Tạp chí khoa học thần kinh, 6 tháng 9 2006, 26 (36): 9196-9204; doi: 10.1523 / JNEUROSCI.1124-06.2006
Peter Olausson1, J. David Jentsch2, Natalie Tronson1, Rachel L. Neve3, Eric J. Nestler4và Jane R. Taylor1
1.Các thư tương ứng nên được gửi tới Jane R. Taylor, Khoa Tâm thần học, Khoa Tâm thần Phân tử, Trường Y Đại học Yale, Cơ sở Nghiên cứu Ribicoff, Trung tâm Sức khỏe Tâm thần Connecticut, Phố Park Park, New Haven, CT 34.[email được bảo vệ]
Tóm tắt
Thay đổi trong động lực đã được liên quan đến sinh lý bệnh của một số rối loạn tâm thần, bao gồm lạm dụng chất và trầm cảm. Phơi nhiễm liên tục với các loại thuốc lạm dụng hoặc căng thẳng được biết là liên tục gây ra yếu tố phiên mã ΔFosB trong nhân accumbens (NAc) và vây lưng, các hiệu ứng được đưa ra giả thuyết góp phần vào phản ứng thần kinh trong việc truyền tín hiệu dopamine. Tuy nhiên, người ta biết rất ít về sự tham gia cụ thể của ΔFosB trong việc điều hòa các hành vi có động cơ ngon miệng. Ở đây chúng tôi chỉ ra rằng sự biểu hiện quá mức của ΔFosB trong NAc và vây lưng của chuột bitransgenic, hoặc cụ thể là trong lõi NAc của chuột bằng cách sử dụng chuyển gen qua trung gian virus, hiệu suất của công cụ được tăng cường thực phẩm và đáp ứng tỷ lệ tiến bộ. Các hiệu ứng hành vi rất giống nhau đã được tìm thấy sau khi tiếp xúc nhiều lần với cocaine, amphetamine, MDMA [(+) - 3,4-methylenedioxymethamphetamine] hoặc nicotine ở chuột. Những kết quả này cho thấy sự điều tiết mạnh mẽ của các quá trình tạo động lực bởi ΔFosB, và cung cấp bằng chứng cho thấy sự thay đổi do thuốc gây ra trong biểu hiện gen thông qua việc tạo ra ΔFosB trong lõi NAc có thể đóng vai trò quan trọng trong tác động của ảnh hưởng động lực đến hành vi của dụng cụ.
Giới thiệu
Phơi nhiễm thuốc lặp đi lặp lại gây ra sự thay đổi năng động theo thời gian trong phiên mã gen tạo ra phản ứng thần kinh kéo dài trong nhân accumbens (NAc) (Nestler, 2004). Vùng não này đóng một vai trò quan trọng trong cả quá trình củng cố thuốc và tự nhiên (Kelley và Berridge, 2002), mặc dù ít được biết về các yếu tố phiên mã tác động đến hành vi được thúc đẩy bởi nondrug, các chất tăng cường thèm ăn như thực phẩm. FosB là một yếu tố phiên mã được kích hoạt trong NAc và vây lưng do tiếp xúc với thuốc mãn tính (Konradi và cộng sự, 1994; Nye và cộng sự, 1995; Chen và cộng sự, 1997; Pich và cộng sự, 1997; Shaw-Lutchman và cộng sự, 2003) và chạy bánh xe bắt buộc (Werme và cộng sự, 2002). Nó cũng được gây ra ở những vùng này bởi một số dạng căng thẳng mãn tính (Perrotti và cộng sự, 2004). Sự tăng cường của các quá trình củng cố thuốc liên quan đến khởi phát FosB được thiết lập tốt (Kelz và cộng sự, 1999; Colby và cộng sự, 2003; Zachariou và cộng sự, 2006). Tuy nhiên, hậu quả của việc tăng nồng độ ΔFosB ở các khu vực này đối với hành vi công cụ được thúc đẩy bởi các chất tăng cường tự nhiên là không được biết đến.
Việc thực hiện các phản ứng công cụ là một thành phần cần thiết của hành vi dùng ma túy có thể trở nên rối loạn hoặc không linh hoạt khi quá trình chuyển sang nghiệnJentsch và Taylor, 1999; Berke và Thánh ca, 2000; Berridge và Robinson, 2003; Everitt và Robbins, 2005). NAc liên quan đến nhiều khía cạnh của hành vi công cụ liên quan đến nghiện (Balleine và Killcross, 1994; Corbit và cộng sự, 2001; de Borchgrave và cộng sự, 2002; Di Ciano và Everitt, 2004b; Everitt và Robbins, 2005). Do đó, có khả năng các phản ứng thần kinh do thuốc gây ra trong NAc có thể ảnh hưởng đến hiệu suất của các hành động công cụ. Thật vậy, tiếp xúc với cocaine mạn tính giúp tăng cường hiệu suất của nhạc cụ được tăng cường sucrose (Miles và cộng sự, 2004) và các thao tác được cho là ngăn chặn sự co giãn thần kinh trong lõi NAc, bao gồm ức chế PKA (protein kinase A) hoặc tổng hợp protein, can thiệp vào các phản ứng dụng cụ được thưởng thức ăn (Baldwin và cộng sự, 2002a; Thoát vị và cộng sự, 2002). Lõi NAc cũng làm trung gian tác động động lực của các ảnh hưởng có điều kiện đến hành vi công cụ (Parkinson và cộng sự, 1999; Corbit và cộng sự, 2001; Hội trường và cộng sự, 2001; Di Ciano và Everitt, 2004a; Ito và cộng sự, 2004), cung cấp chất nền sinh học thần kinh, theo đó ΔFosB cảm ứng có thể ảnh hưởng mạnh mẽ đến hiệu suất của công cụ và động lực thúc đẩy sự thèm ăn như thực phẩm, nước hoặc thuốc lạm dụng.
Ở đây, chúng tôi đã nghiên cứu tác động của ΔFosB đối với hành vi công cụ thúc đẩy thức ăn bằng cách sử dụng hai phương pháp di truyền bổ sung: (1) biểu hiện quá mức của FosB trong NAc và vây lưng của chuột bitransgenic (NSE-tTA × TetOp) của ΔFosB trong lõi NAc đặc biệt bằng cách sử dụng chuyển gen qua trung gian virus ở chuột. Chúng tôi cũng đã đánh giá xem việc tiếp xúc nhiều lần với cocaine, amphetamine, (+) - 3,4-methylenedioxymethamphetamine (MDMA), hay nicotine, trong các điều kiện được báo cáo là tăng FosB, sẽ tăng cường đáp ứng và tăng cường công cụ tăng cường thực phẩm như đã được chỉ ra cho việc tự quản được củng cố bằng thuốc (Horger và cộng sự, 1990, 1992; Quảng trường và cộng sự, 1990; Vezina và cộng sự, 2002; Miles và cộng sự, 2004). Kết quả của chúng tôi cho thấy tác dụng dai dẳng của ΔFosB đối với hành vi công cụ và đề xuất rằng yếu tố phiên mã này có thể hoạt động trong lõi NAc như một bộ điều chỉnh chức năng động lực.
Vật liệu và phương pháp
Động vật và chăm sóc động vật
Những con chuột Sprague Dawley ngây thơ trong thực nghiệm đã được mua từ Phòng thí nghiệm Charles River (Wilmington, MA). Những con chuột 11A đực có nguồn gốc từ con lai giữa những con chuột biến đổi gen đồng hợp tử biểu hiện một protein transactivator đặc hiệu tế bào thần kinh (NSE) -tTA (dòng A) và những con chuột biểu hiện TetOp (chất xúc tác phản ứng tetracycline) các dòng bố mẹ được duy trì trên một nền hỗn hợp ngoài (11% ICR và 50% C50BL57 × SJL) (Chen và cộng sự, 1998; Kelz và cộng sự, 1999). Những con chuột 11A bitransgenic này chỉ biểu hiện ΔFosB khi: (1) cả hai gen được hiện diện trong cùng một tế bào và (2) hoạt hóa phiên mã bởi tTA không bị ức chế bởi sự hiện diện của kháng sinh tetracycline như doxycycline. Do đó, việc sử dụng doxycycline cho những con chuột này có thể tạo ra sự kiểm soát tạm thời đối với biểu hiện của ΔFosB và được sử dụng để ngăn chặn biểu hiện trong quá trình phát triển; thật vậy, quản trị doxycycline không liên quan đến biểu hiện rò rỉ có thể phát hiện được của ΔFosB (Chen và cộng sự, 1998; Kelz và cộng sự, 1999). Hơn nữa, dòng chuột bitransgenic 11A đã được chọn cho các thí nghiệm hiện tại, bởi vì chúng hiển thị một mẫu biểu hiện chủ yếu giới hạn ở các tế bào thần kinh ngoại vi có chứa dynorphin (cả NAc và dorsal striatum), rất giống với mẫu cảm ứng ΔFosB của thuốc mãn tính Phơi bày (Kelz và cộng sự, 1999). Hơn nữa, việc định lượng biểu thức nổi bật này của ΔFosB đã được định lượng trước đó (Chen và cộng sự, 1998; Kelz và cộng sự, 1999). Những con chuột được tạo ra tại Đại học Texas Tây Nam và được duy trì và thử nghiệm trong các cơ sở của Yale. Trong suốt quá trình mang thai và phát triển, tất cả các con chuột được duy trì trên doxycycline cho đến khi 8 triệt 9 ở tuổi tập trung với nồng độ 100 μg / ml trong nước uống, điều kiện được biết là duy trì chuyển gen do TetOp điều khiển ở trạng thái tắt. tuần tắt doxycycline khi biểu thức ΔFosB trở nên tối đa (Kelz và cộng sự, 1999). Tất cả các thí nghiệm liên quan đến việc so sánh chuột bitransgenic trên chuột với so với doxycycline, bản thân nó không có tác dụng đối với hành vi có động lực (Kelz và cộng sự, 1999; McClung và Nestler, 2003; Zachariou và cộng sự, 2006).
Tất cả các đối tượng thử nghiệm được đặt trong cặp (chuột) hoặc theo nhóm (chuột; bốn đến năm con mỗi lồng) trong điều kiện nhiệt độ và độ ẩm được kiểm soát trong chu kỳ sáng / tối của 12 (bật sáng ở 7: 00 AM và tắt ở 7: 00 PM). Họ đã được cho phép ít nhất là 7 d để điều chỉnh các cơ sở nhà ở trước khi có bất kỳ nghiên cứu nào. Động vật có quyền truy cập libitum vào nước mọi lúc và hạn chế truy cập vào thực phẩm như chi tiết dưới đây. Tất cả việc sử dụng động vật được thực hiện theo Hướng dẫn của Viện Y tế Quốc gia về Chăm sóc và Sử dụng Động vật trong Phòng thí nghiệm và đã được phê duyệt bởi Ủy ban Chăm sóc và Sử dụng Động vật tại Đại học Texas Tây Nam và Đại học Yale.
