Ο σχηματισμός δενδριτικής σπονδυλικής στήλης που επάγεται από κοκαΐνη σε D1 και D2 περιέχοντες υποδοχέα ντοπαμίνης νευρώνες του μέσου νεύρου στον πυρήνα accumbens (2006)

Proc Natl Acad Sci US Α. Feb 28, 2006; 103 (9): 3399-3404.
Δημοσιεύθηκε online Feb 21, 2006. doi:  10.1073 / pnas.0511244103
PMCID: PMC1413917
Νευροεπιστήμες
Αυτό το άρθρο ήταν την οποία ανέφερε άλλα άρθρα στο PMC.

Περίληψη

Η επαγόμενη από την ψυχοδιεγερτική τροποποίηση των δενδριτικών σπονδύλων στους ντοπαμινεργικούς νευρώνες στον πυρήνα accumbens (NAcc) έχει υποτεθεί ως προσαρμοστική νευρωνική απόκριση που συνδέεται με μακροχρόνιες συμπεριφορές εθισμού. Το NAcc αποτελείται κατά κύριο λόγο από δύο διαφορετικούς υποπληθυσμούς ακανόνιστων νευρώνων μεσαίου μεγέθους που εκφράζουν υψηλά επίπεδα είτε υποδοχέων ντοπαμίνης D1 είτε D2. Στην παρούσα μελέτη, αναλύσαμε την πυκνότητα της δενδριτικής σπονδυλικής στήλης μετά από χρόνια θεραπεία με κοκαΐνη σε ξεχωριστούς ακανθώδεις νευρώνες που περιείχαν D1 ή D2 υποδοχείς σε NAcc. Αυτές οι μελέτες έκαναν χρήση διαγονιδιακών ποντικών που εξέφραζαν EGFP υπό τον έλεγχο είτε του υποκινητή υποδοχέα D1 είτε D2 (Drd1-EGFP ή Drd2-EGFP). Μετά τις 28 ημέρες της θεραπείας με κοκαΐνη και τις ημέρες απόσυρσης 2, η πυκνότητα της σπονδυλικής στήλης αυξήθηκε τόσο σε νευρώνες θετικούς σε Drd1-EGFP- όσο και σε Drd2-EGFP θετικούς. Ωστόσο, η αύξηση της πυκνότητας της σπονδυλικής στήλης διατηρήθηκε μόνο σε Drd1-EGFP θετικούς νευρώνες 30 ημέρες μετά την απομάκρυνση του φαρμάκου. Ειδικότερα, παρατηρήθηκε αυξημένη έκφραση ΔFosB σε νευρώνες θετικών Drd1-EGFP- και Drd2-EGFP μετά τις ημέρες 2 απόσυρσης φαρμάκου, αλλά μόνο σε θετικούς με Drd1-EGFP νευρώνες μετά από 30 ημέρες απόσυρσης φαρμάκου. Αυτά τα αποτελέσματα υποδεικνύουν ότι η αυξημένη πυκνότητα της σπονδυλικής στήλης που παρατηρείται μετά από χρόνια θεραπεία με κοκαΐνη είναι σταθερή μόνο σε νευρώνες που περιέχουν υποδοχέα D1 και ότι η έκφραση ΔFosB συνδέεται με το σχηματισμό και / ή τη διατήρηση των δενδριτικών σπονδύλων στο D1 καθώς και τους νευρώνες που περιέχουν υποδοχέα D2 σε NAcc.

Η μεσομεταιχμιακή ντοπαμινεργική οδός αποτελείται από νευρώνες στην κοιλιακή καλυπτρική περιοχή που νευρώνουν τον επικλινή πυρήνα (NAcc), τον οσφρητικό φυματίο, τον προμετωπιαίο φλοιό και την αμυγδαλή ( 1 ), ενώ οι μελανοραβδωτοί ντοπαμινεργικοί νευρώνες στη μέλαινα ουσία (pars compacta) παρέχουν μια ανιούσα προβολή στο ραχιαίο ραβδωτό σώμα ( 2 ). Τα ψυχοδιεγερτικά αυξάνουν τις συναπτικές συγκεντρώσεις ντοπαμίνης στο NAcc: η κοκαΐνη, εμποδίζοντας την πρόσληψη ντοπαμίνης από τη συναπτική σχισμή, και η αμφεταμίνη, προωθώντας την απελευθέρωση ντοπαμίνης από τα νευρικά άκρα ( 3-5 ) . Η επαναλαμβανόμενη, διαλείπουσα χορήγηση ψυχοδιεγερτικών έχει ως αποτέλεσμα αυξημένες συμπεριφορικές αντιδράσεις (ευαισθητοποίηση) στις οξείες διεγερτικές επιδράσεις αυτών των φαρμάκων ( 6-8 ). Τα περισσότερα στοιχεία υποδηλώνουν ότι οι προσαρμοστικές αλλαγές στο κοιλιακό καλυπτρικό σύστημα-NAcc ντοπαμινεργικό σύστημα είναι κεντρικές για τις αλλοιώσεις στην εξαρτώμενη από την εμπειρία πλαστικότητα που αποτελεί τη βάση της συμπεριφοράς που προκαλείται από τα φάρμακα.

