Uelewaji na usambazaji wa Dopamini husababisha kubadilika kwa kasi katika kiini cha panya accumbens baada ya kujiondoa kutoka kwa utawala wa kibinafsi wa cocaine. (2010)

Kuingiliana kwa protini

Njia hii imeelezewa kwa kina hapo awali (Boudreau na Wolf, 2005; Ferrario et al., 2010). Panya zilikatishwa, akili zao ziliondolewa haraka, na sehemu nzima ya NAc (au msingi na subcrions ya ganda) ilitengwa kwenye barafu kutoka sehemu ya 2mm ya kikoroli iliyopatikana kwa kutumia tumbo ya ubongo. Vidonda vya NAC nzima vilikatwa mara moja kuwa vipande vya 400μm kwa kutumia kicheko cha tishu cha McIllwain (Vibratome, St. Louis, MO), wakati sehemu ndogo za msingi na ganda zilichoshwa kwa mkono kwa kutumia scalpel. Tissue iliongezewa kwa zilizopo za Eppendorf zilizokuwa na baridi ya bandia CSF iliyochapwa na 2 mM bis (sulfosuccinimidyl) suberate (BS³; Pierce Biotechnology, Rockford, IL). Mwitikio wa kuingiliana uliruhusiwa kuendelea kwa dakika ya 30 saa 4 ° C na uchochezi mpole, na kisha kusitishwa na kuongeza ya 100mM glycine (10 min at 4 ° C). Zabuni ilibadilishwa na kupunguka kwa kifupi, ikasimamishwa tena kwenye buffer ya barafu ya baridi-iliyo na protini na inhibitors za phosphatase, sonciated kwa 5 sec, na centrifuged tena. Vipande vya supernatant vilihifadhiwa kwa -80 ° C hadi kuchambuliwa na blotting Western.

Mchanganuo wa blot wa Magharibi wa DAR kwenye tishu zilizoganda

Sampuli (20-30μg jumla ya protini / lysate) zilitengwa kwa 4-15% Tris-HCl gels (Biorad, Hercules, CA). Protini zilihamishiwa kwenye membrane ya fluoride ya polyvinylidene kwa chanjo ya kutumia kila wakati (1.15mA) kwa 1.5 h. Coil ya baridi ilitumiwa kuzuia kupokanzwa kupita kiasi. Uhamishaji kamili wa hesabu za uzito mkubwa wa Masi ulithibitishwa na kuweka taa baada ya kuhamishwa na Coomassie bluu. Kwa kuongezea, tulithibitisha kwamba protini za DAR zilizogawanywa hazikuonekana kwenye gombo la kuhifadhi (data iliyoonyeshwa). Baada ya kuhamishwa, utando ulioshwa kwenye ddH₂O, iliyokaushwa na hewa kwa 1 hr kwa joto la kawaida (RT), iliyosafishwa tena na 100% MeOH, iliyosafishwa katika 1x Tris buffered saline (TBS) na kuzamishwa katika 0.1M NaOH, pH 10 kwa 15 min kwa RT. Halafu, walioshwa kwa TBS, wamefungiwa na 3% Bovine Serum Albumin (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) katika TBS-Tween-20 (TBS-T), pH 7.4, kwa 1 hr huko RT, na ilichomwa mara moja. kwa 4 ° C na antibodies inayotambua D1 DAR (1: 1000; Millipore; Cat # AB1765P), D2 DAR (1: 1000; Millipore, Billercia, CA; Cat # AB5084P), and D3 DARXNNX; XXUMN DXXNN; XXUMX DARXNN; XXUMUM DPN; Paka # AB1P). D1000 na D1786 DARs hazikuchambuliwa kwa sababu ya ukosefu wa antibodies kugundua receptors zote zilizoingiliana na za ndani. Ikumbukwe kwamba kura za antipar za DAR zilizotumiwa katika majaribio haya zilinunuliwa katika 4-5; kura nyingi za antibodies hizi (2005-06) zinaonyesha muundo tofauti wa banding ambao haujabadilishwa kwa tishu kutoka kwa panya wa DAR Knout (uchunguzi uliochapishwa). Baada ya kutokwa kwa maji mwilini ya msingi, membrane zilioshwa na suluhisho la TBS-T, lilipatikana kwa dakika ya 2009 na IgP-iliyounganishwa kupambana na sungura IgG au anti-panya IgG (10: 60; Upendeleo wa Baiolojia, Ziwa Placid, NY), likanawa na TBS- T, iliyotiwa mafuta na ddH₂O, na kuzamishwa katika chemiluminescence kugundua substrate (Amersham GE, Piscataway, NJ). Baada ya bloti kutengenezwa, picha zilitekwa na Programu ya Imea Doc Imaging (Bio-Rad). Ugumu wa safu ya uso na bendi za ndani zimedhamiriwa kwa kutumia programu ya Wingi (Bio-Rad). Maadili ya viwango, kiwango cha ndani na kiwango cha jumla cha proteni (uso + wa ndani) kiliwekwa sawa ili jumla ya protini katika njia iliyoamuliwa kutumia Ponceau S (Sigma-Aldrich) na kuchambuliwa na JumlaLab (Nonlinear Dynamics, Newcastle, UK). Uwekaji wa uso / usawa wa ndani haukuhitaji kurekebishwa, kwa sababu maadili yote mawili yamedhamiriwa kwa njia hiyo hiyo. Kuchunguza uboreshaji wa antibody, masomo ya preabsorption yalifanywa kwa antibodies za DAR na peptide inayotumiwa kutengeneza kila antijeni. D1, D2, au D3 DAR antibody ilichanganywa na mkusanyiko wa ziada wa 10-peptide katika 500μl ya TBS, iliyochanganywa kwa 4 hrs saa 4 ° C, iliyoongezwa kwa kiasi cha mwisho cha 20ml, iliongezwa kwenye membrane, na iliongezeka usiku. 4 ° C.

