Експресія і розподіл дофамінових рецепторів динамічно змінюються в ядрах щурів щурів після виведення з самоконтролю кокаїну. (2010)

Білок зшивання

Цей метод детально описаний раніше (Boudreau і Wolf, 2005; Ferrario et al., 2010). Щурів обезголовлювали, їх мізки швидко видаляли, і весь NAc (або субрегіони ядра і оболонки) розсікали на льоду з коронального розтину 2mm, отриманого з використанням матриці мозку. Всю тканину NAc негайно подрібнювали на зрізи 400μm, використовуючи м'ясорубка тканини McIllwain (Vibratome, St. Louis, MO), тоді як менші ядра і субрегіони оболонки рубали вручну за допомогою скальпеля. Потім тканину додавали в пробірки Еппендорфа, що містять крижаний штучний CSF з шихтою 2 mM біс (сульфосукцинимидил) субератом (BS³; Pierce Biotechnology, Рокфорд, штат Іллінойс). Реакції зшивання давали можливість протікати протягом 30 хв при 4 ° C при дрібному перемішуванні і потім припиняли додаванням гліцину 100mM (10 хв при 4 ° C). Тканини осаджують шляхом короткого центрифугування, повторно суспендують у крижаному лізисному буфері, що містить інгібітори протеази і фосфатази, сонитируют за 5 сек і знову центрифугують. Аликвоти супернатанту зберігали при -80 ° C до аналізу за допомогою вестерн-блот.

Вестерн-блот-аналіз DAR в зшитих тканинах

Зразки (загальний білок / лізат 20-30μg) електрофорезували на гелях 4-15% Tris-HCl (Biorad, Hercules, CA). Білки переносили на мембрани полівініліденфториду для імуноблотінгу з використанням постійного струму (1.15mA) для 1.5 h. Для запобігання надмірного нагрівання використовувалася охолоджувальна котушка. Повна передача високомолекулярних агрегатів була підтверджена фарбуванням гелів після перенесення з Кумасси синім. Крім того, ми перевірили, що зшиті білки DAR не були виявлені в гелі для укладання (дані не показані). Після перенесення мембрани промивали в ddH₂О, сушили на повітрі протягом 1 год при кімнатній температурі (RT), повторно гідратували 100% MeOH, промивали буферним розчином 1x Tris (TBS) і занурювали в 0.1M NaOH, pH 10 для 15 хв при RT. Потім їх промивали в TBS, блокували 3% бичачим сироватковим альбуміном (Sigma – Aldrich, St. Louis, MO) в TBS-Tween-20 (TBS-T), рН 7.4, протягом 1 год при RT і інкубували протягом ночі при 4 ° C з антитілами, що розпізнають D1 DAR (1: 1000; Millipore; Cat # AB1765P), D2 DAR (1: 1000; Millipore, Billercia, CA; Cat # AB5084P) і D3 DAR (1: 1000; Millipore; Cat # AB1786P). D4 і D5 DAR не аналізували через відсутність антитіл, які розпізнавали як зшиті, так і внутрішньоклітинні рецептори. Слід зазначити, що партії антитіл DAR, використані в цих експериментах, були придбані в 2005-06; поточні партії цих антитіл (2009-10) показують різні структури смужок, які не змінюються в тканини з DAR нокаутних мишей (неопубліковані спостереження). Після первинної інкубації антитіл, мембрани промивали розчином TBS-T, інкубували протягом 60 хв з HRP-кон'югованим анти-кролячим IgG або анти-мишачим IgG (1: 10,000; біотехнологія Upstate, Lake Placid, NY), промивали TBS- Т, промивають ddH₂O, і занурюють в хемілюмінесцентний детекторний субстрат (Amersham GE, Piscataway, NJ). Після того, як були розроблені плями, зображення були зняті за допомогою програмного забезпечення візуалізації Versa Doc (Bio-Rad). Дифузні щільності поверхневих і внутрішньоклітинних смуг визначалися за допомогою програмного забезпечення Quantity One (Bio-Rad). Значення для поверхневого, внутрішньоклітинного і загального (поверхневого + внутрішньоклітинного) рівнів білка нормалізувалися до загального білка в доріжці, визначеному за допомогою Ponceau S (Sigma-Aldrich) і проаналізовані за допомогою TotalLab (Nonlinear Dynamics, Newcastle, UK). Поверхневе / внутрішньоклітинне співвідношення не вимагало нормалізації, оскільки обидві значення визначаються в одній смузі. Для вивчення специфічності антитіл були проведені дослідження переабсорбції антитіл DAR з використанням пептиду, що використовується для генерування кожного антитіла. Антитіло D1, D2 або D3 DAR об'єднували з 10-кратною надлишковою концентрацією пептиду в 500μl TBS, змішували протягом 4 год при 4 ° C, розбавляли до кінцевого об'єму 20ml, додавали до мембрани і інкубували протягом ночі при 4 ° C.