Εκτός από την ντοπαμίνη, το γλουταμινικό οξύ είναι απαραίτητο για την ανάπτυξη της συμπεριφορικής ευαισθητοποίησης σε απόκριση σε ψυχοδιεγερτικά ( 9 , 10 ). Οι μεσαίου μεγέθους ακανθώδεις νευρώνες (MSNs) στο κοιλιακό ραβδωτό σώμα λαμβάνουν διεγερτικές γλουταμινεργικές προεξοχές από τον προμετωπιαίο φλοιό που συνάπτονται στις κεφαλές των δενδριτικών άκανθων. Τα MSNs αποτελούν επίσης τον κύριο στόχο για τους ντοπαμινεργικούς άξονες που συνάπτονται στους αυχένες της σπονδυλικής στήλης ( 1 , 11 , 12 ). Επομένως, οι δενδριτικές άκανθες στα MSNs αντιπροσωπεύουν το κυτταρικό διαμέρισμα όπου αρχικά ενσωματώνονται η ντοπαμινεργική και η γλουταμινεργική μετάδοση.

Η ντοπαμίνη δρα σε δύο κύριες υποοικογένειες υποδοχέων, την υποοικογένεια D1 (υποτύποι D1 και D5) και την υποοικογένεια D2 (υποτύποι D2, D3 και D4) ( 13 ). Στο ραχιαίο ραβδωτό σώμα, ανατομικές μελέτες έχουν δείξει ότι τα ραβδονευρικά MSN περιέχουν υψηλά επίπεδα υποδοχέων D1 (μαζί με την ουσία P και τη δυνορφίνη), ενώ τα ραβδονευρικά παλλιδικά MSN εκφράζουν κυρίως υποδοχείς D2 (μαζί με εγκεφαλίνη) ( 14-17 ). Οι προεξοχές από το NAcc είναι πιο σύνθετες από ό,τι στο ραχιαίο ραβδωτό σώμα, με τα τμήματα του κελύφους και του πυρήνα του NAcc να προεξέχουν σε διακριτές υποπεριοχές του κοιλιακού ωχρού οστού και στην κοιλιακή καλυπτρική περιοχή και την μέλαινα ουσία ( 18 ). Ενώ οι υποδοχείς D2 και η εγκεφαλίνη εκφράζονται σε μεγάλο βαθμό σε προεξοχές προς το κοιλιακό ωχρό οστό, οι υποδοχείς D1 και η ουσία P βρίσκονται εξίσου κατανεμημένες σε προεξοχές προς το κοιλιακό ωχρό οστό και την κοιλιακή καλυπτρική περιοχή ( 19 ). Μελέτες αγωνιστών και ανταγωνιστών επιλεκτικών για τους υποδοχείς D1 ή D2 έδειξαν ότι τόσο οι υποδοχείς D1 όσο και οι υποδοχείς D2 είναι απαραίτητοι για τις εξαρτώμενες από ψυχοδιεγερτικά αλλαγές συμπεριφοράς ( 20-25 ) . Ωστόσο, οι ρόλοι αυτών των υποδοχέων φαίνεται να είναι διαφορετικοί. Για παράδειγμα, η διέγερση των υποδοχέων D1 εξασθενεί την αναζήτηση κοκαΐνης που προκαλείται από ενέσεις κοκαΐνης και περιβαλλοντικά ερεθίσματα που σχετίζονται με την κοκαΐνη, ενώ η διέγερση των υποδοχέων D2 διευκολύνει την επαγόμενη από την κοκαΐνη αποκατάσταση ( 26-28 ).

