचुरा एट अल।, 2003, 2008)। संक्षेप में, दिन 1 (सबसे प्यारे) पर, 20 मिनट के लिए पूरे तंत्र का पता लगाने के लिए चूहे स्वतंत्र थे। निम्नलिखित 8 दिनों (कंडीशनिंग चरण) के दौरान चूहों को एक दो कक्षों में वैकल्पिक रूप से 40 मिनट के लिए दैनिक रूप से सीमित किया गया था। आधे जानवरों के लिए (एफआर और एफएफ समूहों से) एक पैटर्न को लगातार एमसी (एक्सएनयूएमएक्स जी) और दूसरे को मानक भोजन (माउस मानक आहार एक्सएनयूएमएक्स जी) के साथ जोड़ा गया था; अन्य आधे एक पैटर्न के लिए लगातार MC (1 g) और दूसरे OBJ के साथ जोड़ा जाता था।

सांख्यिकी (स्टेटिस्टिक्स)

चूहों के चार समूहों का उपयोग माइक्रोडायलिसिस प्रयोग के लिए किया गया था: FF sham, n = एक्सएनयूएमएक्स; एफएफ कम हो गया, n = एक्सएनयूएमएक्स; FR शम, n = एक्सएनयूएमएक्स; एफआर समाप्त हो गया, n = एक्सएनयूएमएक्स। डेटा (DA आउटपुट: pg / 6 μl) का विश्लेषण दो-तरफ़ा ANOVAs ने एक कारक के साथ किया था (MC के संपर्क में आने वाले मिनट ब्लॉक) और एक स्वतंत्र कारक: उपचार (20-OHDA रिक्तीकरण या शाम विचलन)। प्रत्येक समूह के भीतर दोहराया माप (डीए स्तरों के समय पर निर्भर भिन्नता) के सरल प्रभाव का भी मूल्यांकन किया गया था।

फोस प्रयोगों के लिए चूहों के छह समूहों का उपयोग किया गया था (n = 5 प्रत्येक)। डेटा (सी-फॉस इम्यूनोस्टैक्स्ड न्यूक्लियरिटी का घनत्व) दो स्वतंत्र चर के साथ दो-तरफ़ा एनोवा द्वारा विश्लेषण किया गया था: उपन्यास उत्तेजना (एमसी या ओबीजे) और उपचार (एक्सएनयूएमएक्स-ओएचडीए रिक्तीकरण या शाम विचलन)। पोस्ट हॉक जब भी कारकों के बीच एक महत्वपूर्ण अंतःक्रिया का पता चलता है, तो विश्लेषण (टुके का सुधार) किया गया।

CPP प्रयोगों के लिए चूहों के चार समूहों का उपयोग किया गया: FF का 1 समूह और FR चूहों का 1 समूह (n = 8 प्रत्येक) को MC के साथ जोड़े गए डिब्बे में भेदभाव करने के लिए प्रशिक्षित किया गया था और एक को मानक भोजन चाउ और FF के दूसरे समूह के साथ जोड़ा गया था (n = 8) और FR का (n = 7) चूहों को एमसी के साथ जोड़े गए डिब्बे में भेदभाव करने के लिए प्रशिक्षित किया गया था और एक को एक अखाद्य वस्तु के साथ जोड़ा गया था। व्यवहार डेटा (डिब्बे में बिताए गए सेकंड) का विश्लेषण दो-तरफ़ा ANOVAs द्वारा एक कारक (कम्पार्टमेंट) और एक स्वतंत्र कारक (खिला स्थिति: FF, FR) द्वारा किया गया था। जब कारकों के बीच एक महत्वपूर्ण बातचीत का पता चला था तब प्रत्येक समूह के भीतर डिब्बे के सरल-समूह प्रभाव का मूल्यांकन किया गया था।