Thuốc
Cocaine hydrochloride [được cung cấp bởi Viện lạm dụng ma túy (NIDA)], d-amphetamine sulfate (Sigma, St. Louis, MO), MDMA hydrochloride (được cung cấp bởi NIDA) và (-) - tartrate hydro (Sigma) ) được hòa tan trong nước muối sinh lý vô trùng (0.9%) và được tiêm trong màng bụng với thể tích 5 ml / kg (chuột) hoặc 2 ml / kg (chuột). Độ pH của dung dịch nicotine được điều chỉnh bằng natri bicarbonate trước khi tiêm.
Các vec tơ
Chuyển gen qua trung gian virus đã được thực hiện như mô tả trước đây (Carlezon và cộng sự, 1998; Perrotti và cộng sự, 2004). Nói tóm lại, các cDNA mã hóa các protein cụ thể đã được chèn vào bộ khuếch đại virus herpes simplex (HSV) HSV-PrPUC và được đóng gói vào virus bằng cách sử dụng trình trợ giúp 5dl1.2. Các vectơ điều khiển biểu hiện của HSV-LacZ, mã hóa cho protein điều khiển β-galactosidase, hoặc HSV-ΔFosB, mã hóa cho ΔFosB, sau đó được truyền vào lõi NAc theo giao thức thử nghiệm.
quy trình thí nghiệm
Đề cương.
Thí nghiệm 1 đã kiểm tra ảnh hưởng của phơi nhiễm thuốc lặp đi lặp lại trước đó đối với hiệu suất dụng cụ được tăng cường thực phẩm và đáp ứng tỷ lệ tiến triển. Chuột được chia ngẫu nhiên thành năm nhóm thử nghiệm (n = 9 tầm 10 / nhóm). Các nhóm này được tiêm hai lần mỗi ngày (trong màng bụng; tại 9: 00 AM và 5: 00 PM) bằng nước muối hoặc một trong các loại thuốc sau: nicotine, 0.35 mg / kg; MDMA, 2.5 mg / kg; cocaine, 15 mg / kg; hoặc amphetamine, 2.5 mg / kg trong 15 ngày liên tiếp. Các liều đã được lựa chọn dựa trên dữ liệu được công bố trước đây của chúng tôi (Taylor và Jentsch, 2001; Olausson và cộng sự, 2003) và kích thích vận động do thuốc gây ra đã được theo dõi vào những ngày điều trị 1 và 15. Sau khi 5 d rút tiền, động vật đã được huấn luyện về phản ứng công cụ trong 10 những ngày liên tiếp và sau đó được thử nghiệm về tỷ lệ tiến bộ đáp ứng vào ngày hôm sau. Hai động vật đã bị loại khỏi phân tích thống kê vì chúng không có được phản ứng cụ, không tạo ra nhiều hơn một phản hồi đòn bẩy hoạt động trong mỗi ba buổi huấn luyện cuối cùng.
Các thí nghiệm 2 và 3 đã kiểm tra ảnh hưởng của sự biểu hiện quá mức gây ra của FosB ở chuột bitransgenic đối với hiệu suất của thiết bị và đáp ứng với tỷ lệ tăng cường tiến bộ. Sự biểu hiện quá mức của ΔFosB ở những con chuột này trước đây đã được chứng minh là bắt chước tác động của việc tiếp xúc với thuốc nhiều lần trong hoạt động vận động và mô hình ưu tiên địa điểm có điều kiện (Kelz và cộng sự, 1999; Zachariou và cộng sự, 2006). Những con chuột này có thể cung cấp thông tin quan trọng về sự đóng góp của ΔFosB trong các quy trình hành vi cụ thể. Chuột đực có kiểu gen được duy trì trên doxycycline hoặc được chuyển sang dùng nước máy ở tuần 8. Các thí nghiệm đã được bắt đầu sau vài tuần rút thuốc doxycycline, tại thời điểm biểu hiện gen chuyển là tối đa (Kelz và cộng sự, 1999). Trong thí nghiệm 2, động vật (n = 16) bị hạn chế thực phẩm và được huấn luyện về quy trình công cụ được mô tả dưới đây (xem bên dưới, phản ứng cụ và kiểm tra tỷ lệ lũy tiến) trong 10 ngày liên tiếp. Sau khi hoàn thành thử nghiệm công cụ, kích thích vận động do cocaine được đánh giá ở những con chuột này. Trong thí nghiệm 3, một nhóm chuột riêng biệt (n = 18) đã được huấn luyện về phản ứng công cụ cho 10 trong những ngày liên tiếp trong các điều kiện trong đó tối đa các chất tăng cường 50 được cung cấp. Vào ngày 11, tất cả các con chuột đã được thử nghiệm đáp ứng tỷ lệ lũy tiến. Vào ngày 12, chúng tôi đã xác định ảnh hưởng của sự mất giá của chất gia cố bằng cách cho ăn trước đối với tỷ lệ lũy tiến.
Các thí nghiệm 4 và 5 đã kiểm tra tác động của sự biểu hiện quá mức qua trung gian virus của FosB đặc biệt trong NAc. Thí nghiệm 4 đã thử nghiệm ảnh hưởng của biểu hiện quá mức ΔFosB đến hiệu suất của thiết bị. Ở đây, chuột được truyền HSV-ΔFosB (n = 8) hoặc HSV-LacZ (n = 8) trong lõi NAc và được huấn luyện về quy trình công cụ bắt đầu 40 h sau đó. Sau các buổi huấn luyện hàng ngày của 10, các mức hoạt động cơ bản đã được đánh giá cho tất cả các động vật trong thiết bị giám sát hoạt động vận động như được mô tả dưới đây (xem bên dưới, hoạt động vận động). Thí nghiệm 5 đã đánh giá tác động của biểu hiện quá mức NAc ΔFosB cụ thể đối với đáp ứng tỷ lệ lũy tiến. Ở đây, những con chuột ban đầu được huấn luyện trong 15 những ngày liên tiếp, được chỉ định cho các nhóm thử nghiệm và sau đó được truyền HSV-ΔFosB (n = 8) hoặc HSV-LacZ (n = 7) trong lõi NAc. Các động vật không được kiểm tra và không được điều trị trong 4 d để cho phép biểu hiện FosB đạt đến đỉnh điểm. Vào ngày 5 sau khi tiêm truyền, tất cả các động vật đã được thử nghiệm để nhấn đòn bẩy vào lịch biểu tỷ lệ lũy tiến. Sau ngày thử nghiệm cuối cùng, tất cả chuột đã bị giết và việc đặt các ống tiêm truyền trong lõi NAc đã được xác minh theo mô hình. Dựa trên vị trí đặt ống tiêm truyền, hai con chuột đã được loại trừ khỏi thí nghiệm 4 và một con chuột khỏi thí nghiệm 5.
Đặc điểm biểu hiện gen đã được thực hiện trong một nhóm động vật riêng biệt. Tại đây, HSV-LacZ đã được truyền vào lõi NAc và động vật đã bị giết 3 d sau đó. Sự biểu hiện của-galactosidase sau đó đã được đánh giá miễn dịch.
Hoạt động vận động.
Hoạt động vận động được đo bằng máy đo hoạt động (máy theo dõi hoạt động của động vật Digiscan; Omnitech Electronics, Columbus, OH). Các đồng hồ đo hoạt động được trang bị hai hàng cảm biến quang hồng ngoại, mỗi hàng gồm các cảm biến 16 đặt cách nhau 2.5 cm. Đồng hồ đo hoạt động được kiểm soát bởi và dữ liệu từ máy đo hoạt động được thu thập bởi máy tính PC bằng phần mềm Micropro (Omnitech Electronics).
Các động vật thí nghiệm được đặt trong các hộp nhựa trong suốt (25 × 45 × 20 cm) được đưa vào máy đo hoạt động. Động vật ban đầu được phép làm quen với thiết bị ghi hoạt động vận động trong 30 phút. Trong một số thí nghiệm, động vật sau đó đã được đưa ra ngoài, tiêm cocaine, amphetamine, nicotine hoặc phương tiện theo thiết kế thí nghiệm và đặt lại vào hộp. Hoạt động vận động sau đó được ghi lại trong 60 min, bắt đầu 5 min sau khi tiêm thuốc để tránh tình trạng tăng động do tiêm thuốc không đặc hiệu. Tất cả các thí nghiệm đã được thực hiện trong pha sáng của động vật (giữa 9: 00 AM và 6: 00 PM).
Công cụ đáp ứng và kiểm tra tỷ lệ lũy tiến.
Phản ứng bằng công cụ được đánh giá bằng cách sử dụng buồng hoạt động tiêu chuẩn cho chuột (30 × 20 × 25 cm) hoặc chuột (16 × 14 × 13 cm) được điều khiển bởi phần mềm MedPC (Med Associates, St. Albans, VT). Mỗi buồng được đặt trong một buồng bên ngoài giảm âm thanh được trang bị bộ tạo tiếng ồn trắng và quạt để giảm tác động của tiếng ồn bên ngoài. Một đèn nhà gắn trên tường phía sau chiếu sáng buồng. Một bộ phân phối viên phân phối viên thức ăn (20 hoặc 45 mg; Bio-Serv, Frenchtown, NJ) làm chất tăng cường vào tạp chí. Các mục đầu được phát hiện bởi một tế bào quang điện gắn phía trên thùng chứa cốt thép. Trong tạp chí này là một ánh sáng kích thích. Đối với chuột, một đòn bẩy được đặt ở mỗi bên của tạp chí. Đối với chuột, hai khẩu độ mũi được đặt trên bức tường phía sau của buồng (tức là đối diện với tạp chí gia cố).
Trong thời gian 5 d ngay trước khi bắt đầu huấn luyện, động vật bị hạn chế quyền truy cập tối thiểu vào thức ăn mỗi ngày và tiếp xúc với các viên thức ăn làm từ ngũ cốc (chuột, 90 mg; chuột, 20 mg) trong chuồng tại nhà. Trong thời gian thử nghiệm, các viên thức ăn được cung cấp không liên tục trong các buồng hoạt động theo giao thức hành vi (xem bên dưới) cũng như với số lượng không giới hạn trong lồng gia đình cho 45 min, bắt đầu 90 min sau phiên kiểm tra hàng ngày. Lịch trình tiếp cận thực phẩm này cho phép mỗi cá thể động vật đạt đến điểm bão hòa riêng và giảm sự biến đổi do cạnh tranh giữa động vật trội và động vật phụ. Trong tay của chúng tôi, lịch trình này cho phép tăng cân chậm sau khi giảm cân ban đầu để ~85 tầm 90% trọng lượng cho ăn tự do. Trọng lượng động vật đã được theo dõi trong suốt thí nghiệm.
Tất cả các đối tượng ban đầu được làm quen với thiết bị thử nghiệm cho 2 d; trong các buổi này, các viên thức ăn được đưa vào tạp chí gia cố theo lịch trình thời gian cố định (FT-15). Bắt đầu vào ngày hôm sau, các đối tượng đã nhận được các buổi đào tạo hàng ngày cho 15 ngày liên tiếp. Đáp ứng cho thực phẩm đã được thử nghiệm dựa trên các quy trình điều hòa dụng cụ đã được công bố trước đó (Baldwin và cộng sự, 2002b). Đáp ứng trên đòn bẩy / mũi hoạt động chính xác (nghĩa là hoạt động) đã được củng cố, trong khi phản ứng với đòn bẩy / không hoạt động khác (không hoạt động) không có hậu quả được lập trình. Vị trí của ống mũi hoạt động hoặc đòn bẩy (trái / phải) được cân bằng cho tất cả các nhóm thử nghiệm. Hoàn thành yêu cầu đáp ứng (xem bên dưới) dẫn đến sự khởi đầu của ánh sáng kích thích tạp chí, theo sau 1 bằng cách cung cấp một viên thức ăn duy nhất. Hai giây sau, đèn kích thích đã tắt. Các chất tăng cường 10 đầu tiên thu được sau khi hoàn thành đáp ứng theo lịch trình tỷ lệ cố định (FR1), sau đó các viên có sẵn sau khi đáp ứng theo lịch trình tỷ lệ thay đổi (VR2). Phiên kéo dài trong 15 phút.