Οι συμπεριφορικές ανωμαλίες που σχετίζονται με τον εθισμό σε ψυχοδιεγερτικά είναι εξαιρετικά μακροχρόνιες. Ως εκ τούτου, υπάρχει σημαντικό ενδιαφέρον για τον εντοπισμό μακροχρόνιων αλλαγών που προκαλούνται από φάρμακα σε μοριακό και δομικό επίπεδο σε νευρωνικά κυκλώματα που ρυθμίζονται από την ντοπαμίνη και το γλουταμινικό ( 29-32 ) . Αξιοσημείωτο είναι ότι η μακροχρόνια έκθεση σε κοκαΐνη ή αμφεταμίνη έχει βρεθεί ότι αυξάνει τον αριθμό των δενδριτικών σημείων διακλάδωσης και των ακίδων των MSN στο NAcc ( 33-35 ). Αυτές οι δομικές αλλαγές έχουν αποδειχθεί ότι επιμένουν για έως και ≈1-3.5 μήνες μετά την τελευταία έκθεση σε φάρμακο ( 30 , 35 ) και έχει προταθεί ότι αποτελούν τη βάση μακροχρόνιων αλλοιώσεων στην συναπτική πλαστικότητα που σχετίζονται με την έκθεση σε ψυχοδιεγερτικά.

Στόχος της παρούσας μελέτης ήταν να εξεταστούν οι δομικές αλλοιώσεις των δενδριτικών ακανθών που προκαλούνται από την κοκαΐνη σε υποπληθυσμούς συσσωρευμένων MSN που εκφράζουν είτε υποδοχείς D1 είτε D2. Σε αυτές τις μελέτες, χρησιμοποιήσαμε διαγονιδιακά ποντίκια με βακτηριακό τεχνητό χρωμόσωμα (BAC) που εκφράζουν EGFP υπό τον έλεγχο είτε του υποκινητή υποδοχέα ντοπαμίνης D1 (Drd1-EGFP) είτε του D2 (Drd2-EGFP) ( 36 ). Τα αποτελέσματα δείχνουν ότι, αν και η αυξημένη πυκνότητα ακανθών εμφανίζεται αρχικά σε MSN που περιέχουν υποδοχείς D1 και MSN που περιέχουν υποδοχείς D2, η αλλοιωμένη πυκνότητα ακανθών είναι σταθερή μόνο σε νευρώνες που περιέχουν υποδοχείς D1. Επιπλέον, διαπιστώνουμε παρόμοιες αλλαγές στην έκφραση του παράγοντα μεταγραφής ΔFosB, υποδηλώνοντας ότι το ΔFosB μπορεί να εμπλέκεται στο σχηματισμό ή/και τη διατήρηση των δενδριτικών ακανθών στους νευρώνες D1, καθώς και στους νευρώνες που περιέχουν υποδοχείς D2 στο NAcc.

Αποτελέσματα

Ανάλυση των MSNs σε διαγονιδιακούς ποντικούς Drd1-EGFP και Drd2-EGFP BAC.

Το μοτίβο προβολής των MSN από το ραχιαίο και το κοιλιακό ραβδωτό σώμα σε τρανσγονικά ποντίκια Drd1-EGFP ή Drd2-EGFP BAC έχει χαρακτηριστεί μέσω ανάλυσης της έκφρασης GFP ( 36 ). Η διαφορική έκφραση της GFP σε MSN του ραχιαίου ραβδωτού σώματος αντιστοιχεί γενικά σε αυτή των ενδογενών υποδοχέων D1 ή D2, αντίστοιχα ( 36 ). Αναλύσαμε περαιτέρω τη διαφορική έκφραση της GFP σε NAcc σε ποντίκια Drd1-EGFP ή Drd2-EGFP ( Εικ. 1 α και β ). Αν και ≈58% των νευρώνων σε NAcc εξέφρασαν GFP σε ποντίκια Drd1-EGFP ( Εικ. 1 α ), ≈48% των νευρώνων σε NAcc εξέφρασαν GFP σε ποντίκια Drd-2-EGFP ( Εικ. 1 β ). Τα MSN αντιπροσωπεύουν το 90-95% όλων των νευρώνων στο NAcc ( 12 , 37 ). Οι υποδοχείς D1 εκφράζονται μόνο σε MSN, και οι υποδοχείς D2 εκφράζονται σε MSN και σε χολινεργικούς ενδιάμεσους νευρώνες, οι οποίοι αντιπροσωπεύουν το 1-3% των νευρώνων του ραβδωτού σώματος ( 37 ). Λαμβάνοντας υπόψη αυτούς τους παράγοντες, τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι, τουλάχιστον, ≈10-15% των MSN στο NAcc είναι πιθανό να εκφράζουν υποδοχείς D1 και D2.

Σύκο. 1. 

