Indian J Pharmacol. 2016 Jan-Feb; 48 (1): 53-58.
PMCID: PMC4778208
abstract
Lengo:
Nucleus accumbens (NAcc) ina jukumu la madawa ya kulevya na tabia ya kumeza. Ili kutathmini mfumo wa orexinergic unaohusika na hii, tulimpuuza Orexin Mpinzani na tathmini athari ya ulaji wa maji ya ulaji na upendeleo wa pombe katika panya za Wistar.
Nyenzo na njia:
Panya zilizowekwa ndani ya Wistar (n = 54) ziligawanywa katika vikundi vya udhibiti na majaribio (kipimo cha chini na kipimo kingi). Kutumia njia ya kinyongo, cannula ya mwongozo iliwekwa katika nchi mbili kufikia NAcc. Kiwango cha chini (3 ng) na kipimo cha juu (6 ng) cha Orexin antagonist (SB-334867) kiliingizwa, na matumizi ya chakula, ulaji wa maji na ulaji wa pombe, na mtihani wa upendeleo wa bure wa chupa ulifanywa katika jaribio la kunywa la pombe. kikundi cha majaribio. Kikundi cha kudhibiti kilipokea infusion ya saline na njia zifuatazo zilikuwa sawa. Vipimo vilifanywa mara moja baada ya infusion, saa 1 h, 2 h, 4 h, na kwa siku nzima na kuwakilishwa kwenye takwimu na meza.
Matokeo:
Kupungua kwa ulaji wa maji kuzingatiwa mara baada ya infusion katika 1st h (P <0.05) na 2nd h (P <0.01), ambayo ilikuwa katika kundi kubwa la kipimo ikilinganishwa na kipimo na udhibiti mdogo. Ulaji wa pombe pia ulikuwa ukifuata muundo huo huo. Katika chaguo mbili za bure za chupa, panya hazikuonyesha upendeleo wowote wa pombe.
Hitimisho:
Kulikuwa na utegemezi wa kipimo cha ulaji wa chakula na maji katika panya zilizotibiwa. Hii ilionyesha jukumu linalowezekana kwa mfumo wa orexinergic katika tabia ya kunyonya. Walakini, Orexin A inaweza kuwa na jukumu la kusumbua ulevi wa kileo na kituo cha thawabu NAcc.
kuanzishwa
kujulikana (NAcc) inajulikana kuathiri tabia ya kumeza na ulevi wa dutu. [1,2] Imeathiriwa pia katika ujira na motisha. [3] Mikoa ndogo mbili imeelezewa katika NAcc, na ilionekana mwingiliano mwingi katika utendaji wa mkoa huu mbili. [4] Microinjection ya madawa ya kulevya ndani ya NAcc ilionyesha kuongezeka kwa kiwango cha kipimo cha viwango vya dopamine. Dopamine ni neva inayohusika katika mzunguko wa malipo. Utawala wa kibinafsi wa amfetamini wa ndani unaonyesha kuongezeka kwa hisia za ujira. [5] Sehemu zingine katika mkoa wa subcortical pia hushawishi tabia ya kumeza, ambayo inaweza kuhusishwa kwa karibu na accumbens. Ulaji wa chakula na ulaji wa maji vilionyeshwa kuathiriwa na sehemu kadhaa za ubongo wa basal, kama vile hypothalamus ya baadaye.6] kiini cha patriometri, septum pellucidum, [7] na amygdala za kimsingi. [8] Kuna mtandao wa neural wa kina katika udhibiti wa tabia ya kumeza. NAcc imeonyeshwa kuunganishwa vizuri na vituo vikubwa vya subcortical, kama eneo la sehemu ndogo (VTA);9] Amygdala za basolateral na vituo vingine. [10] Neurotransmitters kubwa zinazohusika katika mabadiliko ya ulaji wa pombe, thawabu, na ulaji wa chakula ziliripotiwa kutoka kwa mizunguko ya neural katika mkoa huu. [11]