D1 DARs

Hakuna tofauti kubwa kati ya cocaine na vikundi vya saline ilipatikana kwenye WD45. Walakini, athari za kujiendesha kwa kokaini zilidhihirika kwenye WD1. Uchambuzi wa NAc nzima umeonyesha kiwango cha juu zaidi cha eneo la D1 DAR / uingiliano wa ndani katika kundi la WD1-Coc ukilinganisha na vikundi ambavyo vilijisajili mwenyewe (Kielelezo 2a). Hii ilitokana na kuongezeka kwa usawa kwa uso wa D1 DARs pamoja na kupungua kwa kiwango cha kawaida kwa D1 DARs (hakuna athari hizi mbili za mwisho zilikuwa na umuhimu wa takwimu), kwa kukosekana kwa mabadiliko yoyote katika viwango vya D1 DAR (uso + wa ndani) (Kielelezo 2a). Ndani ya msingi wa NAc, hakuna athari kubwa iliyopatikana kwa kipimo chochote cha D1 DAR (Kielelezo 2b). Walakini, ganda la NAc lilionyesha mabadiliko ambayo yalikuwa sawa na yale yaliyotazamwa katika NAc nzima lakini nguvu zaidi (Kielelezo 2c). Uwiano / intracellular D1 DAR iliongezeka katika kundi la WD1-Coc kutokana na ongezeko kubwa la kujieleza kwa D1 DAR. Viwango vya ndani vilikuwa havibadilishwa, lakini kulikuwa na mwelekeo kuelekea kuongezeka kwa viwango vya D1 DAR. Kwa muhtasari, sehemu kubwa ya protini ya D1 DAR ilionyeshwa uso kwenye ganda la NAc la panya za WD1-Coc ikilinganishwa na panya za WD1-Sal. Ugawanyaji wa D1 DAR ulirudi katika hali ya kudhibiti baada ya siku za 45 za kujiondoa kutoka kwa ujasusi wa cocaine.

Mtini. 2

D1 DAR ya uso ya uso iliongezeka kwenye ganda la NAc baada ya siku ya 1 ya kujiondoa kutoka kwa serikali ya kujiendesha ya cocaine