D1 DAR

На WD45 не було виявлено істотних відмінностей між кокаїном і сольовими групами. Однак ефекти самоврядування кокаїну були очевидні на WD1. Аналіз всього NAc показав значно більш високе D1 DAR поверхневе / внутрішньоклітинне співвідношення в групі WD1-Coc порівняно з групами, які самостійно вводили фізіологічний розчин (Рис. 2a). Це пояснювалося скромним збільшенням DAR на поверхні D1 у поєднанні зі скромним зниженням внутрішньоклітинних D1 DAR (жоден з цих двох останніх ефектів не був статистично значущим), за відсутності будь-якої зміни в загальному рівні D1 DAR (поверхня + внутрішньоклітинний) (Рис. 2a). У ядрі NAc жодного значущого ефекту не було виявлено для будь-якої міри D1 DAR (2b). Однак оболонка NAc відображала зміни, які були подібні до тих, що спостерігалися у всій NAc, але трохи більш надійною (Рис. 2c). Співвідношення поверхневий / внутрішньоклітинний D1 DAR збільшувалося в групі WD1-Coc за рахунок значного збільшення експресії D1 DAR на поверхні. Внутрішньоклітинні рівні були незмінними, але спостерігалася тенденція до збільшення загального рівня D1 DAR. Таким чином, більша частина білка D1 DAR експресувалася поверхнево в оболонці NAc щурів WD1-Coc порівняно з щурами WD1-Sal. Розподіл D1 DAR повернувся до контрольного стану після 45 днів виведення з кокаїну.

Рис. 2

Експресія поверхні D1 DAR збільшувалася в оболонці NAc після 1 дня виведення з кокаїну

D2 DAR

В усьому NAc основним спостережуваним ефектом було зниження експресії D2 DAR у щурів, які самостійно вводили кокаїн у порівнянні з контролем сольового розчину (Рис. 3a). Це було найбільш яскраво виражено на WD45, коли спостерігалося зниження в поверхневій смузі, всіх трьох внутрішньоклітинних смугах (~ 55, 75 і 100kDa) і в загальному рівні D2 DAR у порівнянні з контролем сольового розчину. Коефіцієнт поверхневого / внутрішньоклітинного D2 DAR був трохи, але значно збільшився у групі WD45-Coc, що пояснюється більшим зниженням DARS в D2, що вказує на те, що клітини компенсують зниження експресії D2 DAR, розподіляючи більшу частину доступних D2 DAR на поверхню. Важливо мати на увазі, що підвищений поверхневий / внутрішньоклітинний коефіцієнт не передбачає збільшення передачі D2 DAR в даному конкретному випадку, оскільки абсолютний рівень поверхнево-виражених D2 DARs був знижений. У групі WD1-Coc єдиним значущим ефектом було зниження внутрішньоклітинних рівнів D2 DAR-мономеру (~ 55kDa) порівняно з групами WD45-Sal і WD1-Sal, хоча деякі інші заходи також мали тенденцію до зниження (Рис. 3a).

