Orexin опосередковує ініціювання сексуальної поведінки у самих щурів, які не є сексуальними, але не є критичним для сексуальної діяльності (2011)

Horm Behav. Авторський рукопис; доступний у PMC 2011 Aug 1.

Опубліковано в остаточному форматі:

PMCID: PMC2917508

Остаточна редагована версія цієї статті видавця доступна за адресою Horm Behav

Див. Інші статті у PMC cite опублікованої статті.

Перейти до:

абстрактний

Гіпоталамусний нейропептид орексин опосередковує збудження, сон і природно корисну поведінку, включаючи прийом їжі. Сексуальна поведінка чоловіків змінюється агоністами або антагоністами рецептора орексину-1, що свідчить про роль орексин-А в природно корисному поведінці. Однак специфічна роль ендогенного орексину-А або В у різних елементах чоловічої сексуальної поведінки в даний час неясна. Таким чином, нинішні дослідження використовували маркери для нейронної активації і орексинових клітинно-специфічних уражень для перевірки гіпотези, що орексин є критичним для сексуальної мотивації і продуктивності у самців щурів. По-перше, експресія cFos в нейронах орексину була продемонстрована після представлення рецептивної або не рецептивної жінки без подальшої активації різними елементами спарювання. Далі, функціональна роль орексину була протестована з використанням орексин-В кон'югованого сапоріну, що призводило до ураження клітин орексину в гіпоталамусі. Поразки були проведені у чоловіків, які не піддавалися сексуальному вжитку, а подальша сексуальна поведінка була зареєстрована під час чотирьох досліджень спарювання. Чоловіки, які страждають поразкою, показали скорочені затримки для монтування та інтромітія під час перших, але не наступних досліджень спарювання, що свідчить про те, що ураження полегшують ініціювання сексуальної поведінки у чоловіків, які не мали сексуального нагляду, але не були досвідченими. Аналогічно, ураження не впливали на сексуальну мотивацію у досвідчених чоловіків, що визначаються тестами на ЗПС. Нарешті, випробування на підвищеній лабіринті показали зниження тривожної поведінки у чоловіків, які страждають ураженням, що підтверджує роль орексину в тривожності, пов'язаній з первинним впливом на жінок у наївних тварин. В цілому, ці результати показують, що орексин не є критичним для чоловічої статевої діяльності або мотивації, але може відігравати певну роль у збудженні та тривожності, пов'язаних з сексуальною поведінкою у наївних тварин.

Ключові слова: орексин, гіпокретин, сексуальна поведінка, копуляція, нервова активація, мотивація, гіпоталамус, новизна, збудження, тривога

Вступ

Орексин, також відомий як гіпокретин, є нейропептидом гіпоталамуса, критичним для харчової поведінки (de Lecea et al., 1998; Sakurai et al; 1998, Sakurai, 2006; Benoit et al., 2008) збудження і сон (Chemelli et al., 1999; Lin et al., 1999, Sakurai, 2007; Furlong і Carrive, 2007; Furlong et al., 2009; Carter et al., 2009). Нейрони орексину локалізовані в бічній зоні гіпоталамуса (LHA) і перифорнічному дорсомедіальному гіпоталамусі (PFA-DMH) і продукують два нейропептиди, орексин-А і В (de Lecea et al., 1998; Sakurai et al., 1998). Показано, що нейрони Orexin проектують на структури мозку, що беруть участь у посередництві збудження, включаючи локус coeruleus, ядро ​​tuberomammillary і peduculopontine tegmental nucleus (Peyron et al., 1998; Hagan et al., 1999; Horvath et al., 1999; Baldo et al., 2003). Орексин також був залучений до винагороди та мотивації, зокрема, пов'язаної з харчовими продуктами та наркотичними засобами (Aston-Jones et al., 2009a; Aston-Jones et al., 2009b) і нейронів орексину було показано, що вони спрямовані на винагороду, пов'язані з структурами мозку в мезолімбічної системі, включаючи вентральну область (VTA) і nucleus accumbens (NAc) (Peyron et al., 1998; Fadel і Deutch, 2002; Martin et al., 2002; Baldo et al., 2003). Нейрони орексину активуються обумовленими контекстуальними ознаками, пов'язаними з винагородою за їжу та ліки (Harris et al., 2005; de Lecea et al., 2006; Choi et al., 2010) і показали, що вони відіграють певну роль у поведінці, яка базується на винагороді (Choi et al., 2010). Більш того, інтрацеребровентрикулярний (ICV) або внутрішньоочеревинний прийом антагоніста орексинового рецептора 1 (ORX1) призводить до зниження мотивації до смакової їжі (Thorpe et al., 2005; Nair et al., 2008), тоді як прийом ICV орексин-А може відновити цю мотивацію (Boutrel et al., 2005).

Роль орексину в інших корисних поведінках в даний час незрозуміла, хоча деякі дослідження вказували на роль орексину в контролі за сексуальною поведінкою у самців щурів. Раніше було показано, що нейрони орексину активуються шляхом копуляції у самців щурів (Muschamp et al., 2007). Крім того, введення орексину-А в медіальну преоптичну ділянку (mPOA) призвело до посилення сексуальної активності, про що свідчать скорочення затримки для монтування та інтроміті, а також збільшення частоти гомосексуалістів та інтромісії.Gulia et al., 2003). На противагу цьому, введення ICV орексин-А послаблює сексуальну мотивацію шляхом зменшення жіночих переваг, хоча тільки у чоловіків з високою сексуальною активністю (Bai et al., 2009). Дослідження, що використовують антагоністи ORX1, також продемонстрували суперечливі дані, оскільки системне введення антагоніста ORX1 мало погіршувало сексуальну активність, збільшуючи латентність до інтроміту, не впливаючи на інші параметри сексуальної поведінки (Muschamp et al., 2007), в той час як ICV введення антагоніста ORX1 не впливало на сексуальну мотивацію (Bai et al., 2009). Разом ці дослідження свідчать про те, що введення екзогенного орексину-А впливає на сексуальну діяльність і мотивацію; проте ендогенний орексин може не відігравати важливу роль у опосередкуванні сексуальної поведінки (Bai et al., 2009). Тому метою даного дослідження було визначити, чи є ендогенний орексин істотним для сексуальної мотивації та продуктивності самців щурів.

По-перше, було визначено, коли при сексуальній поведінці активуються нейрони орексину, перевіряючи гіпотезу, що нейрони орексину активуються при введенні стимулюючого стимулу. Більш того, як було показано, що сексуальний досвід впливає на сексуальну діяльність (Дьюсбері, 1969) і корисні властивості сексуальної поведінки (Tenk et al., 2009), було визначено, чи впливає сексуальний досвід на активацію нейрону орексину під час спарювання. Нарешті, було перевірено, чи орексин відіграє важливу роль у сексуальній мотивації та ефективності, використовуючи специфічні ураження клітин орексину.

Матеріали та методи

Дорослі щури Sprague Dawley (200 – 250g) отримували з Harlan (Indianapolis, IN) або Charles River Laboratories (Шербрук, Квебек, Канада) і розміщували індивідуально або парами в залежності від індивідуального експерименту (див. Нижче) в клітинах з оргскла. Колоніальний зал підтримувався циклом 12 / 12, що перевертав світло-темряву (у 10 ранку світло вимикається), а їжа та вода були доступні ad libitum окрім під час поведінкового тестування. Самки щурів Sprague-Dawley отримували з Harlan (Indianapolis, IN) або Charles River Laboratories (Шербрук, Квебек, Канада) двосторонньо овариэктомировали і імплантували підшкірно синтастичні капсули 5% 17-β-естрадіолу бензоату. Статеву сприйнятливість індукували підшкірними ін'єкціями прогестерону (500 мкг в 0.1ml кунжутної олії) приблизно 4 год до сеансів спарювання. Всі процедури були схвалені Комітетами з догляду за тваринами в Університеті Цинциннаті та Університету Західного Онтаріо і відповідали вимогам Національного інституту охорони здоров'я та Канадської ради з догляду за тваринами. Всі поведінкові випробування проводилися протягом першої половини темної фази при затемненому червоному освітленні, за винятком випадків, коли зазначено інше.

