Optogenetika kokain bilan indikatsiyalangan xulq-atvorni sezgirlashda (2) dopamin D2014 retseptorlarini ifodalovchi akumbal o'rta tirnoqli neyronlarning rolini namoyon etadi.

O'tish:

mavhum

Nukleus akumbenslaridagi (NAc) uzoq muddatli, giyohvand moddalarga taalluqli moslashuvlar giyohvand moddalar bilan bog'liq bo'lgan qaramlik harakatlariga hissa qo'shish uchun taklif qilingan. Bu erda kokainga manfiy xulq-atvorda dopamin D2 retseptorlari (D2Rs) ifodalovchi NAc o'rta zarrachali neuronlarning (MSN) rolini o'rganish uchun optogenetik yondashuvdan foydalanganmiz. Kanal xodsutsin-2 (ChR2) kodlovchi Adeno bilan bog'langan virusli vektor D2R-Cre transgenik sichqonlarining NAcga yuborildi. Bu biz NAc ichida D2R-MSNni tanlab fotostimulyatsiya qilishga imkon berdi. D2R-MSN-larni mahalliy inhibitiv elektronlar hosil qiladi, chunki D2R-MSNning fotostimulyatsiyasi qo'shni MSN-larda inhibitor postinaptik oqimlarni (IPSC) uyg'otdi. NAc D2R-MSNning fotostimulyatsiyasi ning Vivo jonli giyoh ta'siridan xulq-atvorga tushirishning boshlanishi yoki ifodalanishi ta'sir ko'rsatmadi. Ammo, giyohvand moddalarni olib tashlash davrida fotostimulyatsiya, giyoh moddalar bilan bog'liq xatti-harakatlarni sezgirlashning zaif ifodasi. Ushbu natijalar, NAX ning D2R-MSN'lari, ajralib chiqadigan plyptitlilikda asosiy rol o'ynaydi va giyohvand moddalarni suiiste'mol qilishni tugatgandan so'ng relapse qilishga yordam beradi.

Kalit so'zlar: optogenetika, o'rta tuproqli neyronlar, dopamin D2 retseptorlari, giyoh, giyohvandlik

Kirish

Dopamin (DA) signalizatsiyasi mukofotni kutish va maqsadga yo'naltirilgan xatti-harakatlar bilan bog'liq (hikmatli, 2004; Goto va Greys, 2005; Berrij, 2007). Dopaminerjik kasalliklarning ma'lum patologiyalaridan biri giyohvandlik (Robinson va Berrij, 1993, 2003). Qo'shishqoq moddalarga takroran ta'sir qilishdan so'ng, DA mesolimbik yo'lida molekulyar va hujayra darajasida adaptiv o'zgarishlar sodir bo'ladi; ular jiddiy salbiy oqibatlarga qaramasdan kompulsiv giyohvand moddalarni qidirish va giyohvandlik harakatlarini davom ettiradigan surunkali, relapsing kasallik bo'lgan giyohvandlikka bog'liqlikni keltirib chiqarishi mumkin (Thomas va boshqalar, 2008; Baik, 2013). Mezolimbik dopaminergik tizimda yuzaga keladigan o'zgarishlarning xarakteristikasi giyohvandlikning tushunchasini tushunish uchun muhimdir.

Dopamin D1 retseptorlari (D1R) va D2 retseptorlari (D2R) striatumning o'rta uchuvchi neyronlarida (MSN) yuqori darajada ifodalanadi. Ventral striatumda, nukleus akumbenslari (NAc) deb nomlanadigan uzoq muddatli giyohvand moddalarni keltirib chiqaradigan moslamalar, giyohvandlikning rivojlanishiga, shuningdek, giyohvand moddalarni qidirish va qayta tiklash harakatlariga yordam beradi (Lobo va Nestler, 2011; Smit va boshq. 2013). Ventral tegmental hududdan olingan dopaminerjik hujayralar asosan NAc ni innervatsiya qiladi. NAc ichidagi hujayralarning 95% qismida MSN, to'rt asosiy miya mintaqasidan kelgan ekspeditsion yozuvlarni oladi: prefrontal korteks, hipokampusning ventral subikulumi, bazolateral amigdala va talamus (Sesak va Greys, 2010; Luscher va Malenka, 2011). NAc ichidagi MSNlar ikkita asosiy subpopulatsiyaga bo'lingan: to'g'ridan-to'g'ri D1Rsni ifodalovchi MSN va to'g'ridan-to'g'ri o'rta miya DA maydonlariga loyihalar, va D2R va ventral pallidumni ifodalovchi MSNlar bilvosita yo'llari (Kreitzer va Malenka, 2008; Sesak va Greys, 2010; Luscher va Malenka, 2011; Smit va boshq. 2013). MSNlar GABAergik bo'lgani sababli, MSN neyronlarining faollashishi GABAergic (Chevalier va Deniau, 1990). Shu sababli, D1R-MSNni faollashtirilishi, keyinchalik mukofotlash bilan bog'liq xatti-harakatlarni tartibga solishga yordam beradigan o'rta miya DA neyronlarini harakatga keltiradi (Luscher va Malenka, 2011; Bocklisch va boshqalar, 2013).

Genetika bilan ishlab chiqilgan sichqonlardan foydalanib, Cre kinematografiyasini hujayra turiga xos tarzda ifodalovchi so'nggi tadqiqotlar kokainga bog'liqlik harakatlarida D1R-MSN va D2R-MSNlar uchun turli rollarni aniqladi. Bunday sichqonlar D1R-MSN yoki D2R-MSNni qay tarzda o'zgartirish uchun maxsus toksinlar, optogenetik problar yoki DREADD (dizaynerlar retseptorlari faqat dizaynerlar tomonidan faollashtirilgan) genetik maqsadini ta'minlaydi. Ushbu yondashuv, MSNning odatdagi xatti-harakatlardagi roli haqida ba'zi konsensuslarga olib keldi: D1R-MSNlar odatdagidek odatdagi xatti-harakatlarni kuchaytiradilar, ammo D2R-MSNs uchun dori vositasida paydo bo'ladigan odatiy harakatlarning rivojlanishida o'ziga xos rol yo'q (yoki inhibitor rol) (Hikida va boshqalar, 2010; Lobo va boshqalar, 2010; Ferguson va boshqalar, 2011; Bock va boshq. 2013). Kokain ta'sir qilish, har ikki MSN popülasyonunda ham sinaptik modifikasyon va gen ekspresyonundaki o'zgarishlarni keltirib chiqaradi (Lobo va boshqalar, 2010; Lobo va Nestler, 2011; Grueter va boshq. 2013). D1R-MSN va D2R-MSNslarning kokain orqali vositachilik qiladigan odatiy xatti-harakatlarda qarama-qarshi rol o'ynashi ko'rinadi, ammo D2R-MSN ning aniq roli aniq emas.

Avval D2R knockout (KO) sichqonlarining oddiy giyoh vositachiligining xatti-xarakteristikasini va kokainga mo'ljallangan xatti-harakatlarini namoyish etgani, D2R (Baik va boshqalar, 1995; Chausmer va boshq. 2002; Sim va boshq. 2013). Biroq, giyohvand moddalarni yo'qotish jarayonida stressga duch keladigan ta'sirlar, D2R KO sichqonlarida kokainga sabab bo'lgan xatti-harakatlarni sezgirlashni va shuningdek kokainni qidirish va relapsing harakatlarini ifodalaydi (Sim va boshqalar, 2013). NAcdagi D2Rning o'ziga xos taqiqoti bazal lokomotor ta'sirga ta'sir qilmaydi, shuningdek, giyoh tomonidan ta'sirlangan xatti-harakatlarga ta'sir etmaydi, ammo stressni kokain bilan indikatsiyalangan xatti-harakatlarni sezgirlashni inhibe qilish qobiliyatini beradi (Sim va boshqalar, 2013). Bu topilmalar NAXdagi D2Rning blokadasi kokainga asoslangan vosita-xurujni oldini olishga to'sqinlik qilmaydi. Aksincha, NAXdagi D2R kokainga qaratilgan va retsessiya harakatlarining o'sishiga olib kelgan stressni keltirib chiqaradigan sinaptik modifikatsiyalarni tartibga solishda alohida rol o'ynaydi (Sim va boshqalar, 2013).

Bu erda kokain bilan indikatsiyalangan xulq-atvorda NAc D2R-MSNning rolini baholash uchun optogenetikani qo'lladik. Miyaning bo'laklaridan foydalanib, D2R-MSNning fotostimulyatsiyasi qo'shni MSNlar bilan bog'liq bo'lgan NAc ichida mahalliy inhibitiv davrlarni faollashtiradi. NAc D2R-MSN-larning fotostimulyatsiyasi ning Vivo jonli giyoh ta'siridan xulq-atvorga tushirishning boshlanishi yoki ifodasi ta'sir qilmaydi. Biroq, giyohvand moddalarni olib tashlash davrida NAc D2R-MSNning takroran faollashuvi kokainga sabab bo'lgan o'ziga xosliklarni kamaytiradi. Bizning natijalarimiz shuni ko'rsatadiki, NAX ning D2R-MSN-lari qayta ishlashga asoslangan plastisitivada asosiy rol o'ynaydi va giyohvand moddalarni suiiste'mol qilishni to'xtatishga yordam beradi.

