DeltaFosB u jezgri nukleusa je kritičan za jačanje učinaka seksualne nagrade. (2010)

KOMENTARI: Delta FosB je marker za sve ovisnosti, kako bihevioralne tako i kemijske. Kako se ova molekula povećava u krugu nagrađivanja, tako se povećava i ovisničko ponašanje. To je jedna od molekula uključenih u neuroplastične promjene. Ovaj eksperiment pokazuje da se povećava sa seksualnim iskustvom, slično kao i kod ovisnosti o drogama. U eksperimentu su koristili genetski inženjering kako bi povećali njegovu razinu iznad "normalne". To je rezultiralo pojačanim olakšavanjem seksualnih aktivnosti. Mislimo da se to događa s ovisnošću o pornografiji.

POTPUNA STUDIJA

Pitcher KK, Frohmader KS, Vialou V, Mouzon E, Nestler EJ, Lehman MN, Coolen LM.

Genes Brain Behav. 2010 Oct; 9 (7): 831-40 doi: 10.1111 / j.1601-183X.2010.00621.x. Epub 2010 kolovoz 16.

Odjel za anatomiju i staničnu biologiju, Schulichova škola za medicinu i stomatologiju, Sveučilište zapadnog Ontarija, London, Ontario, Kanada.

SAŽETAK

Seksualno ponašanje kod mužjaka štakora nagrađuje i pojačava. Međutim, malo se zna o specifičnim staničnim i molekularnim mehanizmima koji posreduju u seksualnoj nagradi ili pojačavaju učinke nagrade za naknadno izražavanje seksualnog ponašanja. Ova studija ispituje hipotezu da ΔFosB, stabilno izražen skraćeni oblik FosB-a, igra ključnu ulogu u jačanju seksualnog ponašanja i poticanju iskustva seksualne motivacije i izvedbe.

Pokazalo se da seksualno iskustvo uzrokuje akumulaciju ΔFosB u nekoliko limbičkih područja mozga, uključujući nucleus accumbens (NAc), medijalnu prefrontalni korteks, ventralno tegmentalno područje i kaudatni putamen, ali ne i medijalnu preoptičku jezgru.

Zatim je inducirana c-Fos, nizvodna (potisnuta) meta ΔFosB, mjerena kod seksualno iskusnih i naivnih životinja. Broj sparivanja induciranih c-Fos-imunoreaktivnih stanica značajno je smanjen kod seksualno iskusnih životinja u usporedbi sa seksualno naivnim kontrolama.

Konačno, razine ΔFosB i njegova aktivnost u NAc-u su manipulirane korištenjem virusnog prijenosa gena za proučavanje njegove potencijalne uloge u posredovanju seksualnog iskustva i olakšanog seksualnog izvođenja izazvanog iskustvom. Životinje s prekomjernom ekspresijom ΔFosB pokazale su pojačano olakšavanje seksualne izvedbe uz seksualno iskustvo u odnosu na kontrole. Nasuprot tome, ekspresija ΔJunD, dominantnog negativnog vezujućeg partnera ΔFosB, ublažila je poticanje seksualnog učinka izazvanog seksualnim iskustvom i usporavanje dugotrajnog održavanja olakšavanja u usporedbi sa skupinama zelene fluorescencije i ΔFosB prekomjerne ekspresije.

Zajedno, ovi nalazi podupiru kritičnu ulogu izražavanja ΔFosB u NAc-u za pojačavanje učinaka seksualnog ponašanja i poticanja seksualne izvedbe izazvane seksualnim iskustvom.

UVOD

Seksualno ponašanje je vrlo korisno i pojačano za muške glodavce (Coolen et al. 2004; Pfaus dr.. 2001). Štoviše, seksualno iskustvo mijenja naknadno seksualno ponašanje i nagradu (Tenk dr.. 2009). S ponovnim iskustvom parenja, seksualno ponašanje je olakšano ili "pojačano", što se očituje u smanjenim latencijama za iniciranje parenja i olakšavanja seksualne izvedbe (Balfour dr.. 2004; Pfaus dr.. 2001). Međutim, temeljni stanični i molekularni mehanizmi seksualne nagrade i pojačanja slabo su shvaćeni. Pokazalo se da seksualno ponašanje i uvjetovani znakovi koji predviđaju parenje privremeno induciraju ekspresiju neposrednog ranog gena c-fos u mezolimbičkom sustavu mužjaka štakora (Balfour dr.. 2004; Pfaus dr.. 2001). Štoviše, nedavno je pokazano da seksualno iskustvo inducira dugotrajnu neuroplastičnost u mezolimbičkom sustavu mužjaka štakora (Frohmader dr.. 2009; Bacači dr.. 2010). Osim toga, kod mužjaka štakora je pokazano da seksualno iskustvo inducira ΔFosB, a Član obitelji Fos, u nucleus accumbens (NAc) (Wallace dr.. 2008). ΔFosB, skraćena varijanta spajanja FosB-a, jedinstveni je član obitelji Fos zbog svoje veće stabilnosti (Carle dr.. 2007; Ulery-Reynolds dr.. 2008; Ulery dr.. 2006) i igra ulogu u povećanoj motivaciji i nagradi za lijekove zlouporabe i dugoročnu neurološku plastičnost koja posreduje u ovisnosti (Nestler dr.. 2001). ΔFosB formira heteromerni kompleks transkripcijskog faktora (aktivator protein-1 (AP-1)) s Jun proteinima, po mogućnosti JunD (Chen dr.. 1995; Hiroi dr.. 1998). Kroz inducibilnu prekomjernu ekspresiju ΔFosB, primarno ograničenu na striatum pomoću bi-transgenih miševa, fenotip ponašanja ovisnika o drogama je proizveden unatoč odsutnosti prethodne izloženosti lijeku (McClung dr.. 2004). Ovaj fenotip ponašanja uključuje senzibilizirani lokomotorni odgovor na kokain (Kelz dr.. 1999), povećana sklonost kokainu (Kelz dr.. 1999) i morfij (Zachariou dr.. 2006), i povećana samokontrola kokaina (Colby dr.. 2003).

Slično kao i nagrada za lijekove, ΔFosB se regulira prirodnim nagrađivanjem i posreduje u izražavanju tih ponašanja. Prekomjerna ekspresija ΔFosB u NAc korištenjem modela glodavaca povećava volonterski rad kotača (Werme dr.. 2002), instrumentalni odgovor za hranu (Olausson dr.. 2006), unos saharoze (Wallace dr.. 2008), i olakšava muškog (Wallace dr.. 2008) i ženski (Bradley dr.. 2005) seksualno ponašanje. Stoga, ΔFosB može biti uključen u posredovanje učinaka prirodnih iskustava, Ttrenutna studija proširuje prethodne studije specifičnim istraživanjem uloge ΔFosB u NAc-u u dugoročnim ishodima seksualnog iskustva na kasnijem ponašanju parenja i živčane aktivacije u mezolimbičkom sustavu.

  • Prvo, utvrđeno je koja područja mozga koja su uključena u sustav nagrađivanja i seksualno ponašanje izražavaju ΔFosB izazvan seksualnim iskustvom.
  • Zatim, utjecaj ΔFosB izazvanog seksualnim iskustvom na ekspresiju c-Fos koja je izazvana parenjem, nizvodni cilj potisnut ΔFosB (Renthal dr.. 2008), istražena je.
  • Konačno, učinak manipuliranja aktivnošću ΔFosB u NAc (prekomjerna ekspresija gena i ekspresija dominantnog partnera s negativnim vezanjem) na seksualno ponašanje i potaknuto iskustvom poticanje seksualne motivacije i učinka određeno je pomoću tehnologije prijenosa virusnog vektora.