Експериментальний дизайн

cFos дослідження експресії

Самців щурів (n = 48) розміщували індивідуально, і половина тварин отримували сексуальний досвід у домашній клітці під час сеансів спаровування, що складаються двічі на тиждень. В домашніх клітинах проводили тести на згортання, щоб усунути вираз збудження і cFos, індукований впливом іншої арені спаровування і впливу кондиційних сигналів, пов'язаних з попереднім спарюванням (Balfour et al., 2004). У домашню клітку вводили сприйнятливу жінку, а самцям дозволяли спаровуватися до однієї еякуляції або протягом 60 хвилин. Під час кожного випробування спостерігалася сексуальна поведінка. Зафіксовано загальну кількість монтувань та інтромісій, а також затримки до першого згортання та інтромісії (час від подачі сприйнятливої ​​жінки до першого монтування або інтромісії), а також еякуляція (час від першого вторгнення до еякуляції). (Agmo, 1997). Решта половини тварин залишалися сексуальними наївними. Ці тварини були розміщені в одній кімнаті з чоловіками, що мають досвід сексу, були оброблені і піддавалися впливу запахів і звуків, пов'язаних з спарюванням, однак не спарювалися. Наївні та досвідчені тварини були кожні додатково поділені на експериментальні групи 6 (n = 4 на групу). Наївні та досвідчені групи 6 включали: Контроль чоловіків без впливу сексуальної поведінки (Home Cage); чоловіки піддавалися сприйнятливості до жінки, що не сприймається в домашній клітці, протягом ХНУМХ хвилин (Anestrous Female). Чоловіки могли досліджувати і взаємодіяти, однак не спарювались через відсутність жіночої сприйнятливості; чоловіки піддавалися запахам сприйнятливої ​​жінки, поміщеної в коробку з сіткою на верхній частині домашньої клітини протягом 15 хвилин (Estrous Female); самці, які демонстрували гору, але не втручали або еякуляції з вагінально замаскованими жінками (гора); чоловіки, які відображали тільки монтування та інтромісію (Intromission); і самців, які спаровувалися до однієї еякуляції (еякуляція). Через годину після закінчення випробування самці забивали для аналізу експресії cFos. Статево досвідчені групи були підібрані за параметрами сексуальної поведінки і не було істотних відмінностей між групами до остаточного тесту. Більше того, не було значущих відмінностей між наївними і досвідченими групами в кількості горів і втручань під час остаточного тесту.

Перфузії: cFos вираз

Всі самці були глибоко анестезовані пентобарбітолом натрію (270 мг / мл) і були перфардовані транскардиально з 4% параформальдегідом (500 mL; PFA). Наступні перфузійні мізки видаляли негайно і після фіксували протягом однієї години в тому ж фіксаторі, потім переносили на 20% розчин сахарози для кріопротекції. Мозок розділяли на заморожуючий мікротом (Microm, Walldorf, Німеччина) у корональних зрізах 35 мкм і збирали в паралельних секціях 4 в розчині кріопротектора (30% сахарози в 0.1 M PB, що містить 30% етиленгліколю і 0.01% азиду натрію) і зберігали при -20 ° C до подальшої обробки.

Імуногістохімія

Всі інкубації проводили при кімнатній температурі з легким перемішуванням. Вільно плаваючі ділянки промивалися широко 0.1M сольовим забуференним фосфатом натрію (PBS). Розділи блокували за допомогою 1% H2O2 (30% основний розчин) в PBS протягом 10 хвилин, потім екстенсивно знову промивають PBS. Зрізи інкубували з інкубаційним розчином (PBS, що містить 0.1% бичачого сироваткового альбуміну і 0.4% Triton X-100) протягом 1 год. Первинні інкубації антитіл виконували в інкубаційному розчині протягом ночі при кімнатній температурі. Наступні ділянки фарбування промивали у PBS, встановлювали на скляні скляні слайди і покривали дибутилфталат ксилолом (DPX).

cFos / Orexin

Одна серія зрізів була иммунопроцессирована для cFos і orexin. Зрізи інкубували протягом ночі з піднятим антитілом кролика, що розпізнає cFos (кролячі анти-cFos, sc-52; 1: 10, Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA), за якими інкубували 000 години з биотинилированним козячим анти-кроликом (1: 1 , Vector Laboratories, Burlingame, CA) і авидиновий комплекс пероксидази хрону (500: 1, комплект ABC, Vector Laboratories, Burlingame, CA). Зрізи інкубували протягом 1000 хвилин в 10% диаминобензидина (DAB) (Sigma, St. Louis, MO) в фосфатному буфері 0.02M (PB), що містить 0.1% перекису водню і 0.012% сульфату нікелю, в результаті чого утворюється синьо-чорний продукт реакції. Потім зрізи інкубували протягом ночі з антитілом, піднятим кроликом, що розпізнає орексин-А (кролячий анти-орексин-А, Н-0.08-003; 30: 1 20, Phoenix Pharmaceuticals, Burlingame, CA), після чого інкубували 000 год. -рабіт і ABC, як описано вище. Нарешті, зрізи інкубували протягом 1 хвилин з 10% DAB в 0.02M PB, що містить 0.1% пероксиду водню, в результаті чого утворюється рудувато-коричневий продукт реакції.

Всі антитіла були охарактеризовані раніше (Chen et al., 1999; Satoh et al., 2004; Solomon et al., 2007). Імуногістохімічні контролі включали опущення первинних антитіл, вестерн-блот-аналіз, що демонструє одиничні смуги при відповідному вазі (cFos), і втрату імуногістохімічного сигналу орексину з ураженнями орексином В-сапоріном (орексин).

Аналіз даних

cFos / Orexin

Неврони, мічені орексином або орексином і cFos, підраховували двосторонньо в трьох репрезентативних відділах на одну тварину, для яких було відомо, що містять максимальну кількість нейронів орексину (Sakurai et al., 1998) spanning-2.3 мм до -3.6 мм від брегми (Паксинос і Уотсон, 1998) (малюнок 1), з використанням трубки для малювання, прикріпленої до мікроскопа Leica (Leica Microsystems; Wetzlar Germany), шляхом спостереження засліплених для експериментальних груп. PFA-DMH і LHA були визначені на основі розташування сідниці (Малюнок 1a). Відсотки нейронів орексину, що експресують cFos, обчислювали і усереднювали на кожну півкулю для кожної тварини, і обчислювали групові засоби. Статистичну значущість між групами визначали за допомогою двостороннього ANOVA з сексуальним досвідом і сексуальною поведінкою під час остаточного тестування як факторів, за якими слідували LSD-тести Фішера з довірчим рівнем 95%.

малюнок 1 

Розташування орексинових нейронів в гіпоталамусі. (А) Анатомічне розташування нейронів орексину в гіпоталамусі. (Паксинос і Уотсон, 1998), Масштабна шкала: 200 µm. (B) Одиночні мічені нейрони орексина в PFA-DMH у незв'язаному контрольній тварині. (С) орексин ...

