izvor
Wagoner centar za alkoholizam i Ovisnost Istraživanje, Institut za neuroznanost, Sveučilište Teksas u Austinu, Austinu, TX, 78712, SAD. [e-pošta zaštićena].
Sažetak
SAŽETAK:
POZADINA:
Nemogućnost da se smanji ili regulira unos alkohola znak je simptoma za poremećaje konzumacije alkohola. Istraživanje novih modela ponašanja i genetskih modela izazvanih iskustvom promjena u konzumiranju alkohola dodatno će podići naše znanje o poremećajima konzumiranja alkohola. Različita ponašanja alkoholne samouprave prethodno su zapažena kada su uspoređena dva F1 hibridna soja miševa: C57BL / 6J x NZB / B1NJ (BxN) nakon iskustva s visokom koncentracijom alkohola i razdobljima apstinencije pokazuju smanjenu sklonost prema alkoholu dok je C57BL / 6J x FVB / NJ (BxF) pokazuju kontinuiranu preferenciju alkohola. Ti su fenotipovi zanimljivi jer ovi hibridi pokazuju pojavu genetske aditivnosti (BxN) i prekomjernu dominaciju (BxF) u unosu etanola na način koji ovisi o iskustvu.
Specifično, BxF pokazuje zadržanu preferenciju prema alkoholu, a BxN pokazuje smanjenu prednost alkohola nakon iskustva s visokim koncentracijama etanola; međutim, iskustva s niskim koncentracijama etanola daju produženu preferenciju alkohola za oba hibrida.
U ovoj smo studiji testirali hipotezu da su ti fenotipovi predstavljeni diferencijalnom proizvodnjom inducibilnog transkripcijskog faktora, ΔFosB, u nagrađivanju, averziji i stresnim regijama mozga.
REZULTATI:
Promjene u neuronskoj plastičnosti (mjereno ΔFosB razinama) bile su ovisne o iskustvu, kao i regiji mozga i genotipu specifične, dodatno podupirući da neuronska kola podupiru motivacijske aspekte potrošnje etanola.
BxN miševi koji pokazuju smanjenu prednost alkohola imali su niže razine ΔFosB u Edinger-Westphal nukleusu nego miševi koji su pokazivali zadržanu preferenciju prema alkoholu, te povišene razine ΔFosB u središnjoj medijalnoj amigdali u usporedbi s kontrolnim miševima.
BxN miševi koji pokazuju zadržanu preferenciju alkohola pokazali su veće razine ΔFosB u ventralnom tegmentalnom području, Edinger-Westphal jezgra i amigdala (središnje i bočne podjele).
Štoviše, u Razine ΔFosB miševa BxN u Edinger-Westphal jezgri i ventralnim tegmentalnim regijama značajno pozitivno koreliraju s preferencijom etanola i unosom, Dodatno, hijerarhijska analiza klastera otkrila je da su mnogi miševi koji nisu bili na razini etanola s ukupnom niskom razinom ΔFosB u klasteru, dok su mnogi miševi koji pokazuju zadržanu preferenciju alkohola s ukupnim visokim razinama ΔFosB u skupu zajedno.
Zaključak:
Uspoređujući i kontrastirajući dva fenotipa alkohola, ovo istraživanje pokazuje da krugovi vezani uz nagrađivanje i stres (uključujući Edinger-Westphal jezgru, ventralno tegmentalno područje, amigdala) prolaze kroz značajnu plastičnost koja se manifestira kao smanjena sklonost prema alkoholu.
pozadina
Postoje poznati čimbenici osjetljivosti, ekološki i genetski povezani s alkoholizmom i alkoholizmom. Sposobnost da se pije obilna količina alkohola s malim posljedicama za pojedinca je primarni simptom nastanka kod mnogih alkoholičara, što ukazuje da je niska razina odgovora na alkohol glavni čimbenik ranjivosti u razvoju alkoholizma.1,2]. Definiranje neurobioloških čimbenika koji pridonose umjerenosti alkohola pomoći će u našem razumijevanju uporabe i zlouporabe alkohola, te je učinkovita strategija za razvoj poboljšanih tretmana za osobe kojima je dijagnosticiran poremećaj konzumacije alkohola. Korištenje modela glodavaca za imitiranje bolesti ljudi bilo je snažno oruđe u napredovanju razumijevanja ove bolesti i poboljšanju liječenja. Postoji nekoliko modela glodavaca za proučavanje aspekata zlouporabe alkohola i alkoholizma, ali nitko u potpunosti ne modelira alkoholizam. Mjera u kojoj će se miš oralno samoprimijeniti otopine etanola u sličnim uvjetima okoline uvelike ovisi o njegovoj genetskoj pozadini [3].
Nedavno smo otkrili da hibridne miševe C57BL / 6JxFVB / NJ (BxF) i FVB / NJxC57BL / 6J (FVBxB6) F1 samo-primjenjuju neuobičajeno visoke razine alkohola tijekom testova preferencije s dvije boce (ženke konzumiraju 20 – 35 g / kg / dan i mužjaci 7 – 25 g / kg / dan, ovisno o koncentraciji i paradigmi)4]. Ovaj novi genetski model ima značajnu prednost u usporedbi s postojećim samooplodnim sojevima, uključujući dokaze o overdominantnom fenotipu i konzumiranju visokih razina alkohola u krvi.4]. Osim toga, visoka potrošnja etanola koju pokazuju BxF miševi je vidljiva u dvije dodatne paradigme pijenja etanola (pijenje u mraku i prihvaćanje etanola tijekom planiranog pristupa tekućini).4]. Zatim smo primijetili različita ponašanja alkoholne samouprave pri usporedbi dvaju hibridnih sojeva miševa F1: C57BL / 6J x NZB / B1NJ (BxN) pokazuju smanjenu sklonost prema alkoholu nakon iskustva s visokom koncentracijom alkohola i razdoblja apstinencije i BxF-a.5]. Koristeći niz testova ponašanja, pokazali smo da su BxN osjetljiviji od BxF miševa na averzivni i sedativni, ali ne i nagrađujući učinci etanola. [6].
Temeljna istraživanja o novim modelima ponašanja i genetskog ponašanja visokog konzumiranja alkohola i promjena u konzumiranju alkohola potaknut će naše znanje o zlouporabi alkohola i alkoholizmu. Smanjeni fenotip preferencije alkohola je zanimljiv zato što BxN miševi inicijalno pokazuju veliku sklonost prema otopinama etanola. Iako je motivacijski aspekt smanjenja unosa alkohola nakon iskustva s visokom koncentracijom etanola i apstinencije nepoznat, miševi BxN mogu se usporediti s umjerenim alkoholičarima u tome što još uvijek konzumiraju otopine etanola, ali na smanjenoj razini, vjerojatno zbog negativnog iskustva.