ऊतक Catecholamines सामग्री पर mpFC में 6-OHDA आसव के प्रभाव

शाम और डीए और एनई के ऊतक स्तर और अलग-अलग प्रयोगों से नी-हटाए गए चूहों को तालिका में सूचित किया गया है Table1.1। सभी मामलों में, GBR सुरक्षा के तहत स्थानीय 6-OHDA जलसेक ने NE को काफी कम कर दिया, लेकिन DA स्तर mpFC को प्रभावित नहीं किया। एनएसी शेल में एनई और डीए के स्तर का मूल्यांकन इस मस्तिष्क क्षेत्र में न्यूरोटॉक्सिन के प्रसार का परीक्षण करने के लिए चूहों (अनहेल्ड) के अलग-अलग समूहों में भी किया गया था। परिणाम NAc शेल में DA या NE पर mpFC NE घटने के कोई प्रभाव नहीं दिखाते हैं।

  

टेबल 1

शाम और 6OHDA- इलाज चूहों में norepinephrine (NE) और डोपामाइन (DA) के ऊतक स्तर।

एक्सपेरिमेंट एक्सएनयूएमएक्स: डीए आउटफ्लो इन एनएसी शेल ऑफ माइस एक्सपोज्ड टू एमसी टू फस्र्ट टाइम

NA शेल में DA बहिर्वाह पर MC के साथ 40 मिनट के अनुभव के प्रभाव को चित्रा में बताया गया है Figure1.1। एफएफ चूहों में एकत्र किए गए डेटा के सांख्यिकीय विश्लेषण ने कारकों के बीच कोई मुख्य प्रभाव या महत्वपूर्ण बातचीत नहीं प्रकट की; वास्तव में, न तो MC और न ही mpFC NE एक्सप्लोरेशन के संपर्क में NA शैल (चित्रा) में DA बहिर्वाह को प्रभावित किया (Figure1,1, बाएं)। इसके बजाय, FR चूहों में एकत्र किए गए डेटा के लिए कारकों के बीच एक महत्वपूर्ण बातचीत सामने आई थी (F_(2,20) = 11.19; p <0.001), शैंप-संचालित जानवरों में बेसलाइन (0) की तुलना में डीए बहिर्वाह की एक प्रगतिशील वृद्धि के कारण, जिसे एमपीएफसी एनई कमी (चित्रा) द्वारा समाप्त कर दिया गया था (Figure1,1, सही)।

  

चित्रा 1

चयनात्मक औसत दर्जे के पूर्व ललाट प्रांतस्था (mpFC) norepinephrine (एनई) के डोपामाइन (डीए) बहिर्वाह (मतलब पीजी / 20 μl) SEM) के नाभिक accumbumb खोल (NAF शैल) मुक्त खिलाया (FF) और खाद्य प्रतिबंधित () पर प्रभाव FR) चूहों। * गौरतलब ...

एक्सएनयूएमएक्स का प्रयोग: सी-फोस इम्यूनोस्टिंग इन एमईएस को एमसी या पहली बार एक अखाद्य वस्तु के संपर्क में लाया गया।

C-fos एक्सप्रेशन पर MC या OBJ में 40 मिन एक्सपोज़र के प्रभाव को चित्र में दिखाया गया है Figure2.2। विभिन्न प्रयोगात्मक समूहों में NA c-fos अभिव्यक्ति के प्रतिनिधि चित्र में दिखाए गए हैं Figure3.3। यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि, इन प्रयोगों में उपयोग किए जाने वाले ऊतक नमूनों की उच्च संख्या के कारण, एफएफ और एफआर चूहों में एकत्र किए गए नमूनों को विभिन्न बैचों में संसाधित किया गया था, इसलिए इन दो समूहों में प्राप्त परिणामों के बीच प्रत्यक्ष तुलना सार्थक नहीं है।

  

चित्रा 2

विभिन्न प्रयोगात्मक परिस्थितियों में प्लास्टिक (OBJ) या दूध चॉकलेट (MC) के एक टुकड़े के पहले अन्वेषण से प्रेरित सी-फोस अभिव्यक्ति (मतलब घनत्व) SEM)। ^#उपन्यास प्रोत्साहन का मुख्य प्रभाव (ओबीजे बनाम एमसी; विवरण के लिए पाठ देखें)। ...

