Fadok JP, Darvas M, Dickerson TMK, Palmiter RD
(2010). PLoS ONE 5 (9): e12751. toa: 10.1371 / journal.pone.0012751
Jonathan P. Fadok1,2, Martin Darvas2, Tavis MK Dickerson2, Richard D. Palmiter2
Programu ya Uzamili ya 1 katika Neurobiolojia na Maadili, Chuo Kikuu cha Washington, Seattle, Washington, Marekani,
Idara ya Biochemistry ya 2 na Taasisi ya Matibabu ya Howard Hughes, Chuo Kikuu cha Washington, Seattle, Washington, Marekani
Dopamine ya neurotransmitter (DA) ni muhimu kwa kujifunza katika hali ya hofu ya Pavlovian dhana inayojulikana kama shoka inayotokana na hofu (ramprogrammen). Panya ambazo hazi uwezo wa kuunganisha DA zinashindwa kujifunza ushirikiano kati ya kichocheo kilichosimama na kuchochea hofu. Hapo awali, tumeonyesha kuwa marejesho ya awali ya DA kwa neurons ya eneo la kijiji cha VTR (VTA) lilikuwa na kutosha kurejesha ramprogrammen. Hapa, tulitumia mbinu ya urejeshaji wa virusi kwa lengo la kuamua ambayo mikoa ya ubongo ya mesocorticolimbic kupokea DA ishara kutoka kwa VTA inahitaji DA kwa ramprogrammen. Tunaonyesha kwamba marejesho ya awali ya DA kwa amygdala ya msingi (BLA) na kiini accumbens (NAc) inahitajika kwa kumbukumbu ya muda mrefu ya ramprogrammen. Takwimu hizi hutoa ufahamu muhimu katika mzunguko wa dopamini ambao hutegemea kuundwa kwa kumbukumbu inayohusiana na hofu.
kuanzishwa
DA hutengenezwa na neurons katika nuclei ya ndani ndani ya ubongo, ikiwa ni pamoja na hypothalamus, bulb ya shaba, na midbrain ya ndani [1]. Vipindi vya DA katika VTA ya mradi wa midbrain ya msingi kwa maeneo ya ubongo ya kiungo ambayo ni muhimu kwa hali ya hofu, kama kamba ya prefrontal, hippocampus, amygdala, na NAc [1], [2], [3]. Kulingana na jukumu la DA katika hali ya hofu, kiwango cha kupiga risasi cha neuroni za DA kinabadilishwa na uchochezi-inducing uchochezi pamoja na cues kwamba kutabiri matokeo aversive [4], [5], [6]. Zaidi ya hayo, kwa kukabiliana na uchochezi wenye kutisha au hali ya kusumbua, viwango vya DA vinaongezeka katika mikoa kadhaa ya ubongo [7], [8], [9], [10] na matumizi ya dawa na maumbile ya kazi ya DA yanaweza kuharibu kujifunza kwa dhana za hali ya hofu [11], [12], [13], [14].
Katika hali ya hofu ya Pavlovian, kichocheo chenye hali ya kutosha, kama vile nuru, ni pauni na kichocheo kisicho na masharti, kama vile kuchomwa. Kufuatilia mafunzo, uwasilishaji wa kichocheo kilichopendekezwa peke yake hufanya majibu ya hofu [3]. Ramprogrammen ni kawaida inayotumiwa na mtazamo wa hofu ya Pavlovian ambapo kujifunza kunazingatiwa na ongezeko la kupendeza kwa upepo wa mkali [15]. Tumeonyesha hapo awali kwamba neurons za DA katika VTA zinatosha kujifunza kwa dhana ya RVP [12]. Zaidi ya hayo, tulionyesha kuwa DA katika BLA inatosha kuzalisha kumbukumbu ya muda mfupi (STM), lakini si kumbukumbu ya muda mrefu (LTM), ya shirika la kutisha-kutisha. Kwa malengo yaliyobaki ya neurons ya VTA DA, NAC inapata innervation kubwa na hiyo ilikuwa tovuti ya kwanza ya mgombea wa kuundwa kwa LTM kwa ramprogrammen [2].
Machapisho makubwa yanasaidia jukumu la DA ndani ya NAC kwa mchakato wa kujifunza shirikisho katika miongozo ya malipo [16]. Kwa sasa haijulikani kama DA katika NAC pia ni muhimu kwa kujifunza katika hali ya hofu ya Pavlovian. Hata hivyo, tafiti zimeonyesha kuwa viwango vya DA vinaongezeka katika NAC kwa kukabiliana na uchochezi wenye kutisha na cuse ya utabiri [10]. Zaidi ya hayo, NAC inakabiliwa sana na BLA [16], [17], kiini muhimu kwa hali ya hofu, na DA inafanya kazi ya neuronal katika NAc na BLA [18], [19], [20], [21 ]. Kwa hiyo, inawezekana kwamba kuunganishwa kati ya BLA na NAc, na DA ishara katika mikoa yote hii, inahitajika kwa hali ya hofu ya Pavlovian.
