Ảnh hưởng của biểu hiện quá mức ΔFosB đối với tín hiệu qua trung gian thụ thể opioid và cannabinoid trong nhân accumbens (2011)

Neuropharmacology. 2011 Dec;61(8):1470-6. doi: 10.1016/j.neuropharm.2011.08.046.

Sim-Selley LJ, MP gọn gàng, Sparta A, Zachariou V, Nestler EJ, Selley DE.

nguồn

Khoa Dược và Độc chất và Viện Nghiên cứu Thuốc và Rượu, Trường Đại học Y khoa Khối thịnh vượng chung Virginia, Richmond, VA 23298, Hoa Kỳ.

Tóm tắt

Yếu tố phiên mã ổn định ΔFosB được tạo ra trong nhân accumbens (NAc) do tiếp xúc lâu dài với một số loại thuốc lạm dụng, và biểu hiện chuyển gen của ΔFosB trong striatum giúp tăng cường các đặc tính bổ ích của morphin và cocaine. Tuy nhiên, cơ sở cơ học cho những quan sát này chưa được hiểu đầy đủ. Chúng tôi đã sử dụng mô hình chuột bitransgenic với biểu hiện cảm ứng của FosB trong dopamine D (1) thụ thể / tế bào thần kinh ngoại vi có chứa dynorphin để xác định ảnh hưởng của biểu hiện ΔFosB đối với tín hiệu thụ thể opioid và cannabinoid trong NAc. Kết quả cho thấy hoạt động G-protein qua trung gian mu opioid và ức chế adenylyl cyclase được tăng cường trong NAc của chuột biểu hiện FosB. Tương tự như vậy, sự ức chế kappa opioid của adenylyl cyclase đã được tăng cường ở chuột biểu hiện ΔFosB. Ngược lại, tín hiệu qua trung gian thụ thể cannabinoid không khác nhau giữa chuột biểu hiện quá mức ΔFosB và chuột điều khiển. TPhát hiện hese cho thấy tín hiệu thụ thể opioid và cannabinoid được điều chế khác nhau bằng biểu hiện của FosB, và chỉ ra rằng biểu hiện ΔFosB có thể tạo ra một số hiệu ứng của nó thông qua tín hiệu thụ thể opioid mu và kappa trong NAc.

Từ khóa: G-protein, adenylyl cyclase, striatum
Go to:

1. Giới thiệu

Các thụ thể opioid và CB cannabinoid1 thụ thể (CB1R) là các mục tiêu sinh học thần kinh cho hai nhóm ma túy được sử dụng rộng rãi bao gồm morphin, heroin và opioids theo toa và cần sa (9-tetrahydrocannabinol (THC)), tương ứng. Các tác dụng cấp tính của opioids và cannabinoids được điều hòa bởi các thụ thể kết hợp G-protein kích hoạt chủ yếu Gtôi / o protein và tạo ra các phản ứng tác nhân hạ lưu như ức chế adenylyl cyclase (Trẻ em, 1991, Trẻ em và cộng sự, 1992, Howlett, et al., 2002). Động cơ, suy giảm trí nhớ và tác động tâm lý của9-THC được sản xuất bởi CB1R (Huestis và cộng sự, 2001, Zimmer và cộng sự, 1999), được phân phối rộng rãi trong não, với mức độ cao trong hạch nền, đồi hải mã và tiểu não (Herkenham và cộng sự, 1991). Các tác dụng giảm đau và bổ ích của hầu hết các thuốc opioid có liên quan đến lâm sàng và bị lạm dụng đều qua trung gian chủ yếu bởi các thụ thể mu opioid (MOR) (Matthes và cộng sự, 1996), được làm phong phú trong hệ thống limbic và thân não (Mansour, et al., 1994). Hệ thống mesolimbic, bao gồm các dự báo dopaminergic từ vùng não thất (VTA) đến nhân accumbens (NAc), đóng một vai trò quan trọng trong tác dụng bổ sung của opioid và cannabinoids (Bozarth và khôn ngoan, 1984, Vaccarino và cộng sự, 1985, Zangen và cộng sự, 2006), cũng như các loại thuốc lạm dụng khác (Koob và ROLow, 2010). Hơn nữa, hệ thống opioid và cannabinoid nội sinh có liên quan đến tác dụng bổ ích của nhiều nhóm thuốc thần kinh (Maldonado và cộng sự, 2006, Trigo, và cộng sự, 2010). Vì vậy, điều quan trọng là làm sáng tỏ các cơ chế mà opioid và CB1Tín hiệu R được quy định trong NAc.

Một câu hỏi trọng tâm trong lĩnh vực lạm dụng thuốc là xác định các protein làm trung gian cho quá trình chuyển từ tác dụng cấp tính sang lâu dài của thuốc thần kinh. Yếu tố phiên mã AP-1 ΔFosB đặc biệt thú vị bởi vì đây là sản phẩm biến thể mối nối cắt ngắn ổn định của fosb gen tích lũy khi tiếp xúc nhiều lần với các loại thuốc lạm dụng hoặc phần thưởng tự nhiên (McClung và cộng sự, 2004, Nestler, 2008, Nestler và cộng sự, 1999). Chúng tôi đã tìm thấy rằng ΔFosB được gây ra trong não sau khi tiếp xúc nhiều lần với morphin,9-THC, cocaine hoặc ethanol, với mỗi loại thuốc tạo ra một kiểu biểu hiện FosB duy nhất trong khu vực (Perrotti và cộng sự, 2008). Một phát hiện nhất quán trên các loại thuốc là ΔFosB được gây cảm ứng mạnh ở vùng thượng vị, trong đó cả bốn loại thuốc gây ra ΔFosB trong lõi NAc và tất cả ngoại trừ9-THC gây ra biểu hiện đáng kể trong vỏ NAc và caudate-putamen.

Các nghiên cứu dược lý cho thấy rằng đồng quản trị của dopamine D1 thụ thể (D1R) chất đối kháng SCH 23390 đã chặn cảm ứng ΔFosB trong NAc và caudate-putamen sau khi dùng cocaine hoặc morphine không liên tục, cho thấy tầm quan trọng tiềm tàng của D1Tế bào thần kinh biểu hiện R (Muller và Unterwald, 2005, Không, và cộng sự, 1995). Tác động của cảm ứng ΔFosB đối với các hành vi qua trung gian thuốc đã được nghiên cứu bằng cách sử dụng chuột bitransgenic biểu hiện ΔFosB trong các quần thể tế bào thần kinh cụ thể của NAc và vây lưng (Chen, và cộng sự, 1998). Chuột thể hiện FosB trong dynorphin / D1Các tế bào thần kinh dương tính trong NAc và vây lưng (dòng 11A) cho thấy các phản ứng thay đổi đối với các loại thuốc lạm dụng, đáng chú ý là tăng cường độ nhạy cảm với tác dụng bổ sung của cocaine hoặc morphin (Colby, và cộng sự, 2003, Kelz và cộng sự, 1999, Zachariou và cộng sự, 2006). Những thay đổi này xảy ra trong trường hợp không có sự thay đổi về mức độ MOR hoặc các tiểu đơn vị G-protein khác nhau. Tuy nhiên, nồng độ mRNA dynorphin đã giảm trong NAc của chuột biểu hiện ΔFosB (Zachariou và cộng sự, 2006), gợi ý rằng một mục tiêu của FosB là gen mã hóa một peptide opioid nội sinh. Cảm ứng FosB cũng có thể tạo ra những thay đổi hành vi bằng cách điều chỉnh tín hiệu thụ thể trong NAc, nhưng khả năng này chưa được nghiên cứu. Do đó, các nghiên cứu hiện tại đã sử dụng mô hình chuột bitransgenic để xác định xem sự biểu hiện quá mức của ΔFosB trong dynorphin / D1R chứa các tế bào thần kinh ngoại vi làm thay đổi hoạt động G-protein qua trung gian MOR và ức chế adenylyl cyclase qua trung gian MOR và KOR trong NAc. Tác dụng của FosB đối với CB1Hoạt động G-protein qua trung gian R cũng được đánh giá vì9Quản trị -THC gây ra ΔFosB trong NAc (Perrotti và cộng sự, 2008) và hệ thống endocannabinoid được biết để điều chỉnh các mạch thưởng cho não (Người làm vườn, 2005, Maldonado và cộng sự, 2006), nhưng tác dụng của ΔFosB trên hệ thống endocannabinoid chưa được nghiên cứu.