Materiallar va uslublar

Sichqonchalar

C2Bl / 57 fonida D6-Cre BAC transgenik sichqonlari MMRRC (Mutant Sichqonchasi mintaqaviy Resurs Markazlari, B6.FVB (Cg) -Tg (Drd2-cre) ER44Gsat / Mmucd) dan olingan. D2-Cre sichqonchasi uchun tekshiruv sifatida D2-Cre transgeni yo'qotadigan littermates xatti-harakatlarda ishlatilgan. Sichqoncha harorat va namlikning doimiy shartlari ostida va 12-h nurida, 12-h zulmat jadvali ostida maxsus patogensiz to'siqni muhitda saqlandi. Hayvonlarni parvarish qilish va saqlash Koreya universitetining Institutsional hayvonlarni parvarish qilish va ulardan foydalanish qo'mitalari va KIST tomonidan tasdiqlangan standartlarga muvofiq amalga oshirildi.

Virus vektorini tayyorlash

pAAV-EF1a-DIO-hChR2 (H134R) -EYFP-WPRE saxovatli Karl Deisseroth tomonidan taqdim etildi (Stanford Univ.). AAVni tayyorlash uchun DMEM-muhitda antibiotiklar va FBS bilan HEK293T hujayralari ishlab chiqarildi. Transfeksiyadan bir kun oldin, 90-sm idishlardan 10% kontsentratsiyadan tashqari to'rtta plastinka beshta 15-sm idishlarga yopishtirilgan va 18-22-x uchun inkubatorlar yoki 60-ga 70% konfuzsiyaga qadar. HEK293T xujayralari pAAV-DIO-CHR2-EYFP, pAAV-DJ va pHelper bilan jetPEI transfeksiyon reaktifi (QBiogen) yordamida transfekte qilindi. DNK / DMEM / PEI kokteyllari vortektsiya qilindi va xona haroratida 20 daqiqa davomida inkübe qilindi. Kuluçkadan keyin, transfektsiya aralashmasi har bir 15 sm idishga qo'shimcha qilindi. Transfektsion hujayralar transfeksiyadan keyin hosil bo'lgan 48 soatda hosil qilindi va 0.5-soat uchun 6750% natriy deoksikolat (Sigma; D50) va 1014 birliklari / ml benzonaz nukleaz (Sigma, E37) bilan inkubatsiyalangan edi. 1 daqiqada 3000x dan santrifugatsiya qilish orqali hujayra chiqindilarini olib tashlangandan so'ng, suyuq moddalar 15 mm PVDF filtrida (Millipore) filtrlanadi. AAV-DJ zarralarining tozalanishi HiTrap heparin bilan bog'langan ustunlar (GE Healthcare) yordamida amalga oshirildi. AAV konsentratsiyasi uchun 0.45 molekulyar vaznli kesilgan Amicon ultra-15 santrifüj filtri qurilmalari ishlatilgan. Konsentratsiyalangan virus -100,000 ° C da saqlash uchun qotiriladi va muzlatiladi. Oxirgi virusli kontsentratsiyalar 80 ~ 3 × 6 edi12 Har bir AAV uchun ml ga virus zarralari.

Stereotaksik in'ektsiya va optik tolali joylashtirish

Tana vazniga har bir gramm uchun 1.6 ll Zoletil va 0.05 ll ksilazin (Rompun, Bayer) ip in'ektsiyasida hayvonlar behushlik qilindi va stereotaksik apparatga joylashtirildi (David Kopf Instruments, Tujunga, CA). Viruslarni kiritish uchun 31 o'lchovli shprits ignasi 2 ul / min tezlikda ikki ul virusni NAc ga 0 ° burchak ostida (AP +1.7; ML ± 1.3; DV -4.5) quyish uchun ishlatilgan. Sekin-asta tortib olinmasdan oldin igna ukol qilinganidan keyin 0.1 daqiqa davomida joyida qoldi. Implantatsiya uchun optik-tolali kanula sirkoniy ferruladan (diametri 10 mm va uzunligi 1.25 mm) va optik tolaning yassi uchidan (diametri 4.5 µm) iborat edi. D200-MSNlarni yoritish uchun optik-tolali kanulani NAc ga implantatsiya qilish viruslar kiritilgandan so'ng darhol amalga oshirildi. Optik-tolali kanulani o'rnatish uchun koordinatalar NAc ni nishonga olish uchun 2 ° (AP +0; ML ± 1.7; DV -1.35) burchakka teng edi. Optik tolani o'rnatishga yordam berish uchun ikkita vintni optik tolali kanül joylashtirilgan joyning orqa tomoniga bosh suyagiga bog'lab qo'yilgan. Optik-tolali kanulani bosh suyagiga mahkamlash uchun bosh suyagi yuzasiga kanula poydevori atrofida C&B Superbond (Sun Medical) surtilgan. C&B Superbond qotib qolgandan so'ng, kanula ushlagichidan bo'shatildi va kanula va vintlar atrofida tish tsementi (Poly-F, Dentsply) surtildi. Kanulyatsiya joyi atrofidagi kesmani yopish uchun Vetbond to'qima yopishtiruvchisi (4.2 M, 3) ishlatilgan. Implantatsiyadan so'ng sichqonlarga ketma-ket 7003449 kun davomida antibiotiklar (Enrofloksatsin, 5 mg / kg, q 12 soat) va og'riq qoldiruvchi vositalar (Karprofen, 5 mg / kg, q 24 soat) teri ostiga yuborildi.

In Vivo jonli fotostimulyatsiya

200 mk patch kordi surtma bilan joylashtiriladigan optik tolalarning tashqi qismiga ulangan. Optik tolalar FC / PC adapteridan ko'k lazerli diyotga (473 nm, MBL-III 473-150 mW) ulangan va stimulyator orqali (BNC 575) yorug'lik pulslari hosil qilingan. ChR2-expressing neyronlarning fotostimulyatsiyasi uchun stimulyatsiya paradigmasi 20 Hz chastotasi, 5 milodiy zarba muddati va 2-5 mW nur ​​kuchiga tenglashdi. Yamoq simini chiqaradigan yorug'lik quvvati S100C nur sensori bilan quvvat o'lchagichi (PM121D) yordamida o'lchandi.

Davriy tahlil

2-11 haftalardagi erkaklar uchun D13-Cre sichqonlari bilan, 5-6 hafta bo'lgan elektrofizyologik tahlilga ta'sir qilingan sichqonlardan tashqari, qiziqishlariga oid tajribalar o'tkazildi. Yoshga mos keladigan D2-Cre va CRE-ning salbiy nazorat sichqonchalari virus bilan AOK qilingan va alohida-alohida joylashtirilgan va xatti-harakatlarigacha qafasga moslashgan. Har bir manipulyatsiya uchun sichqon eksperimental xonaga eksperimentning boshlanishidan oldin 60 minutga o'tkazilib, u odatlanish va stressni kamaytirish uchun (eksperimental xonaning yorqinligi 70 lyuks) edi. Har bir eksperimental apparat har qanday potentsial hidlarni olib tashlash uchun tajribalar orasidagi 70% o'rganish bilan tozalanadi.

Kokain sezuvchanligi

Kokain sezuvchanligini boshlash uchun sichqon 3 ketma-ket kuniga sho'rlangan in'ektsiyalarga (ipga) joylashtirilgan va sho'r yoki kokain bilan (15 mg kg-1, ip) 5 ketma-ket kun uchun. Sichqonlarga 0.9 G ignasi bilan salin (30% NaCl) yoki sho'rlangan eritilgan kokain gidroxloridi (Jonson Mattney, Edinburgh, UK) bilan intraperitoneal (ip) AOK qilingan. Har bir inyeksiyadan so'ng, sichqonlar 30 min uchun ochiq maydon xonasida gorizontal lokomotor faoliyat uchun sinovdan o'tkazildi. Fotostimulyatsiyani sensitizatsiyalashning boshlanishi va ifodasi ta'sirini o'lchash uchun (shakl (Rasmمورمورمور5), 5), sichqonlarga uy hujayralarida 3 minli seans davomida to'rtta 30-min davrlari uchun NAcga er-xotin optik-optik patch kordlari orqali ikki tomonlama ko'k chiroq berildi. Sichqoncha boshida joylashgan optik-tolali kanülün patch kordonları chiqarildi va sichqonlarga kamida 10 minlik dam olish beriladi. Keyin sichqonchani kokain yoki sho'r suv bilan (kok 1d-coc 5d) AOK qilingan. Sensitizatsiya boshlanganidan so'ng, kokain 14 kun davomida hech qanday sho'rsiz in'ektsiyalarsiz olib tashlandi. Ushbu qaytarib olish davri mobaynida hech qanday fotostimulyatsiya qo'llanilmadi. Keyin giyohga nisbatan xulq-atvorning ifodasi, dori dozasini dozalash yo'li bilan aniqlandi (10 mg kg-1, ip) shaklida ko'rsatilgan NAc fotostimulyatsiyasidan keyin Figure5A.5A. Kokainni yo'qotish davrida fotostimulyatsiya samarasini o'lchash uchun (shakl (Rasm 6), 6), sichqonchani yuqorida ta'riflanganidek, sezuvchanlik uchun xuddi shu protokolga bo'ysundi (rasm Rasm 5)) fotostimulyatsiyadan tashqari. Kokain sezuvchanligi boshlanganidan so'ng, kuniga 1 kunlik jami olib tashlash vaqtida 14 soat uchun har kuni NAc ga fotostimulyatsiya qo'llanildi. 14 kundan so'ng chiqarilgan sichqonlarning barcha guruhlari kokainning dozalash dozalari bilan (AHMSX mg kg-1).