Рис. 3

Внутрішньоклітинні і поверхневі рівні D2 DAR в NAc були знижені після 45 днів виведення з кокаїну

Загальне зниження експресії D2 DAR було також видно в основних і оболонкових субрегіонах NAc (3b і 3cвідповідно), хоча ефекти мали тенденцію бути більш вираженими в оболонці. Таким чином, поверхневі рівні D2 DAR знижувалися у кокаїнових щурів тільки на WD45 в ядрі, але на WD1 і WD45 в оболонці. Усього D2 DARs значно зменшився тільки в оболонці. Зниження внутрішньоклітинних смуг D2 DAR відбувалося в обидва дні виведення як в ядрі, так і в оболонці, хоча були відмінні відмінні відміни і області, в яких внутрішньоклітинна смуга показала статистично значущий ефект. Підсумовуючи, рівень D2 DAR і внутрішньоклітинний білок знижувалися в NAc після кокаїну. Деякі зниження вже були помітні WD1.

Вираз поверхні D1 DAR тимчасово збільшується в оболонці NAc після припинення прийому кокаїну

Після самостійного введення кокаїну, експресія поверхні D1 DAR збільшувалася в оболонці NAc на WD1, але нормалізувалася за допомогою WD45, тоді як в ядрі не спостерігалося ніяких змін, що вказує на перехідний приріст, обмежений оболонкою. Аналогічні результати були отримані в попередніх дослідженнях з використанням авторадіографії рецепторів. Бен-Шахар та ін. (2007) виявили підвищену щільність D1 DAR в оболонці NAc щурів 20 min (але не 14 або 60 днів) після припинення прийому кокаїну з розширеним доступом (6 hr / day), тоді як ніяких змін не спостерігалося в ядрі або після кокаїну -адміністрація (2 hr / день). Nader et al. (2002) спостерігається невелике збільшення щільності D1 DAR в оболонці, але не ядра мавп-резусів, убитих після останнього сеансу самоуправління кокаїном 100. Мавпи, які оцінювали 30 днів після припинення дії тієї ж схеми, показали підвищену щільність D1 DAR в ростральних NAc і в обох ядрах і оболонках на більш каудальних рівнях, але D1 DAR нормалізувалася на 90 днів (Беверидж та ін., 2009). Всі ці результати, як і наші, вказують на тимчасове підвищення рівня D1 DAR, особливо в оболонці, після припинення прийому кокаїну. Однак попереднє дослідження цієї групи свідчило про зниження щільності D1 DAR у NAc (найбільш стійкому в оболонці) макак-резусів, які самостійно вводили кокаїн протягом набагато більш тривалого періоду часу (18 місяців; Moore et al., 1998a). Зниження зв'язування D1 DAR в NAc також було виявлено 18 год після припинення розширеного режиму доступу у щурів, хоча загальне споживання кокаїну в цьому дослідженні було вище, ніж у дослідженнях щурів, обговорених вище (De Montis та ін., 1998). Ці результати показують, що адаптації D1 DAR залежать від багатьох аспектів впливу кокаїну. Ще одне розгляд полягає в тому, що авторадіографія рецепторів вимірює загальні клітинні рецептори, тоді як наші експерименти зшивання білків можуть розрізняти поверхневі та внутрішньоклітинні рецептори. Цікаво, що дослідження иммуноблоттинга виявило тенденцію до підвищення рівня D1 DAR в NAc користувачів кокаїну людини (Worsley та ін., 2000).