Kuamua kama DA inahitajika katika NAC na BLA kwa LTM katika hali ya hofu ya Pavlovian, tumefanya mfano wa mfano wa panya wa Dopamine (DD) ambao hauna uwezo wa kuunganisha DA kutokana na kuingizwa kwa loxP-flanked transcriptional / translation stop kanda katika tyrosine hydroxylase (Thfs) gene [22]. Kwa uwepo wa recombinase ya Cre, dalili ya DA inaweza kuchaguliwa kwa makini kwa mikoa maalum ya lengo kwa upyaji wa Thfs kupotea kupitia kuondolewa kwa kanda ya kuacha. Tulikuwa na virusi vya kupinduliwa vyekundu vinavyotangaza Cre recombinase ili kurejesha DA kwa NAC peke yake, au kwa NAC na BLA. Matokeo yetu yanaonyesha kwamba DA katika NAC na BLA inatosha kuanzisha LTM kwa Ramprogrammen.
Matokeo
Marejesho ya TH katika panya ya DD iliyookolewa Virusi
Kuamua ambapo katika ubongo DA ni muhimu kwa ajili ya kuundwa kwa LTM kwa ramprogrammen, kazi DA ilirejeshwa katika panya DD kupitia sindano ya CAV2-Cre recombinase. Virusi hii huathiri neurons na inaruhusiwa kusafirishwa kutoka kwenye tovuti ya sindano [23]. Ikiwa imeingizwa ndani ya kiini cha lengo la DA neurons kwenye panya za DD, virusi hii itachukuliwa tena kwa DA neurons ya midbrain ya ndani ambayo inadhuru kanda ya kusimama iliyosababishwa na hivyo kuimarisha Th gene, kurejesha uzalishaji wa TH, na kuruhusu uzalishaji wa DA tu kwa malengo yaliyochaguliwa [22]. Tulitumia mbinu hii katika makundi mawili tofauti ya panya. Kwa sababu NAC ni lengo kubwa la neurons za DA za VTA [2], tulifikiri kwamba kiini hiki kinaweza kuwa muhimu kwa kuundwa kwa LTM kwa ramprogrammen; Kwa hiyo, sindano za nchi mbili za CAV2-Cre zilifanywa katika NAC katika kikundi kimoja. Tulijaribu pia dhana ya kwamba DA inaweza kuhitajika katika malengo mengi ya VTA ya LTM. Ili kupima hii, sindano za nchi mbili zilifanywa katika NAC na BLA ya panya ya DD.
Immunohistochemistry ilitumiwa kuthibitisha urejesho wa TH kazi katika panya za DD zilizojitokeza virusi (Kielelezo 1). Kama ilivyovyotarajiwa, kulikuwa na ishara yenye nguvu kwa TH katika panya ya udhibiti ya NAC ambayo imeunganishwa na mtengenezaji wa DA (DAT) (Kielelezo 1A-D). TH pia iligunduliwa katika BLA ya panya za udhibiti (Kielelezo 1E); hata hivyo, DAT immunoreactivity ilikuwa chini sana katika BLA na kwa hiyo haionyeshe. Immunohistochemistry pia ilifanyika kwenye tishu za ubongo kutoka panya zisizo sindano DD (Kielelezo 1 F-J). Hakukuwa na ishara ya TH inayoonekana katika NAC (Kielelezo 1F, G), lakini uchafu wa DAT ulikuwapo (Kielelezo 1H, I). BLA ya panya ya DD pia kwa kiasi kikubwa hakuwa na uchafu wa TH (Kielelezo 1J).
Kielelezo 1
Urejesho wa kuchagua wa TH katika panya za DD zinazookolewa na virusi.
Immunohistochemistry kutoka kwa panya za DD zilizojitokeza za NAc zilionyesha kuwa TH ilirejeshwa kwa kiasi kikubwa cha NAC (Kielelezo 1K-N). Hakuna TH inayoonekana kuchukuliwa katika BLA ya panya ya DD iliyojitokeza ya NAc (Kielelezo 1O). Uokoaji mara mbili kwa NAC na BLA ulisababisha ishara imara kwa TH katika NAc (Kielelezo 1P-S) na ishara yenye nguvu ya TH katika BLA (Kielelezo 1T). Takwimu hizi zinaonyesha kwamba sindano ya virusi ya CAV2-Cre ilikuwa yenye ufanisi katika kurejeshwa kwa neno la TH ambalo maeneo ya ubongo yalijeruhiwa.