Shakl 1 

Nucleus accumbens-da o'rta tirnoqli neyronlarning selektiv fotostimulyatsiyasi. (A) NAIC D2R neyronlaridagi ChR2ning AAV-DIO-ChR2-EYFP virusli vektorlarini etkazib berish orqali selektiv ifodasi. o'lchamli panellar: fon rasmlari, 1 mm: qo'shing, 200 mm. (B) Konfokal tasvirlar ...
Shakl 2 

D2RCre-MSN-larning fotostimulyatsiyasi mahalliy inhibitiv davrlarni boshqaradi. (A) ChrxNUMX va ChR2 ni ifodalovchi qo'shni xujayralarni (o'q tanasi) ifodalaydigan va fotostimulyatsiya qilinishi mumkin bo'lgan bo'yoq to'ldirilgan neyronni ko'rsatuvchi jonli NAc tilining konfokal imgesi. (B) IPSC ...
Shakl 3 

NAc hujayralarining xususiyatlari. (A) Neyronlarning ikki fotonli floresans tasvirlari Alexa 594 bilan to'ldirilgan. (A1) ChR2 + / AP guruhidagi neyronni ko'rsatadi (A3) ChR2- / IPSC guruhidagi bir neyronni ko'rsatadi. (A2) va (A4) yuqori magnitlangan tasvirlar ...
Shakl 4 

NAX ning D2-MSNs ning in-vivo optogenetik aktivatsiyasini bazal lokomotor ta'sirga ta'siri. (A) D2 sakkizta ko'rinishi AAV-DIO-ChR2-EYFP bilan NAc-ga AOK qilingan sichqonchani sichqonlari, so'ngra optik tolali kanüllerin ikkitomonlama implantatsiyasi. 473 nm ko'k rangli stimulyator ...
Shakl 5 

D2-MSNning sezuvchanlik davrida kokainga faollashuvi. (A) D2-MSN-larni surunkali giyohvandlikka qarshi boshlash va ifoda etishda suratga olish uchun eksperimental sxema. Moviy nurli yoritish (2 ~ 5 mW, 5 milodiy, 20 Hz) to'rt ...
Shakl 6 

D2-MSNning qayta ishlash jarayonida takrorlangan kokain ta'siriga ta'siri. (A) D2-MSNni kokainga olib chiqishda suratga olish uchun eksperimental sxema. Moviy nurli yoritish (2 ~ 5 mW, 5 milodiy, 20 Hz) sakkiz 3-min davr uchun yetkazildi ...

Immunofluoresans va konfokal lazer mikroskopi

Immunofluoresans uchun sichqonchalar Zoletil (Virbac, 1.6 ml / g, intraperitoneal) va 0.05 ml / g Rompun (Bayer) bilan behush holatga keltirildi va 0.1% paraformaldehid / PBS eritmasi (Sigma) yordamida fiksator sterillangan 4 M PBS bilan perfuz qilindi. Keyin miya yuqoriga ko'tarilib, muzdan sovuq holatda bo'lgan xNUMX soat uchun o'rnatildi. Keyin miya 4 kun davomida 30% sukroz / 0.1 M PBSda suvsizlangan. Brayinlar muzlatilib, 2-mkm qalinligi bilan bir qatorda kristalli (Leica CM 40, Germaniya) ustida ketma-ket koronal qismlar tayyorlandi. 1900% normal echki sarlavhasi va 40% Triton X-1 o'z ichiga olgan 0.1 M PBSda (5 μm) bo'limlarda (0.2 μm) 100 sutkada 2 ° C darajasida quyon poliklonal anti-D1R (500: 5084, Millipore, AB4P) bilan inkubatsiyalangan. 0.2% Triton X-100 o'z ichiga olgan PBS bilan yuvilganidan so'ng, namunalar RN-da Alexa Fluor 1 echki qo'ziqorini IgG (568: 1; Molecular Probes, Eugene, OR, USA) va 500 ml / ml 0.2 bilan 4-da inkübe qilindi, 6% oddiy echki sarum va 2% Triton X-1 o'z ichiga olgan PBS ichida 0.2-diamidino-100-fenil-indol HCl (DAPI, Sigma, Sent-Luis, MO, AQSh). Salbiy nazorat sifatida DAPI va ikkilamchi antikor bilan namunalar inkübe qilindi. Bo'limlar C1 Plan Apo × 40 / 1.4 suv konfokal lazerli skanerlash tizimi bo'yicha ko'rib chiqildi (LSM 700, Zeiss, Berlin, Germaniya).

Nucleus accumbens dilimida elektrofizyologiya va fotostimulyatsiya

Sichqoncha ChR4-EYFP ning optimal ekspresatsiyasiga erishish uchun virusni yuborishdan keyin 2 hafta o'tgach eksperimentlar o'tkazish uchun ishlatilgan. Sichqoncha keyinchalik miyyaning o'tkir mushaklarini tayyorlash uchun behushlik va dekapitatsiya qilindi. Miya tezda chiqarildi va zudlik bilan (mM) 250 Sucrose, 26 NaHCO3, 10 D-Glyukoza, 3 Myo-inositol, 2.5 KCl, 2 Na-pruvate, 1.25 NaH2PO4, 0.5 Askorbin kislotasi, 1 Kynurenic kislotasi va 7 MgCl2 95% O bilan qovurilgan2/ 5% CO2 (pH = 7.4). NAc ni o'z ichiga olgan koronal miya bo'laklari (250 mkm qalinligi) vibratome (Leica VT 1200 S) yordamida tayyorlangan va undan keyin (mMda) gazli sun'iy miya omurilik suyuqligi (ACSF) ichida inkübe qilingan: 11 D-glyukoza, 125 NaCl, 25 NaHCO3, 1.25 NaH2PO4, 2.5 KCl, 1.25 MgCl2 va 2.5 CaCl2 34-daqiqada 1-daqiqada saqlash uchun. Keyinchalik chiziqlari O ni tashkil etuvchi submersion ro'yxatga olish kamerasiga o'tkazildi2to'yinmagan ACSF eritmasi doimo superfusheed qilindi. NAc va VTAdagi hujayralar 2X suvga chidamli linzali va infraqizil DIC optikasi bilan jihozlangan 1000-foton mikroskopi (Olympus FV25 MPE, Tokio, Yaponiya) yordamida tasvirlangan. Ko'p hujayrali 700B kuchaytirgichi va Digidata 1440A digitizer (Molecular Devices, MChJ) bilan NAc xujayralaridan butun hujayra patch kelepsi yozuvlari olingan. Ma'lumotlar pCLAMP 10.2 dasturidan foydalangan holda tahlil qilindi va Clampfit 10.2 dasturidan (Molecular Devices, LLC) undan keyin tahlil qilindi. 3-5 MΩ o'rtasidagi qarshilikka ega bo'lgan patch elektrodlari (mMda) o'z ichiga olgan ichki eritma bilan to'ldirilgan: 130 K-glyukonat, 2 NaCl, 2 MgCl2, 20 HEPES, 4 Na2ATP, 0.4 Na3GTP, 0.5 EGTA va 10 Na2- 7.3 N KOH yordamida pH qiymati 1 ga sozlangan fosfokreatin. Bikukullin (10 UM) eksperimentlarning bir qismida GABA retseptorlarini blokirovka qilish uchun miya bo'lagiga vanna bilan surtilgan.

ChR2-EYFPni ifodalovchi NAc xujayralari LED yorug'lik manbai (460 ± 27 nm, UHP-Mic-LED-460, Prizmatix) bilan fotostimulyatsiya qilingan. LEDdan kelayotgan ko'k chiroq bir haydash filtri (470-495 nm) bilan jihozlangan filtri kubi bilan qo'shimcha filtrlanadi va zaiflanadi; yorug'lik yonadi (10 milodiy vaqt, 0.0366-0.354 mW / mm2) 25 ob'ekt ob'ektiv orqali miya qismiga 5-40Hz chastotalarida etkazib berildi. Eksperimentlarning bir to'plamida, fotosintezlar 2 s davomiyligidagi yorug'likka javoban ChR2-eksperiment hujayralarida o'lchandi.

Statistik tahlil

Ma'lumotlar vosita sifatida taqdim etilgan va ikkitomonlama talabalar bilan tahlil qilingan tBonferroni tomonidan ta'qib qilingan yoki ikki tomonlama varyans tahlillari bilan post hoc sinov. A P-0.05 qiymati statistik jihatdan ahamiyatli hisoblanadi.

natijalar

Nucleus accumbens-da o'rta tirnoqli neyronlarning selektiv fotostimulyatsiyasi

NAc D2R-MSNsning giyoh vositasi bilan bog'liq bo'lgan o'ziga xoslikdagi rolini aniqlash uchun NAc D2R neyronlarini rag'batlantirish uchun optogenetik yondashuvdan foydalanganmiz. NAXda D2R-MSNning faolligini nazorat qilish uchun AAV-DIO-ChR2-EYFP kodlovchi virusli vektorlar D2R-Cre BAC transgenik sichqonlarining NAcga stereoteksik ravishda AOK qilindi. Virusli in'ektsiyadan keyingi 4 hafta davomida NAXda ChR2-EYFP ning mustahkam ifodasi kuzatilgan (shakl (Rasm 1A) .1A). D2R-MSNda ChR2 iborasining o'ziga xosligi immunofluoresans konfokal tahlillari bilan tasdiqlangan: YFP-etiketli ChR2 ning ifodasi NAX da D2R bilan birgalikda joylashgan (shakl (Rasm 1B), 1BChX2 ning NAX ning D2R-expressing neyronlari bilan ifoda etilganligini ko'rsatib berdi.