Чи є тимчасове збільшення експресії D1 DAR на поверхні, що ми спостерігали в оболонці NAc, важливим для інкубації індукованої cue кокаїну? Це важко оцінити, оскільки жодні дослідження не перевірили вплив внутрішньо-NAc-ін'єкції D1 DAR-агоністів або антагоністів на індукований cue кокаїном після виведення домашньої клітини (або індукованого cue-відновлення кокаїну, що шукається після екстинкційного навчання). Проте рецептори D1 в медіальному NAc (оболонка і медіальне ядро) причетні до відновлення кокаїну з кокаїном після вимирання, очевидно, через механізм, який вимагає спільної активації D1 і D2 DAR (Anderson et al., 2003; 2008; Bachtell et al., 2005; Шмідт і Пірс, 2006; Schmidt et al., 2006). Разом з нашими результатами, це може свідчити про те, що нейрони в оболонці NAc більш чутливі до D1 DAR-опосередкованого кокаїну, який шукає в ранньому виведенні через перехідну регуляцію D1R. Проте слід застосовувати обережність для екстраполяції від відновлення до інкубаційних досліджень, оскільки навчання вимирання та виведення з клітини пов'язані з різними нейроадаптаціями в NAc (Саттон та ін., 2003; Ghasemzadeh et al., 2009; Вольф і Ферраріо, 2010). Важливо відзначити, що D1 DAR в базолатеральній амигдалі і префронтальній корі також важливі для індукованого києм відновлення кокаїну (наприклад, Ciccocioppo et al., 2001; Alleweireldt et al., 2006; Berglind et al., 2006).

На клітинному рівні, як пресинаптичні, так і постсинаптичні DAR можуть модулювати збудливість середніх колючих нейронів, переважний тип клітин і вихідний нейрон NAc (Nicola et al., 2000; O'Donnell, 2003). Відомо, що повторне введення неконтингентного кокаїну посилює деякі ефекти активації D1 DAR в NAc. Таким чином, за один день до одного місяця після припинення лікування кокаїном, по всій NAc спостерігалася підвищена здатність D1 DAR-агоністів пригнічувати активність середніх колючих нейронів (керованих ионофоретическим глутаматом).Генрі і Білий, 1991; 1995). Тим не менш, збільшене вираження поверхні D1 DAR, описане тут, навряд чи пояснить ці попередні результати, оскільки воно обмежено оболонкою і було продемонстровано тільки на WD1. Через добу після прийому кокаїну вводили 10-14 днів після припинення повторних ін'єкцій кокаїну, Бееррі і Малека (2002) спостерігали посилення DA-опосередкованого інгібування збудливих синаптичних відповідей у ​​колючих нейронах NAc середовища, яке, очевидно, було опосередковано пресинаптичними D1-подібними DAR на терміналах глутаматного нерва. Однак можливі ефекти ін'єкції, що викликає (наприклад, див Boudreau et al., 2007 та Kourrich et al., 2007), у поєднанні з відмінностями видів і відсутністю записів в ядрі, ускладнюють порівняння їхніх висновків з нашими. Слід також зазначити, що агоністи і антагоністи DAR використовуються Генрі і Білий (1991; 1995) та Бееррі і Маленка (2002) не розрізняли DARS D1 і D5.

Рівні D2 DAR зменшуються в NAc після припинення прийому кокаїну

Основним ефектом, що спостерігається в нашому дослідженні, було зниження D2 DAR білка як в ядрі NAc, так і в оболонці після припинення самоконтролю кокаїну, порівняно з контролем сольового розчину. Це було більш вираженим в оболонці, де внутрішньоклітинні, поверхневі та загальні смуги зменшувалися як на WD1, так і на WD45. У ядрі експресія поверхні D2 DAR зменшувалася тільки на WD45, а загальний рівень D2 DAR не зменшувався значно. Ряд інших досліджень також виявили зниження експресії D2 DAR після припинення прийому кокаїну. У макак-резусів з великим досвідом самоконтролю кокаїну щільність D2 DAR, виміряна за допомогою авторадіографії рецепторів, зменшувалася в багатьох полосках, включаючи ядро ​​NAc і оболонку, коли тканина була отримана відразу після останнього сеансу (Moore et al., 1998b; Nader et al., 2002). Використовуючи PET, цей ефект у базальних гангліях був виявлений протягом тижня 1 з початку самонаведення кокаїну (Nader et al., 2006). Швидкість, з якої рівень D2 DAR відновлюється під час скасування, може залежати від загального споживання кокаїну. У авторадіографічному дослідженні рівні D2 DAR в NAc відновилися до контрольних значень після 30 або 90 днів виведення з сеансів 100 самоконтролю кокаїну (Беверидж та ін., 2009). Однак у дослідженні PET мавп з більш тривалою експозицією (рік 1) і, таким чином, більшим загальним споживання кокаїну, 3 мавп 5 показав відновлення рівнів D2 DAR після 90 днів, у той час як мавпи 2 не показали відновлення навіть після 12 місяців (Nader et al., 2006). В цілому, ці результати добре збігаються з нашими висновками про зниження рівня D2 DAR в ході виведення.