  

चित्रा 3

मुक्त खिलाया (एफएफ, शीर्ष) और खाद्य प्रतिबंधित (एफआर, नीचे) चूहों के एनएसी कोर और शेल से इम्युनोस्टैस्टेड नमूनों की प्रतिनिधि छवियां। (१) एमएम के संपर्क में आने से शैंपू हो चुके चूहे (ख) ओबीजे के संपर्क में आने से शर्मिंदा हुए चूहे (ग) NE- घटित MC के संपर्क में, (डी) NE-समाप्त ...

एफएफ चूहों में एकत्र आंकड़ों पर किए गए सांख्यिकीय विश्लेषणों ने सेंट्रल एमीगडाला (सीईए) में कारक उत्तेजना (एमसी बनाम ओबीजे) का एक महत्वपूर्ण मुख्य प्रभाव प्रकट किया; F_(1,28) = 7.35; p <0.05), इलाज की परवाह किए बिना एमसी के संपर्क में चूहों में उच्च सी-फॉस अभिव्यक्ति के कारण (Figure2,2, नीचे बाएं), और डॉर्सोमेडियल स्ट्रेटम (डीएमएस) में; F_(1,28) = 14.44; p <0.001) इलाज के बावजूद OBJ को उजागर चूहों में उच्च सी-फॉस अभिव्यक्ति के कारण (चित्रा) (Figure2,2, बाएं से बाएं)। NE घटने का कोई प्रभाव नहीं और न ही कारकों उत्तेजना और उपचार के बीच महत्वपूर्ण बातचीत FF चूहों में एकत्र आंकड़ों के सांख्यिकीय विश्लेषण से पता चला है, यह दर्शाता है कि FFC चूहों में mpFC NE depletion पूरी तरह से अप्रभावी था।

एफआर चूहों (चित्रा) में एकत्र आंकड़ों के लिए के रूप में (Figure2,2, सही) सांख्यिकीय विश्लेषणों ने डीएमएस में कारकों उत्तेजना (ओबीजे बनाम एमसी) और उपचार (शाम बनाम एनई-हटाए गए) के बीच महत्वपूर्ण बातचीत का खुलासा किया (F_(1,24) = 11.5; p <0.005), NAC कोर (F_(1,24) = 12.28; p <0.005), और NAC शैल (F_(1,24) = 16.28; p <0.001)। शम-संचालित चूहों में MC ने c-fos इम्युनोस्टैस्टेड नाभिक की एक बड़ी वृद्धि को बढ़ावा दिया तो NAC कोर और शेल में OBJ (चित्र) (Figure2,2, सही)। एनएसी शेल में एमसी-प्रेरित सी-फोस अभिव्यक्ति की कमी और एनएके कोर में ओबीजे-प्रेरित सी-फोस अभिव्यक्ति की वृद्धि के कारण एनई-हटाए गए जानवर में यह प्रभाव नहीं देखा गया था। शम-संचालित एफआर चूहों के डीएमएस में ओबीजे एमसी द्वारा प्रवर्तित सी-फॉस अभिव्यक्ति को बढ़ावा देने में असमर्थ था (चित्रा) (Figure2,2, ठीक तरह से ऊपर)। डीएमएस में ओबीजे द्वारा प्रवर्तित फ्रंटल कॉर्टिकल एनई कमी ने सी-फॉस अभिव्यक्ति को बढ़ाया, इस प्रकार एफएफ चूहों में मनाया गया सी-फॉस सक्रियण का पैटर्न ठीक हो गया।

FR चूहों के CeA में सांख्यिकीय विश्लेषण ने केवल कारक उत्तेजना (MC बनाम OBJ) का एक मुख्य प्रभाव प्रकट किया; F_(1,24) = 24.93; p इलाज की परवाह किए बिना एमसी के संपर्क में चूहों में उच्च c-fos अभिव्यक्ति के कारण <0.0001) (चित्रा) (Figure2,2, नीचे दाएं)।