Bunday yondashuv boshqa ishlar (masalan, Lobo va boshqalar, 2010), virusni in'ektsiya qilish protseduralari tafsilotlari laboratoriya laboratoriyasidan boshqasiga farq qiladi, bu bizning maxsus eksperimental sharoitlarimizda optogenetik tekshiruvni hujjatlashtirish muhim ahamiyatga ega. NAc tilimdagi MSN-lardan butun hujayra patch qisqichlarini yozish orqali ChR2ning funktsional ifodasini baholadik. MSNlar quyidagicha aniqlandi: (1) Nisbatan hiperpolarizatsiya qilingan membran potensiali (RMP), odatda 80 mVdan salbiyroq; (2) tatbiq oqim pulslariga javob berishda muntazam ravishda APning o'tishi; (3) joriy zarba davomida birinchi APni otish uchun uzoq vaqt kechikish; (4) hiperpolarizatsiya bilan faollashtirilgan kation oqimining (Ih); va (5) hujayra jismlarining nisbatan kichik hajmi (Chang va Kitay, 1985; O'Donnell va Greys, 1993; Le Moin va Bloch, 1996; Taverna va boshq. 2008). Ko'k chiroq (470 nm) butun ko'rinish bo'yicha qo'llanildi (0.78 mm2), MSN-ni esa -69 mV gacha bo'lgan o'lchash potensialida kuchlanish bilan kesish. Ba'zi MSNlar ChR2 ni ifodalaydilar, bu ularning somadagi YFP floresansi sifatida namoyon bo'ladi (Raqamlardagi o'qlar) 1C1, C3). Bunday neyronlar sezilarli fotosintezlar namoyon etar ekan, yorug'likning yanada yorqinligi yuqori fotokarqotlarni keltirib chiqaradi. (Rasm 1D) .1D). Yuqori fotokorus amplitudasi va yorug'lik qizg'inligi o'rtasidagi munosabatlar (rasm (Rasm 1E) 1E) 0.054 ± 0.0023 mW / mm yarm maksimal nur hassosiyatiga ega edi2 va 1.16 ± 0.16 nA (maksimal ± sem, n = 4).

Amaldagi yoritgich sharoitida ChR2 yorug'lik pulslarining poezdlariga ishonchli tarzda javob beradigan MSNni ifodalovchi MSNlar (10 milodiy davomiyligi; Shakl. 1F) .1F). Ushbu shartlar ostida, 0.1 mW / mm dan yuqori yorug'lik zichligi2 APlarni chaqirish uchun etarli bo'lgan (rasm (Rasm 1G, 1G, n = 5). APlar ishonchli tarzda 20 gts ga qadar fotostimulyatsiya chastotalarida ishonchli tarzda uyg'unlashdi, 40da esa yorug'lik bilan bog'liq javoblar doimiy ta'sirchan depolarizatsiyaga sabab bo'ldi, bu esa APlarni chaqirishda kamroq ta'sir qildi (Fig. 1F, G).

D2R-MSN-larning fotostimulyatsiyasi mahalliy inhibitiv aylanishlarni boshqaradi

NAc'dagi mahalliy elektronlardagi D2R-MSNs faoliyati natijalarini o'rganish uchun ChR2-salbiy MSN-larda postinaptik javoblarni o'lchayotganda, biz ChX2ni ifoda etgan msformimatsiyali MSNni (Phots (Rasm 2A) .2A). Shaklda ko'rsatilgan neyron Rasm 2A2A EYFP floresansining yo'qligi bilan bir qatorda ChR2ni ifodalaydi, shuningdek, shakllardagi qisqa muddatli fotosintezlarning yo'qligi Figure1D.1D. Biroq, postsinaptik MSN-69 mV potentsiali sifatida tutilganda, 10 milodiy chastotali chiroq 9.0 ± 0.42 milodiy (kechikishidan keyin) uyg'ongan tashqaridagi oqimni o'chiradi. (Rasm 2B, 2B, n = 15). Ushbu javoblarning xususiyatlarini aniqlash uchun postsinaptik membran potensiali -99 mV dan -39 mV oralig'ida, yorug'lik chirog'i qo'llanilgan (shakl (Shakl 2C) .2C). Yorug'lik bilan bog'liq javoblar membran potentsiali bilan farqlanadi (Rasm (Rasm 2D, 2D, n = 6) va kutupluluklarını -81 ± 3.4 mV'de farqli ravishda aylantirdi. Ionik sharoitlarda xlorid ionlari uchun muvozanat potensiali -80 mV bo'lganligi sababli, nurga bog'liq tashqi oqimlar postsinaptik GABA vositachiligidagi xlorid oqimi bilan bog'liq bo'lishi mumkinA retseptorlari. Ushbu imkoniyatni tekshirish uchun GABAA retseptorlari antagonisti bikukulin (10mM) tashqi eritma qo'shildi. Ushbu preparat nur bilan bog'liq bo'lgan javoblarni butunlay to'sib qo'ydi (2-rasm) (Rasm 2B), 2B) yoritilgan javoblar GABAergik inhibitory postsinaptik toklar (IPSC) ekanligini tasdiqladi.

Fotostimulyatsiyaga oid javoblarga asoslanib, biz qayd qilgan MSNlar 4 guruhlaridan biriga tasniflanishi mumkin: (1) hujayralar yuqorida ta'riflangan fotostimulyatsiyaga (ChR2 + / AP) javoban APni yoqish uchun etarli miqdorda ChR2ni ifodalaydi; (2) hujayralar ChR2ni ifodalaydi, bu esa nurga javoban substherhold depolarizatsiyasini uyg'otdi (ChR2 + / no AP); (3) ChR2 ni ifodalashga ega bo'lmagan, ammo ChR2 (ChR2- / IPSC) ifodalovchi presinaptik MSNdan nurli IPSClar qabul qilgan jim hujayralar; va (4) ChR2-salbiy xujayralari boshqa MSNlar (ChR2- / No IPSC) fotostimulyatsiyasiga javoban IPSClarni namoyish qilmagan. Bu toifalarning har biridagi hujayralarning nisbatan nisbati shaklida ko'rsatilgan Rasm 2E2E (n = 53). Umuman, hujayralarning deyarli yarmi (45.3%) ChR2 (guruhlarning yig'indisi (1) va (2)) ifodalangan. Fotostimulyatsiyaga javoban biz qayd qilgan MSNsning hech ikkisi fotosintez va IPSC ni namoyish qildilar; bu D2R-pozitiv MSNlar NAc ichida bir xil hujayra populyatsiyasining boshqa a'zolarini innervatsiya qilmasligini bildiradi.

Nurga berilgan javoblarning bu klassifikatsiyasi ChR2 + / No AP hujayralarining (guruh 2) va ChR2- / No IPSC xujayralarining (guruh 4) fotostimulyatsiyasi elektron faoliyatiga hissa qo'shadigan har qanday elektr signallarini ishlab chiqarmaydi. Shunday qilib, fotostimulyatsiyani elektron funksiyasiga ta'sirini aniqlash uchun biz NAC fotostimulyatsiyasi vaqtida APlarni ishlab chiqaradigan ChR2 + / APM MSN (1 guruhi) xususiyatlarini batafsil tavsifladik va Ch2- / IPSC xujayralari (guruh 3) ChX2 + / APs MSN-lariga postinaptik, chunki ular nurli IPSC-larni oladi. NAc'teki ChR2 + / AP va ChR2- / IPSC xujayralari, ikkalasi ham zararli nöronlar (Rasm 3A) .3A). Ushbu ikki guruhda neyronlarning morfologik yoki elektrofizyolojik xususiyatlarida sezilarli farqlar mavjud emas edi. Masalan, ushbu ikki guruhdagi neyronlarning somati kattaligi bilan bir xil (rasm (Shakl 3B) .3B). Bundan tashqari, ularning RMP'lari (-83.0 ± 1.7 vs. 85.0 ± 1.8 mV; o'rtacha; n = 10, shakl 3C)) va kirish qarshiliklari (113 ± 15 va boshqalar. 133 ± 13 MΩ, n = 6, shakl Rasm 3D)) ham farqlanmagan (p > 0.05 ikki dumli talaba t(masalan, tetiklik) 3E, F) ham shunga o'xshash (p > 0.05 ikki dumli talaba t-test, n = 6). Xullas, NAX ning D2R-MSN-larning fotostimulyatsiyasi D2R-MSNga juda o'xshash, lekin D2Rni ifodalovchi postsinaptik neyronlar bilan mahalliy inhibitiv davrlarni faollashtiradi.

