Neuroplastisitas yang diinduksi opioid endogen dari neuron dopaminergik di daerah tegmental ventral mempengaruhi hadiah alami dan opiat (2014)

KOMENTAR: Grafik Studi DeltaFosB kita sering mengutip semua fokus nukleus accumbens (pusat penghargaan), dan menemukan bahwa seks hampir melewati mekanisme otak yang sama seperti met & kokain. Dari studi penting oleh peneliti yang sama ini (Undang-Undang Imbalan Alami dan Obat-obatan untuk Mekanisme Plastisitas Saraf Tiruan dengan ΔFosB sebagai Mediator Kunci (2013)):

Dengan demikian, penghargaan alami dan obat tidak hanya berkumpul di jalur saraf yang sama, tetapi juga berkumpul di mediator molekuler yang sama, dan kemungkinan besar di neuron yang sama di Nucleus Accumbens, untuk mempengaruhi arti-penting insentif dan "keinginan" dari kedua jenis penghargaan

Pengambilan: met, kokain, dan seks semua melakukan hal-hal mendasar yang sama untuk sel-sel saraf yang sama di pusat penghargaan (nucleus accumbens), apa pun yang mereka lakukan berbeda di tempat lain di otak. Ini membongkar titik pembicaraan yang biasa bahwa imbalan alami dan obat-obatan berbeda dalam mekanisme dan efeknya.

Studi baru ini meneliti apa yang dilakukan seks terhadap VTA. VTA adalah tempat sel saraf penghasil dopamin dimulai - dan mereka bercabang ke nukleus accumbens, korteks frontal, dan amigdala. Pada dasarnya VTA adalah sumber (mata air) sebagian besar dopamin kita. Lihat 2 gambar sirkuit hadiah ini: Pic1, Pic2

Para peneliti menemukan bahwa seks (klimaks) menyebabkan sel tubuh dalam VTA menyusut sementara (pada pria). Badan sel dan dendritnya terdiri dari materi abu-abu otak. Inilah yang dilakukan oleh kecanduan heroin pada VTA (Bukan sekali pakai heroin, tetapi penggunaan heroin kronis). Perhatikan bahwa susut yang sama dari badan sel VTA ini terjadi pada pecandu heroin manusia.

Penyusutan sel yang dipicu oleh jenis kelamin berlangsung selama setidaknya 7 hari. Perubahan yang disebabkan oleh jenis kelamin telah kembali normal pada hari 30, tetapi para peneliti hanya menilai hari 1, 7, dan 30.

Penyusutan badan sel pada kecanduan heroin menghasilkan dopamin yang lebih rendah di dalam nucleus accumbens - atau yang kita sebut desensitisasi. Para peneliti memberikan morfin pada tikus untuk menilai respons mereka (setelah berhubungan seks), tetapi tidak ada yang terjadi. Biasanya tikus sangat menyukai morfin, tetapi di sini mereka untuk sementara tidak peka. Singkatnya, rangkaian hadiah tikus pasca ejakulasi tidak responsif terhadap rendahnya tingkat heroin. Para peneliti menduga bahwa dosis yang lebih tinggi diperlukan untuk menimbulkan reaksi tikus yang "normal".

Singkatnya - Seks (sementara) melakukan hal yang sama persis di VTA seperti halnya kecanduan heroin: penyusutan badan sel saraf penghasil dopamin. Hal ini menyebabkan dopamin yang lebih rendah di pusat penghargaan, dan kurangnya respons terhadap narkotika - dan otak tikus membutuhkan setidaknya 7 hari untuk pulih.

 

J Neurosci. 2014 Jun 25;34(26):8825-36. doi: 10.1523 / JNEUROSCI.0133-14.2014.

Pitcher KK1, Coppens CM2, Beloate LN3, Fuller J2, Van S2, Frohmader KS2, Laviolette SR2, Lehman MN4, Kencangkan LM5.

Abstrak

Imbalan alami dan obat-obatan pelecehan berkumpul di jalur mesolimbik dan mengaktifkan mekanisme umum plastisitas saraf di nucleus accumbens. Paparan kronis terhadap opiat menginduksi plastisitas pada neuron dopaminergik pada area ventral tegmental (VTA), yang mengatur toleransi morfin.

Di sini, kami menguji hipotesis bahwa pelepasan opioid endogen yang diinduksi-kawin dalam VTA menyebabkan perubahan morfologis sel-sel dopamin VTA pada tikus jantan, yang pada gilirannya mengatur ekspresi jangka panjang dari penguatan pengalaman perilaku seksual yang diinduksi oleh pengalaman.

Pertama, pengalaman seksual menurun VTA ukuran dopamin soma 1 dan 7 hari, tetapi bukan 30 hari setelah sesi perkawinan terakhir. Efek ini diblokir dengan nalokson sebelum setiap sesi kawin; dengan demikian, plastisitas sel dopamin VTA tergantung pada aksi opioid endogen.

Pada gilirannya, plastisitas VTA dikaitkan dengan perubahan hadiah opiat, karena laki-laki yang berpengalaman secara seksual tidak membentuk preferensi tempat yang dikondisikan untuk 0.5 mg / kg morfin.

Selanjutnya, ditentukan apakah tindakan opioid endogen memediasi penghargaan seksual dan memori pada tikus jantan yang diobati dengan nalokson selama pengalaman kawin, baik secara sistemik atau intra-VTA. Naloxone tidak mencegah fasilitasi perilaku seksual awal yang diinduksi pengalaman selama sesi kawin berulang, atau preferensi tempat terkondisikan untuk kawin. Namun, pengobatan nalokson melemahkan ekspresi jangka panjang dari fasilitasi perilaku seksual yang diinduksi oleh pengalaman dan aktivasi saraf di daerah mesolimbik yang disebabkan oleh isyarat terkondisikan terkait perkawinan.

Bersama-sama, data ini menunjukkan bahwa opioid endogen selama kawin menginduksi plastisitas saraf pada neuron dopamin VTA yang tampak penting untuk imbalan morfin dan memori jangka panjang untuk perilaku imbalan alami.

 

Pengantar

Perilaku penghargaan alami dimediasi oleh sistem mesocorticolimbic (Meisel dan Mullins, 2006; Hoebel et al., 2009; Frohmader et al., 2010a; Pitchers et al., 2010a; Young et al., 2011; Blum et al., 2012). Narkoba penyalahgunaan menyebabkan perubahan saraf dalam sistem ini, yang pada gilirannya berkontribusi pada pengembangan dan ekspresi penyalahgunaan zat (Hyman et al., 2006; Nestler, 2012). Kami sebelumnya menentukan bahwa pengalaman dengan perilaku imbalan alami, yaitu, pengalaman seksual pada tikus jantan, juga menyebabkan plastisitas saraf pada nucleus accumbens (NAc), termasuk peningkatan duri dendritik (Pitchers et al., 2010a) dan deltaFosB (Pitchers et al., 2013). Pada gilirannya, plastisitas yang dipicu oleh jenis kelamin ini sangat penting untuk efek pengalaman seks pada kawin berikutnya, dimanifestasikan sebagai fasilitasi inisiasi dan kinerja perilaku seksual (Pitchers et al., 2010b, 2012, 2013). Selain itu, pengalaman seks mengubah responsif terhadap psikostimulan, termasuk kepekaan terhadap aktivitas alat gerak dan peningkatan penghargaan (Frohmader et al., 2010a; Pitchers et al., 2010a, 2013).

NAc adalah salah satu target hilir dari neuron dopaminergik di area ventral tegmental (VTA). Neuron dopamin VTA diaktifkan selama kawin dan setelah paparan isyarat terkondisi yang memprediksi imbalan seksual (Balfour et al., 2004; Frohmader et al., 2010a), melalui pengikatan opioid peptida (EOP) endogen pada μ-opioid receptor (MORs; Matthews dan Jerman, 1984; Johnson dan Utara, 1992; Klitenick et al., 1992; Ikemoto et al., 1997; Balfour et al., 2004). Oleh karena itu, paparan isyarat terkondisi yang memprediksi perilaku seksual menyebabkan pelepasan EOP dan aktivasi sel dopamin ETA, yang memfasilitasi motivasi seksual (Mitchell dan Stewart, 1990; van Furth et al., 1995; van Furth dan van Ree, 1996) dan pelepasan dopamin dalam NAc (Fiorino et al., 1997).

Paparan berulang pada opium eksogen menyebabkan perubahan morfologis pada VTA (Mazei-Robison et al., 2011; Mazei-Robison dan Nestler, 2012), mengurangi ukuran soma neuron dopamin VTA (Sklair-Tavron et al., 1996; Spiga et al., 2003; Chu et al., 2007; Russo et al., 2007; Mazei-Robison et al., 2011), penurunan kadar protein neurofilamen (Beitner-Johnson et al., 1992), peningkatan rangsangan sel dopamin, dan mengurangi transpor axoplasmik dan output dopamin ke NAc (Beitner-Johnson et al., 1992; Mazei-Robison et al., 2011). Perubahan neuron dopamin VTA ini menyebabkan toleransi pemberian morfin dan bersifat sementara saat menghilang dalam waktu satu bulan setelah pemutusan hubungan obat (Russo et al., 2007). Saat ini tidak jelas apakah plastisitas dalam neuron dopamin VTA adalah unik untuk tindakan opiat atau jika mereka juga diproduksi oleh pelepasan EOP selama perilaku yang bermanfaat secara alami.

Di sini, kami menguji hipotesis bahwa pengalaman hadiah alami menyebabkan neuroplastisitas mirip dengan yang disebabkan oleh opiat, dan dengan demikian, bahwa opiat berkumpul pada mekanisme plastisitas yang sangat penting untuk perilaku imbalan alami dan memori hadiah. Kami menguji apakah pengalaman seksual pada tikus jantan mengurangi ukuran soma neuron dopamin VTA melalui proses yang tergantung pada tindakan EOP dalam VTA. Lebih lanjut, kami menyelidiki apakah perubahan yang diinduksi EOP pada neuron dopamin VTA dikaitkan dengan penguatan perilaku penghargaan alami dan atribusi arti-penting insentif untuk isyarat yang terkait dengan hadiah alami, sekaligus menyebabkan toleransi silang terhadap imbalan morfin.

Bahan dan Metode

hewan

Tikus Sprague-Dawley jantan jantan dewasa (200-225 g) diperoleh dari Sungai Charles dan ditempatkan berpasangan di kamar-kamar berlampu artifisial pada siklus cahaya / gelap 12 pada semua percobaan (dimatikan di 10: 00 AM kecuali untuk percobaan toleransi morfin , mati di 5: 00 PM). Makanan dan air tersedia ad libitum kecuali selama pengujian perilaku. Stimulus betina diovariektomi dan ditanam secara subkutan dengan 5% 17-β-estradiol benzoat kapsul SILASTIK (1.98 mm diameter dalam, panjang 0.5 cm, panjang 500 cm, Dow-Corning). Suntikan progesteron (subkutan, 0.1 μg dalam 3 ml minyak wijen) diberikan 6-XNUMX h sebelum pengujian untuk menginduksi penerimaan seksual. Semua prosedur telah disetujui oleh University of Western Ontario dan Komite Perawatan Hewan Universitas Michigan, dan sesuai dengan Dewan Kanada tentang Pedoman Perawatan Hewan dan Institut Kesehatan Nasional yang melibatkan hewan vertebrata dalam penelitian.

Waktu perjalanan perubahan ukuran dopamin soma VTA

Sesi kawin setiap hari.

Untuk mempelajari arah perubahan ukuran dopamin neuron soma dalam VTA, hewan yang berpengalaman secara seksual dan naif dibunuh di 1, 7, atau 31 d (n = 5 – 8 per grup) setelah hari terakhir kawin (berpengalaman) atau penanganan (naif). Kelompok yang berpengalaman secara seksual dicocokkan dengan perilaku seksual selama sesi perkawinan terakhir, serta jumlah total ejakulasi selama lima sesi (rata-rata 5 untuk setiap kelompok), dan tidak berbeda dalam parameter perilaku seksual apa pun.

Sesi kawin.

Laki-laki yang naif secara seksual ditugaskan ke salah satu dari dua kondisi eksperimental: naif secara seksual atau berpengalaman secara seksual. Hewan yang berpengalaman secara seksual diizinkan kawin lima kali pada hari-hari berturut-turut dengan betina yang reseptif di kandang uji segi empat (60 × 45 × 50 cm) hingga menampilkan ejakulasi atau hingga 1 h (mana yang lebih dulu). Kandang dibersihkan secara menyeluruh dengan larutan etanol 70% dan seprai segar ditambahkan di antara sesi perkawinan. Perilaku seksual dilakukan selama fase gelap (2-6 h setelah timbulnya gelap). Hanya hewan yang mengalami ejakulasi selama setidaknya empat dari lima sesi kawin yang dianggap berpengalaman secara seksual dan dimasukkan dalam eksperimen. Semua sesi kawin diamati dan perilaku seksual dicatat. Jumlah mount (M) intromission (IM), mount latency (ML; waktu dari pengenalan betina ke mount pertama), latensi intromission (IL; waktu dari pengenalan betina ke intromission pertama), dan latensi ejakulasi (EL; waktu dari intromisi pertama ke ejakulasi) dicatat (Agmo, 1997). Hewan naif ditempatkan dalam kandang uji bersih untuk 1 h bersamaan dengan laki-laki yang berpengalaman secara seksual kawin di ruangan yang sama, sehingga mereka terkena bau betina yang jauh, dan tingkat gangguan dan kebaruan lingkungan yang sama seperti laki-laki yang berpengalaman.

