Optogenetics inaonyesha jukumu la neurons za spiny za kati zilizoeleza dopamine D2 receptors katika uhamasishaji wa tabia ya cocaine (2014)

Nenda:

abstract

Vipimo vya muda mrefu, vinavyotokana na madawa ya kulevya ndani ya kiini accumbens (NAc) vimependekezwa kuchangia kwenye tabia za kupambana na dawa za kulevya. Hapa tumeutumia mbinu ya optogenetic kuchunguza jukumu la necons spic ya kati ya NAc (MSNs) inayoonyesha dopamine receptors D2 (D2Rs) katika uhamasishaji wa tabia ya cocaine. Veno vimelea vinavyohusishwa na Adeno-encoding channelrhodopsin-2 (ChR2) vilitolewa kwenye NAC ya panya ya D2R-Cre transgenic. Hii ilituwezesha kuchagua photostimulate D2R-MSN katika NAC. D2R-MSN huunda nyaya za kuzuia ndani, kwa sababu photostimulation ya D2R-MSN imetoa maambukizi ya postsynaptic inhibitory (IPSCs) katika MSNs za jirani. Pichatimulation ya NAc D2R-MSN katika vivo hawakuathiri uanzishwaji wala utii wa uhamasishaji wa tabia ya cocaine. Hata hivyo, photostimulation wakati wa uondoaji wa madawa ya kulevya attenuated kujieleza ya cocaine-ikiwa tabia ya uhamasishaji. Matokeo haya yanaonyesha kwamba D2R-MSN za NAc zina jukumu muhimu katika ustawi wa ngozi na huweza kuchangia tena baada ya kukomesha matumizi mabaya ya madawa ya kulevya.

Keywords: optogenetics, neurons kati ya spiny, dopamine receptors D2, cocaine, madawa ya kulevya

kuanzishwa

Dopamine (DA) ishara inahusishwa na matarajio ya malipo na tabia iliyoongozwa na lengo (Uwekimaji, 2004; Goto na Grace, 2005; Berridge, 2007). Moja ya maambukizi maalumu ya matatizo ya dopaminergic ni madawa ya kulevya (Robinson na Berridge, 1993, 2003). Ufuatiliaji mara kwa mara na dutu za kulevya, mabadiliko ya mabadiliko hutokea kwenye ngazi ya molekuli na za mkononi katika njia ya macho ya DA; hizi zinaweza kusababisha utegemezi wa madawa ya kulevya, ambayo ni ugonjwa wa kudumu, unarudia tena ambao tabia za kulazimisha madawa ya kulevya na madawa ya kulevya huendelea pamoja na matokeo mabaya mabaya (Thomas et al., 2008; Baik, 2013). Tabia ya marekebisho yanayotokea katika mfumo wa dopaminergic ya macho ni muhimu kwa kuelewa madawa ya kulevya.

Dopamine D1 receptors (D1R) na D2 receptors (D2R) zinaonyesha sana katika neurons ya spiny kati (MSNs) ya striatum. Imependekezwa kuwa mabadiliko ya muda mrefu ya madawa ya kulevya katika hatua ya mviringo, inayojulikana zaidi kama kiini accumbens (NAc), huchangia maendeleo ya kulevya pamoja na tabia za kutafuta madawa ya kulevya na kurejesha tena (Lobo na Nestler, 2011; Smith et al., 2013). Miili ya kiini ya dopaminergic kutoka kwenye eneo la kijiji kinachotumiwa zaidi ya asili ya NAC. Zaidi ya 95% ya seli ndani ya NAc ni MSN, ambazo hupokea pembejeo za kuchochea kutoka mikoa minne ya ubongo: kisiwa cha prefrontal, subiculum ya ventral ya hippocampus, amygdala ya msingi, na thalamus (Sesack na Grace, 2010; Lüscher na Malenka, 2011). MSNs ndani ya NAc zinaweza kugawanywa katika sehemu mbili kuu: njia za moja kwa moja za MSN zinazoonyesha D1R na mradi moja kwa moja kwa maeneo ya DA midbrain, na njia zisizo za moja kwa moja za MSNs zinazoonyesha D2R na mradi kwa pallidum ventral (Kreitzer na Malenka, 2008; Sesack na Neema, 2010; Lüscher na Malenka, 2011; Smith et al., 2013). Kwa sababu MSN ni GABAergic, uanzishaji wa neurons MSN itakuwa kuzuia malengo yao ya chini ambayo pia GABAergic (Chevalier na Deniau, 1990). Kwa hiyo, uanzishaji wa D1R-MSNs utavutia msukumo wa DA, ambao unachangia udhibiti wa tabia zinazohusiana na malipo (Lüscher na Malenka, 2011; Bocklisch et al., 2013).

Uchunguzi wa hivi karibuni kwa kutumia panya za maumbile zinazozalishwa kwa njia ya aina ya seli zinaonyesha tofauti tofauti za D1R-MSN na D2R-MSNs katika tabia za kulevya za cocaine. Panya hizo huwezesha kulenga maumbile ya sumu, vipimo vya optogenetic au DREADD (vijiti vya kubuni tu vilivyoamilishwa na dawa ya kubuni) ili kuchagua D1R-MSN au D2R-MSN. Njia hii imesababisha makubaliano juu ya jukumu la MSN katika tabia za kulevya: D1R-MSNs inaonekana kukuza tabia za kulevya, wakati hakuna jukumu maalum (au jukumu la kuzuia) katika maendeleo ya tabia za kulevya za kulevya zilipendekezwa kwa D2R-MSNs (Hikida et al., 2010; Lobo et al., 2010; Ferguson et al., 2011; Bock et al., 2013). Mkazo wa Cocaine inaelezea mabadiliko ya synaptic na mabadiliko katika kujieleza kwa jeni katika wakazi wote wa MSN (Lobo et al., 2010; Lobo na Nestler, 2011; Grueter et al., 2013). Ingawa inaonekana kwamba D1R-MSNs na D2R-MSNs hucheza majukumu ya kupinga katika tabia za kulevya za kikaboni, jukumu sahihi la D2R-MSN si wazi.

Hapo awali imeonyeshwa kuwa panya ya D2R (KO) huonyesha uhamasishaji wa kawaida wa cocaine-mediated tabia na tabia ya kutafuta cocaine, na kupunguza kidogo tu kwa uelewa unasababishwa na kukosekana kwa D2R (Baik et al., 1995; Chausmer et al., 2002; Sim et al., 2013). Hata hivyo, kutolewa kwa dhiki wakati wa uondoaji wa madawa ya kulevya huzuia kujieleza kwa uhamasishaji wa tabia ya cocaine ikiwa ni pamoja na kutafuta kiafya na kurejesha tena katika panya D2R KO (Sim et al., 2013). Kushindwa kwa kina kwa D2R katika NAC hakuathiri shughuli za kupiga basal, au uhamasishaji wa tabia ya cocaine, lakini hutoa uwezo wa shida kuzuia kujieleza kwa uhamasishaji wa tabia ya cocaine (Sim et al., 2013). Matokeo haya yanaonyesha kuwa blockade ya D2R katika NAC haizuii uhamasishaji wa tabia ya cocaine. Badala yake, inaonekana kwamba D2R katika NAC ina jukumu tofauti katika udhibiti wa marekebisho ya synaptic yaliyosababishwa na matatizo wakati wa uondoaji unaosababishwa na kuongezeka kwa tabia za kukodisha na kusafiri (Sim et al., 2013).

Hapa tumeutumia optogenetics ili tathmini zaidi jukumu la NAc D2R-MSN katika uhamasishaji wa tabia ya cocaine. Kutumia vipande vya ubongo, tunaona kuwa photostimulation ya D2R-MSNs inasababisha nyaya za kuzuia ndani ndani ya NAc zinazohusisha MSNs jirani. Pichatimulation ya NAc D2R-MSNs katika vivo haiathiri uanzishwaji wala uelewa wa uhamasishaji wa tabia ya cocaine. Hata hivyo, uanzishaji wa mara kwa mara wa NAc D2R-MSN wakati wa kipindi cha uondoaji wa madawa huzuia tabia ya kulevya ikiwa ni ya kulevya. Matokeo yetu yanaonyesha kwamba D2R-MSN ya NAc hufanya jukumu muhimu katika upasuaji uliotokana na uondoaji na huweza kuchangia tena baada ya kukomesha matumizi mabaya ya madawa ya kulevya.

Vifaa na mbinu

Panya

D2-Cre BAC pembe transgenic kwenye historia ya C57Bl / 6 ilitolewa kutoka MMRRC (Kituo cha Rasilimali za Mkoa wa Mutant Mouse, B6.FVB (Cg) -Tg (Drd2-cre) ER44Gsat / Mmucd). Katika majaribio ya tabia, wastaafu wasio na D2-Cre walipatikana kama udhibiti kwa panya D2-Cre. Panya zilihifadhiwa katika kizuizi cha kizuizi cha kinga zisizo na pathogen chini ya hali ya kawaida ya joto na unyevu, na kwa mwanga wa 12-h, ratiba ya 12-h nyeusi. Huduma za wanyama na utunzaji zilifanywa kwa mujibu wa viwango vinavyoidhinishwa na Kamati za Huduma za Wanyama na Taasisi za Matumizi ya Chuo Kikuu cha Korea na KIST.

