A dopaminreceptor expressziója és eloszlása ​​dinamikusan megváltozik a patkánymagban az akumbénben, miután a kokain önadagolása megszűnt. (2010)

Fehérje térhálósítása

Ezt a módszert korábban részletesen leírták (Boudreau és Wolf, 2005; Ferrario és munkatársai, 2010). A patkányokat dekapitáltuk, agyukat gyorsan eltávolítottuk, és az egész NAc-t (vagy mag- és héj alrégiót) jégre hasítottuk egy 2mm koronális szakaszból, amelyet agy mátrix segítségével nyertünk. Az egész NAc-szövetet azonnal feldaraboltuk 400μm-szeletekre McIllwain szövet-chopper alkalmazásával (Vibratome, St. Louis, MO), míg a kisebb mag- és héj alrégiókat kézzel, szike segítségével darálták. A szövetet ezután jéghideg mesterséges CSF-et tartalmazó Xpumorf mM bis (szulfoszukcinimidil) szuberáttal (BS³; Pierce Biotechnology, Rockford, IL). A térhálósítási reakciót 30 percig 4 ° C-on enyhe keverés közben hagyjuk folytatni, majd 100mM glicin hozzáadásával (10 perc 4 ° C-on) leállítottuk. A szövetet rövid centrifugálással pelletáltuk, majd jéghideg lízis pufferben szuszpendáltuk, amely proteáz és foszfatáz inhibitorokat tartalmazott, amelyet 5 szekcióba szinkronizáltunk, majd ismét centrifugáltuk. A felülúszó aliquotjait -80 ° C-on tároltuk, amíg Western-blottal nem elemeztük.

DAR-ok Western blot analízise térhálósított szövetben

A mintákat (20-30μg teljes fehérje / lizátum) elektroforetizáltuk 4-15% Tris-HCl géleken (Biorad, Hercules, CA). A fehérjéket polivinilidén-fluorid membránokra vittük át az immunoblotoláshoz állandó árammal (1.15mA) 1.5 h-ra. A túlmelegedés megakadályozására hűtőtekercset használtunk. A nagy molekulatömegű aggregátumok teljes átadását a Coomassie blue-szel való átvitel után a gélek festésével megerősítettük. Továbbá meggyőződtünk arról, hogy a keresztkötésű DAR fehérjék nem voltak kimutathatók az egymásra rakott gélben (az adatokat nem mutatjuk be). Átvitel után a membránokat ddH-ban mossuk₂O, 1 óra hosszat szobahőmérsékleten szobahőmérsékleten levegőn szárítjuk, 100% MeOH-val újra hidratáljuk, 1x Tris pufferolt sóoldattal (TBS) mossuk és 0.1M NaOH-ban, pH = 10 értékben 15 min. Ezután TBS-ben mossuk, 3% szarvasmarha-szérumalbuminnal (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) blokkolva TBS-Tween-20-ben (TBS-T), pH = 7.4, 1 óra hosszat szobahőmérsékleten, és éjszakán át inkubáljuk. 4 ° C-on a D1 DAR-t felismerő antitestekkel (1: 1000; Millipore; Cat # AB1765P), D2 DAR (1: 1000; Millipore, Billercia, CA; Cat # AB5084P) és D3 DAR (1: 1000; Millipore; Cat # AB1786P). A D4 és a D5 DAR-kat nem vizsgáltuk, mivel hiányzottak mind a keresztkötéses, mind az intracelluláris receptorok. Meg kell jegyezni, hogy az ezekben a kísérletekben felhasznált DAR-antitest-részeket 2005-06-ben vásároltuk; ezeknek az antitesteknek (2009-10) jelenlegi tételei különböző sávos mintázatokat mutatnak, amelyek nem változtak a DAR knockout egerek szövetében (nem publikált megfigyelések). Az elsődleges antitest-inkubálás után a membránokat TBS-T-oldattal mossuk, 60 percig inkubáljuk HRP-konjugált nyúl IgG-vel vagy anti-egér IgG-vel (1: 10,000; Upstate Biotechnology, Lake Placid, NY), TBS-sel mossuk. T, ddH-val mossuk₂O, és kemilumineszcenciát detektáló szubsztrátumba (Amersham GE, Piscataway, NJ) merítjük. A blotok kifejlesztése után a képeket a Versa Doc Imaging szoftverrel (Bio-Rad) készítettük. A felület és az intracelluláris sávok diffúz sűrűségét a Quantity One szoftverrel (Bio-Rad) határoztuk meg. A felszíni, intracelluláris és teljes (felszíni + intracelluláris) fehérjék szintjeit Ponceau S (Sigma-Aldrich) alkalmazásával meghatározott sávban a teljes fehérjére normalizáltuk, és TotalLab-tal (Nonlinear Dynamics, Newcastle, UK) elemeztük. A felületi / intracelluláris arány nem igényel normalizálást, mivel mindkét értéket azonos sávban határozzuk meg. Az antitest-specifitás vizsgálatához a DAR-antitestek preabsorpciós vizsgálatait végeztük az egyes antitestek előállításához használt peptidekkel. A D1, D2 vagy D3 DAR ellenanyagot 10-szeres TBS-feleslegben lévő 500-szeres felesleges koncentrációval kombináltuk, 4-hez 4 ° C-on kevertük, végső térfogatig 20ml-re hígítottuk, és a reakcióelegyet egy éjszakán át inkubáltuk. 4 ° C.