Дослідження ураження орексином

Хірургія

Чоловіки розміщувалися індивідуально і отримували один сеанс попереднього тестування зі сприйнятливою жінкою до поразки і фіктивного хірургічного втручання. Статеву поведінку реєстрували, як описано вище, і групи підбирали на основі параметрів поведінки спарювання. Самців щурів анестезировали ізофлураном (Abbot Laboratories, St. Laurent, Quebec, Canada), використовуючи газовий апарат Surgivet Isotec4 (Smiths Medical Vet Division, Markham, Ontario, Canada) і поміщали в стереотаксичний апарат (Kopf Instruments, Tujunga, CA) з протигазом, що покриває ніс і рот для підтримки анестезії. Здійснювали розріз, щоб виявити череп, знайдено і визначено, що лямбда і брегма рівні. У черепі просвердлили отвір, використовуючи дремель (Dremel, Racine, WI) і скляні мікропіпетки (діаметр 40µm, World Precision Instruments Inc, Сарасота, Флоріда), заповнені міченим токсином orexin-B saporin (IT-20, Advanced Системи націлювання, Сан-Дієго, Каліфорнія, 200ng / мкл у PBS); або некон'югований токсин BLANK-сапорін (IT-21, Advanced Targeting Systems, Сан-Дієго, Каліфорнія; 200ng / мкл в PBS; шамовий контроль) опускали в гіпоталамус. Показано, що цей цільовий токсин зв'язується з високою аффинностью до клітин, що експресують рецептор орексину 2 (ORX2) і з значно меншою аффинностью до клітин, що експресують ORX1 (Gerashchenko et al., 2001), і, як було показано, спеціально аблятують нейрони орексину в гіпоталамусі (Frederick-Duus et al., 2007). Двосторонні інфузії 1 мкл (2 на півкулі) вводили за наступними координатами: AP = −2.8 і −3.2; ML = 0.7 і 0.8; DV = −9.0 (Паксинос і Уотсон, 1998). Після кожної інфузії голка залишалася на місці протягом 3 хвилин, щоб забезпечити дифузію. Голки повільно видаляли і рани закривали рановими затискачами. Через два тижні після операції ураження всі чоловіки тестувалися на сексуальний досвід під час чотирьох досліджень спаровування і потім піддавались ЗПС та / або підвищеному тесту на лабіринт (див. Нижче). Операції виконувалися в трьох різних когортах, розділених на кілька тижнів, для досягнення достатньої кількості тварин у групі.

Сексуальне поведінка

Всі чоловіки тестувалися на сексуальну поведінку під час сеансів спарювання 4, що проводилися кожен другий день у домашній клітці. Під час кожного сеансу чоловіки поєднуються з сприйнятливою жінкою до однієї еякуляції або протягом 60 хвилин, залежно від того, що настало раніше. Поведінка спарювання реєструвалося так, як описано вище, а також обчислювалася ефективність копуляції [число інтромісій / (числа монтувань + номери інтромісій)]. Статистичні відмінності в показниках статевої продуктивності порівнювалися між групами уражень і фіксованих груп для кожного випробування з використанням односторонньої ANOVA з хірургічним ураженням як фактор і LSD-тест Фішера з довірчим рівнем 95% або, при необхідності, непараметричні тести. Kruskal-Wallis односторонній ANOVA з операцією ураження як фактор і тест Данна з 95% довірчий рівень. Крім того, дані для кожної групи порівнювали з даними перед операцією з використанням парних t-тестів.

Сексуальна мотивація: тест на ЗПС

Після тестування сексуальної поведінки підгрупа тепер сексуально досвідчених чоловіків була протестована на сексуальну мотивацію з використанням прямого апарату злітно-посадкової смуги (MED Associates Inc., St. Albans, VT) (120 см; Lopez et al., 1999). Чоловіки звикли до апарату злітно-посадкової смуги протягом двох наступних хвилинних випробувань 10, що проводилися в той же день. Далі були проведені два випробування. Під час першого випробування тварина-стимул (еструдна жінка, анестральна жінка або чоловік) була поміщена в ящик для голів з перфорованими роздільниками на кінці злітно-посадкової смуги. Вентилятор використовувався для того, щоб роздувати запахи тварин-стимулів до чоловіка. Експериментальні самці були поміщені в стартову коробку, двері були відкриті, щоб дозволити доступ до злітно-посадкової смуги, і час для досягнення воріт воріт було записано. Потрапивши в поле для воріт, чоловікам було надано 30 секунд для взаємодії з твариною стимулу за екраном. Ідентичний другий випробування пішов після 1 години. Статистичну значущість між часом для досягнення мети між дослідженнями 1 і випробуванням 2 аналізували за допомогою парних t-тестів з довірчим рівнем 95%. Статистичну значущість між групами визначали за допомогою одностороннього ANOVA з хірургічним ураженням як фактор, що супроводжувався LSD-тестами Фішера з довірчим рівнем 95%.

Поведінка, подібна до тривоги: підвищений плюс лабіринт

Підгрупа тепер сексуально досвідчених чоловіків була перевірена на тривожну поведінку, щоб визначити, чи наслідки ураження орексином на сексуальну продуктивність або мотивацію були викликані змінами в тривожності або збудженні. Чоловіки піддавалися впливу підвищеного апарату лабіринту (EPM; MED Associates Inc., St. Albans, VT) в яскраво освітленому приміщенні під час закінчення світлової фази. EPM складався з озброєнь 4 кожен 50 см у довжину, що проходить від центрального переходу, і був підвищений 75 см. Дві руки лабіринту були відкриті до зовнішнього середовища, а два інших були вкриті темним сайдингом висотою 40 cm. Тварин поміщали на ЕПМ і контролювали протягом п'яти хвилин. Час, проведений у відкритих і закритих руках, і загальна кількість записів в кожну зброю реєструвалися за допомогою фотопотоку. Статистичну значущість між групами визначали за допомогою одностороннього ANOVA з ураженням як фактор, за яким йшли LSD-тести Фішера з довірчим рівнем 95%.

Перфузії і спондикулированние cFos

Після всіх поведінкових тестів усі чоловіки були глибоко анестезовані пентобарбітолом натрію (270mg / мл) і транскардиально перфузовані з 500 мл 4% PFA для верифікації ураження, як описано раніше. Крім того, для тестування ефектів ураження орексином на спарову індуковану експресію cFos, групи фіктивного і поразки самців пов'язували до одного еякуляції. Через годину після еякуляції самці транскардиально перфузировали з 4% PFA, як описано вище. Половина чоловіків у цій групі не вводили жінці і перфузировали з домашньої клітини, щоб служити непідготовленим контролем.

Імуногістохімія

Мозок розсікали, використовуючи заморожуючий мікротом в паралельних серіях 4 з корональних зрізів 35 мкм і зберігали, як описано вище. Для верифікації поразки, одна серія зрізів, що містять гіпоталамус з усіх експериментів поразки, була однозначно позначена для орексину, використовуючи той самий описаний вище протокол кролячих анти-орексин-А та DAB. Одна серія зрізів тварин, які були зв'язані, фарбувалася на cFos і орексин, як описано вище.

Перевірка ураження

У кожній тварині кількість нейронів орексину, імунореактивних для орексину, підраховували білатерально в PFA-DMH і LHA в секціях 3, що експресують максимальну кількість орексинових клітин в нехірургічних контролях, -2.3 мм до -3.6 мм від брегми, як описано вище. Клітини на півкулі були усереднені для кожної тварини, і були розраховані групові засоби. Нехірургічні контрольні тварини (з експериментів cFos) використовувалися для визначення інтактного / вихідного числа нейронів орексину, і дані виражені у відсотках порівняно з контрольними чоловіками без хірургії (малюнок 2). Чоловіків, які мали менше, ніж 20% орексинових клітин порівняно з нехірургічними контрольними тваринами, включали в групу ураження. Тварини з більшим, ніж 20%, але менше 80% були включені в групу часткового ураження. Фіктивні контролі не мали значних змін у кількості клітин орексину. Статистичну значущість між фіктивним, частковим і повним ураженням тварин обчислювали, використовуючи односторонню ANOVA і LSD-тест Фішера з довірчим рівнем 95%.

малюнок 2 

Перевірка ураження. Репрезентативні зображення, що показують клітини орексину (А) і МСН (В) у тваринах-фіктивних ураженнях, ін'єктували BLANK-сапорін. Репрезентативні зображення, що показують втрату орексинових клітин (C), але інтактні клітини MCH (D) у тварині-уразі, ін'єктованому орексином ...