Zanimljiv je i model zadržavanja alkohola, budući da BxF miševi konzumiraju vrlo visoke razine etanola, bez obzira na prethodno iskustvo. Trajna i smanjena preferencija alkohola može biti povezana s učinkom uskraćivanja alkohola, fenomenom gdje životinje pokazuju značajno povećanu konzumaciju alkohola nakon razdoblja prisilnog abstinenciranja.e7]. Efekt uskraćivanja alkohola koristan je fenomen za proučavanje povećanog alkoholnog ponašanja. Iako je eksperimentalni raspored za koji se zna da uzrokuje efekt uskraćivanja alkohola sasvim različit od rasporeda koji se ovdje koristi, uspoređivanje trajne i smanjene preferencije alkohola s učinkom uskraćivanja alkohola odnosi se na različite fenotipove ponašanja o kojima se ovdje raspravlja o važnom fenomenu u modelima istraživanja alkoholizma kod glodavaca. Smanjena preferencija alkohola bila bi suprotna od učinka uskraćivanja alkohola, a kontinuirana preferencija alkohola mogla bi se opisati kao nepostojanje učinka uskraćivanja alkohola. Upotreba različitih genetskih životinjskih modela, kao što su BxF i BxN, uvelike pridonosi napretku polja budući da se smatra da poremećaji uporabe alkohola potječu iz složenih interakcija između genetike i okoliša. Identifikacija diferencijalne neposredne rane ekspresije gena za ove hibride nudi uvid u moždane sklopove važne za nagrađivanje i odbojnost etanola.
Etanol i drugi neurocircuits koji su uključeni u lijek proučavani su u specifičnim modelima glodavaca pomoću molekularnih markera neuronske plastičnosti i / ili aktivnosti.8-15]. Etanol koji se daje samostalno i eksperimentalno ne rezultira ekvivalentnim mapama metabolizma u mozgu, što upućuje na to da specifični krugovi podupiru učinke pojačavanja etanola [8,9].
Jedna ključna komponenta, koju tek treba temeljito istražiti u istraživanju alkohola, je ispitivanje kontinuiranog i smanjenog ponašanja alkohola i identifikacija neuronskih krugova angažiranih tijekom tih ponašanja. Cilj ovog eksperimenta bio je identificirati područja mozga koja su uključena kontinuiranim i smanjenim sklonostima alkoholu. Kako se pokazalo da kronična primjena alkohola (zajedno s drugim lijekovima za zlouporabu) uzrokuje regionalne razlike u razinama ΔFosB u mozgu, testirali smo hipotezu da su ti fenotipovi ponašanja predstavljeni diferencijalnom proizvodnjom inducibilnog transkripcijskog faktora, ΔFosB, u područjima mozga za koja je poznato da biti uključeni u nagrađivanje, odbojnost i stres [10].
Kronični podražaji koji uzrokuju regionalne razlike u razinama ΔFosB uključuju droge zlouporabe (alkohol, kokain, amfetamin, nikotin, morfij i antipsihotici), kronični stres (stres kod sputavanja, nepredvidivi šok u nogama, elektrokonvulzivni napadi) i kompulzivno kretanje kotača.11]. Kao potencijalni posrednik dugotrajnih adaptacija u mozgu, prepoznavanje dominantne varijante FosB (FosB ili ΔFosB) kao odgovor na kronično liječenje etanolom je važna razlika.
Postoji nekoliko studija koje su mjerile FosB i ΔFosB nakon kroničnih podražaja za koje nije potvrđeno da je ΔFosB dominantna izoforma (poput onih opisanih u nastavku). Međutim, postoje snažni dokazi da je ΔFosB, a ne FosB, dominantna izoforma nakon kroničnih stimulusa [10-12]. Studija koju su proveli Ryabinin i Wang (1998) pokazala je da u DBA / 2J miševima koji preferiraju alkohol s niskim udjelom alkohola, četiri dana ponovljenih injekcija etanola rezultiraju snažnim povećanjem ekspresije FosB u sljedećim regijama mozga: prednja kortikalna amigdaloidna jezgra, lateralna septum ventrale, centralna amigdaloidna jezgra, lateralna septum ventrale , lateralna amigdala, lateralni hipotalamus, ljuska nucleus accumbens, jezgra strijelnog terminisa i paraventricularna jezgra talamusa [13]. Njihovi rezultati identificiraju neurociru osjetljivu na etanol. Ekspresija FosB također je izmjerena u C57BL / 6J mišu, koji preferira alkohol, tijekom prikupljanja i održavanja etanolne samouprave pod ograničenim uvjetima pristupa. Nije bilo promjena u FosB razinama tijekom stjecanja samouprave [14]. Međutim, nakon dva tjedna ograničene pristupne etanolne samouprave, razine FosB su povećane u središnjoj medijalnoj jezgri amigdale i Edinger-Westphal jezgre.15]. Sveukupno gledano, izvješća identificiraju nove regije uključene u samostalnu primjenu etanola, kao i ulogu mezokortikolimbičkog puta i proširene amigdale.16]. Međutim, važno je napomenuti da promjene u razinama ΔFosB ovise o putu primjene etanola, dozi i dužini vremena izloženog liječenju ili rasporedu.13-15].
Sojevi miša koji se koriste u ovoj studiji daju zanimljive modele za usporedbu trajne i smanjene preferencije alkohola i temeljnih mehanizama odgovornih za te različite reakcije na alkohol. Ovo istraživanje pokazuje da miševi koji pokazuju smanjenu preferenciju alkohola također pokazuju značajnu plastičnost u krugovima povezanim s nagrađivanjem i stresom (uključujući Edinger-Westphal jezgru, ventralno tegmentalno područje, amigdalu, nucleus accumbens i cingulate cortex).
Rezultati
Utjecaj koncentracije alkohola i razdoblja apstinencije na samoprimjenu kod BxF i BxN miševa
Da bi pokazali da su različite koncentracije etanola i / ili razdoblja apstinencije promijenili naknadnu potrošnju etanola, osmislili smo četiri rasporeda (skupine) za mjerenje potrošnje etanola (Figure1a, b).1a, b). Za svaki su hibrid postojale četiri pokusne skupine: visoke koncentracije, visoke koncentracije s apstinencijskim razdobljima, niske koncentracije i niske koncentracije s periodima apstinencije. Cjeloviti podaci o preferenciji etanola (Slika (Figure2)2) i potrošnje (Slika (Figure3)3) podaci (za sve skupine i oba genotipa) su prikazani kao referenca. Da bi se ustanovili i ilustrirali fenotipovi ponašanja za kontinuiranu i smanjenu preferenciju alkohola, podaci o preferenciji i potrošnji etanola 9% prikazani su na slikama Figures44 i and5.5, Ti se fenotipovi ponašanja temelje na usporedbi preferencije i potrošnje etanola 9% u prvoj, drugoj, trećoj i četvrtoj prezentaciji u grupama s visokim koncentracijama i odgovarajućim eksperimentalnim danima za skupine niskih koncentracija. Izvršena je dvosmjerna ANOVA (genotip x vrijeme) preferencije i potrošnje etanola 9%. Za grupu visokih koncentracija, prednost etanola (Slika (Figure4a)4a) i potrošnje (Slika (Figure5a)5a) bili su veći za BxF od BxN, a BxF je pokazao trajnu sklonost i konzumaciju alkohola, dok je BxN imao smanjenu sklonost i konzumaciju alkohola (PREFERENCIJA ETHANOLA - interakcija F (3,54) = 4.83, P <0, genotip F (01, 1,54) = 24.10, P <0.001, vrijeme F (3,54) = 9.92, P <0.0001; POTROŠNJA ETANOLA - interakcija N / S, genotip F (1,54) = 50.73, P <0.0001, vrijeme F (3,54, 11.68) = 0.0001, P <XNUMX). Za skupinu s visokim koncentracijama s apstinencijom, prednost etanolu (slika (Figure4b)4b) i potrošnja (Slika (Figure5b)5b) bili su veći za BxF od BxN, a BxF je pokazao trajnu sklonost i konzumaciju alkohola, dok je BxN imao smanjenu sklonost i konzumaciju alkohola (ETHANOL PREFERENCE - interakcija F (3,132) = 15.89, P <0.0001, genotip F (1,132) = 250.43, P <0.0001, vrijeme F (3,132) = 27.48, P <0.0001; POTROŠNJA ETANOLA - interakcija F (3,132) = 11.35, P <0.0001, genotip F (1,132) = 510.88, P <0.0001, vrijeme F (3,132) = 22.42, P <0.0001). Za skupinu s niskim koncentracijama, prednost etanolu (slika (Figure4c)4c) i potrošnja (Slika (Figure5c)5c) bili su veći za BxF od BxN, a oba su hibrida imala stalnu sklonost i konzumaciju alkohola (PREFERENCIJA ETHANOLA - interakcija N / S, genotip F (1,54) = 12.2, P <0.01, vrijeme N / S; POTROŠNJA ETHANOLA - interakcija N / S, genotip F (1,54) = 74.83, P <0.0001, vrijeme N / S). Za skupinu s niskim koncentracijama s apstinencijom, prednost etanolu (slika (Figure4d)4d) i potrošnja (Slika (Figure5d)5d) bili su veći za BxF od BxN, a oba su hibrida pokazala umjereno smanjenje preferencija i konzumacije alkohola (PREFERENCIJA ETHANOLA - interakcija N / S, genotip F (1,132) = 166.58, P <0.0001, vrijeme N / S; POTROŠNJA ETANOLA - interakcija F (3,132) = 3.61, P <0.05, genotip F (1,132) = 480.64, P <0.0001, vrijeme F (3,132) = 7.87, P <0.0001). Ukratko, u skupinama s visokim koncentracijama (bez apstinencije), BxF je pokazivao trajnu naklonost prema alkoholu, dok je BxN pokazivao smanjenu naklonost prema alkoholu, a u skupinama s niskom koncentracijom (bez apstinencije), BxF i B6xN pokazivali su trajnu naklonost prema alkoholu. Budući da su fenotipi od interesa najbolje zabilježiti u skupinama bez apstinencije, oni su u fokusu ostatka studije.