METODE

Životinje

Odrasli mužjaci Sprague Dawley štakora (200-225 grama) dobiveni su od Charles River Laboratories (Senneville, QC, Canada). Životinje su bile smještene u kaveze od pleksiglasa s tunelskom cijevi u parovima istog spola tijekom pokusa. Soba kolonije bila je regulirana temperaturom i održavana na ciklusu svjetla 12 / 12 hr s hranom i vodom ad libitum osim tijekom testiranja ponašanja. Ženke poticaja (210-220 grama) za parenje primile su subkutani implantat koji je sadržavao 5% estradiol benzoat i 95% kolesterola nakon bilateralne ovariektomije pod dubokom anestezijom (0.35g ketamin / 0.052g ksilazin). Seksualna receptivnost inducirana je davanjem 500µg progesterona u 0.1 mL sezamovog ulja približno 4 sati prije testiranja. Svi postupci odobreni su od strane Odbora za njegu životinja i korištenja na Sveučilištu Zapadnog Ontarija te su u skladu s CCAC smjernicama koje uključuju kralježnjake u istraživanju.

Seksualno ponašanje

Razmještaj parenja dogodio se tijekom rane mračne faze (između 2 – 6 sati nakon početka mračnog razdoblja) pod tamno crvenim osvjetljenjem. Prije početka pokusa, životinje su nasumično podijeljene u skupine. Za vrijeme parenja, mužjacima štakora bilo je dopušteno kopuliranje u ejakulaciju ili 1 sat, a zabilježeni su i parametri za seksualno ponašanje uključujući: latenciju montiranja (ML; vrijeme od uvođenja ženke do prvog uspona), latenciju intromisije (IL; vrijeme od uvođenja ženka do prve montaže s vaginalnom penetracijom), latencija ejakulacije (EL; vrijeme od prve intromicije do ejakulacije), interval poslije ejakulacije (PEI; vrijeme od ejakulacije do prve sljedeće intromicije), broj grana (M; zdjelično guranje bez vagine) penetracija) i učinkovitost kopulacije (CE = IM / (M + IM)) (Agmo 1997). Broj uzoraka i uložaka nije uključen u analizu za životinje koje nisu pokazale ejakulaciju. Latencije planine i intromije su parametri koji ukazuju na seksualnu motivaciju, dok latencija ejakulacije, broj uspona i učinkovitost kopulacije odražavaju seksualnu izvedbu (Trup 2002).

Eksperiment 1: Izraz ΔFosB

Spolno naivnim mužjacima štakora bilo je dopušteno parenje u čistim kavezima za testiranje (60 × 45 × 50 cm) za 5 uzastopna dnevna parenja ili su ostali seksualno naivni. Dodatna tablica 1 opisuje bihevioralnu paradigmu za eksperimentalne skupine: naivni seks (NNS; n = 5), naivni seks (NS; n = 5), bez seksa (ENS; n = 5) i iskusan spol (ES; n = 4). NS i ES životinje su žrtvovane 1 sat nakon ejakulacije na posljednji dan parenja da bi se istražila ekspresija c-Fos izazvana parenjem. Životinje NNS-a žrtvovane su istodobno s ENS životinjama 24 sati nakon završne sjednice parenja kako bi se ispitao ΔFosB izazvan seksualnim iskustvom. Spolno iskusne skupine bile su prilagođene za seksualno ponašanje prije naknadnog testiranja. Nisu uočene značajne razlike između skupina za bilo kakve mjere ponašanja u okviru odgovarajućih sjednica parenja i pružanje seksualnog ponašanja uzrokovanog seksualnim iskustvom koje su pokazale obje iskusne grupe (Dodatna tablica 2). Kontrole su uključivale seksualno naivne muškarce kojima se rukuje istodobno s životinjama za parenje koje osiguravaju izlaganje ženskim mirisima i vokalizacijama bez izravnog ženskog kontakta.

Za žrtvovanje, životinje su duboko anestezirane pomoću natrij pentobarbital (270mg / kg; ip) i perfundirane intrakardijalno sa 50 mL 0.9% fiziološke otopine, praćene sa 500 mL 4% paraformaldehida u 0.1 M fosfatnom puferu (PB). Mozgovi su uklonjeni i post-fiksirani za 1 h na sobnoj temperaturi u istom fiksativu, zatim uronjeni u 20% sukrozu i 0.01% natrijev azid u 0.1 M PB i pohranjeni na 4 ° C. Koronalne sekcije (35 µm) izrezane su pomoću mikrotoma za zamrzavanje (H400R, Micron, Njemačka), sakupljene u četiri paralelne serije u otopini krioprotektora (30% saharoza i 30% etilen glikola u 0.1 M PB) i pohranjeni na -20 ° C. Slobodni plutajući dijelovi su oprani s 0.1 M fosfatnim puferom (PBS; pH 7.3-7.4) između inkubacija. Sekcije su bile izložene 1% H2O2 za 10 min na sobnoj temperaturi da se uništi endogena peroksidaza, zatim blokira u PBS + inkubacijskoj otopini, koja je PBS koja sadrži 0.1% goveđeg serumskog albumina (kataloška stavka 005-000-121; Jackson ImunoResearch Laboratories, West Grove, PA) i 0.4% Triton X -100 (kataloška stavka BP151-500; Sigma-Aldrich) za 1 h. Sekcije su zatim inkubirane preko noći na 4 ° C u pan-FosB zečjem poliklonskom antitijelu (1: 5K; sc-48 Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, USA). Pan-FosB antitijelo podignuto je protiv unutarnje regije koju dijele FosB i ΔFosB. ΔFosB-IR stanice su specifično ΔFosB-pozitivne jer je u vremenu nakon stimulusa (24 sati) sav FosB izazvan stimulusom degradiran (Perrotti dr.. 2004; Perrotti dr.. 2008). Osim toga, u ovom eksperimentu, životinje koje su se parile na posljednji dan (NS, ES) žrtvovane su 1 h nakon parenja, dakle prije ekspresije FosB. Western blot analiza potvrdila je detekciju ΔFosB na približno 37 kD. Nakon inkubacije primarnih antitijela, sekcije su inkubirane za 1 h u kozjem anti-zečjem IgG (1: 500 u PBS +; Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA) i zatim 1 h u avidin-biotin-hoseradish peroxidase (ABC elita) 1: 1K u PBS, Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA). Nakon ove inkubacije odjeljci su obrađeni na jedan od sljedećih načina:

1. Obilježavanje pojedinačne peroksidaze

Dijelovi NNS i ENS životinja korišteni su za analizu ΔFosB induciranog seksualnim iskustvom. Nakon inkubacije ABC, kompleks peroksidaze je vizualiziran nakon tretmana za 10 minute do kromogenske otopine koja sadrži 0.02% 3,3'-diaminobenzidin tetrahidroklorid (DAB; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) pojačana s 0.02% nikal sulfatom u 0.1 M PB sa vodikov peroksid (0.015%). Sekcije su temeljito isprane u 0.1 M PB kako bi se prekinula reakcija i postavila na kodirane Superfrost plus staklene pločice (Fisher, Pittsburgh, PA, USA) s 0.3% želatinom u ddH20. Nakon dehidracije, sva stakalca su pokrivena s DPX (dibutil ftalat ksilenom).

2. Dvostruka imunofluorescencija

Za analizu ΔFosB i c-Fos korišteni su dijelovi svih četiriju eksperimentalnih skupina koje sadrže NAc i mPFC. Nakon inkubacije ABC, sekcije su inkubirane za 10 min s biotiniliranim tiramidom (BT; 1: 250 u PBS + 0.003% H2O2 Komplet za pojačanje signala tiramida, NEN Life Sciences, Boston, MA) i za 30 min sa strepavidinom konjugiranim s Alexa 488 (1: 100; Jackson Immunoresearch Laboratories, West Grove, PA). Sekcije su zatim inkubirane preko noći sa zečjim poliklonskim antitijelima koja specifično prepoznaju c-Fos (1: 150; sc-52; Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA), nakon čega slijedi inkubacija 30 min s kozjim anti-zečjim Cy3-konjugiranim sekundarnim antitijelima. (1: 200; Jackson Immunoresearch Laboratories, West Grove, PA, USA). Nakon bojenja, sekcije su temeljito isprane u 0.1 M PB, postavljene na kodirana staklena stakalca s 0.3% želatinom u ddH20 i pokriven s vodenim ugradivim medijem (Gelvatol) koji sadrži sredstvo protiv ublažavanja 1,4-diazabiciklo (2,2) oktan (DABCO; 50 mg / ml, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO). Imunohistokemijske kontrole uključivale su izostavljanje bilo kojeg ili oba primarna antitijela, što je rezultiralo odsustvom obilježavanja u odgovarajućoj valnoj duljini.

