Chế độ ăn nhiều chất béo vừa phải làm tăng sự tự quản Sucrose ở chuột non (2013)

Dianne P. Figlewicz,^1,2 Jennifer L. Jay,² Molly A. Acheson, Irwin J. Magrisso,⁴ Constance H. Tây,¹ Aryana Zavosh,² Stephen C. Benoit,³ và Jon F. Davis³

Trước đây chúng tôi đã báo cáo rằng chế độ ăn nhiều chất béo vừa phải làm tăng động lực cho sucrose ở chuột trưởng thành. Trong nghiên cứu này, chúng tôi đã thử nghiệm các tác động động lực, hóa học thần kinh và chuyển hóa của chế độ ăn nhiều chất béo ở chuột đực chuyển qua tuổi dậy thì, trong các tuần 5-8. Chúng tôi quan sát thấy rằng chế độ ăn nhiều chất béo làm tăng động lực đáp ứng với sucrose, không phụ thuộc vào sự thay đổi chuyển hóa hoặc thay đổi trong các chất chuyển hóa dẫn truyền thần kinh catecholamine trong nhân accumbens. Tuy nhiên, nồng độ mRNA AGRP ở vùng dưới đồi đã tăng đáng kể. Chúng tôi đã chứng minh rằng việc kích hoạt các tế bào thần kinh AGRP tăng lên có liên quan đến hành vi có động lực và việc quản lý AGRP ngoại sinh (não thứ ba) dẫn đến tăng động lực đáng kể cho sucrose. Những quan sát này cho thấy rằng sự biểu hiện và hoạt động của AGRP tăng lên ở vùng dưới đồi trung gian có thể làm tăng khả năng đáp ứng với sucrose do can thiệp chế độ ăn nhiều chất béo. Cuối cùng, chúng tôi đã so sánh động lực của sucrose ở chuột trưởng thành so với chuột trưởng thành và quan sát thấy động lực tăng đối với sucrose ở chuột pubertal, phù hợp với các báo cáo trước đây rằng động vật trẻ và con người có sở thích tăng vị ngọt so với người trưởng thành. Cùng với nhau, các nghiên cứu của chúng tôi cho thấy chế độ ăn nền đóng vai trò điều tiết mạnh mẽ trong việc thúc đẩy vị ngọt ở động vật vị thành niên.

Đối tượng

Đối tượng là những con chuột bạch tạng đực từ Simonsen (Gilroy, CA). Chuột được duy trì trên chow (Diet Rodent Diet 5001, LabDiet) hoặc chế độ ăn nhiều chất béo vừa phải (31.8%; Research Diets Inc) quảng cáo tự do. Các chế độ ăn kiêng phù hợp với hàm lượng carbohydrate tổng thể (58% kcal so với 51% kcal cho chất béo thấp so với chất béo cao, tương ứng). Chow ít chất béo có 6.23 gm% đường miễn phí và chế độ ăn nhiều chất béo có 29 gm% sucrose. Chúng được duy trì trên một chu kỳ sáng-tối 12: 12 h với đèn sáng ở 6 AM. Trừ khi có chỉ định khác, chuột được đưa vào ở các tuần tuổi 3, ngay sau khi cai sữa và được nuôi để thích nghi cho đến khi 5 được vài tuần tuổi. Ở tuổi này, chế độ ăn uống và / hoặc đào tạo và kiểm tra hành vi đã được bắt đầu. Các giao thức cụ thể được mô tả chi tiết dưới đây và được tóm tắt trong Bảng 1. Bởi vì chuột đực trải qua tuổi dậy thì tại 6^th-7^th tuần tuổi, thời gian của các nghiên cứu được thiết kế để nghiên cứu chuột khi chúng đi qua giai đoạn phát triển này. Tất cả các quy trình được thực hiện trên chuột đều tuân theo hướng dẫn của NIH về chăm sóc động vật và được phê duyệt bởi Tiểu ban Chăm sóc và Sử dụng Động vật của Ủy ban Nghiên cứu và Phát triển tại Hệ thống Chăm sóc Sức khỏe VA Puget Sound.

  

Bảng 1

Giao thức thí nghiệm

Sucrose tự quản

Nghị định thư chung. Các thủ tục dựa trên phương pháp được công bố của chúng tôi (Figlewicz và cộng sự, 2008; Figlewicz và cộng sự, 2006). Tất cả các quy trình đào tạo và kiểm tra đã được thực hiện giữa 0700 và 1200 hr. Thí nghiệm bao gồm các giai đoạn 2-3: đào tạo tự động và tỷ lệ cố định (FR); phẫu thuật và phục hồi trong đoàn hệ được chỉ định (xem Bảng 1); và đào tạo tỷ lệ lũy tiến (PR) bằng thuật toán PR của Richardson và Roberts (Richardson & Roberts, 1996). Thuật toán PR yêu cầu 1, 2, 4, 6, 9, 12, 16, 20, 28, 36, 48, 63, 83, 110, 145, 191, 251, 331, 437, XNUM v.v.) nhấn đòn bẩy để giao thành công phần thưởng trong một phiên, và là một bài kiểm tra nghiêm ngặt cho động lực và phần thưởng (575). Chuột được huấn luyện để tự quản lý 759% sucrose (phần thưởng 999 ml) được đưa vào một vật chứa chất lỏng. Các hộp hoạt động, được điều khiển bởi hệ thống Med Associates (Georgia, VT), có hai đòn bẩy, nhưng chỉ có một đòn bẩy (một đòn bẩy hoạt động, có thể thu vào) kích hoạt bơm tiêm truyền. Nhấn vào đòn bẩy khác (một đòn bẩy không hoạt động) cũng được ghi lại. Các giải pháp sucrose đã được đưa vào một thùng chứa chất lỏng để tiêu thụ bằng miệng (Med Associates). Huấn luyện ban đầu được thực hiện trong các phiên kéo dài một giờ cho các ngày 999 theo lịch trình tăng cường liên tục (FR27: mỗi lần nhấn đòn bẩy được tăng cường), với tối đa khả năng là phần thưởng sucrose có thể được cung cấp mỗi phiên. Mỗi phiên bắt đầu với việc chèn đòn bẩy hoạt động và chiếu sáng của đèn chiếu sáng màu trắng vẫn còn trên toàn bộ phiên. Một giai điệu 5 (0.5 Hz, 10 dB trên nền) + ánh sáng (1 W ánh sáng trắng trên đòn bẩy hoạt động) cue hợp chất rời rạc đi kèm với mỗi lần giao phần thưởng, sau đó là hết thời gian 50-giây sau mỗi lần phân phối sucrose. Đào tạo PR được thực hiện tối đa có thể là 5 h / ngày trong mười ngày. Các phiên hàng ngày đã kết thúc sau khi 2900 tối thiểu không có phản hồi đòn bẩy hoạt động, tại thời điểm đó đèn nhà bị tắt và cần gạt hoạt động rút lại.

