Роль гіпокретину (орексину) у чоловічій сексуальній поведінці (2007)

J Neurosci. 2007 Mar 14;27(11):2837-45.

Muschamp JW1, Домінгуес Дж. М., Сато СМ, Шень Р.Й., Халл Е.М..

абстрактний

Роль гіпокретину (орексин; hcrt / orx) нейронів у регуляції збудження добре встановлена.

Останнім часом hcrt / orx втягується у нагороду за їжу та поведінку, яка шукає наркотики. Тут ми повідомляємо, що у самців щурів імунореактивність Fos (нейронів) в нейронах hcrt / orx помітно підвищується під час копуляції, тоді як кастрація призводить до зниження кількості hcrt / orx нейронних клітин та рівня білка за часом, що відповідає пошкодженню копуляторної поведінки.

Цей ефект було скасовано шляхом заміни естрадіолу. Імуномаркірування рецепторів андрогену (AR) та естрогену (ER альфа) не виявило жодної колокалізації hcrt / orx з AR та кількома нейронами hcrt / orx, що експресують ER альфа, припускаючи, що гормональна регуляція експресії hcrt / orx відбувається через аферанти з нейронів, що містять ці рецептори. Ми також демонструємо, що системне введення антагоніста рецептора орексину-1 SB 334867 [N- (2-метил-6-бензоксазоліл) -N ”-1,5-нафтиридин-4-іл сечовина] погіршує копулятивну поведінку. Одним із локусів просексуального впливу hcrt / orx може бути вентральна тегментальна зона (VTA). Тут ми показуємо, що hcrt-1 / orx-A спричиняє дозозалежне збільшення швидкості стрільби та популяційної активності нейронів VTA дофаміну (DA) in vivo. Активація hcrt / orx під час копуляції, і, в свою чергу, збудження нейронів VTA DA hcrt / orx, може сприяти сильному збільшенню ядерного нагромадження DA, яке спостерігалося раніше під час сексуальної поведінки чоловіків. Подальше потрійне імуномаркірування в передньому VTA показало, що Fos-ir у нейронах, позитивних до тирозину гідроксилази, розташованих на волокнах hcrt / orx, збільшується під час копуляції.

Разом ці дані підтримують думку про те, що hcrt / orx пептиди можуть діяти на чутливий до стероїдів спосіб сприяти енергійному прагненню до природних винагород, як секс, шляхом активації мезолімбічної системи DA.

Вступ

З моменту відкриття в 1990 (de Lecea et al., 1998; Sakurai et al., 1998), система гіпокретину (орексин; hcrt / orx) розглядається в основному в контексті збудження та інсективної поведінки (Саткліф і де Лесеа, 2002; Siegel, 2004). Миші-мутанти з порушенням hcrt / orx-сигналізації демонструють нерівномірні схеми збудження, що відзначаються частими переходами між сном і неспанням (Mochizuki та ін., 2004). Вважається, що пептиди hcrt / orx сприяють безперебійному збудженню за допомогою надійних проекцій на активні амінонергічні групи клітин в стовбурі мозку (наприклад, локус церулюса, рафе) (Peyron et al., 1998; Намбу та ін., 1999; Saper et al., 2005). На додаток до своїх проекцій на сайти, які регулюють пильність та збудження, нейрони hcrt / orx також проектують на початок шляху мезолімбічного дофаміну (DA) у тегментальній зоні вентралі (VTA) (Fadel і Deutch, 2002). Ця закономірність зв’язку спонукала ряд дослідницьких груп оцінити роль hcrt / orx у підкріпленні, пов'язаному з нагородами (DiLeone та ін., 2003; Harris et al., 2005; Харріс і Астон-Джонс, 2006).

Дослідження на рухах тварин ad libitum показують, що нейтрони hcrt / orx збільшують свою швидкість стрільби в періоди напруженої, дослідницької поведінки (Мілейковський та ін., 2005) та посилення виходу опорно-рухового апарату після внутрішньомозкової інфузії hcrt / orx послаблюється блокадою рецепторів DA (Nakamura та ін., 2000). Інші дослідження продемонстрували підвищену активність клітин DA пробірці від hcrt / orx (Korotkova et al., 2003), а також вивільнення DA з посиленим ядром (NAc) DA в природних умовах після застосування hcrt / orx до VTA (Narita et al., 2006). Нещодавно в поведінкових дослідженнях було встановлено, що активація системи hcrt / orx може бути невід'ємною частиною мотивації до зловживання наркотиками (Boutrel et al., 2005; Harris et al., 2005; Borgland et al., 2006), а також природні харчові винагороди, сила посилення яких визначається гомеостатично гіпоталамічними структурами (Hoebel, 1969; Rolls et al., 1980; Fulton et al., 2000; Thorpe et al., 2005).

Так само, як екзогенний hcrt / orx може посилити годування та пошук їжі (Коц, 2006), внутрішньогіпоталамічна інфузія hcrt / orx полегшує сексуальну поведінку самця щурів (Gulia et al., 2003). У світлі класичних досліджень, в яких поведінка годування або копуляції чоловіків викликалася електричною стимуляцією ділянок у бічній гіпоталамічній зоні (ЛГК), які, як відомо, містять hcrt / orx нейрони (Вон і Фішер, 1962; Caggiula і Hoebel, 1966; Swanson et al., 2005), ми шукали докази для активації hcrt / orx нейронів під час копуляції та для порушення поведінки рецептором орексину-1 (OX1) блокада. Ми також оцінювали нейроендокринну регуляцію системи hcrt / orx шляхом вимірювання впливу кастрації та заміщення гормонів на центральний вміст hcrt / orx та подвійним імуномаркуляцією щодо рецепторів hcrt / orx та стероїдних гормонів. Нарешті, ми оцінили, наскільки мезолімбічна система DA може бути активована hcrt / orx в природних умовах і чи виявляють нейрони DA у VTA, які отримують вхід hcrt / orx, підвищену імунореактивність Fos (ir) під час копуляції.

Матеріали та методи

Fos імуногістохімія, поведінка та кількість клітин.

Дорослі (∼325 г), сексуально досвідчені щури Довго-Еванса (Харлан, Індіанаполіс, Індіана) зберігали та використовували відповідно до Національних інститутів здоров'я Рекомендації з догляду та використання лабораторних тварин, і всі процедури були затверджені університетськими інституційними комітетами з догляду та використання тварин. За тиждень до випробування всім тваринам було дозволено проводити чотири щоденних сеанси сексуального досвіду протягом 1 години з оваріектомізованою самкою, привезеною до еструсу бензоатом естрадіолу (10 мкг, sc) та прогестероном через 48 годин (400 мкг, sc; дано за 4 години тестування; Sigma, Сент-Луїс, Міссурі). Тестування поведінки у всіх експериментах проводили за 2 години звичайного нічного періоду тварин у їх домашній клітці під світлом однієї червоної лампи розжарювання потужністю 40 Вт. Для експериментів копуляції одна група (n = 6) чоловіків було дозволено копулировать у своїй домашній клітці з естрозною самкою до одноразової еякуляції, після чого самку видалили. Усі тварини сідали майже відразу і піддавали спонукання за <4 хв. Середня затримка еякуляції для цієї групи становила 632.6 ± 169.64 с (середнє значення ± SEM; n = 6). Контрольна група (n = 6) був використаний для контролю рівня активності. За цими тваринами здійснювали візуальний моніторинг, щоб перевірити, чи вони були не сплячими та активними протягом 15 хв, що відповідало тривалості періоду тестування копуляції експериментальної групи. Кришки клітини відкривались і закривались на початку та в кінці цього 15-хвилинного періоду, але в іншому випадку тварини залишалися безперешкодними. Контрольних тварин, які перебували в спокої в цей період, не застосовували. Тварини були оцінені як спокійні, якщо вони, здається, відпочивали на боці або в позі головою вниз (адаптовано з Espana та ін., 2003). Через шістдесят хвилин після початку сеансів копуляції або контрольних спостережень тварин глибоко знеболювали пентобарбіталом натрію (100 мг / кг) та перфузували 0.1 m PBS, pH 7.4 та параформальдегід 4% у PBS. Мізки криозахищені 20% сахарозою-PBS, а кожен інший розділ криостату 40 мкм (30 на тварину), розташований поблизу популяції клітин гіпоталамуса hcrt / orx, був імуномаралізований для попереднього введення / hcrt / orx (1: 100; Millipore, Billerica, MA) та Fos (1: 10,000; EMD Biosciences, Сан-Дієго, Каліфорнія) з 3 ', 3' -діамінобензидином (DAB) та інгібітором нікелю DAB відповідно відповідно до описаних раніше імуногістохімічних процедур (Espana та ін., 2003; Sato et al., 2005). Підрахунок клітин проводили під високим збільшенням за допомогою мікроскопа Olympus (Токіо, Японія) на одній секції на послідовному рострокаудальному рівні (див. Рис. 1B,C) (2.45 мм позаду брегми) (Суонсон, 2004). У кожній півкулі клітини, які потрапили в межах двох полів підрахунку 470 × 630 мкм, були помічені за допомогою програмного забезпечення для цифрового аналізу зображень (Image-Pro Plus; Media Cybernetics, Silver Spring, MD) екзаменатором, сліпим експериментальним умовам. В обох півкулях бокові лічильні поля використовували форніки як їх медіальну межу. Поля медіального підрахунку використовували форніки як їх бічну межу. Були записані номери лише для Fos, лише hcrt / orx та двоякі мітки з клітинами hcrt / orx та Fos-ir.