Hivi karibuni, wanafalsafa, kundi la peptidi kubwa zaidi, wameonekana kutoka kwa hypothalamus, hypocretin 1 na 2 (Orexin A na B), peptides kuwa na 32 aa na 29 aa, mtawaliwa.12] Awali, vitu hivi vimeathiriwa katika udhibiti wa mzunguko wa kulala, kama inavyothibitishwa na kuongezeka kwa Orexin A iliyopatikana katika hypothalamus wakati wa harakati ya kuamka.13] Katika maabara yetu, tuligundua kwamba Orexin A kuongezeka kwa chakula na ulaji wa maji wakati umeingizwa NAcc. [14] Kinga ya orexin iliyosimamiwa na serikali ya kawaida inazuia ulaji wa ulaji wa chakula kwa kutegemewa katika 24 h ilifunga panya haraka, na utawala wa ndani wa antire ya orexin ulishindwa kukandamiza matumizi ya chakula, inawakilisha kwamba anti-orexin inachukua hatua kwenye mfumo mkuu wa neva lakini sio kwenye tishu za pembeni. [15] Zaidi ya hayo, walithibitisha kwamba orexini za asili wana jukumu la kisaikolojia juu ya tabia ya kulisha. Ingawa mwanzoni Orexins walikuwa wamewekwa kuathiri tabia ya kumeza, ushahidi wa jukumu la Orexin A katika tabia ya kulisha na ulaji wa vileo na pia upendeleo wa pombe ni sketchy. Katika utafiti wetu wa zamani, tumeonyesha kuwa Orexin A ongezeko la chakula na ulaji wa maji kwenye panya zilizochomwa. [14] Ili kufafanua jukumu la Orexin A katika shughuli za kumeza bila kutarajia, tulifanya majaribio haya katika panya za kiume za Wistar zilizofungiwa usiku kucha, kwa kuingiza Orexin antagonist SB-334867 kwenye NAcc. [16] Tulipima pia upendeleo wa pombe katika panya zilizotibiwa ili kufafanua athari za Orexin Mpinzani juu ya ulaji wa pombe. Matokeo ya majaribio juu ya ulaji wa chakula, maji na pombe, na upendeleo wa pombe yanajadiliwa hapa.
Vifaa na mbinu
Panya hamsini na nne wa kiume Wistar albino panya (n = 54) uzito (250 ± 10 g), umri wa miezi ya 3-4 walichaguliwa kwa masomo. Waligawanywa katika vikundi vitatu. Kikundi cha maji, kikundi cha pombe na kikundi cha chaguo cha bure cha chupa (n = 18 kila mmoja). Waligawanywa katika vikundi vitatu, yaani. Kikundi 1 - Udhibiti (infusion ya Saline); Kikundi cha 2 - Kiwango kidogo cha SB-334867 (3 ng); Kikundi cha 3 - Kiwango kikubwa cha SB-334867 (6 ng, n = 6 kila mmoja). Chakula na maji vilitolewa kwa vikundi vyote ad lib, isipokuwa ambapo imetajwa kwa kufunga mara moja.
Wanyama wote waliwekwa peke yao katika mabwawa ya polypropen, na kitanda sahihi cha huski na kudumishwa kwenye mzunguko wa taa ya 12-h / giza katika mazingira ya kudhibiti joto. Wanyama walitunzwa kulingana na miongozo ya kamati kwa madhumuni ya kudhibiti na kusimamia majaribio juu ya wanyama na miongozo ya Serikali ya India kwa matumizi ya wanyama wa maabara. Kamati ya Maadili ya Wanyama ya Taasisi imeidhinisha itifaki hii ya utafiti.
Dawa za Kulevya na vifaa
Saline 0.9%, SB-334867 (Kutoka: Tocris bioscience) ilifutwa katika cyNodeX cyclodextran katika maji yenye kuzaa. Wakati haikutumika, suluhisho zilihifadhiwa katika 2 ° C hadi wiki za 4. Pampu ya kuingiza ya Harvard Pico pamoja (USA) ilitumiwa kupeleka dawa. Maji ya bomba yalitolewa katika chupa za kunywa za Plastiki, na pelleti za chakula za pete (Hindustan Unilever Ltd.,) zilitolewa. Pombe ya Ethyl (Absolute) ilinunuliwa (Hayman Ltd., Eastways Park, Witham, Essex, CM3YE, UK) na kuongezwa kwa kutengeneza pombe ya 83% (Mkusanyiko huu ulichaguliwa kwa msingi wa utafiti wa majaribio juu ya upendeleo wa mkusanyiko wa pombe) . Ketamine (NEON Maabara mdogo, Thane, MS) na xylazine (India immunological Ltd., Hyderabad) ilitumika kwa dawa ya anesthesia.