ΔFosB razine
Kvantifikacija i analiza ΔFosB korištena je za identificiranje neurocircuitry kronično aktiviranih tijekom kontinuirane i smanjene preferencije alkohola. Za svakog hibrida postojale su tri pokusne skupine: visoke koncentracije, niske koncentracije i voda (kontrola). ΔFosB podaci prikazani su kao postotak ΔFosB pozitivnih neurona [(# od ΔFosB pozitivnih neurona) / (# od ΔFosB pozitivnih neurona + # Nissl pozitivnih neurona)] (Table1).1). Prethodni rad je pokazao da iskustvo etanola može izazvati neurodegeneraciju [17]. Stoga smo istražili broj neurona u ovoj studiji i izvijestili da nema značajne razlike na temelju genotipa ili skupine za područja mozga koja su kvantificirana u ovoj studiji. Provedene su sljedeće tri analize ΔFosB podataka: 1) trosmjerna ANOVA (genotip x grupa x regija mozga), 2) dvosmjerna ANOVA (grupa područja mozga x) za svaki genotip i 3) razvijene su korelacijske matrice radi mapiranja korelacije mreža.
Ponovljene mjere trosmjerne ANOVA (genotip x skupina x regija mozga) otkrile su interakciju genotip x regija mozga [F (15,375) = 2.01, P <.05], interakcija skupine x regija mozga [F (15.375) = 1.99, P <0.01] i glavni učinak na područje mozga [F (15,375) = 43.36, P <.000]. Ponovljene mjere dvosmjerne ANOVA (regija mozga x skupina) za svaki genotip pokazale su da postoji glavni učinak grupe i regije mozga i za BxF i za BxN [BxF - F (2,374) = 11.79, P <.0001, glavni učinak skupina; F (15,374) = 25.64, P <.0001, glavni učinak moždane regije; BxN - F (2,360) = 43.38, P <.0001, glavni učinak grupe; F (15,360) = 23.73, P <.0001, glavni učinak genotipa]. Post-hoc analiza otkrila je šest značajnih razlika u skupini za BxN (slika (Figure6a-c).6ac). Postotci ΔFosB bili su viši u skupini s niskim koncentracijama nego u skupini vode u La, CeC / CeL, EW i VTA. Postotak ΔFosB bio je viši u grupi visokih koncentracija nego u skupini vode u CeMPV. Postotak ΔFosB bio je viši u skupini niskih koncentracija nego u skupini visokih koncentracija u EW. Podaci ΔFosB za sve druge kvantificirane regije mozga prikazani su u tablici Table1.1. Pearsonova r korelacijska analiza korištena je kako bi se utvrdilo je li% pozitivnih neurona ΔFosB u određenoj regiji mozga korelirao s potrošnjom ili preferencijama etanola. Potrošnja i preferencije etanola pokazale su značajnu pozitivnu korelaciju s% ΔFosB u EW i VTA miševa BxN (POTROŠNJA ETANOLA - EW r = 0.85; VTA r = 0.85; PREFERENCIJA ETHANOLA - EW r = 0.83, VTA r = 0.88; p <0.05 za sve).
Kompleksna povezanost između ekspresije ΔFosB, genotipa, regije mozga i potrošnje etanola dodatno je istražena analizom principnih komponenti i hijerarhijskim klasteriranjem. Analiza glavnih komponenti pokazala je da je većina varijabilnosti (~ 80%) u podacima predstavljena komponentama 5. Nenadzirano hijerarhijsko klasteriranje (grupirano od strane pojedinaca i područja mozga) je tada izvršeno i naručeno pomoću prve glavne komponente (slika (Figure7).7). Pojedinačno grupiranje otkrilo je jake, ali ne i savršene obrasce grupiranja na temelju potrošnje etanola, bez obzira na genotip. Mnogi miševi koji nisu bili na etanolu okupili su se zajedno i pokazali manje ukupnog ΔFosB od srednje vrijednosti, a mnogi od miševa koji su pokazali zadržanu preferenciju alkohola grupirali su se zajedno i pokazali su više ukupnog ΔFosB od srednje vrijednosti. Ta su dva skupa bila najviše divergentna. Tri klastera između njih predstavljala su veću, manju od i srednju mješavinu ΔFosB vrijednosti i fenotipe pijenja etanola.
Rasprava
Različita ponašanja alkoholne samouprave primijećena su pri usporedbi dvaju F1 hibridnih sojeva miševa: BxN pokazuje smanjenu sklonost prema alkoholu nakon iskustva s visokom koncentracijom alkohola i periodima apstinencije dok BxF pokazuje kontinuiranu preferenciju alkohola. BxF modeli stabilni, visoka potrošnja (zadržana preferencija alkohola) i BxN modeli umjerenog konzumiranja alkohola (smanjenje alkohola). Neuronalna plastičnost (ili aktivnost, mjerena pomoću ΔFosB razina) bila je različita ovisno o iskustvu etanola, dodatno podupirući ulogu specifičnog neuronskog kruga u kontinuiranom i smanjenom preferencijama alkohola.
Za soj visoke konzumacije alkohola, C57BL / 6, prednost i potrošnja etanola uvelike ovise o početnoj koncentraciji etanola, dužini apstinencije i sub-soju (C57BL / 6Cr ili C57BL / 6J).7,18]. Otkrili smo da su prednost i potrošnja etanola u BxF miševa dosljedno viši (i stabilniji nego u BxN) u četiri različita testirana rasporeda. Umjereno visoka preferencija i potrošnja etanola u BxN održavana je samo s jednim rasporedom kroničnog konzumiranja alkohola (niske koncentracije bez apstinencije), dok su smanjenja preferencija i konzumacije opažena kod svih drugih testiranih kroničnih rasporeda pijenja. BxN reducirana preferencija alkohola nudi novi životinjski model u kojem iskustvo (ponavljano prikazivanje etanola nakon iskustva s višestrukim visokim koncentracijama etanola i / ili nekoliko kratkih razdoblja apstinencije) dramatično smanjuje njihov odgovor na prethodno visoko preferiranu koncentraciju etanola.