Дослідження PET у кокаїнових наркоманів також виявили зниження рівня D2 DAR у багатьох стриатильних регіонах, включаючи вентральний стриатум, які були очевидні при ранньому знятті, а також після місяців дезінтоксикації 3-4 (Volkow et al., 1990, 1993, 1997). Однак значення для поведінки неясне, оскільки наявність D2 DAR не корелює з позитивними суб'єктивними ефектами кокаїну або з рішенням приймати більше кокаїну після дозування (Martinez et al., 2004). Важливо зауважити, що в той час, коли інфекційна тяга до кокаїну свідчить про залежне від часу збільшення під час виведення ("інкубація"), це не відбувається для кокаїну, прагнучого до кокаїну (Lu et al., 2004a). Тому результати Росії Martinez et al. (2004) Залишається відкритою можливість того, що D2 DAR доступність може корелювати з кой-індукованим пошуком кокаїну, фокусом інкубаційної моделі, що вивчається в цьому документі. Низька наявність D2 DAR у користувачів кокаїну людини корелює зі зменшенням метаболізму фронтального кори (Volkow et al., 1993). Поряд з іншими змінами, це може сприяти втраті контролю, що виникає, коли наркомани піддаються наркотикам або наркотичним речовинам, а також підвищенню вираженості наркотиків порівняно з винагородами, що не є наркотиками (Volkow et al., 2007; Volkow et al., 2009). Слід зазначити, що зниження рівня D2 DAR у дослідженні PET може свідчити про підвищений рівень вивільнення DA, ніж про зниження рівня D2 DAR, але останні результати підтверджують це пояснення у випадку хворих на кокаїн (Martinez et al., 2009). Більше того, післясмертне дослідження користувачів кокаїну людини виявило тенденцію до зниження рівня D2 DAR в NAc з використанням імуноблотінгу (Worsley та ін., 2000).

Дослідження кокаїнових наркоманів не можуть визначити, чи знижена доступність D2 DAR є сприятливою ознакою або результатом впливу кокаїну, але інші результати вказують на те, що обидві є вірними. З одного боку, експерименти з людьми, що не зловживають наркотиками, виявили зворотну кореляцію між доступністю D2 DAR і повідомленнями про «уподобання щодо наркотиків» при введенні метилфенидата (Volkow et al., 1999; 2002). Ці дані свідчать про те, що низька доступність D2 DAR може підвищити вразливість до залежності. Аналогічний висновок підтверджується дослідженнями в макаках-резусах. У мавпах, які перебувають у соціальному житті, досягнення соціального домінування збільшує наявність D2 DAR у стриатумі, і це пов'язано з більш низькою чутливістю до посилюючих ефектів кокаїну порівняно з підлеглими мавпами (Morgan et al., 2002). Соціальний статус також корелює з наявністю стриарної D2 DAR у вільних від наркотиків людях добровольців (Martinez et al., 2010). З іншого боку, як дослідження ПЕТ, так і авторадіографії за рецепторами показують, що довготривале самоврядування кокаїну зменшує наявність рецепторів стриктурного D2 DAR у індивідуально розташованих мавпах, як обговорювалося вище (Moore et al., 1998b; Nader et al., 2002; Nader et al., 2006). Схоже, що самостійне застосування хронічного кокаїну знижує наявність D2 DAR у домінуючих мавпах, які перебувають у соціальному житті (Czoty et al., 2004). Таким чином, після тривалого самостійного введення кокаїну, більше не було значних відмінностей у наявності або посиленні ефектів D2 рецепторів між кокаїном і домінуючими мавпами (Czoty et al., 2004). Однак підвищений рівень DAR DAR відновлювався у домінантних мавп під час абстиненції, і це корелювало з більшою затримкою у відповідь на новинку, що є ознакою, яка передбачає зниження чутливості до посилюючих ефектів кокаїну (Czoty et al., 2010).