Малюнок 1. 

Підвищена імунореактивність Fos у нейронах hcrt / orx під час копуляції. A, Hcrt / orx нейрон (справа), що показує Fos-ir. Шкала шкала, 25 мкм. B, Репрезентативна мікрографія з правого лічильного поля в лівій півкулі неконкулюючого контрольного самця. Шкала масштабу (в A), 200 мкм. C, Мікрограф від копуляції самця. Шкала шкала, 200 мкм. Стрілки позначають hcrt / orx нейрони, що показують Fos-ir; зірочки вказують на ядра Fos-ir у клітинах, що не належать до HCT / Orx; fx, fornix.

Експерименти з кастрацією та імуноблотінг.

Дорослим самцям (∼325 г на початку експериментів) Щурам Довго-Еванса було проведено наркоз (75 мг / кг кетаміну HCl та 10 мг / кг ксилазину HCl, ip) та кастровано. Тваринам було дозволено 7, 14 або 28 d тривалість виживання після операції до того, як вони були знеболені та перфузовані, а їхній мозок був імуномаркрований для попереднього прийому hcrt / orx, як зазначено вище (всі групи, n = 5). Цих тварин порівнювали з групою хірургічної операції, яка отримала розріз мошонки під однаковою анестезією (n = 5). Шамс також був убитий у 28 d. Підрахунок клітин проводили, як зазначено вище, в одній корональній площині при меншому збільшенні.

В окремому експерименті 28 d каструє (n = 5) та шахрайсько-керовані контролі (n = 5) були глибоко знеболені пентобарбіталом натрію (100 мг / кг), а мозок видалено та швидко заморожено в 2-метилбутані, охолодженому сухим льодом. Потім заморожені гіпоталами були заблоковані двома корональними розрізами, один через медіальну преоптичну область (mPOA), просто ростральний до розрідження передньої комісури, а інший через заднє ядро ​​гіпоталамуса, просто каудальний до поділу третього шлуночка на його гіпоталамус і соскоподібні поглиблення. Потім блоки обрізали двома сагітальними розрізами на медіальному кінці будь-якого церебрального плодоніжки та горизонтальним зрізом на спинному кінці гіпоталамусової виїмки третього шлуночка. Потім тканинні блоки гомогенізували обробкою ультразвуком, білок екстрагували в модифікований радіоімунопреципітаційний буфер, рН 8.0, з інгібіторами протеази (суміш протеаз Roche Complete Mini; Roche Diagnostics, Індіанаполіс, Індонезія), а екстракти аликвотували після центрифугування. Після визначення загальної концентрації білка для екстрактів від кожного суб’єкта 40 мкг білка від кожної тварини завантажували в окремі лунки 15% гелю SDS-PAGE. Електрофоретичне розділення, перенесення на мембрани дифториду полівінілідену (Bio-Rad, Hercules, CA) та імуномаркірування проводили за методикою Леммлі (Клівленд та ін., 1977), використовуючи 1: 1000 попередньо відзначеного анти-препро-hcrt / orx-антитіла, а пізніше 1: 2000 анти-β-актин (Sigma) та 1: козячий анти-кролячий IgG 5000 (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA) ) у сухому молоці 5% у сольовому розчині, захищеному від трис. Білкові смуги візуалізувались поліпшеними наборами для хемілюмінесценції (ECL; GE Healthcare, Piscataway, NJ) та плівками BioMax Kodak (Rochester, NY) BioMax. Плівки піддавалися впливу 40 s та були скановані цифровим шляхом, а оптична щільність вимірювалася за допомогою загальнодоступного програмного забезпечення ImageJ. Для кожної тварини визначали значення оптичної щільності hcrt / orx у відсотках від контролю навантаження β-актином та піддавали статистичному аналізу.

У третьому експерименті самцям щурам, як описано вище, були проведені хитрі операції (n = 3) або каструють та вводять кожен другий день протягом 28 d з дигідротестостероном (500 мкг, с; n = 4), естрадіол бензоат (20 мкг, sc; n = 3) або масляний транспортний засіб (0.1 мкл; n = 3). Обидва гормони були придбані у Sigma. Дози гормону вибиралися за їх здатності в попередніх дослідженнях підтримувати копуляцію в кастратах (Putnam та ін., 2005). На 28-й день після операцій тварин вбивали, а їх гіпоталамі блокували для вимірювання вмісту препро-ЧХТ / орксу західним імуноблотом, як описано вище.

Рецептор стероїдних гормонів та імуногістохімія з подвійною міткою hcrt / orx.

Мозкові відділи ЛГК неушкодженого, сексуально наївного дорослого самця (N350 г) Щури Довго-Еванса були імуномаркровані на рецептор андрогенів (AR) (1: 750; n = 6; Santa Cruz Biotechnology) або рецептор естрогену (ERα) (1: 2500; n = 9; Санта-Крус Біотехнологія) з використанням нікель-інтенсивного DAB. Згодом секції, мічені AR, були подвійними мітками для pre-hcrt / orx (як зазначено вище), а ділянки, мічені ERα, подвійне фарбування для pre-hcrt / orx (n = 5). Після монтажу секції, які тісно відповідали одному з чотирьох корональних шарів LHA в атласі Swanson (2004) були намальовані вручну під мікроскопом за допомогою вкладки Lucida для камери, і позначені подвійні та одномітні клітини в кожній секції. Малюнки були цифрово відскановані та накладені на рівні атласу за допомогою Adobe Illustrator Adobe (Сан-Хосе, Каліфорнія), і кожна популяція клітин була відображена на ілюстрації атласу (Суонсон, 2004). У разі розділів, помічених ERα-плюс-hcrt / orx, підраховувались числа подвійних та одномітових нейронів hcrt / orx.

Фармакологія та копуляційна поведінка.

Дорослий самець (∼350 г на початку експериментів) щури Довго-Еванса (n = 9) отримали чотири сеанси сексуального досвіду з сексуально сприйнятливою жінкою протягом 1 години протягом тижня перед поведінковим тестуванням. Тварин, які не змогли еякулювати хоча б один раз протягом перших 30 хв остаточного тесту, виключили з експерименту. Сеанси досвіду та поведінкові тестування проводились під 40 Вт червоного лампи розжарювання за 2 год до нічного періоду тварини. Тести копулятивної поведінки проводили в домашній клітці самця і тривали 30 хвилин. Визначні особливості копулятивної поведінки чоловіків (тобто підняття, інтромісії та еякуляції) оцінював спостерігач, сліпий до експериментальних процедур, використовуючи спеціальне комп'ютерне програмне забезпечення, яке реєструвало дані про частоту та затримку для кожної поведінкової події. За тридцять хвилин до поведінкових тестів тваринам вводили або OX1 антагоніста N- (2-метил-6-бензоксазоліл) -N ″-1,5-нафтиридин-4-ілсечовина (SB 334867) (20 мг / кг, в / в) або носій ДМСО (0.5 мл / кг). Експеримент проводився за простою врівноваженою конструкцією суб'єктів, таким чином, що п'ять тварин отримували ін'єкції ліків під час першого дня тестування, а решта чотири отримували носій. Після 48 годин періоду вимивання лікарських засобів тваринам, які отримували препарат у перший день, давали носій та навпаки.

Електрофізіологія.

