Мозок Рес. 2006 Дек 18, 1126 (1): 56-65. Epub 2006 Sep 15.
Source
Кафедра психологічних наук, Університет Пердью, 703 Третя вулиця, Західний Лафайет, IN 47907, США. [захищено електронною поштою]
абстрактний
Нейробіологія сексуальної поведінки жінок в значній мірі зосереджується на механізмах дії гормонів на нервові клітини, а також на тому, як ці ефекти перетворюються на відображення копуляторних моделей двигунів. Не менш важливими, хоча і менш вивченими, є деякі наслідки участі в сексуальній поведінці, включаючи корисні властивості статевих взаємодій і те, як сексуальний досвід змінює ефективність копуляції. Цей огляд підсумовує вплив сексуального досвіду на процеси винагороди та копуляції у жінок сирійських хом'яків. Neural кореляти цих статевих взаємодій включають в себе довгострокові клітинні зміни в допаміновій передачі і постсинаптичні сигнальні шляхи, пов'язані з нейрональною пластичністю (наприклад, дендритне формування хребта). Взяті разом, ці дослідження показують, що сексуальний досвід підсилює підсилюючі властивості сексуальної поведінки, що має співпадіння з підвищенням ефективності копуляції таким чином, що може збільшити репродуктивний успіх.
1. Введення
«Чому тварини спарюються?» - це просте питання, яке лежить в основі нейробіології сексуальної поведінки жінок. Жодне поведінкове питання не має простих відповідей, оскільки існують як безпосередні, так і дистальні причини і наслідки поведінки, які викликають власні питання і мають свої власні нейробіологічні відповіді. Можливо, найпоширенішою відповіддю на це питання є «Виробництво потомства». Це може бути відповіддю в контексті дистального наслідку поведінки, але навіть у такому разі така відповідь безсумнівно неправильна [2]. Agmo [2] наводить дані шведів про те, що лише близько 0.1% гетеросексуальних копуляцій виробляють дітей. Навіть серед таких видів тварин, як щури, у яких високий відсоток нагадувань може призвести до потомства, така кореляція не означає, що вагітність є очікуваний Наслідком копуляції.
Однією з відповідей на питання про те, чому тварина mate - це прямий погляд на сексуальну поведінку жінок як «рефлексивний» відповідь на флуктуючу репродуктивну фізіологію, поєднану зі стимулами від репродуктивно компетентного чоловіка. Такі дослідження нейробіології сексуальної поведінки жінок були засновані на спостереженні, що послідовність впливу гормонів яєчників сформувала необхідний фізіологічний стан для жінок, які відповіли статевим шляхом на чоловіка70]. Для гризунів кілька днів експозиції естрадіолу супроводжується більш короткочасним сплеском прогестерону, який координує овуляцію і сексуальну реакцію у природно-велосипедних жінок [22]. Наступна логіка полягала в тому, що виявлення областей мозку, що містять рецептори естрадіолу та прогестерону, забезпечить фокусні точки для деталізації нейронних шляхів, що регулюють сексуальну поведінку жінок [70]. Крім того, дії цих стероїдних гормонів на нервові клітини дають змогу зрозуміти клітинні та молекулярні механізми, що опосередковують експресію жіночої сексуальної реактивності.71]. Немає сумніву, що цей програмний підхід до вивчення сексуальної поведінки жінок був дуже успішним, і деталі цієї нейробіології з точки зору схеми, нейрохімії та експресії генів добре встановлені [наприклад, 6,71].
Проте, існує ще один аспект, що регулює нейробіологію сексуальної поведінки, що стосується негайних і довгострокових наслідків статевих взаємодій, тобто мотиваційного контролю сексуальної поведінки та емпіричного впливу на нейронну пластичність, що лежить в основі цієї системи. Ця нейробіологія була переглянута для чоловіків, насамперед чоловічих щурів [2]. Мета цієї презентації - вивчити такі пластичні зміни у жінок, зосередившись на нашій роботі з жіночими сирійськими хом'ячками. З цієї роботи очевидно, що в той час як дистальні наслідки сексуальної поведінки можуть бути спрямовані на відтворення, проксимальне обґрунтування полягає в тому, щоб активувати мотиваційні системи, які насправді керують поведінкою.