Maandalizi ya vector ya Virusi

PAAV-EF1a-DIO-hChR2 (H134R) -EYFP-WPRE ilitolewa kwa ukarimu na Karl Deisseroth (Stanford Univ.). Kwa ajili ya maandalizi ya AAV, seli za HEK293T zilipandwa katika vyombo vya habari vya DMEM na antibiotics na FBS. Siku moja kabla ya kuambukizwa, sahani nne zaidi ya 90% confluence kutoka sahani ya 10-cm zilijaa kwenye sahani tano za 15-cm na zimewekwa kwa 18-22 h au hadi 60 hadi 70% confluence. HEK293T seli zilihamishwa na pAAV-DIO-ChR2-EYFP, pAAV-DJ na pHelper kwa kutumia reagent ya transfusion ya jetPEI (QBiogene). Vipodozi vya DNA / DMEM / PEI vortexed na incubated kwa joto la kawaida kwa 20 min. Baada ya kuingizwa, mchanganyiko wa transfection uliongezwa kwenye kila sahani ya 15 cm. Vipengele vilivyotambuliwa vimevunwa 48 h baada ya kuambukizwa na kuingizwa kwa 0.5% deoxycholate ya sodiamu (Sigma; D6750) na vitengo vya 50 / ml ya nuclease ya benzonase (Sigma; E1014) saa 37 ° C kwa 1 h. Baada ya kuondoa uchafu wa seli kwa centrifuging katika 3000 × g kwa 15 min, supernatant ilichujwa kupitia 0.45 mm PVDF filter (Millipore). Utakaso wa chembe za AAV- DJ zilifanyika kwa kutumia nguzo za heparini za HiTrap (GE Healthcare). Kwa mkusanyiko wa AAV, vitengo vya chujio vya Amicon Ultra-15 vya centrifugal na cutoff za uzito wa 100,000 zilikuwa zinatumika. Virusi iliyojitokeza aliquoted na waliohifadhiwa kwa ajili ya kuhifadhi katika -80 ° C. Viwango vya mwisho vya virusi ilikuwa 3 ~ 6 × 1012 chembe za virusi kwa ml kwa kila AAV.

Sindano ya Stereotaxic na uwekaji wa fiber ya macho

Wanyama walilazwa na sindano za ip ya 1.6 µl ya Zoletil na 0.05 µl ya xylazine (Rompun, Bayer) kwa gramu ya uzani wa mwili na kuwekwa kwenye vifaa vya stereotaxic (David Kopf Instruments, Tujunga, CA). Kwa sindano ya virusi, sindano ya sindano yenye kipimo cha 31 ilitumika kuingiza 2 ofl ya virusi katika NAc kwa pembe ya 0 ° (AP +1.7; ML ± 1.3; DV -4.5) kwa kiwango cha 0.1 ul / min. Sindano iliachwa mahali kwa dakika 10 baada ya sindano kabla ya kutolewa pole pole. Njia ya nyuzi-nyuzi ya kupandikiza ilikuwa na feriule ya zirconia (kipenyo cha 1.25 mm na urefu wa 4.5 mm) na ncha tambarare ya nyuzi ya macho (kipenyo cha 200 µm). Kuingizwa kwa kanuni ya nyuzi-nyuzi ndani ya NAc kwa mwangaza wa D2-MSNs ilifanywa mara tu baada ya sindano ya virusi. Uratibu wa upandikizaji wa cannula ya fiber-optic ulikuwa pembe ya 0 ° (AP +1.7; ML ± 1.35; DV -4.2) kwa kulenga NAc. Ili kusaidia kutia nanga nyuzi za macho, screws mbili zilitia nanga ndani ya fuvu nyuma ya tovuti ya kupandikiza ya cannula ya fiber-optic. Ili kurekebisha cannula ya fiber-optic kwenye fuvu, C & B Superbond (Sun Medical) ilitumika kwenye uso wa fuvu karibu na msingi wa cannula. Mara tu C & B Superbond ikawa ngumu, kanuni hiyo ilitolewa kutoka kwa mmiliki na saruji ya meno (Poly-F, Dentsply) ilitumiwa kuzunguka cannula na screws. Ili kufunga mkato karibu na wavuti ya unyonyaji, wambiso wa tishu ya Vetbond (3 M, 7003449) ilitumika. Baada ya kupandikizwa, panya walipewa sindano ya chini ya ngozi ya antibiotics (Enrofloxacin, 5 mg / kg, q 12 h) na analgesia (Carprofen, 5 mg / kg, q 24 h) kwa siku 3 mfululizo.

Katika vivo photostimulation

A 200 μm kamba ya kamba iliunganishwa na sehemu ya nje ya fiber ya kuingizwa kwa muda mrefu kwa kutumia sleeve. Fiber optical zilizounganishwa kwa njia ya adapter FC / PC kwa diode ya bluu ya laser (473 nm, MBL-III 473-150 mW), na pembe za mwanga zilizalishwa kupitia stimulator (BNC 575). Kwa pichatimulation ya neurons zinazoonyesha ChR2, dhana ya kuchochea ilikuwa mzunguko wa 20 Hz, muda wa XMUMX ms na 5-2 mW ya nguvu nyepesi. Nguvu ya nuru iliyotolewa kutoka kamba ya kiraka ilipimwa kwa kutumia mita ya nguvu (PM5D) na sensor ya S100C.

Uchambuzi wa tabia

Majaribio ya tabia yalifanywa na panya za kiume D2-Cre katika umri wa wiki 11-13, isipokuwa panya zilizotokana na uchambuzi wa electrophysiological ambao ulikuwa na umri wa wiki za 5-6. Vidonge vya kudhibiti D2-Cre na Cre vinavyoathiri umri wa umri vilikuwa vimejitenga na virusi na vilivyowekwa moja kwa moja na kuruhusiwa kupatiwa kwenye ngome mpaka mtihani wa tabia. Kwa kila kudanganywa, panya zilihamishiwa kwenye chumba cha majaribio min minara ya 60 kabla ya kuanza kwa majaribio ili kuruhusu habituation na kupunguza matatizo (mwangaza wa chumba cha majaribio ilikuwa ya 70 lux). Kila vifaa vya majaribio vilifanywa na 70% ethanol kati ya majaribio ili kuondoa cues yoyote ya harufu nzuri.

Uhamasishaji wa Cocaine

Kwa kuanzishwa kwa uhamasishaji wa cocaine, panya zilizotumiwa kwa sindano za salini (ip) kwa siku za mfululizo wa 3 na kisha zinajitenga na salini au cocaine (15 mg kg-1, ip) kwa siku za mfululizo wa 5. Panya zilijeruhiwa kwa intraperitoneally (ip) ikiwa ni pamoja na cocaine hydrochloride (Johnson Mattney, Edinburgh, Uingereza) iliyofanywa katika saline (0.9% NaCl) au salini na sindano ya 30 G. Mara baada ya sindano kila, panya zilijaribiwa kwa shughuli za kupangilia ya usawa katika chumba cha wazi cha uwanja kwa minada ya 30. Kwa kipimo cha athari ya pichatimulation juu ya kuanzishwa na kujieleza ya uhamasishaji (Kielelezo (Kielelezoâ € <â € <â € <5), 5), panya zilipewa mwanga wa rangi ya bluu kwa njia mbili kwa njia ya kamba mbili za fiber-optic kwenye NAC kwa vipindi vinne vya 3 wakati wa vikao vya 30 katika mabwawa ya nyumbani. Kamba za kamba kutoka kwenye cannula ya fiber-optic zilizopo kwenye fuvu la panya ziliondolewa na panya zilipewa angalau kupumzika kwa 10. Panya kisha kuingizwa na cocaine au salini (coc 1d-coc 5d). Baada ya kuanzishwa kwa uhamasishaji, kokaini iliondolewa kwa muda wa siku 14 bila sindano yoyote ya salini. Wakati wa kipindi hicho cha uondoaji, hakuna picha ya picha iliyowekwa. Kuelezea kwa uhamasishaji wa tabia kwa cocaine ilikuwa kisha kuamua kwa sindano ya kiwango cha changamoto ya madawa ya kulevya (10 mg kg-1, ip) baada ya pichatimulation ya NAc kama ilivyoonyeshwa kwenye Kielelezo Kielelezo5A.5A. Ili kupima athari za photostimulation wakati wa uondoaji wa cocaine (Kielelezo (Kielelezo6), 6), panya ziliwekwa kwenye itifaki sawa ya uhamasishaji kama ilivyoelezwa hapo juu (kwa Kielelezo Kielelezo5) 5) isipokuwa pichatimulation ilitolewa. Baada ya kuanzishwa kwa uhamasishaji wa cocaine, pichatimulation ilitumika kwa NAC kila siku kwa 1 h wakati wa kuondoa jumla ya siku 14. Baada ya siku 14 ya kuondolewa, vikundi vyote vya panya vilikuwa vimejitokeza na kiwango cha changamoto cha cocaine, (10 mg kg-1).

