Nat Neurosci. Mwandishi wa maandishi; inapatikana katika PMC 2016 Jan 15.
Imechapishwa katika fomu ya mwisho iliyopangwa kama:
Nat Neurosci. 2014 Mei; 17 (5): 704-709.
Imetolewa mtandaoni 2014 Apr 6. do: 10.1038 / nn.3694
PMCID: PMC4714770
NIHMSID: NIHMS574802
Ingo Willuhn,1,2,3,* Lauren M. Burgeno,1,2 Peter A. Groblewski,2 na Paul EM Phillips1,2
Toleo la mwisho la chapisho la mchapishaji linapatikana katika Nat Neurosci
Tazama ufafanuzi "Kupoteza ishara ya phasic dopamine: alama mpya ya ulevi"Ndani Nat Neurosci, juzuu ya 17 kwenye ukurasa wa 644.
Angalia makala nyingine katika PMC kuwa Anatoa makala iliyochapishwa.
abstract
Dawa ya madawa ya kulevya ni shida ya neuropsychiatric iliyoonyeshwa na kuongezeka kwa matumizi ya dawa za kulevya. Dopamine neurotransization katika ventromedial striatum (VMS) mediates athari ya kuimarisha ya madawa ya kulevya, lakini kwa matumizi ya muda mrefu ya dorsolateral striatum (DLS) inadhaniwa kuchukua udhibiti wa utaftaji wa dawa za kulevya. Tulipima kutolewa kwa dopamine ya striatal wakati wa mfumo wa kujiendesha wa kokeini ambayo ilizalisha kuongezeka kwa madawa ya kulevya katika panya. Kwa kushangaza, tuligundua kwamba dopamine ya phasic ilipungua katika mikoa yote kadiri kiwango cha ulaji wa kokeini uliongezeka; na kupungua kwa dopamine katika VMS iliyosahihishwa sana na kiwango cha kuongezeka. Utawala wa dopamine mtangulizi wa L-DOPA kwa kipimo ambacho kilirudisha dalili za dopamine katika upunguzaji wa VMS, na hivyo kuonesha uhusiano wa sababu kati ya kupungua kwa maambukizi ya dopamine na matumizi ya dawa nyingi. Kwa hivyo, pamoja data hizi zinatoa ufahamu wa kiufundi na wa matibabu kwa ulaji mkubwa wa madawa ya kulevya ambayo hutoka kufuatia matumizi ya muda mrefu.
UTANGULIZI
Dhuluma ya madawa ya kulevya inahusishwa sana na kutolewa kwa dopamine kwenye striatum1,2. Walakini, mabadiliko yanayohusiana na matumizi ya madawa ya kulevya katika dopamine neurotransuction hutofautiana kwa muda na utii3-5. Polepole huongezeka kwa mkusanyiko wa dopamine wa nje katika hali ya hewa (VMS), iliyochochewa na dawa nyingi za dhuluma ikiwa ni pamoja na cocaine6, hufikiriwa kuonyesha mali za kuimarisha za dawa7, wanyama wanapodhibiti kiwango chao cha kujisimamia cocaine ili kudumisha kiwango cha juu cha mkusanyiko wa dopamine ulioko8. Ndani ya VMS, majukumu yanayoingiliana ya dopamine kuashiria katika msingi wa msingi na ganda ya mkusanyiko wa nukta imeripotiwa, lakini kwa msisitizo juu ya ganda la upatanishi wa tuzo ya dawa ya msingi na msingi wa kaimu kama substrate ya uimarishaji wa masharti1. Hakika, kutolewa kwa phasic dopamine katika kiini cha mkusanyiko huchukua muda wa sekunde chache, iko katika uwasilishaji wa ushawishi wa mazingira ambao umekuwa ukiratibiwa mara kwa mara na dawa hiyo.9-12 na ina uwezo wa kudhibiti utaftaji wa dawa za kulevya na kuchukua9. Usimbuaji wa hali ya kuchochea iliyotolewa na kutolewa kwa dopamine pia hupatikana katika sehemu za sensorimotor za striatum (dorsolateral striatum, DLS)13, subregion ya striatal ambayo imehusishwa na maendeleo ya utaftaji wa dawa za kawaida na za kulazimisha14-16. Kwa hivyo, maendeleo ya dawa za kulevya zaidi ya matumizi ya burudani huzingatiwa kuashiria ushiriki wa dopamine kuashiria katika hali tofauti za kitabia.1,17, na msisitizo wa kuhama kutoka kwa limbic (VMS) kwa sensorimotor (DLS) wakati wa maendeleo ya tabia ya utaftaji wa utaftaji wa dawa za kulevya.1,18. Walakini, haijulikani ikiwa encoding ya vitendo vinavyohusiana na madawa ya kulevya au kuchochea na mabadiliko ya dopamine ya phasic kama tabia ya wastani ya kuchukua dawa huongezeka.
Paradigms za pete ambazo zimetajwa kuwa mfano bora wa mpito kutoka kwa matumizi ya wastani ya dawa za kulevya hadi kua madawa ya kulevya upatikanaji wa muda mrefu wa dawa hiyo19,20, kama vile kupanua ufikiaji kutoka kwa moja (ufikiaji mfupi, ShA) hadi masaa sita (ufikiaji mrefu, LgA) kwa siku kwa muda wa wiki21. Daraja kama hiyo ya kujitawala ya dawa ya kulevya ina uwezo wa kutoa kuongezeka21 na utaftaji wa madawa ya lazima22, kati ya dalili zingine za kardinali ambazo zinaonyesha utegemezi wa dutu kwa wanadamu23. Hapa, tulijaribu jinsi LgA kwa cocaine inavyoathiri mienendo ya kikanda ya ishara ya phasic dopamine katika striatum iliyokuwa na sifa ya hapo awali wakati wa matumizi thabiti ya ShA13 kupata uelewa bora wa mifumo ya neurobiological inayoeneza matumizi ya dawa.