Pelabelan imunofluoresensi.

Hewan dibius secara mendalam menggunakan natrium pentobarbital (270 mg / kg, ip) dan diperfusi intrakardial dengan 50 ml salin 0.9%, diikuti oleh 500 ml paraformaldehyde 4% dalam buffer buffer natrium fosfat (PB) 0.1 m. Otak dipindahkan dan dipasangkan kembali selama 1 h pada suhu kamar (RT) dalam fiksatif yang sama, dan kemudian direndam dalam 20% sukrosa dan 0.01% natrium azida dalam 0.1 m PB untuk penyimpanan pada 4 ° C. Bagian koral dipotong pada 35 μm pada mikrotom pembekuan (H400R, Microm) dan dikumpulkan dalam empat seri paralel dalam larutan krioprotektan (30% sukrosa, 30% etilena glikol dalam 0.1 m PB) kemudian disimpan di 20 ° C. Semua inkubasi dilakukan di RT dengan agitasi lembut dan bilasan berlebihan dengan 0.1 m PBS, pH 7.35, di antara inkubasi. Bagian terkena 1% H2O2 untuk 10 min untuk menghancurkan peroksidase endogen, kemudian diblokir untuk 1 h dalam larutan inkubasi (PBS +: PBS yang mengandung 0.4% Triton X-100; Sigma-Aldrich) dan 0.1% albumin serum sapi (Laboratorium Penelitian Jackson Immuno). Selanjutnya, bagian diinkubasi semalam di RT di mouse tirosin hidroksilase (TH) -antibodi (1: 20 000; Millipore). Setelah inkubasi antibodi primer, bagian diinkubasi dalam antibodi anti-tikus kambing terkonjugasi AlexaFluor 555 (1: 100; Invitrogen, Eugene, OR) selama 30 min. Akhirnya, bagian dicuci dengan 0.1 m PB, dipasang pada slide kaca Superfrost Plus, dikeringkan, dan ditutup dengan gelvatol yang mengandung agen anti-fading 1,4-diazabicyclo (2,2) oktan (DABCO; 50 mg / ml, Sigma-Aldrich; Lennette, 1978).

Analisis data: ukuran neuron soma.

Gambar neuron TH-immunoreactive (IR) dalam VTA diambil pada pembesaran 40 × pada tiga rostral ke level kaudal (Balfour et al., 2004). Tidak ada perbedaan yang terdeteksi antara sel pada tingkat yang berbeda. Ukuran soma neuron TH-IR dianalisis menggunakan ImageJ (National Institutes of Health). Luas rata-rata, keliling, dan kelenturan diukur seperti yang dijelaskan oleh Sklair-Tavron et al. (1996). Rata-rata sel 25 per hewan (gabungan semua tingkat 3 VTA) dianalisis dan hanya sel dengan nukleus yang terlihat jelas yang dimasukkan. Untuk setiap hewan, luas rata-rata, keliling, dan kelenturan dihitung. Untuk analisis statistik digunakan ANOVA dua arah [faktor: pengalaman seksual (pengalaman seks atau naif seks) dan waktu (1, 7, atau 31 d)] diikuti oleh post hoc perbandingan menggunakan metode Holm – Sidak dengan tingkat signifikansi 0.05.

VTA perubahan non-dopamin

Sesi perkawinan dua mingguan.

Untuk menguji apakah pengalaman seksual selama sesi kawin harian diperlukan untuk penurunan ukuran neuron soma TH-IR, neuron dopamin hewan VTA yang telah kawin selama lima sesi kawin dua mingguan dianalisis. Sesi perkawinan seperti dijelaskan di atas, tetapi selama periode 2.5 minggu. Otak dikumpulkan 7 d setelah kawin atau penanganan terakhir.

Pelabelan Immunoperoxidase.

Selain itu, diuji apakah menggunakan teknik pewarnaan sensitif dengan deteksi imunoperoksidase dan kromogen, juga akan memungkinkan untuk visualisasi perubahan ukuran soma TH-IR. Proses perfusi dan jaringan dilakukan seperti yang dijelaskan di atas. Setelah perawatan dengan 1% H2O2 dan PBS +, bagian diinkubasi semalaman di RT dalam mouse-polyclonal tyrosine hydroxylase (TH) -antibody (1: 20 000; Millipore). Setelah inkubasi antibodi primer, bagian diinkubasi dengan IgG anti-kelinci terkonjugasi biotin (1 h, 1: 500 dalam PBS +; Laboratorium Laboratorium), avidin-biotin-horseradish peroxidase (1 h, elit ABC; 1: 1 di 000 di 3,3 ; Laboratorium Vektor), dan 10′-diaminobenzidine tetrahydrochloride (0.02 min, 0.02%, DAB; Sigma-Aldrich) ditingkatkan dengan nikel sulfat dalam (0.1% dalam 0.015 m PB) dengan hidrogen peroksida (0.1%). Bagian dicuci secara menyeluruh dalam 0.3 m PB untuk mengakhiri reaksi dan dipasang ke Superfrost ditambah slide kaca (Fisher) dengan XNUMX% gelatin dalam ddH2O. Setelah dehidrasi, semua slide dilapisi dengan DPX mountant (dibutyl phthalate xylene; Sigma-Aldrich).

Analisis data: ukuran neuron soma.

Sel-sel TH-IR dianalisis untuk area, perimeter, dan sirkularitas seperti dijelaskan di atas. Selain itu, sel-sel TH-IR dalam substantia nigra (SN), pada bagian yang sama digunakan untuk analisis sel-sel VTA TH-IR, dianalisis. Akhirnya, setelah analisis sel VTA dan SN TH-IR, bagian-bagian dihitung ulang menggunakan cresyl violet dan sel-sel non-TH-IR dianalisis menggunakan metode yang sama seperti yang dijelaskan di atas. Perbedaan antara kelompok naif dan berpengalaman dibandingkan dengan menggunakan Siswa berekor dua t menguji dengan tingkat signifikansi 0.05.

Efek nalokson pada pengurangan ukuran dopamin soma yang diinduksi oleh pengalaman

Untuk menentukan apakah MOR berperan dalam perubahan yang disebabkan pengalaman seks dalam ukuran neuron soma dopamin, MOR diblokir selama perilaku seksual. Setengah dari hewan memperoleh pengalaman seksual, sedangkan setengah lainnya ditangani tetapi tetap naif secara seksual. Hewan yang berpengalaman secara seksual diizinkan kawin pada 5 hari berturut-turut. Dalam kelompok yang berpengalaman secara seksual dan naif, hewan diperlakukan dengan nalokson MOR antagonis nonselektif (10 mg / kg, sc; Sigma-Aldrich, dilarutkan dalam saline 0.9%) atau saline 30 min sebelum pengenalan betina (berpengalaman) atau sebelum menangani (naif); dengan demikian menciptakan empat kelompok eksperimental: salin naif seksual (Sal Naif), nalokson naif seksual (Naif NLX), salin berpengalaman secara seksual (Sal Sal), dan nalokson yang berpengalaman secara seksual (Exp NLX; n = 5 – 8 per grup). Pengobatan nalokson tidak memiliki efek yang signifikan secara statistik pada parameter perilaku seksual, pada 5 d, dan kelompok yang diobati dengan nalokson dan salin identik dalam pengalaman seksual. Semua hewan dibunuh melalui perfusi intrakardial 7 d setelah sesi perkawinan terakhir. Bagian, imunohistokimia, dan analisis data (ANOVA dua arah; faktor: pengalaman seks dan pengobatan obat) untuk ukuran dopamin soma dilakukan seperti yang dijelaskan di atas.

Preferensi tempat yang dikondisikan morfin

Desain eksperimental.

Sebelumnya, Russo et al. (2007) menunjukkan morfin kronis menginduksi toleransi terhadap imbalan morfin. Karena pengalaman seksual dan morfin kronis menyebabkan penurunan yang serupa dalam ukuran soma neuron dopamin dalam VTA, relevansi fungsional dari perubahan morfologis yang dipicu oleh jenis kelamin diuji untuk imbalan morfin. Hewan yang berpengalaman secara seksual dan naif dibagi menjadi enam kelompok eksperimen yang berbeda (n = 9 – 13 per kelompok) berdasarkan perilaku seksual (naif atau berpengalaman secara seksual) dan dosis morfin (0.5, 5.0, atau 10.0 mg / kg, ip) dan diuji untuk preferensi tempat yang dikondisikan morfin (CPP).

Morfin-CPP.

Pengkondisian berlangsung 1 d setelah sesi perkawinan terakhir dan kelompok dicocokkan dengan kinerja seksual selama sesi perkawinan terakhir. Paradigma CPP yang digunakan terdiri dari pretest, hari pengkondisian, dan post-test, dan didasarkan pada aparatur Tenk et al. (2009). Singkatnya, aparat CPP (MED Associates) terdiri dari tiga ruangan berbeda. Di antara setiap sesi, peralatan dibersihkan secara menyeluruh dengan larutan etanol 70% untuk meminimalkan tanda penciuman yang tertinggal. Untuk menentukan preferensi individu, pretest dilakukan selama hewan diberi akses gratis ke seluruh peralatan selama 15 menit. Sebagai suatu kelompok, hewan tidak menunjukkan preferensi yang signifikan untuk ruang tertentu, tetapi masing-masing hewan memiliki sedikit preferensi awal. Tikus yang menunjukkan preferensi substansial untuk salah satu ruang (perbedaan> 200 detik antara waktu yang dihabiskan di masing-masing ruang; <5% hewan) selama pretest dikeluarkan dari penelitian. Selama pengkondisian, obat dipasangkan ke ruang yang awalnya disukai atau tidak diinginkan menggunakan paradigma yang tidak bias (Tzschentke, 2007) dan hewan dikurung di ruang selama 30 min. Hewan disuntik dengan saline (ip) di pagi hari (9: 00 AM hingga 12: 00 PM) dan dikurung di ruang berpasangan salin (kontrol). Pada sore hari (1: 00-4: 00 PM), hewan disuntik dengan morfin (ip, 0.5 mg / kg, 5.0 mg / kg atau 10.0 mg / kg; morfin sulfat dilarutkan dalam saline 0.9%, Johnson Matthey) dan dikurung ke ruang berpasangan morfin. Hewan dikenai dua hari pengkondisian. Hari berikutnya (3 d setelah hari terakhir kawin) post-test, identik dengan pretest, dilakukan. Untuk analisis statistik, waktu yang dihabiskan dalam ruang berpasangan morfin selama post-test dibandingkan dengan waktu yang dihabiskan dalam ruang berpasangan salin selama post-test untuk laki-laki yang naif atau berpengalaman secara seksual dalam setiap dosis menggunakan pasangan. t tes. p <0.05 dianggap signifikan secara statistik. Kelompok kontrol tambahan dari hewan yang naif secara seksual dan berpengalaman menerima saline di ruang berpasangan dan tidak berpasangan untuk dijadikan sebagai kontrol negatif. Tidak ada perbedaan waktu yang dihabiskan antar ruang yang terdeteksi untuk kedua kelompok.

Efek nalokson sistemik pada fasilitasi perilaku seksual yang dipicu oleh pengalaman

Desain eksperimental.

Pengalaman seksual menghasilkan fasilitasi perilaku seksual yang dipertahankan selama setidaknya 1 bulan (Pitchers et al., 2012). Untuk menganalisis efek memblokir MOR pada fasilitasi perilaku seksual yang diinduksi pengalaman, hewan yang berpengalaman secara seksual menerima nalokson atau salin sebelum lima sesi perkawinan berturut-turut (n = Masing-masing 12) seperti dijelaskan di atas. Satu minggu setelah sesi perkawinan terakhir, tes perkawinan terakhir dilakukan di mana semua hewan diizinkan untuk kawin sampai satu ejakulasi atau hingga 1 h. Tidak ada perawatan nalokson atau saline yang diberikan sebelum kawin pada hari tes terakhir. Parameter kawin dibandingkan untuk menentukan apakah nalokson mempengaruhi fasilitasi perkawinan berdasarkan pengalaman seks (hari 1 vs hari 5) atau pemeliharaan fasilitasi ini (hari 5 vs tes) menggunakan ANOVA dua arah [faktor: pengobatan (saline dibandingkan nalokson) ) dan hari (hari 1, hari 5, atau tes)] dan metode Holm – Sidak untuk post hoc perbandingan. Untuk semua tes statistik, p <0.05 dianggap signifikan secara statistik.

Eksperimen kontrol tambahan

Nalokson sistemik pada hari uji.