Các thí nghiệm 3 (chuột) và 5 (chuột) đã sử dụng lịch đào tạo thay thế để tránh tác động tiềm tàng của sự khác biệt trong hiệu suất của thiết bị trong quá trình đào tạo đối với đáp ứng tỷ lệ tiến bộ tiếp theo (chi tiết bên dưới). Trong thử nghiệm 3, chuột được huấn luyện theo lịch FR1 cho 2 d và sau đó theo lịch FR2 cho 8 d. 3 d đầu tiên của thử nghiệm đã sử dụng các phiên 60 tối thiểu. Vào những ngày đào tạo 7 vừa qua, phiên đã kết thúc khi mua lại các chất tăng cường 50. Trong thử nghiệm 5, chuột được huấn luyện theo lịch trình FR1 / VR2 trong các phiên tối thiểu 15 như được mô tả ở trên cho tất cả các thử nghiệm khác với hai ngoại lệ. Đầu tiên, một số lượng tối đa các viên 150 / phiên đã được phân phối. Thứ hai, những con vật này đã nhận được 5 thêm ngày huấn luyện (nghĩa là tổng số 15 d) để cho phép thiết lập hiệu suất ổn định trước bất kỳ thao tác thử nghiệm nào.
Động vật cũng đã được thử nghiệm để đáp ứng cho thực phẩm theo lịch trình tăng cường tỷ lệ lũy tiến. Trong thử nghiệm này, yêu cầu đáp ứng để có được thực phẩm được bắt đầu theo lịch FR1 nhưng tăng dần bởi 2 để có được chất tăng cường tiếp theo (ví dụ: 1, 3, 5, 7, X + 2). Trong thí nghiệm điều trị bằng thuốc sử dụng chuột, lịch trình được tăng dần bằng 5, mang lại một lịch trình cuối cùng là 1, 6, 11, 16, X + 5. Tất cả các thông số khác được giữ giống hệt với quy trình đào tạo chi tiết ở trên. Thử nghiệm đã bị chấm dứt khi không có phản hồi tích cực nào được thực hiện cho 5 phút.
Củng cố giảm giá.
Hiệu quả của việc phá giá chất tăng cường đã được kiểm tra bằng cách sử dụng phương pháp cho con ăn cụ thể. Ở đây, chuột được phép ăn các viên thức ăn làm từ ngũ cốc không giới hạn trong lồng nhà của chúng trong thời gian 3 h trước khi thử nghiệm theo lịch trình tăng cường tỷ lệ lũy tiến như mô tả ở trên.
Kỹ thuật phẫu thuật.
Động vật đã được gây mê bằng Equithesin [hỗn hợp chứa pentobarbital (35 mg / kg) và chloral hydrate (183.6 mg / kg) trong ethanol (10% v / v) và propylene glycol (39% v / v); quản lý tại 4.32 ml / kg, ip]. Các công thức (Nhựa One, Roanoke, VA) đã được phẫu thuật cấy ghép nhằm vào lõi NAc, sử dụng thiết bị lập thể Kopf. Các tọa độ lập thể được sử dụng liên quan đến bregma như sau: trước / sau, + 1.5 mm; bên / trung gian, ± 1.5 mm; bụng / lưng, −6.0 mm (Paxinos và Watson, 1986). Các ống thông được neo vào hộp sọ bằng vít và xi măng nha khoa. Obturators được đặt vào ống dẫn hướng dẫn để ngăn chặn. Sau phẫu thuật, động vật đã được chăm sóc hậu phẫu tiêu chuẩn và được phép phục hồi cho 5 d trước khi bắt đầu bất kỳ thí nghiệm nào.
Truyền dịch.
Truyền tĩnh mạch của vec tơ virus được thực hiện song phương 40 h trước khi bắt đầu đào tạo (xem bên dưới). Các ống tiêm (thước đo 31), kéo dài 1 mm bên dưới đầu ống dẫn hướng, được hạ từ từ đồng thời vào bên trái và NAc bên phải, và 1.0 μl / bên được truyền trong khoảng thời gian tối thiểu 4 với tốc độ truyền của 0.25 μl / tối thiểu sử dụng bơm vi tiêm (PHD-5000; Bộ máy Harvard, Holliston, MA). Các kim tiêm truyền được để lại tại chỗ cho 1 phút sau khi truyền xong, và các ống thông giả được thay thế. Các vị trí Cannula đã được xác minh về mặt mô học sau khi hoàn thành các thí nghiệm hành vi (xem hình 6B) và chỉ những động vật có ống thông được đặt chính xác mới được đưa vào phân tích thống kê dữ liệu thực nghiệm.
Phân tích mô học và duy trì miễn dịch.
Sau khi hoàn thành các thí nghiệm, các động vật đã được phẫu thuật như là một phần của thí nghiệm đã được gây mê bằng Equithesin và được tưới máu bằng cách sử dụng 0.1 m PBS (5 min) và 10% formalin (10 min) theo quy trình chuẩn. Não được đặt sau tiền tố trong formalin và sau đó được đặt trong dung dịch sucrose đệm phosphate (30%). Tất cả các bộ não sau đó được cắt trong các phần 40 onm trên microtome và được sử dụng để phân tích mô học của vị trí ống thông và biểu hiện protein.
Vị trí Cannula được thực hiện trong các phần đối lập với màu đỏ trung tính và được gắn trên các phiến kính hiển vi trong chất dẻo distyrene và xylene (DPX) sau khi mất nước ethanol. Hóa mô miễn dịch đã được thực hiện như mô tả trước đây (Hommel và cộng sự, 2003). Nói tóm lại, biểu hiện của-galactosidase sau khi truyền HSV-LacZ được xác định bằng nhuộm huỳnh quang miễn dịch bằng cách sử dụng kháng thể chính chống-galactosidase của dê (1: 5000; Biogenesis, Kingston, NH). Sau khi ủ qua đêm, các phần được rửa sạch và sau đó được ủ bằng kháng thể thứ cấp chống lừa huỳnh quang kết hợp với Cy2 (1: 200; Jackson ImmunoResearch, West Grove, PA). Các phần được rửa lại sau đó là mất nước ethanol và gắn trong DPX. Các phần kiểm soát liền kề được điều trị giống hệt nhau mà không bao gồm các kháng thể chính. Miễn dịch huỳnh quang được đánh giá ở 520 nm bằng cách sử dụng một Zeiss Kính hiển vi (Oberkochen, Đức) với bộ lọc FITC và hình ảnh được chụp tại thời điểm phơi sáng giống hệt nhau với Zeiss Hệ thống hình ảnh kỹ thuật số Axiovision.
Thống kê học
Dữ liệu từ tất cả các thử nghiệm được đánh giá bằng cách sử dụng ANOVA một, hai hoặc ba chiều, theo sau là thử nghiệm post hoc của Scheffe hoặc Dunnett, hiệu chỉnh cho nhiều so sánh nếu thích hợp bằng cách sử dụng thử nghiệm loại bỏ tuần tự của Holm. Giá trị p ≤ 0.05 được coi là có ý nghĩa thống kê.
Kết quả
Thí nghiệm 1: ảnh hưởng của phơi nhiễm thuốc lặp đi lặp lại đối với hiệu suất của dụng cụ và đáp ứng tỷ lệ lũy tiến
Để xác nhận rằng mô hình tiếp xúc với thuốc lặp đi lặp lại của chúng tôi đã tạo ra các phản ứng thần kinh có ý nghĩa về mặt chức năng, trước tiên chúng tôi đã đánh giá sự nhạy cảm vận động như một biện pháp hành vi nguyên mẫu của hành động thuốc mãn tính. Chuột được tiêm hai lần mỗi ngày nicotine (0.35 mg / kg), MDMA (5 mg / kg), cocaine (15 mg / kg) hoặc amphetamine (2.5 mg / kg) và hoạt động vận động đã được thử nghiệm sau lần tiêm đầu tiên vào ngày điều trị 1 và 15 (hình bổ sung 1A bùng E, có sẵn tại www.jneurosci.org làm tài liệu bổ sung). Phân tích thống kê cho thấy một điều trị quan trọng bằng tương tác ngày (F(4,42) = 9.335; p ≤ 0.0001). Ngoại trừ MDMA (p = 0.62), tất cả các loại thuốc gây ra hoạt động vận động lớn hơn đáng kể (nghĩa là nhạy cảm) vào ngày 15 so với ngày 1 (nicotine, p ≤ 0.001; cocaine, p ≤ 0.001; amphetamine, p 0.01; Tiêm nước muối nhiều lần không có tác dụng. Không có phương pháp điều trị bằng thuốc nào làm thay đổi hoạt động vận động cơ bản được đo trong thời gian tập trung vào ngày 15 (hình bổ sung 2A, có sẵn tại www.jneurosci.org làm tài liệu bổ sung).
Năm ngày sau lần tiêm thuốc cuối cùng, chúng tôi đã kiểm tra tác động của việc tiếp xúc với nicotine, MDMA, cocaine hoặc amphetamine lặp đi lặp lại đối với hành vi của dụng cụ gia cố thực phẩm. Các dữ liệu được trình bày cho từng loại thuốc riêng biệt trong Hình 1Một người H sử dụng nhóm kiểm soát mặn tương tự để so sánh. Chúng tôi thấy rằng việc tiếp xúc trước đây với từng loại thuốc này một cách đáng kể và đáp ứng có chọn lọc công cụ tăng cường thực phẩm (điều trị bằng đòn bẩy bằng ngày huấn luyện, F(36,378) = 1.683; p ≤ 0.01; phân tích bài hoc: nicotine, p ≤ 0.01; MDMA, p ≤ 0.05; cocaine, p ≤ 0.01; amphetamine, p ≤ 0.001). Sự gia tăng liên tục trong đáp ứng công cụ quan sát thấy ở hiệu suất tiệm cận cho thấy có thể tăng cường động lực, phù hợp với sự gia tăng được báo cáo trước đó sau khi tiếp xúc với thuốc kích thích tâm thần lặp đi lặp lại (xem Thảo luận). Do đó, chúng tôi đã kiểm tra xem liệu tiếp xúc với thuốc lặp đi lặp lại có tăng cường động lực bằng cách sử dụng lịch biểu tỷ lệ lũy tiến hay không. Có một ảnh hưởng thống kê của việc tiếp xúc với thuốc trước đây trong việc đáp ứng với đòn bẩy hoạt động (điều trị bằng tương tác đòn bẩy, F(4,42) = 3.340; p ≤ 0.05) (Sung. 2A) cũng như điểm dừng cuối cùng (F(4,42) = 5.560; p ≤ 0.001) (Sung. 2B). Phân tích bổ sung cho thấy tất cả các phương pháp điều trị đều tăng cả số phản ứng tích cực (nicotine, p ≤ 0.001; MDMA, p ≤ 0.05; cocaine, p ≤ 0.001; amphetamine, p ≤ 0.001) và điểm phá vỡ (nicotine, p ≤ 0.001; , p 0.01; cocaine, p 0.0001; amphetamine, p ≤ 0.0001) phù hợp với tác dụng của các phương pháp điều trị này đối với động lực. Do thiếu tác dụng của thuốc đối với hoạt động vận động cơ bản và thiếu tác dụng đối với máy ép đòn bẩy không hoạt động, không có khả năng tăng phản ứng đối với thực phẩm trong những điều kiện này phản ánh sự gia tăng không đặc hiệu trong hoạt động vận động.