Analiza podataka

Analiza mozga ΔFosB

Dva eksperimentatora slijepa za liječenje obavila su skeniranje širokog mozga na kodiranim slajdovima. ΔFosB-imunoreaktivne (-IR) stanice u mozgu su polu-kvantitativno analizirane korištenjem ljestvice za prikaz broja ΔFosB-pozitivnih stanica kako je opisano u Tablica 1, Osim toga, na temelju polu-kvantitativnih nalaza, broj ΔFosB-IR stanica je izbrojen korištenjem standardnih područja analize u područjima mozga koja su uključena u nagrađivanje i seksualno ponašanje pomoću cijevi za crtanje kamere lucida pričvršćene za Leica DMRD mikroskop (Leica Microsystems GmbH, Wetzlar , Njemačka): NAc (jezgra (C) i ljuska (S); 400 × 600µm) analizirana na tri rostralno-kaudalne razine (Balfour dr.. 2004); ventralno tegmentalno područje (VTA; 1000 × 800µm) analizirano na tri rostralno-kaudalne razine (Balfour dr.. 2004) i VTA rep (Perrotti dr.. 2005); prefrontalni korteks (prednje područje cinglulate (ACA); prelimbični korteks (PL); infralimbički korteks (IL); 600 × 800µm svaki); kaudatni putamen (CP; 800 × 800µm); i medijska preoptična jezgra (MPN; 400 × 600 µm) (Dodatne brojke 1 – 3). Izračunata su dva dijela po subregiji, a prosječna vrijednost po životinji za izračunavanje skupine. Spolno naivna i iskusna grupna prosjeka ΔFosB-IR stanica uspoređena je za svaku podregiju korištenjem nesparenih t-testova.

Tablica 1     

Sažetak ekspresije ΔFosB u seksualno naivnih i iskusnih životinja
Analiza ΔFosB i c-Fos

Slike su snimljene pomoću hladne CCD kamere (Microfire, Optronics) priključene na Leica mikroskop (DM5000B, Leica Microsystems; Wetzlar, Njemačka) i Neurolucida softvera (MicroBrightfield Inc) s fiksnim postavkama kamere za sve subjekte (koristeći 10x ciljeve). Broj stanica koje izražavaju c-Fos-IR ili ΔFosB-IR u standardnim područjima analize u NAc jezgri i ljusci (400 × 600µm svaki; Dodatna slika 1i ACA od mPFC (600 × 800µm; Dodatna slika 3) su ručno prebrojani od strane promatrača zaslijepljenog za eksperimentalne skupine, u 2 sekcijama po životinji upotrebom Neurolucida softvera (MBF Bioscience, Williston, VT) i prosjek po životinji. Prosječne skupine c-Fos ili ΔFosB stanica su uspoređene pomoću dvosmjerne ANOVA (faktori: seksualno iskustvo i spolna aktivnost) i Fisher LSD za post hoc usporedbe na razini značajnosti 0.05-a.

Eksperiment 2: manipulacija izrazom ΔFosB

Prijenos gena na virusne vektore

Spolno naivni mužjaci Sprague Dawley štakora nasumce su podijeljeni u skupine prije stereotaksijske operacije. Sve životinje primile su bilateralne mikroinjekcije rekombinantnog adeno-pridruženog virusnog (rAAV) vektora koji kodira GFP (kontrola; n = 12), divlji tip ΔFosB (n = 11) ili dominantno negativnog veznog partnera ΔFosB nazvan ΔJunD (n = 9) u NAc. ΔJunD smanjuje ΔFosB posredovanu transkripciju putem kompetitivnog heterodimeriziranja s ΔFosB prije vezivanja AP-1 regije unutar promotora gena (Winstanley dr.. 2007). Titar virusa određen je pomoću qPCR i procijenjen in vivo prije početka studije. Titer je bio 1 – 2 × 1011 infektivne čestice po mL. Vektori rAAV ubrizgani su u volumenu 1.5 uL / ​​strani tijekom 7 minuta (koordinate: AP + 1.5, ML +/- 1.2 iz Bregme; DV-7.6 s površine lubanje prema Paxinos i Watson, 1998) pomoću Hamiltonove šprice (5L Harvard Apparatus, Holliston, MA, SAD). Vektori ne proizvode toksičnost veću od samih kontrolnih infuzija (Winstanley i sur., 2007; za detalje o pripremi AAV-a, vidi Hommel i sur., 2003). Bihevioralni eksperimenti započeli su 3 tjedana nakon vektorskih injekcija koje su omogućile optimalnu i stabilnu virusnu infekciju (Wallace dr.. 2008). Ekspresija transgena u mišjim vrstama doseže maksimum u 10 dana i ostaje povišena najmanje 6 mjeseci (Winstanley dr.. 2007). Na kraju pokusa, životinje su transkardijalno perfuzirane i NAc sekcije su imuno-obrađene za GFP (1: 20K; zečje anti-GFP antitijelo; Molecular Probes) koristeći ABC-peroksidazu-DAB reakciju (kao što je gore opisano) na histološki potvrdite mjesta ubrizgavanja koristeći GFP kao marker (Dodatna slika 4). ΔFosB i ΔJunD vektori također sadrže segment koji eksprimira GFP odvojen unutrašnjim ribosomalnim ulaznim mjestom, što omogućuje verifikaciju mjesta injekcije pomoću GFP vizualizacije kod svih životinja. Samo su životinje s injekcijskim mjestima i širenjem virusa ograničene na NAc uključene u statističke analize. Širenje virusa općenito je bilo ograničeno na dio NAc i nije se proširilo rostralno-kaudalno u cijeloj jezgri. Štoviše, širenje virusa činilo se uglavnom ograničeno na ljusku ili jezgru. Međutim, varijacije mjesta injiciranja i širenja unutar NAc nisu utjecale na učinke na ponašanje. Konačno, GFP injekcije nisu utjecale na seksualno ponašanje ili poticanje seksualnog ponašanja uzrokovano iskustvom u usporedbi s životinjama iz prethodnih studija koje nisu operirane (Balfour dr.. 2004).

Seksualno ponašanje

Tri tjedna nakon dostave virusnog vektora, životinje koje su bile povezane s jednom ejakulacijom (ili za 1 sat) za 4 uzastopne, dnevne sesije parenja kako bi stekle seksualno iskustvo (iskustvene sesije) i naknadno su testirane na dugoročno izražavanje iskustva potaknutog seksualnim ponašanjem 1 i 2 tjedana (1 i 2 testne sesije) nakon završne sesije iskustva. Parametri seksualnog ponašanja zabilježeni su tijekom svih sesija parenja kao što je gore opisano. Statističke razlike za sve parametre tijekom svake seanse parenja uspoređene su unutar i između skupina korištenjem dvosmjernih ponovljenih mjera ANOVA (faktori: tretman i sjednica parenja) ili jednosmjerna ANOVA (latencija ejakulacije, broj izdanaka i intromisije; faktor: liječenje ili parenje slijedi Fisher LSD ili Newman-Keuls testovi za post hoc usporedbe na razini značajnosti 0.05-a. Konkretno, poticajni učinci seksualnog iskustva na parametre parenja uspoređeni su između sesije iskustva 1 (naivno) i iskustvenih sesija 2, 3, ili 4 svaka, kao i između eksperimentalnih skupina unutar svake sesije iskustva. Štoviše, da bi se analizirali učinci liječenja (vektora) na dugoročno olakšavanje seksualnog ponašanja, parametri parenja su uspoređivani između sesije iskustva 4 i 1 i 2 testne sesije unutar svake tretirane skupine, te uspoređivani između eksperimentalnih skupina unutar svake testne sesije.