Ili kuthibitisha kwamba uokoaji wa virusi wa TH ulisababisha kurejesha DA katika panya za DD zilizojitokeza, tulibainisha DA, metabolites ya DA na norepinephrin kutumia chromatography ya kioevu ya juu ya utendaji (HPLC; Jedwali 1). Kwa jaribio hili, tulifanya uokoaji katika NAC au amygdala ili pia kutambua kama uokoaji wa TH katika lengo moja la DA makadirio yangeathiri viwango vya DA katika eneo lingine, ambalo halijatumiwa. Tuligundua kwamba panya za DD zilizoharibika za dopamine zilikuwa na 0.51% ya kudhibiti viwango vya DA katika NAc na 1.39% ya viwango vya kudhibiti katika amygdala. Nac-waliokolewa Dice panya walikuwa DA ngazi ambayo ilikuwa 34.0% ya kudhibiti katika NAC; lakini viwango vya DA katika amygdala vilikuwa sawa na viwango vya DD ambavyo hazijinjwa (1.57%). Shambulio la DD la Amygdala-lilikuwa na viwango vya DA katika amygdala ambazo zilikuwa 38.4% ya udhibiti, lakini viwango vya DA katika NAC vilikuwa sawa na viwango vya DD ambavyo hazijaokolewa (0.46%). Matokeo haya yanaonyesha kwamba uokoaji wa virusi wa kupambana na virusi vya TH unasababisha viwango vya DA vya juu katika mikoa ya lengo la sindano ya panya za DD.
Aidha, sindano ya virusi katika NAC au amygdala haikuongoza kwenye kiwango cha DA katika lengo lingine. Hatimaye, kwa sababu TH inaonyeshwa kwenye neurons ya noradrenergic ya panya ya DD [24], [25], tulihusisha kiasi kidogo cha TH kinachoonekana katika IHC ya BLA katika panya DD kwa axoni za noradrenergic. Uwepo wa norepinephrine katika BLA ya panya zisizookolewa DD ilithibitishwa na HPLC (Jedwali 1).
Meza 1
Quantification ya HPLC ya DA, NE, na metabolites ya DA.
Dopamine Inahitajika katika NAC na BLA kwa Kumbukumbu ya muda mrefu
Kishindo kinachoweza kusababishwa na hofu ni aina ya hali ya Pavlovian ambapo kichocheo kilichowekwa huchochea ongezeko la mwitikio wa mshtuko wa akustisk [15]. Ili kuhakikisha kwamba urejeshaji mahususi wa DA pekee kwa NAc, au kwa NAc na BLA pekee, hautatiza mwitikio wa mshtuko wa akustisk yenyewe, mikondo ya majibu ya mshtuko ilitolewa kwa vidhibiti na panya wa DD waliookolewa (Mchoro 2A). Uchambuzi wa hatua mbili za kurudiwa kwa tofauti (RM ANOVA) ulifunua athari kubwa ya kiwango cha sauti (F(4,172) = 37.1, p<0.01), lakini hakuna kikundi kwa mwingiliano wa matibabu. Usumbufu wa utendakazi wa DA pia unaweza kusababisha tofauti katika upenyezaji wa sensorimotor ambayo inaweza kudhoofisha FPS [15], [26]. Ili kuchambua upenyezaji wa sensorimotor, panya wote walijaribiwa katika viwango vingi katika dhana ya kuzuia prepulse (PPI) (Kielelezo 2B). Kulikuwa na athari kubwa ya prepulse intensiteten (RM ANOVA F(2,86) = 57.79, p<0.01) lakini hakuna kundi kwa mwingiliano wa matibabu. Matokeo haya yanaonyesha kuwa uokoaji mahususi wa kuashiria DA kwa NAC, au NAc na BLA, uliosababishwa na upotoshaji wetu wa majaribio haukubadilisha mwitikio wa mshtuko wa akustisk au mlango wa sensorimotor. Mchoro 2 Urejeshaji wa DA kwa NAc na BLA unatosha kwa LTM. kwa FPS. Panya walikuwa chini ya dhana ya hali ya hofu (Kielelezo 2C). Wakati wa mafunzo, panya walipewa majaribio 30 ambapo kiashiria cha mwanga cha sekunde 10 kiliunganishwa na mshtuko mdogo wa miguu (sekunde 0.5, 0.2 mA). Kumbukumbu ya muda mfupi (STM) ilijaribiwa dakika 10 baada ya mafunzo na LTM ilijaribiwa saa 24 baadaye. Hakukuwa na tofauti kubwa kati ya vikundi kabla ya kuweka hali. Kufuatia mafunzo, STM ilirejeshwa kabisa katika panya za DD na kurejeshwa kwa NAc na BLA. STM katika panya za DD zilizodungwa za NAc ziliharibika, lakini athari hii haikuweza kufikia umuhimu; hata hivyo, walikuwa na LTM kidogo sana kuliko panya wa kudhibiti (p<0.05; Bonferroni posttest). LTM ilirejeshwa kabisa kwa viwango vya udhibiti katika panya za DD zilizodungwa pande mbili kwenye NAc na BLA. Hakukuwa na tofauti kubwa kati ya vikundi katika mmenyuko wa kitabia kwa mshtuko wa miguu (Kielelezo 2D). Data hizi zinaonyesha kuwa DA katika NAc na BLA inatosha kuwezesha LTM kwa ramprogrammen.