Дорослим самцям щурів Sprague Dawley (N350 g) знеболювали хлоральним гідратом (400 мг / кг, ip для індукції; 100 мг · кг-1 · Год-1 далі для технічного обслуговування) та встановлений на стереотаксичному інструменті. Череп і дура над область стовбура мозку, що містить ВТА, були видалені. Кожна тварина вперше отримала інфузію штучного CSF (aCSF) [0.5 мкл / 5 хв; від лямбда, переднезадній, + 2.6 або + 3.4 мм; медіолатеральний, ± 0.8 мм; дорсовентральний, −7.0 мм; плоский череп відповідно до стереотаксичного атласу (Паксинос і Уотсон, 1998)], зі шприцом 32 ga Hamilton (0.5 мкл / 5 хв) на одній стороні VTA. Потім, 10 хв пізніше, процедура відбору клітин на трек проводилася на іпсилатеральній стороні VTA. Далі тварини отримували інфузію hcrt-1 / orx-A (0.014 нмоль, n = 4; 1.4 нмоль, n = 5; або 140 нмоль, n = 6, розчинений у aCSF; Американський пептид, Саннівейл, Каліфорнія) в контралатеральну VTA перед тим, як повторювали процедуру клітин на трек на цій стороні. Ін'єкції були врівноважені півкулею та передньою або задньою місцем ін'єкції. Позаклітинні одноагрегатні записи проводили за допомогою однопістових скляних мікропіпеток (зовнішній діаметр 1.5 мм перед витягуванням; World Precision Instruments, Sarasota, FL), заповнених 2 m NaCl та розбитими назад. Електродний опір коливався від 2 до 4 MΩ при 135 Гц. Нейрони DA були ідентифіковані за їх позитивно-негативними позаклітинними потенціалами дії, які часто мають виражений початковий сегмент / соматодендритний (IS / SD) розрив, широку тривалість потенціалу дії, повільну швидкість стрільби та нерегулярну схему одиночного спайку чи вибуху (Грейс і Банні, 1983). Для проведення експерименту "Осередки на трек" записуючий електрод пропускали через стереотаксично визначений блок у VTA (2.8 – 3.4 мм перед лямбда; 0.6 – 1.0 мм бічно до середньої лінії; 6.5 – 8.5 мм нижче поверхні мозку) систематично шість разів. Кожен ідентифікований нейрон DA був записаний протягом 2 – 5 хв он-лайн за допомогою системи збору даних діаграми (AD Інструменти, Маунтін-В'ю, Каліфорнія). Середня кількість спонтанно активних нейронів DA, ​​що зустрічалися на кожну дозу електрода від кожної тварини (клітини на трек), була показником активності популяції нейронів VTA DA. Середню швидкість випалу нейронів DA визначали з усіх нейронів DA, ​​відібраних у всіх тварин у кожній групі.

Для перевірки на дезаляризацію деполяризації в групі 140 ncm hcrt / orx, апоморфін HCl (20 мкг / кг, ip; n = 4; Sigma) вводили відразу після завершення відбору після hcrt-1 / orx-A. Через десять хвилин після введення апоморфіну відбирали шість додаткових електродних доріжок у бік VTA, який раніше отримував hcrt-1 / orx-A.

Поведінка, потрійна мітка імуногістохімія та кількість клітин.

Дорослим (∼300 г) щурам Довго-Еванса було проведено чотири сеанси сексуального досвіду 1 h із сприйнятливою самкою, як вище. Перед анестезією, перфузією та підготовкою тканини для імуномаразування (1 h) тварин (n = 6) дозволяли копулюватись до однієї еякуляції. Як було сказано вище, тварини встановлювали та інтромітували майже відразу, і середня затримка еякуляції для цієї групи становила 588.50 ± 85.03 s (середнє ± SEM). Експериментальну групу порівнювали з контрольованими статевими стосунками, яким не було надано доступу до страшних самок для копуляції (n = 6). Як і вище, випробування відбувались за 2 години звичайного нічного періоду тварини при червоному розжарюванні. Після того, як тварин було вбито, зафіксовано та розрізано холодний мікротом (як зазначено вище), для імуногістохімії було відібрано чотири зрізи від кожної тварини, що представляють чотири рострокаудальних рівні VTA. За кількістю предметів (n), що використовується для підрахунку комірок на кожному рівні, див Таблиця 4. Розділи були позначені для Fos (1: 7500; Santa Cruz Biotechnology) з DAB, як зазначено вище. Потім секції мітили для препро-hcrt / orx (1: 500) та тирозин-гідроксилази (TH; 1: 2000; Millipore) із сполученими цианіном флуоресцентними вторинними антитілами (1: 200; Cy3 і Cy2 відповідно; Jackson ImmunoResearch, West Grove, PA). Підрахунок клітин проводили під високим (40 ×) збільшенням на a Leica (Nussloch, Німеччина) з використанням мікроскопа DM 4000B Стереослідчик програмне забезпечення (MBF Bioscience, Williston, VT) експериментатором, сліпим до умов лікування. Стереослідчик програмне забезпечення було використане для визначення поля підрахунку, яке включало всі комірки DA в межах кожного рівня VTA. При одній фокусній відстані в кожному з чотирьох рострокаудальних рівнів ВТА п'ять типів клітин позначали: TH-позитивні нейрони, TH-позитивні нейрони, що показують Fos-ir, TH-позитивні нейрони, що показують прямі (на соматичну плазмалему) призначення від hcrt / оркс-волокна, TH-позитивні нейрони, що показують як Fos-ir, так і hcrt / orx призначення, і, нарешті, соло фос-позитивні ядра не в нейронах TH.

Аналіз даних.

Групові засоби для підрахунку клітин в експерименті Фос та вимірювання оптичної щільності вестерн-блотів першого першого експерименту порівняли незалежними зразками t тест. Зібрані зразки t тестування проводилося на засобах від OX1 поведінковий експеримент антагоніста. Кількість клітин при кастрації, експериментах із потрійним маркуванням та середньою швидкістю випалу та вимірюванням клітин на трек піддавались ANOVA.

результати

Копуляція збільшує імунореактивність Fos в нейтронах hcrt / orx

Відсоток клітин hcrt / orx-ir, які показали Fos-ir, істотно відрізнявся між групами, при цьому у копулюючих тварин виявлялося збільшення Fos-ir в клітинах hcrt / orx (t(10) = 7.71; p <0.01) (Таблиця 1, Рис. 1). Середні числа подвійних міток hcrt / orx також істотно відрізнялися між групами (t(10) = 6.03; p <0.001). Примітно, що у копуліруючих тварин не виявлено різниці в кількості Fos-позитивних нейронів hcrt / orx між медіальним та латеральним полями підрахунку (дані не наведені) (Харріс і Астон-Джонс, 2006). Загальна середня кількість ядер Fos-ir (лише Fos та двократно помічені hcrt / orx нейрони) була значно більша при копуляції тварин, ніж у неконтролюючих контрольних групах (t(10) = 16.97; p <0.001) (Таблиця 1).

Переглянути цю таблицю: 

Таблиця 1. 

Збільшення Fos-ir під час копуляції в hcrt / orx нейронах щурів-самців

Кастрація зменшує імунореактивність hcrt / orx та білка в гіпоталамусі

У порівнянні з контрольно обробленими контрольними групами, кількість нейтронів hcrt / orx-ir показало значне зменшення кількості клітин 28 d після кастрації (Рис. 2A) (F(3,16) = 7.60; p <0.005). Це являє собою зменшення кількості клітин у спостережуваній популяції на 31.8%. Post hoc (Тукі) тестування не виявило суттєвих відмінностей у кількості підроблених щурів або кастратів 7 або 14 d. Подальший західний імуноблот-аналіз гіпоталамічного препро-hcrt / orx виявив значне зниження середньої оптичної щільності діапазонів hcrt / orx від кастратів 28 d у порівнянні з контрольно-обробленими контролями (Рис. 2B) (t(8) = 2.99; p <0.05.).

Малюнок 2. 

У гіпоталамусі самців щурів кастрація знижує ЧХТ / оркс-ір. A, Репрезентативні мікрофотографії нейтронів, мічених hcrt / orx в одній півкулі, показують значне зменшення кількості клітин на 28 d після кастрації. Введені значення - середнє число клітин для обох півкуль ± SEM; **p <0.005. Шкала шкали, 200 мкм; fx, fornix. B, Західні імуноблоти виявляють значне зменшення гіпоталамічного пре-hcrt / orx кастратів 28 d. Кожна смуга представляє сигнал від однієї тварини в будь-якій групі. Значення - середні ± SEM оптичні щільності (од) одиниці для hcrt / orx щодо β-актину; *p < 0.05. C, Імуноблоти для pre-hcrt / orx у кастраціях 28 d показують E2 підтримувати гіпоталамічний вміст hcrt / orx, еквівалентне вмісту шампурів у порівнянні з контролем, обробленим маслом. Групи з однаковою малою літерою суттєво не відрізняються (p <0.05).