Специфіка ураження

Щоб переконатися, що ураження обмежені нейронами орексину, одна серія зрізів, що містять гіпоталамус з підгрупи фіксованих і уражених тварин (n = 20), була иммунопроцессирована для гормону концентрації меланоцитів (MCH), гіпоталамічного пептиду, що має місце перекриття (але не колокалізація) з нейронами орексину (Broberger et al., 1998), використовуючи антитіло, збуджене кроликом, що розпізнає MCH (кролячі анти-MCH, H-070-47; 1: 150 000, Phoenix Pharmaceuticals, Burlingame, CA) і DAB, як описано раніше. MCH-нейрони експресують ORX1 (Bäckberg et al., 2002), але не ORX2 (Volgin et al., 2004), і не суттєво знижуються після лікування орексином В-сапоріном (Frederick-Duus et al., 2007). MCH імунореактивні клітини підраховували двосторонньо в двох секціях на одну тварину (шам: n = 7; ураження n = 5), використовуючи альтернативні зрізи до тих, які аналізували на нейрони орексину. Ураження не суттєво зменшували кількість нейронів MCH в PFA-DMH або LHA (Таблиця 1; Малюнок 2b, d; PFA-DMH: p = 0.47; LHA: p = 0.33). Більш того, індукований спарову експресію cFos підраховували двосторонньо в одному репрезентативному розрізі на одну тварину (шам: n = 4; ураження n = 3), використовуючи альтернативні розділи до тих, які аналізували на нейрони орексину. Ураження не впливали на індуковану спарову експресію cFos в PFA-DMH або LHA (Таблиця 1; PFA-DMH: p = 0.53; LHA: p = 0.82). Нарешті, репрезентативні зразки, що використовувалися для оцінки кількості орексинових клітин (тварин: фіксований: n = 6; ураження: n = 6), були Nissl контрастними з використанням крезил фіолетового (5 g крезил фіолетовий ацетат (C-5042, Sigma, St. Louis, MO), 0.5 р тригідрату ацетату натрію (S209, Thermo Fisher Scientific, Оттава, Онтаріо, Канада), подвійна дистильована вода 1L з крижаною оцтовою кислотою (AX0073-6, EMD Chemicals, Mississauga, Ontario, Canada) при рН: 3.14). Підрахунки Nissl забарвлених нейронів виконували в стандартних областях аналізу (250 мкм × 200 мкм) в загальному розташуванні нейронів орексину. Число Nissl-пофарбованих нейронів не відрізнялося між груповими і ураженими групами (Таблиця 1; PFA-DMH: p = 0.23; LHA: p = 0.33).

Таблиця 1 

Перевірка специфічності поразки: Аналіз кількості нейронів, пофарбованих на Nissl, MCH або індукований згортанням cFos, показав, що немає значних втрат нейронів в цілому, клітин MCH або спарювання, індукованого нейронною активацією в PFA-DMH або ...

Оскільки виявлено, що дефіцит орексину сприяє нарколепсії у мишей (Chemelli et al., 1999), собак (Lin et al., 1999) і людей (Siegel, 1999; Nishino et al., 2000; Peyron et al., 2000; Thannickal et al., 2000) тварин спостерігали для забезпечення відсутності нарколептичного фенотипу. Тварин спостерігали протягом усього періоду поведінкових тестів, про які повідомлялося в цьому дослідженні, і не виявляли будь-яких характеристик нарколепсії.

Експресія cFos-індукованого спарювання у тварин ураження

Кількість cFos-імунореактивних клітин підраховували двосторонньо в секціях 3 на тварин у стандартних зонах аналізу в вентральній тегментальной області (VTA; 900 × 900 µm), mPOA (400 × 600 µm); nucleus accumbens (NAc) ядро ​​і оболонка (400 × 600 мкм) і prelimbic, infralimbic і передній поясні субрегіони медіальної префронтальної кори (mPFC) (600 × 800 мкм на субрегіон) спостерігається сліпих для експериментальних груп . Для кожної тварини усереднювали підрахунки, і обчислювали групові засоби. Статистичну значущість розраховували, використовуючи двосторонній ANOVA з сексуальним досвідом і поразкою як факторами, за якими слідував LSD-тест Фішера з довірчим рівнем 95%.

результати

Активація нейронів орексину під час сексуальної поведінки

Значне збільшення експресії cFos в нейронах орексину спостерігалося після сексуальної поведінки в обох PFA-DMH (F)(5,31) 63.4; р <0.001; Малюнок 3a) і LHA (F(5,31) 10.4; р <0.001; Малюнок 3b), без ефекту сексуального досвіду. Зокрема, як у статевозрілих, так і у досвідчених тварин, у всіх експериментальних групах чоловіків, які демонструють різні параметри сексуальної поведінки (дослідження анестезної жінки, вплив естрозних жіночих запахів, прояв монтажу, втручання або еякуляція), виявлялася однакова індукція cFos порівняно з домашніми тваринами. контролі клітини з більшим відсотком клітин орексину, активованих в PFA-DMH (60 – 80%), порівняно з LHA (14 – 33%), без відмінностей між експериментальними групами. Ці результати показують, що нейрони орексину активуються після впливу на подразник жінки без подальшої активації під час сексуальної діяльності. Більш того, активація не залежить від стимулюючої відмінності жіночого стимулу, оскільки як не-сприйнятливі, так і сприйнятливі жінки індукують активацію у чоловіків, що мають статевий досвід.

малюнок 3 

Нейрони орексину в PFA-DMH (A) і LHA (B) виражали cFos, слідуючи всім параметрам поведінки спарювання у наївних і досвідчених тварин. Скорочення: HC, домашня клітка; АФ: анестезна жінка; EF, еструдна жінка; M, Mount; IM, Intromission; Е, еякуляція. ...

Ефекти ураження орексином

Сексуальне поведінка

Ураження орексином призводили до полегшення сексуальної поведінки (латентність монтування: F(2,47) 3.962; p = 0.034; затримка втручання: H = 9.104; p = 0.011). Під час першого дослідження спарювання чоловіки-поразки показали менші затримки для монтування та втручання порівняно з фіктивними тваринами (латентність монтування: p = 0.03; затримка втручання: p = 0.01; Малюнок 4a – b) і в порівнянні з затримками під час попередньої операції спарювання (латентність монтування: p = 0.02; затримка втручання: p = 0.03; дані не показані). У чоловіків часткового ураження не було суттєвих відмінностей від фіктивних чоловіків, і жодна з груп не відрізнялася від судового процесу перед спадом. Ефекти уражень на латентність монтування та інтромісії послаблювалися при сексуальному досвіді, оскільки не було відмінностей між групами під час будь-якого з наступних випробувань (випробування 4 показано в Малюнок 4a – b). Затримки еякуляції (Малюнок 4c), кількість кріплень (Малюнок 4d) і intromissions ()Малюнок 4e), а також ефективність копуляції (Малюнок 4f) не відрізнялися між групами під час будь-якого випробування або в межах кожної групи між першим випробуванням на спарювання і попередньою операцією.

малюнок 4 

Порушення орексину скорочували затримки для монтування та втручання у сексуально наївних чоловіків під час дослідження 1. Ураження орексином не впливали на спарювання під час випробування 4, після того, як чоловіки отримали сексуальний досвід. (A) Затримка монтування. (B) Затримка втручання. (C) Еякуляція ...
Тест на ЗПС

Ураження орексином не впливали на статеву мотивацію, яку оцінювали у випробуванні на пряму злітно-посадочну смугу у чоловіків, що мають досвід сексуально. Протягом двох випробувальних випробувань чоловіки-поразки проходили значно швидше до еструсної жінки у другому дослідженні порівняно з першим випробуванням (p = 0.03; малюнок 5). Таке збільшене час роботи свідчить про сексуальну мотивацію (Lopez et al., 1999). Під час дослідження 2 (p = 0.03) часткове ураження і фіктивні самці також пробігали швидше до еструсної жінки, хоча це не вдалося досягти значущості у фіктивних чоловіків (p = 0.052). Жодна з груп не показала підвищеної швидкості, щоб пробігати до анестезної самки або чоловіка під час дослідження 2. Більше того, не спостерігалося суттєвих відмінностей між симпатичними, частковими і ураженими самцями на швидкості, щоб пробігатися до будь-якого стимулюючого тварини ні на випробуванні 1, ні на випробуванні 2, демонструючи відсутність відмінностей у загальній активності на ЗПС.