Як і у людей, і у мавп, дослідження щурів показують, що низька доступність D2 DAR є фактором ризику вразливості кокаїну. Таким чином, дослідження ПЕТ на щурах з високою імпульсивністю (ознака, пов'язане з підвищенням самоконтролю кокаїну) показують знижену наявність D2 / D3 DAR у вентральному стриатумі (Dalley et al., 2007). Рівні D2 DAR в NAc також знижуються у щурів, які демонструють високий локомоторний відповідь на новизну, іншу ознаку, пов'язану з вразливістю до наркоманії (Hooks et al., 1994). Наші результати у щурів свідчать про те, що зниження рівнів D2 DAR в NAc також може бути наслідком повторного впливу кокаїну, що відповідає дослідженням у мавп і людей (вище). Однак у двох рецепторних авторадиографических дослідженнях у щурів знайдені результати, які відрізняються від наших. Бен-Шахар та ін. (2007) не спостерігали зниження рівнів D2 DAR в NAc після відміни (20 хв, 14 днів 60 днів) від режиму самостійного застосування кокаїну з розширеним доступом, аналогічного нашому (6 ч / добу), хоча зниження спостерігалося в оболонці NAc після режиму обмеженого доступу (2 год / день) і 14 днів виходу (Ben-Shahar et al., 2007). Stéfanski et al. (2007) не виявив змін у рівнях D2 DAR у ядрі або оболонці 24 h після припинення самостійного застосування кокаїну з обмеженим доступом (ХНУМХ / год), хоча рівні D2 DAR зменшували контрольні показники кокаїну. Як зазначалося вище, рецептори авторадіографії вимірюють загальні клітинні рецептори, тоді як дослідження ПЕТ і зшивання білків вимірюють рецептори клітинної поверхні.

В цілому, дослідження взаємозв'язку між рівнями D2 DAR і кокаїном самостійного застосування підтримують модель, в якій D2 DAR зазвичай обмежує самоконтроль кокаїну. Таким чином, ми припускаємо, що знижені рівні D2 DAR, що спостерігаються в наших експериментах, можуть сприяти кокаїну, який викликається києм після скасування кокаїну. Зокрема, той факт, що поверхнева експресія D2 DAR в ядрі NAc зменшувалася на WD45, але не на WD1, у поєднанні з ключовою роллю для ядра NAc в індукованому cue кокаїном, дозволяє припустити, що залежне від часу D2 DAR регулювання в ядрі NAc може сприяти посиленню у часі інтенсифікації кокаїну. Це передбачає, що внутрішньо-NAc-вливання агоніста D2 під час відміни зменшить кокаїн, який викликається києм. На жаль, жодне дослідження не вивчало вплив інтра-NAc D2 DAR в інкубаційної моделі. З іншого боку, дослідження відновлення кокаїну з урахуванням кокаїну вказують на те, що D1 і D2 DAR в оболонці і медіальному ядрі співпрацюють з метою сприяння пошуку кокаїну (Anderson et al., 2003; Bachtell et al., 2005; Шмідт і Пірс, 2006; Schmidt et al., 2006). Виходячи з цих висновків, зниження експресії D2 DAR, що спостерігається в наших експериментах, може передбачати зменшення пошуку кокаїну, тобто виробляти ефект, протилежний від інтенсифікації, що залежить від відміни, що насправді спостерігається. Ця невідповідність може відображати проблеми, введені шляхом узагальнення від відновлення кокаїну після приготування після екстинкції до кокаїну, викликаного києм після скасування.