MATOKEO
Panya za Wistar wa kiume zilizo na catheters za ndani za ndani zilifundishwa kujishughulisha na cococaine wakati wa vikao vya kila siku vya ShA na kufuatia kupatikana vilibadilishwa kwenye vikao vya LgA katika vyumba vyenye bandari mbili za pua. Pigo la pua ndani ya bandari inayofanya kazi ilisababisha infusion ya cocaine (0.5 mg / kg / infusion) na uwasilishaji wa 20-s kichocheo cha sauti-mwangaza juu ya mpangilio wa muda wa muda wa muda wa (FI) 20. Majibu katika bandari ya pili (isiyo ya kazi) ya bandia, au kwenye bandari inayofanya kazi wakati wa uwasilishaji wa kichocheo (wakati wa kumaliza muda wa 20), hazikuwa na matokeo yaliyowekwa. Kwa madhumuni ya kuripoti, majibu ya utando wa pua kwenye bandari inayofanya kazi nje ya muda wa kumaliza muda (yaani, zile ambazo zilisababisha uingizwaji wa cocaine) hurejelewa kama "matako ya pua ya kazi" na wale walio kwenye bandari isiyofanya kazi nje ya kipindi cha "kutofanya kazi" vifijo vya pua ”. Idadi ya masharubu ya pua yanayofanya kazi yalizidi sana vifuta vya pua visivyotumika (athari kuu ya bandari ya pua: F(1, 23) = 383.226, P <0.001; Mtini. 1) wakati wa kila wiki (P <0.001). Baada ya kubadili kutoka ShA kwenda LgA, ulaji wa cocaine umeongezeka sana kwa muda (athari kuu ya wiki: F(3, 69) = 25.504, P <0.001; Mtini. 1), kama ilivyoripotiwa mara kwa mara na wengine wengi24.
Ili kutathmini mienendo ya muda mrefu ya maambukizi ya dopamine, rekodi za neurophemical za muda mrefu zilifanyika wakati huo huo katika msingi wa mkusanyiko wa nucleus ya VMS na katika DLS kwa microsensors iliyowekwa ndani ya muda mrefu.25 kutumia kasi ya skirke ya volclic (tazama Kielelezo cha ziada 1 kwa uthibitisho wa kihistoria wa uwekaji wa electrode). Katika wiki ya kwanza ya LgA, tuliona ongezeko la muda mfupi la mkusanyiko wa dopamine ya nje katika VMS kufuatia majibu ya kazi (P <0.001; Kielelezo 2a). Utaratibu huu wa uanzishaji ulipungua wakati wa LgA ambapo kutolewa kwa dopamine katika wiki ya tatu ilikuwa ndogo sana kuliko ile ya kwanza (P <0.001) na pili (P = Wiki za 0.030) (athari kuu ya wiki: F(2,72) = 10.230, P <0.001; Kielelezo 2b). Utoaji wa dopamine ya phasic katika DLS uliibuka katika wiki ya pili (P = 0.006; Kielelezo 2c) lakini hakuwepo katika wiki ya tatu ya LgA (athari kuu ya wiki: F(2,51) = 3.474, P = 0.039; mwingiliano wa utendaji wa poke x wiki: F(2,51) = 4.021, P = 0.024; Kielelezo 2c, d). Takwimu hizi zinaonyesha kuwa ishara za dasiti za phasic dopamine katika VMS na DLS zinaibuka mara kwa mara katika hatua tofauti za dawa za kulevya zinazofanana na ile tulivyoripoti kwa usajili wa ShA.13. Walakini, hii kuashiria ilipungua katika mikoa yote kwa kipindi cha LgA, kipindi ambacho inajulikana kuwa maduka ya dawa ya kahawa iliyosimamiwa kwa nguvu haibadiliki26,27.
Ili kujaribu uhusiano kati ya upotezaji wa dopamine kuashiria na kuongezeka kwa matumizi ya dawa za kulevya, tulichukua fursa ya tofauti za mtu binafsi katika kuongezeka kwa ujumuishaji wa dawa za kulevya wakati wa utaratibu wa LgA kwa kutenganisha wanyama katika vikundi viwili kulingana na ikiwa walionyesha ongezeko kubwa kulingana na mstari udhibiti wa matumizi ya dawa za kulevya juu ya vikao vya LgA au la (Mtini. 3a, b). Uthibitisho wa mgawanyiko huu wa wanyama ulionyesha kuwa wanyama ambao hawajiongezeka hawakuonyesha ongezeko kubwa la vifungo vya pua kwa muda wa wiki tatu za LgA (athari kuu ya wiki: F(2,18) = 0.633, P = 0.542; Kielelezo 3b, kushoto), wakati panya zilizoongezeka ziliongezeka ulaji wao kwa kiwango kikubwa (athari kuu ya wiki: F(2,26) = 14.826, P <0.001; Kielelezo 3b, haki; ulaji wa maingiliano ya wiki: F(2,44) = 4.674, P = 0.014) kutengeneza vifuta vya pua zaidi kuliko wanyama wasio na damu wakati wa wiki ya tatu ya LgA (t(22) = 2.307, P = 0.031; Kielelezo 3b). Kwa kweli, wanyama waliokua walionesha motisha kuongezeka kwa kupata cocaine, kama inavyoonyeshwa katika kazi ya uwiano inayoendelea.P = 0.028; Kielelezo cha ziada 2). Katika panya zilizoongezeka, kulikuwa na kushuka kwa kiwango kikubwa kwa kutolewa kwa dopamine katika VMS (athari kuu ya wiki: F(2,51) = 15.507, P <0.001; Kielelezo 3c, sawa, na Kielelezo cha ziada 3a). Walakini, kutolewa kwa dMS ya VMS ilikuwa imara katika panya ambazo hazijiongezeka (athari kuu ya wiki: F(2,18) = 0.057, P = 0.945; Kielelezo 3c, kushoto na Kielelezo cha ziada 4a) kuwasilisha dopamine zaidi ya phasic katika wiki ya tatu ikilinganishwa na panya zilizokua (athari kuu ya ulaji: F(1,69) = 6.444, P = 0. 013; Mtini. 3d, kushoto; ulaji wa maingiliano ya wiki: F(1,70) = 4.303, P = 0.042). Tofauti hii ya kutolewa kwa dopamine kati ya panya zilizoenea na zisizo za kawaida zilionekana katika masaa yote sita ya kujitawala (t(43) = 2.599, P = 0.013). Kwa maana, tofauti hii haikutokana na kupungua kwa jumla kwa kazi ya dopamine kwa wanyama waliokua, kwani kutolewa kwa dopamine kufuatia visivyo vya ubishani, vichocheo vya jaribio la cocaine hakukuwa tofauti kati ya wanyama ambao hawakuongezeka na waliokua (P = 0. 605; Kielelezo cha ziada 5a).