малюнок 5 

Поразки орексину не впливали на сексуальну мотивацію у чоловіків, які переживають статевий акт. Показані часи, щоб досягти estrous жінки в тесті злітно-посадкової смуги під час обох випробувань 1 і 2. * вказує на значне скорочення часу для досягнення жінки у випробуванні 2 порівняно з ...
Поведінка, подібна до тривоги

До цих пір результати показують, що ураження можуть сприяти ініціації сексуальної поведінки у наївних тварин через потенційний вплив на відповіді на новизну та / або подібну до тривоги поведінку, коли чоловіки стикаються з новою жінкою. У підтримці у чоловіків з поразкою спостерігалося зменшення тривожної поведінки на ЕПМ, що розглядається як зменшення відсотка часу, проведеного в закритих руках, (p = 0.012; малюнок 6) і збільшений відсоток часу на розкритих обіймах (p = 0.023; малюнок 6) порівняно з фіктивними самцями. Часткове ураження не мало значного ефекту. Ці дані ще більше підтверджують, що поразка зменшила тривожну поведінку.

малюнок 6 

Поразки орексину зменшили тривожну поведінку на підвищеному лабіринті плюс. Відсоток часу, проведеного в закритих руках (ліворуч), зменшувався, а відсоток часу у відкритих руках (праворуч) збільшувався у чоловіків-поранених. * вказує на значну різницю ...
Вираз cFos

Для оцінки того, чи ендогенний орексин сприяє індукованій спарову активації нейронів у областях мозку, іннервованого орексином, було проведено аналіз індукованої спарову експресією cFos в ядрі VTA, NAc і оболонці, mPOA і mPFC. Як у поразці, так і у фіктивному чоловіку, спарювання значно збільшило cFos у всіх аналізованих ділянках мозку порівняно з непідготовленими контролями (Таблиця 2). Ураження не впливали на нейральну активацію, так як тварини-фіктиви і поразки не відрізнялися за базовою або спарову індукованою експресією cFos.

Таблиця 2 

Спаровування індукувало cFos у фіктивних, часткових і уражених групах порівняно з контрольними групами, що не мають спаровування, з таким самим статусом ураження.

Обговорення

Ці дослідження досліджували роль ендогенного орексину в сексуальній діяльності та мотивації у самців щурів. Було виявлено, що орексин не є необхідним для сексуальної мотивації або працездатності. Натомість, нейрони орексину активуються жіночим стимулом, незалежно від гормонального статусу жіночого або сексуального досвіду чоловіка. Більше того, видалення ендогенного орексину внаслідок ураження орексином клітинами зменшило тривожну поведінку і полегшило ініціювання сексуальної поведінки у чоловіків, які не були сексуальними. Таким чином, результати цього дослідження підтверджують роль орексину в збудженні (de Lecea et al., 2006; Харріс і Астон-Джонс, 2006; Sakurai, 2007; Boutrel et al., 2009; Furlong і Carrive, 2009; Furlong et al., 2009) і тривога (Suzuki et al., 2005; Davis et al., 2009; Li et al., 2010), але не підтримують критичну роль орексину в сексуальній мотивації або працездатності.

Результати цих досліджень ще більше уточнюють роль ендогенного орексину і очевидні контрастні висновки попередніх досліджень, які вивчають роль орексину в чоловічому сексуальному поведінці з використанням фармакологічних засобів. Внутрішньо-mPOA інфузії екзогенного орексину-A призвели до підвищеного сексуального збудження і поліпшення статевої продуктивності, припускаючи, що орексин може діяти в mPOA для підвищення мотивації і продуктивності сексуальної поведінки (Gulia et al., 2003). Однак, навпаки, інфузії ICV орексину-А послаблюють сексуальну мотивацію і збудження (Bai et al., 2009антагоніст орексину не впливав на сексуальне збудження (Bai et al., 2009), що вказує на те, що ендогенний орексин не може відігравати певної ролі в сексуальній мотивації. Нарешті, блокада ORX1 за допомогою системних ін'єкцій показала, що лише трохи погіршує продуктивність копуляції (Muschamp et al., 2007). З цих суперечливих досліджень можна зробити кілька висновків. По-перше, застосування екзогенного орексину-А може впливати на поведінку, але блокада ORX1 не має значних ефектів, що свідчить про незначну роль ендогенного орексину в регуляції чоловічої сексуальної поведінки (Bai et al., 2009). Нинішні результати підтримують цю можливість. Нинішні дослідження з використанням видалення орексину за допомогою специфічних для орексину клітинних уражень показують, що ендогенний орексин не є суттєвим для сексуальної мотивації або працездатності, відповідно до спостережень Бай та ін (2009). Важливо, однак, відзначити, що відсутність ефектів ураження орексином на сексуальну мотивацію на злітно-посадковій смузі може бути пов'язано з тим, що тварини отримали сексуальний досвід до тестування на сексуальну мотивацію, тому відсутність ефекту в тесті злітно-посадкової смуги могло бути обумовлено сексуального досвіду чоловіків. Майбутні експерименти можуть вирішити цю проблему шляхом тестування ефектів ураження орексином на сексуальну мотивацію у неінфекційних чоловіків.

Можливо також, що два ліганда орексина і два підтипи рецепторів орексина (ORX1 і ORX2; Sakurai et al., 1998) можуть регулювати сексуальну поведінку в протилежних напрямках. Використовуючи методики ураження орексинових клітин, ліганди для обох підтипів рецепторів орексину (орексин-А і В) були виключені в поточному дослідженні. Два підтипи рецепторів експресуються в різних областях мозку (Trivedi et al., 1998; Marcus et al., 2001) і, як було показано, диференційовано регулюють пам'ять для кокаїнуSmith et al., 2009). Попередні дослідження сексуальної поведінки в першу чергу зосереджувалися на ролі орексин-А та ORX1 (див. Вище). Антагоніст орексинового рецептора SB334867, що використовується в дослідженнях, на сьогоднішній день специфічно спрямований на ORX1, який має високу спорідненість до орексину-А і значно нижчу спорідненість до орексину-В (Sakurai et al., 1998). Крім того, у попередніх дослідженнях орексин-А використовувався як екзогенний орексин (Gulia et al., 2003; Bai et al., 2009). Необхідні подальші дослідження для вивчення ролі орексину-В та ORX2 у регуляції сексуальної поведінки чоловіків.

Нинішнє дослідження перевірило наслідки тривалої втрати орексину. Muschamp et al. (2007) припустив, що тривале скорочення орексину після кастрації може пояснювати втрату сексуальної мотивації та працездатності. Ця гіпотеза суперечила поточним висновкам, оскільки поразки клітин орексину не зменшують сексуальну мотивацію або працездатність. Можливо, що довгострокова втрата орексина в поточному дослідженні могла призвести до компенсаторних механізмів, хоча ніяких змін в індукованій спарюванням нервовій активації в межах опосередкованої сексуальної поведінки не було виявлено. Тим не менш, очевидно, що зменшення або відсутність орексину не запобігає сексуальній поведінці. Більше того, результати поточного дослідження не підтримують основну роль орексину в індукції експресії cFos сексуальною поведінкою. Було чітко встановлено, що орексин сприяє активації нейронів у ВТА (Korotkova et al., 2003; Borgland et al., 2006; Narita et al., 2006; Vittoz et al., 2008). Проте ураження клітин орексину не блокували індуковану спарову нейральну активацію в VTA, або у будь-яких інших взаємозалежних областях мозку, незважаючи на наявність орексин-імунореактивних волокон у безпосередній близькості до активованих нейронів у фіктивних чоловіків. Таким чином, індукована спаровування нейронна активація в цих областях мозку не є залежною від дії орексину.