Естрадіол відновлює гіпоталамічний рівень hcrt / orx білка

При 28 d після кастрації або шахрайської хірургії рівень попереднього ХГЧ / орксу у тварин, оброблених маслом, був значно нижчим, ніж для шам- та естрадіолу (Е2) -оброблені групи (F(3,9) = 8.47; p <0.005) (Рис. 2C). Одностороння АНОВА с Постфактум (Тукі) випробування виявили, що рівні попереднього hcrt / orx вимірюються в шам- та Е2-оброблені тварини не відрізнялися один від одного і що Е2 Група не відрізнялася від тварин, оброблених ДГТ.

ERα є спільно з hcrt / orx і спільно експресується в анатомічно окремій популяції hcrt / orx нейронів

Ядерний AR витягували вентрально з основної популяції нейронів hcrt / orx, поширюючись посередньобічно від дугоподібного ядра до зорового тракту. У жодному випадку ядерні AR та hcrt / orx не були виявлені в одному і тому ж нейроні (дані не наведені). Незважаючи на те, що ERα продемонстрував подібний характер розподілу в вентральній частині гіпоталамуса, мічення ERα було більш широким у ядрі вентромедіалу. Більш дорсально, мічення ERα було виявлено в звужених смугах клітин, які медіально поширювались від внутрішньої капсули під зоною інцерта до дорсомедіального гіпоталамуса (ДМГ). Мітка для ERα рідко зустрічалася в нейронах hcrt / orx (<1% опитаного населення). Коли було помічено, що ERα колокалізується з hcrt / orx, він, як правило, знаходиться в нейронах, що знаходяться в межах DMT або просто рострально до нього (Рис. 3). Таким чином, хоча дуже мало нейронів hcrt / orx у гіпоталамусі експресують ERα, висока частка (∼65%) тих, що знаходяться в DMH або поблизу (Рис. 3).

Малюнок 3. 

ERα є спільно з hcrt / orx. Ядра ERα представлені замкнутими колами, hcrt / orx нейрони представлені відкритими колами, а подвійні мітки ERα плюс клітини / orx клітини представлені зірками. Числа є в міліметрах каудальних до брегми. AHN, Переднє гіпоталамічне ядро; fx, fornix; от, зоровий тракт; ПВН, паравентрикулярне ядро; ВМХ, Вентромедіальний гіпоталамус; 3v, третій шлуночок.

Блокада Hcrt / orx-рецепторів погіршує копуляцію

У порівнянні з автомобілем, попередня обробка з OX1 антагоніст SB 334867 збільшив середні затримки до інтроміту та зменшив середню частоту еякуляції (Таблиця 2). Спарені зразки t тести виявили значний вплив SB 334867 на затримки інтромісії (t(8) = 3.31; p <0.05) і частота еякуляції (t(8) = 2.40; p <0.05). Лікування наркотиками також призвело до незначного збільшення середньої затримки встановлення та еякуляції та зменшення середньої кількості інтромісій (Таблиця 2).

Переглянути цю таблицю: 

Таблиця 2. 

OX1 антагоніст SB 334867 погіршує копуляційну поведінку чоловіків

Hcrt-1 / orx-A збільшує швидкість випалу нейрону VTA DA та активність популяції та індукує деполяризаційну інактивацію

Найменша доза hcrt-1 / orx-A (0.014 нмоль) збільшила середню швидкість випалу нейрону VTA DA порівняно з контролем, обробленим транспортним засобом (Рис. 4B,C) (попарне порівняння; F(1,18) = 13.83, p <0.01; після змішаного 2 × 3 ANOVA, F(1,10) = 13.67, p <0.005), але жодна інша доза hcrt-1 / orx-A не мала такого ефекту. Ця доза відповідає за значний основний ефект hcrt / orx на швидкість стрільби, виявлений у 2 × 3 ANOVA. A Постфактум (Тукі) випробування не виявило суттєвої різниці у швидкості між контрольованими групами aCSF через дозу. Доза 1.4 нмоль hcrt-1 / orx-A значно збільшила активність популяції нейронів VTA DA (кількість спонтанно активних нейронів, виявлених у кожному сліді електрода (Рис. 4D) (парне порівняння, F(1,24) = 6.42, p <0.05; після значної взаємодії в 2 × 3 змішаній ANOVA, F(2,10) = 16.71, p <.001). Найвища доза дослідженого hcrt-1 / orx-A (140 нмоль) суттєво знизила популяційну активність нейронів DA (клітин на доріжку) (Рис. 4D) (односторонній повторний вимір ANOVA на дозі 140 нмоль, F(2,6) = 12.20; p <0.01). Це зменшення було скасовано шляхом системної ін'єкції апоморфіну (Tukey's Постфактум тесту).

Малюнок 4. 

Hcrt / orx регулює активність нейтронів VTA DA в природних умовах. A, Форма хвилі типового нейрона VTA DA, що демонструє характерний широкий потенціал дії та розрив IS / SD. B, Вгорі, швидкість стрільби та зразок того самого нейрона, обробленого транспортними засобами, що демонструє типову розривну активність; дно, нейрон швидкого випалу, що спостерігається після місцевої інфузії 0.014 нмоля hcrt 1 / orx A (n = 4). C, D, Залежність дози місцево введеного hcrt-1 / orx-A щодо швидкості випалу та популяційної активності нейронів VTA DA. Hcrt-1 / orx-A (1.4 нмоль; n = 5) збільшує активність населення. Знижена активність популяції після 140 нмоль hcrt 1 / orx A (n = 4) було обернено системним апоморфіном (20 мкг / кг). Число всередині кожного рядка показує кількість записаних нейронів. Показані засоби ± SEM. *p <0.05; **p < 0.01.

TH-позитивні нейрони VTA з призначенням hcrt / orx показують збільшення Fos-ir після копуляції

Двостороння ANOVA на середню кількість ядер Fos-ir у не-TH позитивних нейронах показала значні ефекти лікування (F(1,38) = 38.88; p <0.001) та анатомічний рівень (F(7,38) = 12.59; p <0.001), а також значну взаємодію між цими двома факторами (F(7,38) = 7.45; p <0.001), припускаючи, що Fos, індукований під час копуляції, переважно відображається на передніх рівнях підрахунку. Це підтвердили подальші односторонні ANOVA і Постфактум (Тукі) тести, які виявляють два передні рівні ("ростральний" та "середній 1"), щоб мати значно більшу кількість фос-позитивних ядер (F(3,24) = 9.48; p <0.001). Те саме не було справедливим для неколюлюючих контролів, в яких базальний Fos-ir не відрізнявся за рівнем (Таблиця 3). Відсоток мічених TH-нейронами з призначенням hcrt / orx не відрізнявся експериментальним лікуванням; однак цей показник виявив помітний рострокаудальний градієнт, причому найбільший ростральний рівень має значно більший відсоток цих нейронів в обох групах (Таблиця 4) (F(3,38) = 133.57; p <0.001). Цей висновок узгоджується з більш високою щільністю волокон hrt / orx, яку ми спостерігали в передній VTA. Відсоток мічених TH-нейронами, що виявляють Fos-ir (але не мають амплітуд hcrt / orx), не відрізнявся ні лікуванням, ні рострокаудальним рівнем. Відсоток нейронів TH, що демонструє як Fos, так і hcrt / orx-апозиції, продемонстрував значний ефект лікування (F(1,38) = 8.62; p <0.01), рівень (F(3,38) = 4.53; p <0.01) та їх взаємодія (F(3,38) = 4.53; p <0.01). Одностороння ANOVA на засобах експериментальної групи свідчить про те, що індукований копуляцією Fos-ir у нейронах TH з амплітудами hcrt / orx відбувається найбільш помітно в клітинах, розташованих у ростральній VTA (F(3,24) = 4.85; p <0.05).

Переглянути цю таблицю: 

Таблиця 3. 

Кількість ядер Fos-ir у не-TH-позитивних клітинах VTA на чотирьох рострокаудальних рівнях

Переглянути цю таблицю: 

Таблиця 4. 