Etanol koji se daje samostalno i eksperimentalno proizvodi različite karte metabolizma mozga, što sugerira da specifični krugovi podupiru učinke pojačavanja etanola [8,9]. Mi smo testirali hipotezu da su kontinuirani i smanjeni fenotipovi ponašanja alkohola predstavljeni diferencijalnom proizvodnjom inducibilnog transkripcijskog faktora, ΔFosB, u područjima mozga za koje je poznato da su uključeni u nagradu, averziju i stres. ΔFosB je transkripcijski faktor s jedinstvenom dugotrajnom stabilnošću i ne desenzibilizira se na podražaje kao c-Fos, nego se akumulira tijekom kroničnih tretmana. Povećanje ΔFosB je posljedica povećane neuronske aktivnosti i smatra se da odražava dugotrajnu plastičnost neurona. Otkrili smo da postotak ΔFosB pozitivnih neurona u područjima mozga ovisi o genotipu (BxF i BxN) i skupini (kontrola vode, niske koncentracije i visoke koncentracije).
Fili BxN, post-hoc analiza je pokazala da je dobrovoljna potrošnja etanola rezultirala povećanim ΔFosB u EW jezgri, VTA i amigdali: što ukazuje na povećanu plastičnost neurona u regijama mozga za koje se zna da su uključene u reakcije etanola, nagrađivanja i stresa. BxN miševi u skupini s visokim koncentracijama (smanjena preferencija alkohola) imaju smanjenu plastičnost neurona u EW, što ukazuje na to da ovi neuroni reagiraju na unos alkohola s plastičnošću ovisnom o iskustvu. U skupini s niskim koncentracijama (izložena preosjetljivost na alkohol), neuronska plastičnost u EW je veća nego u kontrolnim skupinama s visokim koncentracijama i vodom. Iako su provedena pomoću različitih paradigmi pijenja etanola i genetskih modela miša, naši nalazi u EW miševa BxN-a slažu se s prethodnim istraživanjima potrošnje etanola [14,15]. Nepreganglionski EW je nedavno okarakteriziran kao da sadrži neurone koji sadrže perioculomotorni urokortin (Ucn) [19]. Ucn1 je peptid koji sličan kortikotropinu oslobađa (CRF) i koji veže CRF1 i CRF2 receptore. Prethodne studije koje su koristile genetski, farmakološki i lezijski pristup pokazale su da je Ucn1 uključen u reguliranje konzumacije alkohola.19-22]. Tovdje je poznata genetska predispozicija za visok unos alkohola kod glodavaca koji je povezan s višim bazalnim razinama Ucn1 u EW i LSi [23]. Prema tome, nedostatak post-hoc značaja koji smo uočili u EW-u za alkohol koji preferira i konzumira BxF miševe bio je neočekivan. Možda je to zbog blago povišenih postotaka ΔFosB u skupini BxF u vodi u usporedbi s BxN skupinom vode. Doista, postotak ΔFosB razina za sve miševe koji pokazuju zadržanu preferenciju alkohola (BxF skupina visokih koncentracija, skupina BxF niske koncentracije i skupina BxN niske koncentracije) bili su prilično slični.
Za BxN, potrošnja etanola u skupini s niskim koncentracijama povećala je plastičnost neurona u VTA (veća nego u kontrolnim skupinama u visokim koncentracijama i vodi). Prednost i potrošnja etanola također su bili veći za grupu niskih koncentracija, Nedostatak post-hoc značaja koji smo uočili u VTA za miševe koji preferiraju alkohol i konzumiraju BxF miševe je neočekivan i može biti posljedica nešto viših bazalnih razina ΔFosB u kontrolnoj skupini vode. Postotak ΔFosB razine bio je blago povišen u skupini BxF u vodi u usporedbi s BxN skupinom vode, dok je postotak ΔFosB razina bio prilično sličan za sve miševe koji su pokazivali zadržanu preferenciju alkohola (BxF skupina s visokim koncentracijama, BxF skupina s niskim koncentracijama i BxN skupina niske koncentracije). , VTA dopaminski sustav ima glavnu ulogu u posredovanju pojačavajućih učinaka etanola i sudjeluje u mnogim recipročnim vezama važnim za etanol i ponašanje povezano s nagradom.24-26]. Osim toga, VTA se bavi i amigdalnom i EW jezgrom. Pokazalo se da štakori sami primjenjuju etanol izravno u VTA.27]. Također, izloženost etanolu povećava brzinu otpuštanja dopaminergičkih neurona u VTA.28,29]. Povećana brzina izgaranja mogla bi se povezati s indukcijom ΔFosB u VTA koju smo promatrali nakon kronične dobrovoljne primjene etanola u BxN.
Alkoholna ovisnost izaziva dugotrajne neuroadaptacije, što rezultira negativnim emocionalnim stanjima; važan mehanizam u negativnom pojačanju je signalizacija kortikotropin-oslobađajućeg faktora (CRF) unutar amigdale [30]. Farmakološke manipulacije neurona u CeA usmjerene su na GABA, CRF, opioidne, serotoninske, dynorphin i norepinefrinske receptore [25,31-34]. GAntagonisti ABA, kao i antagonisti CRF, smanjuju potrošnju etanola [32,33,35]. Lezije CeA smanjuju kontinuirani pristup dobrovoljnoj potrošnji etanola [36]. Naši nalazi dalje podupiru ulogu CeA u regulaciji alkoholizma. GABAergični neuroni u središnjoj amigdali tvore heterogenu populaciju čije se veze pojavljuju povezane s njihovim sadržajem peptida. Ovi GABAergični neuroni integriraju izlaznu aktivnost CeA. Kao što je pregledano u [Wee i Koob (2010]), sdosadašnje studije su identificirale ulogu dynorphin i kappa opioidnih receptora u održavanju i povećanju unosa etanolae37]. U novije vrijeme, Walker i suradnici su pokazali da antagonist k-opioidnog receptora, nor-binaltorfimin, unutar proširene amigdale selektivno smanjuje samo-davanje etanola u ovisnim životinjama.38]. Signalizacija kapa opioidnih receptora ostaje ključni interes istraživanja na sjecištu stresa, nagrade i odbojnosti. Također je pokazano da je stresom izazvano samo-davanje etanola posredovano signalizacijom kapa opioidnog receptora [39]. Središnji CeA može se podijeliti na latero-kapsularni (CeL / CeC) i medijski stražnji ventralni. GABAergični neuroni CeL / CeC dobivaju dopaminergičke inervacije iz VTA; kao što je prije navedeno, ovi neuroni se aktiviraju nakon akutne primjene etanola i pokazuju povećane ΔFosB miševe koji pokazuju zadržanu preferenciju alkohola. Također, vidi Mc [Nevjesta (2002]) za izvrsnu recenziju o CeA i učincima alkohola [40]. U našem istraživanju, BxN miševi s zadržanom sklonošću uzimanju alkohola (skupina s niskom koncentracijom) pokazali su povećanu plastičnost neurona u CeC / CeL i La i BxN miševima s smanjenom sklonošću alkohola (skupina s visokom koncentracijom) pokazuju povećanu plastičnost neurona u CeMPV. Ovi rezultati upućuju na to da specifično iskustvo etanola uključuje plastičnost u GABAergičnim neuronima u amigdali. S tim podacima, zajedno s odgovarajućim promjenama neuronske plastičnosti u VTA i EW, predlažemo da ovaj krug podliježe značajnoj plastičnosti pod uvjetom zadržavanja alkohola.