Hình 1.
Hiệu quả của việc tiêm lặp lại nicotine trước đây (0.35 mg / kg), MDMA (2.5 mg / kg), cocaine (15 mg / kg) hoặc amphetamine (2.5 mg / kg) hai lần mỗi ngày đối với hành vi cụ thể tiếp theo. Các động vật đã được thử nghiệm cùng nhau, nhưng để rõ ràng, tác dụng của từng loại thuốc được trình bày riêng biệt, sử dụng cùng nhóm đối chứng được xử lý bằng nước muối. A (phản ứng tích cực) và B (phản ứng không hoạt động) cho thấy tác động của phơi nhiễm nicotine trước đó; C, D, MDMA; E, F, cocaine; G, H, amphetamine. Dữ liệu được biểu diễn dưới dạng phương tiện ± SEM.
Hình 2.
Ảnh hưởng của điều trị lặp lại trước đó (hai lần mỗi ngày, 15 ngày) với nước muối, nicotin (0.35 mg / kg), MDMA (2.5 mg / kg), cocaine (15 mg / kg) hoặc amphetamine (2.5 mg / kg) đối với phản ứng của dụng cụ trên một lịch trình tăng cường tỷ lệ lũy tiến. Dữ liệu được biểu diễn dưới dạng phương tiện ± SEM. *** p <0.001; ** p <0.01; * p <0.05. Sal, nước muối; Nic, nicotin; Cốc, cocain; Amph, amphetamine; PR, tỷ số lũy tiến.
Phơi nhiễm thuốc trước đó cũng không ảnh hưởng đến trọng lượng cơ thể được ghi nhận trước khi hạn chế thực phẩm, vào ngày đầu tiên hoặc ngày cuối cùng của việc luyện tập dụng cụ, hoặc ngay trước khi thử nghiệm tỷ lệ tiến bộ (hình bổ sung 2B, có sẵn tại www.jneurosci.org làm tài liệu bổ sung). Việc tiếp cận thực phẩm bị hạn chế đối với 3 d ban đầu đã làm giảm trọng lượng cơ thể xuống mức trung bình 91 XN 92% trọng lượng cho ăn tự do. Khi kết thúc thử nghiệm hành vi, trọng lượng đã trở về 97 tầm 99% trọng lượng cơ thể trước khi điều trị, và không có sự khác biệt nào được quan sát giữa động vật bị phơi nhiễm thuốc và nhiễm mặn. Do đó, việc thay đổi trọng lượng cơ thể và sự khác biệt về đói hoặc thèm ăn sẽ không đóng góp đáng kể vào việc tăng cường quan sát hiệu suất của động cơ hoặc động lực.
Thí nghiệm 2: sự biểu hiện quá mức của ΔFosB ở chuột bitransgenic; biểu diễn nhạc cụ
Tiếp theo chúng tôi đã kiểm tra xem hiệu suất của nhạc cụ cũng được tăng lên ở những con chuột bitransgenic có khả năng biểu hiện quá mức ΔFosB với sự chọn lọc rõ rệt trong NAc và vây lưng (Kelz và cộng sự, 1999). Trong thí nghiệm này, những con chuột biểu hiện quá mức ΔFosB đã được so sánh với các biện pháp kiểm soát bạn cùng lứa không biểu hiện quá mức ΔFosB vì chúng được duy trì trên doxycycline (xem Vật liệu và Phương pháp). Chúng tôi thấy rằng sự biểu hiện quá mức của ΔFosB làm tăng đáng kể phản ứng được củng cố thực phẩm (biểu hiện gen bằng đòn bẩy trong ngày huấn luyện, F(9,126) = 3.156; p ≤ 0.01) (Sung. 3A). Số lượng phản ứng mũi được thực hiện trong khẩu độ không hoạt động không khác nhau giữa hai nhóm (Sung. 3B). Cùng với nhau, những dữ liệu này chỉ ra rằng FosB biểu hiện quá mức trong NAc và vây lưng tăng hiệu suất của nhạc cụ
Hình 3
Ảnh hưởng của sự biểu hiện quá mức gây cảm ứng của ΔFosB ở chuột bitransgenic đối với hiệu suất của thiết bị. A, Phản ứng tích cực. B, Phản ứng không hoạt động. Dữ liệu được biểu diễn dưới dạng phương tiện ± SEM.
Để loại trừ rằng sự tăng cường hiệu suất của dụng cụ ở động vật biểu hiện quá mức ΔFosB có thể được giải thích bằng sự thay đổi khẩu vị hoặc cơn đói, trọng lượng cơ thể đã được ghi lại trước khi hạn chế thức ăn và vào những ngày đầu tiên và cuối cùng của khóa huấn luyện. FosB không có ảnh hưởng đến trọng lượng cơ thể trước khi hạn chế thực phẩm, cũng không có ảnh hưởng đến trọng lượng cơ thể trong quá trình kiểm tra hành vi. Ở đây, việc truy cập thực phẩm bị hạn chế đối với 3 d đã giảm trọng lượng cơ thể xuống mức trung bình là 87 XN 89% trọng lượng cho ăn tự do. Khi kết thúc thử nghiệm hành vi, trọng lượng động vật là 97, 99% trọng lượng cơ thể trước khi sinh, với những thay đổi tương đương được thấy trong ΔFosB và chuột điều khiển (hình bổ sung 3A, có sẵn tại www.jneurosci.org làm tài liệu bổ sung). Do đó, không có khả năng các tác động tiềm tàng của biểu hiện quá mức ΔFosB đối với đói hoặc thèm ăn có thể giải thích cho các cải tiến trong phản ứng của công cụ được quan sát.
Khi thử nghiệm về hiệu suất của thiết bị đã được hoàn thành, biểu hiện quá mức ΔFosB không làm thay đổi hoạt động vận động cơ bản được đo trong khoảng thời gian tối thiểu 30 (hình bổ sung 3B, có sẵn tại www.jneurosci.org làm tài liệu bổ sung). Quan sát này ủng hộ quan điểm rằng sự thay đổi không đặc hiệu trong hoạt động không góp phần vào hiệu suất công cụ nâng cao được quan sát thấy ở những động vật này. Tuy nhiên, chuột bitransgenic biểu hiện quá mức ΔFosB đã được báo cáo để thể hiện phản ứng vận động tăng cường đối với cocaine cấp tính và lặp đi lặp lại (Kelz và cộng sự, 1999). Vì chúng tôi đã sử dụng một lịch trình rút tiền khác nhau từ doxycycline để gây ra biểu hiện gen (tuần 6 với hạn chế thực phẩm), chúng tôi đã đặt ra để xác nhận kiểu hình này. Thật vậy, những con chuột biểu hiện quá mức ΔFosB đã chứng minh sự gia tăng hoạt động vận động lớn hơn đáng kể khi được tiêm cocaine so với kiểm soát bạn cùng lứa được duy trì trên doxycycline (điều trị bằng biểu hiện gen, F(1,44) = 4.241; p ≤ 0.05) (hình bổ sung 3C, có sẵn tại www.jneurosci.org làm tài liệu bổ sung).
Thí nghiệm 3: sự biểu hiện quá mức của ΔFosB ở chuột bitransgenic; tỷ lệ lũy tiến
Cho rằng tiếp xúc với thuốc trước đó gây ra FosB (Nestler và cộng sự, 2001) và đã được tìm thấy ở đây để tăng đáp ứng tỷ lệ lũy tiến, tiếp theo chúng tôi đã kiểm tra xem liệu biểu hiện quá mức chuyển gen của ΔFosB cũng làm tăng hiệu suất theo lịch trình tăng cường tỷ lệ lũy tiến. Một nhóm chuột mới đã được huấn luyện về phản ứng công cụ trong các điều kiện (xem Vật liệu và Phương pháp) không tạo ra sự khác biệt đáng kể về hiệu suất của thiết bị trước khi thử nghiệm đáp ứng tỷ lệ lũy tiến (F(1,16) <1). Tuy nhiên, trong thử nghiệm tỷ lệ lũy tiến, chúng tôi quan sát thấy một biểu hiện gen đáng kể bằng tương tác đòn bẩy (F(1,16) = 5.30; p ≤ 0.05) (Sung. 4A) và nhận thấy rằng chuột biểu hiện quá mức osFosB, so với chuột điều khiển xả rác được duy trì trên doxycycline, đã tạo ra số lượng lớn hơn các phản ứng hoạt động (p ≤ 0.05), trong khi số lượng phản ứng đòn bẩy không hoạt động không khác nhau. Chuột biểu hiện quá mức FosB cũng đạt điểm dừng cao hơn (F(1,16) = 5.73; p ≤ 0.05) (Sung. 4B). Những dữ liệu này cho thấy, giống như phơi nhiễm thuốc kích thích tâm thần trước đây, sự biểu hiện quá mức của FosB làm tăng động lực. Do số lượng phản ứng không hoạt động không bị thay đổi ở những con chuột biểu hiện quá mức ΔFosB, nên sự gia tăng không đặc hiệu trong hoạt động không có khả năng đóng góp vào những hiệu ứng này. Quan điểm này được hỗ trợ thêm bằng các đánh giá về hoạt động vận động cơ bản trong đó không có sự khác biệt giữa chuột biểu hiện quá mức ΔFosB và chuột điều khiển xả rác được duy trì trên doxycycline. Không có sự khác biệt lớn về trọng lượng cơ thể giữa animalsFosB - biểu hiện quá mức và kiểm soát động vật rõ ràng như được đo trong ngày thử nghiệm. Do đó, mặc dù các động vật biểu hiện quá mức ΔFosB sẽ phát ra nhiều phản ứng công cụ thúc đẩy thức ăn hơn, chúng dường như không tiêu thụ nhiều thức ăn hơn khi có sẵn miễn phí. Lời giải thích khả dĩ nhất cho quan sát này là, mặc dù động lực quyết định mức độ khó của động vật để có được chất tăng cường, nhưng nhiều yếu tố bổ sung (thèm ăn, no, trạng thái trao đổi chất, v.v.) ảnh hưởng đến hành vi cho ăn và tiêu thụ thực phẩm.
Hình 4.
Ảnh hưởng của sự biểu hiện quá mức có thể cảm ứng của FosB ở chuột chuyển gen đối với phản ứng của thiết bị theo một lịch trình tỷ lệ lũy tiến của chất tăng cường, trước và sau khi giảm giá chất tăng cường gây ra cảm giác no. A, B, Cơ sở: phản hồi đòn bẩy (A), điểm ngắt (B). C, D, Sau khi phá giá chất gia cố: phản ứng đòn bẩy (C), điểm phá vỡ (D). Dữ liệu được biểu diễn dưới dạng phương tiện ± SEM. * p <0.05.