Untuk menunjukkan bahwa perubahan perilaku seksual pada hari tes perkawinan terakhir bukan karena tidak adanya nalokson, kami memberikan nalokson atau salin pada hari tes perkawinan terakhir untuk hewan yang menerima kawin berpasangan dengan nalokson sementara mereka memperoleh pengalaman seksual. Secara khusus, semua hewan menerima injeksi nalokson (10 mg / kg, sc) 30 menit sebelum kawin dengan satu ejakulasi selama 5 hari berturut-turut. Pada hari uji 7 d kemudian, sekitar setengah hewan menerima suntikan nalokson (10 mg / kg, n = 7) atau saline (n = 6) 30 mnt sebelum pengenalan wanita yang reseptif. Perilaku seksual diamati dan dicatat. Parameter kawin dibandingkan untuk menentukan apakah nalokson mempengaruhi fasilitasi perkawinan berdasarkan pengalaman seks (hari 1 vs hari 5) atau pemeliharaan fasilitasi ini (hari 5 vs tes) menggunakan ANOVA dua arah [faktor: pengobatan (saline dibandingkan nalokson) ) dan hari (hari 1, hari 5, atau tes)] dan metode Holm-Sidak untuk post hoc perbandingan. Untuk semua tes statistik, p <5% dianggap signifikan secara statistik.

Efek nalokson pada ekspresi jangka pendek dari perilaku seksual yang difasilitasi.

Efek pengobatan nalokson (10 mg / kg, sc) selama kawin diuji pada perilaku seksual berikutnya selama hari tes perkawinan terakhir, yang dilakukan hanya 1 d setelah kawin terakhir (saline, n = 5; nalokson, n = 4).

Pretreatment nalokson sistemik.

Untuk menentukan apakah itu mengulangi perawatan nalokson saja menyebabkan penurunan perilaku seksual 7 d setelah perawatan terakhir, hewan yang naif secara seksual menerima lima nalokson setiap hari (10 mg / kg, sc) atau injeksi salin pada hari-hari berturut-turut sebelum tes kawin 7 d setelah nalokson akhir atau injeksi saline. Pada hari tes terakhir ini, hewan tidak menerima injeksi apa pun. Perilaku seksual diamati dan dicatat seperti dijelaskan di atas. Parameter kawin dibandingkan antara kelompok menggunakan tidak berpasangan t tes. Untuk semua tes statistik, p <5% dianggap signifikan secara statistik.

Nalokson sistemik dan imbalan seks.

Satu kemungkinan untuk efek pelemahan nalokson pada tampilan pemeliharaan perilaku seksual yang difasilitasi adalah bahwa nalokson menghambat efek bermanfaat dari perilaku seksual. Untuk menguji kemungkinan ini, paradigma CPP dilakukan untuk perilaku seksual segera setelah nalokson atau injeksi saline pada pria tanpa pengalaman seksual sebelumnya. Prosedur CPP mirip dengan yang dijelaskan di atas untuk morfin-CPP, termasuk pretest, hari pengkondisian, dan post-test.

Perilaku seks dipasangkan dengan ruang awalnya tidak disukai. Secara seimbang, setiap hewan menerima suntikan nalokson (n = 12) atau saline (n = 11) 30 menit sebelum menerima akses ke wanita yang reseptif. Durasi rata-rata sesi kawin adalah ∼13 menit. Satu menit setelah ejakulasi, hewan itu ditempatkan di ruang berpasangan selama 30 min. Pada hari pengkondisian lainnya, hewan menerima suntikan nalokson atau saline (mana saja yang mereka terima sebelum kawin), dan ditempatkan di ruang yang tidak berpasangan selama min 30. Selanjutnya, post-test dilakukan, identik dengan pretest. Untuk menentukan preferensi ruang, waktu yang dihabiskan dalam ruang berpasangan selama pretest dan post-test dibandingkan. Untuk analisis statistik, dipasangkan t tes digunakan untuk membandingkan skor preferensi dan perbedaan, dan waktu dalam ruang berpasangan selama pretest dan post-test untuk menentukan apakah CPP yang signifikan dibentuk untuk perilaku seksual. p <0.05 dianggap signifikan.

Efek nalokson intra-VTA pada fasilitasi perilaku seksual yang disebabkan oleh pengalaman

Desain eksperimental.

Untuk menentukan apakah tindakan EOP khusus dalam VTA, bertanggung jawab atas efek perubahan yang disebabkan pengalaman seksual pada perilaku seksual, hewan menjalani infus nalokson atau salin lokal ke dalam VTA sebelum lima sesi kawin setiap hari. Paradigma perilaku mirip dengan eksperimen nalokson sistemik. Hewan yang berpengalaman secara seksual diizinkan kawin selama 5 hari berturut-turut sampai satu ejakulasi atau hingga 1 h. Lima belas menit sebelum memperkenalkan betina reseptif, tikus jantan menerima infus bilateral nalokson (10 μg / μl per belahan; 0.5 μl volume; dilarutkan dalam 0.9% saline) atau saline (0.5 μl per hemisfer). Microinjections bilateral diberikan pada laju aliran 0.5 μl / menit selama interval min 1 diikuti oleh tambahan 1 menit dengan kanula injeksi dibiarkan di tempat untuk difusi. Kanula injeksi kemudian diganti dengan kanula tiruan dan penutup debu. Satu minggu setelah hari terakhir perkawinan (hari tes), semua hewan dikawinkan sekali lagi untuk ejakulasi tanpa infus nalokson atau salin. Gambar 3A menguraikan desain eksperimental. Analisis data dilakukan sebagaimana dijelaskan dalam percobaan nalokson sistemik.

Operasi kanulasi.

Tikus jantan dibius dengan injeksi intraperitoneal (0.1 ml / kg) ketamin (0.87 mg / ml) dan xylazine (0.13 mg / ml), dan ditempatkan ke dalam alat stereotaxic (Instrumen Kopf). Kanula pengukur 21-pengukur bilateral (Plastik Satu) diturunkan melalui lubang bor kecil di tengkorak ke otak menuju VTA pada −4.8 mm AP, ± 0.75 mm ML dari bregma dan −7.8 mm DV dari bagian atas tengkorak sesuai dengan Paxinos dan Watson (2013). Cannulas diamankan dengan akrilik gigi yang ditempelkan pada tiga sekrup yang dipasang di tengkorak. Hewan diberi periode pemulihan 2-minggu, dan ditangani setiap hari untuk pembiasaan terhadap prosedur penanganan dan injeksi yang digunakan selama pengujian perilaku.

Verifikasi penempatan kanula.

Penempatan kanula diperiksa menggunakan TH-imunostaining untuk memastikan VTA tepat sasaran. Hanya hewan dengan penempatan yang tepat yang dimasukkan dalam analisis (ukuran kelompok akhir: saline berpengalaman n = 8; nalokson alami n = 6). Tiga hewan tambahan yang menerima suntikan nalokson intra-VTA diarahkan ke luar VTA dikelompokkan bersama dalam kelompok injeksi yang “tidak terjawab”. Kelompok yang terlewatkan dianalisis secara terpisah untuk berfungsi sebagai kontrol anatomi dan Mann-Whitney U Tes digunakan untuk membandingkan perilaku pada hari tes akhir dengan nalokson dan laki-laki berpengalaman yang diberi garam.

PERK yang diinduksi oleh isyarat kontekstual yang berhubungan dengan perkawinan

Desain eksperimental.

Paparan kandang di mana pejantan memperoleh pengalaman kawin telah terbukti menyebabkan aktivasi MOR dalam VTA dan aktivitas saraf di VTA dan NAc (Balfour et al., 2004). Oleh karena itu, lingkungan perkawinan berfungsi sebagai isyarat prediktif untuk imbalan seksual. Studi saat ini menguji apakah aktivasi MOR selama pengalaman seksual diperlukan untuk aktivasi saraf yang diinduksi isyarat yang dikondisikan. Nalokson atau salin diberikan secara sistemik (ip) 30 min sebelum penempatan di arena kawin dan perkenalan betina reseptif untuk kawin (berpengalaman), atau sebelum manipulasi kontrol yang terdiri dari penempatan dalam kandang penanganan tanpa presentasi betina (netral) lingkungan; naif). Dengan demikian, empat kelompok eksperimental telah dibuat: Naive Sal, Naive NLX, Exp Sal, dan Exp NLX. Satu minggu setelah sesi perkawinan terakhir, setengah dari hewan di masing-masing kelompok terpapar ke kandang kawin (Exp jantan: isyarat terkait seks) atau memegang kandang (pejantan naif: isyarat nonsalien / netral), sedangkan separuh lainnya tidak terpapar pada kandang kawin. isyarat dan sebagai gantinya tetap di kandang kandang (untuk menentukan ekspresi pERK dasar). Paradigma eksperimental ini menghasilkan kelompok 8: Naive Sal-No Cue, Naive Sal + Cue, Naive NLX-No Cue, Naive NLX + Cue, Exp Sal-No Cue, Exp Sal ​​+ Cue, Exp NLX-No Cue, Exp NLX + Cue (n = 4 masing-masing kecuali Naive NLX-No Cue, n = 3). Hewan diperfusikan 10 – 15 menit setelah paparan isyarat. Hewan kontrol dikeluarkan dari kandangnya dan dibiakkan secara bersamaan.

Imunohistokimia.

Bagian dan imunohistokimia dilakukan seperti yang dijelaskan di atas. Di sini, kami menggunakan antibodi poliklonal kelinci terhadap p42 dan p44 MAP Kinases ERK1 dan ERK2 (pERK; 1: 4 000; Cell Signaling Technology). Antibodi primer telah banyak dicirikan dalam literatur (Roux dan Blenis, 2004; Murphy dan Blenis, 2006; Frohmader et al., 2010b). Selain itu, penghilangan antibodi primer mencegah semua immunoreaktivitas dan analisis Western blot dari jaringan otak tikus menunjukkan dua pita pada berat molekul yang sesuai.

Analisis data.

pERK-immunoreactive (-IR) sel dihitung di sejumlah daerah otak menggunakan tabung gambar kamera lucida yang melekat pada Leica DMRD mikroskop: NAc [core (C) dan shell (S); 400 × 600 μm; korteks prefrontal medial; mPFC; anterior cingulate area (ACA); prelimbic cortex (PL); korteks infralimbik (IL); 600 × 800 μm masing-masing], caudate-putamen (CP; 800 × 800 μm), dan amygdala basolateral (BLA; 900 × 1200 μm; Balfour et al., 2004; Frohmader et al., 2010b; Pitchers et al., 2010b). Dua bagian dihitung per wilayah otak dan jumlah sel dalam area standar analisis kemudian dihitung sebagai jumlah sel per mm2. Kedua perhitungan tersebut dirata-rata per hewan untuk perhitungan rata-rata kelompok. Rata-rata kelompok dalam kelompok yang berpengalaman secara seksual atau naif dibandingkan dengan menggunakan ANOVA dua arah [faktor: terapi obat (NLX atau Sal) dan isyarat (isyarat atau isyarat tidak ada)] diikuti oleh post hoc perbandingan menggunakan tes jumlah Holm-Sidak atau Mann-Whitney jika sesuai dengan tingkat signifikansi p <0.05. Dalam cangkang NAc hewan yang berpengalaman secara seksual, ada kecenderungan kuat ke arah signifikansi faktor-faktor tersebut dan dengan demikian, perbandingan berpasangan dilakukan untuk membandingkan kelompok saline (Sal-No Cue) dan saline isyarat (Sal + Cue) saja.

Gambar.

Gambar digital ditangkap menggunakan kamera CCD (Macrofire, Optronics) yang terpasang pada a Leica mikroskop (DM5000B) dengan pengaturan kamera tetap. Gambar diimpor ke perangkat lunak Adobe Photoshop 9.0. Gambar tidak diubah dengan cara apa pun kecuali untuk penyesuaian kecerahan dan kontras.

Hasil

Perubahan yang dipicu oleh pengalaman seks dalam sel dopamin VTA

Pengalaman seksual menghasilkan penurunan ukuran VTA dopamin soma (Ara. 1A – C). Pengalaman seksual secara signifikan mengurangi luas dan keliling soma sel VTA TH-IR (area: F(1,31) = 23.068, p <0.001; perimeter, F(1,31) = 18.225, p <0.001). Ada juga pengaruh signifikan utama waktu (area: F(2,31) = 6.377, p = 0.005; perimeter, F(2,31) = 4.389, p = 0.021) dan interaksi yang signifikan antara pengalaman dan waktu (area: F(2,31) = 5.284, p = 0.011; perimeter, F(2,31) = 4.347, p = 0.022). Perbandingan berpasangan mengungkapkan bahwa luas dan keliling sel-sel TH-IR berkurang secara signifikan 1 dan 7 d setelah hari terakhir perilaku seksual pada hewan yang mengalami seksual dibandingkan dengan kontrol yang naif secara seksual [Ara. 1B, area: p = 0.002 (1 d), p <0.001 (7 hari); C, perimeter: p = 0.009 (1 d), p <0.001 (7 hari)]. Efek perilaku seksual menghilang ketika diikuti oleh periode pantang hadiah karena ukuran soma neuron TH-IR kembali ke garis dasar 31 hari setelah sesi kawin terakhir (Ara. 1B, area: p = 0.798; C, perimeter: p = 0.785). Perubahan yang disebabkan oleh pengalaman seks tidak terdeteksi dalam sirkularitas pada titik waktu mana pun (Ara. 1D). Penurunan ukuran dopamin soma VTA tidak tergantung pada sesi perkawinan harian, karena pengalaman kawin selama lima sesi perkawinan dua mingguan juga menghasilkan penurunan ukuran dopamin soma VTA (Ara. 2A,B, E – H, area: p = 0.004; perimeter: p <0.001). Sebaliknya, pengalaman seks tidak mempengaruhi ukuran TH-IR soma di substansia nigra (Ara. 2C, AKU J, area: p = 0.13; perimeter: p = 0.16) atau mengubah ukuran soma pada neuron non-TH-IR VTA terdekat (Ara. 2D, E – H, area: p = 0.46; perimeter: p = 0.45).