Go to:

XUẤT KHẨU. Vật liệu và phương pháp

KHAI THÁC. Thuốc thử

[35S] GTPγS (1250 Ci / mmol), [α-32P] ATP (800 Ci / mmol) và [3H] cAMP (26.4 Ci / mmol) đã được mua từ PerkinElmer (Shelton, CT). ATP, GTP, GDP, cAMP, albumin huyết thanh bò, creatine phosphokinase, papaverine, imidazole và WIN-55212-2, được mua từ Sigma Aldrich (St. Louis, MO). GTPγS được mua từ Tập đoàn Chẩn đoán Roche (Chicago, IL). DAMGO được cung cấp bởi Chương trình cung cấp thuốc của Viện quốc gia về lạm dụng ma túy (Rockville, MD). Chất lỏng tinh trùng của Econo-1 được lấy từ Fisher Khoa học (Norcross, GA). Chất lỏng màu Ecolite được lấy từ ICN (Costa Mesa, CA). Tất cả các hóa chất khác được lấy từ Sigma Aldrich hoặc Fisher Khoa học.

KHAI THÁC. Chuột

Chuột bitransgenic đực có nguồn gốc từ NSE-tTA (dòng A) × TetOp-FosB (dòng 11) đã được tạo ra như mô tả trong Kelz et al. (Kelz và cộng sự, 1999). Chuột Bitransgenic được hình thành và nuôi dưỡng trên doxycycline (100 xôg trong nước uống) để ngăn chặn biểu hiện gen chuyển. Ở tuần tuổi 8, doxycycline đã được bỏ qua khỏi nước cho một nửa số chuột để cho phép biểu hiện gen chuyển, trong khi những con chuột còn lại được duy trì trên doxycycline để ức chế gen chuyển. Não được thu thập 8 tuần sau đó, thời gian mà hiệu ứng phiên mã của ΔFosB là tối đa (McClung và Nestler, 2003). Một dòng chuột chuyển gen thứ hai đã được sử dụng trong đó Δc-Jun, một chất đối kháng tiêu cực chi phối của c-Jun, được thể hiện trong D1R / dynorphin và D2Các tế bào R / enkephalin của striatum, hippocampus và vỏ não (Peakman và cộng sự, 2003). C-Jun và các protein gia đình Jun có liên quan giảm dần với protein gia đình Fos và liên kết với vị trí AP-1 của các gen mục tiêu để điều chỉnh phiên mã. Tuy nhiên, việc cắt đầu N của c-Jun (Δc-Jun) làm cho phức hợp phiên mã không hoạt động và có thể cản trở liên kết DNA của các phức hợp AP-1 đang hoạt động. Chuột bitransgenic đực có nguồn gốc từ NSE-tTA (dòng A) × TetOp-FLAG-c-Jun (dòng E) đã được tạo ra như mô tả trong Peakman et al. (Peakman và cộng sự, 2003). Chuột Bitransgenic được hình thành và nuôi dưỡng trên doxycycline (100 xôg trong nước uống) để ngăn chặn biểu hiện gen chuyển. Những con chó con được cai sữa ở tuần 3, có kiểu gen và được tách thành các nhóm, với một nửa được duy trì trên nước có chứa doxycycline và một nửa trên nước uống thông thường để tạo ra biểu hiện FLAG-Δc-Jun. Não được thu thập 6 tuần sau đó, thời gian mà mức FLAG-Δc-Jun tối đa đã được đo (Peakman và cộng sự, 2003). Tất cả các thủ tục trên động vật được thực hiện theo Hướng dẫn của Viện Y tế Quốc gia về Chăm sóc và Sử dụng Động vật trong Phòng thí nghiệm.

KHAI THÁC. Chuẩn bị màng

Não được lưu trữ ở −80 ° C cho đến ngày thử nghiệm. Trước khi thử nghiệm, mỗi bộ não đã tan băng và NAc được mổ xẻ trên băng. Mỗi mẫu được đồng nhất hóa trong 50 mM Tris-HCl, 3 mM MgCl2, 1 mM EGTA, pH 7.4 (đệm màng) với các nét 20 từ chất đồng nhất thủy tinh ở 4 ° C. Các homogenate được ly tâm tại 48,000 × g ở 4 ° C trong 10 phút, được nối lại trong bộ đệm màng, được ly tâm lại ở 48,000 × g ở 4 ° C trong 10 phút và được gửi lại trong 50 mM Tris-HCl, 3 mM MgCl2, 0.2 mM EGTA, 100 mM NaCl, pH 7.4 (dung dịch đệm khảo nghiệm). Nồng độ protein được xác định bằng phương pháp của Bradford (Bradford, 1976) sử dụng albumin huyết thanh bò (BSA) làm tiêu chuẩn.

KHAI THÁC. Agonist-Kích thích [35S] GTPγS Binding

Màng được ủ trước trong 10 phút ở 30 ° C với adenosine deaminase (3 mU / ml) trong dung dịch đệm xét nghiệm. Các màng (protein 5 ở mức 10) sau đó được ủ cho 2 hr ở 30 ° C trong bộ đệm khảo nghiệm có chứa 0.1% (w / v) BSA, 0.1 nM [35S] GTPγS, 30 TừM GDP và adenosine deaminase (3 mU / ml) có và không có nồng độ DAMGO hoặc WIN55,212-2 thích hợp. Liên kết không đặc hiệu được đo bằng 20 hungM GTPγS. Quá trình ủ được chấm dứt bằng cách lọc qua các bộ lọc sợi thủy tinh GF / B, tiếp theo là rửa 3 với 3 ml lạnh băng 50 mM Tris-HCl, pH 7.4. Độ phóng xạ giới hạn được xác định bằng phương pháp quang phổ tán xạ chất lỏng sau khi chiết qua đêm các bộ lọc trong chất lỏng khử màu của Econo-1.

