ΣΧΟΛΙΑ: πρώιμο πείραμα που αποδεικνύει ότι η ντοπαμίνη επηρεάζει τα επίπεδα του DeltaFosb.
Eur J Neurosci. 1996 Φεβρουάριος 8 (2): 365-81.
Doucet JP, Nakabeppu Υ, Bedard PJ, Ελπίδα ΒΤ, Nestler EJ, Jasmin BJ, Chen JS, Iadarola MJ, St-Jean Μ, Wigle Ν, Blanchet Ρ, Grondin R, Robertson GS.
Πηγή
Τμήμα Φαρμακολογίας, Πανεπιστήμιο Οτάβα, Οττάβα, Οντάριο, Καναδάς K1H 8M5.
Περίληψη
Χρησιμοποιώντας ένα αντίσωμα που αναγνωρίζει τα προϊόντα όλων των γνωστών μελών της οικογένειας fos των άμεσων πρώιμων γονιδίων, αποδείχθηκε ότι η καταστροφή της οδοντογναθικής οδού από βλάβες 6-υδροξυδοπαμίνης (6-OHDA) της δέσμης του μεσαίου προσθίου εγκεφάλου παράγει μια παρατεταμένη (> 3 μήνες) αύξηση της ανοσοαντιδραστικότητας τύπου Fos στο ραβδωτό σώμα. Χρησιμοποιώντας τεχνικές ανίχνευσης οπισθοδρόμησης, έχουμε δείξει στο παρελθόν ότι αυτή η αύξηση της ανοσοαντιδραστικότητας τύπου Fos εντοπίζεται κυρίως στους ραβδωτούς νευρώνες που προεξέχουν στον σφαιρικό παλλόδο. Στην παρούσα μελέτη, οι κηλίδες Western πραγματοποιήθηκαν σε πυρηνικά εκχυλίσματα από το άθικτο και παραγοντοποιημένο ραβδωτό σώμα αρουραίων με 6-ΟΗϋΑ που είχαν υποστεί βλάβη για να προσδιοριστεί η φύση των ανοσοαντιδραστικών πρωτεϊνών Fos που είναι υπεύθυνες για αυτήν την αύξηση. Περίπου 6 εβδομάδες μετά τη βλάβη 6-OHDA, η έκφραση δύο αντιγόνων που σχετίζονται με Fos με φαινόμενες μοριακές μάζες 43 και 45 kDa ενισχύθηκε στο απογεννημένο ραβδωτό σώμα. Η χρόνια χορήγηση αλοπεριδόλης επίσης αύξησε επιλεκτικά την έκφραση αυτών των αντιγόνων που σχετίζονται με Fos, υποδηλώνοντας ότι η επαγωγή τους μετά από ντοπαμινεργική απονέωση προκαλείται από μειωμένη ενεργοποίηση υποδοχέων ντοπαμίνης τύπου D2.
Η ανοσοχρωματοποίηση Western blot χρησιμοποιώντας ένα αντίσωμα το οποίο αναγνωρίζει το Ν-άκρο του FosB έδειξε ότι τα αντιγόνα 43 και 45 kDa Fos που προκαλούνται από ντοπαμινεργική απονεύρωση και χρόνια χορήγηση αλοπεριδόλης μπορεί να σχετίζονται με μια κολοβωμένη μορφή FosB γνωστή ως deltaFosB. Σύμφωνα με αυτή την πρόταση, τα πειράματα ανάδρομης ανίχνευσης επιβεβαίωσαν ότι η ανοσοαντιδραστικότητα τύπου deltaFosB στο αποδιαφορημένο ραβδωτό σώμα εντοπίστηκε κυρίως σε striatopallidal νευρώνες.
Τα πειράματα μετατόπισης του πηκτώματος έδειξαν ότι η αυξημένη δραστικότητα πρόσδεσης AP-1 σε αποστειρωμένα ραβδωτά περιείχαν πρωτεΐνες που μοιάζουν με FosB, γεγονός που υποδηλώνει ότι τα αυξημένα επίπεδα του deltaFosB μπορεί να προκαλέσουν μερικές από τις επιπτώσεις της παρατεταμένης εξάντλησης της ντοπαμίνης στα γονίδια που ρυθμίζονται με AP-1 σε νευρώνες striatopallide. Αντίθετα, η χρόνια χορήγηση του αγωνιστή CY1 του τύπου D208243 σε αρουραίους που είχαν υποστεί βλάβη με 6-OHDA δραματικά ενίσχυσε την ανοσοαντιδραστικότητα τύπου deltaFosB σε νευρώνες ραβδωτού σώματος που προεξέχουν στο substantia nigra. Η ανοσοχρώση με κηλίδωση Western αποκάλυψε ότι το deltaFosB και, σε μικρότερο βαθμό, το FosB ανυψώνονται με χρόνια χορήγηση αγωνιστή τύπου D1. Τόσο η ποσοτική αλυσιδωτή αντίδραση ανάστροφης τρανσκριπτάσης-πολυμεράσης όσο και η δοκιμασία προστασίας ριβονουκλεάσης έδειξαν ότι τα επίπεδα mRNA του deltafosB ενισχύθηκαν ουσιαστικά στο νευρικό ραβδωτό σώμα με χρόνια χορήγηση αγωνιστή τύπου D1.
Τέλος, εξετάσαμε τις επιδράσεις της χρόνιας χορήγησης αγωνιστών υποδοχέων ντοπαμίνης τύπου D1 και D2 στην έκφραση δελτα-FosB στο ραβδωτό σώμα στο πρωτεύον μοντέλο 1-μεθυλ-4-φαινυλ-1,2,3,6-τετραϋδροπυριδίνης (MPTP) της νόσου του Πάρκινσον. Σε πιθήκους που εμφάνισαν Παρκινσονική διαταραχή από MPTP, παρατηρήθηκε μια μέτρια αύξηση στην πρωτεΐνη(-ες) τύπου δελτα-FosB, ενώ η ανάπτυξη δυσκινησίας που προκλήθηκε από χρόνια χορήγηση αγωνιστή τύπου D1 συνοδεύτηκε από μεγάλες αυξήσεις στην πρωτεΐνη(-ες) τύπου Δελτα-FosB. Αντίθετα, η χορήγηση του αγωνιστή τύπου Δ2 μακράς δράσης καβεργολίνης, η οποία ανακούφισε τα συμπτώματα της Παρκινσονίας χωρίς να προκαλέσει δυσκινησία, μείωσε τα επίπεδα δελτα-FosB σε σχεδόν φυσιολογικά επίπεδα. Συνολικά , αυτά τα αποτελέσματα καταδεικνύουν ότι οι χρόνιες αλλοιώσεις στη ντοπαμινεργική νευροδιαβίβαση προκαλούν μια επίμονη αύξηση της πρωτεΐνης(-ων) τύπου δελτα-FosB τόσο στο ραβδωτό σώμα των τρωκτικών όσο και των πρωτευόντων.