Prethodna istraživanja su pokazala da C57BL / 6J miševi mogu postići visoku razinu alkohola u krvi za piće s dvije bočice, međutim te razine alkohola u krvi nisu održane i često konzumiranje ne zadovoljava kriterije za farmakološku motivaciju utvrđenu od Dole i Gentry (1984).41,42]. BxN miševi koji pokazuju smanjenu preferenciju alkohola troše manje nego što se očekuje od tipičnog miša C57BL / 6J [1]. Stoga, iako nismo uzimali uzorke alkohola u krvi, nije vjerojatno da su BxN miševi koji pokazuju smanjenu sklonost alkoholu postigli održane farmakološki relevantne razine alkohola u krvi, što ukazuje na to da visoke koncentracije alkohola u krvi nisu potrebne da bi izazvale plastičnost u tim područjima mozga. Važno je napomenuti da vrlo značajan učinak skupine postoji iu BxF, iako post-hoc rezultati (korigirani za višestruke usporedbe) za BxF regije mozga nisu pokazali značajne promjene u postotku pozitivnih neurona ΔFosB za bilo koju regiju nakon kronične potrošnje etanola. s tim različitim rasporedima.
Kako bi se vizualizirali potencijalni odnosi među varijablama, izvršena je hijerarhijska klasterizacija. Tablica topline dobivene analize pokazuje opći trend između razina ΔFosB i potrošnje etanola bez obzira na genotip. Veće razine ΔFosB povezane su s visokim ispijanjem, a niže razine ΔFosB povezane su s kontrolnim životinjama; međutim, snaga odnosa nije bila dovoljna za točno predviđanje fenotipova pijenja temeljenih isključivo na ΔFosB razinama.
Zaključci
Različita ponašanja alkoholne samouprave primijećena su s dva F1 hibridna soja miševa: BxN pokazuje smanjenu sklonost prema alkoholu nakon iskustva s visokom koncentracijom alkohola, dok BxF pokazuje zadržanu prednost alkohola. BxF modeli stabilni, visoka potrošnja (zadržana preferencija alkohola) i BxN modeli umjerenog konzumiranja alkohola (smanjenje alkohola). Promjene u neuronskoj plastičnosti (mjereno ΔFosB razinama) bile su ovisne o iskustvu, kao i specifičnosti područja mozga i genotipa, a daljnje određivanje neuronskih krugova temeljilo je na motivacijskim aspektima potrošnje etanola. Ovi rezultati pokazuju da promjena jedne roditeljske linije u hibridnim miševima rezultira promjenama u obrascima konzumacije alkohola i značajnim promjenama u obrascima izražavanja ΔFosB, što upućuje na to da su različite moždane mreže uključene u ove različite hibridne miševe.
Metode
Etika
Studija je provedena u strogom skladu s preporukama iz Vodiča za njegu i uporabu laboratorijskih životinja Nacionalnog instituta za zdravlje. Protokol je odobren od strane Institucionalnog odbora za njegu i uporabu životinja na Sveučilištu Texas u Austinu (AUP 2010 – 00028). Sve operacije su provedene pod natrijevom pentobarbitalnom anestezijom i učinjeni su svi napori kako bi se smanjila patnja.
Životinje
Ispitivanja su provedena korištenjem interkrosnih ženskih miševa F1 hibrida dobivenih iz C57BL / 6J i FVB / NJ ili NZB / B1NJ miševa (BxF F1 i BxN F1, roditeljski soj x roditeljski soj). C57BL / 6J, FVB / NJ i NZB / B1NJ uzgajivači kupljeni su od The Jackson Laboratory (Bar Harbor, ME) i parili se u 7 – 8 tjednima. Potomci su odbijeni u izoseksualne skupine svakog od genotipova (BxF F1, BxN F1). Testirali smo samo ženke miševa kako bismo olakšali usporedbu s prethodno prikupljenim podacima [1,5,6]. Miševi su smješteni u standardnim kavezima s hranom i vodom ad libitum, Soba kolonije i prostorija za testiranje bili su na 12 h svjetlu: 12 h mraku (svjetla u 07: 00).
Izbor s dvije boce za etanol
Metoda izbora dviju boca korištena je za određivanje dobrovoljnih uzoraka samouprave etanola u ženki BxF i BxN miševa [1,6]. F1 hibridne ženke miševa (63 dana starosti) pojedinačno su smještene u standardne kaveze dok se jedan tjedan privikavale na boce s epruvetama s kapuljačom koje su sadržavale vodu prije uvođenja otopine etanola. Nakon navikavanja, miševi su imali pristup dvije identične boce: jednu koja sadrži vodu, a drugu sadrži etanolnu otopinu. Položaji cijevi mijenjani su svakodnevno radi kontrole položaja. Da bi se odgovorilo na potencijalno izlijevanje i isparavanje, prosječna težina iscrpljena iz epruveta u kontrolnim kavezima bez miševa je oduzeta od pojedinačnih vrijednosti pijenja svaki dan. Miševi su vagani svakih 4 dana tijekom eksperimenta. Sva potrošnja tekućine mjerena je dnevno tijekom eksperimenta. Količina utrošenog etanola i preferenciju etanola izračunati su za svakog miša, a ove vrijednosti su prosječne za svaku koncentraciju etanola. Utjecaj koncentracija alkohola i razdoblja apstinencije na samoprimjenu u BxF i BxN miševima pokazan je označavanjem eksperimentalne skupine s pristupom visokim koncentracijama (rastući pristup otopinama 3-35% etanola, nakon čega slijedi 3 ponovljeni ciklusi 9, 18, i 27% etanola, koji završava konačnim prikazom 9% etanola) i druge skupine s niskim koncentracijama (eskalacija pristupa 3-9% etanolu, a ostatak pokusa proveden s pristupom 9% etanolu). Svaka od tih skupina imala je podgrupu koja je doživjela ili nije doživjela tri tjedna apstinencije. Kontrolni miševi su iskusili slične uvjete u isto vrijeme kao i eksperimentalni miševi, ali je ponuđena samo jedna boca vode.
Ukupno, bilo je pet skupina za svakog hibrida: Voda (n = 14-16), visoke koncentracije (n = 10), visoke koncentracije s periodima apstinencije (n = 20), niske koncentracije (n = 10) i niske koncentracije s razdobljima apstinencije (n = 20). Pogledajte sliku Figure11 za detaljni raspored odabira dvije grupe boca.