Utaratibu wa upasuaji
Panya za Wistar albino za kiume zilishonwa bila kuingiza mchanganyiko wa ketamine hydrochloride (60 mg / kg), xylazine hydrochloride (6 mg / kg) na kuwekwa kwenye vifaa vya stereotaxic (Inco, India). Macho yalifanywa kwenye ngozi, iliyosababishwa kabisa na roho ya upasuaji. Sehemu hiyo ilisafishwa na pamba na oksidi ya oksidi. Pointi za kuratibu ziliwekwa alama kwenye fuvu katika maeneo yanayolingana ili kufikia NAcc, kwa kumbukumbu ya Paxinos na atlas ya ubongo wa Watson [17] (Kutoka Bregma: Anteroposterior + 2.2 mm, imara ± 1 mm na wima 7.4 mm). Shimo la Burr ilitengenezwa, na cannula ya mwongozo wa chuma cha pua (22 chachi) iliingizwa kwa mujibu wa kuratibu za stereotaxic. Mara tu cannula iko mahali, imehifadhiwa kwa msaada wa screws na akriliki ya meno. Cannula ya mwongozo ilikuwa na mtindo, na panya waliruhusiwa kupona kwa angalau siku 7 kabla ya jaribio. Infusion cannula (cannula ya ndani) ilitengenezwa kutoka kwa sindano ya meno ya chuma ya Septoject isiyo na waya ya viwango vya 30 ambayo ina kitovu, inayofaa kwa kushughulikia. [18] Infusion cannula hadi 1 mm zaidi ya mwongozo unaofaa wa mwongozo. Kabla ya kuanza kwa majaribio panya zote zilipata vipindi viwili vya mafunzo ambavyo vilihifadhiwa kwenye 24 h kufunga basi zilipokea chakula, maji, na pombe ya 10%. Katika kipindi hiki, panya alijifunza kufunga.
Utaratibu wa majaribio
Saline ya kawaida na SB-334867 (katika kipimo kikuu mbili) iliingizwa, kwa mtiririko huo, katika vikundi tofauti vya panya baada ya kufunga kwa 24 h; panya bila kutafutwa (kusonga kwa bure) kupitia cannula ya mwongozo iliyohifadhiwa. Uingilizi huo ulifanywa na sindano ya 10 μl Hamilton iliyoshikamana na bomba la polyethilini na cannula ya ndani. Sindano hii iliwekwa kwenye pampu ya Harvard. Kisha mtindo uliowekwa kwenye cannula ya mwongozo uliondolewa. Cannula ya ndani iliingizwa kwenye cannula ya mwongozo na ililindwa. Kisha pampu ilianza kupeana suluhisho upande wa kulia na wa kushoto wa NAcc moja baada ya nyingine, 1 μl / min (baada ya kuingizwa kwa cannula ya ndani kushoto kwa karibu 10 s kuruhusu utengamano wa dawa). Vipimo viwili vya SB-334867 viliingizwa kwa 3 ng (kipimo cha chini) na 6 ng (kipimo cha juu). Mwisho wa infusion, cannula ya ndani iliondolewa, na maridadi iliwekwa nyuma katika msimamo na wakati ulibainika. Utangulizi wa chapisho, mara moja kiasi cha chakula, maji, na pombe ya 10% kilitolewa katika vikundi husika. Athari za SB-334867 kwenye matumizi zilipimwa na kubainika, kwa usawa kwa kuingiliana wakati wa 1, 2, 4, na 24 h, mtawaliwa. Iliyowekwa juu ya pellets, maji, na pombe iliondolewa, na kiasi kilichotumiwa kilihesabiwa (Kiasi kinachotumiwa = Kiasi kilichobaki juu ya wingi, kwa mfano, mwishoni mwa 1 h).
Kufuatia utafiti huo kukamilika, panya zilitolewa kwa kipimo kikali cha anesthesia na ubongo ukatolewa na kuhifadhiwa kwa usindikaji wa kihistoria. Sehemu saba za micron zilikatwa na kutiwa viini na cresyl violet kudhibitisha tovuti ya infusion [Kielelezo 1].