Kielelezo 1 

Photostimulation ya kuchagua ya neuroni ya kati ya kati katika kiini cha accumbens. (A) Uteuzi wa ChR2 katika nec D2R neurons kwa utoaji wa vimelea vya virusi vya AAV-DIO-ChR2-EYFP. baa ndogo: takwimu za nyuma, 1 mm: ingiza, 200 μm. (B) Picha za kuvutia ...
Kielelezo 2 

Pichatimulation ya D2RCre-MSNs inatoa circuits za kuzuia ndani. (A) Picha ya kuvutia ya kipande cha NAC kilicho hai, inayoonyesha neuroni iliyojaa rangi ambayo haina kueleza ChR2 na kiini cha jirani (arrowhead) ambacho kilionyesha ChR2 na inaweza kuwa photostimulated. (B) IPSC ...
Kielelezo 3 

Mali ya seli za NAC. (A) Picha ya photon fluorescence mbili ya neurons iliyojaa Alexa 594. (A1) inaonyesha neuroni kutoka kundi la ChR2 + / AP, wakati (A3) inaonyesha neuroni kutoka kundi la ChR2- / IPSC. (A2) na (A4) ni picha za ukuzaji wa juu kutoka ...
Kielelezo 4 

Athari za uanzishaji wa optogenetic wa-vivo wa D2-MSN katika NAc kwenye shughuli za msingi za kupangisha. (A) Mtazamo wa Sagittal wa panya ya D2 Cre iliyojitokeza kwenye NAC na AAV-DIO-ChR2-EYFP ikifuatiwa na kuingizwa kwa nchi moja kwa moja ya fiber optic cannula. 473 nm bluu ya kuchochea mwanga ...
Kielelezo 5 

Athari za uanzishaji wa D2-MSN wakati wa kuhamasishwa kwa kukodisha. (A) Mpango wa majaribio ya kuchochea picha ya D2-MSN wakati wa kuanzishwa na kujieleza kwa kuhamasisha kwa kunywa. Mwangaza wa bluu (2 ~ 5 mW, 5 ms, 20 Hz) ilitolewa kwa nne ...
Kielelezo 6 

Athari za uanzishaji wa D2-MSN wakati wa kujiondoa kwa kurudiwa kwa cocaine. (A) Mpango wa majaribio ya kuchochea picha ya D2-MSN wakati wa kujiondoa kwa cocaine. Mwangaza wa rangi ya bluu (2 ~ 5 mW, 5 ms, 20 Hz) ilitolewa kwa kipindi cha minara ya 3 ...

Uharibifu wa immunofluorescence na microscopy laser confocal

Kwa kinga ya kinga, panya zilikuwa zimetiwa na nguvu na Zoletil (Virbac, 1.6 μl / g, intraperitoneally) na 0.05 μl / g Rompun (Bayer) na kufutwa na filter iliyoboreshwa 0.1 M PBS ikifuatiwa na kutengenezwa kwa kutumia 4% paraformaldehyde / PBS ufumbuzi (Sigma). Ubongo uliondolewa kisha utakamilika kwa 4 h na fixative ya baridi-baridi kama hapo juu. Ubongo ulikuwa umeharibika katika 30% sucrose / 0.1 M PBS kwa muda wa siku 2. Ubongo ulikuwa umehifadhiwa na sehemu za 40-μm-nene za mfululizo zimeandaliwa kwenye cryostat (Leica CM 1900, Ujerumani). Sehemu (40 μm) zimezuiwa kwa 1 h katika 0.1 M PBS iliyo na 5% seramu ya kawaida ya mbuzi na 0.2% Triton X-100 na imeingizwa na polyclonal sungura ya D2R (1: 500, Millipore, AB5084P) saa 4 ° C usiku. Baada ya kusafisha na PBS iliyo na 0.2% Triton X-100, sampuli ziliingizwa kwenye RT kwa 1 h na IgG ya anti-sungura ya Alexa Fluor 568 (1: 500; Masiba ya Masi, Eugene, OR, USA) na 0.2 μl / ml 4, HCl 6-2-phenyl-indole (DAPI; Sigma, St. Louis, MO, USA) katika PBS yenye 1% serum ya kawaida ya mbuzi na 0.2% Triton X-100. Kama udhibiti hasi, sampuli ziliingizwa na DAPI na antibody ya sekondari tu. Sehemu zilizingatiwa kwenye Mpango wa C1 Apo 40 / 1.4 mfumo wa skanning laser laser maji (LSM 700, Zeiss, Berlin, Ujerumani).

Electrophysiology na photostimulation katika vipande vya kiini vya accumbens

Panya zilizotumiwa kwa majaribio ya wiki 4 baada ya sindano ya virusi, ili kufikia ufanisi kamili wa ChR2-EYFP. Kanya panya zilikuwa zimetiwa na damu na zimefafanuliwa kwa ajili ya maandalizi ya vipande vya ubongo papo hapo. Ubongo uliondolewa kwa haraka na mara moja kuwekwa katika ufumbuzi wa barafu-kukata baridi (katika mM) 250 Sucrose, 26 NaHCO3, 10 D-Glucose, 3 Myo-inositol, 2.5 KCl, 2 Na-pyruvate, 1.25 NaH2PO4, Asidi 0.5 Ascorbic, 1 asidi Kynurenic na 7 MgCl2 ambayo ilikuwa imeongezwa na 95% O2/ 5% CO2 (pH = 7.4). Vipande vya ubongo vya Coronal (250 μm thick) zenye NAC ziliandaliwa kwa kutumia vibratome (Leica VT 1200 S) na kisha zimeingizwa katika maji yaliyotokana na kioevu (ACSF) yaliyomo (katika mM): X -UMX D-glucose, 11 NaCl, 125 NaHCO3, 1.25 NaH2PO4, 2.5 KCl, 1.25 MgCl2 na 2.5 CaCl2 saa 34 ° C kwa 1 h kabla ya kurekodi. Vipande kisha vihamishiwa kwenye chumba cha kurejesha ndani ambayo O2-suluhisho la ACSF linalotengenezwa mara kwa mara. Seli za NAC na VTA zilifanyika kwa kutumia microscope ya 2-photon (Olympus FV1000 MPE, Tokyo, Japan) iliyo na lens ya kuzama maji ya 25X na optics ya DIC infrared. Vipande vyote vya kikapu vifungo vilipatikana kutoka kwa seli za NAc na amplifier ya Multiclamp 700B na Digidata 1440A digitizer (Molecular Devices, LLC). Takwimu zilichanganyika kwa kutumia programu ya PCLAMP 10.2 na zaidi kuchambuliwa kwa kutumia programu ya Clampfit 10.2 (Molecular Devices, LLC). Patch electrodes na upinzani kati ya 3-5 MΩ walijazwa na ufumbuzi wa ndani ulio na (katika mM): 130 K-gluconate, Naxl 2, 2 MgCl2, 20 HEPES, 4 Na2ATP, 0.4 Na3GTP, 0.5 EGTA na 10 Na2- phosphocreatine, na pH ilibadilishwa kuwa 7.3 kwa kutumia 1 N KOH. Bicuculline (10 µM) iliogeshwa kwa kipande cha ubongo kuzuia vipokezi vya GABA katika seti ya majaribio.

Vipengele vya NAC vinavyotangaza ChR2-EYFP vilikuwa vichapishwa picha na mwanga wa LED (460 ± 27 nm, UHP-Mic-LED-460, Prizmatix). Nuru ya bluu kutoka kwa LED ilikuwa iliyochujwa zaidi na inakabiliwa na mchemraba wa chujio unao na chujio cha uchochezi (470-495 nm); mwanga wa mwanga (muda wa 10, 0.0366-0.354 mW / mm2) zilitolewa kwa kipande cha ubongo kupitia lens ya lengo la 25X kwa mzunguko wa 5-40 Hz. Katika sehemu ndogo ya majaribio, picha za picha zilipimwa kwenye seli za ChR2-zinazoelezea kwenye mwanga wa taa za muda wa 2.

Takwimu ya Uchambuzi

Takwimu zinawasilishwa kama njia ya ± sem na zilishambuliwa na wanafunzi wa tailed mbili t-Katika, au kwa uchambuzi wa njia mbili ya tofauti kulingana na Bonferroni's muda mfupi baada ya mtihani. A P-thamani ya <0.05 ilizingatiwa kitakwimu muhimu.

Matokeo

Photostimulation ya kuchagua ya neuroni ya kati ya kati katika kiini cha accumbens

Ili kuamua jukumu la NAc D2R-MSN katika tabia za ulaji wa cocaine, tumeitumia mbinu ya optogenetic ili kuchochea neurons NAC D2R. Ili kudhibiti udhibiti wa shughuli za D2R-MSN katika NAC kwa mwanga, vectors virusi coding AAV-DIO-ChR2-EYFP walikuwa stereotaxically sindano katika NAc ya D2R-Cre BAC transgenic panya. Wiki ya 4 baada ya sindano ya virusi, kujieleza kwa nguvu ya ChR2-EYFP ilionekana katika NAC (Kielelezo (Kielelezo1A) .1A). Ufafanuzi wa maneno ya ChR2 katika D2R-MSNs imethibitishwa na uchambuzi wa uchanganyiko wa immunofluorescence: uonyesho wa YFP-uliowekwa ChR2 uliunganishwa na D2R katika NAc (Kielelezo (Kielelezo1B), 1B), kuonyesha kwamba ChR2 ilielezwa katika neurons zinazoonyesha D2R katika NAC.