Ανάλυση των MSN σε ποντικούς Drd1-EGFP και Drd2-EGFP. (a και b) Σταθερές φέτες εγκεφάλου από το NAcc του Drd1-EGFP (a) ή Drd2-EGFP (b) Διαγονιδιακοί ποντικοί ΒΑΟ ανοσοχρώθηκαν για GFP και NeuN (ως γενικός νευρωνικός δείκτης). Οι συγχωνευμένες εικόνες δείχνουν, με κίτρινο χρώμα, την αλληλεπίδραση ...

Ανάλυση των δενδριτικών σπονδύλων σε Drd1-EGFP και Drd2-EGFP ποντίκια.

Η έκφραση GFP στα ποντίκια Drd1-EGFP και Drd2-EGFP ήταν χρήσιμη για τη χρώση των νευρωνικών κυτταρικών σωμάτων. Ωστόσο, το σήμα GFP στους δενδρίτες και τις δενδριτικές ακίδες ήταν πολύ ασθενές για να επιτρέψει την ανάλυσή τους μετά από ανοσοχρώση με αντισώματα κατά του GFP. Η βαλλιστική χορήγηση φθοριζουσών χρωστικών μέσω σωματιδίων έχει χρησιμοποιηθεί πρόσφατα για την επισήμανση νευρωνικών πληθυσμών με γρήγορο και αποτελεσματικό τρόπο ( 38 ). Ολόκληροι νευρώνες μπορούν να επισημανθούν χρησιμοποιώντας αυτήν την τεχνική και η μέθοδος φαίνεται να είναι συγκρίσιμη με τη χρώση Golgi-Cox. Για να αναλυθεί η δενδριτική μορφολογία των νευρώνων στο NAcc, σταθερές αθροιστικές φέτες επισημάνθηκαν με τη λιπόφιλη χρωστική φθορισμού υπερχλωρική 1,1'-διοταδεκυλ-3,3,3',3'-τετραμεθυλινδοκαρβοκυανίνη (DiI) χρησιμοποιώντας ένα γονιδιακό πιστόλι. Ένα παράδειγμα MSN χρωματισμένου με DiI φαίνεται στο Σχήμα 1c . Υπό τις συνθήκες που χρησιμοποιήθηκαν, γενικά παρατηρήσαμε επισημασμένους νευρώνες χωρίς επικαλυπτόμενους δενδρίτες από άλλους επισημασμένους νευρώνες. Σε μεγαλύτερη μεγέθυνση, παρατηρήθηκε λεπτομερής δενδριτική μορφολογία, συμπεριλαμβανομένων των δενδριτικών άκανθων ( Εικ. 1 δ ).

Στη συνέχεια, χρησιμοποιήσαμε έναν συνδυασμό σήμανσης DiI και ανοσοϊστοχημείας για GFP σε διαγονιδιακά ποντίκια Drd1-EGFP ή Drd2-EGFP, κάτι που κατέστη δυνατό με τη χρήση χαμηλής συγκέντρωσης απορρυπαντικού για διαπερατότητα ιστών (βλ. Μέθοδοι ). Μέσω προσεκτικής σύγκρισης της χρώσης DiI και της έκφρασης GFP στα κυτταρικά σώματα των MSN, μπορέσαμε να εντοπίσουμε νευρώνες DiI και GFP-θετικούς ή DiI-θετικούς και GFP-αρνητικούς σε ποντίκια Drd1-EGFP ( Εικ. 2α ) ή Drd2-EGFP ( Εικ. 2β ) . Για τις ακόλουθες μελέτες, αναλύσαμε τη δενδριτική μορφολογία μόνο σε νευρώνες DiI και GFP-θετικούς από ποντίκια Drd1-EGFP ή Drd2-EGFP.

Σύκο. 2. 

Ανάλυση των δενδριτικών σπονδύλων σε ποντικούς Drd1-EGFP και Drd2-EGFP. Νευρώνες σε NAcc είτε Drd1-EGFP ποντικών (a) ή Drd2-EGFP ποντικούς (b) επισημάνθηκαν αρχικά με DiI (κόκκινο) και κατόπιν υποβλήθηκαν σε ανοσοϊστοχημεία χρησιμοποιώντας αντίσωμα αντι-ΟΡΡ (EGFP, πράσινο). Μόνο ...

Η θεραπεία της χρόνιας κοκαΐνης έχει ως αποτέλεσμα αυξημένη πυκνότητα σπονδυλικής στήλης σε ακάρεα MSNs που εκφράζουν είτε Drd1-EGFP είτε Drd2-EGFP.