Takwimu ya Uchambuzi
Uchambuzi wa data ulifanywa kwa kutumia programu ya takwimu toleo la SPSS - 16 (SPSS ya Windows, Toleo la 16.0. Chicago, SPSS Inc. USA); Njia moja ANOVA ilifanywa kulinganisha tabia ya ukamilifu kati ya vikundi. Ulinganisho wa kati ulifanywa na baada ya hoc Jaribio la Tukey (Matumizi ya kila saa ikilinganishwa kando, mfano 1 h kudhibiti ulaji wa chakula dhidi ya 1 h SB-334867 ulaji wa chakula). Takwimu zilielezewa kama makosa ± makosa ya kawaida ya maana P <0.05, ilizingatiwa kuwa muhimu.
Matokeo
Jaribio I
Matumizi ya chakula na maji yalipimwa (n = 18) katika kundi hili, wanyama wa mifugo wa NAcc (n = 18). Dawa za kulevya ziliingizwa moja kwa moja ndani ya NAcc [Takwimu ilionyeshwa kwa Meza 1 na Kielelezo Kielelezo1a, 1a, , Bb].
Ulaji wa chakula
Ikilinganishwa na kudhibiti saa 1 h baada ya matibabu ya SB-334867 ilionyesha kupungua sana (F [2, 15] = 9.171 p = 0.003) katika ulaji wa chakula (km Kundi la 1 dhidi ya kikundi 3, p <0.002); wakati hakuna mabadiliko makubwa yaligunduliwa saa 2 (F [2, 15] = 0.190 p = 0.829); 4 h (F [2, 15] = 0.160 p = 0.854); Vipindi vya wakati wa 24 h baada ya muda (F [2, 15] = 4.873 p = 0.023) (Kikundi cha 1 dhidi ya Kikundi 3, p <0.028; Kikundi cha 2 dhidi ya Kikundi cha 3, p <0.05).
Ulaji wa maji
Matibabu ya SB-334867 haikuonyesha athari yoyote kwa ulaji wa maji kwa 1 h (F [2, 15] = 0.957 p = 0.406); 2 h (maji 2 h F [2, 15] = 0.773 p = 0.479); 4 h (F [2, 15] = 0.288 p = 0.753) vipindi vya wakati wa postinfusion; lakini ulaji kamili wa maji wa 24 h ulipunguzwa (F [2, 15] = 10.688 p = 0.001) ikilinganishwa na kudhibiti (Kikundi cha 1 dhidi ya Kikundi 3, p <0.002; Kikundi cha 2 dhidi ya Kikundi cha 3, p <0.006).
Jaribio II
Pombe (10%) na utumiaji wa chakula kilipimwa [n = 18, data ndani Meza 2 na Kielelezo 2].
Panya zilizogunduliwa ziligawanywa katika kikundi kidogo, Kundi la 1 (0.9% saline n = 6), Kikundi 2 (SB-334867-3 ng, n = 6), na Kikundi 3 (SB-334867-6 ng, n = 6).
Matokeo ya ulaji wa pombe ya 10%
Katika matibabu ya 1 h na 2 h SB-334867 ilipata sana ulevi kwenye 1st h (F [2, 15] = 4.457 p = 0.030), (Kikundi cha 1 dhidi ya Kikundi 3, p <0.004), 2nd h (F [2, 15] = 11.122 p = 0.001) (Kikundi cha 1 dhidi ya Kikundi 3, p <0.001; Kikundi cha 2 dhidi ya Kikundi cha 3, p <0.038). Walakini, hakukuwa na mabadiliko makubwa katika unywaji wa pombe saa 4 (F [2, 15] = 0.709 p = 0.508) na 24 h (F [2, 15] = 2.631 p = 0.105) vipindi, mtawaliwa.
Ulaji wa chakula
Katika matibabu ya 1 h na 2 h SB-334867 kwa kiasi kikubwa (F [2, 15] = 4.230 p = 0.035) ulaji wa ulaji wa chakula (Kikundi cha 1 dhidi ya Kikundi 3, p <0.03); (F [2, 15] = 16.558 p = 0.000) (Kikundi cha 1 dhidi ya Kikundi 2, p <0.000; Kikundi cha 2 dhidi ya Kikundi cha 3, p <0.021), mtawaliwa, ikilinganishwa na udhibiti. Hakuna mabadiliko makubwa yaligunduliwa saa 4 (F [2, 15] = 0.070 p = 0.933). Wakati, ulaji kamili wa chakula ulipunguzwa (0-24 h) (F [2, 15] = 4.457 p = 0.030) (Kikundi cha 1 dhidi ya Kikundi 3, p <0.025).