REZULTATI

Seksualno iskustvo uzrokuje akumulaciju ΔFosB

U početku je provedeno polu-kvantitativno ispitivanje akumulacije ΔFosB u mozgu kod spolno iskusnih muškaraca u usporedbi s spolno naivnim kontrolama. Sažetak ukupnih nalaza nalazi se u Tablica 1, ΔFosB-IR analiza je nastavljena određivanjem broja ΔFosB-IR stanica u nekoliko limbički povezanih područja mozga korištenjem standardnih područja analize. Slika 1 prikazuje reprezentativne slike DAB-Ni koji oboje NAc seksualno naivnih i iskusnih životinja. Značajna ΔFosB up-regulacija pronađena je u mPFC subregijama (Slika 2A), NAc jezgra i ljuska (2B), kaudatni putamen (2B) i VTA (2C). U NAc-u su postojale značajne razlike na svim rostralno-kaudalnim razinama u NAc jezgri i ljusci, a podaci prikazani u Slika 2 je prosjek svih rostro-kaudalnih razina. Nasuprot tome, nije bilo značajnog povećanja ΔFosB-IR u hipotalamičkom medijalnom preoptičkom jezgru (NNS: Avg 1.8 +/− 0.26; ENS: Avg 6.0 +/− 1.86).

Slika 1    

 

Reprezentativne slike koje prikazuju ΔFosB-IR stanice (crne) u NAc-u bez ikakvog spola (A) i ne doživljavaju spolne (B) skupine. aco: prednja komisa Skala ljestvice označava 100 µm.
Slika 2      

Broj ΔFosB-IR stanica u: A. subregijama infralimbičkog (IL), prelimbnog (PL) i prednjeg cingulata (ACA) medijalnog prefrontalnog korteksa; B. Jezgra jezgre i ljuske, i patetirani putamen (CP); C. Rostral, srednji, kaudalni i rep ...

Seksualno iskustvo oslabljuje c-Fos izazvano parenje

Učinak seksualnog iskustva na razine ΔFosB u NAc potvrđen je tehnikama obojenja fluorescencije. Osim toga, analizirani su učinci seksualnog iskustva na ekspresiju c-Fos. Slika 3 prikazuje reprezentativne slike ΔFosB- (zelene) i c-Fos (crvene) -IR stanice u svim eksperimentalnim skupinama (A, NNS; B, NS; C, ENS; D, ES). Seksualno iskustvo je značajno povećalo ekspresiju ΔFosB u NAc jezgri (Slika 4A: F1,15 = 12.0; p = 0.003) i ljuska (Slika 4C: F1,15 = 9.3; p = 0.008). Nasuprot tome, parenje 1 sat prije perfuzije nije imalo učinka na ekspresiju ΔFosB (Slika 4A, C) i nije detektirana interakcija između seksualnog iskustva i parenja neposredno prije perfuzije. Postojao je ukupni učinak parenja prije perfuzije na ekspresiju c-Fos u obje jezgre NAc (Slika 4B: F1,15 = 27.4; p <0.001) i ljuska (Slika 4D: F1,15 = 39.4; p <0.001). Štoviše, ukupni učinak seksualnog iskustva otkriven je u jezgri NAc (Slika 4B: F1,15 = 6.1; p = 0.026) i ljuska (Slika 4D: F1,15 = 1.7; p = 0.211) i interakcija između seksualnog iskustva i parenja prije perfuzije detektirana je u NAc jezgri (F1,15 = 6.5; p = 0.022), s trendom u ljusci (F1,15 = 1.7; p = 0.211; F1,15 = 3.4; p = 0.084). Post hoc analize pokazale su ekspresiju c-Fos u jezgri i ljusci kod spolno naivnih muškaraca izazvanih parenjem (Slika 4B, D). Međutim, kod seksualno iskusnih mužjaka, c-Fos nije značajno povećan u NAc jezgri (Slika 4B) i značajno oslabljen u ljusci (Slika 4D). Dakle, seksualno iskustvo je uzrokovalo smanjenje ekspresije c-Fos izazvane parenjem. P-vrijednosti za specifične parne usporedbe nalaze se u legendama.

Slika 3      

Reprezentativne slike prikazuju ΔFosB (zeleno) i c-Fos (crveno) u NAc za svaku eksperimentalnu skupinu. Skala ljestvice označava 100 µm.
Slika 4      

OsFosB induciran spolnim iskustvom i c-Fos izazvanih parenjem. Brojevi imunoreaktivnih stanica ΔFosB (Core, A; Shell, C; ACA, E) ili c-Fos (Core, B; Shell, D; ACA, F) za svaku skupinu: NNS (n = 5), NS (n = 5), ENS (n = 5) ili ES (n = 4). Podaci su izraženi ...

Učinak seksualnog iskustva na c-Fos razine izazvane parenjem nije bio ograničen na NAc. Sličan gubitak ekspresije c-Fos opažen je u ACA kod seksualno iskusnih životinja u usporedbi s seksualno naivnim kontrolama. Seksualno iskustvo imalo je značajan utjecaj na ekspresiju ΔFosB u ACA (Slika 4E: F1,15 = 154.2; p <0.001). Parenje prije perfuzije nije imalo utjecaja na ekspresiju ΔFosB (Slika 4C) ali značajno povećao c-Fos (Slika 4F: F1,15 = 203.4; p <0.001) u ACA. Štoviše, ekspresija c-Fos-a izazvana parenjem u ACA značajno je smanjena seksualnim iskustvom (Slika 4F: F1,15 = 15.8; p = 0.001). Za ekspresiju c-Fos otkrivena je dvosmjerna interakcija između seksualnog iskustva i parenja prije perfuzijeSlika 4F: F1,15 = 15.1; p <0.001). Vrijednosti P za određene usporedbe u paru nalaze se u legendama slika. Konačno, nije došlo do značajnog smanjenja ekspresije c-Fos izazvane parenjem u medijalnoj preoptičkoj jezgri (NS: Prosjek 63.5 +/− 4.0; ES: Prosjek 41.4 +/− 10.09), području u kojem iskustvo parenja nije uzrokovalo značajnije povećanje ekspresije ΔFosB, što ukazuje na to da ekspresija c-Fos inducirana parenjem nije bila pogođena u svim područjima mozga.