2. Вплив досвіду на моделі сексуальної поведінки жінок
Два види, які пропонують гарний контраст на те, як соціальна екологія сприяє моделям сексуальної поведінки, - це норвезькі щури та сирійські хом'яки. Обидва види живуть у системах норок. У цих норах щури мають складні соціальні структури, що складаються з декількох поколінь чоловіків і жінок3], тоді як дорослі хом'яки (як чоловіки, так і жінки) живуть окремо в окремих норах [26].
Соціальна система щурів піддається численним самцям і самкам, що спаровуються одночасно [51]. Незважаючи на цю, мабуть, хаотичну схему, жіночі щури здатні контролювати структуру статевих взаємодій з окремими самцями, включаючи вирішення питання, який самце сприятиме еякуляції під час цього багаторазового чоловічого процесу спарювання [51]. Таким чином, щури-жінки є активними учасниками спарювання і забезпечують ефективний засіб контролю за статевими взаємодіями, включаючи вибір матерів.
Компонент клопотання про сексуальну поведінку жінок у щурів забезпечує найяскравіший доказ того, яким чином жінки можуть контролювати тривалі сексуальні взаємодії з чоловіками. Коли самці щурів наближаються до еструсної жінки, самка реагує з жорстко-ногими опорно-руховим зразком, в якому вона буде стрибати на місці (тобто стрибати) або просунути себе (тобто, кинувшись) від чоловіка [20,49]. Ці клопотання, у поєднанні з бігом від чоловіка, запобігають встановленню самця, поки вона не зупиниться і не дозволить контакт [49]. Цікаво, що самки дозволять самцям знову скористатися після монтування без втручання, ніж якщо б жінка отримала втручання.20,50]. Ця регуляція копуляторної поведінки самців щурів-самців називається "стимуляцією" і має чіткі наслідки для прогестації і фертильності [20,21]. Припускається, що поведінка припасання у щурів-самців знаходиться під контролем дофаміну nucleus accumbens [4,28,29,32,33,58,84]. На перший погляд, складна схема кровообігу у самиць щурів свідчить про поведінку, яка може бути модифікована досвідом. Проте обмежені доступні дані свідчать про інше19] і переважаючий висновок [20] полягає в тому, що «... ходіння є стабільним і вродженим компонентом сексуальної чуйності у самки щура» (стор. 482).
Враховуючи їх самотнє існування, хом'ячки мають зовсім іншу схему спарювання, інформація для якої отримана з лабораторних досліджень [наприклад, 46], а не з натуралістичних спостережень. Жіночі (так само як і чоловічі) хом'яки вводять оклюзії в головному тунелі, що веде в систему нори [26]. Самка хом'ячка активно набирає чоловіків до нори, відкриваючи цю оклюзію і встановлюючи піхвовий запах, який веде до входу в нору в очікуванні початку її поведінкової еструсу46]. Невідомо, чи є відбір чоловіка хом'ячками для чоловіків або як такий підбір може бути виконаний в дикій природі. Після того, як самець секведується в норі, чоловіки і жінки проживають разом, поки жінка не досягне стану еструсу, і починається спаровування.46]. Після спарювання самець виселяється з жіночої нори [46].
Непомітність статевої постави жіночого хом'яка контрастує з відверто активним обміном з чоловіками під час сексуальної поведінки у щурів-жінок. Жіночі хом'яки швидко припускають жорстку позицію, що супроводжує лордоз, позу, яка може зберігатися до 95% від тесту 10 min [15]. В той час, як жінка підтримує цю позицію, самці змонтуються та / або піднімаються з втручанням, мабуть, у власному темпі. Здавалося б, очевидним висновком, зробленим з цих спостережень, було те, що жіночі хом'яки, на відміну від жіночих щурів, не крокують сексуальні взаємодії чоловіків.
Незважаючи на виникнення нерухомості, жіночі хом'яки є насправді досить активними учасниками у взаємодії з чоловіками46]. Благородний [62] вперше зауважив, що жіночі хом'яки роблять активні перинеальні рухи у відповідь на перивагінальну тактильну стимуляцію від чоловічого хом'яка, при цьому самка рухає свою промежину в напрямку стимуляції. Самка рухає піхву в напрямку до точки контакту чоловічих тяг, щоб полегшити інтравагінальне введення чоловіком [62]. Насправді, застосування місцевого анестетика до промежини жіночого хом'яка різко знижує здатність чоловічого хом'яка до досягнення статевого члена63].