D1 DAR-ok

A WD45-on nem találtunk szignifikáns különbséget a kokain és a sócsoport között. A kokain önadagolásának hatásai azonban nyilvánvalóak voltak a WD1-en. A teljes NAc elemzése a WD1-Coc csoportban szignifikánsan magasabb D1 DAR felületi / intracelluláris arányt mutatott, összehasonlítva azokkal a csoportokkal, amelyek önmagukban sóoldatot adtak (2a). Ez a felszíni D1 DAR-ok mérsékelt növekedéséből és az intracelluláris D1 DAR-ok mérsékelt csökkenéséből adódik (az utóbbi két hatás közül egyik sem volt statisztikailag szignifikáns), a D1 összes DAR-szintjének változása nélkül (felület + intracelluláris).2a). Az NAc magon belül semmilyen D1 DAR intézkedés esetében nem találtunk jelentős hatást (2b). Ugyanakkor az NAc héja olyan változásokat mutatott, amelyek hasonlóak voltak a teljes NAc-ben megfigyeltekhez, de kissé erőteljesebbek voltak (2c). A felszíni / intracelluláris D1 DAR arány a WD1-Coc csoportban megnövekedett a felület D1 DAR expressziójának jelentős növekedése miatt. Az intracelluláris szintek változatlanok voltak, de a D1 DAR szintek emelkedése volt megfigyelhető. Összefoglalva, a D1 DAR fehérje nagyobb részét a WD1-Coc patkányok NAc-héjában felszínen expresszáltuk a WD1-Sal patkányokkal összehasonlítva. A D1 DAR eloszlása ​​visszatért a kontrollállapotba, miután 45 napokat vett ki a kokain önadagolásából.

Ábra 2

A D1 DAR felületi expressziója nőtt a NAc-héjban, miután a XIX.

D2 DAR-ok

A teljes NAc-ben a megfigyelt fő hatás csökkentette a D2 DAR expresszióját patkányokban, akik önmagukban adták be a kokainot a sóoldatokkal összehasonlítva (3a). Ez a WD45-nál volt a legnagyobb, amikor a felületi sávban, mindhárom intracelluláris sávban (~ 55, 75 és 100kDa), valamint a D2 DAR szintekben a sóoldatokkal összehasonlítva csökkent. A felszíni / intracelluláris D2 DAR arány kissé, de szignifikánsan megnövekedett a WD45-Coc csoportban, az intracelluláris D2 DAR-ok nagyobb mértékű csökkenése miatt, ami azt jelzi, hogy a sejtek kompenzálják a csökkent D2 DAR expressziót a rendelkezésre álló nagyobb rész eloszlásával. D2 DAR a felületre. Fontos szem előtt tartani, hogy a megnövekedett felszíni / intracelluláris arány nem igazolja a D2 DAR-transzmisszió növekedését ebben az esetben, mivel a felületen expresszált D2 DAR-ok abszolút szintje csökkent. A WD1-Coc csoportban az egyetlen jelentős hatás a D2 DAR monomer (~ 55kDa) intracelluláris szintjének csökkenése volt, mind a WD45-Sal, mind a WD1-Sal csoportokhoz képest, bár számos más intézkedés is csökkent.3a).

Ábra 3

Az intracelluláris és felületi D2 DAR-szintek a NAc-ben csökkentek a XIX.