D2 DARs

Katika NAc nzima, athari kuu iliyozingatiwa ilipunguzwa kujieleza kwa D2 DAR katika panya ambayo cocaine iliyojiendesha yenyewe ikilinganishwa na udhibiti wa chumvi (Kielelezo 3a). Hii ilitamkwa zaidi kwenye WD45, wakati kupungua kulizingatiwa kwenye bendi ya uso, bendi zote tatu za ndani (~ 55, 75 na 100kDa), na kwa jumla viwango vya D2 DAR ikilinganishwa na udhibiti wa saline. Uso / intracellular D2 DAR uwiano ulikuwa kidogo lakini uliongezeka zaidi katika kundi la WD45-Coc, kwa sababu ya kupungua zaidi kwa kiwango cha ndani kuliko uso wa D2 DARs, labda ikionyesha kuwa seli zinalipa fidia ya D2 DAR iliyopungua kwa kusambaza sehemu kubwa ya inapatikana D2 DARs kwa uso. Ni muhimu kuzingatia kwamba uinuko wa uso wa juu / wa ndani hauonyeshi kuongezeka kwa maambukizi ya D2 DAR katika kesi hii, kwa sababu kiwango kabisa cha DARNUMX DARs kilikuwa kimepungua. Katika kundi la WD2-Coc, athari muhimu tu ilikuwa kupungua kwa kiwango cha ndani cha monomer ya D1 DAR (~ 2kDa), ikilinganishwa na vikundi vyote vya WD55-Sal na WD45-Sal, ingawa hatua zingine pia zilikuwa kupungua (Kielelezo 3a).

Mtini. 3

Viwango vya ndani na ya chini ya D2 DAR katika NAc ilipunguzwa baada ya siku za 45 za kujiondoa kutoka kwa ujasusi wa cocaine

Kupungua kwa jumla kwa usemi wa D2 DAR pia ilionekana katika hali ya msingi na usajili wa ganda la NAc (Mtini. 3b na 3c,, mtawaliwa), ingawa athari zilionekana kutamkwa zaidi kwenye ganda. Kwa hivyo, viwango vya D2 DAR vilipungua katika panya za kafe kwenye WD45 tu kwa msingi, lakini kwenye WD1 na WD45 kwenye ganda. Jumla ya D2 DARs zimepungua sana kwenye ganda. Kupungua kwa bendi za ndani za D2 DAR kulitokea kwa siku zote mbili za kujiondoa katika msingi na ganda, ingawa kulikuwa na utaftaji wa- wa kujitenga na wa mkoa katika hali ambayo bendi ya ndani ilionyesha athari kubwa ya takwimu. Kwa muhtasari, uso wa D2 DAR na viwango vya protini vya ndani vilipunguzwa katika NAc baada ya kujiendesha kwa cocaine. Baadhi ya kupungua kulikuwa tayari kwa WD1.

D1 DAR uso kujieleza huongezeka polepole kwenye ganda la NAc baada ya kukomesha utawala wa kahawa

Baada ya kujitawala kwa kahawa, D1 DAR uso uliongezeka kwenye ganda la NAc kwenye WD1 lakini kurekebishwa na WD45, ilhali hakuna mabadiliko yoyote yaliyozingatiwa kwenye msingi, kuashiria kuongezeka kwa muda mfupi kwa ganda. Matokeo kama hayo yamepatikana katika masomo ya zamani kwa kutumia receptor autoradiography. Ben-Shahar et al. (2007) kupatikana kuongezeka kwa wiani wa D1 DAR katika ganda la NAc ya panya 20 min (lakini sio 14 au siku 60) baada ya kukatisha ufikiaji wa kupanuka (6 hr / siku) kujiendesha kwa kocaine, wakati hakuna mabadiliko yaliyozingatiwa kwa msingi au baada ya ufikiaji mfupi wa cocaine -Usimamizi (2 hr / siku). Nader et al. (2002) aliona ongezeko dogo la msongamano wa D1 DAR kwenye ganda lakini sio msingi wa nyani wa rhesus kuuawa baada ya mwisho wa vikao vya kujisimamia vya cocaine ya 100. Nyani alitathmini siku za 30 baada ya kumaliza regimen kama hiyo ilionyesha kuongezeka kwa wiani wa D1 DAR katika rostral NAc na kwa msingi na ganda kwa kiwango zaidi cha caudal, lakini wiani wa D1 DAR ulikuwa umerekebishwa na siku za 90 (Beveridge et al., 2009). Matokeo haya yote, kama yetu, yanaonyesha kuongezeka kwa kiwango cha chini kwa kiwango cha D1 DAR, haswa kwenye ganda, baada ya kukomesha kujiendesha kwa kahawa. Walakini, uchunguzi wa mapema uliofanywa na kikundi hiki ulionyesha kupungua kwa msongamano wa D1 DAR katika NAc (nguvu zaidi kwenye ganda) ya nyani wa rhesus ambao walikuwa na cococaine iliyojiendesha kwa muda mrefu zaidi (miezi ya 18; Moore et al., 1998a). Ilipungua D1 DAR ya kufunga katika NAc pia ilipatikana 18 hr baada ya kukomesha usajili wa kupanuka kwa panya, ingawa ulaji wa jumla wa cocaine katika utafiti huu ulikuwa juu zaidi kuliko masomo ya panya yaliyojadiliwa hapo juu.De Montis et al., 1998). Matokeo haya yanaonyesha kuwa marekebisho ya D1 DAR hutegemea mambo mengi juu ya mfiduo wa cocaine. Kuzingatia mwingine ni kwamba receptor autoradiography inapima jumla receptors za seli, wakati majaribio yetu ya kuingiliana kwa protini yanaweza kutofautisha kati ya receptors za uso na ndani. Kwa kufurahisha, utafiti uliowekwa kwenye kizuizi kiligundua mwenendo kuelekea kuongezeka kwa viwango vya D1 DAR katika NAc ya watumiaji wa kokeini ya binadamu (Worsley et al., 2000).