प्रयोग 3: MC- युग्मित प्रसंग के लिए वातानुकूलित वरीयताएँ

आकृति में Figure44 CPP प्रयोगों के डेटा की सूचना दी जाती है। या तो एफआर या एफएफ चूहों ने एमसी के साथ जोड़े गए डिब्बे के लिए महत्वपूर्ण प्राथमिकता दिखाई, जब दूसरे को अभ्यस्त चाउ भोजन के साथ जोड़ा गया था (खिला स्थिति की परवाह किए बिना युग्मन का मुख्य प्रभाव) F_(1,13) = 12.36; p <0.005; आकृति Figure4A) .4A)। इसके बजाय, जब अन्य डिब्बे को ओबीजे (चित्रा) के साथ जोड़ा गया था (Figure4B), 4B), केवल FR चूहों ने MC-paired one (जोड़ी बनाने और खिलाने की स्थिति के बीच महत्वपूर्ण बातचीत) के लिए एक महत्वपूर्ण प्राथमिकता दिखाई: F_(1,13) = 5.382; p < 0.05).

  

चित्रा 4

विभिन्न प्रायोगिक परिस्थितियों में मिल्क चॉकलेट (MC) के साथ जोड़े गए संदर्भ के लिए वातानुकूलित वरीयता (डिब्बे में comp SEM में खर्च किए गए सेकंड) पर प्रतिबंधित फीडिंग (FR) के प्रभाव। (एक) डिब्बे में MC-paired डिब्बे के लिए वरीयता ...

खाद्य प्रतिबंधित लेकिन नहीं बिना तैयारी के फेड चूहे शो एनएसी शेल में डीए बहिर्वाह बढ़ा जब पहली बार दूध चॉकलेट का अनुभव करते हैं और इस प्रतिक्रिया को फ्रंटल कॉर्टिकल एनई के अभाव से रोका जाता है

प्रयोगों के एक पहले सेट ने दिखाया कि MC के साथ प्रारंभिक अनुभव FR के NA शेल में DA बहिर्वाह की वृद्धि को बढ़ावा देता है लेकिन FF चूहों को नहीं। यह चूहों में प्राप्त वर्तमान और पिछले परिणामों के बीच विसंगति को इंगित करने के लायक है (बस्सारेओ और डि चियारा, 1999), कि प्रजाति के अंतर के साथ-साथ उपयोग किए जाने वाले दूध चॉकलेट के प्रकारों में आसानी से समझाया जा सकता है (पिछले अध्ययन में सफेद चॉकलेट: वेंचुरा एट अल देखें। 2008 ब्योरा हेतु)।

हमारा डेटा यह भी प्रदर्शित करता है कि एफआर चूहों द्वारा उपन्यास तालमेल भोजन के लिए mesoaccumbens DA प्रतिक्रिया को बरकरार ललाट कोर्टिकल नॉरएड्रेनाजिक ट्रांसमिशन की आवश्यकता होती है क्योंकि यह ललाट कॉर्टिकल एनई के एक चयनात्मक कमी द्वारा समाप्त कर दिया गया था। नॉरएड्रेनेर्जिक कमी ने एफएफ चूहों के एनएसी में डीए बहिर्वाह को प्रभावित नहीं किया है, हालांकि इन चूहों (वेंटुरा एट अल।) में एमसी द्वारा प्राप्त एमएफएफसी एनई बहिर्वाह की मध्यम वृद्धि को रोकने के लिए दिखाया गया है। 2008)। यह खोज इस दृष्टिकोण को मजबूत समर्थन प्रदान करती है कि NAc Shell में DA बहिर्वाह केवल mpFC में बड़े NE सांद्रता द्वारा नियंत्रित होता है।

भस्म चॉकलेट की मात्रा पर mpFC एनई की कमी का कोई प्रभाव नहीं था, हालांकि एफआर चूहों ने एफएफ चूहों (देखें "सामग्री और तरीके" अनुभाग) की तुलना में काफी अधिक एमसी खाया, ये डेटा तालू के भोजन के संपर्क में आए चूहों के अनुरूप हैं। बहुत लंबा समय (वेंचुरा एट अल।) 2008) और सामान्य अवलोकन के साथ कि खिला व्यवहार को बढ़ाया मेसोकेम्बुन्स डीए ट्रांसमिशन (निकोला,) की आवश्यकता नहीं होती है 2016; बोखौद एट अल ।; 2017).