Ingawa mbinu hiyo imetumika katika masomo mengine (kwa mfano, Lobo et al., 2010), maelezo ya taratibu za sindano za virusi zitatofautiana kutoka kwa maabara moja hadi nyingine, na kuifanya muhimu kuandika udhibiti wa optogenetic chini ya hali zetu maalum za majaribio. Tulipima uelezeo wa kazi wa ChR2 kwa kufanya katch nzima ya kikapu cha rekodi kutoka kwa MSN katika vipande vya NAc. MSNs zilifafanuliwa na: (1) kiasi kikubwa cha kupumzika kwa membrane (RMP), kawaida zaidi hasi kuliko -80 mV; (2) mfano wa AP wa kukimbia kwa kukabiliana na vifungo vya sasa; (3) latency ndefu kwa kurusha ya AP ya kwanza wakati wa pigo la sasa; (4) kutokuwepo kwa voltage "sag" wakati wa hyperpolarization unasababishwa na cation ya sasa ya hyperpolarization (Ih); na (5) kiasi kidogo cha miili yao ya kiini (Chang na Kitai, 1985; O'Donnell na Grace, 1993; Le Moine na Bloch, 1996; Taverna et al., 2008). Nuru ya bluu (470 nm) ilitumika juu ya eneo lote la mtazamo (0.78 mm2) wakati voltage-clamping MSNs katika uwezekano wa uwezo wa -69 mV. Baadhi ya MSN walionyesha ChR2, dhahiri kama YFP fluorescence katika somata yao (mishale katika Takwimu 1C1, C3). Neurons hizo zilionyesha picha nyingi, na mwanga mkali zaidi unaosababisha picha nyingi za picha (Kielelezo (Kielelezo1D) .1D). Uhusiano kati ya kilele cha picha ya picha na urefu wa mwanga (Kielelezo (Kielelezo1E) 1E) alikuwa na upeo wa nusu ya urefu wa 0.054 ± 0.0023 mW / mm2 na urefu wa kilele cha 1.16 ± 0.16 nA (maana ya ± sem, n = 4).

Chini ya masharti ya sasa, MSN inayoonyesha APR zilizokimbia APs kwa uaminifu kwa kukabiliana na treni za mapigo ya mwanga (muda wa 2; Kielelezo1F) .1F). Chini ya hali hizi, intensities nyepesi kubwa kuliko 0.1 mW / mm2 walikuwa na kutosha kuhamisha APs (Kielelezo (Kielelezo1G, 1G, n = 5). AP za kutekelezwa kwa uaminifu kwenye masafa ya photostimulation hadi 20 Hz, wakati wa 40 Hz majibu yaliyotokana na mwanga yaliongezwa kwa kusababisha uharibifu wa kudumu ambao ulikuwa usiofaa katika AP za kutangaza (Takwimu 1F, G).

Pichatimulation ya D2R-MSNs inatoa circuits za kuzuia ndani

Ili kuchunguza matokeo ya shughuli za D2R-MSN kwenye mizunguko ya ndani huko NAc, tuna MSM ya presynaptic inayoonyesha picha ya ChR2 wakati tukipima majibu ya postsynaptic katika MSNs ChR2 hasi. (Kielelezo2A) .2A). Neuroni iliyoonyeshwa kwenye Kielelezo Kielelezo2A2A haina kueleza ChR2, kama inavyoonyeshwa kwa kukosekana kwa fluorescence ya EYFP pamoja na ukosefu wa picha za picha za muda mfupi kama vile zilizoonyeshwa kwenye Kielelezo Kielelezo1D.1D. Hata hivyo, wakati MSN za postsynaptic zilifanyika kama uwezo wa -69 mV, mwanga wa muda wa 10 unafuta mikondo ya nje baada ya latency ya 9.0 ± 0.42 ms (Kielelezo (Kielelezo2B, 2B, n = 15). Kuamua asili ya majibu haya, uwezo wa utando wa postsynaptic ulikuwa umefautiana kati ya -99 mV hadi -39 mV, wakati mwanga wa mwanga uliotumiwa (Kielelezo (Kielelezo2C) .2C). Majibu ya mwanga yanayotokana na uwezo wa membrane (Kielelezo (Kielelezo2D, 2D, n = 6) na kugeuza polarity yao katika -XUMUM ± 81 mV. Kutokana na kwamba uwezekano wa usawa wa ions ya kloridi ni -3.4 mV chini ya hali zetu za ionic, mikondo ya nje ya nje inaweza kuwa kutokana na chloride flux mediated na postsynaptic GABAA receptors. Ili kupima uwezekano huu, GABAA bicuculline mshindi wa receptor (10 μM) aliongezwa kwenye ufumbuzi wa nje. Dawa hii imefungwa kabisa majibu ya mwanga (Kielelezo (Kielelezo2B), 2B), kuthibitisha kwamba majibu yaliyotokana na mwanga yalikuwa maambukizi ya kisaikolojia ya kuzuia maambukizi ya GABAergic (IPSCs).

Kulingana na majibu yao kwa pichatimulation, MSNs ambazo tumeandika kutoka zinaweza kutambulishwa kwenye moja ya vikundi vya 4: (1) seli zinazoonyesha kiasi cha kutosha cha ChR2 kwa APs moto kwa kukabiliana na pichatimulation (ChR2 + / AP), ambazo zilielezwa hapo juu; (2) zinaonyesha kiasi kidogo cha ChR2, ambacho kiliondoa uharibifu wa kizuizi kwa kuzingatia mwanga (ChR2 + / No AP); (3) seli zenye kimya ambazo hazikuwa na maelezo ya ChR2 lakini zilipata IPSC zilizosababisha mwanga kutoka kwa MSNs za presynaptic zinazoonyesha ChR2 (ChR2- / IPSC); na (4) seli za ChR2 zisizoonyesha IPSCs kwa kukabiliana na pichatimulation ya MSN nyingine (ChR2- / No IPSC). Uwiano wa seli katika kila moja ya makundi haya umeonyeshwa kwenye Kielelezo Kielelezo2E2E (n = 53). Kwa ujumla, nusu ya seli (45.3%) zilionyesha ChR2 (jumla ya vikundi (1) na (2)). Hakuna ya MSN tuliyoandika yalionyesha picha za picha na IPSCs kwa kukabiliana na photostimulation; hii inaonyesha kuwa MSN ya D2R haipatii wanachama wengine wa idadi hii ya kiini ndani ya NAC.

Uainishaji huu wa majibu kwa nuru unaonyesha kwamba pichatimulation ya seli za ChR2 + / Hakuna AP (kikundi 2) na ChR2- / Hakuna seli za IPSC (kikundi 4) hazitazalisha ishara yoyote ya umeme inayoweza kuchangia shughuli za mzunguko. Kwa hiyo, ili kufafanua madhara ya photostimulation kwenye kazi ya mzunguko, tulitambua kwa undani mali ya ChR2 + / AP MSNs (kikundi 1), ambayo itazalisha AP wakati NAc ni photostimulated, na seli za ChR2- / IPSC (kikundi 3), ambacho ni postsynaptic kwa ChR2 + / AP MSNs kwa sababu wanapokea IPSC za mwanga. ChR2 + / AP na ChR2- / IPSC seli za NAC zilijulikana kama neurons za spiny (Kielelezo (Kielelezo3A) .3A). Kulikuwa na tofauti kubwa katika tabia za kimazingira au electrophysiological ya neurons katika makundi haya mawili. Kwa mfano, somata ya neurons katika makundi hayo mawili yalikuwa sawa na ukubwa (Kielelezo (Kielelezo3B) .3B). Kwa kuongeza, RMP zao (-XUMUM ± 83.0 vs -XUMUM ± 1.7 mV; maana ± sem; n = 10, Kielelezo Kielelezo3C) 3C) na ushindani wa pembejeo (113 ± 15 vs. 133 ± 13 MΩ, n = 6, Kielelezo Kielelezo3D) 3D) pia hawakuwa tofauti (p > 0.05 ya Wanafunzi wenye mikia miwili t-test) wakati mifumo yao ya kukimbia ya AP inachukua majibu kwa vifungo vya sasa (Takwimu 3E, F) pia walikuwa sawa (p > 0.05 ya Wanafunzi wenye mikia miwili t-taka, n = 6). Kwa muhtasari, photostimulation ya D2R-MSN katika NAc inachukua circuits za kuzuia ndani na neurons za postsynaptic ambazo ni sawa na D2R-MSNs lakini hazielezei D2R.

Kichocheo cha Optogenetic cha NAc D2R-MSNs katika uhamasishaji wa tabia ya cocaine

Sisi baadaye tuliangalia matokeo ya tabia ya katika vivo photostimulation ya NAc D2R-MSNs. Kwa sababu photostimulation ya D2R-MSNs katika striatum dorsal itapungua shughuli locomotor (Kravitz et al., 2010), tulianza kwa kutaja madhara ya kukusanya D2R-MSN uanzishaji juu ya shughuli za msingi za kupangisha. Kwa kusudi hili, panya za D2R-Cre zilishirikiwa na virusi vya DIO-AAV-ChR2-EYFP kwa pande zote kwa NAc (D2-Cre (+) NAc-ChR2). Vipengele vya D2R-MSN vilikuwa vichapishwa picha na rangi ya bluu (473 nm, muda wa XMUMX ms, 5 Hz) iliyotolewa NAC kupitia nyuzi ya macho. Pichatimuli zilizotumiwa wakati wa muda wa muda wa minne ya 20 ndani ya kipindi cha minara ya 3 wakati panya zilihifadhiwa katika chumba cha kurekodi shughuli za kazi (Kielelezo (Kielelezo4A) .4A). Kwa sambamba, kama panya zisizo za Cre WT littermate walikuwa sawa sindano na virusi na kupokea sawa sawa bluu mwanga. D2-Cre (+) Nac-ChR2 panya zinaonyesha kiwango sawa na kilichoinuliwa cha shughuli za msingi za basal ikilinganishwa na panya D2R-Cre (-) NAC-ChR2 (Takwimu 4B, C). Pichatimulation ya D2R-MSN katika D2-Cre (+) Panya ya NAc-ChR2 imesababisha kupungua kwa kiasi kikubwa katika shughuli za kupangisha ambayo ilipatikana baada ya kuchochea mwanga (Kielelezo (Kielelezo4B) .4B). Hakuna madhara kama haya yaliyoonekana katika kudhibiti D2R-Cre (-) NAC-ChR2 panya (Takwimu 4B, C), akionyesha kuwa madhara ya pichatimulation yalisababishwa na kuanzishwa kwa ChR2, badala ya madhara yasiyowezekana ya kutosha kama vile joto la tishu za ubongo. Kwa hiyo, data yetu ilionyesha kuwa photostimulation ya D2R-MSN katika NAC ilipungua kupungua kwa shughuli za locomotor.