Tác dụng của AGRP đối với việc tự quản sucrose

Vì kết quả của chúng tôi cho thấy sự gia tăng biểu hiện mRNA AGRP ở chuột tuổi dậy thì được cho ăn chế độ ăn nhiều chất béo, chúng tôi muốn xác nhận rằng AGRP có thể làm tăng sự tự quản của sucrose. Những con chuột được cho ăn chow cũ của 5-wk đã được thực hiện thông qua huấn luyện FR, sau đó nhận được ống thông vào não thất thứ ba (ICV). Sau một tuần phục hồi, xác nhận vị trí bằng xét nghiệm phản ứng uống angiotensin II (xem Figlewicz và cộng sự, [2006]), và một phiên đào tạo lại FR, chuột đã được bắt đầu trên mô hình tự quản trị PR. Sau PR Day 1, chuột được chỉ định cho một trong hai nhóm, nghĩa là hiệu suất 1 của PR Day không khác nhau giữa hai nhóm (xe CSF nhân tạo, aCSF; hoặc AGRP, 2 μl của 0.01 nmol). Họ đã nhận được tiêm aCSF (n = 8) hoặc AGRP (n = 7) vào các ngày PR 2, 5 và 8. Tổng lượng thức ăn hàng ngày được định lượng trong thời gian đào tạo PR.

Ảnh hưởng của tuổi tác đối với việc tự quản sucrose

Chúng tôi đã so sánh hành vi tự quản giữa chuột dậy thì và thanh niên, cho ăn chow hoặc chế độ ăn chất béo 31.8%. Chuột đã có hai tuần thích nghi với vivarium VAPSHCS (3 bằng 5wk hoặc 8 XN 10 wk). Sau đó, họ nhận được chế độ ăn kiêng trong toàn bộ thời gian thử nghiệm / đào tạo (4 wk). Do đó, như trong thí nghiệm ban đầu, chuột pubertal đã được nghiên cứu tại 5-8 wk tuổi. Người lớn trẻ tuổi được nghiên cứu tại 10-13 wk tuổi.

Xác định thành phần cơ thể

Thành phần cơ thể được đo bằng phương pháp quang phổ cộng hưởng từ định lượng (QMR [Nixon và cộng sự, 2010]) để xác định hàm lượng nước cơ thể của từng con chuột, từ đó tính toán lượng mỡ cơ thể tương đối. Các con vật được đặt trong các giá đỡ hình trụ không được gây mê, và sau đó các giá đỡ được đưa vào máy QMR để quét phút 2, thực hiện các phép đo ba lần. Dữ liệu được lưu vào một máy tính tích hợp (EchoMRI, Echo Medical Systems, Houston, TX) để tính toán ngay lập tức nước toàn thân, chất béo và khối lượng nạc.

Xét nghiệm dung nạp glucose tiêm tĩnh mạch (IVGTT)

IVGTT có ý thức được thực hiện trên chuột với các ống IV được cấy ghép mạn tính, được nhịn ăn qua đêm trước khi nghiên cứu, sử dụng phương pháp dựa trên Frangioudakis, Gyte, Loxham, & Poucher (2008). Theo phương pháp tiêm tĩnh mạch song phương được cấy hai tuần trước khi nghiên cứu, theo phương pháp đã được thiết lập của chúng tôi (Figlewicz và cộng sự, 2009). Các mẫu cơ sở đã được rút ra ở t-10 min (0.5 ml để xác định insulin và glucose, tại mọi thời điểm) và t0 min. Chuột đã được truyền glucose 1 gm glucose / 2ml / kg qua 15-20 giây sau đó là nước muối 0.5 ml. Các mẫu máu được lấy tại 5, 15, 30, 60, 90 và 120 min. Do việc cắm ống thông trong quy trình (do đó, không thể lấy được mẫu máu), cuối cùng cho dữ liệu cơ sở / IVGTT được trình bày là 7-8 cho chuột ăn chow và 8 cho chuột được cho ăn chế độ ăn chất béo%Bảng 3). Insulin huyết tương được xác định bằng cách sử dụng bộ dụng cụ RIA insulin Linco (# RI-13K và SRI-13K, Linco) và glucose huyết tương được xác định trên Máy phân tích Glucose YSI). Diện tích dưới đường cong (AUC) cho phản hồi từ đường cơ sở đã được tính toán ở mức 5 phút và 120 phút. Chỉ số HOMA được tính là nhịn ăn (glucose [mM] × insulinm [U / L]) / 22.5 và được tính bằng cách sử dụng các mẫu nhịn ăn cuối cùng được đo cho insulin và glucose.

  

Bảng 3

Thông số trao đổi chất¹

Thông số trao đổi chất lúc đói

Chuột từ Thí nghiệm 1 được nhịn ăn qua đêm trước khi trợ tử, vài ngày sau khi hoàn thành IVGTT. Chuột được gây mê sâu bằng cách hít isoflurane và thoát ra ngoài. Não được loại bỏ nhanh chóng và đông lạnh trong nitơ lỏng để đo mRNA peptide vùng dưới đồi và hạt nhân accumbens catecholamine. Huyết tương hoặc huyết thanh đầu cuối được sử dụng để đo insulin, glucose, leptin và triglyceride lúc đói. Đối với triglyceride, Bộ dụng cụ GPO Triglyceride GPO # T7531-400 (Fisher # 23-666-418) và các tiêu chuẩn KIT # 7531-STD (Fisher # 23-666-422) đã được sử dụng trong huyết thanh. Leptin huyết tương được đo bằng Millipore Linco RIA Kit # RL 3K.

Phương pháp HPLC Catecholamine [Davis và cộng sự, 2008]

Chuột được tiêu hủy bằng gây mê bằng isoflurane và não nhanh chóng được loại bỏ, đông lạnh và được lưu trữ ở −80 ° C. Các cú đấm song phương của hạt nhân accumbens (NAcc) đã được phân lập từ mỗi động vật. Mặc dù sự chăm sóc đáng kể đã được thực hiện để giảm thiểu ô nhiễm bởi các vùng não lân cận, do tính chất và kích thước của mỗi cú đấm vi mô, phương pháp của chúng tôi không cho phép chúng tôi phân biệt các tiểu vùng (ví dụ lõi NAcc so với vỏ) trong NAcc. Để phân tích sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC), một dung dịch chống oxy hóa (0.4 N perchlorate, 1.343 mM ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) và 0.526 mM sodium metabisulfite đã được thêm vào các mẫu sau khi sử dụng homogenis ). Một phần nhỏ của homogenate mô đã được hòa tan trong 2% natri dodecyl sulfate (SDS) (w / v) để xác định protein (Bộ thuốc thử protein Pierce BCA; Rockford, IL). Hỗn dịch còn lại được tách ra ở 14,000 g cho 20 g tối thiểu trong một máy ly tâm lạnh. Chất nổi trên bề mặt được dành riêng cho HPLC.

Các mẫu được phân tách trên cột microsorb MV C-18 (5 Am, 4.6_250 mm, Varian; Walnut Creek, CA) và đồng thời kiểm tra DA, 3,4-dihydroxyphenylacetic acid (DOPAC) và axit homovanillic (HOP) suy thoái dopamine, 5-HT và 5-HIAA. Các hợp chất được phát hiện bằng cách sử dụng bộ phát hiện mảng coulometric kênh 12 (CoulArray 5200, ESA; Chelmsford, MA) được gắn vào Hệ thống phân phối dung môi Waters 2695 (Waters; Milford, MA) trong các điều kiện sau: tốc độ dòng của 1 ml / phút; tiềm năng phát hiện của 50, 175, 350, 400 và 525 mV, và; tiềm năng chà của 650 mV. Pha động bao gồm dung dịch metanol 10% trong H chưng cất₂O chứa axit citric 21 g / l (0.1 M), 10.65g / l (0.075 M) Na2HPO4, 176 mg / l (0.8 M) axit heptanesulfonic và 36 mg / l (0.097 mM) Các mẫu không xác định được định lượng theo đường cong chuẩn điểm 4.1 với R tối thiểu² của 0.97. Các mẫu kiểm soát chất lượng được xen kẽ với mỗi lần chạy để đảm bảo hiệu chuẩn HPLC.