Відсоток нейронів TH, що показують hcrt / orx призначення, Fos або обидва

Обговорення

Підвищений Fos-ir в hcrt / orx нейронах ЛГК після копуляції говорить про те, що активація цих клітин супроводжує репродуктивну поведінку чоловіків (Морган і Куран, 1991). Ці дані узгоджуються з попередніми дослідженнями 2-дезоксиглюкози, що повідомляють про підвищення метаболічної активності в ЛГК після впливу естрогенних жіночих запахів (Orsini et al., 1985). Цей ефект може відображати посилену передачу hcrt / orx в термінальних областях hcrt / orx нейронів, таких як mPOA, в яких показано, що hcrt / orx полегшує копуляційну поведінку чоловіків (Gulia et al., 2003). Індукція Фос, пов’язана із статтю, у нейронах hcrt / orx узгоджується з уявленням, що нейрони hcrt / orx чутливі до природних підсилювачів. Нещодавнє дослідження продемонструвало, що Фос-ір збільшував рівень нейронів hcrt / orx щурів, обумовлених очікуванням харчової винагороди, і що це збільшення Фос-іра корелювало з оцінкою переваг тварин у парадигмі переваги умовного місця (Harris et al., 2005). Активізація нейтронів hcrt / orx може бути явищем, пов'язаним із винагородою, оскільки вищевказане дослідження показало відсутність надійного збільшення клітин Fos-ir hcrt / orx у тварин, що зазнали стимулу нового об'єкта. Ці автори також повідомляють про відсотки нейтронів hcrt / orx, що експресують базальні (15%), індуковані новизною (18%) та харчові кондиціонери (50%) Fos-ir, сумісні з тими, про які ми повідомляємо тут (12% базальних проти 40 % спричиненої копуляцією). Ці спостереження свідчать про те, що нейрони hcrt / orx активуються природними винагородами, такими як їжа та секс.

Описана тут естрогенна регуляція hcrt / orx надає додаткові докази можливого гіпокретинергічного контролю сексуальної поведінки чоловіків. Примітно, що зазначений тут часовий хід втрати hcrt / orx сумісний з класичними поведінковими даними, що показують, що сексуальна поведінка чоловіків займає тижні після кастрації, і, тим більше, що це E2 а не DHT, необхідний для відновлення поведінки (Hull et al., 2006). Без подальшого експерименту ми можемо лише спекулювати на механізмах, що лежать в основі постійної присутності hcrt / orx за відсутності E2. Найпростішим поясненням може бути те, що час затримки до зниження рівня hcrt / orx відображає затримку до легко кількісно вичерпаного виснаження у везикулярних сховищах передавача. Як обговорюється нижче, відсутність ER в нейтронах hcrt / orx говорить про регуляцію експресії hcrt / orx введеннями нейронів, що містять ці рецептори. Через синтез нейропептидів (Enyeart та ін., 1987), рухливість (Шакірянова та ін., 2005), і вивільнення - це залежні від діяльності явища (Фулоп та ін., 2005), будь-яка посткастрація зменшується збудливістю hcrt / orx нейрона (Smith et al., 2002) може негативно впливати на ці процеси, уповільнюючи кінетику вивільнення пептиду таким чином, що знижений рівень синтезу може не бути очевидним протягом деякого часу. За будь-яким механізмом, мабуть, ймовірно, що дія стероїду є першим елементом складного каскаду, відповідальним за підтримання базального рівня пептиду.

Так само, як, здається, нейрони hcrt / orx регулюють прийом їжі у відповідь на гуморальні фактори, пов'язані з енергетичним балансом (Olszewski et al., 2003; Бурдаков та ін., 2006), нейтрони hcrt / orx також виявляються чутливими до гормональної обстановки і можуть подібним чином полегшити репродуктивну поведінку. Дані, представлені тут, свідчать про те, що базальна експресія hcrt / orx підтримується E2. У гонадно-недоторканих тварин, які виражають повний доповнення ЧХТ / орків, цей передавач, мабуть, полегшить обробку в структурах, важливих для сексуальної поведінки чоловіка та винагороди. Нейрони hcrt / orx користуються значними взаємними зв'язками з такими ділянками, як mPOA, ядро ​​ліжка термінальної смуги (BNST) та VTA (Peyron et al., 1998; Sakurai et al., 2005), які, як відомо, важливі для вираження сексуальної поведінки чоловіків (огляд, див Hull et al., 2006). Зниження ЧХТ / орксу після кастрації, як очікується, зменшить важливе джерело збуджуючого вкладу в ці структури, тим самим погіршивши поведінку.

Спосіб, яким активація ER підтримує експресію базальної hcrt / orx, чекає додаткового дослідження; однак, ймовірно, це буде викликано аферентами з мозку, що експресують ERα, які проектуються на ЛГВ (Simerly et al., 1990; Йосіда та ін., 2006), особливо ті структури, які мають деякі збудливі проекції [наприклад, BNST і mPOA (Жорж та Астон-Джонс, 2002; Генні та Джонс, 2006)]. Ми не повідомляємо про колокалізацію AR з допомогою hcrt / orx, і, хоча кілька нейтронів hcrt / orx були ERα-імунопозитивними, ці клітини недостатньо численні, щоб пояснити помітні ефекти кастрації, і вони не реєструються з тими, хто бачив зменшити їх вміст hcrt / orx після кастрації (Фіг. 2A, 3). Ми також повідомляємо, що ядра ERα-ir та нейронів hcrt / orx часто зустрічаються, що збільшує можливість локальної регуляції активності нейроналів hcrt / orx та експресії генів сусідніми клітинами, що містять ERα. Важливість активності збуджуючого локального ланцюга цього типу описана в системі hcrt / orx (Li et al., 2002). Однак, поки необхідні анатомічні експерименти не виявляють збуджуючих синапсів, зроблених клітинами, що містять ERα, на нейронах hcrt / orx, гормонозалежну, аферентну експресію hcrt / orx не можна вважати. Hcrt вираз коливається щоденно (Taheri та ін., 2000), під час вагітності (Kanenishi та ін., 2004), і у відповідь на різні дієтичні маніпуляції (Cai та ін., 1999; Griffond та ін., 1999). Молекулярні механізми, що регулюють динаміку hcrt експресія не була охарактеризована, таким чином, простежується шлях від ядра до мембрани, і називати кандидатські сигнальні молекули, які можуть впливати на експресію hcrt / orx, у цей час важко.

Думка про те, що сигналізація hcrt / orx бере участь у посиленні поведінки, такої як секс, також підтримується даними, що показують порушення сексуальної поведінки після лікування OX1 антагоніст SB 334867 (Таблиця 2). У дозі, подібній до тих, що застосовуються для блокування відновленого стресом відновлення самоконтролю кокаїну (Boutrel et al., 2005), SB 334867 значно збільшив затримку інтромісії та зменшив кількість еякуляцій, що дозволяє припустити, що блокада передачі hcrt / orx може впливати на стимулюючі властивості чутливих жінок.

DA є важливим нейромедіатором для винагороди, стимулюючої мотивації та адаптаційної поведінки (Berridge і Robinson, 1998; Ikemoto та Panksepp, 1999; Мудрий, 2004). Ми спостерігали потужну дозозалежну збудливу дію hcrt / orx на активність нейрона VTA DA. Цей висновок підтримує роль hcrt / orx у підкріпленні та дозволяє припустити, що мезолімбічна система DA є місцем поза mPOA, в якому hcrt / orx проекції можуть діяти для посилення сексуальної поведінки чоловіків. При найнижчій випробуваній дозі (0.014 нмоль), hcrt / orx збільшував швидкість випалу, не впливаючи на активність популяції (клітини / трек) (Рис. 4C). При проміжному дозі (1.4 нмоль) активність популяції нейронів DA збільшувалася, що свідчить про активізацію раніше спокійних, гіперполяризованих нейронів (Рис. 4D). При найвищій дозі (140 нмоль) популяційна активність нейронів VTA DA знижувалася. Цікаво, що зниження активності популяції нейронів VTA DA, спричинене hcrt / orx, було відмінено гострим введенням агоніста DA-аморфіну (Рис. 4D). У нормальних тварин апоморфін гіперполяризує нейрони DA, активуючи авторецептори та знижуючи їх швидкість вистрілення та популяційну активність. Однак після хронічного антипсихотичного лікування або повторного лікування лікарськими засобами, що зловживають, апоморфін може змінити зниження активності населення, спричинене наркотиками (Grace et al., 1997; Шень і Чонг, 2006). Вважається, що апоморфін може змінити інактивацію деполяризації шляхом реполяризації перезбуджених клітин, достатніх для відновлення випалу. Ці дані разом указують на те, що hcrt / orx чинить збудливий ефект від дози на нейрони VTA DA, що відповідає попереднім пробірці робота (Korotkova et al., 2003).