Qo'qon tomonidan ta'sirlangan xulq-atvorda NAc D2R-MSNning optogenetik stimulyatsiyasi

Keyinchalik biz xatti-harakatlarning natijalarini o'rganib oldik ning Vivo jonli NAc D2R-MSN-larning fotostimulyatsiyasi. Dorsal striatumda D2R-MSNning fotostimulyatsiyasi lokomotor samaradorlikni pasaytiradi (Kravitz va boshqalar, 2010), D2R-MSN aktivlashtiruvchisi bazal lokomotor faoliyatiga ta'sirini aniqlash bilan boshladik. Shu maqsadda D2R-Cre sichqonlari DIO-AAV-ChR2-EYFP virusi bilan ikki tomonlama NAc (D2-Cre (+) NAc-ChR2) ichiga AOK qilingan. D2R-MSNlar ko'k chiroq bilan fotostimulyatsiya qilingan (473 nm, 5 milodiy zarba muddati, 20 Hz) optik tolalar orqali NAc ga etkazilgan. Photostimuli sichqoncha lokomotorlardagi faoliyatni ro'yxatga olish kamerasida saqlanganda 3 min sessiya davomida to'rtta 50-min davomiylik davomida qo'llanildi (shakl (Rasm 4A) .4A). Shu bilan bir qatorda, Cre v Cre vt littermate sichqonlari ham xuddi shunday virus bilan AOK qilindi va shunga o'xshash ko'k chiroqli nurni olishdi. D2-Cre (+) NAc-ChR2 sichqonlari D2R-Cre (-) NAc-ChR2 sichqonlariga nisbatan taqqoslanadigan yoki biroz yuqori darajadagi bazal lokomotorlik darajasini ko'rsatdi (Fig. 4B, C). D2R-MSNda D2R-MSN (+) NAc-ChR2 sichqonlarining fotostimulyatsiyasi nurni stimulyatsiya to'xtaganidan keyin tiklangan lokomotor harakatlarda sezilarli kamayishga olib keldi (shakl (Shakl 4B) .4B). D2R-Cre (-) NAc-ChR2 sichqonchasida bunday ta'sirlar kuzatilmadi (shakllar 4B, C), bu fotostimulyatsiya ta'sirining miya to'qimasini isitilishi kabi mumkin bo'lmagan o'ziga xos ta'sirlardan ko'ra, ChR2ning faollashuvi natijasida yuzaga kelganligini ko'rsatmoqda. Shuning uchun bizning ma'lumotlarimiz NAXdagi D2R-MSNning fotostimulyatsiyasi lokomotor faoliyatdagi kamayishini ko'rsatdi.

Ushbu natijalar NAc ichida D2R-MSNning faoliyatini nazorat qilish qobiliyatimizni o'rnatdi ning Vivo jonli. Keyinchalik bu qobiliyatni D2R-MSN faoliyatining xatti-harakatlarni sezgirlashda ta'sirini kokainni takroriy boshqarishga qayta ko'rib chiqdik. Xulq-atvori sezgirlashi keyingi dori ta'sirini lokomotor samaradorlikni rag'batlantirish qobiliyatini oshirish uchun giyoh kabi psixostimulyatorlarga birinchi maruziyetini ta'minlovchi jarayonni anglatadi. Ushbu jarayon boshlash va ifodalash fazalariga ajralib turishi mumkin: initsiyalash xatti-harakatlarni sezgirlashni keltirib chiqaradigan bevosita neyrok voqealarni tasvirlaydi (Vanderschuren va Kalivas, 2000; Sim va boshq. 2013) ifodasi, giyohvand moddalarni olib tashlaganidan keyin davom etadigan uzoq vaqt davom etadigan yurak-tomir plyifikatsiyasining shaklidir (Vanderschuren va Kalivas, 2000; Sim va boshq. 2013). Shuning uchun biz kokain bilan indikatsiya qilingan kokainni takroriy intraperitoneal (ip) in'ektsiyasida, bu bosqichlarning har birida NAX ning D2R-MSN'lerin faoliyatini nazorat qilish uchun optogenetika usullarini qo'llash orqali tekshiramiz.

3 kun davomida sho'r kiritishga odatlanganidan so'ng, sichqonchani 15 kunida kokain bilan (5 mg / kg) AOK qilindi va har bir inyeksiyadan keyin 30 min uchun lokomotor javoblar qayd etildi (shakl (Rasm 5A) .5A). Photostimuli 30 min sessiyada, 3 min davrda 5 daqiqada yorug'lik o'chirilgan joyda, XNUMX dyumlik yorug'lik davrlarini kesib o'tdi. (Rasm 5A) .5A). NAcdagi D2R-MSN ning fotostimulyatsiyasi bazal lokomotor samaradorlikni pasaytiradi. (Rasm 4), 4), fotokimyo kokainga qarshi ta'sir o'tkazish xatti-harakatlarining mumkin bo'lgan aralashuviga yo'l qo'ymaslik uchun giyoh qo'llanilguncha darhol topshirildi.

Ikkala nazorat D2-Cre (-) NAc-ChR2 sichqonchasi va D2-Cre (+) NAc-ChRNNUMX sichqonlari takrorlangan kokain inyeksiyalariga javoban lokomotor faoliyatida sezilarli o'sish kuzatilgan (shakl (Rasm 5B), 5B), sezgirlikning boshlanishini ko'rsatib beradi. NAXdagi D2R-MSN'larni fotostimulyatsiya qilish xatti-harakatlarning sensitizatsiyasini boshlashiga ta'sir qilmaydi, chunki kokain bilan indikatsiyalangan xulq-atvori D2-Cre (+) NAc-ChR2 sichqonlarida o'xshash va D2-Cre (-) NAc-ChR2 sichqonlarini nazorat qilishda o'xshardi.

15 kun davomida bunday kokainni (5 mg / kg) in'ektsiyasini takrorlash orqali xatti-harakatlarni sezgirlashni boshlashdan so'ng preparat 14 kun davomida qaytarildi va sezuvchanlik ifodasi darajasi past dozda kokainga ega bo'lgan sichqonchani (10 mg /kg). Sensizatsiyani ifodalash - giyohvand moddalarni olib tashlangandan keyin ham davom etadigan uzoq vaqt davom etadigan yurak-tomir tusiga ega bo'lgan (Steketee va Kalivas, 2011; Sim va boshq. 2013). D2R-MSNning sensizatsiyani ifodalashdagi rolini o'rganish uchun NAc kokainni yuborishdan oldin fotostimulyatsiya qilingan (Fig. (Rasm 5A) 5A) va sezuvchanlik kokainning inyeksiya qilinishiga olib keladigan lokomotor faoliyat miqdori sifatida aniqlandi.

D2-Cre (-) NAc-ChR2 sichqonlari (D2-Cre (-) :: coc-coc) va D2-Cre (+) NAc-ChR2 (D2-Cre (+): : coc-coc) - sezuvchanlikning aniq ifodasi yuzaga keldi (2-rasm) (Shakl 5C) .5C). Qo'qon-qo'zg'atadigan lokomozion o'zgarishlar vaqtlari ham ikki guruh o'rtasida o'xshash bo'lgan (rasm (Rasm 5C), 5C), ikki guruh o'rtasida sezilarli farq yo'q edi. Birgalikda olingan ushbu ikki fotostimulyatsiya tajribasi, NAc'teki D2R-MSN'lerin aktivasyonunun, giyoh tomonidan indüklenen xatti-duyarlılığının başlatılmasına yoki ekspresyonuna ta'sir qilmaganligini ko'rsatadi.

Dori vositasini olib tashlash jarayonida NAc D2R-MSNning fotostimulyatsiyasi

Takrorlangan kokain ta'siridan so'ng dori chiqarish vaqtida surunkali stress stressni keltirib chiqaruvchi D2R-ga bog'liq bo'lgan adaptatsiya mexanizmini tanlab oladi va natijada NAcdagi sinaptik plastisitda o'zgarishlar bilan bog'liq holda kokainni izlash va relapsing harakatlarida kuzatiladi (Sim va boshqalar, 2013). Bu giyohvand moddalarni olib tashlash bilan shug'ullanadigan mexanizmlar giyohvand moddalar bilan bog'liq bo'lgan sezuvchanlik bilan shug'ullanadigan shaxslardan farq qiladi. Keyingi bosqichda, D2R-MSNning giyohvand moddalarni olib tashlash vaqtida fotosintez qilinishi kokainga sabab bo'lgan xatti-harakatlarni sezgirlashni ifodalaydi.

Yuqorida aytib o'tilganidek, kokainni takroriy in'ektsiyalash yo'li bilan xatti-harakatlarni sezgirlashni boshlaganidan so'ng, DNNUMX-Cre (-) va D2-Cre (+) sichqonlari 2 kunlik yig'ish davri uchun ikki guruhga bo'lingan: bir guruh kunlik ko'k nurni stimulyatsiya qilishga 14 soat uchun NAc (1 min × 3 marta), qolgan guruh esa (Fig. (Rasm 6A) .6A). D2R-MSNning kokainni chiqarish vaqtida takrorlangan fotostimulyatsiyasi D2-Cre (-) :: coc-coc sichqonlarida sezuvchanlik ifodasini ta'sir qilmadi (shakl (Shakl 6B) .6B). Buning aksincha, D2-Cre (+) :: coc-coc sichqonlarida, sezuvchanlik ifodasi preparatni qaytarib olishda takroriy fotostimulyatsiya bilan sezilarli darajada kamaydi (Rasm 6B), 6B), garchi lokomozaning kokainga sabab bo'lgan stimulyatsiyasi vaqtining ta'sir etmasa (Fig (Shakl 6C) .6C). Shunday qilib, D2R-MSNning giyohvand moddalarni olib tashlash vaqtida NAc ning fotostimulyatsiyasi kokainga bog'liq bo'lgan xulq-atvorli ta'sirini kamaytirishni kamaytirdi (kokain, F(1,18) = 11.08, P = 0.0037, shakl Shakl. 6B) .6B). Ushbu ma'lumotlar D2R-NAc MSNning giyohvand moddalarni olib tashlash davrida faollashuvini kokainga qaratilgan va relapse harakatlariga ta'sir ko'rsatadi.

muhokama

Muhim dalillar kokainga sabab bo'lgan xatti-harakatlarni sezgirlashning ventral tegmental hududi, prefrontal korteks va yadro akumbenslarini (NAc) o'z ichiga olgan mezokortikolimbik tizimda rivojlangan dopaminerjik uzatish bilan bog'liqligini ko'rsatadi. Ayniqsa, xulq-atvori sezgirlashning ifoda fazasi adaptatsiya mexanizmlari kaskadiga bog'liq bo'lgan dori to'xtatilgandan so'ng doimiy dori hiper ta'sirchanligi bilan tavsiflanadi (Kalivas va Duffy, 1990; Robinson va Berrij, 1993; Kalivas va boshqalar, 1998) kompulsiv giyohvand iste'moliga hissa qo'shishi mumkin (Robinson va Berrij, 1993; Kalivas va boshqalar, 1998; Steketee va Kalivas, 2011). NAc ichidagi molekulyar, hujayrali va xulq-atvorli plastisitlarda, MSNda DA retseptorlari signalizatsiyasi bilan birgalikda, giyoh moddalar bilan bog'liq bo'lgan giyohvandlik xatti-harakatlarini tartibga solishi mumkin bo'lgan (Lobo va boshqalar, 2010; Shmidt va Pirs, 2010; Ferguson va boshqalar, 2011; Pascoli va boshq. 2011; Bocklisch va boshqalar, 2013; Grueter va boshq. 2013).