Peptide Orexigenic mRNA qPCR

Chúng tôi đã đo biểu hiện của các peptide vùng dưới đồi kích thích cho ăn và có liên quan đến các hành vi thúc đẩy và khen thưởng (Figlewicz & Sipols, 2010): neuropeptide Y (NPY [ Hahn, Breininger, Baskin, & Schwartz, 1998; Người Do Thái và cộng sự, 1995; Kelley, Nannini, Bratt, & Hodge, 2001]); peptide liên quan đến agouti (AGRP [Aponte, Atasoy và Sternson, 2011; Barnes, Argyropoulos và Bray, 2010; Broberger và cộng sự, 1998; Hagan và cộng sự, 2000; Hahn, Breininger, Baskin, & Schwartz, 1998; Kaushik và cộng sự, 2011; Krash và cộng sự, 2011; Rossi và cộng sự, 1998; Tracy và cộng sự, 2008]); và orexin (Cason và cộng sự, 2010; Choi, Davis, Fitzgerald, & Benoit, 2010). Chuột được gây mê bằng isoflurane gây mê, và não nhanh chóng được lấy ra, đông lạnh và bảo quản ở -80 ° C cho đến khi chế biến. Vùng dưới đồi bên giữa và bên được cắt nhỏ thành một khối bằng cách sử dụng máy bay đông lạnh AHP-1200CPV (Thermo Electrical Cooling America, Chicago, Il) duy trì nhiệt độ không đổi 12 ° C trong suốt quá trình mổ xẻ. RNA tổng số từ mô bị tổn thương vi mô được phân lập bằng thuốc thử Trizol (Invitrogen, Carlsbad, CA) và được tinh sạch bằng RNeasy Mini Kit (Qiagen, Valencia, CA) theo hướng dẫn của nhà sản xuất. RNA tổng số đã được xử lý để loại bỏ bất kỳ sự ô nhiễm DNA bộ gen tiềm ẩn nào bằng cách sử dụng DNase tự do RNase (Promega, Madison, WI) và được định lượng bằng máy quang phổ NanoVue (GE Healthcare, Cambridge, Vương quốc Anh). Chất lượng RNA được xác nhận bằng điện di trên gel agarose tiêu chuẩn. DNA bổ sung (cDNA) sau đó được phiên mã lại (RT) từ 1-2 μg RNA tổng số bằng hỗn hợp các hexamers ngẫu nhiên và mồi oligo DT bằng cách sử dụng Bộ tổng hợp iScript cDNA (Bio-Rad Laboratories, Inc., Hercules, CA). Các phản ứng không được phiên mã lại (không có RT) cũng được chuẩn bị từ mỗi mẫu để kiểm soát khả năng nhiễm bẩn DNA bộ gen. Các đối chứng cDNA và không-RT được pha loãng và 5-10 ng cDNA mẫu từ mỗi mẫu được sử dụng để đo sự biểu hiện mRNA của các gen đã chọn bằng PCR định lượng thời gian thực sử dụng Hệ thống phát hiện PCR thời gian thực MyIQ (Bio-Rad, Hercules , CA). Các phép đo phức tạp cho mỗi mẫu được chạy trên đĩa iCycler 96 giếng tiêu chuẩn, cùng với không có mẫu kiểm soát (NTC) để phát hiện khả năng nhiễm chéo, trong thể tích phản ứng 20 μl bao gồm 10 μl 2 × iQ Sybr Green Supermix (Bio- Rad, Hercules, CA), 2 μl 0.2-0.5 μM mỗi mồi, 3 μl DEPC nước và 5 μl mẫu. Tất cả các phản ứng qPCR bao gồm phân tích đường cong nóng chảy để đảm bảo tính đặc hiệu của tín hiệu. Sự biểu hiện tương đối cho mỗi gen quan tâm được tính toán bằng cách ngoại suy cho một đường cong chuẩn chạy riêng lẻ trên mỗi đĩa và bắt nguồn từ các độ pha loãng nối tiếp của mẫu tổng hợp cDNA tham chiếu và được chuẩn hóa để biểu hiện tương đối của các gen tham chiếu (phosphoprotein 36B4 có tính axit để biểu hiện gen mô vùng dưới đồi, và protein ribosom của ty thể L32 để biểu hiện trong nhân). Các trình tự mồi sau (IDT, San Diego, CA) được sử dụng để khuếch đại prero-orexin của chuột, NPY và AGRP: Prepro-orexin, Forward: 5′-TTCCTTCTACAAAGGTTCCCT-3 ′, 5′-GCAACAGTTCGTAGAGACGGCAG-3 ′; NPY: Tiến lên, 5- TACTCCGCTCTGCGACACTACATC-3 ′; Đảo ngược: 5′-CACATGGAAGGGTCTTCAAGCC-3 ′; AGRP, Tiền đạo: 5′-GCAGAAGGCAGAAGCTTTGGC-3 ′; Đảo ngược: 5′-CCCAAGCAGGACTCGTGCAG-3 ′.

Định lượng miễn dịch hóa học cFos (ICC) và định lượng

Theo phương pháp đã được thiết lập của chúng tôi (ICC huỳnh quang được sử dụng để xác định các tế bào tế bào thần kinh dương tính Fos và AGRP dương tính ở vùng dưới đồi trung gian.Figlewicz và cộng sự, 2011). Vào ngày cuối cùng (Ngày 10 PR), chuột được đặt trong các buồng tự quản lý như bình thường, trong 90 phút. Ngay sau phiên điều trị 90 phút cuối cùng đó, chuột được gây mê sâu bằng cách hít isoflurane và truyền NaCl 0.9% sau đó với dung dịch lạnh 4% paraformaldehyde. Thời gian gây mê và gây tử vong được dựa trên thời gian biểu hiện đỉnh của protein cFos đã biết ở 90–120 phút sau sự kiện. Do đó, biểu hiện cFos sẽ phản ánh sự kích hoạt của CNS khi bắt đầu thực hiện nhiệm vụ hành vi, chứ không phải là kết quả của việc động vật trải qua nhiệm vụ. Não được lấy ra và cố định sau trong paraformaldehyde vài ngày, sau đó được đặt trong dung dịch 20% sucrose-PBS, sau đó là dung dịch sucrose-PBS 30%. Não được cắt trên một thiết bị đông lạnh (Leica CM 3050S cryostat) để hóa mô miễn dịch. Chúng tôi đã sử dụng phương pháp luận đã được thiết lập của mình để định lượng protein cFos phản ứng miễn dịch trong các phần não (Figlewicz và cộng sự, 2011). Các phần vành của não toàn bộ 12 được gắn trượt được rửa ba lần trong dung dịch muối đệm phốt phát (PBS, OXOID, Hampshire, Anh). Các phần được rửa trong 20 phút bằng nước 100% ethanol / DI (50%, v / v) sau đó rửa PBS, sau đó bị chặn trong giờ 1 ở nhiệt độ phòng trong PBS chứa 5% huyết thanh dê hoặc lừa bình thường. Các phần sau đó được rửa nhiều lần trong PBS và được ủ qua đêm ở 4 ° C trong các dung dịch kháng thể chính được tạo thành trong PBS. Các phần được rửa ba lần trong PBS và sau đó được ủ trong bóng tối ở nhiệt độ phòng trong dung dịch kháng thể thứ cấp được tạo thành trong PBS trong 1 giờ. Các phần sau đó được rửa lại trong PBS, và được gắn và trượt trong môi trường lắp đặt cứng Vectashield (Vector; Burlingame, CA). Hình ảnh kỹ thuật số của các phần được thu được bằng kính hiển vi huỳnh quang E-800 của Nikon được kết nối với máy ảnh chụp kỹ thuật số Qimaging Retiga bằng phần mềm NIS Elements (Nikon).