Kinyume na kutolewa kwa dopamine ya phasic iliyodumishwa katika VMS ya panya ambazo hazikuongezeka, hapo awali tuliripoti kwamba kulikuwa na kupungua kwa kutolewa kwa dopamine kwa wanyama ambao walikuwa wamepitia wiki tatu za ufikiaji mdogo wa cocaine (ShA) ya saa moja tu kwa kila kikao cha kila siku13. Kwa hivyo, tulifanya uchambuzi wa ziada juu ya data iliyopatikana kutoka kwa panya hizi za ShA ili kudhibitisha sifa kamili ya uhusiano kati ya kazi ya dopamine na ulaji wa madawa ya kulevya kwa wanyama wote ambao walitawaliwa na serikali ya ShA au LgA cocaine. Wakati hakukuwa na ongezeko kubwa la matumizi ya dawa za kulevya kwa wanyama wakati wote wa ShA, kulikuwa na tofauti za kibinafsi na kikundi kidogo cha wanyama (6 ya 16) zikionyesha ongezeko kubwa la ulaji wa dawa zaidi ya wiki tatu za kujitawala kwa dawa ya cocaine. Kwa kufurahisha, VMS phasic dopamine katika juma la tatu la ShA kujiendesha kwa kokaini katika kundi la wanyama ambao walidumisha matumizi ya dawa dhabiti (yaani, hawakuonyesha ongezeko kubwa) haikuwa tofauti sana na ile ya wanyama ambao hawakukua katika wiki ya tatu ya LgA (P = 0.741; Kielelezo cha ziada 5b). Wanyama wa ShA ambao waliongezea ulaji wa dawa za kulevya, walionyesha viwango vya chini vya matumizi ya dawa za kulevya (32.7 ± 3.9 dhidi ya 43.9 ± infusions za 3.1 katika saa ya kwanza, P = 0.017) na kutolewa kwa dopamine iliyokamilika (P = 0.049; Kielelezo cha ziada 5b) kuliko wanyama waliopungua ulaji wao chini ya hali ya LgA. Walakini, kulikuwa na hali isiyo ya maana kwa kupunguzwa kwa dMS ya VMS ikilinganishwa na wenzao wasio na kuongezeka (P = 0.094) na hakuna mwingiliano muhimu kwa kutolewa kwa dopamine kwa wakati kati ya ShA na panya zinazoongezeka za LgA (hakuna ulaji wa uingilianaji wa regimen: F(1,57) = 0.111 P = 0.740; Kielelezo cha ziada 5b). Kwa kuzingatia tofauti hizi za kibinafsi, tulifanya uchambuzi wa regression katika panya zote za ShA na LgA ili kujaribu uhusiano wa moja kwa moja kati ya viwango vya dopamine na kiwango cha kuongezeka, na tukapata uhusiano mbaya hasi (panya za Sh na LgA zimewekwa pamoja; r = −0.628 , P = 0.005) na kuongezeka zaidi kwa wanyama ambao walikuwa na dopamine iliyotolewa chini ya wiki 3 (Kielelezo 3e, kushoto). Kwa hivyo, uwasilishaji wa ishara ya dopamine katika VMS ilikuwa ya utabiri wa kuongezeka kwa dawa za kujisimamia za dawa za kulevya LgA na regimens za upatikanaji wa dawa za ShA. Takwimu hizi zinaangazia kwamba hali ya kuota inayohusiana na mabadiliko katika kutolewa kwa dopamine ni kama wanyama wataongezeka au la, badala ya mfumo wa usimamizi ambao wamewekwa wazi per se. Vivyo hivyo, tunaona kwamba katika panya zote, kuongezeka ni utabiri muhimu wa motisho ulioongezeka wa cocaine (P = 0.037, Kielelezo cha ziada 6a), lakini aina ya LgA / ShA sio, kama inavyopimwa katika ratiba ya uwiano inayoendelea (P = 0.340, Kielelezo cha ziada 6b).
Kinyume na VMS, kutolewa kwa dopamini inayoendana na dokamini katika DLS hakukuwa tofauti kati ya wanyama waliokua na wasiokua wa LgA (athari kuu ya ulaji: F(1,48) = 0.472, P = 0. 496; Mtini. 3d, sawa na Nyasi za kuongeza. 3b na 4b), na hakukuwa na uhusiano muhimu kati ya mteremko wa kuongezeka na kutolewa kwa dopamine kwa wanyama wote ambao waliongozwa na serikali ya ShA au LgA cocaine (r = −0.112, P = 0.649; Kielelezo 3e, haki). Kwa hivyo, wakati dopamine katika VMS imeunganishwa na kuongezeka kwa unywaji wa dawa za kulevya, uunganisho sawa haukuzingatiwa katika DLS, mkoa wa ubongo ambao umehusishwa sana na utawala wa muda mrefu wa dawa za kulevya.1,14,16,18.
Kwa kuzingatia uhusiano huu wa uchochezi kati ya neurochemistry na tabia, tuligundua kwamba kushuka kwa dalili za daphamine ya phasic ilikuwa kusababisha kwa kuongezeka kwa madawa ya kulevya, kulingana na ongezeko la dawa zinazotengenezwa na wapinzani wa dopamine-receptor.28-30, na kwa hivyo kuirejesha kunaleta mabadiliko katika kuongezeka (Kielelezo 4a). Kwa hivyo, tulitibu wanyama waliokua (P = 0.024; Kielelezo 4b) na L-DOPA kabla ya kikao kuanza kuongeza phasic dopamine kutolewa31. Kiwango cha L-DOPA-tegemezi (0, 10, 30, na 90 mg / kg, intravenous) ilipungua ulaji wa cocaine (athari kuu ya L-DOPA: F(3,53) = 5.053, P = 0.004; Kielelezo 4b), na ulaji wa ulaji wa 30 mg / kg kurudi kwa kiwango cha kabla. Kwa kweli, kipimo cha 30 mg / kg ya L-DOPA kilitosha kurejesha kabisa dalili za dopamine ya phasic katika VMS (angalia Kielelezo cha ziada 7 kwa tovuti za kurekodi) wakati wa kuchukua dawa za kulevya (F(2,8) = 6.316, P = 0.023; Kielelezo 4c), athari pia ilizingatiwa kwa masaa sita kamili ya kujitawala (F(2,8) = 7.610, P = 0.0141). Kwa hivyo, kiasi cha kutolewa kwa dopamine ya phasic katika VMS ilitabiri kiasi cha ulaji wa madawa ya kulevya wakati wa kikao cha kujisimamia cha koa (r = −0.525, P = 0.046; Mtini. 4d). Athari za kitabia za L-DOPA haziwezi kuelezewa na mabadiliko katika majibu ya kifamasia kwa cocaine, kwani mabadiliko ya polepole ya dopamine ya VMS kufuatia kuingiliana kwa madawa ya kulevya hayakubadilishwa na matibabu ya L-DOPA na, kwa kweli, hayakuwa tofauti kati ya kabla ya kuongezeka, kuongezeka, na hali zilizoenea za L-DOPA (F(2,8) = 0.020, P = 0.980; Kielelezo cha ziada 8). Zaidi ya hayo, athari ya L-DOPA juu ya matumizi ya dawa za kulevya pia ilizingatiwa wakati L-DOPA ilipoingizwa ndani ya VMS (angalia Kielelezo cha ziada 9 kwa tovuti za infusion) za panya zilizoongezeka kabla ya kikao (t(7) = 6.517, P <0.001; Kielelezo 4e). Ikizingatiwa, seti hii ya masomo inaonyesha kuwa kipimo kikuu cha L-DOPA kinachosimamiwa kabla ya ufikiaji wa dawa ni bora katika kurejesha dalili za dopamine na kuhalalisha utumiaji wa cocaine katika hali iliyoenea.