Kreinning rekombinatsiyasini shartli ravishda ifoda etgan genetik jihatdan yaratilgan sichqonlardan foydalangan so'nggi tadqiqotlar kokain qo'shadi xatti-harakatlarida D1R-MSN yoki D2R-MSNlar uchun rollarni aniqladi. 1 kundan so'ng takroriy kokainga buyurilganidan so'ng NAX ning D6R-MSNsning optogenetik faollashuvi lokomotor samaradorlikni oshiradi, D2R-MSNning faollashuvi esa hech qanday ta'sirga ega emas (Lobo va boshqalar, 2010). Ushbu ma'lumotlar kokainga takroran ta'sir qilish NAc ning D1R-MSNs ning chiqishini oshiradi. D1R-ifodalangan MSNni tetanoz toksin bilan inhibe qilish (Hikida va boshqalar, 2010) kokainli sharoitni kamaytiradi (CPP), ammo D2R-MSNlarda sinaptik transplantni bekor qilgandan so'ng, kokain CPP-da hech qanday o'zgarish kuzatilmadi (Hikida va boshqalar, 2010). Dorsal striatumda D1R-MSNning optogenetik faollashuvi doimiy mustahkamlashni keltirib chiqaradi, D2 retseptorlari ifodalangan neyronlarni ogohlantiruvchi o'tkinchi jazolarni keltirib chiqaradi (Kravitz va boshqalar, 2012). Yaqinda o'tkazilgan bir tadqiqot shuningdek, D2R-MSNni kimyoviy yo'l bilan inhibe qilish kokainga erishish uchun motivatsiyani oshiradi, D2R-MSNning optogenetik faollashuvi esa kokainning o'z-o'zini boshqarishiga to'sqinlik qiladi (Bock va boshqalar, 2013). Boshqa tomondan, Bocklisch va boshq. (2013) NX loyihasining D1R-MSNni VTAga, xususan, VTA ichidagi GABAerjik neyronlarga, D2R-MSNlar to'g'ridan-to'g'ri VTA-ga loyiha qilmasligini xabar qildi. Ushbu elektronlik D1R-MSNning optogenetik faollashuvi DA neyronlarini yo'qotishni anglatadi va bu oxir-oqibatda kokain bilan bog'liq qo'shadi xatti-harakatini kuchaytiradi (Bocklisch va boshqalar, 2013).

Ushbu ikki MSN-ning populyatsiyasi oddiy ko'rinishiga qaramasdan, MSNlar bir nechta uskuna olishadi va boshqa miya joylaridan turli chiqimlarga ega bo'lishadi, shuningdek MSNlar va boshqa internoron sinflari o'rtasida mahalliy davrlarni tashkil etishadi, natijada D1R- MSN va D2R-MSNlar murakkab va turli molekulyar, hujayra va xulq-atvor oqibatlarini keltirib chiqarishi mumkin.

Ilgari D2R preparatning olib tashlanishi natijasida paydo bo'lgan sinaptik modifikatsiyaga hissa qo'shdi va bu dastlabki dori-darmonlarni yoki dori-darmonlarni chaqirishga ta'sir qilmasdan, kokainga intilishni qayta tiklashni kuchaytiradi (Sim va boshqalar, 2013). Bizning hozirgi ma'lumotimiz shuni ko'rsatadiki, NAX ning D2R-MSN'larni fotostimulyatsiyasi bazal lokomotor faoliyatning kamayishiga olib keladi. Lobo va boshq. (2010), MSN subtipsi faollashtirilganda lokomotiv o'zgarmasligini aniqladilar, ammo ular bazal lokomotor faoliyatning tezkor javoblarini fotostimulyatsiya qilish uchun emas, balki faqat jami lokomotor faoliyatni tekshirdilar. Kravitz va boshq. (2010Dorsal striatumda D2R-MSNning optogenetik faollashuvi ham lokomotor faollikni pasaytiradi. Shunday qilib, bizning ma'lumotlarimiz NAc ning D2R-MSN'lerin fotostimulyatsiyasi bilan bazal lokomotor faoliyatni inhibe qiladigan birinchi va birinchi bo'lib ushbu neyronlarning fotostimulyatsiyasi vaqtida bazal lokomotor faoliyatning vaqtini muntazam ravishda o'rganib chiqishni ko'rsatmoqda.

Ushbu tadqiqotda NAXdagi D2R-MSN ning optogenetik faollashuvi xatti-harakatlarni sezgirlashni boshlash yoki ifoda etishga ta'sir ko'rsatmadi. Shu bilan birga, D2R-MSNning fotokimyoviy tekshiruvi paytida giyohvand moddalarni olib tashlash jarayonida kokain bilan indikatsiyalangan sensitizatsiyani ifodalaydi. Shuning uchun bizning ma'lumotlarimiz D2R-MSNsning gen ekspresyonini yoki boshqa signalizatsiya shakllarini o'zgartiradigan va shu bilan sinaptik plastisitivada o'zgarishlarni keltirib chiqaradigan, kokain bilan indikatsiyalangan xatti-harakatlarning sezgirlashiga olib keladigan, chiqish davri mobaynida maxsus signallarni qabul qilayotganligini ko'rsatadi. Ushbu MSNlar giyohvandlikka bog'liq xatti-harakatlarda o'ziga xos oqibatlarga olib keladigan hujayra turiga xos moslashuvlarni qanday ishlatishadi. Grueter va boshq. (2013) NAcdagi DFSB sinapsintik xususiyatlarni va hujayra tipi va subregionga xos tarzda modellashtirilishini taklif qiladi. Yaqinda Chandra va boshq. (2013) D2R-MSNs ning takroriy ChR1 faollashuvi, ammo D2R-MSN emasligi Tiam1 genining pastki regulyatsiyasiga sabab bo'ldi, bu esa kokain ta'siriga o'xshash aktinning sitoskeletini qayta tashkil etishda ishtirok etgan oqsil. Shuning uchun, dori bilan bog'liq xatti-harakatlarning uzoq muddatli oqibatlarini keltirib chiqaruvchi mexanizmlarni tushunish uchun ushbu MSN'lardagi molekulyar voqealarni uyali selektiv indüksiyalashni takrorlash dori ta'sirida sinaptik moslashuvni boshqaruvchi muhimdir.

Takrorlanadigan dori ta'sirida qayta tiklanish muhim rol o'ynash uchun taklif qilingan, chunki ba'zi o'zgarishlar kokainga oxirgi marotaba ta'sir qilgandan keyin bir necha hafta o'tgach paydo bo'ladi. Bu shuni ko'rsatadiki, chidamlilik plastisiyani rivojlantirishda muhim vositachi (Robinson va Berrij, 2003; Boudreau va Wolf, 2005; Boudreau va boshq. 2007; Kourrich va boshqalar, 2007). Ushbu kuzatishlar D2R-ga bog'liq bo'lgan signalizatsiya nazorati ostida bo'lgan NAcdagi o'zgarishlarni to'xtatishning o'z boshi bo'lishi mumkinligini oshiradi. Bizning natija shuni ko'rsatadiki D2R-MSNning giyohvand moddalarni olib tashlash vaqtida NAc-da aktivlashtirilishi kokainga bog'liq bo'lgan xulq-atvorga ta'sir qiladi.

Oldindan ko'rsatib o'tilganidek, giyohvand moddalarni olib tashlash vaqtida stressni qayta tiklash D2R KO sichqonlarida kokainga sabab bo'lgan xatti-harakatlarni sezgirlashni va shuningdek, giyohvandlik va relapse-harakatlarini ifodalaydi (Sim va boshqalar, 2013). Shuning uchun D2R-MSNning giyohvand moddalarni olib tashlash vaqtida fotostimulyatsiyasi ham sezuvchanlik ifodasini kamaytiradi. Glutamategik sinapslarda stressga bog'liq bo'lgan sinaptik plastisitiya D2R KO sichqonlarining NAc (Sim va boshqalar, 2013). D2R'larning fotostimulyatsiyasi yoki surunkali stressni olib tashlash davrida sinaptik plastinkada o'xshash o'zgarishlarni keltirib chiqarmaganligi hali ma'lum bo'lmasa-da, hozirgi topilmalarimiz NAX ning D2R-MSN'lerinin chiqarishni kuchaytiruvchi plastisitivada asosiy rol o'ynashi va bu giyohvand moddalarni iste'mol qilishni tugatgandan so'ng qayta D2R MSNning dori chiqarish vaqtida ishtirok etadigan funktsional neyron davrlarini aniqlash, D2R-MSNning fotostimulyatsiyasi va surunkali stressni bu muayyan davrdagi sinaptik plastisitaga ta'sirini tahlil qilish va solishtirish uchun qo'shimcha tekshiruv o'tkazish talab etiladi.