KHAI THÁC. Xét nghiệm Cyclase Adenylyl

Các màng (protein 5, 25 HP) đã được tạo ra trước với adenosine deaminase như được mô tả ở trên, sau đó được ủ cho 15 min ở 30 ° C trong sự hiện diện hoặc vắng mặt của 1 tựaM forskolin, có hoặc không có DAMGO, UXNUM 50,488 TIẾNG ATP, [α-32P] ATP (1.5 ănCi), 0.2 mM DTT, 0.1% (w / v) BSA, 50 mậtM cyclic AMP, 50 mậtM GTP, 0.2 mM papaverine, 5 mM phosphocreatine, 20 mM / ml) trong một thể tích cuối cùng của 3. Trong các điều kiện này, tổng [α-32P] cAMP được phục hồi thường nhỏ hơn 1% trên tổng số lượng được thêm vào [α-32P] ATP trong mỗi mẫu. Phản ứng đã được chấm dứt bằng cách đun sôi trong 3 min và [32P] Cyclic AMP được phân lập bằng phương pháp cột kép (Dowex và alumina) của Salomon (Salomon, 1979). [3H] cAMP (10,000 dpm) đã được thêm vào mỗi ống trước khi sắc ký cột làm chuẩn nội. Độ phóng xạ được xác định bằng phương pháp quang phổ xạ màu lỏng (hiệu suất 45% cho 3H) sau khi 4.5 ml dịch rửa giải được hòa tan trong 14.5 ml chất lỏng khử màu Ecolite.

KHAI THÁC. Phân tích dữ liệu

Trừ khi có chỉ định khác, dữ liệu được báo cáo là giá trị trung bình ± SE của các thử nghiệm riêng biệt 4 XN XNX, mỗi thí nghiệm được thực hiện ba lần. Kích thích ròng [35S] Liên kết GTPγS được tính là liên kết kích thích chủ vận trừ đi liên kết cơ bản. Hoạt động adaselyl cyclase được kích thích bằng forskolin được định nghĩa là hoạt động kích thích forskolin - hoạt động cơ bản (pmol / mg / phút). Phần trăm ức chế hoạt động adaselyl cyclase được kích thích bằng forskolin được định nghĩa là (hoạt động được kích thích bằng forskolin trong trường hợp không có chất chủ vận - hoạt động được kích thích bằng forskolin trong sự hiện diện của chất chủ vận / chất kích thích forskolin trong trường hợp không có chất chủ vận) Tất cả các phân tích thống kê và khớp đường được thực hiện bằng Prism 100c (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA). Đường cong hiệu ứng tập trung được phân tích bằng hồi quy phi tuyến tính lặp để thu được EC50 và Etối đa các giá trị. Ý nghĩa thống kê của dữ liệu ảnh hưởng nồng độ được xác định bằng phân tích phương sai hai chiều (ANOVA), sử dụng liều chủ vận và cảm ứng gen (bật hoặc tắt) làm yếu tố chính. Ý nghĩa thống kê của các giá trị phù hợp với đường cong (Etối đa hoặc EC50) được xác định bằng phép thử t của Sinh viên hai phía không ghép đôi, sử dụng phép hiệu chỉnh của Welch hoặc phép biến đổi căn bậc hai của dữ liệu khi cần thiết để sửa các phương sai không bằng nhau (được phát hiện bằng phép thử F) trong EC50 các giá trị.

Go to:

XUẤT KHẨU. Các kết quả

KHAI THÁC. Ảnh hưởng của biểu hiện ΔFosB đến hoạt hóa G-protein qua trung gian thụ thể opioid và cannabinoid

Để xác định xem MOR- hay CB1Kích hoạt G-protein qua trung gian R đã bị thay đổi do biểu hiện biến đổi gen cảm ứng của ΔFosB trong NAc, được kích thích bởi chất chủ vận [35S] Liên kết GTPγS đã được kiểm tra trong các màng phân lập được chuẩn bị từ vùng chuột bitransgenic này biểu hiện có điều kiện (ΔFosB trên) hoặc không biểu hiện (FosB tắt) gen chuyển FosB. DAMGO tương tự enkephalin chọn lọc MOR đã được sử dụng để kích hoạt MOR và aminoalkylindole WIN55,212-2 được sử dụng để kích hoạt CB1R. Các phối tử này trước đây được chứng minh là chất chủ vận đầy đủ tại MOR và CB1R, tương ứng (Breivogel và cộng sự, 1998, Selley và cộng sự, 1997). Việc kiểm tra hoạt động G-protein qua trung gian KOR là không khả thi vì tín hiệu quá thấp trong não của loài gặm nhấm (Trẻ em và cộng sự, 1998). Kết quả cho thấy sự kích thích phụ thuộc nồng độ của hoạt động G-protein của cả DAMGO và WIN55,122-2 ở NAc từ ΔFosB tắt và ΔFosB trên chuột (Hình 1). Đối với hoạt động kích thích DAMGO (Hình 1A), ANOVA hai chiều của dữ liệu hiệu ứng nồng độ cho thấy các tác động chính đáng kể của trạng thái ΔFosB (p <0.0001, F = 22.12, df = 1) và nồng độ DAMGO (p <0.0001, F = 29.65, df = 5) với không tương tác đáng kể (p = 0.857, F = 0.387, df = 5). Phân tích hồi quy phi tuyến của các đường cong hiệu ứng nồng độ cho thấy DAMGO E lớn hơn đáng kểtối đa giá trị trong ΔFosB trên chuột (Etối đa = Kích thích 73 ± 5.2%) so với offFosB tắt chuột (Etối đa = 56 ± 4.1% kích thích; p <0.05 khác với ΔFosB trên chuột bằng phép thử t của Student). DAMGO EC50 giá trị không khác nhau giữa FosB trên và ΔFosB tắt chuột (302 ± 72 nM so với 212 ± 56 nM, tương ứng, p = 0.346).

Hình 1 

Ảnh hưởng của biểu hiện ΔFosB đến kích thích chủ vận [35S] GTPγS ràng buộc trong NAc. Các màng từ chuột biểu hiện ΔFosB (ΔFosB bật) hoặc chuột điều khiển (tắt ΔFosB) đã được thử nghiệm như mô tả trong Phương pháp sử dụng nồng độ khác nhau ...

Trái ngược với kết quả thu được với chất chủ vận MAM DAMGO, không thấy sự khác biệt phụ thuộc vào trạng thái ΔFosB trong hoạt hóa G-protein với chất chủ vận cannabinoid WIN55,212-2 (Hình 1B). ANOVA hai chiều của dữ liệu hiệu ứng nồng độ WIN55,212-2 cho thấy tác động chính đáng kể của nồng độ WIN55,212-2 (p <0.0001, F = 112.4, df = 7), nhưng không phải ở trạng thái ΔFosB (p = 0.172 , F = 1.90, df = 1) và không có tương tác (p = 0.930, F = 0.346, df = 7). Tương tự, không có ảnh hưởng của trạng thái ΔFosB trên WIN55,212-2 Etối đa các giá trị (kích thích 103 ± 6% so với 108 ± 8% trong ΔFosB trên và ngoài chuột, tương ứng, p = 0.813 bằng phép thử t của Sinh viên) hoặc EC50 các giá trị (103 ± 20 nM so với 170 ± 23 nM trong ΔFosB trên và tắt chuột, tương ứng, p = 0.123).