Дещо несподіваним висновком цього дослідження було вплив ураження орексином на полегшення ініціації сексуальної поведінки у статевих наївних, але не досвідчених тварин. Показано, що це співвідноситься зі зменшенням тривожної поведінки. Таким чином, наслідки ураження орексином на сексуальну мотивацію і працездатність можуть бути вторинними по відношенню до його впливу на тривожність і збудження. Насправді попередні дослідження свідчили про роль орексину в тривожності, оскільки інфузія ICV орексину-А зменшувалася на відкритих кінцях ЕПМ у мишей (Suzuki et al., 2005). Інфузія орексину-А в паравентрикулярне ядро ​​таламуса щурів-самців зменшила час перебування в центральній зоні камери відкритого поля і зменшила дослідження нового об'єкта, вказуючи на те, що орексин може бути залучений у генерацію тривожної поведінки (Li et al., 2010). Крім того, домінуючі щури-самці, які проявляють підвищений ризик прийому ЕПМ, мають підвищений рівень мРНК ORX1 у mPFC (Davis et al., 2009). Показано також, що Orexin змінює відповіді на стрес (Ida et al., 1999; Ida et al., 2000), а стимуляція рецепторів орексину збільшує вивільнення кортикотропін-вивільняє фактора (Al-Barazanji et al., 2001; Singareddy et al., 2006), кортикостерону (Ida et al., 2000; Kuru et al., 2000) і адренокортикотропний гормон (Kuru et al., 2000). Антагоністи орексину в даний час знаходяться в клінічних випробуваннях для лікування безсоння, порушення якого часто супутні з тривожними розладами (Sullivan і Neria, 2009), і передбачається, що антагоністи орексину потенційно можуть бути використані для лікування тривожних розладів (Mathew et al., 2008). Враховуючи зростаючу кількість доказів ролі орексину при тривожності і збудженні, виникає ураження орексином, що може сприяти ініціюванню сексуальної поведінки у наївних чоловіків, зменшуючи тривожні реакції, пов'язані з введенням нового стимулу, тобто жінки.

Значна активація нейронів орексину спостерігалася після сексуального збудження і сексуальної поведінки як у статево наївних, так і у досвідчених тварин як в PFA-DMH, так і в LHA, при цьому 60 – 80% і 14 – 33% клітин орексину, що експресують cFos, відповідно. Існує безліч доказів, що підтверджують дихотомію в функціонуванні нейронів орексину в популяції орексинових клітин, причому PFA-DMH критично залучений до збудження і LHA є критичним для поведінки, пов'язаної з винагородою (Harris et al., 2005; Харріс і Астон-Джонс, 2006, Aston-Jones, 2009a). Таким чином, активація клітин PFA-DMH орексином жіночим стимулом підтверджує гіпотезу, що орексин активується і є критичним для збудження, включаючи сексуальне збудження у наївних і досвідчених чоловіків, і тривожність, пов'язану з новим жіночим стимулом у наївних чоловіків. Проте клітини PFA-DMH активувалися до аналогічних рівнів, незалежних від досвіду чоловіків і гормонального статусу жінки, що свідчить про те, що клітини PFA-DMH активувалися під час загального збудження, а не специфічно статевим збудженням. Більш того, наші дослідження не повністю підтверджують існування повністю дихотомічної популяції орексинових клітин, оскільки була значна активація ЛГА після впливу всіх параметрів сексуального збудження та продуктивності, незалежно від того, чи пов'язана ця поведінка з винагородою. Таким чином, досвідчені чоловіки, які піддавалися анестезіомі, показали рівні рівні активації орексинових клітин у ЛГА в порівнянні з досвідченими чоловіками, які копулювали до еякуляції. Проте, тільки остання група буде формувати умовне місце переваги для спарювання (Tenk et al., 2009); припускаючи, що копуляція до еякуляції є більш корисною, ніж інші елементи спарювання. Нинішнє дослідження спеціально не перевіряло роль орексину в сексуальному винагороді; отже, для вирішення цього питання необхідні подальші дослідження.

Таким чином, результати цих досліджень показують, що орексин не є критичним для сексуальної діяльності або мотивації. Натомість, виявлено, що ураження клітин орексину знижує тривожність, що свідчить про те, що ендогенний орексин бере участь у збільшенні тривоги. Більш того, видалення орексину призвело до полегшення ініціації сексуальної поведінки у чоловіків, які не мали сексуальної допомоги, що свідчить про те, що ендогенний орексин може пригнічувати ініціацію спарювання, можливо, за рахунок збільшення тривоги у відповідь на новий стимул, тобто жіночий. Ці висновки ще більше роз'яснюють нейронні схеми, що беруть участь у сексуальній діяльності та тривожності, і додають до зростаючої кількості літератури про роль орексину в посередництві збудження та тривоги.

Подяки

Це дослідження було підтримано грантами Національних інститутів охорони здоров'я (R01 DA014591), Канадськими інститутами досліджень в галузі охорони здоров'я (RN 014705), а також Радою національних наук і інженерних досліджень Канади (грант Discovery (341710) LMC.

Виноски

Заява видавця: Це PDF-файл неозброєного рукопису, який був прийнятий до публікації. Як послугу нашим клієнтам ми надаємо цю ранню версію рукопису. Рукопис буде підданий копіюванню, набору тексту та перегляду отриманого доказу до його опублікування в остаточній формі. Зверніть увагу, що під час виробничого процесу можуть бути виявлені помилки, які можуть вплинути на вміст, і всі правові застереження, які стосуються журналу, стосуються.