A D2 DAR expressziójának általános csökkenése is nyilvánvaló volt az NAc mag- és héj alrégióiban (3b és 3c), bár a hatások inkább a héjban kifejezettebbek voltak. Így a felület D2 DAR szintje csak a WD45-ben a magban lévő kokain patkányokban csökkent, de WD1 és WD45 héjban. A teljes D2 DAR-ok jelentősen csak a héjban csökkentek. Az intracelluláris D2 DAR sávok csökkenése mindkét elvonási napon mind a magban, mind a héjban jelentkezett, bár az elvonási és a régióspecifikus különbségek tekintetében az intracelluláris sáv statisztikailag szignifikáns hatást mutatott. Összefoglalva, a D2 DAR felülete és az intracelluláris fehérje szintek csökkentek a NAc-ben a kokain önadagolása után. Néhány csökkenés már nyilvánvaló volt a WD1-ben.

A D1 DAR felületi expressziója átmenetileg megnő a NAc héjban, miután a kokain önadagolása megszűnt

A kokain önadagolása után a D1 DAR felszíni expressziója nőtt a NAc héjban a WD1-nál, de WD45-rel normalizálódott, míg a magban nem észleltek változásokat, jelezve a héjra korlátozódó átmeneti növekedést. Hasonló eredményeket kaptunk a korábbi vizsgálatokban, a receptor autoradiográfiával. Ben-Shahar et al. (2007) 1 min (de nem 20 vagy 14 nap) daganatos D60 DAR-sűrűségének növekedése a patkányok NAc-héjában, a kokain önadagolásának megszakítása után (6 óra / nap), míg a magban vagy rövid távú hozzáférést követően nem tapasztaltak változást. - beadás (2 hr / nap). Nader és mtsai. (2002) megfigyelték a D1 DAR-sűrűség kis mértékű növekedését a héjban, de nem a rhesus majmok magját, akiket az utolsó 100-kokain önadagolás során elpusztítottak. A majmok az ugyanazt a kezelési séma leállítását követően 30 napokat értékeltek, a rostrális NAc-ben és a magban és a héjában nagyobb D1 DAR-sűrűséget mutatott, de a D1 DAR-sűrűség 90 napokon normalizálódott.Beveridge és munkatársai, 2009). Mindezek az eredmények, mint a miénk, a D1 DAR-szintek, különösen a héjban történő átmeneti növekedését jelzik a kokain önadagolásának leállítása után. Ennek a csoportnak egy korábbi tanulmánya azonban azt mutatta, hogy a D1 DAR-sűrűség csökken a rákos majmoknak, amelyek önmagában beadott kokaint tartalmaztak sokkal hosszabb ideig (18 hónap; Moore és munkatársai, 1998a). A NAc-ben a D1 DAR-kötődés csökkenését 18 órában is megfigyelték patkányoknál a kiterjesztett hozzáférési rendszer abbahagyása után, bár ebben a vizsgálatban a teljes kokain-bevitel magasabb volt, mint a fentiekben tárgyalt patkányvizsgálatokban.De Montis és munkatársai, 1998). Ezek az eredmények azt mutatják, hogy a D1 DAR adaptációk a kokain expozíció számos aspektusától függenek. Egy másik megfontolás az, hogy a receptor autoradiográfiája a teljes sejtreceptorokat méri, míg fehérje térhálósítási kísérleteink megkülönböztethetik a felületi és intracelluláris receptorokat. Érdekes, hogy egy immunoblott vizsgálat azt mutatta, hogy a humán kokainhasználók NAc-jében a D1 DAR-szintek növekedése tendencia (Worsley és munkatársai, 2000).