Dựa trên hình dạng của các đường cong và thực tế là các nghiên cứu trước đây của chúng tôi đã chỉ ra các đường cong hiệu ứng tập trung WIN55,212-2 trong não (Breivogel và cộng sự, 1999, Breivogel và cộng sự, 1998), các đường cong WIN55,212-2 cũng được phân tích bằng mô hình hai trang web. Phân tích dữ liệu trung bình cho thấy sự cải thiện nhẹ về mức độ phù hợp bằng cách sử dụng mô hình hai trang web (R2 = 0.933 và 0.914, tổng bình phương = 3644 và 5463 trong FosB trên và tắt chuột, tương ứng) so với mô hình một trang web (R2 = 0.891 và 0.879, tổng bình phương = 6561 và 6628 trong FosB trên và tắt chuột, tương ứng). Tuy nhiên, không có sự khác biệt đáng kể nào được tìm thấy giữa FosB trên và ngoài chuột ở cả Etối đa hoặc EC50 giá trị của các trang web có hiệu lực cao hoặc thấp (Bảng bổ trợ 1), mặc dù có xu hướng về EC thấp hơn50 giá trị tại vị trí có hiệu lực cao ở chuột có ΔFosB trên (EC50cao = 28.0 ± 10.6 nM) so với những người tắt ΔFosB (EC50cao = 71.5 ± 20.2 nM; p = 0.094). Hơn nữa, không có ảnh hưởng của trạng thái ΔFosB trên cơ sở [35S] GTPγS liên kết trong màng NAc (253 ± 14 so với 226 ± 14 fmol / mg trong ΔFosB trên và tắt chuột, tương ứng, p = 0.188). Những dữ liệu này chỉ ra rằng biểu hiện chuyển gen cảm ứng của ΔFosB trong NAc của chuột đã làm tăng kích hoạt G-protein qua trung gian MOR mà không ảnh hưởng đáng kể đến CB1Hoạt động G-protein qua trung gian hoặc cơ bản.

KHAI THÁC. Tác dụng của ΔFosB đối với sự ức chế qua trung gian thụ thể opioid và cannabinoid của adenylyl cyclase

Để đánh giá hiệu quả của biểu hiện biến đổi gen cảm ứng của ΔFosB đối với điều chế hoạt động của dòng chảy xuôi dòng bằng MOR và CB1R, sự ức chế của hoạt động adenylyl cyclase được kích thích forskolin forskolin được kiểm tra trong màng NAc. Ngoài MOR- và CB1Sự ức chế qua trung gian R của hoạt động adenylyl cyclase, ảnh hưởng của hoạt động KOR cũng được kiểm tra bằng cách sử dụng chất chủ vận đầy đủ chọn lọc KOR U50,488 (Zhu, và cộng sự, 1997), bởi vì các kết quả trước đó cho thấy mRNA dynorphin là mục tiêu của ΔFosB trong mô hình bitransgenic (Zachariou và cộng sự, 2006). Kết quả cho thấy DAMGO, U50,488 và WIN55,212-2 đều tạo ra sự ức chế phụ thuộc nồng độ của hoạt động adaselyl cyclase ở cả FosB và FosB trên chuột (Hình 2). ANOVA hai chiều của dữ liệu ảnh hưởng nồng độ DAMGO (Hình 2A) cho thấy các tác động chính đáng kể của trạng thái ΔFosB (p = 0.0012, F = 11.34, df = 1) và nồng độ DAMGO (p <0.0001, F = 29.61, df = 6), nhưng không có tương tác đáng kể (p = 0.441, F = 0.986 , df = 6). Phân tích hồi quy phi tuyến của đường cong hiệu ứng nồng độ DAMGO cho thấy DAMGO EC thấp hơn đáng kể50 giá trị tính bằng ΔFosB trên chuột (101 ± 11 nM) so với ΔFosB trên chuột (510 ± 182 nM, p <0.05 bằng bài kiểm tra t của sinh viên). Tuy nhiên, không có sự khác biệt đáng kể trong DAMGO Etối đa các giá trị (ức chế 20.9 ± 1.26% so với 19.8 ± 1.27% trong ΔFosB trên và ngoài chuột, tương ứng, p = 0.534).

Hình 2 

Ảnh hưởng của biểu hiện ΔFosB đối với sự ức chế hoạt động adaselyl cyclase trong NAc. Các màng từ chuột biểu hiện ΔFosB (ΔFosB) hoặc chuột điều khiển (tắt FosB) đã được thử nghiệm như mô tả trong Phương pháp với sự hiện diện của 1 ERICM ...

Ức chế adenylyl cyclase qua trung gian KOR cũng khác nhau như là một chức năng biểu hiện chuyển gen cảm ứng của ΔFosB (Hình 2B). ANOVA hai chiều của dữ liệu hiệu ứng nồng độ U50,488 cho thấy các tác động chính đáng kể của trạng thái ΔFosB (p = 0.0006, F = 14.53, df = 1) và nồng độ U50,488 (p <0.0001, F = 26.48, df = 3) , không có tương tác đáng kể (p = 0.833, F = 0.289, df = 3). Phân tích hồi quy phi tuyến của đường cong hiệu ứng nồng độ cho thấy U50,488 E lớn hơntối đa giá trị ΔFosB trên chuột (ức chế 18.3 ± 1.14%) so với ΔFosB ngoài chuột (12.5 ± 2.03% ức chế; p <0.05 khác với ΔFosB trên thử nghiệm t của Student), không có sự khác biệt đáng kể về U50,488 EC50 các giá trị (310 ± 172 nM so với 225 ± 48 nM trong ΔFosB trên và tắt chuột, tương ứng, p = 0.324).

Trái ngược với các hiệu ứng quan sát được với MOR và KOR, không có tác dụng đáng kể nào của biểu hiện ΔFosB biến đổi gen gây ra đối với sự ức chế adenylyl cyclase của chất chủ vận cannabinoid WIN55212-2 (Hình 2C). ANOVA hai chiều của dữ liệu ảnh hưởng nồng độ WIN55,212-2 cho thấy ảnh hưởng đáng kể của nồng độ thuốc (p <0.0001, F = 23.6, df = 2), nhưng không có trạng thái ΔFosB (p = 0.735, F = 0.118, df = 1) cũng không có tương tác đáng kể (p = 0.714, F = 0.343, df = 2). Hơn nữa, không có ảnh hưởng của trạng thái ΔFosB đối với hoạt động adenylyl cyclase cơ bản hoặc forskolin kích thích khi không có bất kỳ chất chủ vận nào. Hoạt động của base adenylyl cyclase là 491 ± 35 pmol / mg / phút ở ΔFosB trên chuột so với 546 ± 44 ở ΔFosB trên chuột (p = 0.346 bằng phép thử t của Student). Tương tự như vậy, hoạt tính adenylyl cyclase khi có 1 µM forskolin là 2244 ± 163 pmol / mg / phút ở ΔFosB trên chuột so với 2372 ± 138 pmol / mg / phút ở ΔFosB trên chuột (p = 0.555).

KHAI THÁC. Tác dụng của ΔcJun đối với ức chế qua trung gian thụ thể opioid và cannabinoid của adenylyl cyclase

Bởi vì biểu hiện chuyển gen cảm ứng của sự tải nạp tín hiệu ức chế tăng cường ΔFosB từ MOR và KOR để adenylyl cyclase trong NAc, điều quan tâm là xác định liệu một chất ức chế âm tính chi phối của phiên mã qua trung gian ΔFosB có điều chỉnh tín hiệu của thụ thể opioid hay không. Để giải quyết câu hỏi này, sự ức chế hoạt động adenylyl cyclase được kích thích bởi forskolin bởi DAMGO và U50,488 đã được kiểm tra trong các màng được chuẩn bị từ NAc của chuột bitransgenic có điều kiện biểu hiện cJun. Kết quả cho thấy không có tác dụng đáng kể của biểu hiện ΔcJun đối với sự ức chế hoạt động adenylyl cyclase của MOR hoặc KOR (Hình 3). ANOVA hai chiều của đường cong hiệu ứng nồng độ DAMGO cho thấy ảnh hưởng chính đáng kể của nồng độ DAMGO (p <0.0001, F = 20.26, df = 6), nhưng không ở trạng thái ΔcJun (p = 0.840, F = 0.041, df = 1) và không có tương tác đáng kể (p = 0.982, F = 0.176, df = 6). Tương tự, không có sự khác biệt đáng kể trong Etối đa hoặc EC50 giá trị giữa những con chuột có ΔcJun trên (Etối đa = 23.6 ± 2.6%; EC50 = 304 ± 43 nM) hoặc ΔcJun tắt (Etối đa = 26.1 ± 2.5%, p = 0.508; EC50 = 611 ± 176 nM, p = 0.129). Các kết quả tương tự cũng được thấy với U50,488, như ANOVA hai chiều của đường cong hiệu ứng nồng độ cho thấy ảnh hưởng đáng kể của nồng độ (p <0.0001, F = 11.94, df = 6), nhưng không có trạng thái ΔcJun (p = 0.127 , F = 2.391, df = 1) và không có tương tác đáng kể (p = 0.978, F = 0.190, df = 6). Tương tự, không có sự khác biệt đáng kể nào trong Etối đa hoặc EC50 giá trị giữa những con chuột có ΔcJun trên (Etối đa = 14.8 ± 2.9%; EC50 = 211 ± 81 nM) hoặc tắt (Etối đa = 16.7 ± 1.8%, p = 0.597; EC50 = 360 ± 151 nM, p = 0.411).