Je! Ongezeko la muda mfupi katika usemi wa uso wa D1 DAR ambao tuliona kwenye ganda la NAc ni muhimu kwa ujumuishaji wa tamaa ya cocaine iliyosababisha? Hii ni ngumu kutathmini, kwa sababu hakuna tafiti zilizopima athari ya sindano ya ndani ya NAC ya agonisi ya D1 DAR au wapinzani kwenye cueini iliyosababishwa ya cocaine baada ya kujiondoa kwa kizuizi cha nyumbani (au kulazimishwa tena kwa cocaine kutuliza baada ya mafunzo ya kutoweka). Walakini, receptors za D1 katika medial NAc (ganda na msingi wa medial) zinahusika katika kurudishwa tena kwa utumiaji wa cocaine baada ya kutoweka, dhahiri kupitia utaratibu unaohitaji uanzishaji wa ushirika wa D1 na D2 DARs (Anderson et al., 2003; 2008; Bachtell et al., 2005; Schmidt na Pierce, 2006; Schmidt et al., 2006). Pamoja na matokeo yetu, hii inaweza kupendekeza kwamba neurons kwenye ganda la NAc zinajibika zaidi kwa D1 DAR-mediated cocaine inayotafuta kujiondoa mapema kwa sababu ya upitishaji wa muda wa D1R. Hata hivyo tahadhari lazima itumike katika kuongeza zaidi kutoka kwa kurudishwa tena hadi masomo ya kumkaa, kwa sababu mafunzo ya kutoweka na uondoaji wa ngome ya nyumbani yanahusishwa na neuroadaptations tofauti katika NAc (Sutton et al., 2003; Ghasemzadeh et al., 2009; Wolf na Ferrario, 2010). Ni muhimu kutambua kuwa D1 DARs kwenye amygdala ya basolateral na kortini ya mapema pia ni muhimu kwa kurudishwa kwa habari ya uchochezi ya cocaine (kwa mfano, Ciccocioppo et al., 2001; Alleweireldt et al., 2006; Berglind et al., 2006).

Katika kiwango cha rununu, wote presynaptic na postynaptic DARs zinaweza kugeuza kufurahisha kwa mishipa ya kati ya spiny, aina ya seli ya kawaida na neuron ya pato la NAc (Nicola na al., 2000; O'Donnell, 2003). Utawala wa cocaine uliorudiwa usio na utata unajulikana kuongeza athari kadhaa za uanzishaji wa D1 DAR katika NAc. Kwa hivyo, siku moja hadi mwezi mmoja baada ya kumaliza matibabu ya kokaini, uwezo wa kuongeza nguvu wa agonisi za D1 DAR kuzuia shughuli za neuroni za kati (zinazoendeshwa na glutamate ya iontophoretic) zilizingatiwa katika NAc (Henry na White, 1991; 1995). Walakini, kuongezeka kwa uso wa D1 DAR kuripotiwa hapa kuna uwezekano wa kuelezea matokeo haya ya awali, kwa sababu ni mdogo kwa ganda na imeonyeshwa tu kwenye WD1. Siku moja baada ya changamoto ya cocaine iliyosimamiwa siku 10-14 baada ya kumaliza sindano za kurudia za cocaine, Beurrier na Maleka (2002) iliona kuimarishwa kwa kizuizi cha majibu ya upatanishi wa DA-majibu ya msukumo wa kati wa NAc ambayo ilionekana kupatanishwa na Dyns-kama DARNUMX-kama DAR kwenye vituo vya ujasiri wa glutamate. Walakini, athari zinazowezekana za sindano ya changamoto (kwa mfano, ona Boudreau et al., 2007 na Kourrich et al., 2007), pamoja na tofauti za spishi na ukosefu wa rekodi kwa msingi, hufanya iwe vigumu kulinganisha matokeo yao na yetu. Ikumbukwe pia kwamba agonists wa DAR na wapinzani wanaotumiwa na Henry na White (1991; 1995) na Beurrier na Malenka (2002) haikufaulu kati ya D1 na D5 DARs.