У сукупності жіночі щури та хом'яки відрізняються тим, як вони регулюють копуляцію. Різниця між самками щурів і хом'яків полягає в здатності цих тварин регулювати монтаж чоловічої статі. Жіночі щури можуть визначити, чи дійсно чоловік зможе піднятися. Жіночі хом'ячки не контролюють частоту підйому чоловічої статі, але можуть впливати на те, чи зможе самці успішно запрограмувати себе на конкретній спробі встановлення. Таким чином, кровообіг у щурів можна легко спостерігати, тоді як дуже важко кількісно визначити переміщення промежини у жіночих хом'яків під час спарювання. Як рішення ми взяли непрямий підхід до вимірювання ролі жіночого хом'яка в регулюванні інтромісії чоловіка. Ми обґрунтовували, що якщо кількість чоловіків, що отримують хом'як, визначається чоловіком, а культура, що завершується втручанням, обмежується поведінкою жінки, то відсоток голів, що включають в себе вступ (у літературі, що називається «швидкість удару»), насправді міра сильно залежить від поведінки жінки.
Щоб перевірити це твердження, ми обстежили жіночих хом'ячків, які були сексуально наївними або жінки, які раніше отримували 6 щотижня, 10 хвилинні статеві взаємодії з чоловіками [8]. Потім ми відпускали кожну жінку, що матіла, з сексуально наївним чоловічим хом'яком і реєструвала копуляторну поведінку. Наївні чоловіки в парі з сексуально досвідченими жінками мали більш високу швидкість попадання (більший відсоток горів з інтромісією), ніж наївні чоловіки, які пройшли тестування з наївними самками (Рис. 1). Крім того, однакова відмінність в частоті враження спостерігалася, чи були жінки перевірені 1 або 6 тижнів після останнього тесту сексуального досвіду, що свідчить про стабільну вивчену реакцію.
Додатковий експеримент вплинув на дофамін на вплив сексуального досвіду жінки на копуляторну продуктивність чоловіка8]. Нейротоксин дофаміну, 6-гідроксидопамін, вводили в базальний передній мозок, включаючи nucleus accumbens, жіночих хом'яків до отримання сексуального досвіду. Наївні чоловіки, які пройшли тестування з цими самками, не показали підвищеної швидкості удару, характерної для спарювання з досвідченими самками (малюнок 2). Вплив нейротоксину дофаміну на статеві взаємодії був специфічним для збільшення швидкості попадання, пов'язаної з сексуальним досвідом, оскільки не було впливу цих ушкоджень на поведінку недосвідчених чоловіків-жінок.
3. Статевий досвід має корисні наслідки у жінок
Повторні статеві взаємодії з чоловіками також дають довгострокові поведінкові наслідки для жінки в контексті винагороди. Умовно налаштоване місце14] був корисним підходом до розкриття зміцнюючих компонентів сексуальної поведінки. У цій парадигмі повторні статеві взаємодії з самцем пов'язані з одним відділенням багатокамерної камери. У відповідних випадках самку поміщають самостійно в подібному, але відмінному відсіку. До і після цих випробувань кондиціонування, самці пропонується можливість вивчити апарат (у відсутності чоловіка), щоб визначити відносну кількість часу, який жінка проводить у відсіку, пов'язаному з копуляцією. Копуляція з самцем оперативно визначається як підсилююча, якщо жінка проводить значно більше часу в компартменті, пов'язаному з спарюванням після випробувань сексуальної поведінки, ніж до кондиціонування.
Чіткий (хоча, можливо, не дивно) результат цих досліджень у щурів-жінок [наприклад, 65,69] та хом'яків [56], що сексуальні взаємодії підсилюють. Вимоги до стимулювання цього виникнення не були такими очевидними. Ні для щурів, ні для хом'яків є простий показник лордозу під час тестування на спарювання, достатній для впливу на кондиційні місця. Як зазначалося, жіночі щури мають переважну швидкість статевих контактів з гомосексуалістом, який має нейроендокринні наслідки, пов'язані з прогестацією і фертильністю. Дозвіл щурам-самкам на кращий інтервал необхідно для придбання умовного місцеположення, оскільки статеві взаємодії, в яких самка не ходить, не виробляють кондиціонування [25,27,34,67,68]. Температурна картина тут важлива, хоча і не обов'язково є контролем стимуляції, оскільки регулювання стимуляції шляхом видалення і введення чоловіка на бажаному інтервалі жінки також призведе до кондиціонування місцевих переваг [34].