एमसी का पहला अनुभव स्ट्राइटम में सी-फॉस एक्सप्रेशन के एक अलग पैटर्न को बढ़ावा देता है बिना तैयारी के फेड और खाद्य-प्रतिबंधित चूहे और फ्रंटल कोर्टिकल एनई डिप्लेशन केवल प्रभाव सी-फॉस अभिव्यक्ति खाद्य प्रतिबंध चूहे में प्रोत्साहन उत्तेजक द्वारा प्राप्त

प्रयोगों के एक दूसरे सेट ने मूल्यांकन किया कि क्या एमसी के साथ एक पहला अनुभव जीव की खिला अवस्था के आधार पर अलग-अलग मस्तिष्क सर्किटों को संलग्न करता है। इस उद्देश्य के लिए हमने मस्तिष्क के सी-फॉस सक्रियण के पैटर्न का मूल्यांकन किया, जो कि खाने योग्य खाद्य पदार्थों से अलग था क्योंकि बढ़ते प्रमाण कृन्तकों में इस मस्तिष्क मानचित्रण रणनीति के उपयोग का समर्थन करते हैं (नॅप्सका एट अल।) 2007; एगो एट अल।, 2015; जिमेन्ज़-सैंचेज़ एट अल। 2016)। उत्तेजना नवीनता के प्रभाव को नियंत्रित करने के लिए, मस्तिष्क में सी-फॉस अभिव्यक्ति को सक्रिय करने के लिए जाना जाता है (जेनकिंस एट अल।)। 2004; स्ट्रूथर्स एट अल।; 2005; निप्प्सका एट अल। 2007; रिनाल्डी एट अल।; 2010), हमने एक उपन्यास अखाद्य वस्तु (ओबीजे) के संपर्क का उपयोग किया।

प्राप्त परिणाम परीक्षण किए गए परिकल्पना को मजबूत समर्थन प्रदान करते हैं। इस प्रकार, केवल MC द्वारा पदोन्नत FR चूहों NAc c-fos अभिव्यक्ति में OBJ द्वारा प्रचारित की तुलना में बड़ा था; इन चूहों में अधिक है, लेकिन में नहीं बिना तैयारी के खिलाया चूहों, mpFC एनई कमी चयनात्मक रूप से कम c-fos अभिव्यक्ति NA शेल में MC द्वारा प्राप्त, बरकरार mpFC NE प्रसारण की आवश्यकता का संकेत है। ये निष्कर्ष माइक्रोडायलिसिस के साथ प्राप्त परिणामों को समानांतर करते हैं और दोनों के बीच एक कारण संबंध का समर्थन करते हैं क्योंकि स्ट्रेटाट-सी-फ़ोस अभिव्यक्ति (बडियानी एट अल।) में डीए रिसेप्टर्स की उत्तेजना की एक प्रमुख भूमिका के लिए मजबूत सबूत हैं। 1998; बरोट एट अल।, 2000; कैर एट अल।, 2003; बर्ट्रान-गोंजालेज एट अल ।; 2008; कोलेलि एट अल।) 2010; एगो एट अल।, 2015)। इसके विपरीत, OBJ- बनाम एमसी-एक्सपोज़्ड चूहों में सी-फ़ोस अभिव्यक्ति की एक बड़ी वृद्धि शाम-खराब चूहों के डीएमएस में देखी गई थी। डीएमएस में उपन्यास अखाद्य वस्तु द्वारा प्राप्त एक मजबूत सक्रियण चूहों और चूहों (स्ट्रूथर्स एट अल) में पिछले निष्कर्षों के साथ सुसंगत है। 2005; रिनाल्डी एट अल।; 2010) और उपन्यास वस्तुओं की खोज के लिए डीएमएस कामकाज की मुख्य भूमिका के साथ (डरिएक्स एट अल।) 2012)। डीएमएस और एमपीएफसी एनई कमी में ओबीजे-प्रेरित सी-फ़ोस अभिव्यक्ति को कम करने वाले प्रतिबंधित खिला ने खाद्य प्रतिबंध के प्रभाव को समाप्त कर दिया, एफआर चूहों के डीएमएस में सी-फ़ॉइल अभिव्यक्ति के प्रेरण पर फ्रंटल कॉर्टिकल एनई के एक निरोधात्मक नियंत्रण का सुझाव दिया। इसके अलावा, हालांकि पहले MC अनुभव ने FR चूहों के NA कोर में OBJ की तुलना में एक बड़ी c-fos अभिव्यक्ति प्राप्त की, MPFC-NE की कमी ने O-BJ-उजागर चूहों में c-fos अभिव्यक्ति को बढ़ाने के बजाय c-fos अभिव्यक्ति को कम करने के द्वारा इस अंतर को समाप्त कर दिया। एमसी-उजागर चूहों में। साथ में, ये निष्कर्ष इस परिकल्पना का समर्थन करते हैं कि एफआर चूहों में ललाट कॉर्टिकल एनई संचरण में वृद्धि हुई है सी-फॉस अभिव्यक्ति को एनएसी शेल में एमसी की खोज द्वारा बढ़ावा दिया गया और डीएमएस और डी दोनों में एक उपन्यास अखाद्य वस्तु की खोज से प्रेरित सी-फॉस अभिव्यक्ति को रोकता है। NAc कोर।