Chuột bitransgenic ΔFosB được sử dụng ở đây thể hiện ΔFosB trong suốt phần trước. Trong khi đó, vây bụng (bao gồm NAc) có liên quan đến các quá trình tạo động lực, thì vây lưng được cho là có liên quan đến việc thu nhận các thói quen của công cụ (Yin và cộng sự, 2004; Faure và cộng sự, 2005). Mặc dù chúng tôi không quan sát thấy sự khác biệt về hiệu suất của thiết bị trong giai đoạn đào tạo sử dụng lịch biểu tỷ lệ thấp với giới hạn gia cố tối đa, điều kiện tương đối chống lại sự phát triển của thói quen công cụ (Dickinson, 1985), có thể việc thiết lập thói quen có thể ảnh hưởng đến việc đáp ứng theo lịch biểu tỷ lệ lũy tiến. Khả năng này đã được kiểm tra trực tiếp bằng cách đánh giá ảnh hưởng của sự mất giá của chất gia cố bằng cách cho ăn trước khi đáp ứng tỷ lệ lũy tiến. Việc cho con bú như vậy đã làm mất tác dụng của ΔFosB đối với việc đáp ứng tỷ lệ lũy tiến, không có sự khác biệt trong việc đáp ứng hoặc phá vỡ các điểm quan sát giữa FosB - biểu hiện quá mức và kiểm soát chuột (F(1,16) <1) (Sung. 4CD). Cùng với nhau, những dữ liệu này cho thấy rằng sự biểu hiện quá mức của ΔFosB không làm thay đổi độ nhạy cảm đối với những thay đổi về giá trị của kết quả được khen thưởng khi sử dụng lịch trình thử nghiệm này. Thay vào đó, phản ứng công cụ quan sát được trong thử nghiệm tỷ lệ lũy tiến dường như được định hướng theo mục tiêu và điểm phá vỡ tăng lên được quan sát thấy ở những con chuột biểu hiện quá mức ΔFosB có thể là do động lực tăng cường và không phản ứng giống như thói quen.
Thí nghiệm 4: biểu hiện quá mức qua trung gian virus của ΔFosB trong lõi NAc: hiệu suất của thiết bị
Để đánh giá liệu FosB biểu hiện quá mức có chọn lọc trong NAc có thể giải thích cho hành vi được quan sát thấy ở chuột bitransgenic hay không, chúng tôi đã truyền HSV-ΔFosB hoặc HSV-LacZ như một biện pháp kiểm soát, chọn lọc vào lõi NAc của chuột hiệu suất nhạc cụ -reinforced (Sung. 5A, B). Sau khi đào tạo tạp chí, HSV-ΔFosB hoặc HSV-LacZ đã được truyền vào lõi NAUM 40 h trước khi bắt đầu thử nghiệm hành vi. Vị trí tiêm truyền và mức độ biểu hiện gen qua trung gian virus được thể hiện trong Hình 6, Truyền dịch A và B. NAc của HSV-ΔFosB đã tạo ra sự gia tăng bền vững về số lượng phản ứng tích cực được thực hiện (biểu hiện gen bằng đòn bẩy, F(1,12) = 8.534; p ≤ 0.05) (Sung. 5A), tồn tại trong suốt thí nghiệm. Những hiệu ứng này được chọn lọc, vì không có tác động đáng kể nào của sự biểu hiện quá mức ΔFosB trong lõi NAc đối với số lượng phản ứng không hoạt động (Sung. 5B) hoặc trên hoạt động vận động cơ sở được ghi lại vào ngày sau khi hoàn thành thí nghiệm (dữ liệu không được hiển thị). Sự biểu hiện quá mức của ΔFosB trong NAc do đó bắt chước các tác động hành vi của việc tiếp xúc với thuốc trước đây hoặc biểu hiện quá mức của FosB.
Hình 5.
Ảnh hưởng của truyền HSV-ΔFosB vào lõi NAc trước khi đào tạo về phản ứng dụng cụ. A, Phản ứng tích cực. B, Phản ứng không hoạt động. Dữ liệu được biểu diễn dưới dạng phương tiện ± SEM.
Hình 6.
A, Vị trí của các trang web tiêm truyền cho các thí nghiệm vectơ virus. Trên cùng, Các vòng tròn màu đen đầy tương ứng với trang web tiêm truyền dự định. Chỉ truyền trong ∼0.5 mm của khu vực này (nghĩa là trong lõi NAc), như được chỉ ra bởi vòng tròn, được coi là chấp nhận được. Động vật được truyền dịch bên ngoài khu vực này đã bị loại khỏi các phân tích thống kê. Dưới cùng, trang web tiêm truyền trong NAc trong một động vật đại diện. B, Xác minh hóa mô miễn dịch biểu hiện protein sau khi truyền HSV-LacZ. Các tấm trên cùng thể hiện biểu hiện-galactosidase trong lõi NAc (độ phóng đại 2.5 và 10 ×). Các bảng dưới cùng cho thấy sự thiếu miễn dịch huỳnh quang trong các phần kiểm soát liền kề sử dụng cùng một quy trình hóa mô miễn dịch mà không bao gồm kháng thể chính.
Thí nghiệm 5: biểu hiện quá mức qua trung gian virus của ΔFosB trong lõi NAc: tỷ lệ lũy tiến
Thí nghiệm cuối cùng trực tiếp xác định liệu sự biểu hiện quá mức của ΔFosB trong lõi NAc bằng cách sử dụng phương pháp chuyển gen qua trung gian virus có đủ để tăng cường động lực ở chuột hay không. Ở đây, HSV-ΔFosB chỉ được truyền sau khi hoàn thành đào tạo công cụ, loại bỏ mọi ảnh hưởng tiềm tàng của biểu hiện quá mức FosB trong quá trình đào tạo trong bài kiểm tra tỷ lệ tiến bộ tiếp theo. Một nhóm chuột mới đã được huấn luyện, như trước đây và được chia thành các nhóm thử nghiệm cân bằng dựa trên hiệu suất của chúng vào những ngày huấn luyện cuối cùng. Các động vật sau đó đã được truyền dịch song phương HSV-ΔFosB hoặc HSV-LacZ vào lõi NAc và đã được thử nghiệm về tỷ lệ tiến triển đáp ứng sau khi 5 d biểu hiện quá mức. Phân tích thống kê cho thấy một biểu hiện gen quan trọng bằng tương tác đòn bẩy (F(1,12) = 14.91; p ≤ 0.01) (Sung. 7A). Những con chuột được truyền HSV-ΔFosB tạo ra phản ứng tích cực hơn (p ≤ 0.01) so với những con chuột được truyền HSV-LacZ, trong khi phản ứng trên đòn bẩy không hoạt động không bị ảnh hưởng. Phù hợp với sự gia tăng này, chuột được truyền HSV-ΔFosB cũng có điểm phá vỡ cao hơn (F(1,12) = 18.849; p ≤ 0.001) (Sung. 7B) so với động vật truyền HSV-LacZ. Không có tác dụng của ΔFosB đối với hoạt động vận động cơ bản đã thử nghiệm 1 h trước khi thử nghiệm tỷ lệ lũy tiến (hình bổ sung 4A, có sẵn tại www.jneurosci.org làm tài liệu bổ sung). Cũng không có sự khác biệt về trọng lượng cơ thể vào ngày thử nghiệm tỷ lệ lũy tiến (hình bổ sung 4B, có sẵn tại www.jneurosci.org làm tài liệu bổ sung). Những phát hiện này hỗ trợ cho những quan sát của chúng tôi với chuột biến đổi gen ΔFosB, và chỉ ra rằng sự biểu hiện quá mức có chọn lọc của ΔFosB trong NAc là đủ để tăng cường động lực liên quan đến thực phẩm.
Hình 7.
Ảnh hưởng của việc truyền HSV-ΔFosB 5 ngày trước khi thử nghiệm đối với phản ứng của thiết bị theo lịch trình tăng cường tỷ lệ lũy tiến. A, Phản hồi đòn bẩy. B, Điểm nghỉ. Dữ liệu được biểu diễn dưới dạng phương tiện ± SEM. *** p <0.001; ** p <0.01.
Thảo luận
Nghiên cứu hiện tại chứng minh rằng sự biểu hiện quá mức của ΔFosB trong NAc giúp tăng cường các hành vi công cụ được tăng cường thực phẩmr. Phơi nhiễm trước đó với cocaine, amphetamine, MDMA hoặc nicotine được tăng cường đã tạo ra sự gia tăng lâu dài trong hiệu suất nhạc cụ tiếp theo. Những phơi nhiễm thuốc này cũng làm tăng hành vi thúc đẩy thực phẩm theo một lịch trình tăng cường tỷ lệ lũy tiến. Những ảnh hưởng của việc tiếp xúc với thuốc trước đây được mô phỏng bằng cách thể hiện quá mức hạn chế ΔFosB trong vùng vân, sử dụng chuột bitransgenic (NSE-tTA × TetOP-ΔFosB) hoặc sử dụng một vec tơ mới để biểu hiện FosB một cách chọn lọc trong NAc. Đáng chú ý, sự biểu hiện quá mức của ΔFosB trong lõi NAc, sau khi đã có phản ứng cụ, đã tăng cường động lực cho thực phẩm theo lịch trình tỷ lệ tiến bộ. Cùng với nhau, các phát hiện của chúng tôi xác định ΔFosB trong lõi NAc là một trung gian tiềm năng của phản ứng thần kinh do thuốc có thể thúc đẩy hành vi công cụ, mở rộng vai trò của yếu tố phiên mã này bao gồm các quá trình liên quan đến ảnh hưởng động lực đến việc thực hiện hành vi được củng cố thực phẩm. Họ cũng nâng cao khả năng các điều kiện gây ra biểu hiện ΔFosB trong NAc có thể ảnh hưởng đến các đặc tính động lực của cả thuốc tăng cường tự nhiên và thuốc.
FosB tích lũy trong các tế bào thần kinh gai trung bình biểu hiện dynorphin của cả NAc và vây lưng sau mãn tính, nhưng không cấp tính, tiếp xúc với thuốc lạm dụng. Kiểu biểu hiện khu vực này được sao chép trong các con chuột biểu hiện quá mức bitFosB cảm ứng được sử dụng ở đây. Trong những con chuột này nồng độ ΔFosB trong thể vân tăng cao làm tăng độ nhạy cảm của động vật với cocaine và morphin khi được đo bằng sự ưa thích nơi điều hòa (Kelz và cộng sự, 1999; Zachariou và cộng sự, 2006). Nó cũng làm tăng tỷ lệ tiến bộ đáp ứng với cocaine cho thấy rằng động lực để tự quản lý cocaine được tăng cường nhờ sự biểu hiện quá mức ΔFosB (Colby và cộng sự, 2003). Ở đây, chúng tôi thấy rằng sự biểu hiện quá mức ΔFosB ở những con chuột này cũng làm tăng tỷ lệ tiến bộ đáp ứng cho một chất tăng cường thực phẩm và những tác động này được tái tạo bằng cách biểu hiện quá mức qua trung gian virus của ΔFosB trong lõi NAc ở chuột. Dữ liệu của chúng tôi cho thấy ΔFosB có thể hoạt động như một bộ điều biến phiên mã động lực cho các chất tăng cường chính, có thể là thực phẩm, thuốc, hoặc có thể tập thể dục, một ý tưởng phù hợp với các quan sát sơ bộ rằng biểu hiện nổi bật của ΔFosB được tăng lên sau khi bánh xe chạy hoặc uống sucrose (McClung và cộng sự, 2004). Những dữ liệu này cho thấy sự biểu hiện quá mức NAc của ΔFosB có thể tăng cường tác động động lực của cả thuốc tăng cường tự nhiên và thuốc.