Σε ποντίκια Drd1-EGFP ή Drd2-EGFP εγχύθηκαν επανειλημμένα κοκαΐνη (30 mg/kg) ή φυσιολογικός ορός για τέσσερις συνεχόμενες εβδομάδες (βλ. Μέθοδοι ). Δύο ημέρες (2WD) ή 30 ημέρες (30WD) μετά την τελευταία φαρμακευτική αγωγή, οι εγκέφαλοι υποβλήθηκαν σε επεξεργασία για σήμανση DiI και ανοσοϊστοχημεία όπως περιγράφεται παραπάνω. Μια προηγούμενη μελέτη ανέφερε ότι η χρόνια θεραπεία με αμφεταμίνη αύξησε την πυκνότητα της σπονδυλικής στήλης στους περιφερικούς αλλά όχι στους εγγύς δενδρίτες των MSN σε NAcc ( 35 ). Επομένως, περιορίσαμε την ανάλυσή μας στους περιφερικούς δενδρίτες (δηλαδή, σε εκείνους με κλάδους δεύτερης ή τρίτης τάξης), συμπεριλαμβανομένων των τελικών περιοχών. Όταν αναλύθηκε σε 2WD, η πυκνότητα της σπονδυλικής στήλης βρέθηκε να αυξάνεται σε Drd1-EGFP-θετικούς MSN (128% της ομάδας φυσιολογικού ορού) ( Εικ. 3 a και c ) και σε μικρότερο βαθμό σε Drd2-EGFP-θετικούς νευρώνες (115% της ομάδας φυσιολογικού ορού) ( Εικ. 3 b και d ). Μετά από 30WD, η αυξημένη πυκνότητα της σπονδυλικής στήλης διατηρήθηκε στους Drd1-EGFP-θετικούς νευρώνες (118% του ελέγχου με φυσιολογικό ορό) ( Εικόνα 3 a και c ), αλλά όχι στους Drd2-EGFP-θετικούς νευρώνες ( Εικόνα 3 b και d ).

Σύκο. 3. 

Χρόνιες επαγόμενες από κοκαΐνη αυξήσεις της πυκνότητας σπονδυλικής στήλης σε Drd1-EGFP- ή Drd2-EGFP-θετικά MSNs σε NAcc. (a και b) Drd1-EGFP (a) ή Drd2-EGFP (b) ποντικών υποβλήθηκαν σε αγωγή με αλατούχο (Sal) ή κοκαΐνη (Coc, 30 mg / kg) για εβδομάδες 4. Οι εγκεφαλικοί ποντικοί 2WD ή 30WD υποβλήθηκαν σε επεξεργασία ...

Η μορφολογία των δενδριτικών άκανθων ποικίλλει ως προς το μήκος τους και το πλάτος της κεφαλής της σπονδυλικής στήλης. Συνεπώς, ταξινομήσαμε τις δενδριτικές προεξοχές σε τέσσερις κατηγορίες άκανθας (κοντόμορφες, μανιταρένιες, λεπτές και φιλοπόδια) σε 2WD από κοκαΐνη (δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Η πυκνότητα των μανιταρένιων άκανθων (119.7 ± 4.0%, P < 0.01) και λεπτών άκανθων (120.0 ± 3.4%, P < 0.01) αυξήθηκε με θεραπεία με κοκαΐνη σε Drd1-EGFP-θετικά MSN, ενώ η πυκνότητα των κοντόμορφων (182.4 ± 21.6%, P < 0.05) και μανιταρένιων άκανθων (122.5 ± 5.0%, P < 0.01) αυξήθηκε σε Drd2-EGFP-θετικά MSN. Δεν υπήρξε σημαντική αύξηση στις κοντόμορφες άκανθες σε Drd1-EGFP-θετικούς νευρώνες ή σε λεπτές άκανθες σε Drd2-EGFP-θετικούς νευρώνες.

Η χρόνια κοκαΐνη προκαλεί έκφραση ΔFosB σε Drd1-EGFP- ή Drd2-EGFP-θετικά MSNs σε NAcc.

Το ΔFosB είναι μέλος της οικογένειας παραγόντων μεταγραφής Fos. Ενώ η οξεία χορήγηση κοκαΐνης προκαλεί ταχεία και παροδική επαγωγή αρκετών ισομορφών Fos στο NAcc, η επαναλαμβανόμενη έκθεση στην κοκαΐνη αυξάνει το επίπεδο του ΔFosB. Επιπλέον, η αύξηση στην έκφραση του ΔFosB επιμένει στο NAcc για εβδομάδες έως μήνες μετά τη διακοπή της έκθεσης στο φάρμακο και έχει προταθεί ότι εμπλέκεται στη μακροχρόνια ρύθμιση της γονιδιακής έκφρασης, ακόμη και μετά τη διακοπή της λήψης φαρμάκων ( 29 , 39 , 40 ).