दूसरी ओर, एफएफ और एफआर दोनों चूहों ने ओबीजे के संपर्क में आने पर एमसी की तुलना में एमसीए के संपर्क में आने पर एफएफ और एफआर चूहों ने सी-फ़ोस अभिव्यक्ति की एक बड़ी वृद्धि दिखाई, और दोनों समूहों में एमपीएफसी एनई कमी के बाद भी प्रतिक्रिया स्पष्ट थी। बाद की खोज इस दृष्टिकोण के अनुरूप है कि उपन्यास तालुम के द्वारा CeA में c-fos अभिव्यक्ति का समावेश पोंस के पैराब्रैचियल नाभिक (कोह एट अल) से गुह्य अभिवाही जानकारी द्वारा मध्यस्थता से किया जाता है। 2003; निप्प्सका एट अल। 2007)। हालांकि उपन्यास स्वाद द्वारा CeA सक्रियण भोजन neophobia मध्यस्थता करने का प्रस्ताव दिया गया है: एक प्रतिक्रियाशील प्रतिक्रिया, इस व्याख्या को घाव अध्ययन (रिली और बोर्नोवालोवा, के परिणामों से चुनौती दी गई है) 2005) और अवलोकन के द्वारा कि CeA μ-opioid रिसेप्टर्स की उत्तेजना विभिन्न उत्तेजनाओं के प्रोत्साहन को बढ़ाती है जिसमें तालुका भोजन (Mahler और Berridge, शामिल हैं) 2012)। इसके अलावा, Pavlovian क्षुधावर्धक कंडीशनिंग में CeA की भूमिका के लिए लगातार सबूत हैं, और विशेष रूप से, जगह में कंडीशनिंग (Knapska et al)। 2007; रेज़ायॉफ़ एट अल।; 2007)। इसलिए, सीईए की सक्रियता एफएफ चूहों (वेंचुरा एट अल।) में एमपीएफसी एनई-स्वतंत्र एमसी-प्रेरित सीपीपी में योगदान कर सकती है। 2008).

जब कोई अन्य अप्रभावी उपन्यास वस्तु के साथ जुड़ा हुआ हो, केवल एक फेनयुक्त खाद्य पदार्थ के साथ जोड़ा गया एफआर चूहे एक प्रसंग के लिए वातानुकूलित पसंद विकसित करते हैं