Viwango vya D2 DAR hupungua katika NAc baada ya kumaliza kujisimamia

Athari kuu iliyoangaziwa katika somo letu lilikuwa kupungua kwa protini ya D2 DAR katika msingi wa NAc na ganda baada ya kukomesha kujiendesha kwa kokaini, kulingana na udhibiti wa saline. Hii ilitamkwa zaidi kwenye ganda, ambapo bendi za ndani, uso na jumla ya bendi vilipunguzwa kwa WD1 na WD45. Kwa msingi, usemi wa uso wa D2 DAR ulipunguzwa tu kwenye WD45 na viwango vya D2 DAR zote hazipungua sana. Masomo mengine kadhaa yamepata vivyo hivyo kupungua kujieleza kwa D2 DAR baada ya kukomesha kujiendesha kwa kokaini. Katika nyani za rhesus zilizo na uzoefu wa hali ya juu ya kujiendesha kwa kikohozi, wiani wa D2 DAR, uliopimwa na receptor autoradiografi, ulipunguzwa katika mikoa mingi ya ndani ikijumuisha msingi wa NAc na ganda wakati tishu zilipatikana mara baada ya kikao cha mwisho (Moore et al., 1998b; Nader na al., 2002). Kutumia PET, athari hii katika gangal ya basal iligunduliwa ndani ya wiki ya 1 ya kuanzisha kujiendesha kwa kokaini (Nader na al., 2006). Kiwango ambacho viwango vya D2 DAR hupona wakati wa kujiondoa hutegemea ulaji jumla wa cocaine. Katika utafiti wa autoradiografia, viwango vya D2 DAR katika NAc zinapona kudhibiti maadili baada ya siku za 30 au 90 za kujiondoa kutoka vikao vya 100 vya kujisimamia cocaine (Beveridge et al., 2009). Walakini, katika utafiti wa PET wa nyani aliye na mfiduo mrefu (mwaka wa 1) na kwa hivyo ulaji wa jumla wa cocaine, 3 ya nyani XXUMX ilionyesha kupona kwa kiwango cha D5 DAR baada ya siku za 2 wakati nyani za 90 hazikuonyesha kupona hata baada ya miezi ya 2 (Nader na al., 2006). Kwa jumla, matokeo haya yanaambatana vizuri na matokeo yetu ya viwango vya D2 DAR vilivyopungua wakati wa kujiondoa.