ΔFosB u NAc-u posreduje u pojačavanju seksualnog ponašanja

Kako bi se istražio potencijalni molekularni mehanizam za pojačavanje seksualnog ponašanja, što je pokazano iskustvenim poticanjem seksualnog ponašanja, utvrđeni su učinci lokalne manipulacije ΔFosB razinama i njegova transkripcijska aktivnost. Seksualno iskustvo tijekom četiri uzastopna sesija iskustva značajno je utjecalo na latenciju montiranja (Slika 5A: F1,23 = 13.8; p = 0.001), latencija ulaza (Slika 5B: F1,23 = 18.1; p <0.001) i kašnjenje ejakulacije (Slika 5C: GFP, F11,45 = 3.8; p = 0.006). Životinje sa GFP kontrolom pokazale su očekivano olakšano seksualno ponašanje izazvano iskustvom i pokazale su značajno niže latencije na prvo montiranje, prvu intromiciju i ejakulaciju tijekom sesije iskustva 4 u usporedbi s 1 iskustvom (Slika 5A – C; vidi legendu slika za p-vrijednosti). To iskustvo potaknuto seksualnim ponašanjem također je opaženo u skupini ΔFosB za latenciju montiranja i intromisije, ali nije bilo značajne razlike otkrivene u latenciji ejakulacije (Slika 5A – C). Nasuprot tome, ΔJunD životinje su pokazale usporavanje; iako su se latencije za nadogradnje, intromisije i ejakulacije smanjivale s ponovljenim sjednicama parenja, nijedan od ovih parametara nije dosegao statističku značajnost kada se uspoređuje između sesija iskustva 1 i 4 (Slika 5A – C). Između grupnih usporedbi za svaku sesiju iskustva pokazalo se da je ΔJunD imao značajno dulje latencije za montiranje, intromit i ejakulaciju tijekom sesija iskustva u usporedbi s ΔFosB i GFP (Slika 5A – C). Osim toga, i seksualno iskustvo i liječenje imali su značajne učinke na učinkovitost kopulacije (Slika 5F: seksualno iskustvo, F1,12 = 22.5; p <0.001; liječenje, F1,12 = 3.3; p = 0.049). Muškarci ΔFosB imali su povećanu učinkovitost kopulacije tijekom sesije iskustva 4 u usporedbi s iskustvom 1 (Slika 5F). Osim toga, ΔFosB životinje su imale znatno manje nosača prije ejakulacije tijekom iskustva 4 dana, u usporedbi s iskustvom 1 (Slika 5D: F10,43 = 4.1; p = 0.004), te da su ΔJunD mužjaci imali značajno više nosača prije ejakulacije, čime je značajno smanjena učinkovitost kopulacije, u usporedbi s bilo kojom od druge dvije skupine (Slika 5D i F). Tako, GFP i ΔFosB životinje pokazale su potaknuto iskustvo poticanja inicijacije seksualnog ponašanja i seksualne izvedbe, dok životinje ΔJunD nisu.

Slika 5      

Seksualno ponašanje GFP (n = 12), ΔFosB (n = 11) i ΔJunD (n = 9) životinja: latencija (A), latencija intromisije (B), latencija ejakulacije (C), broj grana (D), broj intromisija (E) i učinkovitost kopulacije (F). Podaci su izraženi ...

Da bi se testirala hipoteza da je ekspresija ΔFosB kritična za dugoročno izražavanje poticanja iskustva seksualnog ponašanja izazvanog iskustvom, životinje su testirane 1 tjedan (1 sesije testa) i 2 tjedana (2 test test) nakon završne sesije iskustva. Doista, olakšano seksualno ponašanje održavano je i u GFP i ΔFosB grupama jer se nijedan parametar ponašanja nije razlikovao između testnih sesija 1 ili 2 i završne sesije 4, unutar GFP i ΔFosB skupina (Slika 5A – C; osim latencije ejakulacije i djelotvornosti kopulacije u ispitnoj sesiji 1 za ΔFosB životinje). Značajne razlike između ΔJunD životinja i GFP ili ΔFosB skupina otkrivene su na oba testa za sve parametre seksualnog ponašanja (Slika 5A – F). Nije bilo nikakvih razlika između ili unutar skupina kada se uspoređuje broj intromisija, PEI ili postotak životinja koje ejakuliraju (100% muškaraca u svim grupama ejakuliranih tijekom posljednja četiri sjednica parenja).

RASPRAVA

Trenutna studija pokazala je da seksualno iskustvo uzrokuje nakupljanje ΔFosB u nekoliko područja mozga povezanih s limbom, uključujući NAc jezgru i ljusku, mPFC, VTA i kaudatni putamen. Osim toga, seksualno iskustvo oslabljuje ekspresiju c-Fos u NAc i ACA. Konačno, pokazalo se da je ΔFosB u NAc-u kritičan u posredovanju u olakšavanju parenja tijekom stjecanja seksualnog iskustva i dugoročnog izražavanja poticanja iskustva seksualnog ponašanja izazvanog iskustvom.. Konkretno, smanjenje ΔFosB-posredovane transkripcije oslabilo je iskustvo potaknuto iskustvo seksualne motivacije i učinka, dok je prekomjerna ekspresija ΔFosB u NAc je izazvao pojačano olakšavanje seksualnog ponašanja u smislu povećane seksualne izvedbe s manje iskustva. Sadašnja otkrića podupiru hipotezu da je ΔFosB kritični molekularni posrednik za dugotrajnu neuralnu i bihevioralnu plastičnost izazvanu seksualnim iskustvom.

Sadašnja otkrića proširuju prethodna istraživanja koja pokazuju seksualni doživljaj ΔFosB u NAc kod mužjaka štakora (Wallace dr.. 2008) i ženske hrčke (Zaštita dr.. 2009). Wallace i sur. (2008) pokazali da je rAAV-Prekomjerna ekspresija ΔFosB u NAc-u povećala je seksualno ponašanje u životinja koje su bile seksualno naivne tijekom prvog zasjedanja parenja, o čemu svjedoče manje intromisije na ejakulaciju i kraći post-ejakulacijski intervali, ali nisu imali učinka kod seksualno iskusnih muškaraca (Wallace dr.. 2008).

Nasuprot tome, trenutna studija nije pokazala učinke prekomjerne ekspresije ΔFosB kod spolno naivnih muškaraca tijekom prvog testa, nego tijekom i nakon stjecanja seksualnog iskustva. ΔFosB prekomjerni ekspresori pokazali su povećanu seksualnu učinkovitost (povećanu učinkovitost kopulacije) u usporedbi s GFP životinjama.

Osim toga, trenutna studija ispitala je ulogu ΔFosB blokiranjem transkripcije ΔFosB posredstvom virusnog vektora koji eksprimira ΔJunD. Prevencija povećanja ekspresije ΔFosB uzrokovanog iskustvom spriječila je poticanje seksualne motivacije uzrokovane iskustvom (povećane latencije u planiranju i intromisiji), kao i seksualni učinak (povećana latencija ejakulacije i broj uspona) i kasnije dugoročno izražavanje olakšanog seksualnog ponašanja.

Dakle, ovi podaci su prvi koji ukazuju na obveznu ulogu ΔFosB u stjecanju iskustva potaknutog seksualnim ponašanjem. Štoviše, ovi podaci pokazuju da je ΔFosB također kritički uključen u dugoročno izražavanje olakšanog ponašanja izazvanog iskustvom. Predlažemo da ovaj dugoročni izraz olakšanog ponašanja predstavlja oblik sjećanja za prirodnu nagradu, stoga je ΔFosB u NAc-u posrednik sjećanja na nagradu. Seksualno iskustvo također je povećalo razine ΔFosB u VTA i mPFC, područja uključenih u nagradu i pamćenje (Balfour dr.. 2004; Phillips dr.. 2008). Potrebna su buduća istraživanja kako bi se razjasnilo potencijalno značenje ΔFosB up-regulacije u tim područjima za memorijsku nagradu.

Ekspresija ΔFosB je vrlo stabilna, pa ima veliki potencijal kao molekularni posrednik trajnih adaptacija mozga nakon kroničnih poremećaja (Nestler dr.. 2001). Pokazalo se da ΔFosB postupno povećava NAc tijekom višestrukih injekcija kokaina i traje do nekoliko tjedana. (Nada dr.. 1992; Nada dr.. 1994). Ove promjene u ekspresiji NAc ΔFosB povezane su sa senzibilizacijom i ovisnošću o lijeku (Chao & Nestler 2004; McClung i Nestler 2003; McClung dr.. 2004; Nestler 2004, 2005, 2008; Nestler dr.. 2001; Zachariou dr.. 2006). Nasuprot tome, uloga ΔFosB u posredovanju prirodne nagrade bila je nedovoljna. Nedavni dokazi su se pojavili sugerirajući da je indukcija ΔFosB u NAc uključena u prirodnu nagradu. Razine ΔFosB slično se povećavaju u NAc nakon uzimanja saharoze i rada kotača, Prekomjerna ekspresija ΔFosB u striatumu pomoću bitransgeničnih miševa ili virusnih vektora kod štakora uzrokuje povećanje unosa saharoze, povećana motivacija za hranom i povećano spontano kretanje kotača (Olausson dr.. 2006; Wallace dr.. 2008; Werme dr.. 2002). Sadašnji podaci znatno pridonose tim izvješćima i dodatno podupiru ideju da je ΔFosB kritični posrednik za jačanje nagrađivanja i prirodnu nagradu.