Gambar 1. 

Perubahan ukuran soma yang diinduksi opioid endogen dari neuron dopamin VTA. A, Gambar representatif dari neuron dopamin VTA dari hewan yang naif dan berpengalaman secara seksual menunjukkan pengurangan ukuran soma 7 d setelah sesi perkawinan terakhir. Bilah skala, 5 μm. Data kuantitatif menunjukkan bahwa pengalaman seksual (Exp, black bar) menyebabkan pengurangan area yang signifikan (B; dalam pM2) dan perimeter (C; dalam μm) sel dopamin VTA, 1 d (Naif, Exp; n = 6) dan 7 d (Naif, n = 5; Exp, n = 6), tetapi tidak 31 d (Naif, n = 6; Exp, n = 8) setelah perkawinan terakhir, dibandingkan dengan kontrol yang naif secara seksual (Naif, bilah putih). Area dikurangi menjadi 84% pada pria berpengalaman dibandingkan dengan kontrol naif di 1 atau 7 d. Perimeter dikurangi menjadi 91.6 dan 90% pada kelompok yang berpengalaman dibandingkan dengan kontrol pada 1 dan 7 d resp. Tidak ada efek pada sirkularitas (D). Plastisitas sel dopamin ini di daerah (E) dan perimeter (F) dicegah dengan nalokson (NLX, n = 8), tetapi tidak salin (Sal, n = 7) selama kawin, 7 d setelah sesi perkawinan akhir dibandingkan dengan kontrol yang naif secara seksual (Sal, n = 5; NLX, n = 6). Data mewakili rata-rata ± SEM; * menunjukkan perbedaan signifikan dibandingkan dengan kontrol yang naif secara seksual pada hari yang sama (B, C) atau dibandingkan dengan kontrol yang naif secara seksual yang diobati dengan saline dan laki-laki yang berpengalaman secara seksual dengan nalokson (E, F).

Gambar 2. 

Pengalaman seksual tidak menurunkan ukuran soma pada neuron substantia nigra dopamine atau neuron nondopamine VTA. VTA TH-IR area neuron soma (A; dalam pM2) dan perimeter (B; dalam μm) pada hewan yang naif secara seksual (putih) dan berpengalaman (hitam) yang mendapatkan pengalaman dengan kawin dua kali per minggu daripada selama hari-hari berturut-turut. Substantia nigra TH-IR area soma (C) dan area soma non-TH-IR VTA (D) pada hewan yang naif (putih) dan berpengalaman (hitam) secara seksual. Data mewakili rata-rata ± SEM; * menunjukkan perbedaan yang signifikan dibandingkan dengan kontrol yang naif secara seksual. Gambar representatif yang menunjukkan neuron TH-IR (coklat) dalam VTA yang naif secara seksual (E), dan berpengalaman (F) laki-laki. G, H, Gambar pembesaran yang lebih tinggi dari neuron yang ditunjukkan oleh panah masuk E dan F masing-masing. Neuron bernoda nissl diperlihatkan dengan warna biru pada gambar-gambar ini. Gambar representatif yang menunjukkan neuron TH-IR dalam SN yang naif secara seksual (I) dan berpengalaman (J) laki-laki. Skala bar: E-J, 20 μm.

Pengurangan ukuran soma yang diinduksi oleh pengalaman seks dari neuron dopamin VTA tergantung pada aktivasi reseptor opioid

Pengurangan ukuran VTA dopamin neuron soma yang disebabkan oleh pengalaman seksual diblokir oleh antagonis MOR nalokson non-selektif, diberikan sebelum setiap sesi perkawinan. Perawatan nalokson sebelum sesi kawin memiliki efek signifikan pada area (F(1,22) = 4.738, p = 0.041) dan cenderung berpengaruh signifikan pada perimeter (F(1,22) = 2.892, p = 0.052). Interaksi yang signifikan antara pengalaman dan pengobatan nalokson ditemukan untuk area (F(1,22) = 5.578, p = 0.027) dan perimeter (F(1,22) = 8.167, p = 0.009). Perbandingan berpasangan menunjukkan bahwa pengalaman seksual pada hewan yang diberi saline secara signifikan mengurangi luas dan keliling VTA dopamin neuron 7 d setelah sesi perkawinan terakhir dibandingkan dengan laki-laki yang naif secara seksual yang diobati saline.Ara. 1E, area: p = 0.018; F, perimeter: p = 0.007). Sebaliknya, hewan yang diobati nalokson yang berpengalaman secara seksual tidak berbeda dengan pejantan yang naif yang diobati nalokson (Ara. 1E, area: p = 0.483; F, perimeter: p = 0.330). Selain itu, ukuran soma hewan saline yang berpengalaman menurun secara signifikan dibandingkan dengan hewan nalokson yang berpengalaman (Ara. 1E, area: p = 0.002; F, perimeter: p = 0.002). Efek nalokson ini spesifik untuk pengalaman seksual, karena pengobatan nalokson saja tidak mempengaruhi ukuran soma sel TH-IR pada laki-laki yang diobati nalokson yang naif secara seksual dibandingkan dengan kontrol yang diberi salin (Ara. 1E,F). Selain itu, efek nalokson ini pada pengurangan ukuran soma yang diinduksi pengalaman bukan karena efek nalokson pada perilaku seksual, karena perilaku kawin tidak berbeda secara signifikan antara pria yang diobati dengan nalokson dan salin, kecuali waktu yang lebih lama untuk memulai kawin setelah ejakulasi. (interval pasca ejakulasi) pada pria yang diobati nalokson selama sesi kawin pertama dan kelima (p = 0.03 dan p = 0.004, masing-masing). Laki-laki yang diobati dengan saline dan nalokson bersanggama dengan ejakulasi selama masing-masing dari lima sesi perkawinan.

Toleransi penghargaan morfin yang diinduksi pengalaman seksual

Efek pengalaman seksual pada ukuran VTA dopamin soma oleh aksi EOP dalam VTA mirip dengan yang dilaporkan untuk opiat eksogen (Sklair-Tavron et al., 1996; Russo et al., 2007). Oleh karena itu, diuji apakah plastisitas sel dopamin VTA yang diinduksi hadiah alami mempengaruhi hadiah untuk morfin opiat. Memang, pengalaman seksual menyebabkan toleransi imbalan morfin, mirip dengan efek opiat kronis (Russo et al., 2007). Laki-laki yang berpengalaman secara seksual gagal mengembangkan CPP untuk 0.5 mg / kg dosis morfin; sedangkan, laki-laki yang naif secara seksual memang membentuk CPP untuk dosis ini, seperti yang ditunjukkan dengan menghabiskan lebih banyak waktu di ruang berpasangan morfin dibandingkan dengan ruang berpasangan saline selama post-test (Ara. 3; p = 0.039). Baik kelompok yang naif dan berpengalaman secara seksual menghabiskan jumlah waktu yang jauh lebih besar di dalam ruang berpasangan morfin dibandingkan dengan ruang berpasangan salin dengan dosis morfin yang lebih tinggi: 5.0 mg / kg (Ara. 3; Naif: p = 0.029; Exp: p = 0.012) dan 10.0 mg / kg (Ara. 3; Naif: p <0.001; Kedaluwarsa: p = 0.002).

Gambar 3. 

Efek dari pengalaman seksual pada penghargaan morfin. Waktu yang dihabiskan di ruang saline- (Sal) atau morfin-berpasangan (Mor; 0.5, 5 atau 10 mg / kg berat badan) selama post-test dalam naif seksual (Naif, n = 10 – 13) atau berpengalaman (Exp, n = 9 – 13) laki-laki. Data disajikan sebagai rata-rata ± SEM; * menunjukkan perbedaan yang signifikan dibandingkan dengan ruang pasangan Sal dalam hewan yang sama. NS, Tidak signifikan.

Fasilitasi perilaku kawin yang diinduksi oleh pengalaman seks tergantung pada aktivasi reseptor opioid

Temuan sejauh ini menunjukkan bahwa EOP bertindak dalam VTA selama sesi perkawinan pendek harian 5 menyebabkan plastisitas neuron dopamin VTA yang mirip dengan efek morfin kronis atau pemberian heroin secara mandiri (Russo et al., 2007; Mazei-Robison et al., 2011). Kami berhipotesis bahwa pengurangan ukuran dopamin soma VTA sangat penting untuk pembelajaran hadiah dan khususnya untuk fasilitasi perilaku seks yang disebabkan oleh pengalaman seks dalam hal motivasi dan kinerja. Hipotesis ini diuji dengan memblokir MOR menggunakan nalokson selama kawin dan memeriksa efek pada fasilitasi perilaku seksual yang disebabkan oleh pengalaman seksual selama lima sesi kawin setiap hari. Data disajikan dalam Gambar 4 hanya untuk sesi kawin pertama dan kelima, karena ini adalah data yang paling baik menggambarkan fasilitasi perilaku kawin yang diinduksi oleh pengalaman. Selain itu, efek jangka panjang dari perawatan nalokson selama sesi kawin diuji pada pemeliharaan fasilitasi perilaku kawin yang diinduksi pengalaman, selama tes kawin terakhir 1 seminggu kemudian. Gambar 4A menunjukkan desain eksperimental. Ada efek utama yang signifikan dari sesi kawin pada semua parameter perilaku seks (tingkat latensi: F(2,55) = 11.286, p <0.001; latensi intromisi: F(2,55) = 8.767, p <0.001; latensi ejakulasi: F(2,55) = 10.368, p <0.001) dan pengobatan nalokson pada latensi untuk meningkat (F(1,55) = 6.585, p = 0.013) dan intromission (F(1,55) = 7.863, p = 0.007). Perbandingan berpasangan menunjukkan bahwa perawatan nalokson mempengaruhi perilaku seksual selama sesi perkawinan pertama karena hewan nalokson memiliki latensi yang jauh lebih lama untuk meningkat (p = 0.002) dan intromission (p = 0.002) dibandingkan dengan kontrol saline pada hari pertama kawin. Efek nalokson ini pada perilaku seks awal dikurangi dengan pengalaman seksual dan tidak diamati selama sesi perkawinan berikutnya (Tabel 1). Selain itu, pemberian nalokson sebelum masing-masing dari lima sesi perkawinan tidak mencegah fasilitasi awal perilaku seksual dengan pengalaman seksual. Konsisten dengan efek penguat dari pengalaman seksual, pria yang diberi saline menunjukkan penurunan latensi untuk meningkat (Ara. 4B; p = 0.032) intromission (Ara. 4C; p = 0.033) dan ejakulasi (Ara. 4D; p <0.001) selama sesi kawin kelima dibandingkan dengan sesi kawin pertama, yang menunjukkan fasilitasi perilaku seksual. Demikian pula, pria yang diobati dengan nalokson menunjukkan latensi yang jauh lebih pendek untuk dipasang (Ara. 4B; p <0.001), intromisi (Ara. 4C; p <0.001), dan ejakulasi (Ara. 4D; p = 0.017) pada hari kelima dibandingkan dengan hari pertama. Selain itu, jantan yang diobati nalokson tidak berbeda dari kontrol salin dalam latensi selama sesi perkawinan kelima.

Gambar 4. 

Opioid endogen memainkan peran penting dalam fasilitasi perilaku seksual yang disebabkan oleh pengalaman. A, Desain eksperimental. B-D, Parameter perilaku seksual untuk pria yang diobati dengan saline (Sal, white bar, n = 11) atau nalokson (NLX; bilah hitam, n = 12) dengan administrasi sistemik. Data yang ditampilkan adalah latensi untuk dipasang (B; detik), intromission (C; detik), dan ejakulasi (D; detik) pada hari 1 dan 5 selama lima hari berturut-turut kawin. Selain itu, data ditampilkan untuk tes kawin akhir, 7 d setelah sesi kawin kelima. Data disajikan sebagai rata-rata ± SEM; + menunjukkan perbedaan yang signifikan antara hari 1 dan 5 dalam perawatan; * menunjukkan perbedaan yang signifikan antara hari tes dan hari 5 dalam perawatan; # menunjukkan perbedaan signifikan antara nalokson dan kelompok salin dalam sehari.

Tabel 1. 