Uchunguzi wa PET wa madawa ya kulevya ya binadamu ya kokeini pia umepunguza viwango vya D2 DAR katika maeneo mengi ya biashara, pamoja na striatum ya ventral, ambayo ilionekana katika kujiondoa mapema vile vile na baada ya miezi ya 3-4 ya detoxification (Volkow et al., 1990, 1993, 1997). Walakini, umuhimu wa tabia hauelewe wazi, kwani upatikanaji wa D2 DAR haukurekebisha na athari nzuri za cocaine au uamuzi wa kuchukua zaidi cocaine baada ya kipimo cha kupandikiza (Martinez et al., 2004). Ni muhimu kutambua kwamba wakati tamaa ya cocaine iliyosababishwa na cocaine inaonyesha kuongezeka kwa wakati wa kujiondoa wakati wa kujiondoa ("incubation"), hii haitokei kwa utaftaji wa cocaine-primed cocaine (Lu et al., 2004a). Kwa hivyo, matokeo ya Martinez et al. (2004) acha wazi kwamba uwezekano wa kupatikana kwa D2 DAR kunaweza kuendana na utaftaji wa cocaine uliosababisha, mtazamo wa mfano wa kufyonzwa uliosomeshwa hapa. Upatikanaji wa D2 DAR ya chini kwa watumiaji wa watu wa cocaine haidhibitisha na umetaboli wa mbele wa cortical (Volkow et al., 1993). Pamoja na mabadiliko mengine, hii inaweza kuchangia upotezaji wa udhibiti ambao hufanyika wakati waraibu huwekwa kwenye dawa za kulevya au vitu vilivyooanishwa na madawa ya kulevya, na kwa mshono mkubwa wa dawa ikilinganishwa na tuzo zisizo za dawa (Volkow et al., 2007; Volkow et al., 2009). Ikumbukwe kwamba kupungua kwa viwango vya D2 DAR katika utafiti wa PET kunaweza kuonyesha kutolewa kwa DA badala ya kupungua kwa viwango vya D2 DAR, lakini matokeo ya hivi karibuni yanapingana na maelezo haya katika kesi ya wagonjwa wanaotegemea cocaine (Martinez et al., 2009). Kwa kuongezea, uchunguzi wa baada ya watu wanaotumia kokeini ya binadamu walipata mwelekeo kuelekea kupungua kwa viwango vya D2 DAR katika NAc kwa kutumia chanjo (Worsley et al., 2000).

Uchunguzi katika wanadamu wa madawa ya kulevya wa kokeini hauwezi kuamua ikiwa kupatikana kwa D2 DAR ni sifa inayotarajiwa au matokeo ya udhihirisho wa cocaine, lakini matokeo mengine yanaonyesha kuwa yote ni kweli. Kwa upande mmoja, majaribio kwa wanadamu wasio wanyanyasaji wa dawa za kulevya wamepata uhusiano wa baina ya upatikanaji wa D2 DAR na ripoti za "kupenda dawa" wakati unasimamiwa methylphenidate (Volkow et al., 1999; 2002). Matokeo haya yanaonyesha kuwa kupatikana kwa D2 DAR kunaweza kuongeza udhaifu wa madawa ya kulevya. Hitimisho kama hilo linaungwa mkono na tafiti katika nyani za rhesus. Katika nyani mwenye makao ya kijamii, kufanikiwa kwa kutawala kwa jamii huongeza upatikanaji wa D2 DAR kwenye striatum na hii inahusishwa na unyeti wa chini kwa athari za utiaji nguvu za cocaine ikilinganishwa na nyani mdogo (Morgan et al., 2002). Hali ya kijamii pia imeunganishwa na upatikanaji wa D2 DAR kupatikana kwa watu wanaojitolea wa bure wa dawa za kulevya (Martinez et al., 2010). Kwa upande mwingine, tafiti zote mbili za PET na receptor autoradiography zinaonyesha kuwa utawala wa kokeini wa muda mrefu hupungua kupatikana kwa D2 DAR receptor kupatikana kwa nyani wa kibinafsi, kama ilivyojadiliwa hapo juu.Moore et al., 1998b; Nader na al., 2002; Nader na al., 2006). Usimamizi wa siku zote wa cocaine pia unaonekana kupungua kwa upatikanaji wa D2 DAR katika nyani wenye makao makubwa ya kijamii (Czoty et al., 2004). Kwa hivyo, baada ya kujitawala kwa muda mrefu wa koa, hakukuwa na tofauti kubwa katika upatikanaji wa receptor ya D2 au athari za kuimarisha za cocaine kati ya nyani mkubwa na chini ya (Czoty et al., 2004). Walakini, viwango vya juu vya D2 DAR vilirekebishwa katika nyani wakubwa wakati wa kujizuia na hii ilihusishwa na ucheleweshaji mrefu katika kujibu riwaya, tabia ya utabiri wa kupungua kwa unyeti kwa athari za kuimarisha cocaine (Czoty et al., 2010).