ΔFosB može posredovati pojačano seksualno ponašanje izazvano iskustvom indukcijom plastičnosti u mezolimbičkom sustavu. Doista, seksualno iskustvo uzrokuje brojne dugotrajne promjene mezolimbičkog sustava (Bradley & Meisel 2001; Frohmader dr.. 2009; Bacači dr.. 2010). Razina ponašanja, senzibilizirani lokomotorni odgovor na amfetamin i povećana nagrada za amfetamin pokazani su kod seksualno iskusnih mužjaka štakora (Bacači dr.. 2010); promijenjeni lokomotorni odgovor na amfetamin također je opažen kod ženki hrčaka (Bradley & Meisel 2001). Nadalje, povećan broj dendritskih bodljica i složenost dendritičnih stabala pronađeni su nakon razdoblja apstinencije od seksualnog iskustva kod mužjaka štakora (Bacači dr.. 2010). Sadašnja studija sugerira da ΔFosB može biti specifičan molekularni posrednik dugoročnih ishoda seksualnog iskustva. U skladu s tim, nedavno se pokazalo da je ΔFosB važan za induciranje dendritičnih promjena kralježnice kao odgovor na kroničnu primjenu kokaina (Dietz dr.. 2009; Zbrka dr.. 2010).

Nije jasno koji su uzvodni neurotransmiteri odgovorni za induciranje ΔFosB u NAc, ali DA je predložen kao kandidat (Nye dr.. 1995). Gotovo svi lijekovi zlostavljanja, uključujući kokain, amfetamin, opijate, kanabinoide i etanol, kao i prirodne nagrade, povećavaju ΔFosB u NAc-u (Perrotti dr.. 2005; Wallace dr.. 2008; Werme dr.. 2002). I lijekovi zlouporabe i prirodne nagrade povećavaju sinaptičku koncentraciju DA u NAc (Damsma dr.. 1992; Hernandez i Hoebel 1988a, b; Jenkins i Becker 2003). Indukcija ΔFosB lijekovima zlouporabe pokazana je u DA stanicama koje sadrže i kokain-inducirani ΔFosB je blokiran antagonistom D1 DA receptorat (Nye dr.. 1995). Stoga se pretpostavlja da oslobađanje DA stimulira ekspresiju ΔFosB i time posreduje neuroplastičnost povezanu s nagradom. Nadalje, podupirući ideju da su ΔFosB razine ovisne o DA, nalaz je da područja mozga u kojima se mijenjaju ΔFosB razine seksualnog iskustva primaju snažan dopaminergički unos iz VTA, uključujući srednji prefrontalni korteks i bazolateralnu amigdalu.

Međutim, nasuprot tome, ΔFosB se ne povećava u medijalnom predoptičkom području, iako ovo područje prima dopaminergički unos, iako iz izvora hipotalamusa (Miller & Lonstein 2009). Potrebne su buduće studije kako bi se testiralo je li ekspresija ΔFosB izazvana parenjem i učinci seksualnog iskustva na seksualnu motivaciju i učinak ovise o djelovanju DA. Uloga DA u seksualnoj nagradi kod mužjaka štakora trenutno nije potpuno jasna (Agmo i Berenfeld 1990; Pfaus 2009). Postoji dovoljno dokaza da se DA oslobađa u NAc tijekom izlaganja ženki ili parenju (Damsma dr.. 1992) i DA neuroni se aktiviraju tijekom seksualnog ponašanja (Balfour dr.. 2004). Međutim, sistemske injekcije antagonista DA receptora ne sprječavaju uvjetovanu preferenciju mjesta uzrokovanu seksualnom nagradom (Agmo i Berenfeld 1990i hipoteza da je DA kritična za pojačanje parenja uzrokovano iskustvom.

Također je nejasno što su nizvodni medijatori ΔFosB učinaka na seksualno ponašanje. Pokazalo se da ΔFosB djeluje kao i transkripcijski aktivator i represor preko AP-1 ovisnog mehanizma (McClung i Nestler 2003; Peakman dr.. 2003). Identificirani su brojni ciljni geni, uključujući i rani gen c-fos (Nada dr.. 1992; Nada dr.. 1994; Morgan & Curran 1989; Renthal dr.. 2008; Zhang dr.. 2006), cdk5 (Bib dr.. 2001), dinorfin (Zachariou dr.. 2006), sirtuin-1 (Renthal dr.. 2009), NFkB podjedinice (Ang dr.. 2001),i podjedinica AMPA glutamatnog receptora GluR2 (Kelz dr.. 1999). Trenutni rezultati pokazuju da su razine spajanja inducirane c-Fos smanjene seksualnim iskustvom u područjima mozga s povećanim ΔFosB (NAc i ACA). Supresija c-Fos čini se ovisna o razdoblju od posljednjeg parenja i ponovljenih parenja, kao u prethodnim studijama, takvo smanjenje u c-Fos nije otkriveno u mužjaka štakora testiranih 1 tjedan nakon završnog sjednice parenja (Balfour dr.. 2004) ili nakon seksualnog iskustva koje se sastoji samo od jedne seanse parenja (Lopez i Ettenberg 2002). Štoviše, trenutni nalaz je u skladu s dokazom da ΔFosB potiskuje c-fos gen nakon kronične izloženosti amfetaminu (Renthal dr.. 2008). U skladu s tim nalazima, indukcija nekoliko ranih mRNA gena (c-fos, fosB, c-jun, junB i zif268) smanjena je nakon ponovljenih injekcija kokaina u usporedbi s akutnim injekcijama lijeka (Nada dr.. 1992; Nada dr.. 1994), a c-fos izazvan amfetaminom potisnut je nakon povlačenja iz kronične primjene amfetamina (Jaber dr.. 1995; Renthal dr.. 2008). Funkcionalna relevantnost down-regulacije ekspresije c-Fos nakon kroničnog liječenja lijekovima ili seksualnog iskustva ostaje nejasna, te je predloženo da bude važan homeostatski mehanizam za reguliranje osjetljivosti životinje na ponovljeno izlaganje nagradi (Renthal dr.. 2008).

U zaključku, trenutna studija pokazuje da ΔFosB u NAc-u igra ključnu ulogu u pamćenju seksualnog nagrađivanja, podupirući mogućnost da je ΔFosB važan za opće pojačanje nagrađivanja i pamćenje., Nalazi iz sadašnje studije dodatno razjašnjavaju naše razumijevanje staničnih i molekularnih mehanizama koji posreduju u seksualnoj nagradi i motivaciji i dodaju u literaturu da je ΔFosB važan igrač u razvoju ovisnosti, pokazujući ulogu ΔFosB u prirodnoj nagradi. pojačanje.

Dopunski materijal

Supp Slika S1-S4 i Tablica S1-S2

Zahvale

Ovo istraživanje je podržano grantovima kanadskih Instituta za istraživanje zdravlja LMC-u, Nacionalnom institutu za mentalno zdravlje EJN-u, te Vijeću prirodnih znanosti i inženjerskih istraživanja Kanade za KKP i LMC.