Matokeo haya yalianzisha uwezo wetu wa kudhibiti shughuli za D2R-MSN ndani ya NAc katika vivo. Tutumia tena uwezo huu wa kuchunguza ushawishi wa shughuli za D2R-MSN juu ya uhamasishaji wa tabia kwa utawala mara kwa mara wa cocaine. Uhamasishaji wa tabia unamaanisha utaratibu unaowezesha kuambukizwa awali kwa psychostimulants, kama vile cocaine, kuongeza uwezo wa madawa ya kulevya yatokanayo na shughuli za kuchochea shughuli. Utaratibu huu unaweza kugawanywa katika awamu za kuanzisha na kujieleza: uanzishwaji unaelezea matukio ya haraka ya neural ambayo inasababisha uhamasishaji wa tabia (Vanderschuren na Kalivas, 2000; Sim et al., 2013), wakati kujieleza inajulikana kuwa aina ya kudumu ya plastiki ya tabia inayoendelea baada ya uondoaji wa madawa (Vanderschuren na Kalivas, 2000; Sim et al., 2013). Kwa hiyo, sisi kuchunguza uhamasishaji wa tabia ya cocaine wakati wa mara kwa mara intraperitoneal (ip) sindano za cocaine, wakati unatumia optogenetics kudhibiti shughuli za D2R-MSN katika NAC wakati wa kila hatua hizi.

Baada ya kawaida ya sindano ya salini juu ya siku za 3, panya zilijitokeza na cocaine (15 mg / kg) kwenye siku za mfululizo wa 5 na majibu ya kukodisha yalirekebishwa kwa dakika 30 baada ya sindano kila mmoja. (Kielelezo5A) .5A). Pichatimuli zilitolewa wakati wa vikao vya minara ya 30 kabla ya sindano ya cocaine, interspersing muda wa minara ya 3 ya kuangaza na vipindi vya 5 ambapo mwanga uligeuka (Kielelezo (Kielelezo5A) .5A). Kwa kuwa photostimulation ya D2R-MSN katika NAc itapungua shughuli za kupangisha msingi (Kielelezo (Kielelezo4), 4), photostimuli zilitolewa mara moja kabla ya utawala wa cocaine ili kuzuia uwezekano wa kuingiliwa na majibu ya tabia kwa sindano ya cocaine.

Pande zote kudhibiti D2-Cre (-) NAC-ChR2 panya na D2-Cre (+) Panya NAc-ChR2 ilionyesha ongezeko la alama ya shughuli za locomot kwa kukabiliana na sindano za mara kwa mara za cocaine (Kielelezo (Kielelezo5B), 5B), kuonyesha uanzishwaji wa uhamasishaji. Pichatimulation ya D2R-MSN katika NAC haikuonekana kuathiri kuanzishwa kwa uhamasishaji wa tabia, kwa sababu uhamasishaji wa tabia ya cocaine ulikuwa sawa katika panya D2-Cre (+) NAC-ChR2 na kudhibiti panya D2-Cre (-) NAc-ChR2.

Baada ya kuingizwa kwa uhamasishaji wa tabia kwa kurudia sindano hizo za cocaine (15 mg / kg) kwa muda wa siku 5, dawa hiyo iliondolewa kwa muda wa siku 14 na kiwango cha kujieleza kwa uhamasishaji ilifuatiwa na changamoto panya zilizo na kiwango cha chini cha cocaine (10 mg /kilo). Ufafanuzi wa kuhamasisha ni aina ya kudumu ya plastiki ya tabia inayoendelea baada ya uondoaji wa madawa (Steketee na Kalivas, 2011; Sim et al., 2013). Ili kuchunguza jukumu la D2R-MSN katika kujieleza kwa uhamasishaji, NAc ilikuwa imepangiwa picha kabla ya utawala wa cocaine (Kielelezo (Kielelezo5A) 5A) na uhamasishaji ulipimwa kama kiasi cha shughuli za locomotor zinazosababishwa na sindano ya cocaine.

Katika makundi mawili ya cocaine-pretreated ya panya-D2-Cre (-) NAC-ChR2 panya (D2-Cre (-) :: coc-coc) na D2-Cre (+) NAc-ChR2 (D2-Cre (+): : coc-coc) -Kuonyesha uharibifu wa uhamasishaji ulifanyika (Kielelezo (Kielelezo5C) .5C). Kipindi cha wakati wa mabadiliko ya cocaine-kuchochewa na mabadiliko yalikuwa sawa pia kati ya makundi mawili (Kielelezo (Kielelezo5C), 5C), bila tofauti kubwa iliyoonekana kati ya makundi mawili. Kuchukuliwa pamoja, majaribio haya mawili ya photostimulation yanaonyesha kuwa uanzishaji wa D2R-MSN katika NAC hauathiri kuanzisha au kujieleza kwa uhamasishaji wa tabia ya cocaine.

Pichatimulation ya NAc D2R-MSNs wakati wa uondoaji wa madawa ya kulevya

Kukabiliana na matatizo wakati wa kuondolewa kwa madawa ya kulevya baada ya kufuta mara kwa mara ya cocaine matokeo ya kuajiri uchaguzi wa D2R-tegemezi kukabiliana na utaratibu ambayo inasababisha kuongezeka kwa stress-katika kutafuta cocaine na relapse tabia kwa kushirikiana na mabadiliko ya plastiki synaptic katika NAc (Sim et al., 2013). Hii inaonyesha kwamba utaratibu unaosababishwa na uondoaji wa madawa ni tofauti na wale wanaohusika na uhamasishaji wa madawa ya kulevya. Kwa hiyo, tunafuatilia baadaye ikiwa photostimulation ya D2R-MSN katika NAC wakati wa uondoaji wa cocaine huathiri uelewa wa uhamasishaji wa tabia ya cocaine.

Baada ya kuingizwa kwa uhamasishaji wa tabia kwa kuingizwa mara kwa mara ya cocaine kama ilivyo hapo juu, panya D2-Cre (-) na D2-Cre (+) ziligawanywa katika makundi mawili kwa kipindi cha uondoaji wa siku 14: kikundi kimoja kilikuwa kinakabiliwa na kuchochea mwanga wa kila siku ya bluu NAC kwa 1 h (3 min × mara 8), wakati kikundi kingine hakuwa (Kielelezo (Kielelezo6A) .6A). Pichatimulation iliyopigwa ya D2R-MSN katika NAC wakati wa uondoaji wa cocaine haikuathiri maneno ya uhamasishaji katika panya D2-Cre (-) :: coc-coc (Kielelezo6B) .6B). Kwa upande mwingine, katika panya ya D2-Cre (+) :: coc, uelewa wa kuhamasishwa ulikuwa umezuiliwa sana na photostimulation mara kwa mara wakati uondoaji wa madawa ya kulevya (Kielelezo (Kielelezo6B), 6B), ingawa kipindi cha muda cha kuchochea kwa cocaine-induced stimulation ilikuwa haijaathirika (Kielelezo (Kielelezo6C) .6C). Hivyo, photostimulation ya D2R-MSN ya NAc wakati uondoaji wa madawa ya kulevya hupunguzwa kujieleza kwa uhamasishaji wa tabia ya cocaine (cocaine × mwingiliano wa picha-kuchochea F(1,18) = 11.08, P = 0.0037, Kielelezo Kielelezo6B) .6B). Takwimu hizi zinaonyesha kwamba uanzishaji wa MSN D2R-NAC wakati wa kuondolewa kwa madawa ya kulevya huathiri tabia ya kukodisha na kukataa tena.

Majadiliano

Ushahidi mkubwa unaonyesha kuwa uhamasishaji wa tabia ya cocaine unahusishwa na uhamisho wa dopaminergic ulioimarishwa katika mfumo wa mesocorticolimbic unaojumuisha eneo la eneo la kikanda, kanda ya prefrontal na kiini accumbens (NAc). Hasa, awamu ya kujieleza ya uhamasishaji wa tabia inajulikana na dawa ya kudumu ya majibu baada ya kumalizika kwa madawa ya kulevya, ambayo yanahusishwa na utaratibu wa kupitishwa (Kalivas na Duffy, 1990; Robinson na Berridge, 1993; Kalivas et al., 1998) ambayo inaweza kuchangia tamaa ya madawa ya kulevya (Robinson na Berridge, 1993; Kalivas et al., 1998; Steketee na Kalivas, 2011). Imependekezwa kuwa mabadiliko ya cocaine yaliyosababishwa na plastiki ya molekuli, seli na tabia ndani ya NAc, kwa kushirikiana na ishara ya kupokeza DA katika MSNs, inaweza kudhibiti tabia za kulevya za dawa za kulevya (Lobo et al., 2010; Schmidt na Pierce, 2010; Ferguson et al., 2011; Pascoli et al., 2011; Bocklisch et al., 2013; Grueter et al., 2013).