ΔFosB Imunohistokemija i kvantifikacija
ΔFosB imunohistokemija (IHC) izmjerena je u 16 područja mozga kod miševa koji su imali neprekidni pristup 72 dana bilo vodi (Control) ili vodi i alkoholu [visoke koncentracije i niske koncentracije]. Učinak visokih koncentracija na preferenciju i potrošnju etanola bio je mnogo veći od učinka apstinencije; stoga skupine koje su imale razdoblja apstinencije nisu bile uključene u ΔFosB IHC mjerenja. Nadalje, eksperiment je proveden nakon prve pojave trajne ili smanjene preferencije prema alkoholu kako bi se pokazalo da su fenotipovi ponašanja stabilni s ponovljenim ciklusima promjena koncentracije etanola kako bi se ispitali učinci kronične konzumacije etanola. Četiri do osam sati nakon uklanjanja alkohola 73. dana pokusa, miševi su duboko anestezirani (175 mg / kg natrijevog pentobarbitala) i intrakardijalno perfundirani sa 20 ml 0.01 M fiziološke otopine puferirane fosfatom, a zatim 100 ml 4% paraformaldehid u PBS. Mozgovi su uklonjeni, post-fiksirani u 4% paraformaldehida na 4 ° C, ugrađeni u 3% agarozu, presječeni (50 um, koronalni) na vibratom, stavljeni u krioprotektant (30% saharoze, 30% etilen glikola i 0.1% polivinil pirolidon u PBS) preko noći na 4 ° C i pohranjeni na -20 ° C dok se ne obradi za IHC. Otopljeni dijelovi isprani su PBS-om, obrađeni s 0.3% H2O2 i inkubirani jedan sat u 3% normalnom kozjem serumu kako bi se smanjilo nespecifično označavanje. Zatim su dijelovi tkiva inkubirani preko noći na 4 ° C u 3% normalnom kozjem serumu i anti-FosB (SC-48, razrjeđenje 1: 5000, Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA). Sekcije su isprane, inkubirane u biotiniliranom kozjem Ig protiv kunića (razrjeđenje 1: 200, Vector Laboratories, Burlingame, CA) jedan sat, isprane i inkubirane u avidin-biotinskom kompleksu (razrjeđenje 1: 200, Elite kit-Vector Laboratories) . Aktivnost peroksidaze vizualizirana je reakcijom s 0.05% diaminobenzidina (koji sadrži 0.015% H2O2). Tkivne sekcije su Nissl kontrastirane (upotrebom metilen plavog / azurnog II). Klizači su kodirani za slijepo prebrojavanje. ΔFosB-IR neuroni su brojani na 50X (ulje) uvećanju primjenom metode optičkog frakcioniranja i računalnog softvera StereoInvestigator. Informacije o parametrima uzorkovanja: okvir brojanja (50um x 50um x 10um) bio je isti za sve kvantificirane regije; međutim, veličina mreže je određena za svaku regiju mozga kako bi se osiguralo da ukupni broj bilateralnih stanica bude jednak 100-300 kako bi se postigao koeficijent varijacije manji od 0.1. Podaci su izračunati kao postotak ΔFosB pozitivnih jezgri (broj ΔFosB pozitivnih jezgri / broj neurona) za svaku regiju.
FosB antitijelo koje se koristi u ovom istraživanju (SC-48, Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA) je podignuto protiv unutarnje regije FosB i prepoznaje i FosB i ΔFosB. Iako ovo antitijelo prepoznaje i FosB i ΔFosB, imunopozitivni neuroni kvantificirani u ovoj studiji bit će nazvani pozitivnim neuronima ΔFosB jer je pokazano da lijekovi zlouporabe, uključujući alkohol, specifično induciraju ΔFosB, a ne FosB, u neuronima. Perrotti i sur. ([2008]) izmjerena indukcija ΔFosB (kao odgovor na kroničnu primjenu droga zlouporabe, uključujući alkohol) pomoću dvaju antitijela: jedno koje prepoznaje FosB i ΔFosB (SC-48) i jedno selektivno za ΔFosB (nije komercijalno dostupno) i utvrdilo je da za sve lijekove proučavano, imunoreaktivnost opažena upotrebom FosB antitijela (SC-48) je posljedica ΔFosB, budući da nisu detektirali nikakve imunoreaktivne neurone upotrebom antitijela selektivnog za FosB pune dužine [10]. Osim toga, poznato je da se ΔFosB inducira u specifičnom tipu područja mozga i stanica, različitim kroničnim tretmanima i da su dostupni odlični pregledi na ovu temu.11,43,44].
Kratice i lokacije neuroanatomskih struktura
Il - infralimbični korteks (+1.70 mm); Cg1 - cingulasti korteks 1 (+1.1 mm); Cg2 - cingulasti korteks 1 (+1.10 mm); Jezgra NAcc - jezgra nucleus accumbens (+1.10 mm); NAcc ljuska - ljuska jezgre (+1.10 mm); LSi - srednji lateralni septum (+1.10 mm); La - bočna amigdala (-1.22 mm); Bla - bazolateralna amigdala (-1.22 mm); CeC / CeL - središnja kapsularna i središnja bočna amigdala (-1.22 mm); CeMPV - medijalni posterioventralni dio središnje jezgre amigdale (-1.22 mm); PAG - periakvaduktalna siva (-3.64 mm); EW - Edinger-Vestfalska jezgra (-3.64 mm); VTA - ventralno tegmentalno područje (-3.64 mm); DR - leđni raphe (- 4.60 mm); PBN - parabrahijalna jezgra (-5.2 mm); NTS - nukleusni trakt solitarius (−6.96 mm). Mozak mozga u stereotaksičnim koordinatama[45] je korišten za subjektivno podudaranje jednog do tri odjeljka za kvantifikaciju svakog područja mozga.
Statistički postupci
Podaci su prikazani kao srednja vrijednost ± SEM, osim gdje je drugačije naznačeno. Podaci su normalno distribuirani. Statistike su provedene korištenjem Statistica verzije 6 (StatSoft, Tulsa, OK, USA) i GraphPad Prism verzije 4.00 (GraphPad Software, San Diego, CA, USA). Dvosmjerne ANOVA-e s ponovljenim mjerama provedene su za podatke o potrošnji etanola i preferencijama za procjenu razlika između skupina. Dva i trosmjerna ANOVA-i su provedeni za ΔFosB podatke za procjenu interakcija i glavnih učinaka za skupinu (visoke koncentracije, niske koncentracije i vodu), regiju mozga i genotip. Bonferronijeva korekcija za višestruke usporedbe i Bonferronijeve post-hoc provedene su kada je bilo prikladno. Konkretno, pretpostavili smo da bi stres i nagrada trebali povećati FosB kod miševa koji pokazuju smanjenu sklonost prema alkoholu. Za svaki hibridni križ, korišten je Pearsonov r za identificiranje prisutnosti značajnih korelacija između razina ΔFosB i preferencije etanola i potrošnje u miševima s iskustvom etanola.
Hijerarhijsko klasteriranje provedeno je kako bi se vizualiziralo kako podaci variraju i procjenjuju kako se skupina podataka zajedno. Imputirane vrijednosti medijana zamijenile su nedostajuće postotke ΔFosB podataka, koji nisu premašili 15% podataka. Iako postoji veći stupanj neizvjesnosti nego kad bi se imputirane vrijednosti stvarno promatrale, analiza hijerarhijskog klasteriranja zahtijeva kompletno članstvo ili potpuno brisanje za slučajne usporedbe. Hijerarhijsko grupiranje provedeno je pomoću Wardove metode, a dobiveni klasteri su poredani po prvoj principnoj komponenti analize glavnih komponenti (JMP®, verzija 8, SAS Institute Inc., Cary, NC). Za skupine s iskustvom u vodi i etanolu, ΔFosB podaci za svaku regiju mozga bili su z-score transformirani i provedena je analiza glavnih komponenti kako bi se odredio broj klastera. Podaci su zatim grupirani po regijama mozga i pojedincima koristeći analiziranu hijerarhijsku klastering analizu.
Doprinosi autora
ARO, YAB, RAH, TAJ doprinijeli su izradi studije. ARO je prikupio podatke. ARO, IP, RDM analizirali su podatke. ARO, RDM, IP, TAJ, YAB i RAH bili su uključeni u izradu i reviziju rukopisa. Svi autori su pročitali i odobrili završni rukopis.