Важливість спуску шляхів від ЛГА до ВТА ​​було досліджено в ряді експериментів (Bielajew і Shizgal, 1986; Shizgal, 1989; Ви та ін., 2001). Ці дані дозволяють припустити, що підвищення NAc DA під час гіпоталамічно опосередкованої мотивованої поведінки, як копуляція (Pfaus et al., 1990; Wenkstern et al., 1993) або годування (Hernandez і Hoebel, 1988; Rada et al., 2005) може покладатися на ці низхідні прогнози. Те, що такі прогнози містять hcrt / orx, підтверджується експериментами, в яких видно, що витік NAc DA збільшується після внутрішньо VTA введення hcrt / orx (Narita et al., 2006). У гіпоталамусі серотонін [5-гідрокситриптамін (5-HT)] може сильно гіперполярити hcrt / orx нейрони в LHA (Li et al., 2002). Селективні інгібітори зворотного захоплення серотоніну або сам 5-HT, зворотний діаліз у ЛГК поблизу основної популяції клітин, що експресують hcrt / orx, зменшує вивільнення базального та жіночого NAc DA та погіршує копуляцію (Lorrain et al., 1997, 1999). У світлі даних, представлених вище, що показують активацію hcrt / orx нейронів під час копуляції та нейронів VTA DA за допомогою hcrt / orx, ми стверджуємо, що низхідні прогнози hcrt / orx до VTA можуть опосередковувати статевий випуск NAc DA. Крім того, інгібування цих проекцій внутрішньо-LHA 5-HT може пояснити інгібуючу дію 5-HT на вивільнення NAc DA та сексуальну поведінку.

Анатомічний субстрат для взаємодії hcrt / orx-DA є очевидним у нашому висновку, що TH-позитивні VTA нейрони іннервуються системою hcrt / orx і демонструють підвищений Fos-ir із впливом нагороджуючих стимулів, як копуляція (Рис. 5, Таблиця 4). Цей ефект показав як поведінкову актуальність, так і просторову специфічність, оскільки індукція Fos у ТХ нейронах, накладених оксидом / оксидом, була виявлена ​​лише в передній VTA копулюючих тварин. Мабуть, не примітно, що ця модель активації виявляється в цій частині VTA, оскільки клітини DA там лежать просто каудально для основної популяції нейронів hcrt / orx, чиї низхідні волокна об’їжджають цю область, перш ніж розподілятись на більш дистальні цілі в стовбурі мозку (Peyron et al., 1998).

Малюнок 5. 

Копуляція індукує Fos-ir в нейронах VTA DA, призначених для оксиду / оксиду. A, Мікрофотографії, що показують TH, hcrt / orx та маркування Fos у VTA. Стрілки позначають фос-позитивні нейрони ТГ із призначенням hcrt / orx; зірочками позначають подвійні мітки нейронів без призначень. Шкала шкала, 45 мкм. B, Деталь нейронів, сприятливих до Fos, зі стрілками, що вказують місця бутонів hcrt / orx при призначенні. C, Корональні відрізки, що показують рострокаудальні рівні VTA, що використовуються при підрахунку (темні відтінки). Цифри в лівій верхній частині кожної секції розташовані в міліметрах від брегми. Числа вгорі праворуч - це середні ± SEM оцінки щільності клітин на цьому рівні. У полі вказується площа мікрофотографії в A.

Ці дані говорять про новий шлях, за яким стероїди гонад можуть впливати на гіпоталамічний вхід в системи DA, пов'язані з мотивованою поведінкою (Рис. 6). Вони також додають сексуальну поведінку до зростаючого списку поведінки, що регулюється hcrt / orx, включаючи збудження, поведінку при застосуванні та пошук наркотиків.

Малюнок 6. 

Модель регуляції hcrt / orx гонадальними стероїдами та VTA DA через hcrt / orx. Естрадіол, синтезований з гонадального тестостерону за допомогою ароматази, діє на містять ERα нейрони в BNST, mPOA та LHA. Ці структури проектуються на нейрони гіпоталамічного ЧХТ / орксу. Ексклюзивні прогнози цих структур можуть впливати на активність нейтрональних hcrt / orx та експресію генів стероїдно-чутливим чином. Проекції Hcrt / orx на VTA підсилюють активність нейронів середнього мозку під час сексуальної поведінки чоловіків. Цей ефект може бути заблокований внутрішньо-LHA-вливаннями 5-HT, які інгібують активність hcrt / orx, погіршуючи сексуальну поведінку та вивільнення NAc DA.

Виноски

  • Отримано квітня 21, 2006.
  • Редакція отримала січень 23, 2007.
  • Прийнято лютого 8, 2007.

  • Цю роботу підтримали Гранти Служби охорони здоров'я США MH073314 (JWM), MH40826 та MH01714 (EMH) та AA12435 (R.-YS). Ми дякуємо доктору Саміру Хадж-Дахману за корисну пораду та доктору Зуоксину Ван за оснащення мікроскопічного обладнання.

  • Листування має бути адресоване Джону Мушаму, кафедрі психології, Університету штату Флорида, Таллахассі, FL 32306-1270. [захищено електронною поштою]

посилання

  1. ↵
    1. Berridge KC,
    2. Робінсон Т.Е.

    (1998) Яка роль допаміну в нагороді: гедонічний вплив, нагорода навчання або стимулююче відзначення? Brain Res Brain Res Rev 28: 309-369.

  2. ↵
    1. Bielajew C,
    2. Шизгал П

    (1986) Докази, що передбачають низхідні волокна при самостимуляції медіального пучка переднього мозку. J Neurosci 6: 919-929.

  3. ↵
    1. Borgland SL,
    2. Taha SA,
    3. Сарті F,
    4. Поля HL,
    5. Bonci A

    (2006) Орексин А у ВТА має вирішальне значення для індукції синаптичної пластичності та сенсибілізації поведінки до кокаїну. Нейрон 49: 589-601.

  4. ↵
    1. Boutrel B,
    2. Kenny PJ,
    3. Specio SE,
    4. Martin-Fardon R,
    5. Markou A,
    6. Koob GF,
    7. de Lecea L

    (2005) Роль гіпокретину в опосередкуванні відновленого стресом відновлення поведінки, що шукає кокаїн. Proc Natl Acad Sci США 102: 19168-19173.

  5. ↵
    1. Бурдаков Д,
    2. Jensen LT,
    3. Алексопулос Н,
    4. Williams RH,
    5. Ферон І.М.,
    6. О'Келлі I,
    7. Герасименко О,
    8. Fugger L,
    9. Верхрацький А

    (2006) Тандемно-порові К + канали опосередковують пригнічення нейронів орексину глюкозою. Нейрон 50: 711-722.

  6. ↵
    1. Caggiula AR,
    2. Hoebel BG

    (1966) "Місце зцілення-винагороди" в задньому гіпоталамусі. наука 153: 1284-1285.

  7. ↵
    1. Цай XJ,
    2. Widdowson PS,
    3. Харрольд Дж.
    4. Wilson S,
    5. Букінгемський РЕ,
    6. Arch JR,
    7. Тадайон М,
    8. Clapham JC,
    9. Wilding J,
    10. Вільямс G

    (1999) Експресія гіпоталамічного орексину: модуляція глюкозою в крові та годування. Діабет 48: 2132-2137.

  8. ↵
    1. Клівленд DW,
    2. Фішер С.Г.,
    3. Кіршнер МВт,
    4. Леммлі, Великобританія

    (1977) Картографування пептидів обмеженим протеолізом у додецилсульфаті натрію та аналіз гель-електрофорезом. J Biol Chem 252: 1102-1106.

  9. ↵
    1. de Lecea L,
    2. Kilduff TS,
    3. Пейрон С,
    4. Гао Х,
    5. Foye PE,
    6. Даніельсон ПЕ,
    7. Фукухара С,
    8. Баттенберг Е.Л.,
    9. Гаутвік В.Т.,
    10. Bartlett FS II.,
    11. Frankel WN,
    12. ван ден Пол А.Н.,
    13. Bloom FE,
    14. Gautvik KM,
    15. Саткліфф Дж

    (1998) Гіпокретини: специфічні для гіпоталамусу пептиди з нейроекцитируючою активністю. Proc Natl Acad Sci США 95: 322-327.

  10. ↵
    1. DiLeone RJ,
    2. Georgescu D,
    3. Nestler EJ

    (2003) Бічні нейропептиди гіпоталамусу в нагороду та наркоманію. Life Sci 73: 759-768.

  11. ↵
    1. Enyeart JJ,
    2. Sheu SS,
    3. Hinkle PM

    (1987) Дигідропіридинові модулятори чутливих до напруги каналів Ca2 + спеціально регулюють вироблення пролактину клітинами пухлини гіпофіза GH4C1. J Biol Chem 262: 3154-3159.