У жіночих хом'яків немає тимчасової вимоги до спаровування42], хоча вони також демонструють сприятливе місце, віддаючи перевагу спарюванню [56]. Одним із способів, яким важливість сексуальних контактів у чоловіків для кондиціонування місцевих переваг була випробувана у жіночих хом'яків, було порівняти ефективність нормальних статевих взаємодій із статевими взаємодіями, при яких інтравагінальна інтромісія чоловіка була запобігана шляхом закривання піхви жінки [39]. Тут кондиціонування місцевих переваг було очевидним незалежно від того, чи отримувала жінка жіноча вагінальна стимуляція під час випробувань на кондиціювання сексуальної поведінки. Цей експериментальний результат, як видається, порушує спостереження, що аналогічна оклюзія вагіни запобігає підвищенню дофаміну в статевих взаємодіях з чоловіком [40]. Проте жінки були сексуально наївними в цьому дослідженні мікродіалізу. Здавалося б, що безліч сенсорних властивостей, накопичених під час сексуального досвіду, наприклад, під час кондиціонування випробувань місцевої переваги парадигми [39], розширює сенсорні стимули, що сприяють сексуальній винагороді, від обмеженої ролі вагінальної стимуляції у жінок, що статеві наївні [40].
Досліджено нейромедіаторні системи, що опосередковують кондиціювання місцевих переваг до статевих взаємодій. В одному дослідженні антагоніст до опіоїдної нейротрансмісії шляхом лікування жіночих щурів налоксоном до статевих взаємодій усунув кондиціювання місця [68]. І навпаки, кілька досліджень з використанням антагоністів дофамінових рецепторів давали змішані результати. Претретинг жіночих хом'ячків з антагоністами дофамінових рецепторів D2 [57] перешкодило придбанню умовного місця перевагу сексуальним взаємодіям (Рис. 3). Аналогічне дослідження на щурах не дало ефекту [30].
4. Нейротрансмітер і клітинна пластичність після сексуального досвіду у жінок
Існує багата традиція дослідження механізмів сигналізації дофаміну, оскільки вони пов'язані з компонентами мотивованої поведінки та зловживанням наркотиками [наприклад, 60]. Займаючись з цієї літератури, ми досліджували можливість того, що сексуальний досвід може вплинути на нейротрансмісію дофаміну в мезолімбічному шляху і що пластичність в цій системі є основою для поведінкових наслідків сексуального досвіду, наприклад, зміни ефективності копуляції та винагороди. У мезолімбічної дофамінової системи є як докази активації під час жіночих статевих взаємодій, так і довгострокові ефекти на структурну і нейрохімічну пластичність. Початкові експерименти з мікродіалізу показали, що рівні позаклітинного дофаміну в ядрах жінок були підвищені під час спарювання [55,58]. Для жіночих щурів вивільнення дофаміну було особливо чутливим до темпу взаємодії з чоловіками4,33,58], а для (щонайменше, статево наївних) хом'яків, підвищення дофаміну залежало від вагінальної стимуляції, отриманої під час спарювання [40]. IНа подальшому експерименті ми взяли трохи інший підхід, на цей раз вимірявши позаклітинний допамін в nucleus accumbens під час спарювання у сексуально наївних жіночих хом'яків або у жінок, що мали статевий досвід перед тестом мікродіалізу [38]. Статевий досвід призвів до перебільшеного збільшення кількості позаклітинного дофаміну, який зберігався протягом усього статевого взаємодії з чоловіком, у порівнянні з рівнями дофаміну у жінок, які були сексуально наївними. (малюнок 4). Можливо, підвищена реакція дофаміну у жінок, що мають досвід сексу, відображає збагачений масив пов'язаних подразників, до яких хом'яки стають чуйними в результаті цього досвіду.
Підвищення рівня вивільнення дофаміну у досвідчених хом'ячків нагадує наслідки повторного опромінення тварин наркотичними засобами [75]. У цій літературі підвищений рівень дофаміну у відповідь на фіксовану дозу препарату називається "сенсибілізацією" [75]. Сенсибілізація лікарського засобу супроводжується різноманітними клітинними відповідями, які, як вважають, підвищують синаптичну ефективність і потік інформації через мезолімбічний шлях [74].