Administrasi nalokson sebelum kawin meningkatkan latensi untuk dipasang dan intromisi hanya pada hari pertama kawin

Sebaliknya, perawatan nalokson selama sesi pengalaman seksual tidak mengganggu pemeliharaan fasilitasi perilaku seksual yang diinduksi oleh pengalaman pada hari tes perkawinan terakhir. Hari tes dilakukan 7 d setelah sesi perkawinan terakhir dengan tidak adanya injeksi nalokson. Laki-laki kontrol yang diberi saline menunjukkan fasilitasi perilaku seksual yang dipicu oleh pengalaman. Secara khusus, latensi untuk pemasangan, intromission, dan ejakulasi tidak berbeda antara sesi perkawinan kelima dan hari tes akhir (Ara. 4B – D). Sedangkan, pria yang diobati nalokson menunjukkan peningkatan signifikan dalam latensi untuk meningkat (Ara. 4B; p = 0.033), intromission (Ara. 4C; p = 0.036) dan ejakulasi (Ara. 4D; p = 0.049) pada hari tes dibandingkan dengan sesi kawin kelima. Juga, pada hari uji hewan nalokson ditemukan secara signifikan lebih lambat daripada pejantan yang diberi saline sebagaimana ditunjukkan oleh latensi yang lebih lama untuk dipasang (Ara. 4B; p = 0.017) dan intromission (Ara. 4C; p = 0.043). Dengan demikian, pengobatan nalokson menghambat pemeliharaan, tetapi bukan awal, pengembangan fasilitasi perilaku seksual yang disebabkan oleh pengalaman. Temuan ini menunjukkan peran penting untuk plastisitas neuron dopamin VTA yang diinduksi EOP pada ekspresi jangka panjang dari penguatan perilaku penghargaan alami.

Beberapa percobaan kontrol tambahan dilakukan untuk menentukan bahwa efek dari blokade reseptor opioid pada hilangnya penguatan jangka panjang dari perilaku seksual terjadi secara independen dari kurangnya administrasi nalokson pada hari tes perkawinan terakhir (Ara. 5A,B), khusus untuk kehilangan fasilitasi jangka panjang, tetapi tidak jangka pendek untuk perkawinan (Ara. 5E,F), tidak disebabkan oleh paparan harian nalokson saja (Ara. 5C,D), dan tidak disebabkan oleh hilangnya imbalan seksual pada pria yang diobati nalokson (Ara. 5G,H). Pertama, untuk menunjukkan bahwa perubahan perilaku seksual pada tes perkawinan terakhir bukan karena tidak adanya nalokson, baik nalokson atau salin diberikan pada hari tes perkawinan terakhir untuk hewan yang menerima kawin berpasangan dengan nalokson sementara mereka memperoleh pengalaman seksual (Ara. 5A). Ada efek utama yang signifikan dari hari kawin pada latensi untuk melakukan mount (Ara. 5B; F(2,27) = 30.031, p = 0.038) dan intromission (Tabel 2; F(2,27) = 10.686, p = 0.048). Tidak ada efek utama dari hari kawin pada latensi ke ejakulasi (Tabel 2; F(2,27) = 2.388, p = 0.109) Mirip dengan yang dijelaskan di atas, perawatan nalokson selama kawin tidak mempengaruhi fasilitasi perilaku seksual selama lima sesi pengalaman seksual awal. Kedua kelompok (kelompok yang diberi saline dan nalokson sebagaimana ditentukan oleh perlakuan yang diterima selama tes perkawinan akhir; keduanya menerima nalokson selama kawin) menunjukkan perilaku seksual yang difasilitasi pada hari 5 dibandingkan dengan hari 1 dan menunjukkan latensi yang lebih pendek secara signifikan untuk pemasangan pertama (Ara. 5B; garam: p = 0.033; nalokson: p = 0.014) dan intromission (Tabel 2; garam: p = 0.034; nalokson: p = 0.026). Hewan yang menerima nalokson atau saline pada hari terakhir tes kawin memiliki latensi yang lebih lama untuk dipasang (Ara. 5B; garam: p = 0.018; nalokson: p = 0.029) dan intromission (Tabel 2; garam: p = 0.019; nalokson: p = 0.020) dibandingkan dengan hari kelima pengalaman kawin. Oleh karena itu, pemberian nalokson atau salin pada hari tes segera sebelum kawin tidak mempengaruhi efek pengobatan nalokson selama sesi pengalaman seksual dan pelemahan fasilitasi jangka panjang dari perilaku seksual adalah identik dengan yang ditunjukkan pada hewan yang tidak menerima injeksi apa pun. pada hari terakhir tes kawin (Ara. 4).

Gambar 5. 

Opioid endogen penting dalam ekspresi jangka panjang dari fasilitasi perilaku seksual yang diinduksi oleh pengalaman. A, Desain eksperimental untuk percobaan dengan efek pengobatan NLX pada hari tes. B, Tingkatkan latensi pada hari 1 dan 5 selama lima hari berturut-turut dari perkawinan dan hari tes perkawinan akhir (Tes) setelah injeksi salin (abu-abu) atau nalokson (hitam). Data mewakili rata-rata ± SEM. * menunjukkan perbedaan yang signifikan antara hari 1 dan hari 5 dalam perawatan. # menunjukkan perbedaan yang signifikan antara Hari Tes dan Hari 5 dalam perawatan. C, Desain eksperimental untuk eksperimen untuk menguji efek pra-perawatan nalokson sendirian tanpa pengalaman seksual pada perilaku kawin. D, Tingkatkan latensi pada hari tes perkawinan terakhir, 7 hari setelah 5 hari baik injeksi salin atau nalokson tanpa adanya kawin. Data mewakili rata-rata ± SEM. E, Desain eksperimental untuk eksperimen untuk menguji apakah pengobatan nalokson mempengaruhi tampilan jangka pendek dari perilaku seksual yang difasilitasi pada hewan yang mengalami hubungan seksual. F, Tingkatkan latensi pada hari 1 dan hari 5 selama lima hari berturut-turut perkawinan dan hari tes perkawinan terakhir, 1 hari demi hari 5 di hadapan injeksi saline (abu-abu) atau nalokson (hitam). Data mewakili rata-rata ± SEM. * menunjukkan perbedaan yang signifikan antara hari 1 dan hari 5 dalam perawatan. G, Desain eksperimental untuk eksperimen untuk menguji apakah pengobatan nalokson memblokir efek menguntungkan dari perilaku seksual. H, Waktu yang dihabiskan dalam kawin ruang berpasangan (dalam detik) selama pretest (putih) dan post-test (hitam) untuk hewan yang menerima nalokson atau salin sebelum kawin. Data mewakili rata-rata ± SEM; * menunjukkan perbedaan yang signifikan dibandingkan dengan pretest.

Tabel 2. 

Data yang ditampilkan adalah latensi untuk intromisi dan ejakulasi (detik) dari eksperimen kontrol yang dilakukan untuk menentukan bahwa efek blokade MOR pada hilangnya penguatan jangka panjang dari perilaku seksual terjadi terlepas dari kurangnya administrasi nalokson pada hari tes perkawinan terakhir

Untuk menentukan apakah itu pengobatan nalokson ketika dipasangkan dengan pengalaman seksual dan tidak diulangi dengan nalokson per se yang menyebabkan penurunan perilaku seksual 7 d setelah perawatan terakhir, hewan yang naif secara seksual menerima baik suntikan nalokson atau saline lima hari sebelum tes perkawinan terakhir 7 d nanti (Ara. 5C). Tidak ada perbedaan signifikan yang terdeteksi untuk parameter kawin antara kelompok yang diberi perlakuan saline dan nalokson (Ara. 5D; tingkatkan latensi; latensi intromisi: saline 139.7 ± 40.3 vs naloxone 121.83 ± 42.55; latensi ejakulasi: saline 887.9 ± 70.0 vs naloxone 1050.8 ± 327.31). Hasil ini menunjukkan bahwa nalokson saja tidak cukup untuk mengubah perilaku seksual berikutnya, mirip dengan kurangnya efek nalokson saja pada plastisitas neuron dopamin VTA.

Kami berhipotesis bahwa pengobatan nalokson selama perolehan pengalaman seksual mengganggu ekspresi jangka panjang dari fasilitasi perilaku seksual yang diinduksi oleh pengalaman seks. Untuk menguji ini lebih lanjut, efek dari perawatan nalokson selama kawin diuji pada perilaku seksual berikutnya selama tes kawin akhir, yang dilakukan hanya 1 d setelah kawin terakhir (desain eksperimental; Ara. 5E). Ada efek utama yang signifikan dari hari kawin di gunung (Ara. 5F; F(2,20) = 19.780, p <0.001) dan latensi intromission (Tabel 2; F(2,20) = 19.041, p <0.001). Tidak ada efek utama yang signifikan hari ini pada latensi ejakulasi (Tabel 2; F(2,20) = 3.042, p = 0.070). Mirip dengan yang dijelaskan di atas, semua laki-laki (terlepas dari perawatan saline atau nalokson) menunjukkan fasilitasi perilaku seksual selama lima sesi pengalaman seksual yang ditunjukkan oleh latensi yang jauh lebih pendek untuk dipasang (Ara. 5F; garam: p = 0.002; nalokson: p = 0.018) dan intromission (Tabel 2; garam: p = 0.006; nalokson: p = 0.009) pada hari 5 dibandingkan dengan hari 1. Demikian pula, perilaku seksual yang difasilitasi ditunjukkan pada hari tes dibandingkan dengan hari 1 yang ditunjukkan oleh latensi yang lebih singkat untuk meningkat (Ara. 5F; garam: p = 0.001; nalokson: p = 0.020) dan intromission (Tabel 2; garam: p = 0.004; nalokson: p = 0.009). Lebih penting lagi, perawatan nalokson selama kawin tidak secara signifikan mempengaruhi fasilitasi perilaku seks yang diinduksi pengalaman seks ketika diuji 1 d setelah pengalaman seks, terlepas dari pengobatan nalokson pada hari tes perkawinan terakhir ini.

Akhirnya, kami menguji kemungkinan bahwa efek pelemahan nalokson terhadap ekspresi jangka panjang dari perilaku seksual yang difasilitasi adalah karena efek pemblokiran nalokson pada sifat-sifat bermanfaat perilaku seksual. Namun, nalokson yang diberikan segera sebelum kawin tidak mengubah pembentukan CPP untuk kawin (Ara. 5G), menunjukkan bahwa perawatan nalokson tidak mengubah imbalan seksual. Kedua kelompok yang diberi saline dan nalokson membentuk CPP yang signifikan untuk perilaku seksual seperti yang ditunjukkan oleh peningkatan waktu yang dihabiskan secara signifikan dalam ruang pasangan seks (Ara. 5H; garam: p = 0.038; nalokson: p = 0.002) selama post-test dibandingkan dengan pretest. Oleh karena itu, nalokson tidak memberikan efek yang merugikan pada pemeliharaan perilaku seksual yang difasilitasi dengan memblokir hadiah yang terkait dengan perilaku seksual.

Fasilitasi perilaku seksual tergantung pada tindakan EOP dalam VTA

Untuk mengkonfirmasi bahwa EOP bertindak secara khusus dalam VTA untuk mendorong fasilitasi jangka panjang dari perilaku seksual, desain eksperimental diuraikan dalam Gambar 3A diulangi dengan infus nalokson intra-VTA daripada injeksi sistemik. Hasil identik dengan administrasi sistemik yang dijelaskan di atas. Ada efek utama yang signifikan dari hari kawin pada semua parameter perilaku seks (Ara. 6A, tingkatkan latensi: F(2,33) = 4.494, p = 0.019; B, latensi intromisi: F(2,33) = 4.042, p = 0.027; C, latensi ejakulasi: F(2,33) = 5.309, p = 0.010) dan perawatan nalokson intra-VTA pada latensi untuk dipasang (F(1,33) = 7.345, p = 0.011) dan intromission (F(1,33) = 6.126, p = 0.019). Intra-VTA nalokson tidak mencegah fasilitasi perilaku seksual yang diinduksi pengalaman awal selama 5 d kawin, karena pejantan yang diobati dengan nalokson menunjukkan penurunan latensi untuk meningkat (Ara. 6A; p = 0.001), intromission (Ara. 6B; p <0.001), dan ejakulasi (Ara. 6C; p = 0.001) pada hari 5 dibandingkan dengan hari 1. Laki-laki yang diobati dengan nalokson tidak berbeda dengan laki-laki yang diberi saline pada hari kelima kawin di salah satu latensi. Perawatan nalokson intra-VTA, seperti pemberian sistemik, menyebabkan peningkatan secara signifikan (Ara. 6A; p <0.001) dan latensi intromission (Ara. 6B; p <0.001) pada hari kawin pertama dibandingkan dengan laki-laki yang diobati dengan garam, yang tidak diamati selama sesi kawin berikutnya (selama laki-laki yang diobati dengan nalokson dan garam tidak berbeda). Satu pengamatan tak terduga adalah bahwa dalam percobaan ini, laki-laki yang diobati dengan garam tidak menunjukkan fasilitasi pemasangan atau latensi intromisi yang signifikan secara statistik (seperti yang ditunjukkan dalam semua percobaan yang dijelaskan di atas), dan hanya latensi ejakulasi yang dipersingkat pada hari kelima dibandingkan dengan hari pertama. (garam: p = 0.001).