  12. ↵
    1. Еспана Р.А.,
    2. Валентино RJ,
    3. Берридж CW

    (2003) Фомусна імунореактивність у нейронах, що експресують гіпокретин та нейрони, що експресують гіпокретин-1: наслідки спонтанного пробудження добових та нічних, стресу та введення гіпокретину-1. Неврологія 121: 201-217.

  13. ↵
    1. Фадель J,
    2. Deutch AY

    (2002) Анатомічні субстрати взаємодії орексин-дофамін: бічні гіпоталамічні проекції на тегментальну область вентрала. Неврологія 111: 379-387.

  14. ↵
    1. Фулоп Т,
    2. Radabaugh S,
    3. Сміт С

    (2005) Залежний від активності диференціальний вивільнення передавача в клітинах хромафіну надниркових залоз миші. J Neurosci 25: 7324-7332.

  15. ↵
    1. Фултон S,
    2. Woodside B,
    3. Шизгал П

    (2000) Модуляція схеми нагородження мозку лептином. наука 287: 125-128.

  16. ↵
    1. Жорж Ф,
    2. Aston-Jones G

    (2002) Активація клітин вентральної ділянки тегментарної зони ядром шару термінальної смуги: новий вхід збуджувальної амінокислоти до нейронів середнього мозку дофаміну. J Neurosci 22: 5173-5187.

  17. ↵
    1. Грейс А.А.
    2. Bunney BS

    (1983) Внутрішньоклітинна і позаклітинна електрофізіологія нігральних дофамінергічних нейронів. 1. Ідентифікація та характеристика. Неврологія 10: 301-315.

  18. ↵
    1. Грейс А.А.
    2. Bunney BS,
    3. Мур Н,
    4. Todd CL

    (1997) Блок деполяризації дофамінових клітин як модель терапевтичної дії антипсихотичних препаратів. Тенденції Neurosci 20: 31-37.

  19. ↵
    1. Гріффонд Б,
    2. Risold PY,
    3. Жакемард С,
    4. Colard C,
    5. Fellmann D

    (1999) Гіпоглікемія, викликана інсуліном, збільшує мРНК препрогіпокретину (орексину) у бічній гіпоталамічній зоні щурів. Neurosci Lett 262: 77-80.

  20. ↵
    1. Гулія К.К.,
    2. Mallick HN,
    3. Кумар В.М.

    (2003) Застосування орексину А (гіпокретин-1) у медіальній преоптичній зоні потенціює сексуальну поведінку чоловіків у щурів. Неврологія 116: 921-923.

  21. ↵
    1. Harris GC,
    2. Aston-Jones G

    (2006) Побудження та винагорода: дихотомія функції орексину. Тенденції Neurosci 29: 571-577.

  22. ↵
    1. Harris GC,
    2. Wimmer M,
    3. Aston-Jones G

    (2005) Роль латеральних нейронів гіпоталамусу орексину у пошуку винагород. природа 437: 556-559.

  23. ↵
    1. Генні П,
    2. Джонс БЕ

    (2006) Інервація нейронів орексину / гіпокретину за допомогою GABAergic, глутаматергічних або холінергічних базальних терміналів переднього мозку, що підтверджується імуностасуванням для пресинаптичного везикулярного транспортера та постсинаптичних білків скеля. J Comp Neurol 499: 645-661.

  24. ↵
    1. Ернандес L,
    2. Hoebel BG

    (1988) Винагорода за їжу та кокаїн збільшують позаклітинний дофамін у ядрах, що вимірюється мікродіалізом. Life Sci 42: 1705-1712.

  25. ↵
    1. Hoebel BG

    (1969) Годування та самостимуляція. Енн Нью-Йорк Acad Sci 157: 758-778.

  26. ↵
    1. Корпус EM,
    2. Дерево RI,
    3. Маккенна КЕ

    (2006) в Knobil and Neill's fiziology of reproduction, Neurobiology of Муж сексуальної поведінки, ed Neill JD (Elsevier, New York), Ed 3, pp. 1729–1824.

  27. ↵
    1. Ikemoto S,
    2. Panksepp J

    (1999) Роль ядра прив'язує дофамін у мотивованій поведінці: об'єднавча інтерпретація з особливим посиланням на прагнення нагороди. Brain Res Brain Res Rev 31: 6-41.

  28. ↵
    1. Каненіші К,
    2. Уено М,
    3. Момозе S,
    4. Кувабара Н,
    5. Танака Н,
    6. Сато С,
    7. Кобаяші Т,
    8. Хіно О,
    9. Сакамото Н,
    10. Хата Т

    (2004) Експресія мРНК препро-орексину в мозку щурів збільшується під час вагітності. Neurosci Lett 368: 73-77.

  29. ↵
    1. Короткова Т.М.,
    2. Сергєєва О.А.,
    3. Ерікссон К.С.
    4. Хаас HL,
    5. Коричневий РЕ

    (2003) Збудження дофамінергічних та недопамінергічних нейронів вентральної області орексинами / гіпокретинами. J Neurosci 23: 7-11.

  30. ↵
    1. Коц СМ

    (2006) Інтеграція годування та спонтанних фізичних навантажень: роль орексину. Фізіол Беав 88: 294-301.

  31. ↵
    1. Li Y,
    2. Gao XB,
    3. Сакурай Т,
    4. ван ден Пол А.Н.

    (2002) Гіпокретин / орексин збуджує нейрони гіпокретину через локальний глутаматний нейрон - потенційний механізм оркестрування гіпоталамічної системи збудження. Нейрон 36: 1169-1181.

  32. ↵
    1. Lorrain DS,
    2. Матушевич Л,
    3. Фрідман Р.Д.,
    4. Халл Е.М.

    (1997) Позаклітинний серотонін в бічній гіпоталамічній області збільшується під час постіакуляторного інтервалу і погіршує копуляцію у самців щурів. J Neurosci 17: 9361-9366.

  33. ↵
    1. Lorrain DS,
    2. Ріоло СП,
    3. Матушевич Л,
    4. Халл Е.М.

    (1999) Бічний гіпоталамічний серотонін гальмує допамін ядерних ліг: наслідки для сексуальної ситості. J Neurosci 19: 7648-7652.

  34. ↵
    1. Мілейковський Б.Ю.,
    2. Кіященко Л.І.,
    3. Siegel JM

    (2005) Поведінкові кореляти активності в виявлених нейронах гіпокретин / орексин. Нейрон 46: 787-798.

  35. ↵
    1. Мочізукі Т,
    2. Крокер А,
    3. McCormack S,
    4. Янагісава М,
    5. Сакурай Т,
    6. Scammell TE

    (2004) Нестабільність поведінки у мишей, що вибивають орексин. J Neurosci 24: 6291-6300.

  36. ↵
    1. Морган JI,
    2. Curran T

    (1991) Стимулююче-транскрипційне сполучення в нервовій системі: залучення індуцибельних прото-онкогенів fos та jun. Annu Rev Neurosci 14: 421-451.

  37. ↵
    1. Nakamura T,
    2. Урамура К,
    3. Намбу Т,
    4. Яда Т,
    5. Goto K,
    6. Янагісава М,
    7. Sakurai T

    (2000) Гіперлокомоція та стереотипія, викликані орексином, опосередковуються дофамінергічною системою. Brain Res 873: 181-187.

  38. ↵
    1. Намбу Т,
    2. Сакурай Т,
    3. Мізукамі К,
    4. Hosoya Y,
    5. Янагісава М,
    6. Goto K

    (1999) Розподіл орексинових нейронів у мозку дорослої щури. Brain Res 827: 243-260.

  39. ↵
    1. Наріта М,
    2. Нагумо Y,
    3. Хашимото S,
    4. Хотіб Дж.
    5. Міятаке М,
    6. Сакурай Т,
    7. Янагісава М,
    8. Nakamachi T,
    9. Shioda S,
    10. Suzuki T

    (2006) Пряме залучення орексинергічних систем в активацію мезолімбічного дофамінового шляху та пов'язані з ними поведінки, індуковані морфіном. J Neurosci 26: 398-405.

  40. ↵
    1. Ольшевський П.К.,
    2. Лі Д,
    3. Грейс МК,
    4. Біллінгтон CJ,
    5. Коц CM,
    6. Левін А.С.

    (2003) Нейронна основа орексигенних ефектів греліну, що діє в латеральному гіпоталамусі. Пептиди 24: 597-602.

  41. ↵
    1. Орсіні JC,
    2. Журдан F,
    3. Cooper HM,
    4. Monmaur P

    (1985) Вплив жіночих запахів на бічний гіпоталамус у щура-самця. Напівкількісний аналіз на дезоксиглюкозу. Фізіол Беав 35: 509-516.