Kama ilivyo kwa wanadamu na nyani, tafiti za panya zinaonyesha kuwa kupatikana kwa D2 DAR ni hatari kwa hatari ya hatari ya cocaine. Kwa hivyo, masomo ya PET katika panya na msukumo wa hali ya juu (tabia inayohusishwa na uboreshaji wa tumbaku ya cocaine) onyesha kupatikana kwa D2 / D3 DAR katika stralatum ya ventral (Dalley et al., 2007). Viwango vya D2 DAR katika NAc pia hupunguzwa kwa panya ambazo zinaonyesha mwitikio wa hali ya juu kwa ujinga, tabia nyingine inayohusishwa na hatari ya kulevya (Hooks na al., 1994). Matokeo yetu katika panya yanaonyesha kuwa viwango vya D2 DAR kwenye NAc pia vinaweza kuwa matokeo ya mfiduo wa mara kwa mara wa cocaine, sanjari na masomo ya nyani na wanadamu (hapo juu). Walakini, masomo mawili ya receptor autoradiography katika panya yalipata matokeo ambayo ni tofauti na yetu. Ben-Shahar et al. (2007) haikuona kupungua kwa viwango vya D2 DAR katika NAc baada ya kujiondoa (dakika ya 20, siku za 14 za siku za 60) kutoka kwa upatikanaji wa mfumo wa udhibiti wa udhibiti wa cocaine sawa na yetu (6 hr / siku), ingawa upungufu ulizingatiwa katika ganda la NAc baada ya usajili mdogo wa kupata (2 hr / siku) na siku za 14 za kujiondoa (Ben-Shahar et al., 2007). Stéfanski et al. (2007) Haikupata mabadiliko yoyote katika viwango vya D2 DAR kwa msingi au ganda 24 h baada ya kukomesha ufikiaji mdogo wa utumiaji wa kokeini (2 hr / day), ingawa viwango vya D2 DAR vilipungua katika udhibiti wa cocaine. Kama ilivyoonyeshwa hapo juu, receptor autoradiografia hupokea jumla ya receptors za seli, wakati masomo ya PET na proteni ya uingilianaji wa proteni hupokea receptors za seli ya seli.

Kwa jumla, tafiti juu ya uhusiano kati ya viwango vya D2 DAR na utumiaji wa kahawa ya kawaida huunga mkono mfano ambao D2 DARs kawaida hupunguza kujiendesha kwa cocaine. Kwa hivyo, tunapendekeza kwamba kiwango cha DARNUMX DAR kilichopungua kinachozingatiwa katika majaribio yetu kinaweza kuchangia kutafuta cocaine iliyosababisha cocaine baada ya kujiondoa kwa koa. Hasa, ukweli kwamba uso wa D2 DAR kwenye msingi wa NAc ulipunguzwa kwenye WD2 lakini sio WD45, pamoja na jukumu muhimu la msingi wa NAc katika utaftaji wa cocaine ulioonyeshwa, unaonyesha kwamba D1 DAR inayodumu kwa msingi wa NAc msingi inaweza kuwa. kuchangia kuongezeka kwa kutegemea kwa muda wa utaftaji wa cocaine uliochochea. Hii ingetabiri kwamba kuingizwa kwa intra-NAc ya agonist ya D2 wakati wa kujiondoa kunaweza kupunguza utaftaji wa cocaine uliosababishwa. Kwa bahati mbaya, hakuna tafiti zilizochunguza athari za dawa za intra-NAc D2 DAR kwenye mfano wa incubation. Kwa upande mwingine, tafiti za kurudishwa tena kwa cococaine-primed zinaonyesha kuwa D2 na D1 DARs kwenye ganda na msingi wa medial hufanya kazi kwa kushirikiana kukuza utaftaji wa cocaine (Anderson et al., 2003; Bachtell et al., 2005; Schmidt na Pierce, 2006; Schmidt et al., 2006). Kwa msingi wa matokeo haya, kujieleza kupungua kwa D2 DAR kuzingatiwa katika majaribio yetu kunaweza kutabiriwa kupunguza utaftaji wa cocaine, ambayo ni, kusababisha athari inayokabili ujazo wa kutegemewa ambao huzingatiwa. Utofauti huo unaweza kuonyesha shida zilizoletwa na kurejeshwa kutoka kwa kurudishwa tena kwa cococaine-primed baada ya mafunzo ya kutoweka hadi kwa kutafuta cocaine aliyechochea baada ya kujiondoa.