Gambar 6. 

Opioid endogen dalam VTA memediasi fasilitasi perilaku seksual yang diinduksi pengalaman dan pemeliharaan jangka panjangnya. Parameter perilaku seksual untuk pria yang diobati dengan saline (Sal, white bar, n = 8) atau NLX (bilah hitam, n = 6) dengan administrasi intra-VTA. Data yang ditampilkan adalah latensi untuk dipasang (A), intromission (B), dan ejakulasi (C) pada hari 1 dan 5 selama lima hari berturut-turut kawin. Selain itu, data ditampilkan untuk hari tes perkawinan terakhir, 7 d hari berikutnya 5 dengan tidak adanya injeksi salin atau nalokson. Data mewakili rata-rata ± SEM; + menunjukkan perbedaan yang signifikan antara hari 1 dan 5 dalam perawatan; * menunjukkan perbedaan yang signifikan antara hari tes dan hari 5 dalam perawatan; # menunjukkan perbedaan signifikan antara nalokson dan kelompok Sal dalam sehari. Gambar skematik dari bagian VTA koronal (H, −4.60; I, −5.00; J, −5.25 dari bregma) menunjukkan situs injeksi intra-VTA untuk semua hewan dalam Percobaan 5 (saline; putih; nalokson, hitam; Tidak terjawab, abu-abu), menggunakan gambar template dari Swanson Brain Maps (Swanson, 2004). Cannula bersifat bilateral, tetapi tempat injeksi diwakili secara sepihak untuk kemudahan presentasi. fr, Fasciculus retroflexus; ML, lemniskus Medial; SN, substantia nigra.

Perawatan naxolone intra-VTA memblokir pemeliharaan perilaku seksual yang difasilitasi yang diamati pada pria yang berpengalaman secara seksual, mirip dengan efek nalokson sistemik. Secara khusus, pada hari tes akhir laki-laki yang diobati nalokson memiliki latensi yang lebih lama untuk dipasang (Ara. 6A; p = 0.011), intromission (Ara. 6B; p = 0.010), dan ejakulasi (Ara. 6C; p = 0.015) dibandingkan dengan sesi perkawinan kelima dan dibandingkan dengan laki-laki yang diberi saline pada hari tes terakhir (Ara. 6A, p = 0.006; B, p = 0.008). Sebaliknya, hewan yang diberi perlakuan saline tidak berbeda dalam latensi untuk dipasang dan intromisi antara hari uji akhir dan hari 5 kawin. Efek ini khusus untuk pengiriman nalokson ke VTA, karena laki-laki dengan situs kanulasi di dekatnya tetapi tidak menargetkan VTA (Ara. 6D; n = 3) menunjukkan fasilitasi jangka panjang dari perilaku seksual yang mirip dengan kontrol yang diberi saline (ML, IL = 53 ± 6.245, EL = 389 ± 299.5 dan sangat berbeda dibandingkan dengan hewan nalokson intra-VTA pada hari tes perkawinan terakhir (ML, IL: p = 0.029; EL: p = 0.0395).

Diperlukan tindakan EOP untuk aktivasi saraf yang diinduksi isyarat yang dikaitkan dengan isyarat terkait seks

Berdasarkan temuan sejauh ini, kami berhipotesis bahwa aktivasi EOP di VTA selama pengalaman kawin dan pengurangan ukuran dopamin soma VTA berikutnya sangat penting untuk atribusi arti-penting insentif untuk mengawinkan rangsangan yang berhubungan dengan hadiah dan akibatnya, pemeliharaan fasilitasi yang diperlihatkan dari perilaku seksual. Untuk menguji hipotesis ini, efek memblokir reseptor opioid selama pengalaman kawin pada aktivitas saraf yang disebabkan oleh paparan selanjutnya pada isyarat kontekstual terkondisi yang memprediksi imbalan seksual (isyarat kontekstual terkait seks) diperiksa. Hewan yang naif secara seksual juga terpapar pada isyarat lingkungan, tetapi ini tidak terkait dengan pengalaman kawin sebelumnya, karenanya isyarat netral. Akhirnya, level dasar pERK ditentukan pada kelompok kontrol yang berpengalaman secara seksual dan naif yang tetap berada di kandang rumah dan tidak terpapar pada isyarat apa pun (-Tidak ada Cue). Mengonfirmasi dan memperluas temuan sebelumnya (Balfour et al., 2004), paparan isyarat kontekstual terkait dengan imbalan jenis kelamin sebelumnya secara signifikan meningkatkan ekspresi pERK pada laki-laki yang berpengalaman secara seksual di NAc (Ara. 7) dan mPFC (Ara. 8A – C), tetapi tidak menyebabkan aktivasi saraf di BLA (Ara. 8D) atau CPu (data tidak ditampilkan). Ada efek utama paparan isyarat pada inti NAc (F(1,12) = 12.1941, p = 0.004), ACA (F(1,12) = 5.541, p = 0.038), dan PL (F(1,12) = 5.241, p = 0.041), dan perawatan nalokson di dalam inti NAc (F(1,12) = 6.511, p = 0.025), ACA (F(1,12) = 15.242, p = 0.002), dan PL (F(1,12) = 7.336, p = 0.019). Ada interaksi yang signifikan dalam inti NAc (F(1,12) = 10.107, p = 0.008), ACA (F(1,12) = 16.060, p = 0.002), PL (F(1,12) = 8.235, p = 0.014), dan IL ((F(1,12) = 6.965, p = 0.022). Pertama, paparan isyarat yang berhubungan dengan perkawinan secara signifikan meningkatkan pERK pada hewan yang mengalami hubungan seksual yang diberi garam (Sal Sal + Isyarat) dibandingkan dengan kontrol yang tidak terpapar pada isyarat apa pun dan diambil dari kandang di rumah (Exp Sal-No Cue) pada inti NAc (Ara. 7A; p <0.001), dan subkawasan mPFC ACA (Ara. 8A; p = 0.001), PL (Ara. 8B; p = 0.003), dan IL (Ara. 8C; p = 0.029). Sebaliknya, pada hewan yang naif secara seksual yang diobati dengan saline, paparan isyarat kontekstual, yang tidak terkait dengan hadiah seksual, tidak menyebabkan pERK di salah satu area otak (Sal Na Na + Tanda isyarat dibandingkan dengan Na Na Sal Tanpa Tanda; Buah ara. 7, 8), menunjukkan bahwa induksi pERK khusus untuk paparan isyarat terkait pengalaman seksual. Selain itu, pengalaman seksual saja tidak mengubah ekspresi pERK dasar di salah satu daerah otak, karena tidak ada perbedaan antara kelompok yang diambil dari kandang di rumah, apakah naif atau pengalaman seksual, dan diobati dengan saline atau naloxone.

Gambar 7. 

Tindakan opioid endogen diperlukan untuk aktivasi saraf pada NAc yang diinduksi oleh isyarat terkait seks. Jumlah sel pERK-IR per mm2 dalam inti accumbens core (A) dan shell (B) pada hewan yang naif secara seksual (putih) dan berpengalaman (Exp; hitam) yang diobati dengan NLX sistemik atau salin (Sal) selama sesi kawin (Exp jantan) atau sesi penanganan (Jantan naif). Kelompok terpapar pada isyarat kontekstual (isyarat), yang isyarat terkait perkawinan pada laki-laki Exp dan isyarat netral pada hewan naif, atau diambil dari kandang rumah (No Cue; diindikasikan oleh kurangnya label isyarat). Data disajikan sebagai rata-rata ± SEM; * menunjukkan perbedaan yang signifikan dibandingkan dengan kontrol tanpa paparan isyarat yang dipajan saline (Naive Sal-No Cue dan Exp Sal-No Cue); # menunjukkan perbedaan yang signifikan dibandingkan dengan kelompok Exp yang terpajan Cue yang diobati Sal (Exp Sal ​​+ Cue). Gambar representatif sel pERK-IR per mm2 dalam inti NAc laki-laki yang berpengalaman secara seksual dengan Sal (C, D) atau NLX (E, F) yang diambil dari kandang rumah (No Cue, C, E), atau terkena isyarat kontekstual terkait perkawinan (Cue; D, F). N = 4 setiap grup kecuali Naive NLX (No Cue), n = 3. ac, komissure anterior. Bilah skala, 100 μm.

Gambar 8. 

Efek nalokson pada perkawinan ekspresi pERK yang diinduksi isyarat di wilayah target VTA lainnya. Jumlah sel pERK-IR per mm2 pada hewan yang naif secara seksual (putih) dan berpengalaman (Exp; hitam) yang diobati dengan NLX sistemik atau salin (Sal) selama sesi perkawinan dan terpapar pada isyarat kontekstual (Isyarat) atau kandang rumah (tanpa isyarat) di ACA (A), PL (B), IL (C), dan BLA (D). Data mewakili rata-rata ± SEM; * menunjukkan perbedaan yang signifikan dibandingkan dengan kontrol tanpa paparan isyarat yang dipajan saline (Naive Sal-No Cue dan Exp Sal-No Cue); # menunjukkan perbedaan yang signifikan dibandingkan dengan kontrol yang dipajan dengan isyarat yang terpajan Sal yang terpajan secara seksual (Naive Sal + Cue).

Untuk mendukung hipotesis kami, pengobatan nalokson selama pengalaman seksual secara signifikan melemahkan induksi pERK oleh isyarat terkait seks. Ekspresi pERK pada pria berpengalaman yang terpajan nalokson yang diobati (Exp NLX + Cue) tidak berbeda dari ekspresi pERK dasar dalam kelompok kontrol yang naif atau berpengalaman secara seksual yang diambil dari kandang rumah (Naive Sal-No Cue atau Naive NLX- Tanpa isyarat). Selain itu, ekspresi pERK pada laki-laki berpengalaman terpapar isyarat yang diobati nalokson (Exp NLX + Cue) secara signifikan lebih rendah dibandingkan dengan hewan berpengalaman yang terpajan dengan isyarat yang diperlakukan salin (Exp Sal ​​+ Cue) pada inti NAc (Ara. 7A; p = 0.002) dan subregion mPFC (Ara. 8A, ACA: p <0.001; B, PL: p = 0.002; C, IL: p = 0.015).

Dalam cangkang NAc, analisis ANOVA dua arah tidak menghasilkan efek yang signifikan secara statistik dari faktor pemaparan isyarat dan pengobatan nalokson. Namun, perbandingan berpasangan menunjukkan bahwa paparan isyarat memang menginduksi pERK pada kelompok yang berpengalaman secara seksual yang diberi salin (Exp SAL + Cue) dibandingkan dengan kelompok kontrol naif Saline yang tidak terpapar isyarat (Ara. 7B; SAL Naif-Tanpa Isyarat: p = 0.0163).

Diskusi

Penelitian saat ini menunjukkan bahwa EOP bertindak dalam VTA selama perilaku seksual, perilaku hadiah alami, menyebabkan pengurangan yang kuat tapi sementara dalam ukuran soma sel dopamin VTA. Pengurangan ukuran soma tidak diamati pada neuron non-dopamin VTA, atau pada neuron dopamin di substantia nigra terdekat, menunjukkan perubahan ini khusus untuk sel dopamin VTA. Plastisitas dopamin VTA ini tampak serupa dengan yang diinduksi oleh paparan opiat kronis (Sklair-Tavron et al., 1996; Russo et al., 2007; Mazei-Robison et al., 2011) dan menyebabkan toleransi yang serupa dengan imbalan opium (morfin) eksogen. Kami menunjukkan bahwa plastisitas dopamin VTA sangat penting untuk jangka panjang (pemeliharaan) tetapi tidak jangka pendek (pengembangan), penguatan perilaku seksual dan aktivitas saraf yang diinduksi oleh isyarat yang terkait dengan isyarat (pERK) di wilayah target VTA: NAc dan mPFC. Temuan ini menunjukkan peran plastisitas dopamin VTA dalam ekspresi jangka panjang dari arti-penting insentif dari tanda prediksi hadiah alami atau memori hadiah.