OНевхідна точка в механізм, через який поведінковий досвід може змінити нейрональну пластичність, знаходиться на рівні синапсів. Непрямий підхід до цього питання було зроблено шляхом вимірювання дендритних змін у стриатичних (у тому числі ядерних) нейронів у відповідь на введення ліків або після поведінкового досвіду. Повторне введення різноманітних зловживаних речовин з різними фармакологічними профілями збільшить довжину дендритних і / або щільності хребта в кінцевих дендритних гілках середніх колючих нейронів. [13,23,44,45,64,76,77,78]. Набагато менше прикладів існують для поведінкового досвіду, що має подібний вплив на дендрити, хоча індукція апетиту солі [79], сексуальна поведінка чоловіків [24] та сексуальна поведінка жінок [59] змінить дендритну морфологію в середніх колючих нейронах nucleus accumbens.
Статевий досвід у хом'яків мав диференційний вплив на дендритну щільність хребта [59] залежно від досліджуваного регіону (Рис. 5). У цьому експерименті жіночі хом'ячки отримали нашу основну парадигму 6 тижнів сексуального досвіду або залишилися сексуально наївними [38]. На 7th Тиждень, всі жінки отримували естрадіол і прогестерон, і після смерті прогестерону приносили в жертву близько 4 год. Мозок обробляли для фарбування Гольджи і аналізували шматочки 240 мкм. Шпильки відлічували від кінцевих дендритних гілок пірамідальних нейронів в медіальній префронтальній корі, середніх колючих нейронах nucleus accumbens (оболонка і ядро комбіновані), або середніх колючих нейронів спинного хвоста. У середніх колючих нейронах nucleus accumbens, щільність дендритного хребта (нормалізована до 10 мкм дендритної довжини) була вищою у сексуально досвідчених, ніж у сексуально наївних жінок. Зворотне було знайдено в апікальних дендритах нейронів шару V префронтальної кори. Відсутність групових відмінностей у щільності хребта у хвостатих середніх колючих нейронах. Ми інтерпретуємо ці відмінності в щільності хребта як відображає пластичність при нейтральній нейротрансмісії при допамінергічно реагуючих нейронах [37].
Якщо ми сприймаємо пластичність в дендритних шипах як дистальний клітинний маркер статевого досвіду, ми можемо висунути гіпотезу про каскад клітинних подій, що викликаються повторними сексуальними взаємодіями. Іншими словами, акцент повинен бути зроблений на два класи відповідей, проілюстрованих лікуванням наркотичними засобами [36перебільшена реакція на сексуальну поведінку і зміна клітинних реакцій при відсутності сексуальної поведінки. Запропоновані сигнальні події зображені на рис Рис. 6. Ця пропозиція не є ні новітньою, ні радикальною, оскільки дендритна пластичність, що виникає в результаті різноманітних стимулів, таких як стероїдні гормони [54], наркотики61], або довгострокове потенціювання [1] всі включають ілюстровані події. Це пояснюється тим, що ці шляхи настільки добре представлені у різноманітних прикладах нейронної пластичності, що представляється ймовірним, що, будучи заповнені прогалинами, це буде справедливо для впливу сексуальної поведінки на nucleus accumbens.
Підхід до відкриття, що використовує мікрочіпи генів [7], поряд з експериментальними підходами почали перевіряти змінену активність або експресію білка в декількох точках цих шляхів, що є результатом сексуального досвіду. Фактори транскрипції представляють один набір молекулярних подій, які можуть впливати на дендритну структуру, що призводить до тривалої пластичності [5,17,52]. Обидва кольори c-Fos та FosB досліджували у відповідь на сексуальний досвід і спарювання у жіночих сирійських хом'ячків. Після статевого взаємодії з чоловіком, забарвлення c-Fos була підвищена в ядрі nucleus accumbens, відповіді, яке збільшувалося у жінок, які пережили статеві захворювання (Рис. 7) [9]. Фарбування FosB не було помітним чином уражене статевою взаємодією, хоча рівні фарбування були більш високими в ядрі nucleus accumbens у сексуально досвідчених хом'ячків у порівнянні з наївними жінками (Рис. 8). Ні c-Fos, ні FosB не зазнали впливу сексуальної поведінки або сексуального досвіду в обох оболонках nucleus accumbens або в спинному стриатумі у цих жінок. У наших експериментах зміни в c-Fos і FosB відбуваються паралельно, як регіонально, так і як функція досвіду, хоча в інших дослідженнях зміни в цих білках не завжди коварируют.y [наприклад, 12].