Για να εξεταστεί η επαγωγή του ΔFosB σε NAcc από ποντικούς Drd1-EGFP ή Drd2-EGFP μετά από θεραπεία κοκαΐνης, αναλύσαμε την έκφραση FosB και GFP με διπλή επισήμανση (Σύκο. 4 και Πίνακας 1) Το αντίσωμα αντι-FosB αναγνωρίζει όλες τις μορφές του FosB, αλλά υποθέτουμε ότι η αυξημένη ανοσοστρώση αντιπροσωπεύει ΔFosB (βλέπε Μέθοδοι για περαιτέρω συζήτηση). Σε ποντικούς που υποβλήθηκαν σε αγωγή με φυσιολογικό ορό, το 16% των θετικών για Drd1-EGFP νευρώνων και το 15% των θετικών για Drd2-EGFP νευρώνων εξέφρασαν την ανοσοδραστικότητα FosB με σχετικά ασθενή ένταση (Σύκο. 4 a και b και Πίνακας 1). Η επανειλημμένη θεραπεία με κοκαΐνη, ακολουθούμενη από 2WD, οδήγησε σε σημαντική αύξηση στον αριθμό των θετικών για Drd1-EGFP νευρώνων που συν-εκφραζόταν με ΔFosB (55% θετικών GFP νευρώνων) (Σύκο. 4c και Πίνακας 1). Μία μικρότερη αλλά σημαντική αύξηση στην έκφραση του ΔFosB βρέθηκε σε νευρώνες θετικούς σε Drd2-EGFP (25% νευρώνων θετικών για GFP) (Σύκο. 4d και Πίνακας 1). Όπως με τις μεταβολές της πυκνότητας της σπονδυλικής στήλης, η αυξημένη έκφραση του ΔFosB διατηρήθηκε σε νευρώνες θετικούς σε Drd1-EGFP (46% θετικών GFP νευρώνων), αλλά όχι σε θετικούς με Drd2-EGFP νευρώνες (15% GFP θετικών νευρώνων) 30WD (Σύκο. 4 e και f και Πίνακας 1). Σημειώστε ότι η αυξημένη έκφραση ΔFosB που παρατηρήθηκε στο Σύκο. 4f είναι παρόν σε Drd2-EGFP-αρνητικούς νευρώνες.

Σύκο. 4. 

Η χρόνια κοκαΐνη επάγει έκφραση ΔFosB σε Drd1-EGFP- ή Drd2-EGFP-θετικά MSNs σε NAcc. Drd1-EGFP (a, cκαι e) ή Drd2-EGFP (b, dκαι f) ποντίκια υποβλήθηκαν σε αγωγή με αλατούχο ή χρόνιο κοκαΐνη όπως περιγράφεται στο Σύκο. 3. 2WD (c και d) ή 30WD (e και ...
Πίνακας 1. 

Ποσοτικοποίηση των θετικών σε EGFP νευρώνων που εκφράζουν ΔFosB

Ερωτήσεις - Συζήτηση

Πιστεύεται ότι μακροχρόνιες προσαρμογές στη ντοπαμινεργική νευροδιαβίβαση αποτελούν τη βάση των εθιστικών συμπεριφορών που σχετίζονται με ψυχοδιεγερτικά φάρμακα. Συγκεκριμένα, οι αυξήσεις στην πυκνότητα της δενδριτικής σπονδυλικής στήλης των MSN στο NAcc που προκαλούνται από ψυχοδιεγερτικά έχουν υποτεθεί ότι συνδέονται με την αναδιοργάνωση της συναπτικής συνδεσιμότητας ( 30 ). Το NAcc αποτελείται σε μεγάλο βαθμό από δύο διακριτούς υποπληθυσμούς MSN που εκφράζουν υψηλά επίπεδα υποδοχέων ντοπαμίνης D1 ή D2. Στην παρούσα μελέτη, αναλύσαμε την πυκνότητα της σπονδυλικής στήλης σε διακριτά MSN που περιέχουν υποδοχείς D1 ή D2 στο NAcc μετά από χρόνια θεραπεία με κοκαΐνη. Τα αποτελέσματα που ελήφθησαν δείχνουν ότι, αν και η αυξημένη πυκνότητα της σπονδυλικής στήλης εμφανίζεται αρχικά σε MSN που περιέχουν υποδοχείς D1 και MSN που περιέχουν υποδοχείς D2, η αλλοιωμένη πυκνότητα της σπονδυλικής στήλης είναι σταθερή μόνο σε νευρώνες που περιέχουν υποδοχείς D1. Επιπλέον, βρίσκουμε ένα παρόμοιο μοτίβο αλλαγών στην έκφραση του παράγοντα μεταγραφής ΔFosB σε MSN που περιέχουν υποδοχείς D1 και D2.