Telah didokumentasikan dengan baik bahwa pengalaman seksual menghasilkan fasilitasi perilaku seksual berikutnya, termasuk onset yang lebih cepat untuk inisiasi perkawinan dan peningkatan kinerja (Balfour et al., 2004; Pitchers et al., 2010a,b, 2012). Fasilitasi atau penguatan perilaku seksual ini dipertahankan setidaknya selama 28 d setelah kawin (Pitchers et al., 2012). Selain itu, telah ditunjukkan bahwa perilaku seks dan isyarat terkondisi yang memprediksi imbalan seks menyebabkan internalisasi MOR dalam VTA dan menginduksi aktivasi neuron di seluruh sistem mesolimbik, termasuk dalam VTA (neuron dopamin dan nondopamin), NAc, PFC, dan BLA (Balfour et al., 2004, 2006). Telah terbukti bahwa neuron dopamin VTA memainkan peran penting dalam pembelajaran dan atribusi arti-penting insentif rangsangan terkait hadiah (Berridge dan Robinson, 1998; Berridge dkk., 2009; Flagel et al., 2011) dan sangat penting untuk prediksi hadiah (Schultz, 2010). Temuan saat ini memperluas pengetahuan kami saat ini dengan menunjukkan bahwa neuroplastisitas VTA yang diinduksi oleh hadiah sangat penting untuk fungsi-fungsi ini, dan bergantung pada aktivasi MOR oleh EOP di VTA. Saat ini tidak diketahui EOP mana yang merupakan ligan MOR yang bertindak dalam VTA selama perilaku seksual pria. Meskipun baik β endorphin dan enkephalin telah terlibat dalam motivasi insentif untuk penguat makanan (Hayward et al., 2002), ini masih harus ditetapkan untuk perilaku seksual pria. Kami sebelumnya telah menunjukkan bahwa neuron β-endorphin tidak diaktifkan selama kawin, juga tidak ada peningkatan mRNA POMC; dengan demikian, menunjukkan bahwa β endorphin mungkin bukan EOP kritis yang bekerja dalam VTA selama kawin (Davis et al., 2007). Plastisitas dopamin VTA ini penting untuk aktivitas saraf di mPFC, NAc, dan VTA setelah paparan isyarat lingkungan yang memprediksi hadiah seksual. Selain itu, plastisitas dopamin VTA sangat penting untuk ekspresi jangka panjang peningkatan inisiasi dan kinerja perilaku seksual. Sebaliknya, VTA neuroplastisitas yang disebabkan oleh pengalaman seksual tidak diperlukan untuk respon hedonis sebagai hadiah seks (ditentukan oleh CPP) dan fasilitasi jangka pendek dari motivasi dan kinerja seksual (selama pengalaman seks atau 1 d kemudian) tetap utuh meskipun blokade MOR selama perkawinan (Mehrara dan Baum, 1990). Sebaliknya, data menunjukkan bahwa VTA dopamin neuroplastisitas memediasi jangka panjang (7 d setelah pengalaman seks terakhir; Pitchers et al., 2012) ungkapan "keinginan" imbalan seks dan respons termotivasi yang meningkat terhadap isyarat kawin (Miller dan Baum, 1987; Berridge dan Robinson, 1998).

Hewan yang berpengalaman secara seksual menunjukkan toleransi silang terhadap imbalan morfin, mirip dengan efek dari roda yang berjalan pada tikus, perilaku lain yang bermanfaat, efek yang diblokir dengan pengobatan nalokson (Lett et al., 2001, 2002) dan bertekad untuk bergantung pada plastisitas sel dopamin VTA (temuan saat ini). Mirip dengan imbalan alami, paparan berulang pada morfin opiat atau heroin menghasilkan pengurangan sementara ukuran VTA dopamin soma (Sklair-Tavron et al., 1996; Spiga et al., 2003; Russo et al., 2007; Mazei-Robison et al., 2011). Selain itu, paparan opiat dengan periode penarikan pendek menyebabkan toleransi hadiah, seperti yang ditimbulkan oleh dosis obat yang lebih tinggi yang diperlukan untuk membentuk asosiasi hadiah (Shippenberg et al., 1987; Russo et al., 2007), dan menyebabkan hewan yang dikelola sendiri meningkatkan asupan obat (Ahmed et al., 2000; Walker et al., 2003). Oleh karena itu, EOP dan opiat bertindak pada substrat saraf umum untuk menginduksi toleransi hadiah selama penarikan awal, yang mungkin mencerminkan mekanisme homeostatis kompensasi untuk menangkal stimulasi dengan paparan berulang (Koob dan Le Moal, 2005). Sebaliknya, selama pantang obat opiat jangka panjang, toleransi dibalikkan ke sensitivitas terhadap sifat-sifat bermanfaat terhadap obat (Harris dan Aston-Jones, 2003; Aston-Jones dan Harris, 2004; Harris dan Gewirtz, 2004). Menariknya, pengalaman seksual yang diikuti oleh periode pantang seks 7-28 d telah ditemukan menyebabkan sensitisasi silang untuk hadiah psikostimulan (Pitchers et al., 2010a), yang tergantung pada ekspresi deltaFosB yang diinduksi kawin dan aktivasi reseptor dopamin 1 dalam NAc (Pitchers et al., 2013). Oleh karena itu, pengalaman penghargaan seksual menyebabkan toleransi hadiah opiat simultan dan kepekaan penghargaan psikostimulan, meskipun periode pantang seks yang lebih lama pada toleransi hadiah morfin masih harus diuji. Kami berpendapat bahwa efek yang berlawanan ini pada pemberian obat dapat dimediasi oleh berbagai bentuk plastisitas saraf di berbagai area sistem mesolimbik: aksi VTA EOP dan plastisitas dopamin memediasi toleransi hadiah opiat (penelitian saat ini), sedangkan ekspresi NAc deltaFosB mengendalikan kepekaan psikostimulan. (Pitchers et al., 2013). Kedua peristiwa ini dapat berkontribusi pada peningkatan konsumsi obat (Ahmed dan Koob, 1998, 1999; Ahmed et al., 2000, 2002, 2003; Walker et al., 2003).

Mekanisme molekuler di mana EOP mempengaruhi neuron dopamin VTA selama perilaku imbalan alami tetap tidak diketahui. Jalur IRS2-Akt-mTORC2 adalah mediator utama penurunan ukuran soma dalam VTA yang disebabkan oleh morfin berulang (Jaworski et al., 2005; Russo et al., 2007; Mazei-Robison et al., 2011). Pemberian morfin yang diulang menyebabkan perubahan ukuran neuron dopamin dalam VTA dapat dicegah dengan infus intra-VTA faktor neurotropik yang diturunkan dari otak (BDNF; Sklair-Tavron dan Nestler, 1995). BDNF mengaktifkan jalur ini melalui pensinyalan TrkB (Russo et al., 2007), reseptor kinase dengan afinitas tinggi untuk BDNF dan bagian dari jalur IRS2-Akt (Seroogy and Gall, 1993; Numan dan Seroogy, 1999), dan diekspresikan pada neuron dopamin dan GABA di VTA. Downregulasi berbagai komponen jalur IRS2-Akt menggunakan teknologi transfer gen vektor virus meniru efek dari paparan opiat kronis. Lebih lanjut, efek dari paparan opiat dapat diselamatkan dengan mengembalikan jalur pensinyalan ini (Russo et al., 2007) dan ekspresi berlebih dari komponen mTORC2 mencegah pengurangan dopamin soma VTA yang diinduksi morfin (Mazei-Robison et al., 2011). Oleh karena itu, penelitian sebelumnya yang menyelidiki efek opiat kronis pada ukuran VTA dopamin soma menunjukkan bahwa regulasi regulasi IRS2-Akt-mTOR yang diinduksi morfin cukup dan diperlukan untuk efek ini (Mazei-Robison dan Nestler, 2012). Dengan demikian, tergoda untuk berspekulasi bahwa efek dari pengalaman seksual pada neuroplastisitas dopamin VTA juga dimediasi oleh BDNF dan jalur IRS2-Akt-mTORC2.

Sebagai kesimpulan, penelitian saat ini menunjukkan bahwa neuroplastisitas VTA disebabkan oleh pengalaman dengan perilaku penghargaan alami, khususnya oleh perilaku seksual pria yang berulang. Secara khusus, EOP bertindak dalam VTA untuk mengurangi ukuran dopamin soma, yang dihipotesiskan terkait dengan peningkatan rangsangan saraf dan output dopamin yang lebih sedikit yang menghasilkan sistem hipodopaminergik, dan mengubah sistem mesolimbik yang berfungsi sebagai respons terhadap isyarat yang bersifat prediksi penghargaan seksual. Selain itu, neuroplastisitas VTA sangat penting untuk motivasi insentif dan memori hadiah, tetapi tidak untuk dampak hedonis perilaku seksual. Akhirnya, neuroplastisitas VTA yang disebabkan oleh perilaku imbalan alami yang diikuti oleh periode singkat pemberian hadiah tidak mempengaruhi imbalan opiat dan karenanya dapat memengaruhi kerentanan terhadap pengembangan kecanduan narkoba.

Catatan kaki

  • Menerima 12 Januari, 2014.
  • Revisi diterima Mei 17, 2014.
  • Diterima 20 Mei, 2014.

  • Penelitian ini didukung oleh dana dari Lembaga Penelitian Kesehatan Kanada untuk LMC dan Dewan Riset Ilmu Pengetahuan Alam dan Rekayasa untuk KKP

  • Para penulis menyatakan tidak ada kepentingan finansial yang bersaing.

  • Korespondensi harus ditujukan kepada Dr Lique M. Coolen, Pusat Medis Universitas Mississippi, Departemen Fisiologi dan Biofisika, 2500 North State Street, Jackson, MS 39216-4505. [email dilindungi]

Referensi

  1. ↵
    1. Agmo A

    (1997) Perilaku seksual tikus jantan. Brain Res Brain Res Protoc 1: 203-209.

  2. ↵
    1. Ahmed SH,
    2. Koob GF

    (1998) Transisi dari asupan obat sedang ke berlebihan: perubahan set point hedonis. Ilmu 282: 298-300.

  3. ↵
    1. Ahmed SH,
    2. Koob GF

    (1999) Peningkatan tahan lama pada titik yang ditentukan untuk pemberian sendiri kokain setelah eskalasi pada tikus. Psychopharmacology 146: 303-312.

  4. ↵
    1. Ahmed SH,
    2. Walker JR,
    3. Koob GF

    (2000) Peningkatan motivasi untuk mengonsumsi heroin secara terus-menerus pada tikus dengan riwayat eskalasi obat. Neuropsychopharmacology 22: 413-421.

  5. ↵
    1. Ahmed SH,
    2. Kenny PJ,
    3. Koob GF,
    4. Markou A

    (2002) Bukti neurobiologis untuk allostasis hedonis terkait dengan peningkatan penggunaan kokain. Nat Neurosci 5: 625-626.

  6. ↵
    1. Ahmed SH,
    2. Lin D,
    3. Koob GF,
    4. Parsons LH

    (2003) Eskalasi pemberian sendiri kokain tidak tergantung pada nukleus yang diinduksi kokain yang berubah-ubah sehingga meningkatkan kadar dopamin. J Neurochem 86: 102-113.

  7. ↵
    1. Aston-Jones G,
    2. Harris GC

    (2004) Substrat otak untuk peningkatan pencarian obat selama penarikan berlarut-larut. Neurofarmakologi 47: 167-179.

  8. ↵
    1. Balfour ME,
    2. Yu L,
    3. Kencangkan LM

    (2004) Perilaku seksual dan isyarat lingkungan terkait seks mengaktifkan sistem mesolimbik pada tikus jantan. Neuropsychopharmacology 29: 718-730.

  9. ↵
    1. Balfour ME,
    2. Brown JL,
    3. Yu L,
    4. Kencangkan LM

    (2006) Kontribusi potensial dari eferen dari korteks prefrontal medial ke aktivasi saraf setelah perilaku seksual pada tikus jantan. Neuroscience 137: 1259-1276.

  10. ↵
    1. Beitner-Johnson D,
    2. Guitart X,
    3. Nestler EJ

    (1992) Protein neurofilamen dan sistem dopamin mesolimbik: regulasi umum oleh morfin kronis dan kokain kronis di area tegmental ventral tikus. J Neurosci 12: 2165-2176.

  11. ↵
    1. Berridge KC,
    2. Robinson TE

    (1998) Apa peran dopamin dalam hadiah: dampak hedonis, pembelajaran hadiah, atau arti-penting insentif? Brain Res Brain Res Rev 28: 309-369.

  12. ↵
    1. Berridge KC,
    2. Robinson TE,
    3. Aldridge JW

    (2009) Membedah komponen hadiah: "suka", "keinginan", dan belajar. Curr Opin Pharmacol 9: 65-73.

  13. ↵
    1. Blum K,
    2. Werner T,
    3. Carnes S,
    4. Carnes P,
    5. Bowirrat A,
    6. Giordano J,
    7. Oscar-Berman M,
    8. Emas M

    (2012) Jenis kelamin, obat-obatan, dan rock 'n' roll: berhipotesis aktivasi mesolimbik yang umum sebagai fungsi dari polimorfisme gen hadiah. J Obat Psikoaktif 44: 38-55.

  14. ↵
    1. Chu NN,
    2. Zuo YF,
    3. Meng L,
    4. Lee DY,
    5. Han JS,
    6. Cui CL

    (2007) Stimulasi listrik perifer membalikkan pengurangan ukuran sel dan meningkatkan tingkat BDNF di daerah tegmental ventral pada tikus morfin yang diobati secara kronis. Otak Res 1182: 90-98.

  15. ↵
    1. Davis BA,
    2. Fitzgerald ME,
    3. Brown JL,
    4. Amstalden KA,
    5. Kencangkan LM

    (2007) Aktivasi neuron POMC selama rangsangan umum tetapi tidak perilaku seksual pada tikus jantan. Behav Neurosci 121: 1012-1022.