Tulijaribu ijayo ikiwa utumiaji wa L-DOPA ungefaa katika kupunguza matumizi mabaya ya dawa katika hali ya dosing ya muda mrefu, yanafaa zaidi kwa maombi ya kliniki. Kwanza, tulifanya majaribio ya kuanzisha infusion ya mara kwa mara ya L-DOPA kwa siku mfululizo wakati wa ujumuishaji wa kuongezeka. Wanyama walipata mafunzo ya kujisimamia wenyewe kwa wenyewe kahawa na kisha ikabadilishwa kwa LgA au kubaki kwenye ShA wakati ambao waliingizwa na L-DOPA (30 mg / kg, intravenous) au saline kabla ya kila kikao kwa wiki mbili (Kielelezo 5a). L-DOPA imeathiri sana ulaji wa dawa kwa njia maalum ya regimen (athari kuu ya matibabu: F(1,53) = 9.297, P = 0.004; athari kuu ya regimen: F(1,53) = 5.968, P = 0.018; Kielelezo 5a) na ulaji wa kahawa uliopungua kwa wanyama wa LgA (P = 0.004), lakini sio wanyama wa ShA (P = 0.170; Kielelezo 5a), na bila athari kwenye masharubu ya pua yasiyofanya kazi (LgA, P = 0.202; ShA, P = 0.101; data haijaonyeshwa). Kwa hivyo, matibabu ya L-DOPA yalifanikiwa kuzuia kuongezeka kwa matumizi ya dawa wakati wa LgA. Walakini, juu ya kukomesha matibabu, athari hii haikuvumilia (P = 0.789; Kielelezo 5a). Pili, tulirudisha L-DOPA kurudia kwa siku mfululizo kwa wanyama walio na matumizi mabaya ya dawa za kulevya. Wanyama walipewa mafunzo ya kujisimamia wenyewe kwa wenyewe kahawa na baadaye ilibadilishwa kwa LgA, au ilibaki kwa ShA kwa wiki tatu. Wanyama hawa walitibiwa na L-DOPA au saline kabla ya vikao vya kujisimamia katika wiki ya tatu (Kielelezo 5b). Wanyama waliofunzwa na LgA walionyesha ongezeko kubwa la matumizi ya cocaine wakati wa wiki mbili za kwanza ikilinganishwa na wanyama waliofunzwa na ShA (athari kuu ya regimen: F(1,51) = 15.706, P <0.001; data haijaonyeshwa). Matibabu ya L-DOPA ilizalisha athari maalum ya regimen (athari kuu ya matibabu: F(1,51) = 5.303, P = 0.025; athari kuu ya regimen: F(1,51) = 11.884, P = 0.001; Kielelezo 5b), kupungua kwa ulaji wa cocaine katika wanyama wa LgA (P = 0.048), lakini sio wanyama wa ShA (P = 0.210; Kielelezo 5b) bila kuleta majibu ya kutofanya kazi (LgA, P = 0.641; ShA, P = 0.664). Kwa kweli, athari ya tofauti ya L-DOPA kwenye maboksi ya pua ya kazi ilikuwa nguvu zaidi wakati wanyama waliwekwa kwenye vikundi visivyokua na visivyoweza kuongezeka, badala ya ShA na LgA (wanyama waliokua, P = 0.005; wanyama wasiokuwa na kasi, P = 0.421; Kielelezo 5c), kuonyesha kwamba L-DOPA ilipunguza ulaji wa kupikia wa kokeini badala ya kuathiri utumiaji wa dawa za kulevya per se, mwingiliano ambao uliongezeka kwa siku maingiliano (ulaji wa matibabu ya x (siku 1): F(1,51) = 0.562, P = 0.457; lakini ulaji wa matibabu ya ulaji wa x (siku 5): F(1,51) = 4.091, P = 0.048). Kwa kweli, tofauti hizi kati ya idadi ndogo ya watu ambao hawakuongezeka na wasio na kuongezeka pamoja na athari za kuongezeka kwa L-DOPA kali na zinazosimamiwa kwa muda pia zinazingatiwa kwa masaa yote sita ya kujisimamia.Kielelezo cha ziada 10). Kwa pamoja matokeo haya yanaonyesha kwamba kutolewa kwa dopamine ya phasic kunapungua kwa wanyama wanaokula ulaji wa zao la cocaine na kuirudisha tena na utawala unaorudiwa wa mtaftaji wa dopamine, L-DOPA, kuzuia na kurudisha nyuma ongezeko hili, kutoa ushahidi ambao umepungua kuongezeka kwa dopamine kwa kuongezeka kwa utawala wa dawa.