Các tiểu vùng của NAc đã được tranh luận để làm trung gian khác nhau ảnh hưởng của các quá trình khuyến khích pavlovian hoặc công cụ đến hiệu suất công cụ (Corbit và cộng sự, 2001; de Borchgrave và cộng sự, 2002), trong khi những ảnh hưởng động lực chung hơn đến hiệu suất của nhạc cụ có thể được mã hóa bởi các khu vực khác như hạt nhân trung tâm của amygdala (Corbit và Balleine, 2005). Tuy nhiên, lõi NAc cũng được đề xuất là một trang quan trọng để thu nhận học tập công cụ hướng mục tiêu (Smith-Roe và Kelley, 2000; Baldwin và cộng sự, 2002a,b; Kelley, 2004). Chúng tôi cho thấy tác dụng tương đương của phơi nhiễm thuốc trước đây và biểu hiện vượt trội FosB trong việc cải thiện hành vi của dụng cụ. Truyền dịch HSV-ΔFosB giới hạn trong lõi NAc cũng làm tăng đáp ứng dụng cụ gia cố thực phẩm. Mặc dù các thí nghiệm này không loại trừ sự đóng góp của vây lưng trong các hành vi này, nhưng chúng khuyến nghị mạnh mẽ rằng các thay đổi do ΔFosB gây ra trong biểu hiện gen trong NAc là đủ để tăng phản ứng thúc đẩy thức ăn. Bởi vì đáp ứng tỷ lệ lũy tiến cũng được tăng cường khi ΔFosB được thể hiện sau khi đạt được hiệu suất công cụ ổn định trước đó, một vai trò cho ảnh hưởng động lực lên hành vi công cụ dường như có thể. Tuy nhiên, khả năng các thao tác của chúng tôi cũng ảnh hưởng đến các quá trình học tập công cụ có thể không được loại trừ hoàn toàn. Để hỗ trợ cho kết luận của chúng tôi, sự gia tăng hiệu suất của nhạc cụ được quan sát sau khi tiếp xúc với cocaine trước đó (Miles và cộng sự, 2004) đã được tranh luận liên quan đến sự thay đổi động lực phù hợp với khả năng điều trị nicotine mãn tính để tăng tỷ lệ đáp ứng tiến triển ở chuột (Brunzell và cộng sự, 2006). Hơn nữa, chuột hạ gục vận chuyển dopamine, trong đó nồng độ dopamine ngoại bào được tăng lên, hiển thị cả khả năng miễn dịch ΔFosB tăng cường và động lực củng cố thực phẩm, nhưng không thay đổi việc học (Cagniard và cộng sự, 2006). Hơn thế nữa, chúng tôi thấy rằng sự biểu hiện quá mức của ΔFosB ở chuột không ảnh hưởng đến hiệu suất khi thức ăn bị mất giá bởi việc cho con bú. Những dữ liệu này chỉ ra rằng động vật rất nhạy cảm với giá trị động lực của chất tăng cường và việc đáp ứng là hướng đến mục tiêu.
Phơi nhiễm thuốc lặp đi lặp lại trước đây cũng có thể tăng cường kiểm soát hành vi gây ra bởi các kích thích có điều kiện liên quan đến các chất tăng cường tự nhiên, được đo bằng phương pháp pavlovian (Harmer và Phillips, 1998; Taylor và Jentsch, 2001; Olausson và cộng sự, 2003), gia cố có điều kiện (Taylor và Horger, 1999; Olausson và cộng sự, 2004) và chuyển pavlovian sang dụng cụ (Wyvell và Berridge, 2001). Hiện nay có bằng chứng thuyết phục rằng lõi NAc, trái ngược với vỏ, có liên quan đến việc kiểm soát hành vi vận động của ma túy bằng các kích thích có điều kiện pavlovian (Parkinson và cộng sự, 1999, 2002; Hội trường và cộng sự, 2001; Dalley và cộng sự, 2002; Ito và cộng sự, 2004). Kết quả của chúng tôi có thể gợi ý rằng cảm ứng FosB do thuốc gây ra trong NAc có thể là một cơ chế giúp kiểm soát hành vi được tăng cường trong các thủ tục này. Cũng có thể các kích thích có điều kiện pavlovian, hoạt động như các chất tăng cường có điều kiện, góp phần vào các hiệu ứng hành vi hiện tại. Tăng cường kiểm soát hành vi bằng các kích thích có điều kiện như vậy qua trung gian tăng striFosB cũng có thể đóng góp vào tác dụng của protein đối với ưu tiên nơi điều hòa do thuốc gây ra (Kelz và cộng sự, 1999; Zachariou và cộng sự, 2006) và tỷ lệ lũy tiến đáp ứng với cocaine (Colby và cộng sự, 2003). Sự thay đổi trong các quá trình tạo động lực đã được đưa ra giả thuyết để góp phần vào sự phát triển và duy trì hành vi gây nghiện (Robinson và Berridge, 1993; Jentsch và Taylor, 1999; Robbins và Everitt, 1999; Nestler, 2004). Dữ liệu hiện tại cũng phù hợp với các lý thuyết khác nhấn mạnh nhiều quá trình công cụ và pavlovian trong hành vi gây nghiện (Everitt và Robbins, 2005). Bây giờ công việc bổ sung là cần thiết để xác định vai trò của thuốc giảm đau thần kinh do thuốc và osFosB gây ra trong NAc và các tiểu vùng limbic khác đối với các yếu tố liên quan hoặc động lực cụ thể có thể tạo điều kiện cho hoạt động của công cụ và góp phần vào hành vi cưỡng chế.
Mặc dù các cơ chế phân tử chính xác mà theo đó thay đổi trong hành vi ảnh hưởng NAc được thúc đẩy bởi các chất tăng cường chính hoặc có điều kiện không được biết đến (Kelley và Berridge, 2002), các tế bào thần kinh gai trung bình GABAergic của NAc được coi là chất nền quan trọng cho tính dẻo phụ thuộc vào thuốc và kinh nghiệm. Ở đây, đầu vào dopaminergic từ vùng phía bụng và đầu vào glutamatergic từ các tác nhân corticolimbic hội tụ vào đuôi gai và gai đuôi thông thường (Sesack và Pickel, 1990; Smith và Bolam, 1990). Phơi nhiễm tâm thần mãn tính làm tăng mật độ của các gai như vậy trên các nơ-ron trong vỏ và lõi NAc (Robinson và Kolb, 1999; Robinson và cộng sự, 2001; Li và cộng sự, 2003, 2004). Gần đây, việc gây ra sự nhạy cảm về hành vi có liên quan đặc biệt với sự gia tăng các gai gai trong lõi NAc (Li và cộng sự, 2004). Đáng chú ý, sự gia tăng cocaine trong mật độ cột sống chỉ tồn tại ở D1tế bào thần kinh giả định cùng tồn tại FosB (Robinson và Kolb, 1999; Lee và cộng sự, 2006). FosB trong lõi NAc có thể góp phần vào tính dẻo synap kéo dài có thể ảnh hưởng đến hành vi của thiết bị. Thật vậy, một vai trò quan trọng đối với dẫn truyền thần kinh dopamine-glutamate (Smith-Roe và Kelley, 2000), protein kinase A hoạt động (Baldwin và cộng sự, 2002a) và tổng hợp protein de novo (Thoát vị và cộng sự, 2002) trong lõi NAc về hiệu suất công cụ đã được báo cáo trước đây. Bây giờ chúng tôi xác định ΔFosB là một yếu tố phiên mã có thể liên tục tăng cường đáp ứng được củng cố thực phẩm khi được biểu hiện quá mức trong lõi NAc. Các gen hoặc protein cụ thể liên quan đến các hiệu ứng này vẫn được xác định chính xác. FosB điều chỉnh sự biểu hiện của nhiều protein trong NAc liên quan đến tính dẻo dai (McClung và Nestler, 2003). Một phân tích microarray gần đây đã mô tả các mẫu biểu hiện gen trong NAc của chuột bitransgenic biểu hiện ΔFosB được sử dụng ở đây và xác định một tập hợp gen được điều chỉnh bởi biểu hiện tương đối ngắn của FosB (McClung và Nestler, 2003). BDNF là một trong những gen như vậy và BDNF trong mạch thần kinh này được biết là tăng cường đáp ứng cho các tín hiệu liên quan đến thuốc và thực phẩm (Horger và cộng sự, 1999; Grimm và cộng sự, 2003; Lu và cộng sự, 2004). Một gen quan tâm bổ sung là kinase phụ thuộc cyclin 5 (Bibb và cộng sự, 2001), cũng được gây ra bởi ΔFosB, và có thể điều chỉnh cả độ dẻo cấu trúc do cocaine (Norrholm và cộng sự, 2003) và động lực được đo bằng tỷ lệ lũy tiến đáp ứng cho thuốc tăng cường tự nhiên hoặc thuốc (JR Taylor, quan sát chưa được công bố). Các ứng cử viên bổ sung là tiểu đơn vị Glamour của các thụ thể glutamate AMPA (Kelz và cộng sự, 1999) và yếu tố phiên mã NFκB (yếu tố hạt nhân κB) (Ang và cộng sự, 2001). Điều quan trọng là phải đánh giá các protein này và các protein được quy định khác trong các tiểu vùng NAc với tư cách là ứng cử viên để làm trung gian tác động hành vi của ΔFosB đối với hiệu suất và động lực của thiết bị.
Sản phẩm loạt thí nghiệm hiện tại cung cấp bằng chứng cho thấy sự biểu hiện quá mức của ΔFosB trong NAc có thể tăng cường hành vi thúc đẩy thực phẩm và do đó điều chỉnh hiệu suất của thiết bị, như đã được chứng minh trước đây về phần thưởng thuốc. Những dữ liệu này cung cấp bằng chứng mới cho thấy ΔFosB có thể hoạt động như một công tắc phân tử chung liên quan đến các cải tiến trong các khía cạnh động lực của sự củng cố về hành vi hướng đến mục tiêu. Các phát hiện của chúng tôi cho thấy khả năng gây ra NAc ΔFosB, ví dụ, thuốc gây nghiện, căng thẳng, hoặc có lẽ là thực phẩm bổ ích, có thể là một cơ chế quan trọng trong đó các trạng thái động lực rối loạn dẫn đến rối loạn tâm thần liên quan đến hành vi cưỡng chế.
Chú thích
o Nhận được tháng 3 15, 2006.
o Bản sửa đổi nhận được tháng 6 23, 2006.
o Được chấp nhận tháng 8 2, 2006.