посилання

  1. Agmo A. Статева поведінка самців щурів. Brain Res Brain Res Protoc. 1997: 1: 203 – 209. [PubMed]
  2. Al-Barazanji KA, Wilson S, Baker J, Jessop DS, Harbuz MS. Центральний орексин-А активує гіпоталамо-гіпофізарно-надниркову вісь і стимулює гіпоталамічний кортикотропін-вивільняючий фактор і аргініно-вазопресиновий нейронів у свідомих щурах. J Neuroendocrinol. 2001: 13: 421 – 424. [PubMed]
  3. Aston-Jones G, Smith RJ, Moorman DE, Richardson KA. Роль бічних нейронів гіпоталамуса орексину в обробці винагороди та залежності. Нейрофармакологія. 2009, 56 Suppl 1: 112 – 121. [PMC безкоштовна стаття] [PubMed]
  4. Aston-Jones G, Smith RJ, Sartor GC, Moorman DE, Massi L, Tahsili-Fahadan P, Річардсон К.А. Бічні нейрони гіпоталамусу орексину / гіпокретину: роль у пошуку винагороди та залежності. Brain Res. 2009: 1314: 74 – 90. [PMC безкоштовна стаття] [PubMed]
  5. Bai YJ, Li YH, Zheng XG, Han J, Yang XY, Sui N. Orexin A послаблює безумовну сексуальну мотивацію у самців щурів. Pharmacol Biochem Behav. 2009: 91: 581 – 589. [PubMed]
  6. Bäckberg M, Hervieu G, Wilson S, Meister B. Рецептор орексина-1 (OX-R1) імунореактивний в хімічно ідентифікованих нейронах гіпоталамуса: фокус на орексинових мішенях, що беруть участь у контролі прийому їжі та води. Eur J. Neurosci. 2002: 15: 315 – 328. [PubMed]
  7. Baldo BA, Daniel RA, Berridge CW, Kelley AE. Перекриття розподілу імунореактивних волокон орексину / гіпокретину та дофаміну-бета-гідроксилази в областях головного мозку щурів, що опосередковують збудження, мотивацію і стрес. J Comp Neurol. 2003: 464: 220 – 237. [PubMed]
  8. Balfour ME, Yu L, Coolen LM. Сексуальна поведінка та пов'язані з статтю екологічні сигнали активізують мезолімбічну систему у самців щурів. Нейропсихофармакологія. 2004: 29: 718 – 730. [PubMed]
  9. СК Бенуа, Трейсі А.Л., Девіса Дж. Ф., Чоя Д., Клегга діджея. Нові функції орексигенних гіпоталамічних пептидів: від генів до поведінки. Харчування. 2008: 24: 843 – 847. [PMC безкоштовна стаття] [PubMed]
  10. Borgland SL, Taha SASF, Fields HL, Bonci A. Orexin A у VTA є критичним для індукції синаптичної пластичності та поведінкової сенсибілізації до кокаїну. Нейрон. 2006 (49): 4 – 589. [PubMed]
  11. Boutrel B, Cannella N, de Lecea L. Роль гіпокретину в провокуванні збудження і цілеспрямованої поведінки. Brain Res. 2009 [PMC безкоштовна стаття] [PubMed]
  12. Boutrel B, Kenny PJ, Specio SE, Martin-Fardon R, Markou A, Koob GF, de Lecea L. Роль для hypocretin в опосередкуванні стрес-індукованого відновлення кокаїн-шукає поведінку. Proc Natl Acad Sci США A. 2005, 102: 19168 – 19173. [PMC безкоштовна стаття] [PubMed]
  13. Broberger C, De Lecea L, Sutcliffe JG, Хокфельт Т. Гіпокретин / орексин- і меланін-концентруючі клітини, що експресують, утворюють чіткі популяції в латеральному гіпоталамусі гризунів: зв'язок з білковими системами, пов'язаними з геном нейропептиду Y і agouti. J Comp Neurol. 1998: 402: 460 – 474. [PubMed]
  14. Carter ME, Borg JS, de Lecea L. Мозок гіпокретинів та їх рецепторів: медіатори алостатичного збудження. Curr Opin Pharmacol. 2009: 9: 39 – 45. [PMC безкоштовна стаття] [PubMed]
  15. Chemelli RM, Віллі JT, Сінтон CM, Elmquist JK, Scammell T, Лі C, Річардсон JA, Вільямс SC, Xiong Y, Кісанукі Y, Fitch TE, Наказато М, Hammer RE, Saper CB, Yanagisawa М. Нарколепсія в мишачих мишей orexin : молекулярна генетика регулювання сну. Cell. 1999: 98: 437 – 451. [PubMed]
  16. Chen CT, Dun SL, Kwok EH, Dun NJ, Chang JK. Orexin A-подібна імунореактивність у мозку щурів. Neurosci Lett. 1999: 260: 161 – 164. [PubMed]
  17. Чой Д.Л., Девіс Дж. Ф., Фіцджеральд М.Е., Бенуа С.Т. Роль орексину-А в мотивації харчових продуктів, поведінковій поведінці на основі винагороди та індукованої їжею активації нейронів у щурів. Неврологія. 2010: 167: 11 – 20. [PubMed]
  18. Davis JF, Krause EG, Melhorn SJ, Sakai RR, Benoit SC. Домінуючі щури є природними ризиками і проявляють підвищену мотивацію до винагороди за їжу. Неврологія. 2009: 162: 23 – 30. [PubMed]
  19. de Lecea L, Jones BE, Boutrel B, Borgland SL, Nishino S, Bubser M, DiLeone R. Залежність і збудження: альтернативні ролі гіпоталамічних пептидів. J. Neurosci. 2006 (26): 41 – 10372. [PubMed]
  20. de Lecea L, Kilduff TS, Peyron C, Gao X, Foye PE, Danielson PE, Fukuhara C, Battenberg EL, Gautvik VT, Bartlett FS, 2nd, Frankel WN, van den Pol, Bloom FE, Gautvik KM, Sutcliffe JG. Гіпокретини: гіпоталамус-специфічні пептиди з нейроексітаторною активністю. Proc Natl Acad Sci США A. 1998, 95: 322 – 327. [PMC безкоштовна стаття] [PubMed]
  21. Дьюсбері Д.А. Копуляторна поведінка щурів (Rattus norvegicus) як функція попереднього досвіду копуляції. Anim Behav. 1969: 17: 217 – 223. [PubMed]
  22. Fadel J, Deutch AY. Анатомічні субстрати взаємодій орексин-допамін: бічні гіпоталамічні проекції до вентральної тегментальної області. Неврологія. 2002: 111: 379 – 387. [PubMed]
  23. Фредерік-Дуус Д, Гейтон М.Ф., Фадель Дж. Харчування, викликане збільшенням вивільнення ацетилхоліну в кортикальному руслі, вимагає передачі орексина. Неврологія. 2007: 149: 499 – 507. [PubMed]
  24. Furlong TM, Carrive P. Нейротоксичні ураження, зосереджені на перифорнічному гіпоталамусі, скасовують серцево-судинні та поведінкові реакції обумовленого страху на контекст, але не на стримування. Brain Res. 2007: 1128: 107 – 119. [PubMed]
  25. Furlong TM, Vianna DM, Лю L, Carrive P. Гіпокретин / орексин сприяє вираженню деяких, але не всіх форм стресу та збудження. Eur J Neurosci. 2009: 8: 1603 – 1614. [PubMed]
  26. Геращенко Д., Колс М.Д., Греко М., Валеш Н.С., Салін-Паскуаль Р., Кілдуфф Т.С., Лаппі Д.А., Широмані П.Я. Порушення гіпокретину-2-сапоріну латерального гіпоталамуса призводять до нарколептичного поведінки сну у щурів. J Neurosci. 2001: 21: 7273 – 7283. [PubMed]
  27. Gulia KK, Mallick HN, Кумар В.М. Застосування орексину А (гіпокретин-ХНУМХ) на медіальній преоптичній ділянці потенціює чоловічу сексуальну поведінку у щурів. Неврологія. 1: 2003: 116 – 921. [PubMed]
  28. Hagan JJ, Leslie RA, Patel S, Evans ML, Wattam TA, Holmes S, Benham CD, Тейлор С.Г., Рутледж С, Гемматі П, Мунтон Р.П., Ашмеад Т.Е., Шах А.С. , Piper DC, Hunter AJ, Porter RA, Аптон Н. Orexin A активує випалювання клітин локусу coeruleus і збільшує збудження у щура. Proc Natl Acad Sci США A. 1999, 96: 10911 – 10916. [PMC безкоштовна стаття] [PubMed]
  29. Гарріс ГК, Астон-Джонс Г. Збудження і винагорода: дихотомія в функції орексину. Тенденції Neurosci. 2006: 29: 571 – 577. [PubMed]
  30. Harris GC, Wimmer M, Aston-Jones G. Роль нейронів бічних гіпоталамічних орексинів у пошуку винагороди. Природа. 2005 (437): 7058 – 556. [PubMed]
  31. Хорват Т.Л., Пейрон С, Діано С, Іванов А, Астон-Джонс Г, Кілдуфф Т.С., ван Ден Пол А.Н. Активація гіпокретину (орексину) і синаптична іннервація локусу coeruleus норадренергічної системи. J Comp Neurol. 1999: 415: 145 – 159. [PubMed]