FUNGA
Katika utafiti wa sasa, tulichunguza kutolewa kwa dopamine ya phasic katika VMS na DLS wakati wa kuongezeka kwa ulaji wa dawa, jambo ambalo huonyesha kiashiria muhimu cha utambuzi kwa utegemezi wa dawa21,23. Matokeo yetu yanaonyesha kuwa kuongezeka kunashirikiana na kupungua kwa dalili za dopamine katika VMS na DLS, na kupungua kwa dopamine katika VMS kunalingana sana na kiwango cha kuongezeka. Athari hii inaonekana kuwa ya kuchagua kwa dopamine ya phasic kwani mabadiliko kulinganishwa hayakuzingatiwa katika dopamine ya tonic kwenye utafiti wa sasa, katika kazi ya zamani kwa kutumia regimen sawa katika panya27 au paradigms zinazojisimamia za kibinafsi katika primates zisizo za kibinadamu32,33. Kumekuwa na idadi ya ripoti za kupunguzwa kwa dopamine ya phasic dopamine wakati wa kujiondoa kwa madawa ya kulevya (iliyojaribiwa kati ya masaa ya 18 na siku saba kutoka kikao cha mwisho cha kujisimamia) ambacho kinahusishwa na unyeti mdogo wa cocaine34-37. Wakati tuliona kupunguzwa sawa kwa majibu ya dopamine kwa cocaine kati ya panya za ShA na LgA (Kielelezo cha ziada 5a), athari hii haikuonekana kuhusika na kuongezeka kama majibu ya neva ya kutuliza kwa kokeini isiyo na utata sio tofauti kati ya panya zilizopanda na zile ambazo hazikufanya (hakuna ulaji wa uingilianaji wa regimen: F(1,34) = 1.964 P = 0.170; Kielelezo cha ziada 5a). Vivyo hivyo, mabadiliko ya kilele cha mkusanyiko wa dopamine ya tonic hadi sekunde 90 baada ya cocaine yenye utata, labda kutokana na hatua za kifafa za cocaine, hazikuwa tofauti kati ya hali iliyoenea na iliyokua ndani ya wanyama sawa.Kielelezo cha ziada 8). Kwa hivyo, kipengele pekee cha maambukizi ya dopamine ambayo tuliona ambayo yalitabiri kuongezeka kwa ulaji wa dawa za kulevya ilikuwa majibu ya phasic ambayo yalitokea mara moja kufuatia kishindo cha pua, ambayo ni majibu ya shabaha kwa tabia zinazohusiana na dawa.9,11,13. Jibu hili la neva limepungua kwa wanyama waliokua ulaji wa dawa za kulevya, ambayo ni kumbukumbu ya wazo la kawaida la kujifunza ambapo kutolewa kwa dopamini katika VMS iliyoinuliwa na kichocheo kinachohusiana na malipo kunapungua wakati kichocheo hicho kinatabiriwa kwa muda.38,39. Walakini, kusudi la kutolewa kwa dopamine wakati wa kujitawala kunatokea baadaye sana katika mchakato wa kujifunza kuliko unavyotarajiwa kwa kujifunza kwa dharura, muda mrefu baada ya kupatikana kwa madawa ya kulevya. Zaidi ya hayo, katika wanyama ambao hawazidishi ulaji wao wa dawa za kulevya, upeanaji wa kutolewa kwa dopamine ya phasic haifanyika hata wanyama hawa huonyesha tabia ya kibaguzi ya asymptotic.
Kwa thamani ya uso, uchunguzi wetu wa kupungua kwa kutolewa kwa dopamine wakati matumizi ya dawa zinaendelea kuonekana kuwa hayana uhusiano wowote na nadharia kadhaa za kisasa za ulevi. Nadharia zinazozingatia michakato ya uhamasishaji inayosababishwa na dawa za kulevya husimamia kuongezeka kwa mfumo wa dopamine ya VMS juu ya kufichua mara kwa mara kwa madawa ya kulevya ambayo inaleta majibu yaliyosisitizwa kwa udhihirisho wa madawa ya kulevya na dalili40, uzushi ambao ni nguvu hasa baada ya LgA41. Tafakari juu ya jukumu la kujifunza kwa wahamiaji na malezi ya tabia katika ulevi wa madawa ya kulevya zinaonyesha kwamba kuibuka kwa dopamine kwenye DLS inazidi kudhibiti udhibiti wa utaftaji wa dawa za kulevya.1,14,16. Kwa kuongezea, mifano maarufu ya ushirika ya ulevi husababisha kuongezeka kwa ishara ya dopamine kwa tabia zinazohusiana na dawa kama nguvu inayoongoza kuelekea ulevi.42,43. Kinyume chake, matokeo yetu yanaonekana kuwa sawa na maoni ya dopamine ya upungufu wa madawa ya kulevya, uliopendekezwa na Dackis na Dhahabu44, na nadharia zinazohusiana na mchakato wa mpinzani21 ambayo inasisitiza kukandamiza utumiaji wa madawa ya kulevya kwa michakato inayohusiana na thawabu. Ukandamizaji kama huo umechangiwa ili kusababisha udhibiti wa kibinafsi wa matumizi ya dawa ili kudumisha kiwango kinachopendekezwa cha ulevi21. Hasa, wanadamu na wanyama walipa fidia kwa kipimo cha dari ya kafeini iliyo na majibu zaidi45,46. Utaratibu huu umewekwa na maambukizi ya dopamine katika VMS8 na, kwa sababu hiyo, kupunguza maambukizi ya dopamine (kwa mfano, na dopamine receptor antagonism) husababisha kuongezeka kwa kiwango cha matumizi ya dawa za kulevya28,29. Kwa hivyo, kupunguzwa kwa ishara dopamine ambayo tuliona wakati wa LgA kunaweza kuchochea uandikishaji wa ulaji wa madawa ya kulevya ili kufikia kiwango cha ulevi. Kwa kuunga mkono dhana hii, kupunguzwa kwa dopamine katika VMS kulitamkwa sana kwa wanyama ambao walionesha kuongezeka kwa matumizi ya dawa za kulevya.
Kwa hivyo, tuliamua kwamba kurejesha maambukizi ya dopamine kunaweza kuongezeka. Kwa kweli, usimamizi wa L-DOPA ulikuwa na ufanisi katika kuzuia na kurudisha nyuma kuongezeka kwa ulaji wa dawa za kulevya. Kwa kweli, athari za L-DOPA juu ya matumizi ya dawa hazikuvumilia kufuatia kukomeshwa kwa matibabu, ikionyesha kwamba haikuzuia neuroadaptation ya msingi. Kwa hivyo, data zetu zinaonyesha kuwa kuongezeka kunapatanishwa na mchakato ambao unadhihirishwa kupitia kupungua kwa dopamine ya phasic wakati wa kuchukua dawa. Matokeo haya hutoa habari ya kiufundi kwa matumizi ya L-DOPA katika matibabu ya kliniki ya unyanyasaji wa kisaikolojia, mkakati ambao umeahidi, lakini jumla mchanganyiko, matokeo katika idadi ndogo ya majaribio ya kliniki ya hivi karibuni47. Hasa, kwa kuwa L-DOPA ilipunguza matumizi ya dawa yaliyoenea bila kuzaa, tunapendekeza inafaa kwa njia za kupunguza athari na, haswa, kuruhusu watumizi wa madawa ya kulevya kupata tena kiwango cha udhibiti wa utumiaji wao wa dawa wakati wa kuingia kwenye programu za matibabu ya tabia. Kwa jumla, matokeo yetu yanaonyesha kupungua kwa kutolewa kwa dopamine ya phasic ambayo hufanyika wakati wa ufikiaji wa madawa ya kulevya ambao huingilia mabadiliko kutoka kwa burudani kwenda kwa matumizi ya dawa yasiyodhibitiwa.