Jaribio la III
Chakula, 10% pombe, na maji [upendeleo wa chupa mbili, Meza 2] matumizi yalipimwa. Panya zilizogunduliwa ziligawanywa kama Chumvi 1 (0.9% saline, n = 6), Kikundi 2 (SB-334867-3 ng, n = 6), na Kikundi 3 (SB-334867-6 ng, n = 6), waliingizwa.
Ulaji wa chakula
Matibabu ya SB-334867 huko 1 h (F [2, 15] = 5.111, p = 0.02) ulaji wa ulaji wa chakula (Kikundi cha 1 dhidi ya Kikundi 3, p <0.011) lakini hakuna tofauti kubwa iliyoonekana saa 2 h, 4 h (F [2, 15] = 0.093 p = 0.911), (F [2, 15] = 0.797 p = 0.469), kwa mtiririko huo, na kwa 24 h dozi zote mbili za mpinzani zilionyesha kupungua kwa ulaji wa chakula (F [2, 15] = 12.698 p = 0.001) (Kikundi cha 1 dhidi ya Kikundi 2 na Kikundi 3, p <0.039, p <0.000, mtawaliwa), ikilinganishwa na kikundi cha kudhibiti.
Ulaji wa maji
Matibabu ya SB-334867 haikuleta mabadiliko katika ulaji wa maji katika kikundi chochote na muda wa 1 h (F [2, 15] = 0.584 p = 0.578), 2 h (F [2, 15] = 0.662 p = 0.530), 4 h (F [2, 15] = 1.655 P = 0.224) na 24 h (F [2, 15] = 0.513 p = 0.609).
Ulevi (10%) ulaji
Matibabu ya SB-334867 ilipata ulaji wa pombe kwa 1 h (F [2, 15] = 9.098 p = 0.003), (Kikundi cha 1 dhidi ya Kikundi 2 na Kikundi 3, p <0.004, p <0.008, mtawaliwa). Hakuna mabadiliko ya umuhimu katika kikundi chochote saa 2 h (F [2, 15] = 0.854 p = 0.446), 4 h (F [2, 15] = 0.931 p = 0.416) na 24 h (F [2, 15] = 0.349 p = 0.711), mtawaliwa.
Jumla ya ulaji wa maji
Hakuna mabadiliko makubwa kwa yoyote ya vikundi, katika 1st h (F [2, 15] = 2.064 p = 0.161), 2nd h (F [2, 15] = 1.023 p = 0.383), 4th h (F [2, 15] = 1.205 p = 0.327) na 24 h (F [2, 15] = 0.484, p = 0.626).
Majadiliano
Urekebishaji wa ulaji wa chakula na maji na neurochemicals mbalimbali imekuwa chini ya uchunguzi. Kati ya molekuli kadhaa za wagombea ambazo zimeonyeshwa kuathiri tabia ya kulisha, pamoja na ulaji wa vileo, Orexins pia zinahusishwa. [19] Orexins hapo awali ziliaminika kuwa kichocheo cha ulaji wa chakula na udhibiti wa shughuli za kumeza; baadaye walipatikana kuathiri majimbo ya kulala na macho. [20] Dube et al. wameonyesha kuwa utawala wa kati wa Orexins una jukumu la kawaida katika tabia ya kumeza, iliyozingatia sana hypothalamus. [21] Katika majaribio yetu ya sasa, tulijaribu athari ya Orexin A antxonist (SB-334867) kwenye NAcc. NAcc imepewa jukumu muhimu katika shughuli za ulevi na shughuli zinazohusiana na kulisha. [22] Orexins pia zimeathiriwa katika upatanishi wa hatua hii ya NAcc. [4] Walakini, NAcc ilionyesha wilaya mbili tofauti za kihistoria, [23] ambayo inaweza kuwa na tofauti za utendaji [24] na kazi zao zilionekana kuongezeka sana. [25] Katika majaribio yetu ya hapo awali, tuligundua kwamba kuingizwa kwa Orexin A ndani ya NAcc kwa kutumia mbinu ya microinjection iliongezea ulaji wa chakula na maji katika masaa mara baada ya infusion, lakini hakukuwa na upendeleo wowote wa pombe wakati ulijaribiwa na chaguo mbili za bure za chupa. [14] Kwa hivyo, tulijaribu kuingiza Orexin Mpinzani ndani ya NAcc na kuchambua ulaji wa chakula, ulaji wa maji na ulaji wa pombe katika panya, ambazo zilifungwa haraka usiku.