Dựa trên các nghiên cứu PCR chứng minh mức độ mRNA AGRP tăng lên, chúng tôi tập trung vào các vùng dưới đồi trung gian, đặc biệt là nhân não thất và nhân vòng cung (ARC)). Các phần 12 phù hợp với bản đồ được đánh giá cho biểu thức và định lượng cFos trong các phần và vùng phù hợp, dựa trên tập bản đồ của Paxinos và Watson [2005]. Để định lượng (ở độ phóng đại 40 ×), các vùng khớp với bản đồ đã được chọn. Phần mềm NIS Elements (Nikon) đã được sử dụng để chụp ảnh khu vực mong muốn. Một khu vực được phân định để đếm và ngưỡng cho số lượng tế bào dương tính đã được thiết lập. Vùng và nền (ngưỡng) giống hệt nhau được sử dụng cho các phần từ các nhóm thử nghiệm tương ứng và phần mềm đếm các tế bào dương tính (định lượng) được thực hiện trong cùng một phiên cho tất cả các nhóm thử nghiệm, để ngăn thay đổi giữa các phiên trong cài đặt nền. Để phân tích thống kê, số lượng được lấy từ một con chuột riêng lẻ nếu các phần tương ứng hoặc hoàn chỉnh qua từng khu vực có sẵn; dữ liệu cho một khu vực cụ thể không được lấy từ một con chuột nếu có sự đại diện song phương không đầy đủ cho khu vực đó.

Ngoài định lượng cFos, định lượng hóa mô miễn dịch nhãn kép cho cFos và AGRP đã được tiến hành. Bởi vì chúng tôi không muốn làm xáo trộn hoạt động hành vi của động vật, chúng không được xử lý trước bằng colchicine để tối ưu hóa hình dung AGRP. Do đó, việc hình dung các tế bào thần kinh dương tính với AGRP có thể bị đánh giá thấp. Quy trình nhuộm kép đối với AGRP có thể so sánh với xét nghiệm phản ứng miễn dịch cFos của chính nó, ngoại trừ các phần được chặn trong một giờ ở nhiệt độ phòng trong huyết thanh lừa PBS-5%. Sau đó, hỗn hợp các kháng thể chính fos-Ab và AGRP được sử dụng để ủ qua đêm ở 4 ° C; tương tự như vậy, cả hai kháng thể thứ cấp ở trong cùng một dung dịch và được ủ trong một giờ trong bóng tối ở nhiệt độ phòng. Các xét nghiệm tối ưu hóa ban đầu được thực hiện để xác định độ pha loãng thích hợp của các kháng thể chính. Các kháng thể chính được sử dụng là chống cFos ở thỏ (1: 500) (sc-52) và chống AGRP của dê (1: 100) (18634) (Santa Cruz Biotechnology, Inc., Santa Cruz, CA). Các kháng thể thứ cấp được sử dụng là chống thỏ lừa liên hợp Cy3 (Jackson Immunoresearch; West Grove, PA), và IgG chống dê lừa Alexa fluor 488 (Molecular Probes, Eugene, OR); tất cả các kháng thể thứ cấp được pha loãng ở tỷ lệ 1: 500.

Phân tích thống kê

Dữ liệu nhóm được trình bày dưới dạng trung bình ± sai số chuẩn của giá trị trung bình (SEM) trong văn bản, Bảng và Hình. Ý nghĩa được xác định là p ≤ 0.05. So sánh thống kê được thực hiện giữa các nhóm thử nghiệm, như được trình bày trong phần “Kết quả” bằng cách sử dụng 't'test của Học sinh chưa được ghép đôi (ví dụ: so sánh chế độ ăn, tuổi hoặc điều trị). 'Chuẩn hóa' dữ liệu được định nghĩa khi nó được sử dụng.

Hiệu quả của chế độ ăn nhiều chất béo vừa phải đối với động lực quanh tuổi dậy thì đối với sucrose

Chuột được cho ăn chế độ ăn chất béo 31.8% trong thời gian 5-8, trong khi trong các buổi tự quản, đã có một động lực tăng đáng kể cho sucrose, so với chuột ăn chow. Như thể hiện trong Hình 1a, không có sự khác biệt về hiệu suất trong quá trình đào tạo FR ban đầu (lần lượt sử dụng máy ép đòn bẩy hoạt động trung bình của FRDays 1-10, 38 ± 5 so với 39 ± 2 cho chế độ ăn kiêng so với 31.8% chất béo). Tuy nhiên, khi những con chuột được chuyển sang nhiệm vụ PR nghiêm ngặt hơn, đã có sự gia tăng đáng kể số lần nhấn đòn bẩy hoạt động và số lượng phần thưởng sucrose được thực hiện, nhưng không phải trong tổng thời lượng phiên (Hình 1b). Không có tác dụng của điều trị chế độ ăn kiêng mãn tính đối với số lần nhấn đòn bẩy không hoạt động. Khi chuột được cho ăn chế độ ăn nhiều chất béo trong thời gian 5-8 nhưng sau đó trở lại chế độ ăn chow được thực hiện thông qua đào tạo FR và PR trong nhiều tuần 9-12, có một xu hướng nhưng không có sự khác biệt đáng kể trong việc nhấn đòn bẩy hoạt động. Do đó, dường như không có hiệu ứng chuyển đổi hành vi của chế độ ăn kiêng chất béo cao vừa phải được tiêu thụ trong khung thời gian quanh năm. Dữ liệu tham số PR cho các đoàn hệ này được tóm tắt trong Bảng 2. Để bắt đầu làm sáng tỏ (các) cơ chế đóng góp cho sự gia tăng do chế độ ăn kiêng trong động lực sucrose, chúng tôi đã thực hiện một số phép đo chuyển hóa và CNS.

  

Hình 1

Phản ứng thúc đẩy PR cho phần thưởng sucrose được tăng lên ở những con chuột peripubertal được cho ăn chế độ ăn chất béo 31.8% (n = 8). 1a. Trong các phiên FR, không có tác dụng của chế độ ăn kiêng, nhưng hiệu quả của chế độ ăn kiêng được biểu hiện khi chuột được chuyển sang mô hình PR. 1b. Dữ liệu là ...