Mbinu
Wanyama
Panya wazima wa kiume Wistar kutoka kwa Charles River (Hollister, CA, USA) wenye uzito kati ya 300g na 400g waliwekwa nyumba moja kwa moja na waliwekwa kwenye mzunguko wa giza wa 12-h / 12-h (taa kwenye 0700) na joto lililodhibitiwa na unyevu na chakula na maji inapatikana ad libitum. Matumizi yote ya wanyama yalipitishwa na Kamati ya Utunzaji wa Wanyama na Matumizi ya Taasisi ya Washington, na michakato ya upasuaji ilifanywa chini ya hali ya aseptic. Kwa majaribio ya voltammetry 50 wanyama walifanywa upasuaji, ambao 29 ilidumisha patency ya catheter wakati wote wa majaribio, ilikuwa na angalau moja ya kazi ya umeme na dhibitisho ya kihistoria, na vigezo vya tabia vilipita (tazama hapa chini). Kwa majaribio ya kifamasia, 28 ya panya 32 iliyowekwa ndani ya catheter, ilidumisha patency ya catheter ya intravenous na ilitumiwa kwenye utafiti. Wanyama walishindiliwa katika vikundi vya majaribio kulingana na kiwango cha kujisimamia wakati wa mafunzo ya majaribio ya ShA. Sampuli za ukubwa ni sawa na zile zilizoripotiwa katika machapisho ya zamani13.
Upasuaji Stereotaxic
Panya zilishughulikiwa na isoflurane, kuwekwa katika mfumo wa stereota sumu, unasimamiwa na carprofen isiyo yaerozi ya kuzuia uchochezi (5 mg / kg, kwa njia ya chini), na kuwekwa kwenye pedi ya joto ya mwili ili kudumisha joto la mwili. Ngozi hiyo ilivutwa na pombe na betadine, ikanawa na mchanganyiko wa lidocaine (0.5 mg / kg) na bupivacaine (0.5 mg / kg), na ikabuni kufunua cranium. Mashimo yalichimbwa kwenye cranium na dura dari ilisafishwa kwa kulenga DLS (1.2-mm anterior, 3.1-mm imara na 4.8-mm ventral hadi Bregma48) na kiini kinakua msingi wa VMS (1.3-mm anterior, 1.3-mm lateral na 7.2-mm ventral kwa Bregma). Microelectrode moja ya kaboni-fiber iliyotengenezwa ndani ya nyumba25 iliwekwa katika VMS na nyingine katika DLS, na elektroli ya rejista ya Ag / AgCl iliingizwa katika sehemu tofauti ya mtaro. Katika seti tofauti za wanyama, mwongozo wa bangi (chachi ya 26; Plastiki ya kwanza, Roanoke, VA, USA), iliyotumiwa na bangi za "dummy" za urefu sawa, ziliingizwa pande mbili ili kulenga VMS. Electrodes na cannula ya mwongozo ililindwa na saruji ya cranioplastic iliyowekwa kwenye fuvu na vis. Kufuatia upasuaji, panya zilisimamiwa na carprofen ya muda mrefu, isiyo ya kupambana na uchochezi (5 mg / kg, subcutaneally) na kuwekwa kwenye pedi ya joto ya mwili ili kudumisha joto la mwili mpaka ambulati. Wanyama wote waliingizwa kwa catheters ya ndani wakati wa upasuaji tofauti wiki moja baadaye.
Uingizaji wa catheters za ndani
Panya walilazwa na isoflurane, iliyosimamiwa na carprofen ya kupambana na uchochezi ya nonsteroidal (5 mg / kg, chini), na kuwekwa kwenye pedi ya isothermal kudumisha joto la mwili. Catheters zilitengenezwa kwa neli ya silika na kipenyo cha nje cha 0.6 mm na kuambatanishwa na "kitovu" mwisho mmoja (mbali na kuingizwa kwa mshipa; Plastics One, VA, USA) kwa unganisho na pampu ya infusion. Catheters zilisukumwa kwa njia ndogo kupitia mkato nyuma kati ya mabega hadi mbele ya mwili, na kutia nanga kwenye mshipa wa kulia uliosaidiwa na shanga ya mpira wa silicon karibu na mwisho wa catheter. Nafasi bora ya catheter ilithibitishwa kwa kuchora damu ndani yake na shinikizo hasi. Kitovu hicho kilikuwa kimehifadhiwa na kipande cha matundu ya Teflon kilichoshonwa kwa tishu zinazozunguka na njia zilifungwa, na kuacha kitovu kikijitokeza nyuma ya panya. Katheta kisha ikachomwa na suluhisho la heparini (80 U / ml kwenye chumvi) na kujazwa suluhisho la mnato la polyvinylpyrolidone (PVP) na heparini (1000 U / ml). Kitovu cha katheta kilifunikwa na kipande kifupi kilichokatwa cha neli ya polyethilini na suluhisho la PVP lilibaki kwenye katheta ili kuhakikisha patency. Kufuatia upasuaji, panya waliruhusiwa kupona angalau siku tano.