Majadiliano
DA inadhaniwa kuwezesha kuimarisha na kuundwa kwa LTM katika mikoa muhimu ya ubongo kama vile amygdala, NAc na hippocampus [27], [28], [29], na masomo ya awali yamesema nafasi ya DA katika hali ya hofu ya Pavlovian [ 13]. Hapo awali, tulionyesha kuwa DA ni muhimu kwa kuimarisha kumbukumbu ya kumbukumbu katika dhana ya FPS [12]. Zaidi ya hayo, marejesho ya kazi ya DA kwa mzunguko wa mesocorticolimbic kutoka kwa VTA ulikuwa wa kutosha kurejesha STM na LTM kwa ramprogrammen, lakini marejesho kwa BLA pekee yamerejeshwa STM [12]. Hata hivyo, tovuti za hatua za DA zinazohitajika kwa ajili ya kuundwa kwa LTM katika aina hii ya kujifunza haijulikani. Hapa, tunaonyesha kuwa marejesho ya awali ya DA kwa NAC na BLA yanatosha kwa LTM kwa ramprogrammen. Tunaona pia kwamba marejesho ya TH kwa DA neurons zinazoelezea NAC haikuwa yenye ufanisi katika kuokoa STM kama kurejesha BLA [12], au kurejeshwa kwa BLA na NAC. Hii inaonyesha kuwa NAC inaweza kuwa muhimu zaidi kwa kuundwa kwa LTM kuliko STM.
Njia moja ya uwezo wa kurejesha virusi ni kwamba neurons za DA zinaweza kupeleka makadirio ya dhamana kwa lengo moja zaidi. Hivyo, virusi vya sindano ndani ya NAC inaweza kurejesha TH, na hivyo DA, kwa BLA. Matokeo yetu ya immunohistochemistry yanaonyesha kuwa neurons za DA zinazohifadhiwa NAC ni idadi ya watu tofauti kutoka kwa wale ambao hawakubali BLA kwa sababu sindano ya virusi katika kanda moja ya ubongo imeimarisha staa ya TH tu katika eneo hilo. Matokeo ya HPLC yanaimarisha hoja hii kwa sababu viwango vya DA vimeinua katika NAC ya panya za DD zilizookolewa na NA na sio katika amygdala. Matokeo haya ni sawa na tafiti nyingi ambazo zimezingatia uharibifu wa neurons za DA kulingana na lengo la makadirio [30], [31], [32], [33].
Mzunguko na utaratibu unaotokana na haja ya DA katika NAC na BLA kwa hali ya hofu ya Pavlovian bado haijafanywa. Kwa kushangaza, BLA inatuma makadirio kwa NAc [16], [34] na haya synapses yanaweza kupatikana kwa uwezekano wa muda mrefu, kiini muhimu inayohusiana na kujifunza na kumbukumbu [35]. Aidha, DA inasaidia LTP katika BLA na NAc [18], [21]. Kwa hiyo, wakati wa hali ya hofu ya Pavlovian, inawezekana kwamba DA katika BLA inawezesha shughuli za seli za pyramidal ya glutamatergic [19], [20], [36], ikiwa ni pamoja na seli hizo zinazozalisha NAc [34], wakati DA katika NAc inawezesha LTP ya BLA kwa synapses ya NA, na hivyo kukuza malezi ya LTM. Kuamua wakati sahihi wa matukio ya DA katika BLA na NAC kwa ramprogrammen itaongeza uelewa wetu wa mchakato huu.
Vifaa na mbinu
Taarifa ya Maadili
Vipande vyote vilipatiwa kwa mujibu wa miongozo iliyoanzishwa na Taasisi za Afya za Taifa na taratibu na panya ziliidhinishwa na Kamati ya Chuo Kikuu cha Washington Chakula cha Mnyama na Kamati ya Matumizi (2183-02).