  

Bảng 2

Hiệu quả của chế độ ăn nhiều chất béo Peri-Pubertal đối với hiệu suất tăng dần cho Sucrose

Ảnh hưởng của chế độ ăn nhiều chất béo vừa phải đến các thông số trao đổi chất

Ngay sau khi kết thúc thử nghiệm hành vi, thành phần chất béo trong cơ thể đã được xác định trên những con chuột có sự can thiệp chế độ ăn uống và mô hình hành vi trong thời gian làm việc 5-8. Sau đó, chuột nhận được ống thông tĩnh mạch mạn tính cho các xét nghiệm dung nạp glucose IV (có ý thức) (IVGTTs). Sau đó, huyết tương và huyết thanh lúc đói được lấy cho các biện pháp trao đổi chất bổ sung. Như thể hiện trong Bảng 3, không có sự khác biệt về thành phần cơ thể, trọng lượng cơ thể, các biện pháp insulin hoặc glucose lúc đói, độ nhạy insulin (tính toán HOMA) hoặc phản ứng với IVGTT, giữa những con chuột được cho ăn nhiều chất béo và ăn nhiều chất béo. Các phép đo leptin và triglyceride lúc đói không khác nhau giữa hai nhóm. Do đó, mặc dù việc điều trị chế độ ăn uống có ảnh hưởng đáng kể đến động lực cho sucrose, nhưng nó phản ánh một phản ứng hành vi ở những con chuột ăn nhiều chất béo bị béo phì.

Hiệu quả của chế độ ăn nhiều chất béo vừa phải đối với CNS cân bằng nội môi và thưởng hóa thần kinh

Ngoài các phép đo trao đổi chất ở giai đoạn cuối, não của đoàn hệ có cả can thiệp chế độ ăn uống và rèn luyện hành vi trong nhiều tuần 5-8 đã được đo cho các cấu hình hạt nhân accumbens amin (n = 4 trên mỗi nhóm chế độ ăn kiêng) hoặc mức mRNA của peptide orexigenic. Như thể hiện trong Bảng 4, không có tác dụng đáng kể của chế độ ăn nhiều chất béo đối với các chất chuyển hóa dopamine, norepinephrine hoặc serotonin trong nhân accumbens, một trang web trung tâm của hoạt động khen thưởng và tạo động lực (Ikemoto & Panksepp, 1996; Kelley & Berridge, 2002) trong đó mỗi hệ thống dẫn truyền thần kinh này đóng một vai trò điều tiết chính. Trong các chất chiết xuất từ ​​vùng dưới đồi, mức mRNA của các peptit orexigenic, NPY, AGRP và orexin đã được đo. Một xu hướng mạnh mẽ nhưng không có ý nghĩa đối với việc tăng AGRP ở chuột ăn chất béo đã được quan sát thấy trong nhóm thuần tập này (n = 8 cho một trong hai chế độ ăn); do đó chúng tôi lặp lại mô hình đào tạo về chế độ ăn uống / hành vi trong một nhóm thuần tập bổ sung và đo NPY, AGRP, và mRNA orexin ở vùng dưới đồi. Trong các nhóm thuần tập kết hợp, chúng tôi đã quan sát thấy sự gia tăng đáng kể (p <0.05) mRNA AGRP ở những con chuột ăn chế độ ăn nhiều chất béo so với đối chứng chow (Hình 2), nhưng không có thay đổi đáng kể trong biểu hiện NPY hoặc orexin. Để đánh giá các kết nối có thể có giữa biểu hiện AGRP và hành vi tự quản lý, chúng tôi đã đo các tế bào thần kinh miễn dịch cFos và AGRP ở vùng dưới đồi trung thất. Các nhóm chuột được cho ăn chế độ ăn chow hoặc 31.8% chất béo; một số được thực hiện thông qua giao thức tự quản lý (tuần 5-8) và một số khác được xử lý như các điều khiển hành vi. Hình 3a cho thấy một ví dụ về đồng địa hóa của cFos và AGRP trong một tế bào thần kinh hạt nhân. Như được tóm tắt trong Bảng 5, kích hoạt tế bào thần kinh AGRP (đồng biểu hiện của cFos-ICC và AGRP-ICC trong cùng một tế bào) có liên quan đến hoạt động tự quản lý. Điều này được thể hiện trong Hình 3b, trong đó số lượng tế bào thần kinh được kích hoạt (cFos dương tính) được hiển thị dưới dạng số lượng tế bào thần kinh, hoặc là phần trăm của tổng số tế bào thần kinh dương tính với AGRP: có sự kích hoạt đáng kể các tế bào thần kinh AGRP trong chuột tự điều trị sucrose, so với kiểm soát xử lý , trong các nhóm chế độ ăn uống kết hợp. Một so sánh điều trị trong chế độ ăn kiêng cho số lượng tế bào thần kinh AGRP được kích hoạt trong nhóm tự quản lý so với kiểm soát xử lý cho thấy xu hướng không đạt được ý nghĩa thống kê (chow, p = .078; 31.8% chất béo, p = .073) . Điều quan trọng, không chỉ các dữ liệu này liên kết kích hoạt tế bào thần kinh AGRP với hành vi tự quản mà còn do thời gian đo cFos (90 phút sau khi chuột được đặt trong buồng tự quản), biểu hiện cFos phản ánh hoạt động của các tế bào thần kinh AGRP trong dự đoán, hoặc khi bắt đầu, hoạt động tự quản. Có một xu hướng không đáng kể để tăng tổng số tế bào thần kinh dương tính với AGRP trong nhóm tự quản (so với kiểm soát xử lý, p = 0.16). Ở những con chuột này, nơi mà việc nhấn đòn bẩy được kết hợp giữa các nhóm chế độ ăn uống, số lượng tế bào thần kinh dương tính với AGRP cũng được kết hợp. Không có tác dụng của việc điều trị chế độ ăn một mình đối với số lượng tế bào thần kinh dương tính với AGRP trong những con chuột kiểm soát hành vi.

  

Hình 2

Ảnh hưởng của chế độ ăn 31.8% chất béo đến sự biểu hiện mRNA peptide vùng dưới đồi trung gian. Dữ liệu được chuẩn hóa đối với chuột ăn nhiều chất béo (n = 17) so với đối chứng chow (n = 16). AGRP mRNA tăng cao đáng kể (p <0.05).

  

Hình 3

Kích hoạt tế bào thần kinh AGRP khi bắt đầu tự quản sucrose. 3a. Đồng địa hóa cFos và AGRP trong tế bào thần kinh hạt nhân, phóng đại 60x. 3b. Số lượng tế bào thần kinh miễn dịch AGRP được kích hoạt (cFos-immunopositive) ở vùng dưới đồi trung thất ...

  

Bảng 4

Chất chuyển hóa hạt nhân Accumbens Amine

  