Uwekezaji wa Cocaine
Vikao vya kujisimamia viliendeshwa kati ya 0900 na 1700 hr. Panya alijifunza kujisimamia cocaine (Sigma, St. Louis, MO, USA) katika chumba cha kawaida cha waendeshaji (Med Associates, VT, USA) iliyo na vifaa viwili vya kujibu pua (bandari na taa zilizojumuishwa za cue) ziko kwenye paneli karibu. ya ukuta huo huo, taa ya nyumba na wasemaji kutoa sauti safi na sauti-nyeupe-kelele. Chumba cha waendeshaji kiliwekwa ndani ya chumba cha nje kikiwa na sauti. Panya (umri wa miezi ya 3-4) walipata mafunzo kupata cocaine kufuatia jibu la muendeshaji kwenye ratiba ya uimarishaji ya FI20. Kuweka pua katika bandari inayofanya kazi (upande unaoingiliana kati ya wanyama) ilisababisha kuingizwa kwa kikaidi mara moja kwa koga (0.5 mg / kg zaidi ya sekunde kumi) iliyoandaliwa na uwasilishaji wa 20-pili ya kichocheo cha kutazama audiovisual (mwangaza wa taa ndani ya pua. bandari ya poke na sauti; kichocheo kilicho na masharti, CS). Wakati wa uwasilishaji wa CS, wakati wa pili wa 20 uliwekwa wakati ambapo kupiga pumzi hakukuleta kuingizwa zaidi kwa dawa au matokeo mengine yoyote yaliyopangwa. Kupatikana kwa madawa ya kulevya wakati wa kikao kilionyeshwa na kelele nyeupe na taa ya taa ya nyumba. Ili kudhibiti ujanibishaji wa majibu, pua ya bandari ya pili (isiyo ya kazi) ilifuatiliwa, lakini haikuimarishwa kamwe. Kufuatia vikao vya mafunzo ya mapema na kigezo cha majibu matano au zaidi ya kazi kwa kila kikao kimoja mfululizo cha kuingizwa kwenye masomo, panya zilipewa ufikiaji wa kila siku wa kokeini kwa saa moja kwa siku (ufikiaji mfupi; ShA) kwa wiki moja na kisha sita masaa kwa siku (ufikiaji mrefu; LgA) kwa wiki tatu (siku tano kwa wiki). Idadi ya vikao vya kufikia kigezo kilitofautiana kati ya wanyama kutoka kwa vipindi viwili hadi vitano. Matokeo ya mwenendo kutoka kwa kikundi cha kudhibiti kilichoripotiwa hapo awali13 zilitumika kama msingi wa kulinganisha data ya kitabia kutoka kwa panya zinazoendeshwa na uboreshaji wa kahawa ya LgA kwa panya zilizofunzwa chini ya usajili wa ShA wa idadi sawa ya siku.
Baada ya majuma matatu ya ShA au LgA ya kujiendesha kwa kahawa ya FI20, sehemu ndogo ya panya ilifanywa kwa kipimo cha uwiano cha maendeleo. Vipindi hivi vilikuwa sawa na vikao vya FI20 isipokuwa kwamba wanyama walitakiwa kufanya majibu yanayoongezeka ya wahusika kwa infusions mfululizo za cocaine wakati wa kikao hiki. Sharti ya muendeshaji kwa kila jaribio (T) ilikuwa hesabu iliyozungukwa ya chini ya 1.4(T - 1) vyombo vya habari vya lever, kuanzia 1 lever Press (hiyo ni, 1, 1, 1, 2, 3, 5, 7, 10, 14, 20, 28, 40, 56, 79, 111, 155, 217, 304, 426, XNUMX, XNUMX, XNUMX . Sharti la kazi hii inakuwa juu sana mwishowe wanyama huacha kujibu na kufikia "mahali pa kupumzika". Sehemu ya mapumziko ilifafanuliwa kwa operesheni kama jumla ya infusions iliyopatikana kabla ya kipindi cha dakika thelathini wakati ambao infusions hazipatikana.
L-DOPA / Benserazide utawala
L-DOPA (L-3,4-dihydroxyphenylalanine) ilitolewa pamoja na kaimu anayehusika wa DOPA decarboxylase inhibitor Benserazide ili kupunguka kuvunjika kwa pembeni kwa L-DOPA (wote kutoka Sigma, St. Louis, MO, USA). Dawa zote mbili zilifutwa katika chumvi na kuingizwa kwa ndani kwa kiwango cha uzito wa mwili wa 1 ml / kg. L-DOPA ilitekelezwa dakika ya 30 kabla ya kuanza kwa kikao saa 0, 10, 30, au 90 mg / kg, wakati Benserazide ilipewa mara kwa mara kwa kiwango cha 2 mg / kg bila kujali kipimo cha L-DOPA kilichosimamiwa. Katika seti ya kwanza ya masomo (majibu ya kipimo), panya walitibiwa na L-DOPA kwa siku moja (Mtini. 4). Hakuna kipimo cha kipimo cha L-DOPA kinachotumiwa utendaji wa jumla au kilichosababisha dyskinesia. Ili kuepusha athari zinazoweza kufadhaisha za usimamizi wa mara kwa mara wa L-DOPA, panya zilifunzwa bila matibabu ya L-DOPA kufuatia "vikao vya L-DOPA". Katika seti ya pili ya masomo, wanyama walitibiwa na hizi L-DOPA kabla ya kila kikao cha kujitawala kwa kipindi cha hadi wiki mbili (Mtini. 5). Katika seti ya tatu ya tafiti, panya ambazo zilionesha hali ya kujisimamia ya kokaini wakati wa LgA, athari za uchochezi wa nchi mbili wa L-DOPA (25-50 µg kufutwa katika 0.5 µl ACSF katika kila mzunguko; 0.25 Xl / min; Sigma, St. Louis, MO, USA) na ACSF ndani ya VMS juu ya tabia ya kuchukua dawa zilichunguzwa. Katika siku za infusion, cannula ya dummy ilibadilishwa na cannula ya uingilizi wa kipimo cha 33-iliyopunguka 1.0 mm zaidi ya cannula ya mwongozo. Infusions walipewa dakika kumi kabla ya kuanza kwa kikao. Baada ya infusion, bangi zilibaki mahali kwa dakika mbili kabla ya kuondolewa ili kuruhusu utengamano wa dawa.