Công việc này được hỗ trợ bởi các khoản tài trợ của Viện quốc gia về lạm dụng ma túy, Viện Sức khỏe tâm thần quốc gia và Viện lạm dụng rượu và nghiện rượu quốc gia. Chúng tôi rất biết ơn sự giúp đỡ quý báu của Dilja Krueger, Drew Kiraly, Tiến sĩ Ralph DiLeone, Robert Sears và Tiến sĩ Jonathan Hommel tại Khoa Tâm thần, Đại học Yale. Chúng tôi cũng biết ơn Tiến sĩ Jennifer Quinn và Tiến sĩ Paul Hitchcott vì đã cung cấp những nhận xét hữu ích về bản thảo này.
Các thư tương ứng nên được gửi tới Jane R. Taylor, Khoa Tâm thần học, Khoa Tâm thần Phân tử, Trường Y Đại học Yale, Cơ sở Nghiên cứu Ribicoff, Trung tâm Sức khỏe Tâm thần Connecticut, Phố Park Park, New Haven, CT 34.[email được bảo vệ]
Bản quyền © 2006 Hội khoa học thần kinh 0270-6474 / 06 / 269196-09 $ 15.00 / 0
dự án
1. ↵
1. Anh ơi
2. Chen JS,
3. Zagouras P,
4. Magna H,
5. Hà Lan J,
6. Schaeffer E,
7. Nestler EJ
(2001) Cảm ứng NFB trong hạt nhân được tích tụ bằng cách sử dụng cocaine mạn tính. J Neurochem 79: 221 tầm 224.
2. ↵
1. Hói
2. Sadeghian K,
3. Holahan MR,
4. Kelley AE
(2002a) Học tập công cụ thích nghi bị suy yếu do ức chế protein kinase phụ thuộc cAMP trong nhân accumbens. Neurobiol Học Mem 77: 44 tầm 62.
3. ↵
1. Hói
2. Sadeghian K,
3. Kelley AE
(2002b) Học tập nhạc cụ xuất hiện đòi hỏi phải kích hoạt ngẫu nhiên NMDA và dopamine D1 thụ thể trong vỏ não trước trán trung gian. J Neurosci 22: 1063 tầm 1071.
4. ↵
1. Balleine B,
2. Killcross S
(1994) Ảnh hưởng của các tổn thương axit ibotenic của hạt nhân accumbens trên hành động của dụng cụ. Behav Brain Res 65: 181 tầm 193.
5. ↵
1. Berke JD,
2. Màng trinh
(2000) Nghiện, dopamine và các cơ chế phân tử của bộ nhớ. Neuron 25: 515 tầm 532.
6. ↵
1. Berridge KC,
2. Robinson TE
(2003) Phân tích phần thưởng. Xu hướng Neurosci 26: 507 tầm 513.
7. ↵
1. Bibb JA,
2. Chen J,
3. Taylor JR,
4. Svenningsson P,
5. Nishi A,
6. Snyder GL,
7. Yan Z,
8. Sagawa ZK,
9. CCimimet,
10. Nairn AC,
11. Nestler EJ,
12. Nhà kính P
(2001) Ảnh hưởng của việc tiếp xúc lâu dài với cocaine được điều hòa bởi protein thần kinh Cdk5. Thiên nhiên 410: 376 lên 380.
8. ↵
1. Brunzell DH,
2. Thay đổi
3. Schneider B,
4. Olausson P,
5. Taylor JR,
6. Picciotto MR
(2006) Các thụ thể nicotinic acetylcholine chứa beta2-Subunit có liên quan đến sự gia tăng do nicotine trong tăng cường có điều kiện nhưng không đáp ứng tỷ lệ tiến triển đối với thức ăn ở chuột C57BL / 6. Tâm sinh lý học (Berl) 184: 328 XN 338.
9. ↵
1. Bọ ngựa B,
2. Balsam PD,
3. Ngăm ngăm
4. Zhuang X
(2006) Chuột có dopamine tăng mạn tính biểu hiện động lực tăng cường, nhưng không học tập, để nhận phần thưởng thực phẩm. Thần kinh thực vật 31: 1362 XN 1370.
10. ↵
1. Carlezon WA Jr.,
2. Thome J,
3. Olson VG,
4. Làn đường SB,
5. Brodkin ES,
6. Hiroi N,
7. Duman RS,
8. Không có RL,
9. Nestler EJ
(1998) Quy định về phần thưởng cocaine của CREB. Khoa học 282: 2272 lên 2275.
11. ↵
1. Chen J,
2. Kelz MB,
3. Hy vọng BT
4. Nakabeppu Y,
5. Nestler EJ
(1997) Kháng nguyên mãn tính liên quan đến Fos: các biến thể ổn định của ΔFosB gây ra trong não bằng các phương pháp điều trị mãn tính. J Neurosci 17: 4933 tầm 4941.
12. ↵
1. Chen J,
2. Kelz MB,
3. Zeng G,
4. Sakai N,
5. Steffen C,
6. Shockett PE,
7. Picciotto MR,
8. Duman RS,
9. Nestler EJ
Động vật chuyển gen với biểu hiện gen mục tiêu, cảm ứng trong não. Mol Pharmacol 54: 495 tầm 503.
13. ↵
1. Colby CR,
2. Thì thầm K,
3. Steffen C,
4. Nestler EJ,
5. Tự DW
(2003) Sự biểu hiện quá mức của loại tế bào đặc biệt của ΔFosB giúp tăng cường khuyến khích cho cocaine. J Neurosci 23: 2488 tầm 2493.
14. ↵
1. Corbit LH,
2. Balleine
(2005) Sự phân ly kép của các tổn thương amygdala cơ bản và trung ương trên các hình thức chuyển giao cụ thể và kết quả cụ thể của pavlovian. J Neurosci 25: 962 tầm 970.
15. ↵
1. Corbit LH,
2. Muir JL,
3. Balleine
(2001) Vai trò của hạt nhân accumbens trong điều hòa dụng cụ: bằng chứng về sự phân ly chức năng giữa lõi accumbens và vỏ. J Neurosci 21: 3251 tầm 3260.
16. ↵
1. Dalley JW,
2. Chudasama Y,
3. Theobald DE,
4. Pettifer CL,
5. Fletcher CM,
6. Robbins TW
(2002) Nucleus accumbens dopamine và phương pháp học tập phân biệt đối xử: tác động tương tác của tổn thương 6-hydroxydopamine và quản lý apomorphin toàn thân. Tâm sinh lý học (Berl) 161: 425 XN 433.
17. ↵
1. de Borchgrave,
2. Nguyên liệu JN,
3. Dickinson A,
4. Balleine
(2002) Ảnh hưởng của các hạt nhân gây độc tế bào gây tổn thương lên điều hòa dụng cụ ở chuột. Exp Brain Res 144: 50 tầm 68.
18. ↵
1. Di Ciano P,
2. Bít tất Everitt
(2004a) Tương tác trực tiếp giữa amygdala cơ bản và nhân accumbens cốt lõi làm cơ sở cho hành vi tìm kiếm cocaine của chuột. J Neurosci 24: 7167 tầm 7173.
19. ↵
1. Di Ciano P,
2. Bít tất Everitt
(2004b) Thuộc tính củng cố có điều kiện của các kích thích được kết hợp với cocaine, heroin hoặc sucrose tự điều trị: hàm ý cho sự tồn tại của hành vi gây nghiện. Thần kinh học 47 ([Cung cấp 1]) 202 XN 213.
20. ↵
1. Dickinson A
(1985) Hành động và thói quen: sự phát triển của tự chủ hành vi. Philos Trans R Lond B Biol Sci 308: 67 XN 78.
21. ↵
1. Bít tất Everitt,
2. Robbins TW
(2005) Hệ thống thần kinh củng cố cho nghiện ma túy: từ hành động đến thói quen đến bắt buộc. Nat Neurosci 8: 1481 tầm 1489.
22. ↵
1. Faure A,
2. Haberland U,
3. Bao cao su F,
4. El Massioui N
(2005) Sự tổn thương đối với hệ thống dopamine nigrostriborn phá vỡ sự hình thành thói quen đáp ứng kích thích. J Neurosci 25: 2771 tầm 2780.
23. ↵
1. Grimm JW,
2. Lư,
3. Hayashi T,
4. Hy vọng BT
5. Su TP,
6. Shaham Y
(2003) Sự gia tăng phụ thuộc vào thời gian của nồng độ protein yếu tố thần kinh có nguồn gốc từ não trong hệ thống dopamine mesolimbic sau khi rút khỏi cocaine: ngụ ý cho việc thèm cocaine. J Neurosci 23: 742 tầm 747.
24. ↵
1. Hội trường J,
2. Parkinson JA,
3. Kết nối TM,
4. Dickinson A,
5. Bít tất Everitt
(2001) Sự tham gia của hạt nhân trung tâm của lõi amygdala và hạt nhân accumbens trong việc làm trung gian ảnh hưởng của Pavlovian lên hành vi công cụ. Eur J Neurosci 13: 1984 tầm 1992.
25. ↵
1. Gây hại
2. Phillips GD
(1998) Tăng cường điều hòa sự thèm ăn sau khi tiền xử lý lặp đi lặp lại với d-amphetamine. Behav Pharmacol 9: 299 tầm 308.
26. ↵
1. Thoát vị
2. Sadeghian K,
3. Kelley AE
(2002) Hợp nhất sớm việc học công cụ đòi hỏi phải tổng hợp protein trong nhân accumbens. Nat Neurosci 5: 1327 tầm 1331.
27. ↵
1. Hommel JD,
2. Tìm kiếm RM,
3. Georgescu D,
4. Simmons DL,
5. DiLeone RJ
(2003) Sự phân hủy gen cục bộ trong não bằng cách sử dụng can thiệp RNA qua trung gian virus. Nat Med 9: 1539 XN 1544.
28. ↵
1. Horger BA,
2. Shelton K,
3. Schenk S
(1990) Preexposeure làm nhạy cảm chuột với tác dụng bổ ích của cocaine. Pharmacol Biochem Behav 37: 707 tầm 711.
29. ↵
1. Horger BA,
2. Giles MK,
3. Schenk S
(1992) Preexposeure với amphetamine và nicotine khiến chuột phải tự uống một liều cocaine thấp. Tâm sinh lý học (Berl) 107: 271 XN 276.
30. ↵
1. Horger BA,
2. Iyasere CA,
3. Berhow MT,
4. Lộn xộn
5. Nestler EJ,
6. Taylor JR
(1999) Tăng cường hoạt động vận động và phần thưởng có điều kiện cho cocaine bởi yếu tố thần kinh có nguồn gốc từ não. J Neurosci 19: 4110 tầm 4122.
31. ↵
1. Nó,
2. Cướp bóc TW,
3. Bít tất Everitt
(2004) Kiểm soát khác biệt đối với hành vi tìm kiếm cocaine bằng nhân và vỏ. Nat Neurosci 7: 389 tầm 397.
32. ↵
1. Jentsch JD,
2. Taylor JR
(1999) Sự bốc đồng do rối loạn chức năng trước sinh trong lạm dụng thuốc: hàm ý kiểm soát hành vi bằng các kích thích liên quan đến phần thưởng. Tâm sinh lý học (Berl) 146: 373 XN 390.