Αυτές οι μελέτες χρησιμοποίησαν διαγονιδιακά ποντίκια BAC που εκφράζουν GFP σε συγκεκριμένους υποπληθυσμούς MSN υπό τον έλεγχο είτε του υποκινητή του υποδοχέα D1 είτε του D2. Επιπλέον, αναπτύξαμε μια μέθοδο διπλής σήμανσης που συνδύαζε την ανοσοϊστοχημεία για την GFP με βαλλιστική σήμανση νευρώνων χρησιμοποιώντας DiI. Προηγούμενες μελέτες έχουν χρησιμοποιήσει τη μέθοδο Golgi-Cox για να αναλύσουν την επίδραση των ψυχοδιεγερτικών στην πυκνότητα της σπονδυλικής στήλης ( 34 ), και η μέθοδος DiI που χρησιμοποιήθηκε εδώ έδωσε αποτελέσματα που ήταν ποσοτικά συγκρίσιμα. Αναπτύξαμε τη μέθοδο διπλής σήμανσης επειδή η χρώση Golgi δεν είναι συμβατή με την ανοσοϊστοχημεία. Η ανοσοχρώση συνήθως απαιτεί διαπερατότητα ιστών με απορρυπαντικά, μια διαδικασία που συνήθως οδηγεί σε διαλυτοποίηση λιπόφιλων χρωστικών από τη μεμβράνη ( 38 ). Ωστόσο, στις τρέχουσες μελέτες μας, η ανοσοχρώση GFP δεν απαιτούσε υψηλή συγκέντρωση απορρυπαντικού για διαπερατότητα ιστών και επομένως θα μπορούσε να χρησιμοποιηθεί σε συνδυασμό με σήμανση λιπόφιλων χρωστικών. Η μέθοδος διπλής σήμανσης που χρησιμοποιούμε θα πρέπει να είναι γενικά χρήσιμη για μελέτες δομικών αλλαγών στις δενδριτικές άκανθες, για παράδειγμα όταν χρησιμοποιείται για την ανάλυση σειρών διαγονιδιακών ποντικών BAC όπου η GFP εκφράζεται σε συγκεκριμένους πληθυσμούς νευρώνων στον φλοιό ( 36 ).

Αν και εξακολουθεί να είναι κάπως αμφιλεγόμενο, πιστεύεται ότι οι υποδοχείς D1 και D2 διαχωρίζονται σε μεγάλο βαθμό ανατομικά στους άμεσους (ραβδονευρικούς) και έμμεσους (ραβδονευρικούς) νευρώνες προβολής ραβδωτού σώματος, αντίστοιχα ( 17 , 41 ). Ο αρχικός χαρακτηρισμός του εντοπισμού της GFP στα ποντίκια Drd1-EGFP και Drd2-EGFP ήταν σύμφωνος με αυτό το συμπέρασμα ( 36 ). Επιπλέον, η ανάλυσή μας για τον αριθμό των θετικών για GFP νευρώνων στο NAcc από ποντίκια Drd1-EGFP και Drd2-EGFP είναι σύμφωνη με το συμπέρασμα ότι ≈50% των MSN εκφράζουν μόνο υποδοχείς D1, ότι ≈35-40% εκφράζουν μόνο υποδοχείς D2 και ότι ≈10-15% συνεκφράζουν και τους δύο υποδοχείς D1 και D2. Αυτή η τιμή συνέκφρασης είναι παρόμοια με αυτήν που υποδηλώνεται από μελέτες του ραχιαίου ραβδωτού σώματος που συνδύασαν την ανάλυση patch-clamp μεμονωμένων νευρώνων ραβδωτού σώματος με τεχνικές RT-PCR για την απομόνωση και την ενίσχυση mRNAs (≈17% συνέκφραση εγκεφαλίνης και ουσίας P) ( 42 ). Πρέπει να σημειωθεί ότι οι τρέχουσες μελέτες μας δεν ασχολούνται με το ζήτημα της έκφρασης των υποδοχέων D3, D4 και D5, ούτε ασχολούνται με το ζήτημα των χαμηλών επιπέδων έκφρασης υποδοχέων D1 σε MSNs που εκφράζουν υψηλά επίπεδα υποδοχέων D2 ή αντίστροφα.