Wanyama na matibabu
Panya za DD zilizalishwa kama ilivyoelezwa [22]. Kwa kifupi, DD (Thfs / fs; DbhTh / +) panya hubeba alleles mbili za tyrosine hydroxylase (Th) ambazo zinaweza kuimarishwa na Cre recombinase. Panya ya DD ina dopamini isiyo ya kawaida ya β-hydroxylase (Dbh) yalele, na Dbh moja inakabiliwa na kuingizwa kwa lengo la Th gene ili kuruhusu uzalishaji wa kawaida wa norepinephrine [24], [25]. Kudhibiti wanyama kubeba angalau moja ya Th inakamilika na moja ya ndani ya Dbh allele. Panya za kiume na za kiume zilikuwa zikijaribu kupima tabia kati ya miezi ya 2-6 miezi. Vipande vyote vilikuwa vimewekwa chini ya mzunguko wa 12 (mwanga: giza) katika mazingira ya kudhibiti joto la joto (12LJ5; Feli za PMI, St. Louis, MO) na maji yaliyopatikana kwa ad libitum. Majaribio yote ya tabia yalifanyika wakati wa mzunguko wa mwanga. Kwa sababu panya za DD zina hatari sana, zilikuwa zimejitokeza kila siku (intraperitoneally) na 5, 3-dihydroxy-L-phenylalanine (L-Dopa) kwenye 4 mg / kg kwa kiasi cha 50 μl / g, kuanzia siku ya kuzaliwa baada ya kuzaliwa 33 [10]. Baada ya sindano ya virusi, panya za DD zilihifadhiwa na sindano za kila siku za L-Dopa mpaka waweze kula kwa kutosha bila matibabu zaidi ya L-Dopa.
Majeraha ya Virusi
Isoflurane (1.5-5%) - panya za anesthetized ziliwekwa kwenye chombo cha stereotaxic (David Kopf Instruments, Tujunga, CA). Kwa kurejeshwa kwa jeni la Th hufanya kazi katika kiini cha accumbens peke yake, virusi vya CAV2-Cre (vyema katika vipengele vya 2.1 × 1012 / ml) viliingizwa bilaterally (kuratibu mm: 1.7 anterior kwa Bregma, 0.75 imara kwa midline, mstari wa 4.75 kwa Bregma; 0.5 μl / hemphere) katika DD na kudhibiti panya. Kwa ajili ya kurejeshwa mara mbili kwa DA kwa NAc na BLA, virusi vya CAV2-Cre ziliingizwa katikati ya NAC, kama hapo juu, na BLA (mipangilio ya mm: 1.5 posterior kwa Bregma, 3.25 imara kwa midline, 5 ventral kwa Bregma; 0.5 μl / hemisphere) katika DD na kudhibiti panya. Maelezo ya kina ya vector hii ya virusi imechapishwa [22]. Virusi zilijeruhiwa kwa kipindi cha muda wa 10 kwa kutumia sindano ya sindano ya 32-sindano (Hamilton, Reno, NV) iliyounganishwa na pampu ndogo ya infusion (WPI, Sarasota, FL). Udhibiti wa panya kutoka kwa NAc peke yake na makundi ya uokoaji mara mbili yaliandaliwa kwenye kikundi kimoja na hakuwa na tofauti katika parameter yoyote ya tabia.
Apparatus
Vipengele vya kuondokana na sauti (SR-Lab, San Diego Instruments, San Diego, CA) vilikutumiwa kupima kuzuia maambukizi, majibu ya mshangao, na mshtuko wa kutisha, kama ilivyoelezwa [12]. Upeo wa kilele cha majibu ulitumiwa kuhesabu kuzuia uharibifu, majibu ya mshangao, mshtuko wa kuogopa, na usumbufu wa kutisha. Viwango vya sauti vilihakikishwa kwa kutumia msomaji wa kiwango cha sauti (RadioShack, Fort Worth, TX). Kitengo cha calibration kilitumiwa ili kuhakikisha utimilifu wa masomo ya majibu ya mshangao (San Diego Instruments, San Diego, CA). Nuru ya 8-watt ilikuwa imewekwa kwenye ukuta wa nyuma wa sanduku la kushangaa kwa matumizi kama cue.
Swala za majibu ya mwanzo
Ufuatiliaji wa muda wa dakika ya 5, wanyama waliwasilishwa na majaribio ya 10 ya majaribio na viwango vya kuongezeka kwa sauti za sauti: kutoka null, ambayo hakuwa na sauti, kwa 105 dB, na ITI ya sekunde ya 30. Pigo zote za sauti zilikuwa 40 msec.