Kuongezeka kwa wakati kwa dhihirisho la uso wa D3 DAR hufanyika katika msingi wa NAc baada ya kukomesha utawala wa kahawa

Utafiti wa dawa za D3 za kupendelea DARNUMX na kanuni za kurudisha tena zinaonyesha kwamba wapinzani wa D3 DAR wanaweza kuwa na maana katika kutibu ulevi wa madawa ya kulevya na, haswa, katika kupunguza kurudi tena kwa dalili zinazohusiana na cocaine (Heidbreder et al., 2005; 2008; Le Foll et al., 2005; Xi na Gardner, 2007). Matokeo haya yanamaanisha kuwa uanzishaji wa D3 DAR na DA ya asili inaweza kuhusika katika upatanisho wa kutafuta cocaine iliyosababisha. Matokeo yetu yanaonyesha kuwa D3 DAR ya uso kujieleza kwenye msingi wa NAc haibadilishwa kwenye WD1 kutoka kwa ujanibishaji wa kibinafsi wa kokaini lakini iliongezeka kwa WD45 ikishirikiana na uchochezi wa kutamani cocaine. Uso wa uso wa D3 DAR haukua sana katika ganda, ingawa kulikuwa na ongezeko ndogo lakini muhimu kwa uwiano wa uso / intracellular. Kwa kuzingatia jukumu la maambukizi ya D3 DAR katika kujibu dalili zinazohusiana na cocaine na umuhimu wa msingi wa utaftaji wa cocaine, inajaribu kubashiri kwamba iliongeza uso wa D3 DAR kwenye msingi wa NAc ulichangia kuingiza cocaine iliyosababisha cueine. tamaa ambayo inazingatiwa kwenye WD45. Walakini, tovuti ya neural ambayo wapinzani wa D3 DAR hufanya kupunguza utaftaji wa cocaine haijaanzishwa. Hasa, hakuna tafiti zilizochunguza athari za sindano ya intra-NAc ya D3 DAR ikipendelea madawa ya kulevya kwenye kutafuta cocaine iliyochochewa. Kwa mfano tofauti, Schmidt et al. (2006) iligundua kuwa sindano ya D3-ikipendelea agonist PD 128,907 kwa msingi au ganda haikuleta msukumo wa utaftaji wa cocaine baada ya mafunzo ya kutoweka.

Matokeo yetu kwa ujumla yanaendana na masomo ya receptor autoradiografia ambayo yalipima jumla ya viwango vya D3 DAR katika NAc baada ya mfiduo wa cocaine. Staley na Mash (1996) iliripoti kuwa D3 DAR ya kufunga ilikuwa juu zaidi katika NAc ya waathiriwa wa madawa ya kulevya zaidi ya cocaine ikilinganishwa na udhibiti wa umri. Baada ya kufichua cocaine katika eneo lenye upendeleo wa mahali na siku tatu za kujiondoa, panya lilionyeshwa liliongezea D3 DAR kumfunga katika msingi wa NAc na ganda (Le Foll et al., 2002). Neisewander et al. (2004) kipimo D3 DAR ikifunga kwa panya na uzoefu wa hali ya juu ya usimamiaji wa cocaine ambao ulipimwa kwa kurudishwa kwa cocaine-primed baada ya vipindi mbali mbali vya kujiondoa kisha kuuawa 24 h baadaye. D3 DAR ya kufunga katika NAc haikubadilishwa kwenye WD1 lakini iliongezeka baada ya muda mrefu (WD31-32), sanjari na uchunguzi wetu wa ongezeko linalotegemea wakati. Kwa kuongezea, matibabu ya madawa ya kulevya wakati wa kujiondoa ambayo yalipunguza utaftaji wa cocaine pia yalizidisha kuongezeka kwa D3 DAR binding, na kupendekeza kuwa D3 DAR upregulation inahusishwa kwa vitendo na utaftaji wa cocaine. Ikumbukwe kwamba D3 DAR inaongezeka ndani Neisewander et al. (2004) zilikuwa muhimu kwa msingi wakati mwenendo tu ulizingatiwa katika ganda, lakini sehemu hizo zilichambuliwa katika sehemu ya rostral ya NAc ambapo msingi na ganda hazina tofauti kabisa. Uchambuzi wetu ulifanywa kwa msingi na ganda kutoka sehemu za rostral na caudal za NAc.

Kazi hii iliungwa mkono na DA009621, DA00453 na Tuzo ya Upelelezi ya NASAAD iliyojulikana kwa MEW, DA020654 hadi MM, na tuzo ya kwanza ya Utaftaji wa Utafiti wa Kitaifa wa DA021488 kwa KLC