J Neurochem. 2014 Jan; 128 (1): 173-85. doi: 10.1111 / jnc.12381. Epub 2013 kolovoz 21.
Liu QR1, Rubio FJ, Bossert JM, Marchant NJ, Fanous S, Hou X, Shaham Y, Nadam se BT.
Sažetak
Metamfetamin i drugi lijekovi aktiviraju mali dio svih neurona u mozgu. Prethodno smo razvili metodu baziranu na fluorescentno aktiviranom staničnom razvrstavanju (FACS) koja karakterizira molekularne alteracije inducirane selektivno u aktiviranim neuronima koji izražavaju marker neuronske aktivnosti Fos. Međutim, ova metoda zahtijeva prikupljanje uzoraka od mnogih štakora. Sada opisujemo modificiranu FACS-baziranu metodu koja karakterizira molekularne promjene u Fos-ekspresirajućim dorzalnim striatnim neuronima iz jednog štakora pomoću strategije multipleksa pre-amplifikacije.
Fos i NeuN (neuronski marker) imunohistokemija ukazuju da su 5-6% dorzalnih striatum neurona aktivirani 90 min nakon akutne injekcije metamfetamina (5 mg / kg, ip), dok je manje od 0.5% neurona bilo aktivirano injekcijama fizioloških otopina.
Koristili smo FACS da odvojimo neurone obilježene NeuN-om u Fos-pozitivne i Fos-negativne neurone i procijenimo ekspresiju mRNA koristeći RT-qPCR od samo pet Fos-pozitivnih neurona. Metamfetamin inducira povećanja 3-20-puta u neposrednim ranim genima, homer-2, c-fos, fosB i njegove izoforme (ΔfosB i nova izoforma ΔfosB-2) u Fos-pozitivnim ali ne Fos-negativnim neuronima. Neposredna rana indukcija mRNA gena bila je 10-puta niža ili odsutna kada je procijenjena u nerazvrstanim uzorcima homogenata jednog dorzalnog striatuma. Našom modificiranom metodom moguće je proučavati jedinstvene molekularne promjene u neuronima koji se aktiviraju lijekovima ili lijekovima povezanim modelima u kompleksnim modelima ovisnosti.
Metamfetamin i drugi lijekovi aktiviraju mali dio svih neurona u mozgu. Ovdje navodimo poboljšanu metodu za karakteriziranje molekularnih alteracija induciranih selektivno u aktiviranim neuronima koji izražavaju marker neuronske aktivnosti Fos. Koristili smo FACS zajedno s ciljanom pred-amplifikacijom PCR-a za procjenu akutne ekspresije gena induciranog metamfetaminom od samo nekoliko 5 Fos-eksprimirajućih neurona iz jednog štakorskog striatuma. Metamfetamin inducira povećanje 3-20-a u neposrednim ranim genima (IEG) u Fos-pozitivnim ali ne Fos-negativnim neuronima. Ciljano PCR pre-amplifikacija čini mogućim proučavanje jedinstvenih molekularnih promjena u neuronima koji se aktiviraju lijekovima ili lijekovima povezanim znakovima u kompleksnim modelima ovisnosti.
Objavljeno 2013. Ovaj članak je rad vlade SAD-a i javna je domena u SAD-u.
;