Виявлення молекулярних змін у фос-експресуючих нейронах, що активуються метамфетаміном, з одного спинового стриатуму щура з використанням флуоресцентно-активованого сортування клітин (FACS) (2013)

Метамфетамін та інші препарати активують невелику частку всіх нейронів головного мозку. Ми раніше розробили метод флуоресцентно-активованого клітинного сортування (FACS), що характеризує молекулярні зміни, індуковані селективно в активованих нейронах, які експресують маркер нейронної активності Fos. Однак цей спосіб вимагає об'єднання зразків від багатьох щурів. Тепер ми описуємо модифікований метод на основі FACS, що характеризує молекулярні зміни в Fos-експресуючих нейронах спинного стриарту від однієї щури з використанням стратегії мультиплексної попередньої ампліфікації.

Імуногістохімія Fos і NeuN (нейрональний маркер) вказують, що 5-6% нейронів дорсального стриатума були активовані 90 хв після гострих ін'єкцій метамфетаміну (5 мг / кг, ip), тоді як менш ніж 0.5% нейронів активувалися сольовими ін'єкціями.

Ми використовували FACS для розділення нейронів, позначених NeuN, на Fos-позитивні та Fos-негативні нейрони і оцінювали експресію мРНК з використанням RT-qPCR з п'яти Fos-позитивних нейронів. Метамфетамін індукував 3-20-кратне збільшення дуги безпосередніх ранніх генів, гомер-2, c-fos, fosB і його ізоформ (ΔfosB і нова ізоформа ΔfosB-2) у Фос-позитивних, але не Фос-негативних нейронах. Індукція мРНК безпосереднього раннього гена була 10-кратною або відсутня при оцінці в несортованих зразках гомогенатів одного спинного стриатума. Наш модифікований метод робить можливим вивчення унікальних молекулярних змін в нейронах, активованих лікарськими засобами або пов'язаними з наркотиками сигналами в складних моделях наркоманії.

Метамфетамін та інші препарати активують невелику частку всіх нейронів головного мозку. Ми повідомляємо про вдосконалений метод, що характеризує молекулярні зміни, індуковані селективно в активованих нейронах, які експресують маркер нейронної активності Fos. Ми використовували FACS разом з цільовою ПЛР-попередньою ампліфікацією для оцінки гострої індукованої метамфетаміном експресії генів від небагатьох 5 Fos-экспрессирующих нейронів з однієї щурячої стриатуму. Метамфетамін індукував 3-20-кратне збільшення безпосередніх ранніх генів (IEG) у Fos-позитивних, але не Фос-негативних нейронах. Цільова попередня ампліфікація ПЛР робить можливим вивчення унікальних молекулярних змін в нейронах, активованих лікарськими засобами або пов'язаними з наркотиками сигналами в складних моделях наркоманії.

Опубліковано 2013. Ця стаття є роботою уряду США і є суспільним надбанням у США.