Vipimo vya uchambuzi wa voltammetric
Kwa ugunduzi wa dopamine na voltlic ya skirti ya haraka-wakati wa vipindi vya majaribio (rekodi zilizofanywa wakati wa vikao viwili kwa wiki), microsensors zilizowekwa ndani ya kaboni ziliunganishwa na kisukuku cha voltammetric, kilichoingiliana na mfumo wa upatikanaji wa data na mfumo wa uchambuzi wa PC. (Vyombo vya Kitaifa, TX, USA) kupitia swivel ya umeme (Med Associates, VT, USA) iliyowekwa juu ya chumba cha majaribio. Vipimo vya voltammetric vilirudiwa kila 100 ms kufikia kiwango cha sampuli ya 10 Hz. Wakati wa kila skoti ya voltammetric, uwezo wa umeme wa kaboni-fiber ulipigwa kutoka kwa −0.4 V dhidi ya Ag / AgCl hadi + 1.3 V (kufagia kwa anodic) na nyuma (kufagia kwa cathodic) kwa 400 V / s (8.5-ms Jumla ya wakati wa skirini ) na iliyofanyika −0.4 V kati ya skizi. Wakati dopamine iko kwenye uso wa elektroni, hutiwa oksidi wakati wa kufagia kwa anodic kuunda dopamine-o-quinone (athari ya kilele kilichogunduliwa kwa takriban + 0.7 V) ambayo hupunguzwa kurudi kwa dopamine kwenye kufagia kwa cathodic (athari ya kilele kilichogunduliwa kwa takriban −0.3 V). Flux inayofuata ya elektroni hupimwa kama ya sasa na inahusiana moja kwa moja na idadi ya molekuli ambazo hupitia umeme. Takwimu ya voltammetric ilichujwa kwa kupita kwa 0.025 - 2,000 Hz. Usuli uliyotengwa, uliosimamiwa kwa wakati uliopatikana kutoka kwa kila skati ulitoa saini ya kemikali ya mchambuzi, ikiruhusu azimio la dopamine kutoka kwa vitu vingine49. Dopamine ilitengwa na ishara ya voltammetric na uchambuzi wa chemometri kwa kutumia seti ya mafunzo ya kiwango25 msingi wa kutolewa kwa dopamine ya umeme iliyogunduliwa na elektroni zilizoingizwa mara kwa mara. Mkusanyiko wa dopamine ulikadiriwa kwa msingi wa unyeti wa wastani wa uingizwaji wa elektroni25. Kabla ya kuchambua mkusanyiko wa wastani, data zote zilisambaratishwa na kiwango cha 5 ndani ya wastani wa wastani wa jaribio. Mkusanyiko wa dopamine uliongezwa kwa zaidi ya sekunde saba (takriban ishara ya ishara ya phasic) kufuatia majibu ya mwendeshaji (majibu baada ya) au uwasilishaji usio na utata wa CS na ililinganishwa na mkusanyiko wa wastani kwa sekunde mbili kabla ya mfanyakazi. majibu (msingi). CS iliwasilishwa bila ya ubishani wakati wa kila kikao cha kurekodi kilichofanywa katika wiki ya pili na ya tatu (mara mbili kwa kila kikao kwa sekunde za 20 kila mmoja), lakini sio wakati wa wiki ya kwanza ili kuzuia kuingiliwa na hali ya ushirika kati ya utoaji wa dawa na cue wakati wa kipindi ambapo chama hiki kilikuwa bado kinaendelea.
Uchambuzi wa takwimu
Ishara za elektroniki za mtu binafsi ziliongezwa katika kipindi chote cha kujisimamia, na kisha kwa wanyama na wiki, ili kuongeza nguvu ya takwimu. Ishara zililinganishwa kwa kutumia ANOVA za multivariate na majibu, eneo la ubongo, ulaji wa cocaine, na wiki kama sababu. Kwa kulinganisha na data ya umeme, data za tabia pia ziliwekwa ndani ya wiki. Kwa majaribio ya L-DOPA, data ya tabia (wastani wa siku ikiwa inasimamiwa kwa siku mfululizo) ya matibabu fulani ya dawa (hakuna matibabu, kipimo cha L-DOPA, au gari) zilichambuliwa kwa kutumia ANOVA za multivariate na matibabu ya dawa, regimen ya ulaji, cocaine, na wiki kama sababu. Katika kesi ya athari kuu kuu au mwingiliano, uchambuzi wa baada ya hoc ulifanywa na P maadili yalibadilishwa kulingana na njia ya marekebisho ya Holm-Bonferroni kwa majaribio mengi50. Viwanja vilitengenezwa kwa kutumia Prism (Programu ya GraphPad, La Jolla, CA, USA). Uchambuzi wa takwimu ulifanyika kwa kutumia SPSS, toleo la 17.0 (Chicago, IL, USA) na Prism. Takwimu zinafaa kwa uchambuzi wa takwimu. Mkusanyiko wa data na uchambuzi haukufanywa wazi kwa hali ya majaribio.
Uthibitisho wa kihistoria wa tovuti za kurekodi
Juu ya kukamilika kwa majaribio, wanyama walishonwa bila sindano ya ndani ya ketamine (100 mg / kg) na xylazine (20 mg / kg). Katika wanyama walio na implode za elektroni, tovuti za kurekodi ziliwekwa alama na lesion ya elektroni (300 V) kabla ya kuchomwa kwa mafuta na chumvi iliyofuatiwa na 4% -paraformaldehyde. Wabongo waliondolewa na kusanikishwa katika paraformaldehyde kwa masaa ishirini na nne na kisha waliohifadhiwa haraka katika umwagaji wa isopentane, uliowekwa kwenye kilio cha fuwele (sehemu za kutu za 50-−m, UM20 ° C), na kubadilishwa na cresyl violet kusaidia kuona. miundo ya anatomiki na vidonda vya elektroni-ikiwa au tovuti za infusion.
Vifaa vya ziada
1
8
9
10
11
2
3
4
5
6
7
Shukrani
Tunawashukuru Scott Ng-Evans, Christina Akers Sanford, Chad Zietz, Nicole Murray, na Daniel Hadidi kwa msaada wa kiufundi, na Monica Arnold na Jeremy Clark kwa maoni muhimu. Kazi hii iliungwa mkono na Kituo cha Utafiti cha Ujerumani (Deutsche Forschungsgemeinschaft, DFG) Grant WI 3643 / 1-1 (IW), tuzo kutoka Taasisi ya Pombe na Dawa (PEMP) na Mpeana wa Chuo Kikuu cha Washington (PEMP), na Taasisi za Kitaifa. ya ruzuku ya Afya T32-DA027858 (LMB), F32-DA033004 (PAG), P01-DA015916 (PEMP), R21-DA021793 (PEMP) na R01-DA027858 (PEMP).
Maelezo ya chini
Michango ya Mwandishi
IW na PEMP walifanya utafiti, IW, LMB, na PAG walifanya utafiti, na data ya IW ilichambua; IW na PEMP waliandika karatasi.
Maelezo ya Mwandishi
Waandishi hutangaza hakuna mgongano wa maslahi.
Marejeo