Bảng 5

Kích hoạt Agrp Neuron: Chế độ ăn uống và điều trị hành vi

Ảnh hưởng của quản trị AGRP đến động lực sucrose

Giải thích của chúng tôi về phát hiện này là biểu hiện AGRP ở chuột tuổi dậy thì là một cơ chế chính dựa trên sự tự quản sucrose tăng cường của những con chuột ăn nhiều chất béo. Để xác nhận tính hiệu quả của AGRP để tăng động lực cho sucrose, AGRP đã được quản lý thông qua tâm thất thứ ba để nuôi chuột peri-pubertal được nuôi dưỡng trong phần PR của mô hình hành vi. Phác đồ liều AGRP này là ngưỡng phụ để kích thích lượng chow trong hai tuần của mô hình PR, nhưng dẫn đến việc tự điều trị sucrose tăng đáng kể, như thể hiện trong Hình 4. (Lưu ý rằng mỗi phần thưởng sucrose có hàm lượng calo của 0.1 kcal, do đó hoạt động tự quản sucrose đóng góp lượng calo không đáng kể vào tổng lượng tiêu thụ hàng ngày.) Bảng 6 hiển thị dữ liệu tham số tự quản lý trong mô hình PR ngày của 9, với AGRP hoặc aCSF được tiêm ICV vào các ngày 2, 5 và 8. Trong những con chuột được xử lý bằng AGRP, số lần nhấn đòn bẩy hoạt động đã tăng đáng kể trên tổng số ngày PR 2-10 (p = 0.03) và vào những ngày không tiêm (p = 0.048) với xu hướng tăng (trung bình) ngày tiêm. Ngoài ra, Thời gian dừng (phản ánh tổng thời gian thực hiện nhiệm vụ tự quản lý) đã tăng đáng kể vào những ngày không tiêm (p = 0.02) với xu hướng tăng tổng thể và vào những ngày tiêm. Số lượng phần thưởng sucrose đã tăng lên trong suốt PR ngày 2-10 (p = 0.03). Không có tác dụng của điều trị AGRP đối với việc nhấn đòn bẩy không hoạt động, so với các biện pháp kiểm soát được điều trị bằng aCSF, hoặc giữa các ngày tiêm và không tiêm. Các kết quả hỗ trợ cho việc giải thích hiệu quả bền vững của AGRP để tăng khả năng tự quản sucrose: chuột nhấn nhiều hơn vào đòn bẩy thưởng, nhận được nhiều phần thưởng sucrose hơn và dành nhiều thời gian hơn cho nhiệm vụ.

  

Hình 4

AGRP tâm thất thứ ba (ICV) (0.01 nmol) kích thích tự quản sucrose trong mô hình PR, nhưng không có tác dụng đối với lượng thức ăn hàng ngày trong suốt thời gian nghiên cứu (PR Days 2 XN 10, với việc tiêm vào các ngày 2, 5 và 8) . Dữ liệu AGRP (n = 9) được thể hiện ...

  

Bảng 6

Ảnh hưởng của ICV AGRP so với aCSF đối với hiệu suất tỷ lệ lũy tiến cho Sucrose

Ảnh hưởng của giai đoạn cuộc sống đến sở thích và động lực cho sucrose

Trong thí nghiệm cuối cùng, chúng tôi đã đánh giá liệu động lực cho sucrose có khác nhau giữa chuột trưởng thành và chuột trưởng thành hay không. Ban đầu, những con chuột già 5-và 10-wk đã được thử nghiệm ưu tiên sucrose với các lựa chọn giải pháp từ 0 đến 20% sucrose, trước khi bắt đầu thử nghiệm và huấn luyện tự quản lý. Như thể hiện trong Hình 5avà phù hợp với những phát hiện được báo cáo trong tài liệu, những con chuột trước tuổi dậy thì dường như thích một giải pháp ngọt ngào hơn so với những con chuột trưởng thành trẻ tuổi: hầu hết những con chuột trước tuổi dậy thì đều có lượng dung dịch 20% sucrose cao nhất, trong khi những con chuột trưởng thành cho thấy mức tiêu thụ cao nhất của 15% sucrose. Sau đó, cả hai nhóm tuổi được phân chia giữa chuột chow và chế độ ăn nhiều chất béo trong quá trình đào tạo và kiểm tra tự quản lý. Có một sự gia tăng nhỏ nhưng có ý nghĩa thống kê về số lần nhấn đòn bẩy hoạt động của peri-pubertal so với chuột trưởng thành (45 ± 3 so với 37 ± 2, p = 0.05) trung bình trong các phiên FR, không có sự khác biệt về số lượng phần thưởng sucrose hoặc số lần nhấn vào đòn bẩy không hoạt động. Như thể hiện trong Hình 5b, có một tác động tổng thể đáng kể về tuổi tác, qua các phiên PR, với việc tăng cường đòn bẩy hoạt động đáng kể cho chuột pubertal (n = 15) so với người trưởng thành trẻ tuổi (n = 14) (2-way ANOVA, PRDay × age; ảnh hưởng của tuổi tác, p = 0.017, không có tác dụng độc lập của PRDay, không có tương tác đáng kể). Tthere là một xu hướng ảnh hưởng lớn hơn của tuổi tác trong điều kiện ăn nhiều chất béo nhưng điều này không đạt được ý nghĩa thống kê (p = .13). Bảng 7 liệt kê các thông số hành vi PR: ngoài việc nhấn đòn bẩy hoạt động, chuột peri-pubertal nhận được phần thưởng sucrose đáng kể hơn và cho thấy xu hướng tăng thời gian dừng. Ngoài ra, chuột peri-pubertal có số lần nhấn nhỏ nhưng đáng kể trên đòn bẩy không hoạt động (nghĩa là không bổ ích), mặc dù đối với cả chuột peri-pubertal và trưởng thành, số lần nhấn đòn bẩy không hoạt động là khoảng 10% của máy ép đòn bẩy hoạt động. Những kết quả này cho thấy chuột peri-pubertal thích và sẽ say mê tìm kiếm các loại thực phẩm có vị ngọt hơn, và hiệu quả có thể được khuếch đại với nền tảng của chế độ ăn nhiều chất béo.

  

Hình 5

Chuột vị thành niên đã tăng động lực cho phần thưởng sucrose so với chuột trưởng thành. 5a. Các thử nghiệm ưu tiên Sucrose đối với chuột con (peri-pubertal, n = 15) và chuột trưởng thành (n = 14). Chuột đã uống 30 tối thiểu trong phạm vi nồng độ (0-20% sucrose). ...

  

Bảng 7

Ảnh hưởng của tuổi tác đến hiệu suất tỷ lệ lũy tiến^a cho Sucrose

Nghiên cứu này được hỗ trợ bởi NIH cấp DK40963. Dianne Figlewicz Lattemann là một nhà khoa học nghiên cứu nghề nghiệp cao cấp, Chương trình nghiên cứu phòng thí nghiệm y sinh, Bộ Cựu chiến binh Hệ thống chăm sóc sức khỏe Puget Sound, Seattle, Washington. Stephen Benoit được hỗ trợ bởi NIH DK066223 và Ethicon Endosurgery Inc. Các tác giả cảm ơn Tiến sĩ Tami Wolden-Hanson đã hỗ trợ cho các phép đo thành phần cơ thể; Tiến sĩ William Banks và Lucy Dillman đã hỗ trợ đo các chất béo trung tính; và Amalie Alver, và Samantha Thomas-Nadler để được hỗ trợ nghiên cứu hành vi.