Matumizi katika 1st h ulipungua sana kwa wanyama waliotibiwa na orexin. Utafiti wetu unathibitisha jukumu la Orexin A katika tabia ya kulisha. Orexin receptor aina 1 (OX1R) antagonist SB-334867 infusion inaonyesha kulisha na kunywa. Orexin A ilionyesha mfululizo athari ya kichocheo kwenye kulisha na kunywa. Mpinzani wa OX1R ana ushirika mkubwa wa mara 10 kwa Orexin A kuliko B. [26,27]
Mradi wa neurons wa Orexinergic kwenda kwa AccSh na receptors zote mbili za orexin (OX1R na OX2R) zipo katika NAcc, na OX2R imeonyeshwa kwa kiwango kikubwa. [28,29] Orexin kuongezeka kwa mikondo ya GABAergic na kupungua kwa mikondo ya N-methyl-D-aspartate katika neurons za pekee za kukusanya. [30] Kwa kuongezea, orexins inakuza dopaminergic VTA neurons. [31] Kwa kuwa dopaminergic VTA neurons ya ndani na ya kufurahisha neurons ya AccSh GABAergic (inhibitory), kuashiria orexin kunaweza kuongeza kizuizi cha ndani katika Acc kwa kuongeza shughuli za neuronal katika VTA, na kusababisha kuongezeka zaidi kwa tabia ya kukimbilia. Lakini hii ilipingwa na Baldo na Kelley, [32] ambaye hakuona athari ya kulisha au shughuli za densi na intra-AccSh Orexin A.
Tulijaribu uwezekano wa Orexin A kaigiza kama suluhisho la unywaji pombe [Meza 2] pamoja na chakula. Kutoka kwa utafiti wetu wa zamani, tuligundua kwamba panya hupendelea kunywa pombe kwa suluhisho la 10% ambalo limethibitishwa katika somo letu la hapo awali. [33] Kwa hivyo katika utafiti huu, tulitoa pombe katika densi hii kufuatia kuingizwa kwa dawa ndani ya NAcc. Tulipata kupungua kwa kiwango cha ulaji wa pombe katika masaa mara tu kufuatia infusion ya mpinzani wa Orexin. Kupungua kwa ulaji wa chakula na maji kulikuwa chini katika kundi la infusion ya kiwango cha chini (3 ng) wakati ilikuwa juu katika kundi la kiwango cha juu (6 ng). Ili kujaribu upendeleo wa pombe, tulitoa panya na hali ya kuchagua chupa mbili, ambapo chupa moja ya maji na nyingine iliyo na 10% pombe ilitolewa kwa wakati mmoja. Kufuatia infusion ya Orexin mpinzani ilizalisha kupungua kwa ulaji wa chakula na ulaji wa pombe. Aina hii ya kupungua ilipatikana kwa kipimo cha chini na cha juu lakini kikiwa tu kwa 1st h baada ya infusion. Walakini, kupungua kwa ulaji wa chakula kuliwekwa alama zaidi ikilinganishwa na maji au pombe. Ushuhuda huu unapeana msaada kwa ushiriki wa Orexin A katika udhibiti wa ulaji wa chakula lakini hauungi mkono uwezekano wa kuhusika kwa Orexin katika upendeleo kwa pombe.
Msaada wa Fedha na Uhamasishaji
Idara ya Baiolojia, Sehemu ya mradi unaofadhiliwa na DBT, Ref: Ref: BT / PR14012 / MED / 30 / 315 / 2010 ya 30.09.2010 Serikali ya India.
Migogoro ya riba
Hakuna migogoro ya riba.
Shukrani
Waandishi wanashukuru kwa Idara ya Baiolojia, Serikali ya India, kwa msaada wa kifedha. Chuo cha Matibabu cha Kasturba, Mabad, Chuo Kikuu cha Manipal, kwa vifaa vilivyotolewa.
Marejeo