Kuzuia kabla ya vurugu
PPI ilipimwa kama ilivyoelezwa [12]. Kwa kifupi, baada ya kipindi cha mazoezi, panya ziliwasilishwa na 5, 40-msec, 120-dB, majaribio ya pigo-peke yake. Panya kisha ziliwasilishwa na majaribio ya 50 ya majaribio ya mshtuko wa pekee, mojawapo ya majaribio matatu (5, 10, na 15-dB juu ya background), au jaribio la wazi ambalo hakuwa na kuchochea kwa sauti. Kuzuia maambukizi ilifanyika kwa kila ngazi ya kuenea kwa kutumia fomu ifuatayo:% inhibition = [(wastani wa majibu ya mshangao juu ya majaribio ya kutangulia / wastani wa jibu la kutisha juu ya jaribio la pigo-pekee) × 100].
Mshtuko wa kutisha
Vipande vyote vilijaribiwa kwa kutumia dhana ya FPS ya siku ya 3 kama ilivyoelezwa [12]. Kwa kifupi, juu ya msingi, panya walipewa mfululizo wa maagizo ya 20 ya pseudo-randomly, kupasuliwa sawasawa kati ya hali ya cue na hakuna-cue. Siku ya 2, panya zilipokea jozi za 30 (2 min inamaanisha ITI) ya mwanga wa 10-cue mwanga na 0.2-mA, 0.5-sec footshock. Panya kisha waliwekwa kwenye mabwawa yao ya nyumbani kwa minara ya 10 kabla ya kupima kumbukumbu ya muda mfupi. Siku ya 3, LTM ilipimwa. Fomu ifuatayo ilitumiwa kuhesabu janga la kutisha:% potentiation = [(wastani wa majibu ya majaribio ya cue / wastani wa majibu ya majaribio yasiyo ya cue-1) × 100].
Immunohistochemistry
Mouse tishu ya ubongo iliandaliwa uchambuzi wa histolojia kwa kutumia mbinu za kawaida, kama ilivyoelezwa [12]. Sehemu za kondomu zisizo na joto (30 μm) zilikuwa zimehifadhiwa na sungura dhidi ya TH (1 2000, Millipore) na anti-DAT za kupambana na DAT (1 1000, Millipore). Antibodies za Sekondari zilikuwa Cy2- au Cy3-conjugated (1 200, Jackson ImmunoResearch). Picha zilichukuliwa na darubini yenye nguvu yenye mkali (Nikon).
Chromatography ya kioevu ya juu ya utendaji
Panya ziliunganishwa na Beuthanasia (250 mg / kg) na kisha akili zikaondolewa na kuwekwa kwenye safu ya marble ya baridi. Kutumia tumbo la ubongo (Mfumo wa Uendeshaji, Warrren, MI), vipande vidogo vya 1-mm vilichukuliwa kupitia NAc au amygdala. Vipande vya tishu (1-mm kipenyo) vilichukuliwa, viliwekwa katika vijiko vya microcentrifuge vya 1.7 mL, na visivyohifadhiwa haraka katika nitrojeni ya maji. Sampuli zilihifadhiwa katika -80 ° C mpaka zilipelekwa kwenye Barafu la Kavu hadi kwa Neurochemistry Core Lab (Venderbilt Chuo Kikuu cha Chuo Kikuu cha Utafiti wa Kisaikolojia ya Masi) kwa uchambuzi.
Uchambuzi wa Takwimu
Uchambuzi wa takwimu ulifanyika kwa kutumia programu ya GraphPad Prism (La Jolla, California).
Shukrani
Tunamshukuru Larry Zweifel kwa maoni ya manufaa juu ya maandishi, Glenda Froelick na Albert Quintana kwa msaada wa histology, na Valerie Wall kwa ajili ya matengenezo ya koloni ya panya. Pia tunamshukuru Dk. Miguel Chillon (Kituo cha Vector Production of CBATEG katika Universitat Autonoma ya Barcelona) kwa CAV2.
Maelezo ya chini
Maslahi ya kushindana: Waandishi wametangaza kuwa hakuna maslahi ya mashindano yanayopo.
Ufadhili: Uchunguzi huu uliungwa mkono kwa sehemu na Taasisi ya Matibabu ya Howard Hughes, Huduma ya Afya ya Umma, Tuzo ya Huduma ya Kitaifa ya Utafiti, T32 GM07270, kutoka Taasisi ya Kitaifa ya Sayansi ya Tiba ya Jumla na Taasisi za Kitaifa za NIH za Ruzuku ya Sayansi ya Tiba 4 R25 GM 058501- 05. Wafadhili hawakuwa na jukumu katika usanifu wa masomo, ukusanyaji wa data na uchambuzi, uamuzi wa kuchapisha, au kuandaa hati hiyo.