Uchunguzi wa hivi karibuni kwa kutumia panya za kiini zinazozalishwa na kimaumbile ambazo kwa kawaida zinaonyesha Cre recombinase zimefunua majukumu kwa D1R-MSN au D2R-MSNs katika tabia za kulevya za cocaine. Utekelezaji wa Optogenetic wa D1R-MSN ya NAc baada ya siku 6 ya uongozi wa cocaine mara kwa mara huongeza shughuli za uendeshaji, wakati uanzishaji wa D2R-MSNs haukuwa na athari (Lobo et al., 2010). Takwimu hizi zinashauri kwamba kurudia mara kwa mara kwa cocaine huongeza matokeo ya D1R-MSN ya NAC. Uzuiaji wa MSN za D1R zinazoonyesha na sumu ya tetanasi (Hikida et al., 2010) hupunguza upendeleo wa eneo la cocaine (CPP), wakati hakuna mabadiliko katika CPP ya cocaine yalizingatiwa baada ya kufuta maambukizi ya synaptic katika D2R-MSNs (Hikida et al., 2010). Utekelezaji wa Optogenetic wa D1R-MSNs katika striatum ya dorsal induces kuimarisha kuendelea, wakati kuchochea D2-receptor-kueleza neurons induces adhabu ya muda mfupi (Kravitz et al., 2012). Uchunguzi wa hivi karibuni pia umesema kuwa kuzuia D2R-MSN kupitia mbinu ya chemicogenetic huongeza msukumo wa kupata cocaine, wakati uanzishaji optogenetic wa D2R-MSNs huzuia cocaine self-administration (Bock et al., 2013). Kwa upande mwingine, Bocklisch et al. (2013) iliripoti kuwa D1R-MSN ya mradi wa NAC kwa VTA, hasa kwa neuroni za kibaya ndani ya VTA, wakati D2R-MSNs hazijitekeleza moja kwa moja kwa VTA. Mzunguko huu una maana kwamba uanzishaji wa optogenetic wa D1R-MSNs huwazuia neurons za DA, ambazo hatimaye huongeza tabia za kulevya zinazosababishwa na cocaine (Bocklisch et al., 2013).

Pamoja na shirika lisilo rahisi sana la watu hawa wawili wa MSN, ukweli kwamba MSN hupokea pembejeo nyingi na hupata matokeo tofauti kutoka / kwa maeneo mengine ya ubongo, pamoja na kutengeneza nyaya za mitaa kati ya MSN na madarasa mengine ya interneurons, matokeo ya D1R- MSN na D2R-MSN zinaweza kutoa mazoezi tofauti na tofauti ya Masi, seli na tabia.

Hapo awali imeonyeshwa kwamba D2R inachangia mabadiliko ya synaptic yanayotokana na uondoaji wa madawa ya kulevya na haya yanaweza kukuza tena kocaine kutafuta, bila kuathiri upatikanaji wa madawa ya kwanza au kutafuta madawa ya kulevya (Sim et al., 2013). Takwimu zetu za sasa zinaonyesha kwamba photostimulation ya D2R-MSN katika NAc inasababisha kupungua kwa shughuli za msingi za kupangisha. Lobo et al. (2010) hawakuona mabadiliko katika ukimbizi wakati MSN subtype ilianzishwa, lakini tu kuchunguza shughuli ya locomotor jumla badala ya kuchunguza majibu ya haraka ya shughuli basal locomotor kwa photostimulation. Kravitz et al. (2010) pia aligundua kuwa uanzishaji wa optogenetic wa D2R-MSN katika storum ya kinyume pia hupunguza shughuli za uendeshaji. Kwa hivyo, data yetu ni ya kwanza kuonyesha kwamba shughuli za msingi za kupangilia zinazuiliwa na pichatimulation za D2R-MSN za NAc na ya kwanza ili kuchunguza kwa ufanisi kipindi cha muda cha shughuli za kupiga basal wakati wa photostimulation ya neurons hizi.

Katika somo la sasa, tumeona kuwa uanzishaji wa optogenetic wa D2R-MSN katika NAC haukuathiri kuanzisha au kujieleza kwa uhamasishaji wa tabia. Hata hivyo, photostimulation ya D2R-MSN wakati wa uondoaji wa madawa ya kulevya ulichanganya uelewa wa uhamasishaji wa cocaine. Kwa hiyo, takwimu zetu zinaonyesha kuwa D2R-MSNs huajiri ishara fulani hasa wakati wa uondoaji unaoendelea kubadili maelezo ya jeni au aina nyingine za ishara na hivyo kusababisha mabadiliko katika plastiki ya synaptic, na kusababisha mabadiliko katika uhamasishaji wa tabia ya cocaine. Jinsi MSN hizi zinavyotumia mabadiliko ya aina ya kiini ambayo yanaweza kuzalisha matokeo yao tofauti katika tabia zinazohusiana na madawa ya kulevya haijulikani. Grueter et al. (2013) alipendekeza kuwa ΔFosB katika NAc inasimamia tofauti ya tabia ya synaptic na tabia zinazohusiana na malipo katika aina ya kiini na aina fulani. Hivi karibuni, Chandra et al. (2013) iliripoti kuwa uanzishaji wa ChR2 wa D1R-MSN kwa mara kwa mara, lakini sio D2R-MSNs uliosababishwa na udhibiti wa kiini cha Tiam1, protini iliyohusika katika upyaji wa kiini cha kitini, sawa na matokeo ya cocaine. Kwa hiyo, kuelewa taratibu zilizozalisha athari za kudumu za tabia za madawa ya kulevya itakuwa muhimu kuelezea uingizaji wa kiini-chaguo wa matukio ya molekuli katika MSNs hizi zinazolinda kukabiliana na synaptic kwa kufuta madawa ya kulevya mara kwa mara.

Kwa kushirikiana na udhirizaji wa madawa ya kurudia mara kwa mara, uondoaji umependekezwa kuwa na jukumu muhimu kwa sababu baadhi ya mabadiliko yanaonekana wiki kadhaa tu baada ya kufidhiliwa mwisho kwa cocaine. Hii inaonyesha kuwa kujizuia ni mpatanishi muhimu katika maendeleo ya plastiki (Robinson na Berridge, 2003; Boudreau na Wolf, 2005; Boudreau et al., 2007; Kourrich et al., 2007). Uchunguzi huu unasema uwezekano kwamba kujiondoa yenyewe kunaweza kuwa husababisha mabadiliko katika NAC ambayo yana chini ya udhibiti wa ishara ya tegemezi ya D2R. Matokeo yetu yanaonyesha kuwa uanzishaji wa D2R-MSN katika NAC wakati wa uondoaji wa madawa ya kulevya huathiri uhamasishaji wa tabia ya cocaine hutoa msaada wa kulazimisha kwa wazo hili.

Imeonyeshwa hapo awali kuwa kufuta mara kwa mara kwa dhiki wakati wa uondoaji wa madawa ya kulevya kunasisitiza kujieleza kwa uhamasishaji wa tabia ya cocaine ikiwa ni pamoja na kutafuta kiafya na kurejesha tena katika panya D2R KO (Sim et al., 2013). Kwa hiyo ni jambo la kuvutia kwamba photostimulation ya D2R-MSNs wakati wa uondoaji wa madawa ya kulevya pia huzuia kujieleza kwa kuhamasisha. Kisaikolojia ya synaptic ya plastiki katika synapses ya glutamatiba imebadilishwa katika NAC ya panya D2R KO (Sim et al., 2013). Ingawa bado haijulikani ikiwa photostimulation ya MSX ya D2R au matatizo ya muda mrefu wakati wa uondoaji inafanya mabadiliko sawa katika plastiki ya synaptic, matokeo yetu ya sasa yanasaidia dhana kwamba D2R-MSNs ya NAc hufanya jukumu muhimu katika ukatili wa uondoaji na inaweza kuchangia kurudi baada ya kukomesha matumizi mabaya ya madawa ya kulevya. Uchunguzi zaidi utatakiwa kujua mizunguko ya neural ya kazi ambayo D2R MSNs kushiriki wakati wa uondoaji wa madawa ya kulevya na kuchambua na kulinganisha matokeo ya D2R-MSN photostimulation na matatizo ya muda mrefu juu ya plastiki synaptic katika mzunguko huu.

Jambo jingine linalowezekana kwa MSN za D2R-zinaweza kuzuia pato la D1R-MSN kutoka NAc. Utafiti uliopita unaonyesha kwamba ingawa MSN hujenga axoni ndefu kwa malengo ya kijijini, kuingiliana kwa kina hutokea kati ya dhamana za axon na miti ya dendritic ya neurons ya makadirio ya spiny karibu (Grofová, 1975; Preston et al., 1980; Wilson na Groves, 1980). Hii inaweza kuonyesha uwezekano wa kuunganishwa kwa synaptic ya MSN ndani ya NAC. Rekodi ya intracellular kutoka kwa jozi ya neurons ya makadirio ya spiny imetambua uhusiano wa kazi ya kuzuia kati ya MSN katika striatum ya panya (Czubayko na Plenz, 2002; Tunstall et al., 2002; Koos et al., 2004; Gustafson et al., 2006). Imeripotiwa pia kuwa synapses zilizoundwa na axons ya dhamana ya mara kwa mara ya MSN katika striatum si ya random, D2R-MSNs hufanya uhusiano wa synaptic na wengine D2R-MSN na D1R-MSNs, ambapo D1R-MSNs karibu hutengeneza uhusiano wa synaptic na wengine D1R-MSNs (Taverna et al., 2008). Ingawa ushirikiano wa GABAergic na dhamana za mara kwa mara za kawaida kati ya MSNs zilizopatikana pia zimeripotiwa (Taverna et al., 2004), bado haijulikani bado ikiwa D2R-MSNs huwahi kuunda microcircuits za mitaa au zinachangia kwenye microcircuits katika NA na uhusiano wa upendeleo kama wanavyofanya katika striatum. Takwimu zetu zinaonyesha kwamba D2R-MSN katika NAc inayoonyesha ChR2 huunganisha synaptic na MSNs za jirani ambazo zinaonyesha D1R, na kwamba D2R-MSNs hufanya kuwasiliana na D1-MSNs ili kuzuia uendelezaji wa D1R uliopatanishwa na tabia za kulevya.