  42. ↵
    1. Paxinos G,
    2. Watson C

    (1998) Мозок щурів у стереотаксичних координатах (Академік, Нью-Йорк), Ед 4.

  43. ↵
    1. Пейрон С,
    2. Tighe DK,
    3. ван ден Пол А.Н.,
    4. de Lecea L,
    5. Heller HC,
    6. Саткліфф Ж.Г.,
    7. Kilduff TS

    (1998) Нейрони, що містять гіпокретин (орексин), направляються на кілька нейронних систем. J Neurosci 18: 9996-10015.

  44. ↵
    1. Pfaus JG,
    2. Damsma G,
    3. Nomikos GG,
    4. Wenkstern DG,
    5. CD Blaha,
    6. Phillips AG,
    7. Fibiger HC

    (1990) Статева поведінка посилює центральну передачу допаміну у самців щура. Brain Res 530: 345-348.

  45. ↵
    1. Putnam SK,
    2. Сато S,
    3. Ріоло СП,
    4. Халл Е.М.

    (2005) Вплив метаболітів тестостерону на копуляцію, медіальний преоптичний дофамін та NOS-імунореактивність у кастрованих щурів-самців. Horm Behav 47: 513-522.

  46. ↵
    1. Рада П,
    2. Avena NM,
    3. Hoebel BG

    (2005) Щоденне запоювання цукру багаторазово вивільняє дофамін в оболонці прихильників. Неврологія 134: 737-744.

  47. ↵
    1. Rolls ET,
    2. Бертон, Дж. Дж.
    3. Мора F

    (1980) Нейрофізіологічний аналіз винагороди за стимуляцію мозку у мавпи. Brain Res 194: 339-357.

  48. ↵
    1. Сакурай Т,
    2. Амемія А,
    3. Ішіі М,
    4. Мацузакі I,
    5. Chemelli RM,
    6. Танака Н,
    7. Williams SC,
    8. Річардсон JA,
    9. Козловський Г.П.,
    10. Wilson S,
    11. Arch JR,
    12. Букінгемський РЕ,
    13. Haynes AC,
    14. Карр С.А.,
    15. Анан Р.С.,
    16. McNulty DE,
    17. Лю WS,
    18. Terrett JA,
    19. Ельшурбаджі Н.А.,
    20. Bergsma DJ,
    21. та інші

    (1998) Орексини та орексинові рецептори: сімейство гіпоталамічних нейропептидів та рецепторів, пов'язаних з білком G, які регулюють поведінку годування. Осередок 92: 573-585.

  49. ↵
    1. Сакурай Т,
    2. Нагата Р,
    3. Яманака А,
    4. Кавамура Н,
    5. Цухіно Н,
    6. Муракі Y,
    7. Kageyama H,
    8. Куніта S,
    9. Такахасі S,
    10. Goto K,
    11. Кояма Y,
    12. Shioda S,
    13. Янагісава М

    (2005) Введення нейронів орексин / гіпокретин, виявлених генетично кодованим трассером у мишей. Нейрон 46: 297-308.

  50. ↵
    1. Saper CB,
    2. Scammell TE,
    3. Lu J

    (2005) Гіпоталамічна регуляція сну та циркадних ритмів. природа 437: 1257-1263.

  51. ↵
    1. Сато S,
    2. Braham CS,
    3. Putnam SK,
    4. Халл Е.М.

    (2005) Нейронна синтаза оксиду азоту та гонадальна стероїдна взаємодія в MPOA самців щурів: ко-локалізація та відновлення тестостерону відновлення копуляції та nNOS-імунореактивності. Brain Res 1043: 205-213.

  52. ↵
    1. Шакірянова Д,
    2. Туллі А,
    3. Hewes RS,
    4. Deitcher DL,
    5. Левітан Е.С.

    (2005) Вивільнення, залежне від активності синаптичних нейропептидних везикул. Nat Neurosci 8: 173-178.

  53. ↵
    1. Шень RY,
    2. Чонг KC

    (2006) Різні адаптації дофамінових нейронів вентральної тегментальної ділянки в контрольних та етанолових щурах після лікування метилфенідатом. Біол Психіатрія 59: 635-642.

  54. ↵
    1. Шизгал П

    (1989) Назустріч клітинному аналізу внутрішньочерепного самостимуляції: внесок досліджень зіткнення. Neurosci Biobehav Rev 13: 81-90.

  55. ↵
    1. Siegel JM

    (2004) Гіпокретин (орексин): роль у нормальній поведінці та невропатології. Annu Rev Psychol 55: 125-148.

  56. ↵
    1. Simerly RB,
    2. Чанг С,
    3. Мурамацу М,
    4. Swanson LW

    (1990) Розподіл клітин, що містять мРНК, що містять андроген та естроген, в мозку щурів: дослідження in situ гібридизації. J Comp Neurol 294: 76-95.

  57. ↵
    1. Сміт МД,
    2. Джонс Л.С.,
    3. Вілсон МА

    (2002) Статеві відмінності в збудливості шматочків гіпокампа: роль тестостерону. Неврологія 109: 517-530.

  58. ↵
    1. Саткліфф Ж.Г.,
    2. de Lecea L

    (2002) Гіпокретини: встановлення порогу збудження. Nat Rev Neurosci 3: 339-349.

  59. ↵
    1. Swanson LW

    (2004) Мозкові карти III: структура мозку щурів (Ельзев'є, Нью-Йорк), Ед 3.

  60. ↵
    1. Swanson LW,
    2. Санчес-Ватт G,
    3. Watts AG

    (2005) Порівняння моделей експресії мРНК-концентрації меланіну та мРНК гіпокретину / орексину в новій схемі посилення бічної гіпоталамічної зони. Neurosci Lett 387: 80-84.

  61. ↵
    1. Taheri S,
    2. Sunter D,
    3. Дакін С,
    4. Moyes S,
    5. Печатка L,
    6. Гардінер J,
    7. Россі М,
    8. Ghatei M,
    9. Блум S

    (2000) Добові коливання імунореактивності орексину А та мРНК препроререксину в центральній нервовій системі щурів. Neurosci Lett 279: 109-112.

  62. ↵
    1. Торп AJ,
    2. Cleary JP,
    3. Левін А.С.,
    4. Коц СМ

    (2005) Центрально введений орексин А підвищує мотивацію солодких гранул у щурів. Психофармакологія (Берл) 182: 75-83.

  63. ↵
    1. Вуган Е,
    2. Фішер А.Є.

    (1962) Статева поведінка чоловіків, викликана внутрішньочерепною електричною стимуляцією. наука 137: 758-760.

  64. ↵
    1. Wenkstern D,
    2. Pfaus JG,
    3. Fibiger HC

    (1993) Передача дофаміну збільшується в ядрах щурів-самців щурів під час їх першого впливу на статево сприйнятливих щурів-жінок. Brain Res 618: 41-46.

  65. ↵
    1. Мудрий РА

    (2004) Дофамін, навчання та мотивація. Nat Rev Neurosci 5: 483-494.

  66. ↵
    1. Йосіда К,
    2. McCormack S,
    3. Еспана Р.А.,
    4. Крокер А,
    5. Scammell TE

    (2006) Відносини до орексинових нейронів мозку щурів. J Comp Neurol 494: 845-861.

  67. ↵
    1. Ви, ZB,
    2. Чень YQ,
    3. Мудрий РА

    (2001) Вивільнення дофаміну та глутамату в прилеглих ядрах та вентральній тегментальній області щурів після бічного гіпоталамічного самостимуляції. Неврологія 107: 629-639.

Статті з посиланням на цю статтю

  • Повне зменшення синдрому рефрактерного первинного SUNCT з кломіфен цитратом (лікарський гіпоталамічний модулятор глибокого мозку) Цефалгія, 1 жовтня 2014, 34 (12): 1021-1024
  • Гіпокретин (орексин) полегшує винагороду за рахунок ослаблення протизахисних ефектів його котрансміттера динорфіну в вентральній тегментальній області PNAS, 22 квітня 2014, 111 (16): E1648-E1655
  • Орексин / Гіпокретин модулює реакцію вентральних тегментальних дофамінових нейронів на префронтальну активацію: добові впливи Журнал неврології, 17 листопад 2010, 30 (46): 15585-15599
  • Orexin A / Hypocretin-1 селективно сприяє мотивації позитивних силових арматур Журнал неврології, 9 вересня 2009, 29 (36): 11215-11225
  • Каркаси кінази, стимульовані орексином, активуються через безліч G-білкових сигнальних шляхів в адренокортикальних клітинах H295R людини: різноманітні ролі для орексинів A і B Журнал ендокринології, 1 серпня 2009, 202 (2): 249-261