Hình 3 

Ảnh hưởng của biểu hiện ΔcJun đối với sự ức chế hoạt động adaselyl cyclase trong NAc. Các màng từ cJun-expressing (ΔcJun on) hoặc kiểm soát (ΔcJun tắt) đã được ủ với sự hiện diện của DAMGO (A), U50,488H (B) hoặc WIN55,212-2 ...

Biểu hiện ΔcJun cũng không ảnh hưởng đáng kể đến sự ức chế adenylyl cyclase trong NAc bởi chất chủ vận cannabinoid. ANOVA hai chiều của đường cong ảnh hưởng cô đặc WIN55,212-2 cho thấy ảnh hưởng chính đáng kể của nồng độ WIN55,212-2 (p <0.0001, F = 15.53, df = 6), nhưng không phải của kiểu gen (p = 0.066, F = 3.472, df = 1) và không có tương tác đáng kể (p = 0.973, F = 0.208, df = 6). Tương tự, không có sự khác biệt đáng kể trong WIN55,212-2 Etối đa các giá trị (ức chế 13.0 ± 2.3% và 13.6 ± 0.9% trong ΔcJun trên chuột so với tắt, tương ứng, p = 0.821) và hoặc EC50 các giá trị (208 ± 120 nM và 417 ± 130 nM trong ΔcJun trên chuột so với tắt, tương ứng, p = 0.270). Do đó, mặc dù có một xu hướng nhỏ về việc giảm hiệu lực của WIN55,212-2 ở chuột biểu hiện ΔcJun, nhưng gen chuyển không làm thay đổi đáng kể sự ức chế cannabinoid của adenylyl cyclase. Hơn nữa, không có ảnh hưởng của tình trạng ΔcJun đối với hoạt động adaselyl cyclase được kích thích cơ bản hoặc forskolin. Hoạt động cơ bản của adaselyl cyclase là 1095 ± 71 pmol / mg / phút và 1007 ± 77 pmol / mg / phút (p = 0.403) ở chuột có bật hoặc tắt ΔcJun. Hoạt động adenylyl cyclase được kích thích bởi 1 GIAM forskolin lần lượt là 4185 ± 293 pmol / mg / phút so với 4032 ± 273 pmol / mg / phút (p = 0.706) ở chuột có bật hoặc tắt ΔcJun.

XUẤT KHẨU. Thảo luận

Kết quả của nghiên cứu này cho thấy kích hoạt G-protein qua trung gian MOR và ức chế adenylyl cyclase ở NAc của chuột với biểu hiện chuyển gen cảm ứng của ΔFosB trong dynorphin / D1R chứa tế bào thần kinh. Sự ức chế qua trung gian KOR của hoạt động adenylyl cyclase cũng được tăng cường trong NAc của chuột biểu hiện ΔFosB, cho thấy rằng FosB điều chỉnh hệ thống opioid nội sinh trong NAc. DAMGO Etối đa giá trị lớn hơn đối với kích thích MOR [35S] Liên kết GTPγS và EC của nó50 giá trị thấp hơn đối với ức chế adaselyl cyclase, ở chuột biểu hiện quá mức ΔFosB so với chuột đối chứng. Những phát hiện này cho thấy khả năng dự trữ thụ thể để điều chế effector nhưng không kích hoạt G-protein trong các điều kiện xét nghiệm được kiểm tra. Phát hiện rằng sự ức chế tối đa adenylyl cyclase của chất chủ vận KOR bị ảnh hưởng bởi biểu hiện ΔFosB cho thấy dự trữ thụ thể thấp cho phản ứng qua trung gian KOR, phù hợp với mức độ thấp của các vị trí gắn KOR trong não chuột (Unterwald và cộng sự, 1991). Ngược lại, CB1Hoạt động G-protein qua trung gian R và ức chế adenylyl cyclase không bị ảnh hưởng bởi biểu hiện FosB, gợi ý rằng hệ thống opioid và cannabinoid khác nhau trong phản ứng của chúng với ΔFosB trong các tế bào thần kinh NAc này.

Tác dụng của ΔFosB đối với tín hiệu qua trung gian thụ thể opioid phù hợp với báo cáo trước đây của chúng tôi rằng biểu hiện ΔFosB trong thể vân làm thay đổi tác dụng cấp tính và mãn tính của morphin (Zachariou và cộng sự, 2006). Một phát hiện của nghiên cứu đó là những con chuột có biểu hiện biến đổi gen FosB trong dynorphin / D1Các tế bào thần kinh xuất hiện R nhạy cảm hơn với morphin trong điều hòa tại chỗ hơn là đối chứng. Hơn nữa, hiệu ứng này được mô phỏng theo biểu hiện qua trung gian virus của ΔFosB bằng cách tiêm tại chỗ cụ thể vào NAc. Những quan sát này phù hợp với các kết quả hiện tại cho thấy tín hiệu MOR nâng cao trong NAc.

Trước đây chúng tôi đã xác định mã hóa gen dynorphin là mục tiêu của ΔFosB, và đề xuất rằng giảm dynorphin sẽ phù hợp với các đặc tính bổ sung của morphin ở chuột ransFosB bitransgenic (Zachariou và cộng sự, 2006). Các kết quả hiện tại cho thấy sự ức chế qua trung gian KOR của adenylyl cyclase trong NAc được tăng cường ở chuột biểu hiện ΔFosB, điều này có thể phản ánh sự gia tăng độ nhạy của KOR sau khi giảm dynorphin. Các nghiên cứu trước đây đã chỉ ra rằng KOR đã được điều hòa trong một số vùng não nhất định của chuột bị loại trừ prodynorphin, bao gồm NAc (Clarke và cộng sự, 2003).