Kwa kumalizia, tumeonyesha kwamba uanzishaji wa optogenetic wa NAc D2R-MSNs hubadilishana upasuaji unaotokana na uhaba wa cocaine. Kutokana na kwamba shughuli za kuthibitisha D2R wakati wa kipindi cha uondoaji inaonekana kuwa kiongozi muhimu wa uelewa wa uhamasishaji wa tabia ya cocaine, tunapendekeza kwamba D2R-MSNs ni mpatanishi muhimu wa kukabiliana na kudumu kwa ajili ya kutafuta madawa ya kulevya na kurudi tena. Utambulisho wa substrates za Masioni za ishara ya kutegemea D2R, pamoja na utambuzi wa mzunguko maalum wa NAc D2R-MSNs ambao huajiriwa chini ya madawa ya kulevya mara kwa mara, wanapaswa kutoa malengo ya riwaya ya kuingilia matibabu kwa kurejesha madawa ya kulevya.

Migogoro ya taarifa ya riba

Waandishi wanatangaza kuwa utafiti ulifanyika bila kutokuwepo na uhusiano wowote wa biashara au wa kifedha ambao unaweza kuitwa kama mgogoro wa maslahi.

Shukrani

Kazi hii iliungwa mkono na ruzuku ya Utafiti wa Kitaifa ya Korea (NRF) iliyofadhiliwa na Wizara ya Sayansi, Teknolojia na Mipango ya Baadaye na Programu ya Utafiti wa Ubongo (kwa Ja-Hyun Baik, Grant No. 2013M3C7A1056101) na Bio na Medical Technology Mpango wa Maendeleo (kwa Ja-Hyun Baik, Grant No. 2013M3A9D5072550) na mpango wa Taasisi ya Dunia (WCI) ya Utafiti wa Taifa wa Korea (NRF) unaofadhiliwa na Wizara ya Sayansi, Teknolojia na Mipango ya Baadaye (kwa George J. Augustine , WCI 2009-003), pamoja na Shirika la Kitaifa la Korea (kwa Ja-Hyun Baik) na ruzuku ya CRP kutoka Foundation ya Taifa ya Utafiti wa Singapore (kwa George J. Augustine).