33. ↵
1. Kelley AE
(2004) Kiểm soát tiền đình của động lực thèm ăn: vai trò trong hành vi tiêu hóa và học tập liên quan đến phần thưởng. Neurosci Biobehav Rev 27: 765 XN 776.
34. ↵
1. Kelley AE,
2. Berridge KC
(2002) Khoa học thần kinh của phần thưởng tự nhiên: sự liên quan đến thuốc gây nghiện. J Neurosci 22: 3306 tầm 3311.
35. ↵
1. Kelz MB,
2. Chen J,
3. Carlezon WA Jr.,
4. Thì thầm K,
5. Gilden L,
6. Beckmann,
7. Steffen C,
8. Trương YJ,
9. Marotti L,
10. Tự DW,
11. Tkatch T,
12. Baranauskas G,
13. DJ Surmeier,
14. Không có RL,
15. Duman RS,
16. Picciotto MR,
17. Nestler EJ
(1999) Biểu hiện của yếu tố phiên mã FosB trong não kiểm soát độ nhạy cảm với cocaine. Thiên nhiên 401: 272 lên 276.
36. ↵
1. Konradi C,
2. Cole RL,
3. Heckers S,
4. Màng trinh
(1994) Amphetamine điều chỉnh biểu hiện gen ở chuột cống thông qua yếu tố phiên mã CREB. J Neurosci 14: 5623 tầm 5634.
37. ↵
1. Lee KW,
2. Kim Y,
3. Kim A,
4. Helmin K,
5. Nairn AC,
6. Nhà kính P
(2006) Sự hình thành gai cột sống do cocaine trong D1 và D2 dopamine - chứa các tế bào thần kinh gai trung bình có chứa trong các tế bào thần kinh đệm. Proc Natl Acad Sci USA 103: 3399 tầm 3404.
38. ↵
1. Li Y,
2. Kolb B,
3. Robinson TE
(2003) Vị trí của những thay đổi kéo dài do amphetamine gây ra trong mật độ gai gai trên các tế bào thần kinh gai trung bình trong nhân accumbens và caudate-putamen. Thần kinh thực vật 28: 1082 XN 1085.
39. ↵
1. Li Y,
2. Acerbo MJ,
3. Robinson TE
(2004) Việc gây ra sự nhạy cảm về hành vi có liên quan đến tính dẻo cấu trúc do cocaine trong lõi (nhưng không phải là vỏ) của hạt nhân. Eur J Neurosci 20: 1647 tầm 1654.
40. ↵
1. Lư,
2. Dempsey J,
3. Lưu SY,
4. Bossert JM,
5. Shaham Y
(2004) Một lần tiêm truyền yếu tố thần kinh có nguồn gốc từ não vào vùng não thất gây ra tác dụng kéo dài của cocaine sau khi cai. J Neurosci 24: 1604 tầm 1611.
41. ↵
1. McClung CA,
2. Nestler EJ
(2003) Điều chỉnh biểu hiện gen và phần thưởng cocaine bằng CREB và ΔFosB. Nat Neurosci 6: 1208 tầm 1215.
42. ↵
1. McClung CA,
2. PGS
3. Perrotti LI,
4. Zachariou V,
5. Berton O,
6. Nestler EJ
(2004) FosB: một công tắc phân tử để thích nghi lâu dài trong não. Brain Res Mol Brain Res 132: 146 tầm 154.
43. ↵
1. Miles FJ,
2. Bít tất Everitt,
3. Dalley JW,
4. Dickinson A
(2004) Hoạt động có điều kiện và củng cố công cụ sau khi uống cocaine lâu dài bằng chuột. Behav Neurosci 118: 1331 tầm 1339.
44. ↵
1. Nestler EJ
(2004) Cơ chế phân tử của nghiện ma túy. Thần kinh học 47 ([Cung cấp 1]) 24 XN 32.
45. ↵
1. Nestler EJ,
2. Barrot M,
3. Tự DW
(2001) FosB: một công tắc phân tử duy trì cho nghiện. Proc Natl Acad Sci USA 98: 11042 tầm 11046.
46. ↵
1. Norrholm SD,
2. Bibb JA,
3. Nestler EJ,
4. CCimimet,
5. Taylor JR,
6. Nhà kính P
(2003) Sự tăng sinh do cocaine của gai gai trong nhân accumbens phụ thuộc vào hoạt động của kinase-5 phụ thuộc cyclin. Khoa học thần kinh 116: 19 tầm 22.
47. ↵
1. Không, Ngài
2. Hy vọng BT
3. Kelz MB,
4. Iadarola M,
5. Nestler EJ
(1995) Các nghiên cứu dược lý về việc điều hòa cảm ứng kháng nguyên mãn tính liên quan đến FOS bằng cocaine trong các khối và nhân accumbens. J Pharmacol Exp Ther 275: 1671 tầm 1680.
48. ↵
1. Olausson P,
2. Jentsch JD,
3. Taylor JR
(2003) Phơi nhiễm nicotine lặp đi lặp lại giúp tăng cường học tập liên quan đến phần thưởng ở chuột. Thần kinh thực vật 28: 1264 XN 1271.
49. ↵
1. Olausson P,
2. Jentsch JD,
3. Taylor JR
(2004) Phơi nhiễm tiếp xúc với nicotine lặp đi lặp lại giúp tăng cường đáp ứng với cốt thép có điều kiện. Tâm sinh lý học (Berl) 173: 98 XN 104.
50. ↵
1. Parkinson JA,
2. MC của Olmstead,
3. Bỏng LH,
4. Cướp bóc TW,
5. Bít tất Everitt
. J Neurosci 1999: 19 tầm 2401.
51. ↵
1. Parkinson JA,
2. Dalley JW,
3. Hồng y RN,
4. Bamford A,
5. Fehnert B,
6. Lachenal G,
7. Rudarakanchana N,
8. Halkerston KM,
9. Cướp bóc TW,
10. Bít tất Everitt
(Piano Behav Brain Res 2002: 137 tầm 149.
52. ↵
1. Paxinos G,
2. Watson C
(1986) Bộ não chuột ở tọa độ lập thể (Học thuật, Sydney).
53. ↵
1. Perrotti LI,
2. Hadeishi Y,
3. PGS
4. Barrot M,
5. Monteggia L,
6. Duman RS,
7. Nestler EJ
(2004) Cảm ứng ΔFosB trong các cấu trúc não liên quan đến phần thưởng sau khi bị căng thẳng mãn tính. J Neurosci 24: 10594 tầm 10602.
54. ↵
1. Quảng trường PV,
2. Deminiere JM,
3. le Moal M,
4. Simon H
(1990) Nhạy cảm hành vi do căng thẳng và dược lý gây ra làm tăng tính dễ bị tổn thương khi tự điều trị bằng amphetamine. Brain Res 514: 22 XN 26.
55. ↵
1. EM EM
2. Pagliusi SR,
3. Tessari M,
4. Talabot-Ayer D,
5. Hooft van Huijsduijnen R,
6. Chiamulera C
(1997) Chất nền thần kinh phổ biến cho các đặc tính gây nghiện của nicotine và cocaine. Khoa học 275: 83 lên 86.
56. ↵
1. Cướp bóc TW,
2. Bít tất Everitt
(1999) Nghiện ma túy: thói quen xấu cộng lại. Thiên nhiên 398: 567 Gian 570.
57. ↵
1. Robinson TE,
2. Berridge KC
(1993) Cơ sở thần kinh của sự thèm thuốc: một lý thuyết nhạy cảm khuyến khích nghiện. Brain Res Brain Res Rev 18: 247 tầm 291.
58. ↵
1. Robinson TE,
2. Kolb B
(1999) Thay đổi hình thái của đuôi gai và gai đuôi gai trong nhân accumbens và vỏ não trước trán sau khi điều trị lặp đi lặp lại với amphetamine hoặc cocaine. Eur J Neurosci 11: 1598 tầm 1604.
59. ↵
1. Robinson TE,
2. Gorny G,
3. Mitton E,
4. Kolb B
(2001) Cocaine tự quản làm thay đổi hình thái của đuôi gai và gai gai trong nhân accumbens và neocortex. Synapse 39: 257 XN 266.
60. ↵
1. Vừng
2. VM Pickel
(Piano Brain Res 1990: 527 XN 266.
61. ↵
1. Shaw-Lutchman TZ,
2. Impey S,
3. Bão D,
4. Nestler EJ
(2003) Điều hòa phiên mã qua trung gian CRE trong não chuột bằng amphetamine. Synapse 48: 10 XN 17.
62. ↵
1. Smith,
2. Bolam JP
(1990) Mạng lưới thần kinh của hạch nền cơ bản được tiết lộ bởi nghiên cứu về các kết nối synap của các tế bào thần kinh được xác định. Xu hướng Neurosci 13: 259 tầm 265.
63. ↵
1. Smith-Roe SL,
2. Kelley AE
(2000) Kích hoạt trùng hợp NMDA và dopamine D1 Các thụ thể trong lõi accumbens hạt nhân là cần thiết cho việc học dụng cụ ngon miệng. J Neurosci 20: 7737 tầm 7742.
64. ↵
1. Taylor JR,
2. Horger BA
(1999) Đáp ứng tăng cường cho phần thưởng có điều kiện được sản xuất bởi amphetamine trong nội tạng được tăng cường sau khi nhạy cảm với cocaine. Tâm sinh lý học (Berl) 142: 31 XN 40.
65. ↵
1. Taylor JR,
2. Jentsch JD
.
66. ↵
1. Vezina P,
2. Lorrain DS,
3. Arnold GM,
4. Austin JD,
5. Sao Diêm Vương
(2002) Nhạy cảm với phản ứng tế bào thần kinh dopamine midbrain thúc đẩy việc theo đuổi amphetamine. J Neurosci 22: 4654 tầm 4662.
67. ↵
1. Werme M,
2. Messer C,
3. Olson L,
4. Gilden L,
5. Thoren P,
6. Nestler EJ,
7. Brene S
(2002) FosB điều chỉnh bánh xe đang chạy. J Neurosci 22: 8133 tầm 8138.
68. ↵
1. Wyvell CL,
2. Berridge KC
(2001) Nhạy cảm khuyến khích bằng cách tiếp xúc với amphetamine trước đó: tăng kích hoạt cue - kích thích muốn kiếm tiền thưởng sucrose. J Neurosci 21: 7831 tầm 7840.
69. ↵
1. Âm hộ
2. Kiến thức về BJ,
3. Balleine
(2004) Các tổn thương của vây lưng bảo tồn kết quả mong đợi nhưng phá vỡ sự hình thành thói quen trong học tập công cụ. Eur J Neurosci 19: 181 tầm 189.
70. ↵
1. Zachariou V,
2. Bolanos CA,
3. Selley DE,
4. Theobald D,
5. MP gọn gàng,
6. Kelz MB,
7. Shaw-Lutchman T,
8. Berton O,
9. Sim-Selley LJ,
10. Dileone RJ,
11. Kumar A,
12. Nestler EJ
(2006) Một vai trò thiết yếu đối với ΔFosB trong hạt nhân accumbens trong hành động morphin. Nat Neurosci 9: 205 tầm 211.
;