Білки Fos можуть бути активовані через кілька сигнальних шляхів, включаючи MAP-кіназу [18]. ERK є кіназою нижньої течії в цьому шляху, і ми досліджували регуляцію ERK після сексуальної поведінки (Рис. 9). У західних блотах загальний рівень ERK 2 не впливав ні на сексуальну поведінку, ні на сексуальний досвід. Навпаки, ПЕРК 2 був підвищений у nucleus accumbens після сексуальної поведінки, але тільки у жінок з попереднім сексуальним досвідом.
Вступ до шляху MAP кінази може надходити з декількох джерел, включаючи активацію глутаматного рецептора [1], G-білкові рецептори (наприклад, дофамінові рецептори) [83], інозитол трифосфатні шляхи [66], і через рецептори фактора росту [16]. Ефекти сексуального досвіду на цих шляхах були залучені через аналіз мікрочіпів [7], але насправді не були досліджені безпосередньо. Одним з механізмів, який фактично регулюється статевим досвідом, є приєднання дофамінових рецепторів до аденилатциклазе [10]. Гомогенати з nucleus accumbens були взяті з досвідчених або недосвідчених жіночих хом'яків. Ці гомогенати стимулювали дофаміном і вимірювали накопичення цАМФ (Рис. 10). Допамін стимулював накопичення цАМФ у всіх групах лікування, з більшою стимуляцією в гомогенатах у статево досвідчених жінок. TДії дофаміну були визначені як опосередковані рецептором D1. Хоча один компонент пластичності після сексуального досвіду є пресинаптичним (тобто збільшеним виходом допаміну під час статевих взаємодій), так само ясно, що є постсинаптичні модифікації, які не є просто відображенням підвищених синаптичних рівнів дофаміну.
5. Резюме та висновки
Одна гіпотеза про мезолімбічної функції дофаміну полягає в тому, що цей шлях чутливий до умовних властивостей, пов'язаних з поведінкою, що зустрічається в природі, таким чином, що оптимізує функціональні наслідки цих поведінків [80]. З цієї основи ми можемо уявити картину поведінки, при якій вагінальна стимуляція, яку отримують жінки під час копуляції, стимулює нейротрансмісію допаміну. Хоча спочатку цей відгук є безумовним [55], з досвідом жінки отримують тонкі перинеальні рухи, які збільшують ймовірність отримання вагінальної стимуляції від чоловіка8]. У свою чергу, відбувається активізація допаміну, яка живить вперед для підтримки поведінкової реакції. Оскільки отримання вагінальної стимуляції за допомогою інтродукції з боку чоловічої статі (що передує еякуляції чоловіком) є необхідним для індукції прогестационного стану, що супроводжує запліднення (і, отже, успішної вагітності) [42], ця поведінкова регуляція мала б непрямий вплив на підвищення ефективності копуляції, що призводить до успішної репродуктивності. Відповідь на питання «Чому жінки-матерії?» - це отримання стимуляції, що має корисні наслідки у вигляді дофамінової активності переднього мозку. Ці «приємні» компоненти сексуальної поведінки мають непередбачені (з жіночої точки зору), хоча й дуже адаптивні, наслідки успішної вагітності та народження потомства.
Подяки
Ми хотіли б подякувати багатьом людям, які зробили важливий внесок у дослідження, включаючи доктора Кетрін Бредлі, Алма Хаас, Маргарет Джоппа, доктор Джесс Колер, Річард Роу і доктор Вал Воттс. Особлива подяка Павлу Мермельштейну за його поради та постійний інтерес до нашої роботи. Цей огляд базується на доповіді на семінарі 2006 з приводу стероїдних гормонів та функцій мозку, Breckenridge, Co. Ми вдячні Національному науковому фонду (IBN-9412543 та IBN-9723876) та Національному інституту здоров'я (DA13680) за їх підтримка цього дослідження.
посилання
;