Залежне від часу збільшення експресії поверхні D3 DAR відбувається в ядрі NAc після припинення прийому кокаїну

Дослідження препаратів, що віддають перевагу D3 DAR, в парадигмах самостійного застосування та відновлення кокаїну дозволяють припустити, що антагоністи D3 DAR можуть бути корисні при лікуванні кокаїнової залежності та, зокрема, у зниженні реактивності до асоційованих з кокаїном сигналів (Heidbreder et al., 2005; 2008; Le Foll et al., 2005; Сі і Гарднер, 2007). Ці результати вказують на те, що активація D3 DAR ендогенним DA може бути залучена в опосередковування індукованого cue кокаїну. Наші результати показують, що експресія поверхні D3 DAR в ядрі NAc залишається незмінною на WD1 з самостійного застосування кокаїну з розширеним доступом, але збільшується на WD45 у зв'язку з інкубацією кокаїну. Вираз D3 DAR на поверхні не збільшувався значно в оболонці, хоча спостерігалося невелике, але значне збільшення поверхневого / внутрішньоклітинного співвідношення. Враховуючи роль передачі D3 DAR у відповідь на асоційовані з кокаїном сигнали і важливість ядра для кокаїну, що викликається києм, спокушається припустити, що підвищена експресія D3 DAR в ядрі NAc сприяла інкубації кокаїну. тяга, що спостерігається на WD45. Проте невральний сайт, на якому антагоністи D3 DAR діють для зниження кількості кокаїну, не встановлено. Зокрема, жодне дослідження не вивчало вплив внутрішньо-NAc-ін'єкції D3 DAR, що віддає перевагу лікарським засобам на кокаїн. У іншій моделі Schmidt et al. (2006) виявили, що ін'єкція D3-переважного агоніста PD 128,907 в ядро ​​або оболонку не призводила до відновлення кокаїну, що шукається після екстинкційного навчання.

Наші результати, як правило, узгоджуються з дослідженнями авторадіографії рецепторів, які вимірювали загальні рівні D3 DAR в NAc після впливу кокаїну. Staley and Mash (1996) повідомили, що зв'язування D3 DAR було вищим у NAc жертв передозування кокаїну в порівнянні з контролем за віком. Після впливу кокаїну в парадигмі кондиційного місця і трьох днів зняття, миші демонстрували збільшення зв'язування D3 DAR в ядрі NAc і оболонці (Le Foll et al., 2002). Neisewander et al. (2004) вимірювали зв'язування D3 DAR у щурів з великим досвідом самоконтролю кокаїну, які були протестовані на відновлення кокаїном після різних періодів абстиненції, а потім позбулися 24 h. D3 DAR зв'язування в NAc було незмінним на WD1, але збільшилося після більш тривалого часу (WD31-32), що відповідає нашому спостереженню залежного від часу збільшення. Крім того, лікування наркотиками під час відміни, яке знижувало пошук кокаїну, також послаблювало збільшення зв'язування D3 DAR, що свідчить про те, що регуляція D3 DAR функціонально пов'язана з пошуком кокаїну. Слід зазначити, що D3 DAR збільшується в Neisewander et al. (2004) були значними в ядрі, тоді як в оболонці спостерігалися лише тенденції, але субрегіони були проаналізовані в ростральній частині NAc, де ядро ​​і оболонка менш чіткі. Наш аналіз проводили на ядрі і оболонці з ростральних і каудальних ділянок NAc.

Ця робота була підтримана DA009621, DA00453 і нагородами NARSAD заслуженого дослідника MEW, DA020654 до MM, а також докторською нагородою National Research Service DA021488 для KLC