Zahvale
Zahvaljujemo dr. Jody Mayfield i Colleen McClung za korisne rasprave i Marni Martinez, Jennifer Stokes, Michelle Foshat, Jose Cienfuegos, Jamie Seymour i Darshan Pandya za tehničku pomoć. Ovo istraživanje je podržano od Integrativne neuroznanstvene inicijative za konzorcij za alkoholizam AA13520 i Nacionalnog instituta za zlouporabu alkohola i alkoholizma AA06399-S i AA16424.
Reference
- Garcia-Andrade C, Wall TL, Ehlers CL. Mit o vatru i odgovor na alkohol u Misiji Indijanaca. Am J Psychiatry. 1997;154: 983-988. [PubMed]
- Schuckit MA, Smith TL, Kalmijn J. Nalazi u podskupinama o razini odgovora na alkohol kao faktor rizika za poremećaje konzumiranja alkohola: koledž žena i latinica. Alkohol Clin Exp Res. 2004;10: 1499-1508. [PubMed]
- Belknap JK, Crabbe JC, Mladi ER. Dobrovoljna potrošnja etanola u sojevima 15 inbred miša. Psihofarmakologija. 1993;112: 503-510. doi: 10.1007 / BF02244901. [PubMed] [Cross Ref]
- Blednov YA, Metten P, Finn DA, Rodos JS, Bergeson SE, Harris RA, Crabbe JC. Hibridni C57BL / 6J x FVB / NJ miševi piju više alkohola nego C57BL / 6J miševi. Alkohol Clin Exp Res. 2005;29:1949–1958. doi: 10.1097/01.alc.0000187605.91468.17. [PMC slobodan članak] [PubMed] [Cross Ref]
- Blednov YA, Ozburn AR, Walker D, Ahmed S, Belknap JK. i sur. Hibridni miševi kao genetski modeli visoke konzumacije alkohola. Behav Genet. 2010;40:93–110. doi: 10.1007/s10519-009-9298-4. [PMC slobodan članak] [PubMed] [Cross Ref]
- Ozburn AR, Harris RA, Blednov YA. Bihevioralne razlike između hibridnih miševa C57BL / 6JxFVB / NJ i C57BL / 6JxNZB / B1NJ F1: u odnosu na kontrolu unosa etanola. Behav Genet. 2010;40:551–563. doi: 10.1007/s10519-010-9357-x. [PMC slobodan članak] [PubMed] [Cross Ref]
- Melendez RI, Middaugh LD, Kalivas PW. Razvoj efekta uskraćivanja alkohola i eskalacije u C57BL / 6J. Alkohol Clin Exp Res. 2006;30:2017–2025. doi: 10.1111/j.1530-0277.2006.00248.x. [PubMed] [Cross Ref]
- Porrino LJ, Whitlow CT, Samson HH. Učinci samo-davanja etanola i etanola / saharoze na brzinu lokalnog iskorištavanja glukoze u mozgu kod štakora. Brain Res. 1998;791(1-2) 18-26. [PubMed]
- Williams-Hemby L, Porrino LJ. Niske i umjerene doze etanola proizvode različite obrasce cerebralnih metaboličkih promjena u štakora. Alkohol Clin Exp Res. 1994;18(4):982–988. doi: 10.1111/j.1530-0277.1994.tb00070.x. [PubMed] [Cross Ref]
- Perrotti LI, Weaver RR, Robison B, Renthal W, Maze I, Yazdani S, Elmore RG, Knapp DJ, Selley DE, Martin BR, Sim-Selley L, Bachtell RK, Self DW, Nestler EJ. Različiti obrasci indukcije DeltaFosB u mozgu pomoću droga zlostavljanja. Sinapsa. 2008;62(5):358–369. doi: 10.1002/syn.20500. [PMC slobodan članak] [PubMed] [Cross Ref]
- McClung CA, Ulery PG, Perrotti LI, Zachariou V, Berton O, Nestler EJ. DeltaFosB: molekularni prekidač za dugotrajnu adaptaciju u mozgu. Brain Res. Mol Brain Res. 2004;132: 146-154. [PubMed]
- Perrotti LI, Bolaños CA, Choi KH, Russo SJ, Edwards S, Ulery PG, Wallace DL, Self DW, Nestler EJ, Barrot M. DeltaFosB akumulira se u populaciji GABAergičnih stanica u stražnjem repu ventralnog tegmentalnog područja nakon tretmana psihostimulansom. Eur J Neurosci. 2005;21:2817–2824. doi: 10.1111/j.1460-9568.2005.04110.x. [PubMed] [Cross Ref]
- Ryabinin AE, Wang YM. Ponavljano davanje alkohola različito utječe na imunoreaktivnost c-Fos i FosB proteina u DBA / 2J miševima. Alkohol Clin Exp Res. 1998;22:1646–1654. doi: 10.1111/j.1530-0277.1998.tb03962.x. [PubMed] [Cross Ref]
- Ryabinin AE, Bachtell RK, Freeman P, Risinger FO. Izraz ITF u mozgu miša tijekom stjecanja alkoholne samouprave. Brain Res. 2001;890:192–195. doi: 10.1016/S0006-8993(00)03251-0. [PubMed] [Cross Ref]
- Bachtell RK, Wang YM, Freeman P, Risinger FO, Ryabinin AE. Pijenje alkohola uzrokuje selektivne promjene u području mozga u ekspresiji inducibilnih transkripcijskih faktora. Brain Res. 1999;847(2):157–165. doi: 10.1016/S0006-8993(99)02019-3. [PubMed] [Cross Ref]
- Kalivas PW. Kako utvrditi koje su neuroplastične promjene uzrokovane lijekovima važne? Nat Neurosci. 2005;8:1440–1441. doi: 10.1038/nn1105-1440. [PubMed] [Cross Ref]
- Crews FT, Nixon K. Mehanizmi neurodegeneracije i regeneracije u alkoholizmu. Alkohol. 2009;44: 115-127. doi: 10.1093 / alcalc / agn079. [Cross Ref]
- Khisti RT, Wolstenholme J, Shelton KL, Miles MF. Karakterizacija učinka deprivacije etanola kod supstrata C57BL / 6 miševa. Alkohol. 2006;40: 119-126. doi: 10.1016 / j.alcohol.2006.12.003. [PMC slobodan članak] [PubMed] [Cross Ref]
- Weitemier AZ, Tsivkovskaia NO, Ryabinin AE. Distribucija urokortina 1 u mišjem mozgu ovisi o soju. Neuroscience. 2005;132: 729-740. doi: 10.1016 / j.neuroscience.2004.12.047. [PubMed] [Cross Ref]
- Ryabinin AE. Lezije Edinger-Westphal jezgre u C57BL / 6J miševima narušavaju hipotermiju uzrokovanu etanolom i potrošnju etanola. Eur J Neurosci. 2004;20:1613–1623. doi: 10.1111/j.1460-9568.2004.03594.x. [PubMed] [Cross Ref]
- Ryabinin AE, Yoneyama N, Tanchuck MA, Mark GP, Finn DA. Mikroinekcija urokortina 1 u lateralni septum miša regulira stjecanje i izražavanje konzumacije alkohola. Neuroscience. 2008;151: 780-790. doi: 10.1016 / j.neuroscience.2007.11.014. [PMC slobodan članak] [PubMed] [Cross Ref]