A D1 DAR felületi expressziójának átmeneti növekedése, amit az NAc-héjban megfigyeltünk, fontos a cue-indukált kokain-vágy inkubálásához? Ezt nehéz megbecsülni, mert egyetlen vizsgálat sem tesztelte a D1 DAR agonisták vagy antagonisták intracelluláris NAc injekciójának hatását a cue-indukált kokainra, ha az otthoni ketrec kivonását követően (vagy a kioltás utáni kiképzés után a kokain keresését indukálja). Azonban a mediális NAc-ben (héj és mediális mag) lévő D1-receptorok a kokain által kiváltott kokainpótlásba kerülnek, amely a kihalás után keresett, nyilvánvalóan a D1 és a D2 DAR-ok együttműködő aktiválását igénylő mechanizmuson keresztül.Anderson és munkatársai, 2003; 2008; Bachtell és munkatársai, 2005; Schmidt és Pierce, 2006; Schmidt és munkatársai, 2006). Eredményeinkkel együtt ez arra utalhat, hogy a NAc héj neuronjai jobban reagálnak a D1 DAR által közvetített kokainra, amely a tranziens D1R felfelé történő szabályozás miatt korai visszavonást keres. Ugyanakkor óvatossággal kell eljárni az inkubációs vizsgálatokba való visszahelyezéskor, mivel a kihalásképzés és az otthoni ketrec elvonása a NAc különböző neuroadaptációihoz kapcsolódik (Sutton és munkatársai, 2003; Ghasemzadeh és munkatársai, 2009; Wolf és Ferrario, 2010). Fontos megjegyezni, hogy a D1 DAR-ok a bazolaterális amygdala és a prefrontális kéregben szintén fontosak a kokainkeresés (pl. Ciccocioppo és munkatársai, 2001; Alleweireldt és munkatársai, 2006; Berglind és munkatársai, 2006).

Celluláris szinten mind a preszinaptikus, mind a posztszinaptikus DAR-ok modulálhatják a közepes tüskés neuronok ingerlékenységét, a NAc domináns sejttípusát és kimeneti neuronját (Nicola és munkatársai, 2000; O'Donnell, 2003). Ismert, hogy az ismétlődő nem kontingens kokain-adagolás fokozza a D1 DAR aktiváció bizonyos hatásait a NAc-ben. Így a kokain kezelés befejezése után egy nap és egy hónap között a D1 DAR agonisták fokozott képessége a közepes tüskés neuronok (iontoforetikus glutamát által vezérelt) aktivitásának gátlására figyelhető meg (Henry és White, 1991; 1995). Az itt bemutatott megnövekedett D1 DAR felületi expresszió azonban nem valószínű, hogy elmagyarázza ezeket az előzetes eredményeket, mert csak a héjra korlátozódik, és csak a WD1-en bizonyították. Egy nappal a kokainprobléma beadása után az ismételt kokaininjekciók leállítása után 10-14 napot adtak be, Beurrier és Maleka (2002) megfigyelték a gerjesztő szinaptikus válaszok DA-közvetített gátlásának fokozódását NAc közepes tüskés neuronokban, amelyeket a presztaptikus D1-szerű DAR-ok közvetítettek a glutamát idegvégződéseken. Azonban a kioldódás lehetséges hatásai (pl. Lásd:. \ T Boudreau és munkatársai, 2007 és a Kourrich és munkatársai, 2007) a faji különbségekkel és a központi felvételek hiányával kombinálva megnehezítik saját eredményeik összehasonlítását. Azt is meg kell jegyezni, hogy a DAR agonisták és antagonisták használják Henry és Fehér (1991; 1995) és a Beurrier és Malenka (2002) nem különbözött a D1 és a D5 DAR között.

A D2 DAR szintje csökken a NAc-ben, miután a kokain önadagolása megszűnt

A vizsgálatunkban megfigyelt fő hatás a D2 DAR fehérje csökkenése mind a NAc magjában, mind a héjban a kokain önadagolásának leállítása után, a sóoldat-kontrollokhoz viszonyítva. Ez kifejezettebb volt a héjban, ahol az intracelluláris, felületi és teljes sávok csökkentek mind a WD1, mind a WD45 esetében. A magban a D2 DAR felületi expressziója csak a WD45-on csökkent, és a D2 DAR-szintek összességében nem csökkentek jelentősen. Számos más vizsgálat hasonlóan kimutatta a D2 DAR expresszió csökkenését a kokain önadagolásának megszüntetése után. A kiterjedt kokain önadagolási tapasztalattal rendelkező rhesus majmoknál a receptor autoradiográfiával mért D2 DAR-sűrűség számos striatális régióban csökkent, beleértve a NAc magot és a héjat, amikor a szövetet közvetlenül az utolsó szekció után kaptuk meg (Moore és munkatársai, 1998b; Nader és munkatársai, 2002). PET-t használva ezt a hatást a bazális ganglionokban a kokain önadagolásának megkezdését követő 1-héten észleltük (Nader és munkatársai, 2006). A D2 DAR-szintek visszanyerésének mértéke függhet a teljes kokain-beviteltől. Egy autoradiográfiás vizsgálatban a D2 DAR-szintek a NAc-ben 30 vagy 90 napok után a kontrollok értékeihez jutottak a kokain önadagolásának 100 szekciói után.Beveridge és munkatársai, 2009). Azonban a hosszabb expozíciós (1 év) majmok és így a teljes kokain-bevitel PET-vizsgálatában az 3 5 majmok 2 napok után a D90 DAR-szintek helyreállását mutatták, míg az 2 majmok 12 hónapok után nem tapasztaltak helyreállítást (Nader és munkatársai, 2006). Összességében ezek az eredmények jól illeszkednek a csökkent D2 DAR-szintek eredményeihez a kivonás során.