Marejeo
1. Bjorklund A, Dunnett SB. Dopamine neuron mifumo katika ubongo: update. Mwelekeo wa Neurosci. 2007; 30: 194-202. [PubMed]
2. Mashamba HL, Hjelmstad GO, Margolis EB, Nicola SM. Viwango vya neurons ya eneo la kujitolea katika kujifunza tabia ya kupendeza na kuimarisha chanya. Annu Rev Neurosci. 2007; 30: 289-316. [PubMed]
3. Maren S. Neurobiolojia ya hali ya hofu ya Pavlovian. Annu Rev Neurosci. 2001; 24: 897-931. [PubMed]
4. Brischoux F, Kikraborty S, Brierley DI, Ungless MA. Msisimko wa Phasic wa neopons ya dopamini katika VTA ya msingi kwa uchochezi. Proc Natl Acad Sci US A. 2009; 106: 4894-4899. [Maelezo ya bure ya PMC] [PubMed]
5. Guarraci FA, Kapp BS. Tabia ya electrophysiological ya neurons ya dopaminergic ya eneo la kijivu wakati wa hali tofauti ya hofu ya pavlovian katika sungura ya awake. Behav Ubongo Res. 1999; 99: 169-179. [PubMed]
6. Joshua M, Adler A, Mitelman R, Vaadia E, Bergman H. Midbrain neurons ya dopaminergic na interneurons ya uzazi wa kizazi hutofautiana kati ya malipo na matukio ya aversive katika wakati tofauti wa majaribio ya hali ya kawaida ya uwezekano. J Neurosci. 2008; 28: 11673-11684. [PubMed]
7. Abercrombie ED, Keefe KA, DiFrischia DS, Zigmond MJ. Tofauti tofauti ya dhiki kwenye kutolewa kwa dopamini katika striatum, kiini accumbens, na kamba ya mbele ya kati. J Neurochem. 1989; 52: 1655-1658. [PubMed]
8. Inglis FM, Moghaddam B. Ukosefu wa usafi wa amygdala ni wajibu sana kwa shida. J Neurochem. 1999; 72: 1088-1094. [PubMed]
9. Kalivas PW, Duffy P. Utekelezaji wa utekelezaji wa dopamine maambukizi katika shell ya kiini accumbens na stress. Resin ya ubongo. 1995; 675: 325-328. [PubMed]
10. Pezze MA, Heidbreder CA, Feldon J, Murphy CA. Uteuzi wa kuchagua wa msingi wa kiini kukusanya na dopamini ya shell kwa hali ya hali ya hewa iliyo na hali na maelekezo yasiyofaa. Neuroscience. 2001; 108: 91-102. [PubMed]
11. de Oliveira AR, Reimer AE, Brandao ML. Dopamine D2 receptor utaratibu katika hotuba ya hofu iliyowekwa. Pharmacol Biochem Behav. 2006; 84: 102-111. [PubMed]
12. Fadok JP, Dickerson TM, Palmiter RD. Dopamine ni muhimu kwa hali ya hofu inayotokana na hofu. J Neurosci. 2009; 29: 11089-11097. [Maelezo ya bure ya PMC] [PubMed]
13. Pezze MA, Feldon J. Mesolimbic njia dopaminergic katika hali ya hofu. Prog Neurobiol. 2004; 74: 301-320. [PubMed]
14. Ponnusamy R, Nissim HA, Barad M. Uzuiaji wa mfumo wa D2-kama dopamine receptors huwezesha kuangamizwa kwa hofu katika panya. Jifunze Mem. 2005; 12: 399-406. [Maelezo ya bure ya PMC] [PubMed]
15. Koch M. Neurobiolojia ya mshangao. Prog Neurobiol. 1999; 59: 107-128. [PubMed]
16. Sesack SR, Grace AA. Cortico-basal Ganglia malipo ya mtandao: microcircuitry. Neuropsychopharmacology. 2010; 35: 27-47. [Maelezo ya bure ya PMC] [PubMed]
17. McGaugh JL. Amygdala inasababisha kuimarisha kumbukumbu za uzoefu wa kuchochea kihisia. Annu Rev Neurosci. 2004; 27: 1-28. [PubMed]
18. Bissiere S, Humeau Y, Luthi A. milango ya Dopamine LTP induction katika amygdala ya nyuma kwa kuzuia kuzuia feedforward. Nat Neurosci. 2003; 6: 587-592. [PubMed]
19. Kroner S, Rosenkranz JA, Grace AA, Barrionuevo G. Dopamine hupunguza msukumo wa neurons ya amygdala ya msingi katika vitro. J Neurophysiol. 2005; 93: 1598-1610. [PubMed]
20. Marowsky A, Yanagawa Y, Obata K, Vogt KE. Kitengo maalum cha interneurons kinasaidia uendeshaji wa dopaminergic wa kazi ya amygdala. Neuron. 2005; 48: 1025-1037. [PubMed]