- Turek VF, Tsivkovskaia NO, Hyytia P, Harding S, Lê AD, Ryabinin AE. Ekspresija urokortina 1 u pet pari linija štakora selektivno se uzgaja za razlike u alkoholu. Psihofarmakologija. 2005;181:511–517. doi: 10.1007/s00213-005-0011-x. [PubMed] [Cross Ref]
- Ryabinin AE, Weitemier AZ. Urokortin 1 neurocirkuit: osjetljivost na etanol i potencijalna uključenost u konzumiranje alkohola. Brain Res Rev. 2006;52: 368-380. doi: 10.1016 / j.brainresrev.2006.04.007. [PubMed] [Cross Ref]
- Samson HH, Tolliver GA, Haraguchi M, Hodge CW. Samouprava alkohola: uloga mezolimbičkog dopamina. Ann NY Acad Sci. 1992;654:242–253. doi: 10.1111/j.1749-6632.1992.tb25971.x. [PubMed] [Cross Ref]
- McBride WJ, Li TK. Životinjski modeli alkoholizma: neurobiologija visokog alkoholnog ponašanja kod glodavaca. Crit Rev Neurobiol. 1998;12:339–369. doi: 10.1615/CritRevNeurobiol.v12.i4.40. [PubMed] [Cross Ref]
- Koob GF, Roberts AJ, Schulteis G, Parsons LH, Heyser CJ, Hyytiä P, Merlo-Pich E, Weiss F. Neurocircuitry ciljevi u etanol nagrada i ovisnost. Alkohol Clin Exp Res. 1998;22:3–9. doi: 10.1111/j.1530-0277.1998.tb03611.x. [PubMed] [Cross Ref]
- Rodd ZA, Melendez RI, Bell RL, Kuc KA, Zhang Y, Murphy JM, McBride WJ. Intrakranijalna samo-primjena etanola unutar ventralnog tegmentalnog područja mužjaka Wistar štakora: dokaz uključenosti neurona dopamina. J Neurosci. 2004;24:1050–1057. doi: 10.1523/JNEUROSCI.1319-03.2004. [PubMed] [Cross Ref]
- Gessa GL, Muntoni F, Collu M, Vargiu L, Mereu G. Niske doze etanola aktiviraju dopaminergične neurone u ventralnom tegmentalnom području. Brain Res. 1985;348:201–203. doi: 10.1016/0006-8993(85)90381-6. [PubMed] [Cross Ref]
- Brodie MS, Shefner SA, Dunwiddie TV. Etanol povećava brzinu okidanja dopaminskih neurona na području ventralnog tegmenta štakora in vitro. Brain Res. 1990;508:65–69. doi: 10.1016/0006-8993(90)91118-Z. [PubMed] [Cross Ref]
- Heilig M, Koob GF. Ključna uloga faktora za oslobađanje kortikotropina u ovisnosti o alkoholu. Trendovi Neurosci. 2007;30(8):399–406. doi: 10.1016/j.tins.2007.06.006. [PMC slobodan članak] [PubMed] [Cross Ref]
- Dyr W, Kostowski W. Dokazi da je amigdala uključena u inhibitorne učinke antagonista receptora 5-HT3 na pijenje alkohola kod štakora. Alkohol. 1995;12:387–391. doi: 10.1016/0741-8329(95)00023-K. [PubMed] [Cross Ref]
- Gilpin NW, Richardson HN, Koob GF. Učinci CRF1-receptora i antagonista opioidnih receptora na povećanje alkohola izazvanog ovisnošću kod štakora koji preferiraju alkohol (P). Alkohol Clin Exp Res. 2008;32:1535–1542. doi: 10.1111/j.1530-0277.2008.00745.x. [PMC slobodan članak] [PubMed] [Cross Ref]
- Hyytiä P, Koob GF. Antagonizam GABAA receptora u proširenoj amigdali smanjuje samoprimjenu etanola kod štakora. Eur J Pharmacol. 1995;283:151–159. doi: 10.1016/0014-2999(95)00314-B. [PubMed] [Cross Ref]
- Roberto M, Madamba SG, Moore SD, Talent MK, Siggins GR. Etanol povećava GABAergični prijenos i na pred- i postsinaptičkim mjestima u štakorskim neuronima središnjeg amigdala. Proc Natl Acad Sci. 2003;100: 2053-2058. doi: 10.1073 / pnas.0437926100. [PMC slobodan članak] [PubMed] [Cross Ref]
- Roberts AJ, Cole M, Koob GF. Intra-amigdala muscimol smanjuje samoprimjenu etanola u zavisnim štakorima. Alkohol Clin Exp Res. 1996;20:1289–1298. doi: 10.1111/j.1530-0277.1996.tb01125.x. [PubMed] [Cross Ref]
- Möller C, Wiklund L, Sommer W, Thorsell A, Heilig M. Smanjena eksperimentalna anksioznost i dobrovoljna potrošnja etanola kod štakora nakon središnjih, ali ne i bazolateralnih amigdalnih lezija. Brain Res. 1997;760:94–101. doi: 10.1016/S0006-8993(97)00308-9. [PubMed] [Cross Ref]
- Wee S, Koob GF. Uloga dynorphin-kappa opioidnog sustava u pojačavajućim učincima droga. Psihofarmakologija (Berl) 2010;210:121–135. doi: 10.1007/s00213-010-1825-8. [PMC slobodan članak] [PubMed] [Cross Ref]
- Walker BM, Valdez GR, McLaughlin JP, Bakalkin G. Ciljanje dynorphin / kappa opioidnih receptorskih sustava za liječenje zlouporabe alkohola i ovisnosti. Alkohol. 2012;46: 359-370. doi: 10.1016 / j.alcohol.2011.10.006. [PMC slobodan članak] [PubMed] [Cross Ref]
- Sperling RE, Gomes SM, Sypek EI, Carey AN, McLaughlin JP. Endogeno kappa-opioidno posredovanje pojačanog stresnog djelovanja etanolom uvjetovanog mjesta i samouprave. Psihofarmakologija (Berl) 2010;210:199–209. doi: 10.1007/s00213-010-1844-5. [PubMed] [Cross Ref]
- McBride WJ. Središnja jezgra amigdale i djelovanje alkohola i alkohola u glodavaca. Pharmacol Biochem Behav. 2002;71:509–515. doi: 10.1016/S0091-3057(01)00680-3. [PubMed] [Cross Ref]
- Dole VP, Gentry RT. Prema analogiji alkoholizma u miševa: faktori skale u modelu. Proc Natl Acad Sci. 1984;81: 3543-3546. doi: 10.1073 / pnas.81.11.3543. [PMC slobodan članak] [PubMed] [Cross Ref]
- Dole VP, Gentry RT. Prema analogiji alkoholizma u miševa: Kriteriji za prepoznavanje farmakološki motiviranog pijenja. Proc Natl Acad Sci. 1985;82: 3469-3471. doi: 10.1073 / pnas.82.10.3469. [PMC slobodan članak] [PubMed] [Cross Ref]
- Nestler EJ. Molekularna neurobiologija ovisnosti. Am J Addict. 2001;10: 201-217. doi: 10.1080 / 105504901750532094. [PubMed] [Cross Ref]
- Nestler EJ, Kelz MB, Chen J. DeltaFosB: molekularni posrednik dugotrajne neuralne i bihevioralne plastičnosti. Brain Res. 1999;835:10–17. doi: 10.1016/S0006-8993(98)01191-3. [PubMed] [Cross Ref]
- Franklin KJ, Paxinos G. Mozak miša u stereotaksičnim koordinatama. 2. San Diego, CA: Akademski; 2001.
;