D2R-ifoda etuvchi MSN-lar uchun boshqa mumkin bo'lgan rol D1R-MSNning NAc-dan chiqishini inhibe qilishi mumkin. Avvalgi izlanishlar shuni ko'rsatadiki, MSNlar uzoq aksonlarni masofaviy maqsadlarga qaratmoqchi bo'lishsa ham, akson kafolatlari bilan qo'shni zarg'aldoq prozeksiyon nöronlarının dendritik daraxtlari orasida (Grofová, 1975; Preston va uning hamkorlari, 1980; Wilson va Groves, 1980). Bu NAc ichida MSN uchun mumkin mahalliy sinaptik ulanishni ko'rsatishi mumkin. Spiny projektoriya neyronlari juftlaridan hujayralardagi yozuvlar, ratalar striatumida (Czubayko va Plenz, 2002; Tunstall va boshq. 2002; Koos va boshq. 2004; Gustafson va boshq. 2006). Bundan tashqari, DNNUMXR-MSNs boshqa D2R-MSN va D2R-MSN bilan sinxintik aloqalar qiladi, D1R-MSN esa deyarli faqat boshqalar bilan sinaptik ulanishlarni hosil qiladi. D1R-MSNlar (Taverna va boshqalar, 2008). Gomoelektrik vositalarning mahalliy oqsoqollar tomonidan oqsamal MSN bilan almashinuvi ham xabar qilingan (Taverna va boshqalar, 2004), D2R-MSNlar mahalliy mikrokimyularni tasodifiy shaklda tashkil etadimi yoki ular NA ning mikrosxemalariga imtiyozli aloqada bo'lishiga yordam beradimi, hali aniq emas. Ma'lumotlarimiz shuni ko'rsatadiki, D2R-MSNs ChrxNUMX-ni ifodalovchi qo'shni MSNlar bilan DNNUMXR-ni ifodalovchi sinaptik ulanishlarni amalga oshiradi va D2R-MSN-lar D1-MSN-ga D2R-vositachiligi bilan bog'liqlikdagi harakatlarning modellashuvini tartibga solish uchun to'siqsiz aloqa ko'rsatadi.

NK D2R-MSNning optogenetik faollashuvi kokainda giyohvandlik jarayonida yuzaga keladigan plyansiyaning o'zgarishini ko'rsatdi. D2Rga qaram bo'lgan signalizatsiya jarayoni vaqtida olib tashlash jarayonida kokainga bog'liq bo'lgan xulq-atvorni ifodalashning asosiy regulyatori ko'rinadi, shuning uchun D2R-MSNlar giyohvand moddalarni izlash va qayta chaqirish uchun uzoq muddatli moslashuvning muhim vositachisi bo'lishini taklif qilamiz. D2Rga bog'liq signalizatsiya molekulyar substratlarini identifikatsiya qilish va qayta takrorlanadigan dori ta'sirida ishlatiladigan NAc D2R-MSNning o'ziga xos o'chog'ini identifikatsiyalash bilan birgalikda preparatning qaytalanishida terapevtik aralashuvga yangi maqsadlar qo'yilishi kerak.

Foiz hisoboti to'qnashuvi

Mualliflar tadqiqot natijalari potentsial manfaatlar to'qnashuvi deb talqin etilishi mumkin bo'lgan biron-bir tijoriy yoki moliyaviy aloqalar mavjud bo'lmagani holda amalga oshirilganligini e'lon qiladi.

rahmat

Ushbu ishni Miya tadqiqotlari dasturi (Ja-Hyun Baik, Grant No. 2013M3C7A1056101) va Biologiya va Tibbiy Texnologiya (Bio and Medical Technology) tomonidan moliyalashtiriladigan Koreya milliy ilmiy tadqiqot fondi (NRF) tomonidan moliyalashtirildi. (Ja-Hyun Baik, Grant No. 2013M3A9D5072550) va Fan, AKT va kelajak rejalashtirish vazirligi (Jorj J. Augustine) tomonidan moliyalashtiriladigan Koreya Milliy Tadqiqot Jamg'armasi (WRC) Jahon Sinfi Instituti (WCI) , WCI 2009-003), shuningdek, Koreya Universitet Grantining (Ja-Hyun Baik) va Singapur Milliy Tadqiqot Jamg'armasidan (Jorj J. Augustine) CRP granti.