• Andersen SL, Te Rich MH. Căng thẳng, giai đoạn nhạy cảm và các sự kiện trưởng thành trong trầm cảm vị thành niên. Xu hướng trong khoa học thần kinh. 2008; 31: 183 tầm 191. [PubMed]
• Aponte Y, Atasoy D, Sternson SM. Tế bào thần kinh AGRP đủ để điều phối hành vi cho ăn nhanh chóng và không cần đào tạo. Khoa học thần kinh tự nhiên. 2011; 14: 351 tầm 355. [Bài viết miễn phí của PMC] [PubMed]
• Barnes MJ, Argyropoulos G, Bray GA. Ưu tiên cho chế độ ăn nhiều chất béo, nhưng không tăng sản sau khi kích hoạt thụ thể mu opioid bị chặn ở chuột bị loại trừ AgRP. Nghiên cứu não. 2010; 1317: 100 tầm 107. [Bài viết miễn phí của PMC] [PubMed]
• Bolaños CA, Barrot M, Berton O, Wallace-Black D, Nestler EJ. Điều trị bằng Methylphenidate trong giai đoạn tiền và tiền mãn kinh làm thay đổi phản ứng hành vi đối với các kích thích cảm xúc ở tuổi trưởng thành. Tâm sinh học. 2003; 54: 1317 tầm 1329. [PubMed]
• Bolaños CA, Glatt SJ, Jackson D. Sự nhạy cảm với thuốc dopaminergic ở chuột periadolescent: một phân tích hành vi và hóa học thần kinh. Nghiên cứu não phát triển nghiên cứu não. 1998; 111: 25 tầm 33. [PubMed]
• Brandon CL, Marinelli M, Baker LK, FJ trắng. Tăng cường khả năng phản ứng và tính dễ bị tổn thương với cocaine sau khi điều trị bằng methylphenidate ở chuột vị thành niên. Thần kinh thực vật. 2001; 25: 651 tầm 61. [PubMed]
• Brandon CL, Marinelli M, FJ trắng. Tiếp xúc với thanh thiếu niên với methylphenidate làm thay đổi hoạt động của các tế bào thần kinh dopamine midbrain chuột. Tâm sinh học. 2003; 54: 1338 tầm 1344. [PubMed]
• Broberger C, Johansen J, Johansson C, Schalling M, Hokfelt T. Mạch não protein liên quan đến gen Y / agouti (AGRP) ở chuột được điều trị bình thường, anorectic và monosodium. Kỷ yếu của Viện Hàn lâm Khoa học Quốc gia. 1998; 95: 15043 tầm 15048. [Bài viết miễn phí của PMC] [PubMed]
• Cason AM, Smith RJ, Tahsili-Fahadan P, Moorman DE, Sartor GC, Aston-Jones G. Vai trò của orexin / hypocretin trong việc tìm kiếm phần thưởng và nghiện: tác động của bệnh béo phì. Sinh lý học & Hành vi. 2010; 100: 419–428. [Bài viết miễn phí của PMC] [PubMed]
• Choi DL, Davis JF, Fitzgerald ME, Benoit SC. Vai trò của orexin-A trong động lực thực phẩm, hành vi cho ăn dựa trên phần thưởng và kích hoạt tế bào thần kinh do thức ăn gây ra ở chuột. Khoa học thần kinh. 2010; 167: 11 tầm 20. [PubMed]
• Cizz G, RJ màu nâu, Rovers KI. Tỷ lệ mắc tăng và thách thức của bệnh tiểu đường thời thơ ấu. Một đánh giá nhỏ. Tạp chí điều tra nội tiết. EpubX epub có thể 2012, 8. [Bài viết miễn phí của PMC] [PubMed]
• Coldwell SE, Oswald TK, Reed DR. Dấu hiệu tăng trưởng khác nhau giữa thanh thiếu niên có sở thích ăn đường cao và ít đường. Sinh lý học & Hành vi. 2009; 96: 574–580. [Bài viết miễn phí của PMC] [PubMed]
• Davis JF, Choi DL, Benoit SC. Insulin, leptin và phần thưởng. Xu hướng về Nội tiết và Chuyển hóa. 2010; 21: 68 tầm 74. [Bài viết miễn phí của PMC] [PubMed]
• Davis JF, Choi DL, Schurdak JD, Fitzgerald MF, DJ Clegg, Lipton JW, Figlewicz DP, Benoit SC. Leptin điều chỉnh cân bằng năng lượng và động lực thông qua hành động tại các mạch thần kinh riêng biệt. Tâm sinh học. 2011a; 69: 668 tầm 674. [Bài viết miễn phí của PMC] [PubMed]
• Davis JF, Choi DL, Schurdak JD, Krause EG, Fitzgerald MF, Lipton JW, Sakai RR, Benoit SC. Các melanocortins trung tâm điều chỉnh hoạt động mesocorticolimbic và hành vi tìm kiếm thức ăn ở chuột. Sinh lý học & Hành vi. 2011b; 102: 491–495. [Bài viết miễn phí của PMC] [PubMed]
• Davis JF, Tracy AL, Schurdak JD, Tschop MH, Clegg DJ, Benoit SC, Lipton JW. Phơi nhiễm với mức độ cao của chất béo chế độ ăn uống làm suy giảm phần thưởng tâm thần và doanh thu dopamine mesolimbic ở chuột. Khoa học thần kinh hành vi. 2008; 122: 1257 tầm 1263. [Bài viết miễn phí của PMC] [PubMed]
• Desor JA, Beauchamp GK. Những thay đổi theo chiều dọc về sở thích ăn ngọt ở người. Sinh lý học & Hành vi. Năm 1987; 39: 639–641. [PubMed]
• Desor JA, Greene LS, Maller O. Sở thích về vị ngọt và mặn trong 9- đến 15 - người già và người trưởng thành. Khoa học. 1975; 190: 686 tầm 687. [PubMed]
• Drewnowski A. Mật độ năng lượng, độ ngon miệng và cảm giác no: hàm ý kiểm soát cân nặng. Nhận xét dinh dưỡng. 1998; 56: 347 tầm 353. [PubMed]
• Figlewicz DP, Bennett JL, Aliakbari S, Zavosh A, Sipols AJ. Insulin hoạt động tại các vị trí CNS khác nhau để giảm việc cho ăn sucrose cấp tính và tự quản sucrose ở chuột. Tạp chí Sinh lý học Hoa Kỳ. 2008; 295: R388THER R394. [Bài viết miễn phí của PMC] [PubMed]
• Figlewicz DP, Bennett JL, Naleid AM, Davis C, Grimm JW. Insulin nội thất và leptin làm giảm sự tự sử dụng đường sucrose ở chuột. Sinh lý học & Hành vi. 2006; 89: 611–616. [PubMed]
• Figlewicz DP, Bennett-Jay JL, Kittleson S, Sipols AJ, Zavosh A. Sucrose tự quản lý và kích hoạt CNS ở chuột. Là J Physiol. 2011; 300: R876THER R884. [Bài viết miễn phí của PMC] [PubMed]
• Figlewicz DP, Ioannou G, Bennett Jay J, Kittleson S, Savard C, Roth CL. Ảnh hưởng của lượng chất ngọt vừa phải đến sức khỏe trao đổi chất ở chuột. Sinh lý học & Hành vi. 2009; 98: 618–624. [Bài viết miễn phí của PMC] [PubMed]
• Figlewicz DP, Sipols AJ. Năng lượng điều chỉnh tín hiệu và thưởng thực phẩm. Dược lý, hóa sinh và hành vi. 2010; 97: 15 tầm 24. [Bài viết miễn phí của PMC] [PubMed]