Marejeo

  1. Baik JH (2013). Dopamine ishara katika tabia zinazohusiana na malipo. Mbele. Neural Circuits 7: 152 10.3389 / fncir.2013.00152 [Makala ya bure ya PMC] [PubMed] [Msalaba wa Msalaba]
  2. Baik JH, Picetti R., Saiardi A., Thiriet G., Dierich A., Depaulis A., et al. (1995). Uharibifu wa locomotor kama vile uhifadhi wa Parkinsonian katika panya ambazo hazipatikani dopamine D2 receptors. Hali 377, 424-428 10.1038 / 377424a0 [PubMed] [Msalaba wa Msalaba]
  3. Berridge KC (2007). Mjadala juu ya jukumu la dopamini katika malipo: kesi ya ushawishi wa motisha. Psychopharmacology (Berl) 191, 391-431 10.1007 / s00213-006-0578-x [PubMed] [Msalaba wa Msalaba]
  4. Bock R., Shin JH, Kaplan AR, Dobi A., Markey E., Kramer PF, et al. (2013). Kuimarisha njia isiyo ya moja kwa moja inalenga ustahimilivu wa matumizi ya cocaine. Nat. Neurosci. 16, 632-638 10.1038 / nn.3369 [Makala ya bure ya PMC] [PubMed] [Msalaba wa Msalaba]
  5. Bocklisch C., Pascoli V., Wong JC, Nyumba DR, Yvon C., de Roo M., et al. (2013). Cocaine inakataza neurons ya dopamine kwa uwezekano wa maambukizi ya GABA katika sehemu ya eneo. Sayansi 341, 1521-1525 10.1126 / sayansi.1237059 [PubMed] [Msalaba wa Msalaba]
  6. Boudreau AC, Reimers JM, Milovanovic M., Wolf ME (2007). Maeneo ya kiini AMPA mapokezi katika ongezeko la kiini cha panya wakati wa uondoaji wa cocaine lakini kuingizwa baada ya changamoto ya cocaine kwa kushirikiana na uanzishaji wa protini kinases iliyowekwa na mitogen. J. Neurosci. 27, 10621-10635 10.1523 / jneurosci.2163-07.2007 [Makala ya bure ya PMC] [PubMed] [Msalaba wa Msalaba]
  7. Boudreau AC, Wolf ME (2005). Kuhamasisha tabia kwa cocaine ni kuhusishwa na ongezeko la uso wa AMP receptor uso katika kiini accumbens. J. Neurosci. 25, 9144-9151 10.1523 / jneurosci.2252-05.2005 [PubMed] [Msalaba wa Msalaba]
  8. Chandra R., Lenz JD, Gancarz AM, Chaudhury D., Schroeder GL, Han MH, et al. (2013). Inhibition ya Optogenetic ya D1R yenye nucleus accumbens neurons inabadilisha udhibiti wa cocaine-mediated wa Tiam1. Mbele. Mol. Neurosci. 6: 13 10.3389 / fnmol.2013.00013 [Makala ya bure ya PMC] [PubMed] [Msalaba wa Msalaba]
  9. Chang HT, Kitai ST (1985). Neurons ya kupima ya kiini accumbens: uchunguzi wa maandishi ya ndani. Resin ya ubongo. 347, 112-116 10.1016 / 0006-8993 (85) 90894-7 [PubMed] [Msalaba wa Msalaba]
  10. Chausmer AL, Elmer GI, Rubinstein M., Low MJ, Grand DK, Katz JL (2002). Shughuli ya ukodishaji wa Cocaine na ubaguzi wa cocaine katika dopamine panya ya D2 receptor mutant. Psychopharmacology (Berl) 163, 54-61 10.1007 / s00213-002-1142-y [PubMed] [Msalaba wa Msalaba]
  11. Chevalier G., Deniau JM (1990). Kuepuka marufuku kama mchakato wa msingi katika maelezo ya kazi za kujifungua. Mwelekeo wa Neurosci. 13, 277-280 10.1016 / 0166-2236 (90) 90109-n [PubMed] [Msalaba wa Msalaba]
  12. Czubayko U., Plenz D. (2002). Haraka ya maambukizi ya synaptic kati ya neurons ya makadirio ya spiny. Proc. Natl. Chuo. Sci. USA 99, 15764-15769 10.1073 / pnas.242428599 [Makala ya bure ya PMC] [PubMed] [Msalaba wa Msalaba]
  13. Ferguson SM, Eskenazi D., Ishikawa M., Wanat MJ, Phillips PE, Dong Y., et al. (2011). Inhibitisho ya muda mfupi ya neuronal inaonyesha majukumu ya kupinga ya njia zisizo sahihi na za moja kwa moja katika kuhamasisha. Nat. Neurosci. 14, 22-24 10.1038 / nn.2703 [Makala ya bure ya PMC] [PubMed] [Msalaba wa Msalaba]
  14. Goto Y., Grace AA (2005). Mfumo wa dopaminergic wa gari la limbic na cortical ya kiini accumbens katika tabia iliyoongozwa na lengo. Nat. Neurosci. 8, 805-812 10.1038 / nn1471 [PubMed] [Msalaba wa Msalaba]
  15. Grofová I. (1975). Utambulisho wa neuroni za kuzaa na pallidal zinazojitolea kuimarisha nigra. Uchunguzi wa majaribio kwa njia ya kurejesha upya usawa wa axonal wa peroxidase ya horseradish. Resin ya ubongo. 91, 286-291 10.1016 / 0006-8993 (75) 90550-8 [PubMed] [Msalaba wa Msalaba]
  16. Grueter BA, Robison AJ, Neve RL, Nestler EJ, Malenka RC (2013). ΔFosB tofauti huimarisha kiini accumbens kazi ya moja kwa moja na ya moja kwa moja. Proc. Natl. Chuo. Sci. USA 110, 1923-1928 10.1073 / pnas.1221742110 [Makala ya bure ya PMC] [PubMed] [Msalaba wa Msalaba]
  17. Gustafson N., Gireesh-Dharmaraj E., Czubayko U., Blackwell KT, Plenz D. (2006). Vipimo vya kulinganisha na uchambuzi wa sasa wa kamba ya maoni na maambukizi ya synaptic ya mifugo katika microcircuit ya uzazi katika vitro. J. Neurophysiol. 95, 737-752 10.1152 / jn.00802.2005 [PubMed] [Msalaba wa Msalaba]
  18. Hikida T., Kimura K., Wada N., Funabiki K., Nakanishi S. (2010). Majukumu ya kutofautiana ya maambukizi ya synaptic kwa njia za moja kwa moja na zisizo za moja kwa moja za malipo na malipo na tabia ya kupinga. Neuron 66, 896-907 10.1016 / j.neuron.2010.05.011 [PubMed] [Msalaba wa Msalaba]
  19. Kalivas PW, Duffy P. (1990). Athari ya matibabu ya papo hapo na ya kila siku kwenye dopamini ya ziada ya seli katika kiini cha accumbens. Sambamba 5, 48-58 10.1002 / syn.890050104 [PubMed] [Msalaba wa Msalaba]
  20. Kalivas PW, Pierce RC, J. Cornish, Sorg BA (1998). Jukumu la kuhamasisha katika tamaa na kurudi katika madawa ya kulevya ya cocaine. J. Psychopharmacol. 12, 49-53 10.1177 / 026988119801200107 [PubMed] [Msalaba wa Msalaba]
  21. Koos T., JM Tepper, Wilson CJ (2004). Kulinganisha kwa IPSCs iliyotokana na neuroni za spiny na za haraka-haraka katika neostriatum. J. Neurosci. 24, 7916-7922 10.1523 / jneurosci.2163-04.2004 [PubMed] [Msalaba wa Msalaba]
  22. Kourrich S., Rothwell PE, Klug JR, Thomas MJ (2007). Uzoefu wa Cocaine udhibiti wa plastiki ya bidirectional syntaptic katika nucleus accumbens. J. Neurosci. 27, 7921-7928 10.1523 / jneurosci.1859-07.2007 [PubMed] [Msalaba wa Msalaba]
  23. Kravitz AV, Freeze BS, Parker PR, Kay K., Thwin MT, Deisseroth K., et al. (2010). Udhibiti wa tabia za magari ya parkinsonian na udhibiti wa optogenetic wa circuitry ya basli ya ganglia. Hali 466, 622-626 10.1038 / asili09159 [Makala ya bure ya PMC] [PubMed] [Msalaba wa Msalaba]
  24. Kravitz AV, Tye LD, Kreitzer AC (2012). Majukumu tofauti ya njia za moja kwa moja na zisizo moja kwa moja za neurons za kuzaa katika kuimarisha. Nat. Neurosci. 15, 816-818 10.1038 / nn.3100 [Makala ya bure ya PMC] [PubMed] [Msalaba wa Msalaba]
  25. Kreitzer AC, Malenka RC (2008). Kinga ya plastiki na kazi ya mzunguko wa basili. Hali 60, 543-554 10.1016 / j.neuron.2008.11.005 [Makala ya bure ya PMC] [PubMed] [Msalaba wa Msalaba]
  26. Le Moine C., Bloch B. (1996). Ufafanuzi wa receptor ya D3 dopamini katika neurons peptidergic ya kiini accumbens: kulinganisha na receptors D1 na D2. Neuroscience 73, 131-143 10.1016 / 0306-4522 (96) 00029-2 [PubMed] [Msalaba wa Msalaba]
  27. Lobo MK, Covington HE, 3rd, Chaudhury D., Friedman AK, Sun H., Damez-Werno D., et al. (2010). Upungufu wa aina ya kiini wa BDNF unaonyesha mchanganyiko wa optogenetic wa malipo ya cocaine. Sayansi 330, 385-390 10.1126 / sayansi.1188472 [Makala ya bure ya PMC] [PubMed] [Msalaba wa Msalaba]
  28. Lobo MK, Nestler EJ (2011). Tendo la kusawazisha kwa uzazi wa kulevya katika kulevya kwa madawa ya kulevya: majukumu tofauti ya njia za moja kwa moja na za moja kwa moja za neuroni za spiny kati. Mbele. Nyuki. 5: 41 10.3389 / fnana.2011.00041 [Makala ya bure ya PMC] [PubMed] [Msalaba wa Msalaba]
  29. Lüscher C., Malenka RC (2011). Matibabu ya dawa ya kulevya yaliyotokana na madawa ya kulevya kwa kulevya: kutoka mabadiliko ya Masioni hadi kurekebisha mzunguko. Neuron 69, 650-663 10.1016 / j.neuron.2011.01.017 [Makala ya bure ya PMC] [PubMed] [Msalaba wa Msalaba]
  30. O'Donnell P., Grace AA (1993). Mali ya kimwili na kisaikolojia ya accumbens msingi na neurons shell kumbukumbu katika vitro. Sambamba 13, 135-160 10.1002 / syn.890130206 [PubMed] [Msalaba wa Msalaba]
  31. Pascoli V., Turiault M., Lüscher C. (2011). Kubadilika kwa uwezekano wa synaptic wa cocaine unaotokana na cocaine hupunguza upya tabia ya madawa ya kulevya. Hali 481, 71-75 10.1038 / asili10709 [PubMed] [Msalaba wa Msalaba]
  32. Preston RJ, Askofu GA, Kitai ST (1980). Kipimo cha neuroni cha spin katikati ya utafiti wa panyaxidasi ya panyaxidase. Resin ya ubongo. 183, 253-263 10.1016 / 0006-8993 (80) 90462-x [PubMed] [Msalaba wa Msalaba]
  33. Robinson TE, Berridge KC (1993). Msingi wa neural wa tamaa ya madawa ya kulevya: nadharia ya kuhamasisha ya kulevya. Resin ya ubongo. Resin ya ubongo. Mshauri 18, 247-291 10.1016 / 0165-0173 (93) 90013-p [PubMed] [Msalaba wa Msalaba]
  34. Robinson TE, Berridge KC (2003). Madawa. Annu. Mchungaji Psychol. 54, 25-53 10.1146 / annurev.psych.54.101601.145237 [PubMed] [Msalaba wa Msalaba]
  35. Schmidt HD, Pierce RC (2010). Neuroadaptations ikiwa ni pamoja na neuroadaptations katika glutamate maambukizi: uwezekano wa malengo ya matibabu kwa tamaa na kulevya. Ann. NY Acad. Sci. 1187, 35-75 10.1111 / j.1749-6632.2009.05144.x [PubMed] [Msalaba wa Msalaba]
  36. Sesack SR, Grace AA (2010). Mtandao wa malipo ya bandia ya Cortico: microcircuitry. Neuropsychopharmacology 35, 27-47 10.1038 / npp.2009.93 [Makala ya bure ya PMC] [PubMed] [Msalaba wa Msalaba]
  37. Sim HR, Choi TY, Lee HJ, Kang EY, Yoon S., Han PL, et al. (2013). Jukumu la dopamine receptors D2 katika plastiki ya tabia ya dhiki-addictive tabia. Nat. Jumuiya. 4: 1579 10.1038 / ncomms2598 [PubMed] [Msalaba wa Msalaba]
  38. Smith RJ, Lobo MK, Spencer S., Kalivas PW (2013). Vipimo vya Cocaine katika D1 na D2 accumbens makadirio neurons (dichotomy sio sawa na njia moja kwa moja na isiyo ya moja kwa moja). Curr. Opin. Neurobiol. 23, 546-552 10.1016 / j.conb.2013.01.026 [Makala ya bure ya PMC] [PubMed] [Msalaba wa Msalaba]
  39. Steketee JD, Kalivas PW (2011). Kudai madawa ya kulevya: uhamasishaji wa tabia na kurudia tabia ya kutafuta madawa ya kulevya. Pharmacol. Mchungaji 63, 348-365 10.1124 / pr.109.001933 [Makala ya bure ya PMC] [PubMed] [Msalaba wa Msalaba]
  40. Taverna S., Ilijic E., DJ Surmeier (2008). Uhusiano wa mara kwa mara wa dhamana ya neurons ya spinal kati ya vizazi huvunjika katika mifano ya ugonjwa wa Parkinson. J. Neurosci. 28, 5504-5512 10.1523 / JNEUROSCI.5493-07.2008 [Makala ya bure ya PMC] [PubMed] [Msalaba wa Msalaba]
  41. Taverna S., van Dongen YC, Groenewegen HJ, Pennartz CM (2004). Ushahidi wa kisaikolojia moja kwa moja kwa kuunganishwa kwa synaptic kati ya neuroni ya spini ya ukubwa wa kati katika kiini cha panya accumbens katika situ. J. Neurophysiol. 91, 1111-1121 10.1152 / jn.00892.2003 [PubMed] [Msalaba wa Msalaba]
  42. Thomas MJ, Kalivas PW, Shaham Y. (2008). Neuroplasticity katika mfumo wa dopamine ya macholimbic na kulevya ya cocaine. Br. J. Pharmacol. 154, 327-342 10.1038 / bjp.2008.77 [Makala ya bure ya PMC] [PubMed] [Msalaba wa Msalaba]
  43. Futa MJ, Oorschot DE, Kean A., Wickens JR (2002). Uingiliano wa kuzuia kati ya neurons ya makadirio ya spiny katika striatum ya panya. J. Neurophysiol. 88, 1263-1269 10.1152 / jn.00886.2001 [PubMed] [Msalaba wa Msalaba]
  44. Vanderschuren LJ, Kalivas PW (2000). Mabadiliko ya maambukizi ya dopaminergic na glutamatergic katika kuingizwa na kujieleza kwa uhamasishaji wa tabia: uchunguzi muhimu wa masomo ya usahihi. Psychopharmacology (Berl) 151, 99-120 10.1007 / s002130000493 [PubMed] [Msalaba wa Msalaba]
  45. Wilson CJ, Groves PM (1980). Muundo mzuri na uhusiano wa synaptic ya neuron ya kawaida ya spin ya neostriatum ya panya: utafiti unaojumuisha sindano ya kiinijoni ya peroxidase ya horseradish. J. Comp. Neurol. 194, 599-615 10.1002 / cne.901940308 [PubMed] [Msalaba wa Msalaba]
  • Rawa wa hekima (2004). Dopamine, kujifunza na motisha. Nat. Mchungaji Neurosci. 5, 483-494 10.1038 / nrn1406 [PubMed] [Msalaba wa Msalaba]