Manbalar

  1. Baik JH (2013). Mukofot bilan bog'liq xatti-harakatlarda dopamin signalizatsiyasi. Oldin. Neyron davrlari 7: 152 10.3389 / fncir.2013.00152 [PMC bepul maqola] [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  2. Baik JH, Picetti R., Sairardi A., Thiriet G., Dierich A., Depaulis A. va boshq. (1995). Dopamin D2 retseptorlari yo'q sichqonlarda Parkinsoniy shunga o'xshash lokomotor buzilish. Tabiat 377, 424-428 10.1038 / 377424a0 [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  3. Berridge KC (2007). Dopaminning mukofotda ishtirok etishi haqidagi munozarasi: rag'batlantirish uchun masala. Psixofarmakologiya (Berl) 191, 391-431 10.1007 / s00213-006-0578-x [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  4. Bock R., Shin JH, Kaplan AR, Dobi A., Markey E., Kramer PF va boshq. (2013). Accumbal bilvosita yo'lni kuchaytirish majburiy giyoh foydalanishga chidamlilikni ta'minlaydi. Nat. Neurosci. 16, 632-638 10.1038 / nn.3369 [PMC bepul maqola] [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  5. Bocklisch S, Paskal V., Vong JK, House DR, Yvon S, ham Roo M. va boshq. (2013). Kokain dobamin neyronlarni ventral tegmental sohada GABA uzatishni kuchaytirishi bilan disinhibits. Fan 341, 1521-1525 10.1126 / science.1237059 [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  6. Boudreau AC, Reimers JM, Milovanovich M., Wolf ME (2007). Sichqoncha hujayra sirtida AMPA retseptorlari kokain chiqarish vaqtida kuchayib boradi, ammo kokainning chaqiruvidan so'ng mitojen bilan faollashtirilgan protein kinazlarining faollashtirilishi bilan ichki holatga tushadi. J. Neurosci. 27, 10621-10635 10.1523 / jneurosci.2163-07.2007 [PMC bepul maqola] [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  7. Boudreau AC, Wolf ME (2005). Kokainga nisbatan xulq-atvorli munosabat, yadrodagi akumbenslarda AMPA retseptorlari sirtini ifoda etish bilan bog'liq. J. Neurosci. 25, 9144-9151 10.1523 / jneurosci.2252-05.2005 [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  8. Chandra R., Lenz JD, Gancarz AM, Chaudhury D., Schroeder GL, Xon MH va boshq. (2013). D1R o'z ichiga olgan nukleus akumbens neyronlarining optogenetik inhibatsiyasi Tiam1 ning kokain-vositachilik tartibini o'zgartiradi. Oldin. Mol. Neurosci. 6: 13 10.3389 / fnmol.2013.00013 [PMC bepul maqola] [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  9. Chang HT, Kitay ST (1985). Nucleus accumbens ning projektoriya neyronlari: hujayra ichidagi yorliqlar. Brain Res. 347, 112-116 10.1016 / 0006-8993 (85) 90894-7 [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  10. Chausmer AL, Elmer GI, Rubinstein M., past MJ, Grandy DK, Katz JL (2002). Dopamin D2 retseptorlari mutant sichqonlarida kokain bilan indikator lokomotor faollik va kokainni ajratish. Psixofarmakologiya (Berl) 163, 54-61 10.1007 / s00213-002-1142-y [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  11. Chevalier G., Deniau JM (1990). Striatal funktsiyalarni ifodalashda asosiy jarayon sifatida Disinhibisyon. Trends Neurosci. 13, 277-280 10.1016 / 0166-2236 (90) 90109-n [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  12. Czubayko U., Plenz D. (2002). Striatal zarg'aldoq proektsion neyronlar orasida tez sinaptik o'tish. Proc. Natl. Akad. Sci. AQSh 99, 15764-15769 10.1073 / pnas.242428599 [PMC bepul maqola] [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  13. Ferguson SM, Eskenazi D., Ishikawa M., Wanat MJ, Phillips pe, Dong Y. va boshq. (2011). Vaqtinchalik neyronal inhibitatsiya bevosita va to'g'ridan-to'g'ri yo'llarni sezuvchanlikdagi ziddiyatli rollarni aniqlaydi. Nat. Neurosci. 14, 22-24 10.1038 / nn.2703 [PMC bepul maqola] [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  14. Goto Y., Grace AA (2005). Maqsadga yo'naltirilgan harakatlarda yadro akumbenslarining limbik va kortikal diskini dopaminerjik modulyatsiya. Nat. Neurosci. 8, 805-812 10.1038 / nn1471 [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  15. Grofová I. (1975). Nigraga asoslanadigan striatal va pallidal neyronlarning identifikatsiyasi. Horseradish peroxidase ning retrograd aksonal transporti orqali eksperimental tadqiqotlar. Brain Res. 91, 286-291 10.1016 / 0006-8993 (75) 90550-8 [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  16. Grueter BA, Robison AJ, Neve RL, Nestler EJ, Malenka RC (2013). DFOSB nukleus akumbenslarini bevosita va bilvosita yo'l harakati bilan modulyatsiya qiladi. Proc. Natl. Akad. Sci. AQSh 110, 1923-1928 10.1073 / pnas.1221742110 [PMC bepul maqola] [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  17. Gustafson N., Gireesh-Zarmaraj E., Cubayko U., Blackwell KT, Plens D. (2006). In vitro striatal mikroko'proqda qayta besleme va oqim sinaptik o'tkazuvchanligi bilan qiyosiy kuchlanish va oqimni tahlil qilish. J. Neurophysiol. 95, 737-752 10.1152 / jn.00802.2005 [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  18. Hikida T., Kimura K., Wada N., Funabiki K., Nakanishi S. (2010). To'g'ridan-to'g'ri va bilvosita striatal yo'llarda sinaptik translyatsiyaning turli rollari, mukofot va savobli xatti-harakatlar. Neuron 66, 896-907 10.1016 / j.neuron.2010.05.011 [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  19. Kalivas PW, Duffy P. (1990). O'tkir va kundalik giyoh davolashni hujayradan dopaminga yadrodagi akumbenslardagi ta'sir. Synapse 5, 48-58 10.1002 / syn.890050104 [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  20. Kalivas PW, Pirs RC, Cornish J., So'rov B (1998). Kokainga bog'liq giyohvandlik va natseptsiyada sezuvchanlikning ahamiyati. J. Psychopharmacol. 12, 49-53 10.1177 / 026988119801200107 [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  21. Koos T., Tepper JM, Wilson CJ (2004). Neostriatumdagi shiddatli va tezkor neyronlar bilan uyg'unlashtirilgan IPSClarni taqqoslash. J. Neurosci. 24, 7916-7922 10.1523 / jneurosci.2163-04.2004 [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  22. Kourrich S., Rothwell PE, Klug JR, Tomas MJ (2007). Qo'qon tajribasi yadro gilamlarda ikki tomonlama sinaptik plastisitni nazorat qiladi. J. Neurosci. 27, 7921-7928 10.1523 / jneurosci.1859-07.2007 [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  23. Kravitz AV, Freeze BS, Parker PR, Kay K., Thwin MT, Deisseroth K. va boshq. (2010). Bazal ganglion davrlarini optogenetik nazorat qilish yo'li bilan parkinson vosita harakatlarini tartibga solish. Tabiat 466, 622-626 10.1038 / nature09159 [PMC bepul maqola] [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  24. Kravitz AV, Tye LD, Kreitzer AC (2012). To'g'ridan-to'g'ri va bilvosita yo'llar uchun mustahkamlovchi striatal neyronlar uchun alohida rollar. Nat. Neurosci. 15, 816-818 10.1038 / nn.3100 [PMC bepul maqola] [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  25. Kreitzer AC, Malenka RC (2008). Striatal plastisitiya va bazal ganglion elektron funktsiyasi. Tabiat 60, 543-554 10.1016 / j.neuron.2008.11.005 [PMC bepul maqola] [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  26. Le Moin S, Bloch B. (1996). D3 dopamin retseptorlari yadrosidagi akumbenslarning peptidjik neyronlarida ifodalanishi: D1 va D2 dopamin retseptorlari bilan taqqoslash. Neuroscience 73, 131-143 10.1016 / 0306-4522 (96) 00029-2 [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  27. Lobo MK, Covington HE, 3rd, Chaudhury D., Fridman AK, Sun X., Damez-Verno D. va boshq. (2010). BDNF signallarining hujayra turiga xos yo'qolishi kokaindan olingan mukofotning optogenetik nazoratini taqqoslaydi. Fan 330, 385-390 10.1126 / science.1188472 [PMC bepul maqola] [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  28. Lobo MK, Nestler EJ (2011). Giyohvandlikda striatal muvozanatlash harakatlari: bevosita va bilvosita yo'llarning o'rta zo'riqibor neyronlarning alohida vazifalari. Oldin. Neyroanat. 5: 41 10.3389 / fnana.2011.00041 [PMC bepul maqola] [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  29. Luscher C., Malenka RC (2011). Narkomaniyaning giyohvand moddalari bilan uyg'unlashgan sinaptik plastisitivasi: molekulyar o'zgarishlardan elektronni qayta qurishdan. Neuron 69, 650-663 10.1016 / j.neuron.2011.01.017 [PMC bepul maqola] [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  30. O'Donnell P., Greys AA (1993). In vitro qayd etilgan akumbens yadrosi va qobiq neyronlarining fiziologik va morfologik xususiyatlari. Synapse 13, 135-160 10.1002 / syn.890130206 [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  31. Pascoli V., Turiault M., Luscher C. (2011). Kokaindan uyarılmış sinaptik potansiyasyonun tiklanishi, uyuşturucuya bog'liq adaptif xatti-qayta tiklaydi. Tabiat 481, 71-75 10.1038 / nature10709 [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  32. Preston RJ, Bishop GA, Kitay ST (1980). Sichqoncha neostriatumdan olingan o'rta bo'g'imli neyron proektsiyasi: hujayra ichidagi guruchli peroksidaza o'rganish. Brain Res. 183, 253-263 10.1016 / 0006-8993 (80) 90462-x [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  33. Robinson TE, Berrij KC (1993). Narkomaniya nervlarining asosi: giyohvandlikning rag'batlantiruvchi sensitizatsiya nazariyasi. Brain Res. Brain Res. Rev. 18, 247-291 10.1016 / 0165-0173 (93) 90013-p [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  34. Robinson TE, Berrij KC (2003). Qo'shadi. Annu. Rev. Psychol. 54, 25-53 10.1146 / annurev.psych.54.101601.145237 [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  35. Shmidt HD, Pirs RC (2010). Glutamat uzatishda kokainga sabab bo'lgan neyrokodatlar: ehtiros va narkomaniya uchun potentsial terapevtik maqsadlar. Ann. NY Acad. Sci. 1187, 35-75 10.1111 / j.1749-6632.2009.05144.x [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  36. Sesack SR, Greys AA (2010). Cortico-bazal ganglion mukofotlari tarmog'i: mikrosxemalar. Nöropsikofarmakologiya 35, 27-47 10.1038 / npp.2009.93 [PMC bepul maqola] [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  37. Sim HR, Choi TY, Lee HJ, Kang EY, Yoon shahri Rabva mahallasi, Han PL, et al. (2013). Dopamin D2 retseptorlarining stressga sabab bo'ladigan qo'shadi xulq-atvorining rolida ahamiyati. Nat. Kommunizm. 4: 1579 10.1038 / ncomms2598 [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  38. Smit RJ, Lobo MK, Spencer S., Kalivas PW (2013). D1 va D2 akumbens proektsion neyronlarida kokain tomonidan uyg'unlashtirilgan moslamalar (dichotomiya to'g'ridan-to'g'ri va bilvosita yo'llar bilan mutanosib ravishda emas). Curr. Opin. Neurobiol. 23, 546-552 10.1016 / j.conb.2013.01.026 [PMC bepul maqola] [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  39. Steketee JD, Kalivas PW (2011). Kerakli dori: xatti-harakatlarning sezgirligi va giyohvandlikka qarshi harakatga qaytishi. Farmakol. Rev. 63, 348-365 10.1124 / pr.109.001933 [PMC bepul maqola] [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  40. Taverna S., Ilijik E., Surmeier DJ (2008). Parkinson kasalligining modellarida striatal moddalarning takrorlanuvchi kollateral birikmalari buzilgan neyronlarning buzilishiga olib keladi. J. Neurosci. 28, 5504-5512 10.1523 / JNEUROSCI.5493-07.2008 [PMC bepul maqola] [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  41. Taverna shahri Rabva mahallasi, van Dongen YC, Groenewegen HJ, Pennartz CM (2004). Sichqoncha yadrosidagi o'rta o'lchamli o'mrovli neyronlar orasidagi sinaptik ulanish uchun bevosita fiziologik dalillar in situ. J. Neurophysiol. 91, 1111-1121 10.1152 / jn.00892.2003 [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  42. Tomas MJ, Kalivas PW, Shaham Y. (2008). Mesolimbik dopamin tizimidagi nevroplastiklik va giyoh giyohvandligi. Br. J. Pharmacol. 154, 327-342 10.1038 / bjp.2008.77 [PMC bepul maqola] [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  43. Tunstall MJ, Oorschot DL, Kean A., Wickens JR (2002). Sichqoncha striatumida tishli proektsion neyronlar orasidagi inhibitoryan o'zaro ta'sirlar. J. Neurophysiol. 88, 1263-1269 10.1152 / jn.00886.2001 [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  44. Vanderschuren LJ, Kalivas PW (2000). Davolash xatti-harakatini indüksiyon va ekspresyonunda dopaminerjik va glutamaterjik transmisyona qilingan o'zgarishlar: preklinik tadkikotlar muhim tanqid. Psixofarmakologiya (Berl) 151, 99-120 10.1007 / s002130000493 [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  45. Wilson CJ, Groves PM (1980). Sichqoncha neostriatumning umumiy aylanma neyronining nozik strukturasi va sinaptik aloqasi: horseradish peroxidase ning hujayra ichidagi in'ektsiyasi bilan ishlaydigan bir tadqiqot. J. Komp. Neurol. 194, 599-615 10.1002 / cne.901940308 [PubMed] [O'zaro faoliyat]
  • Wise RA (2004). Dopamin, o'rganish va turtki. Nat. Rev. Neurosci. 5, 483-494 10.1038 / nrn1406 [PubMed] [O'zaro faoliyat]