  32. Ida T, Nakahara K, Katayama T, Murakami N, Nakazato M. Вплив бічного церебровентрикулярного введення стимулюючого апетит нейропептиду, орексину та нейропептиду Y на різні поведінкові дії щурів. Brain Res. 1999: 821: 526 – 529. [PubMed]
  33. Ida T, Nakahara K, Murakami T, Hanada R, Nakazato M, Murakami N. Можливе залучення орексину до стресової реакції у щурів. Biochem Biophys Res Commun. 2000: 270: 318 – 323. [PubMed]
  34. Короткова Т.М., Сергєєва О.А., Еріксон К.С., Хаас Г.Л., Браун Р.Е. Збудження вентральних тегментальних ділянок дофамінергічних і недепамінергічних нейронів орексинами / гіпокретинами. J Neurosci. 2003 (23): 1 – 7. [PubMed]
  35. Kuru M, Ueta Y, Serino R, Nakazato M, Yamamoto Y, Shibuya I, Yamashita H. Центрально введений орексин / гіпокретин активує вісь ГПА у щурів. Нейрорепортаж. 2000: 11: 1977 – 1980. [PubMed]
  36. Li Y, Li S, Wei C, Wang H, Sui N, Kirouac GJ. Зміни в емоційній поведінці виробляються мікроін'єкціями орексину в паравентрикулярном ядрі таламуса. Pharmacol Biochem Behav. 2010: 95: 121 – 128. [PubMed]
  37. Lin L, Faraco J, Li R, Kadotani H, Rogers W, Lin X, Qiu X, де Jong PJ, Nishino S, Mignot E. Розлад сну собака нарколепсія викликана мутацією в гені гипокретина (орексин) рецептора 2 . Cell. 1999: 98: 365 – 376. [PubMed]
  38. Лопес Х.Х., Ольстер Д.Х., Еттенберг А. Сексуальна мотивація у самців щурів: роль первинних стимулів і копуляторного досвіду. Horm Behav. 1999: 36: 176 – 185. [PubMed]
  39. Marcus JN, Aschkenasi CJ, Lee CE, Chemelli RM, Saper CB, Yanagisawa M, Elmquist JK. Диференціальна експресія рецепторів орексину 1 і 2 в мозку щурів. J Comp Neurol. 2001: 435: 6 – 25. [PubMed]
  40. Martin G, Fabre V, Siggins GR, de Lecea L. Взаємодія гіпокретинів з нейротрансміттерами в nucleus accumbens. Regul Pept. 2002: 104: 111 – 117. [PubMed]
  41. Метью SJ, Ціна RB, Charney DS. Останні досягнення в нейробіології тривожних розладів: наслідки для нових терапевтичних засобів. Am J Med Genet C Semin Med Genet. 2008; 148C: 89 – 98. [PubMed]
  42. Muschamp JW, Dominguez JM, Sato SM, Shen RY, Hull EM. Роль гіпокретину (орексину) у чоловічій сексуальній поведінці. J Neurosci. 2007: 27: 2837 – 2845. [PubMed]
  43. Nair SG, Golden SA, Shaham Y. Диференціальні ефекти антагоніста рецептора гіпокретину 1 SB 334867 на самостійне введення їжі з високим вмістом жирів і відновлення пошуку продуктів у щурів. Br J Pharmacol. 2008: 154: 406 – 416. [PMC безкоштовна стаття] [PubMed]
  44. Наріта М, Нагумо Я., Хашімото С., Хотіб Дж, Міятаке М, Сакурай Т, Янагісава М, Накамачі Т, Шіода С., Сузукі Т. Пряме залучення орексинергічних систем до активації мезолімбічного допамінового шляху і пов'язаних з ним поведінків, індукованих морфіном. J Neurosci. 2006: 26: 398 – 405. [PubMed]
  45. Nishino S, Ripley B, Overeem S, Lammers GJ, Mignot E. Дефіцит гіперкотину (орексину) у людській нарколепсії. Lancet. 2000: 355: 39 – 40. [PubMed]
  46. Paxinos G, Watson C. Мозок щура в стереотаксичних координатах. Сан-Дієго, Каліфорнія: Академічна преса; 1998.
  47. Пейрон С, Фарако Дж, Роджерс В., Ріплі Б, Оверім С, Шарне Я., Невсималова С, Олдріч М, Рейнольдс Д, Альбін Р, Лі Р, Хунґс М, Педраццолі М, Падигару М, Кучерлапа М, Фен J, Макі Р , Lammers GJ, Bouras C, Kucherlapati R, Nishino S, Mignot e. Мутація в разі ранньої нарколепсії і узагальненої відсутності пептидів гіпокретину в людських нарколептичних мізках. Nat Med. 2000: 6: 991 – 997. [PubMed]
  48. Пейрон С, Тігхе Д.К., ван ден Пол А.Н., Лечеа Л., Хеллер Х.С., Саткліф Дж.Г., Кілдуфф Т.С. Нейрони, що містять гіпокретин (орексин), проектуються на множинні нейрональні системи. J Neurosci. 1998: 18: 9996 – 10015. [PubMed]
  49. Сакурай Т. Ролі орексинов і рецепторів орексину в центральній регуляції харчової поведінки та енергетичного гомеостазу. ЦНС Нейрол Disord мети наркотиків. 2006: 5: 313 – 325. [PubMed]
  50. Сакурай Т. Нейронна схема орексину (гіпокретин): підтримка сну і неспання. Nat Rev Neurosci. 2007: 8: 171 – 181. [PubMed]
  51. Сакурай Т, Амемія А, Ішіі М, Мацузакі І, Чемеллі Р., Танака Х, Уільямс С., Річардсон Я., Козловський Г.П., Вілсон С., Арк Дж., Букінгем Р.Е., Хейнс А.С., Карр С.А., Аннан Р.С. Терретт Д.А., Ельшурбаг Н.А., Бергсма DJ, Янагісава М. Орексини і рецептори орексину: сімейство нейропептидів гіпоталамуса і рецептори G-білка, які регулюють поведінку харчування. Cell. 1998: 92: 573 – 585. [PubMed]
  52. Satoh S, Matsumura H, Fujioka A, Nakajima T, Kanbayashi T, Nishino S, Shigeyoshi Y, Yoneda H. FOS експресія в нейронах орексину після мусцимольної перфузії преоптической області. Нейрорепортаж. 2004: 15: 1127 – 1131. [PubMed]
  53. Siegel JM. Нарколепсія: ключова роль для клітин гіпокретинів (орексинів). 1999: 98: 409 – 412. [PubMed]
  54. Singareddy R, Uhde T, Commissaris R. Диференціальні ефекти гіпокретинів на шумових і потенційно вражених реакціях. Physiol Behav. 2006: 89: 650 – 655. [PubMed]
  55. Smith RJ, див. RE, Aston-Jones G. Сигналізація орексину / гіпокретину на рецепторі орексину 1 регулює виявлення кокаїну. Eur J Neurosci. 2009: 30: 493 – 503. [PMC безкоштовна стаття] [PubMed]
  56. Solomon A, De Fanti BA, Martinez JA. Периферичний грелін взаємодіє з нейронами орексину при глюкостатичній сигналізації. Regul Pept. 2007: 144: 17 – 24. [PubMed]
  57. Sullivan GM, Neria Y. Фармакотерапія в посттравматичному стресовому розладі: докази з рандомізованих контрольованих досліджень. Curr Opin Investig наркотиків. 2009: 10: 35 – 45. [PMC безкоштовна стаття] [PubMed]
  58. Suzuki M, Beuckmann CT, Shikata K, Ogura H, Sawai Т. Orexin-A (hypocretin-1), можливо, беруть участь у генерації тривожної поведінки. Brain Res. 2005: 1044: 116 – 121. [PubMed]
  59. Tenk CM, Wilson H, Zhang Q, Pitchers KK, Coolen LM. Статева винагорода у самців щурів: вплив сексуального досвіду на сприятливі переваги місця, пов'язані з еякуляцією та втручанням. Horm Behav. 2009: 55: 93 – 97. [PMC безкоштовна стаття] [PubMed]
  60. Thannickal TC, Moore RY, Nienhuis R, Ramanathan L, Gulyani S, Aldrich M, Cornford M, Siegel JM. Зниження кількості нейронів гіпокретину в людській нарколепсії. Нейрон. 2000: 27: 469 – 474. [PubMed]
  61. Thorpe AJ, Cleary JP, Левін А.С., Коц CM. Центральний прийом орексину А підвищує мотивацію для солодких пелет у щурів. Психофармакологія (Берл) 2005, 182: 75 – 83. [PubMed]
  62. Trivedi P, Yu H, MacNeil DJ, Ван дер Ploeg LH, Guan XM. Розподіл мРНК рецептора орексину в мозку щурів. FEBS Lett. 1998: 438: 71 – 75. [PubMed]
  63. Vittoz NM, Schmeichel B, Berridge CW. Гіпокретин / орексин переважно активує каудоміальні вентральні сегменти дофамінових нейронів. Eur J Neurosci. 2008: 28: 1629 – 1640. [PMC безкоштовна стаття] [PubMed]
  64. Volgin Д.В., Swan J, Kubin L. Профілювання генної експресії гена RT-PCR одиночної клітини гостро. дисоційовані і иммуноцитохимически ідентифіковані центральні нейрони. Методи Neurosci. 2004: 136: 229 – 236. [PubMed]