REFERENCE

  1. Agmo A. Spolno ponašanje mužjaka štakora. Mozak Res Brain Res Protoc. 1997; 1: 203-209. [PubMed]
  2. Agmo A, Berenfeld R. Jačanje svojstava ejakulacije kod mužjaka štakora: uloga opioida i dopamina. Behav Neurosci. 1990; 104: 177-182. [PubMed]
  3. Ang E, Chen J, Zagouras P, Magna H, Holland J, Schaeffer E, Nestler EJ. Indukcija nuklearnog faktora kappaB u nucleus accumbens kroničnom primjenom kokaina. J Neurochem. 2001; 79: 221-224. [PubMed]
  4. Balfour ME, Yu L, Coolen LM. Seksualno ponašanje i spolni aspekti okoliša aktiviraju mezolimbički sustav kod mužjaka štakora. Neuropsvchopharmacologv. 2004; 29: 718-730. [PubMed]
  5. Bibb JA, Chen J, Taylor JR, Svenningsson P, Nishi A, Snyder GL, Yan Z, Sagawa ZK, Ouimet CC, Nairn AC, Nestler EJ, Greengard P. Učinci kronične izloženosti kokainu regulirani su proteinom neurona Cdk5. Priroda. 2001; 410: 376-380. [PubMed]
  6. Bradley KC, Haas AR, Meisel RL. Lezije 6-Hidroksidopamina kod ženki hrčaka (Mesocricetus auratus) ukidaju senzibilizirane učinke seksualnog iskustva na kopulacijske interakcije s muškarcima. Behav Neurosci. 2005; 119: 224-232. [PubMed]
  7. Bradley KC, Meisel RL. Indikacija seksualnog ponašanja c-Fos-a u nucleus accumbens i amfetamin-stimulirana lokomotorna aktivnost senzibilizirana je prethodnim seksualnim iskustvom kod ženskih sirijskih hrčka. J Neurosci. 2001; 21: 2123-2130. [PubMed]
  8. Carle TL, Ohnishi YN, Ohnishi YH, Alibhai IN, Wilkinson MB, Kumar A, Nestler EJ. Proteasom-ovisni i neovisni mehanizmi za destabilizaciju FosB-a: identifikacija FosB-degron domena i implikacije za stabilnost DeltaFosB-a. Eur J Neurosci. 2007; 25: 3009-3019. [PubMed]
  9. Chao J, Nestler EJ. Molekularna neurobiologija ovisnosti o drogama. Annu Rev Med. 2004; 55: 113-132. [PubMed]
  10. Chen J, Nye HE, Kelz MB, Hiroi N, Nakabeppu Y, Hope BT, Nestler EJ. Regulacija delta FosB i FosB-sličnih proteina elektrokonvulzivnim napadima i liječenjem kokainom. Molekularna farmakologija. 1995; 48: 880-889. [PubMed]
  11. Colby CR, Whisler K, Steffen C, Nestler EJ, Self DW. Striatalna tipična prekomjerna ekspresija DeltaFosB-a povećava poticaj za kokain. J Neurosci. 2003; 23: 2488-2493. [PubMed]
  12. Coolen LM, Allard J, Truitt WA, Mckenna KE. Središnja regulacija ejakulacije. Physiol Behav. 2004; 83: 203-215. [PubMed]
  13. Damsma G, Pfaus JG, Wenkstern D, Phillips AG, Fibiger HC. Spolno ponašanje povećava prijenos dopamina u nucleus accumbens i striatum muških štakora: usporedba s novostima i lokomocijom. Behav Neurosci. 1992; 106: 181-191. [PubMed]
  14. Dietz DM, Maze I, Mechanic M, Vialou V, Dietz KC, Iniguez SD, Laplant Q, Russo SJ, Ferguson D, Nestler EJ. Bitna uloga ΔFosB u regulaciji kokaina dendritičkih bodlji neurona nucleus accumbens. Društvo za neuroznanost Sažetak. 2009
  15. Frohmader KS, Pitchers KK, Balfour ME, Coolen LM. Miješanje užitaka: Pregled učinaka lijekova na seksualno ponašanje u modelima ljudi i životinja. Horm Behav. 2009 U tisku.
  16. Hedges VL, Chakravarty S, Nestler EJ, Meisel RL. Prekomjerna ekspresija Delta FosB u nucleus accumbens pojačava seksualnu nagradu kod ženskih sirijskih hrčaka. Genes Brain Behav. 2009; 8: 442-449. [PMC slobodan članak] [PubMed]
  17. Hernandez L, Hoebel BG. Hranjenje i stimulacija hipotalamusa povećavaju promet dopamina u akumbensima. Physiol Behav. 1988a; 44: 599-606. [PubMed]
  18. Hernandez L, Hoebel BG. Nagrada za hranu i kokain povećavaju izvanstanični dopamin u nucleus accumbens, mjereno mikrodijalizom. Život Sci. 1988b; 42: 1705-1712. [PubMed]
  19. Hiroi N, Marek GJ, Brown JR, Ye H, Saudou F, Vaidya VA, Duman RS, Greenberg ME, Nestler EJ. Bitna uloga gena fosB u molekularnim, staničnim i ponašajnim aktivnostima kroničnih elektrokonvulzivnih napadaja. J Neurosci. 1998; 18: 6952-6962. [PubMed]
  20. Hommel JD, Sears RM, Georgescu D, Simmons DL, DiLeone RJ. Lokalno uklanjanje gena u mozgu korištenjem interakcije RNA posredovane virusom. Nat Med. 2003; 9: 1539-1544. [PubMed]
  21. Hope B, Kosofsky B, Hyman SE, Nestler EJ. Regulacija neposredne rane ekspresije gena i vezanja AP-1-a u nukleusu štakora accumbens pomoću kroničnog kokaina. Proc Natl Acad Sci US A. 1992, 89: 5764-5768. [PMC slobodan članak] [PubMed]
  22. Nada BT, Nye HE, Kelz MB, Self DW, Iadarola MJ, Nakabeppu Y, Duman RS, Nestler EJ. Indukcija dugotrajnog AP-1 kompleksa sastavljenog od izmijenjenih Fos-sličnih proteina u mozgu kroničnim kokainom i drugim kroničnim tretmanima. Neuron. 1994; 13: 1235-1244. [PubMed]
  23. Trup EM, Meisel RL, Sachs BD. Muško spolno ponašanje. Horm Behav. 2002; 1: 1-139.
  24. Jaber M, Cador M, Dumartin B, Normand E, Stinus L, Bloch B. Akutni i kronični tretmani amfetaminom različito reguliraju razine neuropeptidnih RNA i Fos imunoreaktivnosti u neurozima striatara štakora. Neuroscience. 1995; 65: 1041-1050. [PubMed]
  25. Jenkins WJ, Becker JB. Dinamičko povećanje dopamina za vrijeme kopulacije u ženki štakora. Eur J Neurosci. 2003; 18: 1997-2001. [PubMed]
  26. Kelz MB, Chen J, Carlezon WA, Jr., Whisler K, Gilden L, Beckmann AM, Steffen C, Zhang YJ, Marotti L, Self DW, Tkatch T, Baranauskas G, Surmeier DJ, Neve RL, Duman RS, Picciotto MR, Nestler EJ. Ekspresija transkripcijskog faktora deltaFosB u mozgu kontrolira osjetljivost na kokain. Priroda. 1999; 401: 272-276. [PubMed]
  27. Lopez HH, Ettenberg A. Izloženost ženkama štakora daje razlike u indukciji c-fos između seksualno-naivnih i iskusnih mužjaka štakora. Brain Res. 2002; 947: 57-66. [PubMed]
  28. Maze I, Covington HE, 3rd, Dietz DM, LaPlant Q, Renthal W, Russo SJ, Mechanic M, Mouzon E, Neve RL, Haggarty SJ, Ren Y, Sampath SC, Hurd YL, Greengard P, Tarakhovsky A, Schafer Y, Nestler EJ. Bitna uloga histonske metiltransferaze G9a u plastičnosti izazvanoj kokainom. Znanost. 2010; 327: 213-216. [PMC slobodan članak] [PubMed]