21. Wolf ME, Sun X, Mangiavacchi S, Chao SZ. Kichocheo cha kisaikolojia na plastiki ya neuronal. Neuropharmacology. 2004; 47 (Suppl 1): 61-79. [PubMed]
22. Hnasko TS, Perez FA, Scouras AD, Stoll EA, Gale SD, et al. Marejesho ya urekebishaji wa urekebishaji wa dopamine ya nigrostriatal katika panya ya upungufu wa dopamini huwahirisha hypophagia na bradykinesia. Proc Natl Acad Sci US A. 2006; 103: 8858-8863. [Maelezo ya bure ya PMC] [PubMed]
23. Soudais C, Laplace-Builhe C, Kissa K, Kremer EJ. Transduction ya upendeleo ya neva na vectors ya canine adenovirus na ufanisi wao wa kurejesha usafiri katika vivo. FASEB J. 2001; 15: 2283-2285. [PubMed]
24. Szczypka MS, Rainey MA, Kim DS, Alaynick WA, Marck BT, et al. Kulisha tabia katika panya ya uharibifu wa dopamini. Proc Natl Acad Sci US A. 1999; 96: 12138-12143. [Maelezo ya bure ya PMC] [PubMed]
25. Zhou QY, Palmiter RD. Panya ya upungufu wa Dopamine ni kali sana, ya adipsic, na ya aphagic. Kiini. 1995; 83: 1197-1209. [PubMed]
26. Swerdlow NR, Braff DL, Geyer MA. Mifano ya wanyama wa kupoteza sensorimotor duni: nini tunajua, nini tunadhani tunajua, na nini tunatarajia kujua hivi karibuni. Behav Pharmacol. 2000; 11: 185-204. [PubMed]
27. LaLumiere RT, Nawar EM, McGaugh JL. Uwezeshaji wa kuimarisha kumbukumbu na msingi wa amygdala au kikaboni kichocheo huhitaji uingizaji wa dopamine ya receptor katika maeneo yote ya ubongo. Jifunze Mem. 2005; 12: 296-301. [Maelezo ya bure ya PMC] [PubMed]
28. Manago F, Castellano C, Oliverio A, Mele A, De Leonibus E. Wajibu wa dopamini receptors subtypes, D1-kama na D2-kama, ndani ya mikoa ya kijijini accumbens, msingi na shell, juu ya kukumbusha kumbukumbu katika kesi moja ya kuzuia kuepuka kazi. Jifunze Mem. 2009; 16: 46-52. [PubMed]
29. Rossato JI, Bevilaqua LR, Izquierdo I, Medina JH, Cammarota M. Dopamine hudhibiti uendelezaji wa kuhifadhi kumbukumbu ya muda mrefu. Sayansi. 2009; 325: 1017-1020. [PubMed]
30. Lammel S, Hetzel A, Hackel O, Jones I, Liss B, et al. Vipengele vya kipekee vya neurons za misafa ya ndani ya mfumo wa dopamine mbili ya mesocorticolimbic. Neuron. 2008; 57: 760-773. [PubMed]
31. Ford CP, Mark GP, Williams JT. Mali na uharibifu wa opioid ya neurons ya macholimbic ya dopamine inatofautiana kulingana na eneo la lengo. J Neurosci. 2006; 26: 2788-2797. [PubMed]
32. Margolis EB, Lock H, Chefer VI, Shippenberg TS, Hjelmstad GO, et al. Kappa opioids hutegemea neuroni za dopaminergic zinazoelekea kwenye kamba ya prefrontal. Proc Natl Acad Sci US A. 2006; 103: 2938-2942. [Maelezo ya bure ya PMC] [PubMed]
33. Margolis EB, Mitchell JM, Ishikawa J, Hjelmstad GO, Fields HL. Midbrain dopamine neurons: lengo la makadirio huamua muda wa uwezekano wa muda na dhibamu ya Dopamine D (2) ya upokeaji. J Neurosci. 2008; 28: 8908-8913. [PubMed]
34. McGaugh JL, McIntyre CK, Power AE. Amygdala modulation ya kumbukumbu ya uimarishaji: mwingiliano na mifumo mingine ya ubongo. Neurobiol Jifunze Mem. 2002; 78: 539-552. [PubMed]
35. Popescu AT, Saghyan AA, Pare D. NMDA-kuwezesha utegemezi wa plastiki corticostriatal na amygdala. Proc Natl Acad Sci US A. 2007; 104: 341-346. [Maelezo ya bure ya PMC] [PubMed]
36. Rosenkranz JA, Grace AA. Mfumo wa kuingiliana wa Dopamine ya uwezekano wa harufu ya kutosha ya amygdala wakati wa hali ya pavlovian. Hali. 2002; 417: 282-287. [PubMed]
;