A humán kokainfüggők PET-vizsgálatai szintén csökkent D2 DAR-szinteket találtak számos striatális régióban, beleértve a ventrális striatumot is, amelyek a korai visszavonás során, valamint az 3-4 méregtelenítési hónapok után jelentkeztek (Volkow és munkatársai, 1990, 1993, 1997). A viselkedés jelentősége azonban nem tisztázott, mivel a D2 DAR rendelkezésre állása nem korrelált a kokain pozitív szubjektív hatásával vagy a több kokainnak a primer dózis után történő bevitelével.Martinez és munkatársai, 2004). Fontos megjegyezni, hogy míg a cue-indukált kokain-vágy időbeli függő növekedést mutat a visszavonás során („inkubáció”), ez nem fordul elő a kokainalapú kokainkeresésnél (Lu és munkatársai, 2004a). Ezért az eredményeket Martinez et al. (2004) hagyjuk nyitva a lehetőséget, hogy a D2 DAR rendelkezésre állása korrelálhat a cue-indukált kokainkereséssel, az itt vizsgált inkubációs modell fókuszával. Alacsony D2 DAR rendelkezésre állása a humán kokainhasználókban korrelál a csökkent frontális kortikális metabolizmussal (Volkow és munkatársai, 1993). Az egyéb változások mellett ez hozzájárulhat az ellenőrzés elvesztéséhez, amely akkor fordul elő, ha a függők kábítószerekkel vagy kábítószerrel párosított jelekkel vannak kitéve, és hogy a drogok nagyobb arányban vannak, mint a nem kábítószeres jutalmak (Volkow és munkatársai, 2007; Volkow és munkatársai, 2009). Meg kell jegyezni, hogy a PET-vizsgálatban a csökkent D2 DAR-szintek inkább a megnövekedett DA-felszabadulást jelezhetik, mint a csökkent D2 DAR-szinteket, de a legújabb eredmények a kokainfüggő betegek esetében ezt a magyarázatot állítják (Martinez és munkatársai, 2009). Ezen túlmenően a humán kokainhasználók utólagos vizsgálata során megállapították, hogy a D2 DAR-szintek csökkenése az NAc-ben immunoblottával (Worsley és munkatársai, 2000).

A humán kokainfüggőkkel végzett vizsgálatok nem tudják meghatározni, hogy a D2 DAR csökkenése prediszponáló tulajdonság vagy a kokain-expozíció eredménye, de más eredmények azt mutatják, hogy mindkettő igaz. Egyrészt a nem kábítószerrel szenvedő emberekkel végzett kísérletek fordított összefüggést találtak a D2 DAR rendelkezésre állása és a „kábítószer-szeretet” jelentése között, amikor metil-fenidátot alkalmaztak (Volkow és munkatársai, 1999; 2002). Ezek az eredmények arra utalnak, hogy az alacsony D2 DAR rendelkezésre állása növelheti a függőséggel szembeni sebezhetőséget. Hasonló következtetést támasztanak alá rhesus majmokon végzett vizsgálatok is. A szociálisan elhelyezett majmok esetében a társadalmi dominancia elérése növeli a D2 DAR elérhetőségét a striatumban, és ez a kokain erősítő hatásával szembeni alacsonyabb érzékenységhez kapcsolódik, mint az alárendelt majmok (Morgan és munkatársai, 2002). A szociális státus szintén korrelál a striatális D2 DAR rendelkezésre állással a kábítószer-mentes emberi önkénteseknél (Martinez és munkatársai, 2010). Másrészt, mind a PET, mind a receptor autoradiográfiás vizsgálatok azt mutatják, hogy a hosszú távú kokain önadagolás csökkenti a striatális D2 DAR receptor elérhetőségét egyedileg elhelyezett majmokban, amint azt a fentiekben ismertettük.Moore és munkatársai, 1998b; Nader és munkatársai, 2002; Nader és munkatársai, 2006). Úgy tűnik, hogy a krónikus kokain önadagolás is csökkenti a D2 DAR rendelkezésre állását a domináns, szociálisan elhelyezett majmoknál (Czoty és munkatársai, 2004). Így a hosszú távú kokain önadagolás után nem volt szignifikáns különbség a D2 receptor elérhetőségében vagy a kokain erősítő hatásaiban a domináns és alárendelt majmok között.Czoty és munkatársai, 2004). Az absztinencia során azonban a megemelkedett D2 DAR-szintek a domináns majmokban eltávolodtak, és ez összefüggésben állt az újdonságra adott válasz hosszabb késleltetésével, ami a kokain erősítő hatásai iránti csökkent érzékenység előrejelzője (Czoty és munkatársai, 2010).