  16. ↵
    1. Fiorino DF,
    2. Coury A,
    3. Phillips AG

    (1997) Perubahan dinamis pada nukleus accumbens efflux selama efek Coolidge pada tikus jantan. J Neurosci 17: 4849-4855.

  17. ↵
    1. Flagel SB,
    2. Clark JJ,
    3. Robinson TE,
    4. Mayo L,
    5. Czuj A,
    6. Willuhn I,
    7. Akers CA,
    8. Clinton SM,
    9. Phillips PE,
    10. Akil H

    (2011) Peran selektif untuk dopamin dalam pembelajaran stimulus-hadiah. Alam 469: 53-57.

  18. ↵
    1. Frohmader KS,
    2. Pitchers KK,
    3. Balfour ME,
    4. Kencangkan LM

    (2010a) Mencampur kesenangan: ulasan tentang efek obat pada perilaku seks pada manusia dan model hewan. Horm Behav 58: 149-162.

  19. ↵
    1. Frohmader KS,
    2. Wiskerke J,
    3. RA yang bijaksana,
    4. Lehman MN,
    5. Kencangkan LM

    (2010b) Metamfetamin bekerja pada subpopulasi neuron yang mengatur perilaku seksual pada tikus jantan. Neuroscience 166: 771-784.

  20. ↵
    1. Harris AC,
    2. Gewirtz JC

    (2004) Peningkatan mengejutkan selama penarikan dari morfin akut: model penarikan opiat dan kecemasan. Psychopharmacology 171: 140-147.

  21. ↵
    1. Harris GC,
    2. Aston-Jones G

    (2003) Perubahan motivasi dan pembelajaran setelah penghentian opiat: bukti untuk disregulasi berkepanjangan dari pemrosesan hadiah. Neuropsychopharmacology 28: 865-871.

  22. ↵
    1. Hayward MD,
    2. Pintar JE,
    3. MJ rendah

    (2002) Defisit imbalan selektif pada tikus yang kekurangan beta-endorphin dan enkephalin. J Neurosci 22: 8251-8258.

  23. ↵
    1. Hoebel BG,
    2. Avena NM,
    3. Sungguh-sungguh AKU,
    4. Rada P

    (2009) Kecanduan alami: model perilaku dan rangkaian berdasarkan kecanduan gula pada tikus. J Addict Med 3: 33-41.

  24. ↵
    1. Hyman SE,
    2. Malenka RC,
    3. Nestler EJ

    (2006) Mekanisme kecanduan saraf: peran pembelajaran dan memori yang berhubungan dengan hadiah. Annu Rev Neurosci 29: 565-598.

  25. ↵
    1. Ikemoto S,
    2. Kohl RR,
    3. McBride WJ

    (1997) GABA (A) blokade reseptor di daerah tegmental ventral anterior meningkatkan kadar dopamin ekstraseluler dalam nukleus accumbens tikus. J Neurochem 69: 137-143.

  26. ↵
    1. Jaworski J,
    2. Spangler S,
    3. Seeburg DP,
    4. Hoogenraad CC,
    5. Sheng M

    (2005) Kontrol arborisasi dendritik oleh target phosphoinositide-3′-kinase-Akt-mamalia dari jalur rapamycin. J Neurosci 25: 11300-11312.

  27. ↵
    1. Johnson SW,
    2. RA Utara

    (1992) Opioid merangsang neuron dopamin dengan hiperpolarisasi interneuron lokal. J Neurosci 12: 483-488.

  28. ↵
    1. Klitenick MA,
    2. DeWitte P,
    3. Kalivas PW

    (1992) Peraturan pelepasan dopamin somatodendritic di daerah tegmental ventral oleh opioid dan GABA: studi mikrodialisis in vivo. J Neurosci 12: 2623-2632.

  29. ↵
    1. Koob GF,
    2. Le Moal M

    (2005) Plastisitas dari neurocircuitry imbalan dan "sisi gelap" dari kecanduan narkoba. Nat Neurosci 8: 1442-1444.

  30. ↵
    1. Lennette DA

    (1978) Media pemasangan yang ditingkatkan untuk mikroskopi imunofluoresensi. Am J Clin Pathol 69: 647-648.

  31. ↵
    1. Lett BT,
    2. Berikan VL,
    3. Koh MT

    (2001) Nalokson melemahkan preferensi tempat yang dikondisikan yang disebabkan oleh roda yang berjalan pada tikus. Physiol Behav 72: 355-358.

  32. ↵
    1. Lett BT,
    2. Berikan VL,
    3. Koh MT,
    4. Flynn G

    (2002) Pengalaman sebelumnya dengan roda berjalan menghasilkan toleransi silang terhadap efek morfin yang memuaskan. Pharmacol Biochem Behav 72: 101-105.

  33. ↵
    1. Matthews RT,
    2. Jerman DC

    (1984) Bukti elektrofisiologis untuk eksitasi neuron dopamin area ventral tikusmentmental oleh morfin. Neuroscience 11: 617-625.

  34. ↵
    1. Mazei-Robison MS,
    2. Koo JW,
    3. Friedman AK,
    4. Lansink CS,
    5. Robison AJ,
    6. Vinish M,
    7. Krishnan V,
    8. Kim S,
    9. Siuta MA,
    10. Galli A,
    11. Niswender KD,
    12. Appasani R,
    13. Horvath MC,
    14. Neve RL,
    15. Worley PF,
    16. Snyder SH,
    17. Hurd YL,
    18. Cheer JF,
    19. Han MH,
    20. Russo SJ,
    21. et al.

    (2011) Peran untuk pensinyalan mTOR dan aktivitas neuronal dalam adaptasi yang diinduksi morfin dalam neuron dmentamin daerah tegmental ventral. Neuron 72: 977-990.

  35. ↵
    1. Mazei-Robison MS,
    2. Nestler EJ

    (2012) Plastisitas molekul dan seluler yang diinduksi opiat dari daerah tegmental ventral dan neuron katekolamin locus coeruleus. Cold Spring Harb Perspect Med 2: a012070.

  36. ↵
    1. Mehrara BJ,
    2. Baum MJ

    (1990) Nalokson mengganggu ekspresi tetapi tidak diakuisisi oleh tikus jantan dari respons preferensi tempat yang dikondisikan untuk betina yang suka berahi. Psychopharmacology 101: 118-125.

  37. ↵
    1. Meisel RL,
    2. Mullins AJ

    (2006) Pengalaman seksual pada tikus betina: mekanisme seluler dan konsekuensi fungsional. Otak Res 1126: 56-65.

  38. ↵
    1. Miller RL,
    2. Baum MJ

    (1987) Nalokson menghambat pilihan tempat kawin dan terkondisikan untuk betina ester pada tikus jantan segera setelah pengebirian. Pharmacol Biochem Behav 26: 781-789.

  39. ↵
    1. Mitchell JB,
    2. Stewart J

    (1990) Fasilitasi perilaku seksual pada tikus jantan yang terkait dengan suntikan opiat intra-VTA. Pharmacol Biochem Behav 35: 643-650.

  40. ↵
    1. Murphy LO,
    2. Blenis J

    (2006) Kekhususan sinyal MAPK: tempat yang tepat pada waktu yang tepat. Tren Biochem Sci 31: 268-275.

  41. ↵
    1. Nestler EJ

    (2012) Mekanisme transkripsi kecanduan narkoba. Klinik Psychopharmacol Neurosci 10: 136-143.

  42. ↵
  • ↵
    1. Paxinos G,
    2. Watson C

    (2013) Otak tikus dalam koordinat stereotaxic (Academic, Boston), Ed 7.

  • ↵
    1. Pitchers KK,
    2. Balfour ME,
    3. Lehman MN,
    4. Richtand NM,
    5. Yu L,
    6. Kencangkan LM

    (2010a) Neuroplastisitas dalam sistem mesolimbik yang diinduksi oleh hadiah alami dan hadiah pantang berikutnya. Psikiatri Biol 67: 872-879.

  • ↵
    1. Pitchers KK,
    2. Frohmader KS,
    3. Vialou V,
    4. Mouzon E,
    5. Nestler EJ,
    6. Lehman MN,
    7. Kencangkan LM

    (2010b) DeltaFosB dalam nucleus accumbens sangat penting untuk memperkuat efek dari imbalan seksual. Gen Otak Behav 9: 831-840.

  • ↵
    1. Pitchers KK,
    2. Schmid S,
    3. Di Sebastiano AR,
    4. Wang X,
    5. Laviolette SR,
    6. Lehman MN,
    7. Kencangkan LM

    (2012) Pengalaman hadiah alami mengubah distribusi dan fungsi reseptor AMPA dan NMDA di nucleus accumbens. PLoS One 7: e34700.

  • ↵
    1. Pitchers KK,
    2. Vialou V,
    3. Nestler EJ,
    4. Laviolette SR,
    5. Lehman MN,
    6. Kencangkan LM

    (2013) Imbalan alami dan obat-obatan bekerja pada mekanisme plastisitas saraf umum dengan DeltaFosB sebagai mediator utama. J Neurosci 33: 3434-3442.

  • ↵
    1. Roux PP,
    2. Blenis J

    (2004) ERK dan protein kinase teraktivasi pAPNUMX MAPK: keluarga protein kinase dengan beragam fungsi biologis. Microbiol Mol Biol Rev 68: 320-344.

  • ↵
    1. Russo SJ,
    2. Bolanos CA,
    3. Theobald DE,
    4. DeCarolis NA,
    5. Renthal W,
    6. Kumar A,
    7. Winstanley CA,
    8. Renthal NE,
    9. Wiley MD,
    10. DW sendiri,
    11. Russell DS,
    12. Neve RL,
    13. Eisch AJ,
    14. Nestler EJ

    (2007) Jalur IRS2-Akt di neuron dopamin otak tengah mengatur respons perilaku dan seluler terhadap opiat. Nat Neurosci 10: 93-99.

  • ↵
    1. Schultz W

    (2010) Beragam fungsi neuron dopamin. F1000 Biol Rep 2: 2.

  • ↵
    1. KB Seroogy,
    2. Empedu CM

    (1993) Ekspresi neurotrofin oleh neuron dopaminergik otak tengah. Exp Neurol 124: 119-128.

  • ↵
    1. Shippenberg TS,
    2. Bals-Kubik R,
    3. Herz A

    (1987) Sifat motivasi opioid: bukti bahwa aktivasi reseptor delta memediasi proses penguatan. Otak Res 436: 234-239.

  • ↵
    1. Sklair-Tavron L,
    2. Nestler EJ

    (1995) Efek berlawanan dari morfin dan neurotrofin, NT-3, NT-4, dan BDNF, pada locus coeruleus neuron in vitro. Otak Res 702: 117-125.

  • ↵
    1. Sklair-Tavron L,
    2. Shi WX,
    3. Lane SB,
    4. Harris HW,
    5. Bunney BS,
    6. Nestler EJ

    (1996) Morfin kronis menginduksi perubahan yang terlihat pada morfologi neuron dopamin mesolimbik. Proc Natl Acad Sci USA 93: 11202-11207.

  • ↵
    1. Spiga S,
    2. Serra GP,
    3. Puddu MC,
    4. Foddai M,
    5. Diana M

    (2003) Kelainan yang disebabkan oleh penarikan morfin dalam VTA: mikroskop pemindaian laser confocal. Eur J Neurosci 17: 605-612.

  • ↵
    1. Swanson LW

    (2004) Peta otak: struktur otak tikus (Akademik, San Diego), Ed 3.

  • ↵
    1. Tenk CM,
    2. Wilson H,
    3. Zhang Q,
    4. Pitchers KK,
    5. Kencangkan LM

    (2009) Hadiah seksual pada tikus jantan: efek pengalaman seksual pada preferensi tempat yang terkait dengan ejakulasi dan intromisi. Horm Behav 55: 93-97.

  • ↵
    1. Tzschentke TM

    (2007) Mengukur imbalan dengan paradigma preferensi tempat yang dikondisikan (CPP): pembaruan dekade terakhir. Addict Biol 12: 227-462.

  • ↵
    1. van Furth WR,
    2. van Ree JM

    (1996) Motivasi seksual: keterlibatan opioid endogen di daerah ventral tegmental. Otak Res 729: 20-28.

  • ↵
    1. van Furth WR,
    2. Wolterink G,
    3. van Ree JM

    (1995) Pengaturan perilaku seksual maskulin: keterlibatan opioid otak dan dopamin. Brain Res Brain Res Rev 21: 162-184.

  • ↵
    1. Walker JR,
    2. Chen SA,
    3. Moffitt H,
    4. Inturrisi CE,
    5. Koob GF

    (2003) Paparan opioid kronis menghasilkan peningkatan pemberian sendiri heroin pada tikus. Pharmacol Biochem Behav 75: 349-354.

  • ↵
    1. KA muda,
    2. Gobrogge KL,
    3. Liu Y,
    4. Wang Z

    (2011) Neurobiologi ikatan pasangan: wawasan dari tikus monogami sosial. Neuroendocrinol depan 32: 53-69.

    •