Trái ngược với ΔFosB, biểu hiện biến đổi gen cảm ứng của ΔcJun, đột biến cắt ngắn âm tính chi phối của đối tác liên kết ΔFosB cJun, không làm thay đổi sự ức chế adaselyl cyclase bởi các chất chủ vận MOR hoặc KOR. Những kết quả này cho thấy mức cơ bản của biểu hiện ΔFosB, tương đối thấp, không đóng vai trò quan trọng trong việc duy trì tín hiệu thụ thể opioid ở mức truyền tín hiệu này trong NAc. Thực tế là tác dụng bổ sung có điều kiện của morphin đã bị giảm do biểu hiện ΔcJun trong nghiên cứu trước đây của chúng tôi (Zachariou và cộng sự, 2006) cho thấy rằng việc kích thích morphin của ΔFosB trong quy trình điều hòa rất quan trọng trong việc điều chỉnh phản ứng hành vi với thuốc hoặc tác dụng phiên mã của ΔFosB ngoài những tác động lên tín hiệu của thụ thể opioid có thể ảnh hưởng đến phần thưởng opioid. Trong mọi trường hợp, kết quả của nghiên cứu hiện tại cho thấy rõ rằng, khi biểu hiện ΔFosB tăng cao hơn mức cơ bản trong dynorphin / D xuất hiện1Các tế bào thần kinh biểu hiện R, có sự gia tăng mạnh mẽ trong sự kết hợp của MOR và KOR với sự ức chế adenylyl cyclase trong NAc.

Các cơ chế mà tín hiệu qua trung gian MOR và KOR được tăng cường bằng biểu hiện quá mức ΔFosB là không rõ ràng, nhưng trước đây chúng tôi đã chỉ ra rằng các mức MOR, được đánh giá bởi [3H] naloxone liên kết, không khác nhau trong NAc của ΔFosB trên chuột so với tắt (Zachariou và cộng sự, 2006). Nghiên cứu tương tự cho thấy GαiNồng độ protein 1 và 2 không bị ảnh hưởng trong khu vực này bởi biểu hiện FosB. Tuy nhiên, các phân tích mảng biểu hiện gen trước đây cho thấy Gαo mRNA đã được điều chỉnh trong NAc của ΔFosB trên chuột (McClung và Nestler, 2003). Nó sẽ được quan tâm trong các nghiên cứu trong tương lai để kiểm tra toàn diện ảnh hưởng của biểu hiện FosB biến đổi gen trên biểu hiện tiểu đơn vị protein G ở mức độ protein cũng như biểu hiện của nhiều protein điều chế protein G.

Điều thú vị là biểu thức ΔFosB không tăng cường CB1Tín hiệu trung gian R trong NAc. Có thể là sự thay đổi trong CB1Tín hiệu R xảy ra trong một quần thể tế bào thần kinh rời rạc bị che khuất trong toàn bộ quá trình chuẩn bị NAc. Ví dụ: quản trị9- THC gây ra ΔFosB đáng kể trong lõi, nhưng không phải vỏ, của NAc (Perrotti và cộng sự, 2008). tôiThứ năm, nó đã được chứng minh rằng thách thức với9-THC sau khi dùng lặp lại Δ9-THC tăng giải phóng dopamine trong lõi NAc, nhưng giảm giải phóng trong vỏ (Cadoni và cộng sự, 2008). Cũng cần lưu ý rằng dòng 11A của chuột bitransgenic chỉ biểu hiện FosB trong dynorphin / D1R tế bào thần kinh gai trung bình dương tính của vân, nhưng CB1R được biểu thị bằng cả dynorphin / D1R và enkephalin / D2R tế bào thần kinh dương tính dương tính (Hohmann và Herkenham, 2000), cũng như trên các thiết bị đầu cuối của vỏ não (Robbe, và cộng sự, 2001). Biểu hiện của chất điều hòa âm tính chi phối của phiên mã qua trung gian ΔFosB, ΔcJun, cũng không có tác dụng đáng kể đối với tín hiệu thụ thể cannabinoid, mặc dù ΔcJun được biểu hiện rõ ràng ở cả D1 và D2- bao gồm các quần thể tế bào thần kinh gai trung bình ở những con chuột này (Peakman và cộng sự, 2003). Tuy nhiên, có thể biểu hiện ΔFosB cơ bản là đủ thấp để ΔcJun sẽ không ảnh hưởng đến tín hiệu thụ thể, như được đề xuất bởi kết quả với MOR và KOR. Cũng có thể là CB1Tín hiệu R được tăng cường một cách khiêm tốn nhờ biểu thức ΔFosB cơ bản, như vậy việc tăng thêm biểu thức ΔFosB hoặc chặn hành động của nó với ΔcJun chỉ có tác dụng nhẹ không đạt đến mức ý nghĩa thống kê. Có thể thấy sự hỗ trợ gián tiếp cho cách giải thích này bằng cách so sánh WIN55,212-2 EC50 giá trị giữa những con chuột biểu thị cJun so với ΔFosB. Tỷ lệ của WIN55,212-2 EC50 giá trị ức chế adaselyl cyclase ở chuột có biểu hiện cảm ứng ΔcJun với EC của nó50 giá trị kích hoạt G-protein ở chuột có biểu hiện cảm ứng ΔFosB là 4.0, trong khi tỷ lệ tương tự ở chuột không có cảm ứng chuyển gen là 1.2.

Ngoài ra, cannabinoids có thể gây ra biểu hiện ΔFosB mà không có bất kỳ ảnh hưởng trực tiếp nào đến CB1Tín hiệu R. Trong kịch bản này, cannabinoids có thể điều chỉnh mức độ đáp ứng với tác dụng tâm sinh lý của các loại thuốc khác thông qua quy định phiên mã qua trung gian ΔFosB. tôithực tế, quản trị của Δ9-THC tạo ra sự nhạy cảm chéo với opioids và amphetamine (Cadoni và cộng sự, 2001, Lamarque, et al., 2001), phù hợp với giả thuyết này. Hơn nữa, việc sử dụng lặp lại chất chủ vận cannabinoid CP55,940 đã được báo cáo để tăng kích hoạt protein G qua trung gian MOR trong NAc, tương tự như chuột biểu hiện FosB trong nghiên cứu hiện tại (Vigano và cộng sự, 2005). Ảnh hưởng của biểu thức ΔFosB đến9Các hành vi qua trung gian -THC chưa được đánh giá, nhưng kết quả hiện tại không loại trừ sự tương tác. Kết quả của nghiên cứu này và trước đây của chúng tôi (Zachariou và cộng sự, 2006) hiển thị các thay đổi FosB gây ra trong MOR và KOR / dynorphin trong phần trước. Những tác dụng bổ ích của9-THC, được đo theo sở thích địa điểm, bị bãi bỏ ở chuột MOR null, trong khi xóa KOR bị suy giảm9-THC đặt ác cảm và tiết lộ9-THC ưu tiên địa điểm (Ghozland và cộng sự, 2002). Tương tự, ác cảm nơi điều kiện đối với Δ9-THC không có mặt trong loại trực tiếp pro-dynorphin so với chuột hoang dã (Zimmer và cộng sự, 2001). Những dữ liệu này cho thấy rằng9-THC có thể bổ ích hơn sau khi cảm ứng ΔFosB và do đó gây ra tín hiệu MOR với việc giảm biểu hiện dynorphin.

Tóm lạiy, kết quả của nghiên cứu này cho thấy biểu hiện của ΔFosB trong D1Các tế bào thần kinh ngoại vi dương tính R / dynorphin đã tăng cường tín hiệu qua trung gian MOR và KOR ở mức độ ức chế qua trung gian G-protein của hoạt động adaselyl cyclase trong NAc. Phát hiện này phù hợp với các nghiên cứu đã chứng minh vai trò của hệ thống opioid nội sinh trong phần thưởng (Trigo, và cộng sự, 2010) và cung cấp một cơ chế tiềm năng cho các hiệu ứng qua trung gian ΔFosB trên phần thưởng. Ngược lại, CB1Tín hiệu qua trung gian R trong NAc không bị ảnh hưởng đáng kể bởi biểu hiện FosB trong điều kiện được kiểm tra, mặc dù các nghiên cứu tiếp theo được bảo đảm để xác định ảnh hưởng của cảm ứng ΔFosB trên hệ thống endocannabinoid.