Mint az emberek és a majmok esetében, a patkányvizsgálatok azt mutatják, hogy az alacsony D2 DAR rendelkezésre állása a kokain sebezhetőségének kockázati tényezője. Tehát a magas impulzivitású patkányokon végzett PET-vizsgálatok (a fokozott kokain önadagolással összefüggő jellemző) csökkent D2 / D3 DAR rendelkezésre állást mutatnak a ventrális striatumban (Dalley és munkatársai, 2007). Az NAc D2 DAR szintjei szintén csökkentek azokban a patkányokban, amelyek az újdonságra nagyfokú lokomotoros választ mutatnak, és a függőség sebezhetőségével kapcsolatos egyéb jellemzők (Hooks és munkatársai, 1994). Patkányaink eredményei azt mutatják, hogy a D2 DAR-szintek csökkenése a NAc-ben szintén ismétlődő kokain-expozíciónak lehet következménye, összhangban a majmok és emberek vizsgálatával (fent). A patkányokon végzett két receptor autoradiográfiás vizsgálat eredményei azonban eltérnek a miénktől. Ben-Shahar et al. (2007) nem figyeltek meg csökkentett D2 DAR-szinteket a NAc-ben a megvonás után (20 min., 14 napok 60 napjai) egy kiterjesztett hozzáférésű kokain önadagolási rendjéről, hasonlóan a miénkhez (6 hr / nap), bár az NAc héjban megfigyelhető csökkenés volt megfigyelhető korlátozott hozzáférési séma (2 hr / nap) és az 14 kivonási napok után (Ben-Shahar és munkatársai, 2007). Stéfanski et al. (2007) nem talált változást a D2 DAR szintekben a magban vagy a héjban 24 h a korlátozott hozzáférésű kokain önadagolás megszűnése után (2 hr / nap), bár a D2 DAR szintek csökkentek a kokain kontrollok esetében. Amint fentebb már említettük, a receptor autoradiográfiája a teljes sejtreceptorokat méri, míg a PET és a fehérje térhálósítási vizsgálatok a sejtfelszíni receptorokat méri.

Összességében a D2 DAR-szintek és a kokain önadagolás közötti összefüggést vizsgáló tanulmányok olyan modellt jelentenek, amelyben a D2 DAR-ok általában korlátozzák a kokain önadagolását. Ezért azt javasoljuk, hogy a kísérleteinkben megfigyelt csökkent D2 DAR szintek hozzájárulhatnak a kokain kiváltása után a cue-indukált kokainkereséshez. Különösen azt a tényt, hogy a D2 DAR felületi expressziója a NAc magban csökkent a WD45-on, de nem a WD1-nél, és az NAc mag kulcsszerepe a cue-indukált kokainkeresésben, arra utal, hogy az időfüggő D2 DAR lefelé történő szabályozás a NAc magban hozzájárulnak a cue-indukált kokainkeresés időfüggő fokozásához. Ez azt jósolja, hogy a D2 agonista intra-NAc infúziója a visszavonás során csökkenti a cue-indukált kokainkeresést. Sajnos, egyetlen vizsgálat sem vizsgálta a NAC D2 DAR hatóanyagok hatását az inkubációs modellben. Másrészről, a kokain által előidézett visszaállítás tanulmányai azt mutatják, hogy a D1 és a D2 DAR-ok a héj- és a mediális magban együttműködnek a kokainkeresés előmozdításában (Anderson és munkatársai, 2003; Bachtell és munkatársai, 2005; Schmidt és Pierce, 2006; Schmidt és munkatársai, 2006). Ezek alapján megállapítható, hogy a kísérleteinkben megfigyelt csökkent D2 DAR-expresszió csökkenti a kokainkeresést, vagyis ellentétes a ténylegesen megfigyelt kivonásfüggő intenzifikációval. A különbség tükrözi a problémákat, amelyeket a kokain által előidézett visszaállítás után az extinkciós képzés után általánosítottuk, a kivonás utáni cue-indukált kokainra.