FF चूहों में MC या OBJ द्वारा प्राप्त NAc c-fos अभिव्यक्ति में कोई अंतर नहीं था। इस खोज की सबसे अधिक रूढ़िवादी व्याख्या यह है कि दो उत्तेजनाएं समान रूप से उनके उपन्यास की वजह से समान रूप से नमकीन थीं। वास्तव में, उपन्यास वस्तुएं कृन्तकों के लिए मजबूत प्रोत्साहन हैं (रेचल और बेविंस, 2008)। यह व्याख्या यह भी बता सकती है कि क्यों एफएफ और एफआर दोनों चूहे एमसी-पेयरेड संदर्भ के लिए वातानुकूलित वरीयता विकसित करते हैं, जब दूसरे को आदतन लैब चाउ के साथ जोड़ा जाता है, हालांकि केवल एफआर चूहों में इस कंडीशनिंग को एमपीएफसी एनई रिक्लेक्शन (वेंचुरा एट अल) द्वारा रोका जाता है। 2008)। दूसरे शब्दों में, MC का प्रेरक लार FF में नवीनता पर निर्भर हो सकता है लेकिन FR चूहों में नहीं। इस परिकल्पना का परीक्षण करने के लिए, हमने एक उपकरण में एफएफ और एफआर चूहों को प्रशिक्षित किया, जो उपन्यास के साथ जुड़े एक के साथ उपन्यास ताल खाने से संबंधित एक डिब्बे के विपरीत था। हमने तर्क दिया कि अगर FF चूहों में MC युग्मित प्रसंग के लिए नवीनता को वरीयता दी जाती है, तो कोई प्राथमिकता तब नहीं होनी चाहिए जब कोई दूसरा उपन्यास प्रोत्साहन दूसरे डिब्बे से जुड़ा हो।

प्राप्त परिणामों ने इस परिकल्पना का जोरदार समर्थन किया। वास्तव में, एफएफ चूहों ने एमसी के साथ जुड़े डिब्बे के लिए वातानुकूलित वरीयता विकसित नहीं की, जब अन्य वस्तु नवीनता के साथ जुड़ा हुआ था, जैसा कि पहले बताया गया था (वेंचुरा एट अल।) 2008), उन्होंने MC-paired डिब्बे के लिए वातानुकूलित वरीयता दिखाई जब दूसरा एक प्रसिद्ध स्वाद के साथ जुड़ा हुआ था। इसके विपरीत, एफआर चूहों ने दोनों प्रयोगात्मक सेटिंग्स में एमसी से जुड़े डिब्बे को इस निष्कर्ष का समर्थन किया कि इन चूहों के लिए एमसी और एमसी से जुड़े उत्तेजनाओं का प्रोत्साहन नमकीनपन से संबंधित नहीं है। यह निष्कर्ष FF में MC द्वारा नहीं बल्कि FR में चूहों द्वारा प्रेरित CPP में CeA की भूमिका का समर्थन करता है। इसलिए, वर्तमान प्रयोगों के व्यवहार और सी-फोस निष्कर्षों से संकेत मिलता है कि अलग-अलग मस्तिष्क सर्किट दो खिला स्थितियों में उपन्यास तालमेल भोजन के प्रेरक नमकीन बनाने की प्रक्रिया करते हैं।

अंत में, OBJ FF चूहों में जगह कंडीशनिंग के लिए MC के साथ प्रतिस्पर्धा करता है, लेकिन FR चूहों में ऐसा नहीं होता है, यह दर्शाता है कि उपन्यास ताल खाने की प्रेरक क्षमता बाद वाले समूह में अधिक है। वास्तव में, एक पिछले अध्ययन ने बताया कि उपन्यास वस्तुएं कम कंडीशनिंग के साथ प्रतिस्पर्धा करती हैं, लेकिन जगह कंडीशनिंग के लिए कोकीन की उच्च खुराक के साथ नहीं (रीचेल और बीन्स, 2010)। इसके अलावा, क्योंकि MC का पहला अनुभव एफआर में तो एफएफ चूहों (वेंचुरा अल,) में फ्रंटल कॉर्टिकल एनई पर बड़ा होने का संकेत देता है। 2008) ये निष्कर्ष परिकल्पना का समर्थन करते हैं कि एक प्रोत्साहन प्रोत्साहन द्वारा प्राप्त ललाट कोर्टिकल एनई रिलीज की सीमा उसके प्रेरक नमकीन (पुग्लिसी-एलेग्रा और वेंचुरा, की ताकत पर निर्भर है) 2012).

अनुदान। यह शोध रोम के Sapienza University के अनुसंधान परियोजनाओं द्वारा वित्त पोषित किया गया था। ATENEO एए 2016।

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