  29. McClung CA, Nestler EJ. Regulacija ekspresije gena i nagrade kokaina od strane CREB i DeltaFosB. Nat Neurosci. 2003; 6: 1208-1215. [PubMed]
  30. McClung CA, Ulery PG, Perrotti LI, Zachariou V, Berton O, Nestler EJ. DeltaFosB: molekularni prekidač za dugotrajnu adaptaciju u mozgu. Brain Res Mol Brain Res. 2004; 132: 146-154. [PubMed]
  31. Miller SM, Lonstein JS. Dopaminergičke projekcije na medijalnom predoptičkom području poslijeporođajnih štakora. Neuroscience. 2009; 159: 1384-1396. [PMC slobodan članak] [PubMed]
  32. Morgan JI, Curran T. Povezivanje transkripcije stimulansa u neuronima: uloga staničnih neposrednih ranih gena. Trendovi Neurosci. 1989; 12: 459-462. [PubMed]
  33. Nestler EJ. Molekularni mehanizmi ovisnosti o drogama. Neurofarmakologija. 2004, 47 Dopuna 1: 24 – 32. [PubMed]
  34. Nestler EJ. Neurobiologija ovisnosti o kokainu. Sci Pract Perspect. 2005; 3: 4-10. [PMC slobodan članak] [PubMed]
  35. Nestler EJ. Pregled. Transkripcijski mehanizmi ovisnosti: uloga DeltaFosB-a. Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci. 2008; 363: 3245-3255. [PMC slobodan članak] [PubMed]
  36. Nestler EJ, Barrot M, Self DW. DeltaFosB: kontinuirani molekularni prekidač za ovisnost. Proc Natl Acad Sci US A. 2001, 98: 11042-11046. [PMC slobodan članak] [PubMed]
  37. Nye HE, Hope BT, Kelz MB, Iadarola M, Nestler EJ. Farmakološka ispitivanja regulacije kronične indukcije antigena antigena s FOS kokainom u striatumu i nucleus accumbens. J Pharmacol Exp Ther. 1995; 275: 1671-1680. [PubMed]
  38. Olausson P, Jentsch JD, Tronson N, Neve RL, Nestler EJ, Taylor JR. DeltaFosB u nucleus accumbens regulira instrumentalno ponašanje i motivaciju pojačanu hranom. J Neurosci. 2006; 26: 9196-9204. [PubMed]
  39. Peakman MC, Colby C, Perrotti LI, Tekumalla P, Carle T, Ulery P, Chao J, Duman C, Steffen C, Monteggia L, Allen MR, Stock JL, Duman RS, McNeish JD, Barrot M, Self DW, Nestler EJ , Schaeffer E. Inducibilna ekspresija dominantnog negativnog mutanta c-Jun-a u transgenim miševima na području mozga smanjuje osjetljivost na kokain. Brain Res. 2003; 970: 73-86. [PubMed]
  40. Perrotti LI, Bolanos CA, Choi KH, Russo SJ, Edwards S, Ulery PG, Wallace DL, Self DW, Nestler EJ, Barrot M. DeltaFosB akumulira se u populaciji GABAergičnih stanica u stražnjem repu ventralnog tegmentalnog područja nakon tretmana psihostimulansom. Eur J Neurosci. 2005; 21: 2817-2824. [PubMed]
  41. Perrotti LI, Hadeishi Y, Ulery PG, Barrot M, Monteggia L, Duman RS, Nestler EJ. Indukcija deltaFosB u moždanim strukturama povezanim s nagrađivanjem nakon kroničnog stresa. J Neurosci. 2004; 24: 10594-10602. [PubMed]
  42. Perrotti LI, Weaver RR, Robison B, Renthal W, Maze I, Yazdani S, Elmore RG, Knapp DJ, Selley DE, Martin BR, Sim-Selley L, Bachtell RK, Self DW, Nestler EJ. Različiti obrasci indukcije DeltaFosB u mozgu pomoću droga zlostavljanja. Sinapsa. 2008; 62: 358-369. [PMC slobodan članak] [PubMed]
  43. Pfaus JG. Putovi seksualne želje. J Sex Med. 2009; 6: 1506-1533. [PubMed]
  44. Pfaus JG, Kippin TE, Centeno S. Kondicioniranje i seksualno ponašanje: pregled. Horm Behav. 2001; 40: 291-321. [PubMed]
  45. Phillips AG, Vacca G, Ahn S. Pogled odozgo prema dolje na dopamin, motivaciju i pamćenje. Pharmacol Biochem Behav. 2008; 90: 236-249. [PubMed]
  46. Pitcher KK, Balfour ME, Lehman MN, Richtand NM, Yu L, Coolen LM. Neuroplastičnost mezolimbičkog sustava izazvana prirodnom nagradom i naknadnom apstinencijom nagrađivanja. Biol Psychiatry. 2010; 67: 872-879. [PMC slobodan članak] [PubMed]
  47. Renthal W, Carle TL, Maze I, Covington HE, 3rd, Truong HT, Alibhai I, Kumar A, Montgomery RL, Olson EN, Nestler EJ. Delta FosB posreduje u epigenetskoj desenzibilizaciji gena c-fos nakon kronične izloženosti amfetaminu. J Neurosci. 2008; 28: 7344-7349. [PMC slobodan članak] [PubMed]
  48. Renthal W, Kumar A, Xiao G, Wilkinson M, Covington HE, 3rd, Maze I, Sikder D, Robison AJ, LaPlant Q, Dietz DM, Russo SJ, Vialou V, Čakravarty S, Kodadek TJ, Stack A, Kabbaj M, Nestler EJ. Genomska analiza regulacije kromatina kokainom otkriva ulogu sirtuina. Neuron. 2009; 62: 335-348. [PMC slobodan članak] [PubMed]
  49. Tenk CM, Wilson H, Zhang Q, Pitchers KK, Coolen LM. Seksualna nagrada kod mužjaka štakora: učinci seksualnog iskustva na uvjetovane preferencije mjesta povezane s ejakulacijom i intromisijama. Horm Behav. 2009; 55: 93-97. [PMC slobodan članak] [PubMed]
  50. Ulery-Reynolds PG, Castillo MA, Vialou V, Russo SJ, Nestler EJ. Fosforilacija DeltaFosB posreduje njenu stabilnost in vivo. Neuroscience. 2008
  51. Ulery PG, Rudenko G, Nestler EJ. Regulacija stabilnosti DeltaFosB fosforilacijom. J Neurosci. 2006; 26: 5131-5142. [PubMed]
  52. Wallace DL, Vialou V, Rios L, Carle-Florence TL, Chakravarty S, Kumar A, Graham DL, Green TA, Kirk A, Iniguez SD, Perrotti LI, Barrot M, DiLeone RJ, Nestler EJ, Bolanos-Guzman CA. Utjecaj DeltaFosB-a u nucleus accumbens na ponašanje koje se odnosi na prirodno nagrađivanje. J Neurosci. 2008; 28: 10272-10277. [PMC slobodan članak] [PubMed]
  53. Werme M, Messer C, Olson L, Gilden L, Thoren P, Nestler EJ, Brene S. Delta FosB regulira rad kotača. J Neurosci. 2002; 22: 8133-8138. [PubMed]
  54. Winstanley CA, LaPlant Q, Theobald DE, Green TA, Bachtell RK, Perrotti LI, DiLeone RJ, Russo SJ, Garth WJ, Self DW, Nestler EJ. Indukcija DeltaFosB u orbitofrontalnom korteksu posreduje u toleranciji kognitivne disfunkcije izazvane kokainom. J Neurosci. 2007; 27: 10497-10507. [PubMed]
  55. Zachariou V, Bolanos CA, Selley DE, Theobald D, Cassidy MP, Kelz MB, Shaw-Lutchman T, Berton O, Sim-Selley LJ, Dileone RJ, Kumar A, Nestler EJ. Bitna uloga za DeltaFosB u nucleus accumbens u djelovanju morfija. Nat Neurosci. 2006; 9: 205-211. [PubMed]
  56. Zhang J, Zhang L, Jiao H, Zhang Q, Zhang D, Lou D, Katz JL, Xu M. c-Fos olakšava stjecanje i izumiranje trajnih promjena izazvanih kokainom. J Neurosci. 2006; 26: 13287-13296. [PubMed]