A D3 DAR felületi expressziójának időfüggő növekedése a NAc magban a kokain önadagolásának befejezése után következik be.

A D3 DAR-t preferáló gyógyszerek vizsgálata a kokain önadagolás és újraképző paradigmákban azt sugallják, hogy a D3 DAR antagonisták hasznosak lehetnek a kokain-függőség kezelésében, és különösen a kokainhoz kötődő jelekkel szembeni reaktivitás csökkentésében (Heidbreder és munkatársai, 2005; 2008; Le Foll és munkatársai, 2005; Xi és Gardner, 2007). Ezek az eredmények arra utalnak, hogy a D3 DAR endogén DA aktiválása részt vehet a cue-indukált kokainkeresés közvetítésében. Eredményeink azt mutatják, hogy a D3 DAR felületi expressziója a NAc magban változatlan a WD1-ban a kiterjedt hozzáférésű kokain-önadagolással, de a WD45-nél nőtt a kokain vágy inkubálásával összefüggésben. A D3 DAR felületi expressziója nem növekedett szignifikánsan a héjban, bár a felületi / intracelluláris arány kismértékben, de jelentősen növekedett. Tekintettel a D3 DAR átvitel szerepére a kokainhoz kapcsolódó jelzésekre adott válaszként és a magnak a cue-indukált kokainkeresés szempontjából betöltött szerepének fontosságában, kísértés, hogy spekuláljunk, hogy a D3 DAR felületi expressziójának növekedése a NAc magban hozzájárult a cue-indukált kokain inkubálásához. a WD45-on megfigyelt vágy. Azonban az a neurális hely, ahol a D3 DAR antagonisták csökkentik a kokainkeresést, még nem állapítottak meg. Pontosabban, egyetlen vizsgálatban sem vizsgálták a D3 DAR intravénás NAc injekciójának hatását a cue-indukált kokainkeresésre. Egy másik modellben Schmidt et al. (2006) megállapította, hogy a D3-preferáló agonista PD 128,907 injekciója a magba vagy a héjba nem eredményezte a kioltási képzés után kerülő kokaint.

Eredményeink általában összhangban vannak a receptor autoradiográfiás vizsgálatokkal, amelyek a kokain expozíció után a NAc összes D3 DAR szintjét mérték. Staley és Mash (1996) beszámoltak arról, hogy a D3 DAR-kötés magasabb volt a kokain-túladagolás áldozatainak NAc-jében, mint az életkorhoz igazított kontrollok. Miután a kokainnak kitettük a kondicionált hely preferencia paradigmában és három nappal az elvonást, az egerek nagyobb D3 DAR kötést mutattak az NAc magban és a héjában (Le Foll és munkatársai, 2002). Neisewander et al. (2004) mért D3 DAR-kötődés kiterjedt kokain önadagolási tapasztalattal rendelkező patkányok esetében, amelyeket különböző kivonási időszakok után teszteltek a kokainalapú újrakezdésre, majd később 24-t öltek meg. A D3 DAR kötődése a NAc-ben nem változott a WD1-en, de hosszabb idő után (WD31-32) növekedett, összhangban az időfüggő növekedés megfigyelésével. Továbbá, a gyógyszeres kezelés a visszavonás során, hogy a csökkent kokainkeresés is csökkentette a D3 DAR-kötődés növekedését, ami arra utal, hogy a D3 DAR felszabályozás funkcionálisan kapcsolódik a kokainkereséshez. Meg kell jegyeznünk, hogy a D3 DAR a Neisewander et al. (2004) szignifikánsak voltak a magban, míg a héjban csak a trendeket figyelték meg, de az alrégiókat az NAc rostrális részében elemezték, ahol a mag és a héj kevésbé elkülönült. Elemzésünket a NA és a rostrális és caudalis részek magja és héja alapján végeztük.

Ezt a munkát a DA009621, a DA00453 és a NARSAD Distinguished Investigator Award MEW, DA020654 és MM támogatása támogatta, valamint a Nemzeti Kollégium kutatási díját DA021488 KLC-nek.