Nghiên cứu nổi bật

  • Tín hiệu MOR được tăng cường trong các hạt nhân của chuột thể hiện FosB
  • Sự ức chế KOR của adenylyl cyclase cũng được tăng cường ở những con chuột biểu hiện FosB
  • Biểu hiện của ΔFosB không làm thay đổi CB1Tín hiệu R trong nhân accumbens
Go to:

Vật liệu bổ sung

Go to:

Lời cảm ơn

Các tác giả cảm ơn Hengjun He, Jordan Cox và Aaron Tomarchio đã hỗ trợ kỹ thuật với [35S] Các thử nghiệm ràng buộc GTPγS. Nghiên cứu này được USPHS tài trợ DA014277 (LJS), DA10770 (DES) và P01 DA08227 (EJN).

Go to:

Chú thích

Tuyên bố từ chối trách nhiệm của nhà xuất bản: Đây là một tệp PDF của một bản thảo chưa được chỉnh sửa đã được chấp nhận để xuất bản. Là một dịch vụ cho khách hàng của chúng tôi, chúng tôi đang cung cấp phiên bản đầu tiên của bản thảo này. Bản thảo sẽ trải qua quá trình sao chép, sắp chữ và xem xét bằng chứng kết quả trước khi nó được xuất bản ở dạng có thể trích dẫn cuối cùng. Xin lưu ý rằng trong quá trình sản xuất, các lỗi có thể được phát hiện có thể ảnh hưởng đến nội dung và tất cả các khuyến cáo pháp lý áp dụng cho tạp chí liên quan.

Go to:

dự án

  • Bozarth MA, khôn ngoan RA. Các lĩnh vực thụ thể thuốc phiện khác biệt giải phẫu trung gian khen thưởng và phụ thuộc vật lý. Khoa học. 1984;224: 516-517. [PubMed]
  • MM MM. Một phương pháp nhanh chóng và nhạy cảm để định lượng lượng microgam protein sử dụng nguyên lý liên kết thuốc nhuộm protein. Hậu môn. Sinh hóa. 1976;72: 248-254. [PubMed]
  • Breivogel CS, Childers SR, Deadwyler SA, Hampson RE, Vogt LJ, Sim-Selley LJ. Đồng bằng mãn tính9Điều trị -tetrahydrocannabinol tạo ra sự mất mát phụ thuộc vào thời gian của các protein G được kích hoạt thụ thể cannabinoid trong não. J. Neurochem. 1999;73: 2447-2459. [PubMed]
  • Breivogel CS, Selley DE, Trẻ em SR. Hiệu quả chủ vận thụ thể Cannabinoid để kích thích [35S] GTPγS liên kết với màng tiểu não chuột tương quan với giảm chủ nghĩa gây ra bởi agonist trong ái lực GDP. J. Biol. Chem. 1998;273: 16865-16873. [PubMed]
  • Cadoni C, Pisanu A, Solinas M, Acquas E, Di Chiara G. Nhạy cảm hành vi sau khi tiếp xúc nhiều lần với Delta 9-tetrahydrocannabinol và nhạy cảm chéo với morphin. Psychopharmacology (Berl) 2001;158: 259-266. [PubMed]
  • Cadoni C, Valentini V, Di Chiara G. Nhạy cảm hành vi với delta 9-tetrahydrocannabinol và nhạy cảm chéo với morphin: thay đổi khác biệt trong vỏ tích lũy và truyền dopamine lõi. J. Neurochem. 2008;106: 1586-1593. [PubMed]
  • Chen J, Kelz MB, Zeng G, Sakai N, Steffen C, Shockett PE, Picciotto MR, Duman RS, Nestler EJ. Động vật chuyển gen với biểu hiện gen mục tiêu, cảm ứng trong não. Mol. Pharmacol. 1998;54: 495-503. [PubMed]
  • Trẻ em SR. Các sứ giả thứ hai kết hợp với thụ thể opioid. Cuộc sống Sci. 1991;48: 1991-2003. [PubMed]
  • Childers SR, Fleming L, Konkoy C, Marckel D, Pacheco M, Sexton T, Ward S. Opioid và cannabinoid ức chế thụ thể adenylyl cyclase trong não. Ann. Học viện NY Khoa học 1992;654: 33-51. [PubMed]
  • Trẻ em SR, Xiao R, Vogt LJ, Sim-Selley LJ. Kappa opioid kích thích thụ thể của [35S] GTPγS liên kết trong não chuột lang: Thiếu bằng chứng cho kappa2kích hoạt chọn lọc của G-protein. Sinh hóa. Dược điển. 1998;56: 113-120. [PubMed]
  • Clarke S, Zimmer A. Khoa học thần kinh. 2003;122: 479-489. [PubMed]
  • Colby CR, Whisler K, Steffen C, Nestler EJ, Tự DW. Sự biểu hiện quá mức của loại tế bào đặc biệt của DeltaFosB giúp tăng cường khuyến khích cocaine. J. Neurosci. 2003;23: 2488-2493. [PubMed]
  • Người làm vườn EL. Hệ thống tín hiệu endocannabinoid và phần thưởng cho não: nhấn mạnh vào dopamine. Pharmacol. Biochem. Behav. 2005;81: 263-284. [PubMed]
  • Ghozland S, Matthes HW, Simonin F, Filliol D, Kieffer BL, Maldonado R. Tác dụng tạo động lực của cannabinoids được trung gian bởi các thụ thể mu-opioid và kappa-opioid. J. Neurosci. 2002;22: 1146-1154. [PubMed]
  • Herkenham M, Lynn AB, Johnson MR, Melvin LS, de Costa BR, Rice KC. Đặc điểm và nội địa hóa các thụ thể cannabinoid trong não chuột: một nghiên cứu định lượng in vitro định lượng. J. Neurosci. 1991;11: 563-583. [PubMed]
  • Hohmann AG, Herkenham M. Nội địa hóa mRNA của thụ thể cannabinoid CB (1) trong các quần thể tế bào thần kinh của chuột striatum: một nhãn kép trong nghiên cứu lai tạo tại chỗ. Khớp thần kinh. 2000;37: 71-80. [PubMed]
  • Howlett AC, Barth F, Bonner TI, Cabral G, Casellas P, Devane WA, Felder CC, Herkenham M, Mackie K, Martin BR, Mechoulam R, Pertwee RG. Liên minh Dược phẩm Quốc tế. XXVII. Phân loại các thụ thể cannabinoid. Đánh giá dược lý. 2002;54: 161-202.
  • Huestis MA, Gorelick DA, Heishman SJ, Preston KL, Nelson RA, Moolchan ET, Frank RA. Phong tỏa tác dụng của cần sa hun khói bằng chất đối kháng thụ thể cannabinoid chọn lọc CB1 SR141716. Arch. Tướng tâm thần học. 2001;58: 322-328. [PubMed]
  • Kelz MB, Chen J, Carlezon WA, Jr, Whisler K, Gilden L, Beckmann AM, Steffen C, Zhang YJ, Marotti L, Self DW, Tkatch T, Baranauskas G, Surmeier DJ, Neve RL, Duman RS, Picci Nestler EJ. Biểu hiện của yếu tố phiên mã deltaFosB trong não kiểm soát độ nhạy cảm với cocaine. Thiên nhiên. 1999;401: 272-276. [PubMed]
  • Koob GF, ROLow ND. Thần kinh gây nghiện. Neuropsychopharmacology. 2010;35: 217-238. [Bài viết miễn phí của PMC] [PubMed]
  • Lamarque S, Taghzouti K, Simon H. Điều trị mãn tính bằng Delta (9) -tetrahydrocannabinol giúp tăng cường phản ứng vận động với amphetamine và heroin. Hệ lụy cho sự tổn thương đối với nghiện ma túy. Neuropharmacology. 2001;41: 118-129. [PubMed]
  • Maldonado R, Valverde O, Berrendero F. Sự tham gia của hệ thống endocannabinoid trong nghiện ma túy. Xu hướng Neurosci. 2006;29: 225-232. [PubMed]
  • Mansour A, Fox CA, Thompson RC, Akil H, Watson SJ. Biểu hiện mRNA của thụ thể mu-Opioid trong CNS chuột: so sánh với liên kết với thụ thể mu. Brain Res. 1994;643: 245-265. [PubMed]
  • Matthes HWD, Maldonado R, Simonin F, Valverde O, Slowe S, Bếp I, Befort K, Dierich A, LeMeur M, Dolle P, Tzavara E, Hanoune J, Roques BP, Kieffer BL. Mất thuốc giảm đau do morphin, hiệu quả khen thưởng và các triệu chứng cai nghiện ở chuột thiếu gen thụ thể-opioid. Thiên nhiên. 1996;383: 819-823. [PubMed]
  • McClung CA, Nestler EJ. Quy định biểu hiện gen và phần thưởng cocaine của CREB và DeltaFosB. Nat. Thần kinh. 2003;6: 1208-1215. [PubMed]
  • McClung CA, Ulery PG, Perrotti LI, Zachariou V, Berton O, Nestler EJ. DeltaFosB: một công tắc phân tử để thích ứng lâu dài trong não. Não Res. Mol. Não Res. 2004;132: 146-154. [PubMed]
  • Muller DL, Unterwald EM. Các thụ thể dopamine D1 điều chỉnh cảm ứng deltaFosB trong chuột cống sau khi dùng morphin không liên tục. J. Pharmacol. Exp. Ther. 2005;314: 148-154. [PubMed]
  • Nestler EJ. Ôn tập. Cơ chế phiên mã của nghiện: vai trò của DeltaFosB. Triết gia Xuyên. R. Sóc. Thích B. Biol. Khoa học 2008;363: 3245-3255. [Bài viết miễn phí của PMC] [PubMed]
  • Nestler EJ, Kelz MB, Chen J. DeltaFosB: một trung gian phân tử của tính dẻo thần kinh và hành vi lâu dài. Brain Res. 1999;835: 10-17. [PubMed]
  • Nye HE, Hope BT, Kelz MB, Iadarola M, Nestler EJ. Các nghiên cứu dược lý về việc điều chỉnh cảm ứng kháng nguyên mãn tính liên quan đến FOS bằng cocaine ở vùng vân và hạt nhân. J. Pharmacol. Exp. Ther. 1995;275: 1671-1680. [PubMed]
  • MC đỉnh cao, Colby C, Perrotti LI, Tekumalla P, Carle T, Ulery P, Chao J, Duman C, Steffen C, Monteggia L, Allen MR, Stock JL, Duman RS, McNeish JD, Barrot M, Self DW, Nestler EJ , Schaeffer E. Biểu hiện cụ thể ở vùng não của một đột biến âm tính chi phối của c-Jun ở chuột biến đổi gen làm giảm độ nhạy cảm với cocaine. Brain Res. 2003;970: 73-86. [PubMed]
  • Perrotti LI, RR Mô hình khác biệt của cảm ứng DeltaFosB trong não bằng thuốc lạm dụng. Khớp thần kinh. 2008;62: 358-369. [Bài viết miễn phí của PMC] [PubMed]
  • Robbe D, Alonso G, Duchamp F, Bockaert J, Manzoni OJ. Nội địa hóa và cơ chế hoạt động của các thụ thể cannabinoid tại các khớp thần kinh glutamatergic của nhân chuột chuột. J. Neurosci. 2001;21: 109-116. [PubMed]
  • Xét nghiệm cyclase Salomon Y. Adenylate. Adv. Nucleotide tuần hoàn Res. 1979;10: 35-55. [PubMed]
  • Selley DE, Sim LJ, Xiao R, Liu Q, Trẻ em SR. Mu opioid kích thích thụ thể [35S] GTPγS liên kết trong đồi thị chuột và dòng tế bào nuôi cấy: Cơ chế truyền tín hiệu dựa trên hiệu quả của chất chủ vận. Mol. Pharmacol. 1997;51: 87-96. [PubMed]
  • Trigo JM, Martin-Garcia E, Berrendero F, Robledo P, Maldonado R. Hệ thống opioid nội sinh: một chất nền phổ biến trong nghiện ma túy. Rượu thuốc phụ thuộc. 2010;108: 183-194. [PubMed]
  • Unterwald EM, Knapp C, Zukin RS. Nội địa hóa thần kinh của các thụ thể opioid κ1 và κ2 trong não chuột và chuột lang. Brain Res. 1991;562: 57-65. [PubMed]
  • Vaccarino FJ, Bloom FE, Koob GF. Sự phong tỏa các hạt nhân accumbens thụ thể thuốc phiện làm suy giảm phần thưởng heroin tiêm tĩnh mạch ở chuột. Psychopharmacology (Berl) 1985;86: 37-42. [PubMed]
  • Vigano D, Rubino T, Vaccani A, Bianchessi S, Marmorato P, Castiglioni C, Parolaro D. Các cơ chế phân tử liên quan đến sự tương tác bất đối xứng giữa các hệ thống cannabinoid và opioid. Psychopharmacology (Berl) 2005;182: 527-536. [PubMed]
  • Zachariou V, Bolanos CA, Selley DE, Theobald D, Cassidy MP, Kelz MB, Shaw-Lutchman T, Berton O, Sim-Selley LJ, Dileone RJ, Kumar A, Nestler EJ. Một vai trò thiết yếu cho DeltaFosB trong hạt nhân accumbens trong hành động morphin. Nat. Thần kinh. 2006;9: 205-211. [PubMed]
  • Zangen A, Solinas M, Ikemoto S, Goldberg SR, Wise RA. Hai trang web não cho phần thưởng cannabinoid. J. Neurosci. 2006;26: 4901-4907. [PubMed]
  • Zhu J, Luo LY, Li JG, Chen C, Liu-Chen LY. Kích hoạt thụ thể kappa opioid nhân bản vô tính bằng chất chủ vận giúp tăng cường [35S] GTPγS liên kết với màng: xác định hiệu lực và hiệu quả của phối tử. J. Pharmacol. Exp. Ther. 1997;282: 676-684. [PubMed]
  • Zimmer A, Valjent E, Konig M, Zimmer AM, Robledo P, Hahn H, Valverde O, Maldonado R. Sự vắng mặt của delta -9-tetrahydrocannabinol ở chuột bị thiếu dynorphin. J. Neurosci. 2001;21: 9499-9505. [PubMed]
  • Zimmer A, Zimmer AM, Hohmann AG, Herkenham M, Bonner TI. Tăng tỷ lệ tử vong, giảm hoạt động và hạ huyết áp ở chuột hạ gục thụ thể CB1 cannabinoid. Proc. Natl. Học viện Khoa học Hoa Kỳ 1999;96: 5780-5785. [Bài viết miễn phí của PMC] [PubMed]