• Frangioudakis G, Gyte AC, Loxham SJ, Túi SM. Thử nghiệm dung nạp glucose tiêm tĩnh mạch ở chuột Wistar đóng hộp: Một phương pháp mạnh mẽ để đánh giá in vivo về bài tiết insulin được kích thích bằng glucose. Tạp chí Phương pháp dược lý và độc tính. 2008; 57: 106 tầm 113. [PubMed]
• Hagan MM, PA vội vã, Pritchard LM, Schwartz MW, Strack AM, Van Der Ploeg LHT, Woods SC, Seeley RJ. Tác dụng orexigenic dài hạn của AgRP- (83-132) liên quan đến các cơ chế khác ngoài phong tỏa thụ thể melanocortin. Tạp chí Sinh lý học Hoa Kỳ. 2000; 279: R47THER R52. [PubMed]
• Hahn TM, Breininger JF, Baskin DG, Schwartz MW. Sự cùng tồn tại của Agrp và NPY trong các tế bào thần kinh vùng dưới đồi được kích hoạt lúc đói. Khoa học thần kinh tự nhiên. 1998; 1: 271 tầm 272. [PubMed]
• Hodos W. Tỷ lệ lũy tiến như một thước đo sức mạnh khen thưởng. Khoa học. 1961; 134: 943 tầm 944. [PubMed]
• Ikemoto S, Panksepp J. Phân biệt giữa phản ứng thèm ăn và tiêu dùng bằng các thao tác dược lý của các vùng não liên quan đến phần thưởng. Khoa học thần kinh hành vi. 1996; 110: 331 tầm 345. [PubMed]
• Jewett DC, Cleary J, Levine AS, Schaal DW, Thompson T. Ảnh hưởng của neuropeptide Y, insulin, 2-deoxyglucose và thiếu hụt thức ăn đối với hành vi thúc đẩy thực phẩm. Tâm sinh lý. 1995; 120: 267 tầm 271. [PubMed]
• Kaushik S, Rodriguez-Navarro JA, Arias E, Kiffin R, Sahu S, Schwartz GJ, Cuervo AM, Singh R. Autophagy trong tế bào thần kinh AgRP vùng dưới đồi điều chỉnh lượng thức ăn và cân bằng năng lượng. Trao đổi chất tế bào. 2011; 14: 173 tầm 183. [Bài viết miễn phí của PMC] [PubMed]
• Kelley AE, Berridge KC. Khoa học thần kinh của phần thưởng tự nhiên: liên quan đến thuốc gây nghiện. Tạp chí khoa học thần kinh. 2002; 22: 3306 tầm 3311. [PubMed]
• Kelley SP, Nannini MA, Bratt AM, Hodge CW. Neuropeptide-Y trong nhân paraventricular làm tăng sự tự quản ethanol. Peptide. 2001; 22: 515 tầm 522. [Bài viết miễn phí của PMC] [PubMed]
• Kohli R, Boyd T, Hồ K, Dietrich K, Nicholas L, Balistreri WF, Ebach D, Shashidkar H, Xanthakos SA. Tiến triển nhanh chóng của NASH trong thời thơ ấu. Tạp chí Nhi khoa Tiêu hóa và Dinh dưỡng. 2010; 50: 453 tầm 456. [Bài viết miễn phí của PMC] [PubMed]
• Krash MJ, Koda S, Ye CP, Rogan SC, Adams AC, Caser DS, Maratos-Flier E, Roth BL, Lowell BB. Kích hoạt nhanh chóng các tế bào thần kinh AgRP thúc đẩy hành vi cho ăn ở chuột. Tạp chí điều tra lâm sàng. 2011; 121: 1424 tầm 1428. [Bài viết miễn phí của PMC] [PubMed]
• Mennella JA, Pepino MY, Sậy DR. Yếu tố quyết định di truyền và môi trường của nhận thức cay đắng và sở thích ngọt ngào. Khoa nhi. 2005; 115: 216 tầm 222. [Bài viết miễn phí của PMC] [PubMed]
• Myers KP, Sclafani A. Phát triển sở thích hương vị đã học. Tâm lý học phát triển. 2006; 48: 380 tầm 388. [PubMed]
• Chương trình nghiên cứu ứng dụng của Viện Ung thư Quốc gia. Nguồn calo từ đường bổ sung trong Dân số Hoa Kỳ, 2005-06. Cập nhật 21 tháng 12 2010. [Truy cập 21 tháng 9 2011]; 2010 Có sẵn từ: http://riskfactor.cancer.gov/diet/foodsources/added_sugars/
• Nixon JP, Zhang M, Wang CF, Kuskowski MA, Novak CM, Levine JA, Billington CJ, Kotz CM. Đánh giá một hệ thống hình ảnh cộng hưởng từ định lượng để phân tích thành phần toàn bộ cơ thể ở loài gặm nhấm. Béo phì. 2010; 18: 1652 tầm 1659. [Bài viết miễn phí của PMC] [PubMed]
• Ogden CL, Carroll MD. Phòng Khảo sát kiểm tra sức khỏe và dinh dưỡng. Tỷ lệ béo phì ở trẻ em và thanh thiếu niên: Hoa Kỳ, xu hướng 1963-1965 thông qua 2007-2008. [Truy cập 21 tháng 9 2011]; Chỉ số sức khỏe. 2010 2010 Có sẵn từ: http://www.cdc.gov/nchs/fastats/overwt.htm.
• Paxinos G, Watson C. Atlas của não chuột trong tọa độ lập thể. 5th. San Diego CA: Nhà xuất bản học thuật Elsevier; KHAI THÁC.
• Khu bảo tồn thiên nhiên, Roberts DC. Lịch trình tỷ lệ tiến bộ trong nghiên cứu tự quản lý thuốc ở chuột: một phương pháp để đánh giá hiệu quả củng cố. Tạp chí Phương pháp thần kinh học. 1996; 66: 1 tầm 11. [PubMed]
• Roitman MF, Stuber GD, Phillips PE, Wightman RM, Carelli RM. Dopamine hoạt động như một bộ điều biến thứ hai của tìm kiếm thực phẩm. Tạp chí khoa học thần kinh. 2004; 24: 1265 tầm 1271. [PubMed]
• Rossi M, Kim M, Morgan D, Small C, Edwards C, Sunter D, Abusnana S, Goldstone A, Russell S, Stanley S, Smith D, Yagaloff K, Ghatei M, Bloom S. Một đoạn C của Agouti- protein liên quan làm tăng việc cho ăn và đối kháng với tác dụng của hormone kích thích alpha-melanocyte in vivo. Nội tiết. 1998; 139: 4428 tầm 4431. [PubMed]
• Stanhope KL. Vai trò của đường có chứa fructose trong dịch bệnh béo phì và hội chứng chuyển hóa. Nhận xét hàng năm của Y học. 2012; 63: 329 tầm 343. [PubMed]
• Sturman DA, Mandell DR, Moghaddam B. Thanh thiếu niên thể hiện sự khác biệt về hành vi so với người trưởng thành trong quá trình học tập và tuyệt chủng. Khoa học thần kinh hành vi. 2010; 124: 16 tầm 25. [Bài viết miễn phí của PMC] [PubMed]
• Tracy AL, DJ Clegg, Johnson JD, Davidson TL, Woods SC. Chất đối kháng melanocortin AgRP (83-132) làm tăng phản ứng thèm ăn đối với chất béo, nhưng không phải là chất tăng cường carbohydrate. Dược lý hóa sinh, và hành vi. 2008; 89: 263 tầm 271. [Bài viết miễn phí của PMC] [PubMed]
• Vartanian LR, Schwartz MB, Brownell KD. Ảnh hưởng của tiêu thụ nước ngọt đến dinh dưỡng và sức khỏe: đánh giá có hệ thống và phân tích tổng hợp. Tạp chí Sức khỏe Cộng đồng Hoa Kỳ. 2007; 97: 667 tầm 75. [Bài viết miễn phí của PMC] [PubMed]