Αρκετές προηγούμενες μελέτες έχουν εξετάσει τον νευρωνικό εντοπισμό της έκφρασης Fos που προκαλείται από ψυχοδιεγερτικά και τον ρόλο των υποδοχέων D1 και D2 ( 43-45 ). Αυτές οι μελέτες υποστήριξαν το συμπέρασμα ότι η επαγωγή Fos και ΔFosB προκαλείται από την ενεργοποίηση των υποδοχέων D1. Ωστόσο, ο κυτταρικός εντοπισμός της έκφρασης Fos επηρεάζεται από το περιβαλλοντικό πλαίσιο στο οποίο χορηγούνται ψυχοδιεγερτικά φάρμακα ( 46 , 47 ). Για παράδειγμα, η αμφεταμίνη ή η κοκαΐνη που χορηγείται στο κλουβί οικιακής χρήσης επάγει άμεσα πρώιμα γονίδια (συμπεριλαμβανομένου του Fos) κατά προτίμηση σε κύτταρα θετικά στην ουσία Ρ που συνεκφράζουν υποδοχείς D1. Αντίθετα, αυτά τα φάρμακα μπορούν να προκαλέσουν έκφραση Fos τόσο σε MSN που περιέχουν υποδοχείς D1 όσο και σε D2 όταν χορηγούνται σε ένα νέο περιβάλλον. Το πρωτόκολλο που χρησιμοποιήθηκε στις τρέχουσες μελέτες μας δεν περιελάμβανε τον συνδυασμό της ένεσης φαρμάκου με την έκθεση σε ένα νέο περιβάλλον. Ωστόσο, δεν μπορούμε να αποκλείσουμε κάποιο είδος στρες που εξαρτάται από το πλαίσιο και είναι υπεύθυνο για την έκφραση ΔFosB σε MSN που περιέχουν υποδοχείς D2.

Ένα αξιοσημείωτο χαρακτηριστικό των παρόντων αποτελεσμάτων ήταν το παράλληλο πρότυπο αυξημένης πυκνότητας σπονδυλικής στήλης και έκφρασης ΔFosB. Η αυξημένη πυκνότητα σπονδυλικής στήλης και έκφραση ΔFosB εμφανίστηκε αρχικά σε MSNs που εκφράζουν Drd1-EGFP και Drd2-EGFP. Ωστόσο, αυτές οι αλλαγές ήταν σταθερές μόνο σε νευρώνες που περιέχουν υποδοχέα D1. Μια πιθανή εξήγηση για την παρατήρηση ότι η αυξημένη πυκνότητα σπονδυλικής στήλης και έκφραση ΔFosB βρέθηκε παροδικά σε νευρώνες που περιέχουν υποδοχέα D2 είναι ότι αυτό συνέβη στο μικρό κλάσμα των MSNs που συνεκφράζουν υποδοχείς ντοπαμίνης D1 και D2. Έτσι, η παροδική φύση αυτών των αυξήσεων μπορεί να σχετίζεται με ανταγωνιστικές επιδράσεις της ενεργοποίησης του υποδοχέα D2 στις οδούς σηματοδότησης που εξαρτώνται από την D1 ( 48 ). Είναι ενδιαφέρον ότι οι αλλαγές στην πυκνότητα της σπονδυλικής στήλης και την έκφραση ΔFosB ήταν αναστρέψιμες, γεγονός που μπορεί να αντανακλά την ικανότητα των οδών σηματοδότησης που εξαρτώνται από τον υποδοχέα D2 να επηρεάζουν τη σταθερότητα του ΔFosB.

Η παρατήρηση ότι υπάρχουν παράλληλες αλλαγές στην έκφραση του ΔFosB και στην πυκνότητα της σπονδυλικής στήλης είναι σύμφωνη με την ιδέα ότι το ΔFosB εμπλέκεται στον αρχικό σχηματισμό και την επακόλουθη διατήρηση των δενδριτικών σπονδύλων σε νευρώνες που περιέχουν υποδοχείς D1 στο NAcc. Η έκφραση του ΔFosB ελέγχεται από την εξαρτώμενη από D1/DARPP-32/PP1 οδό σηματοδότησης σε MSNs ( 49 ). Αρκετές μελέτες έχουν δείξει ότι το ΔFosB παίζει σημαντικό ρόλο στις ανταποδοτικές και κινητικές δράσεις των ψυχοδιεγερτικών ( 39 ), πιθανώς επηρεάζοντας την έκφραση πολλαπλών γονιδίων που περιλαμβάνουν υποδοχείς νευροδιαβιβαστών, πρωτεΐνες σηματοδότησης και πρωτεΐνες που εμπλέκονται στη ρύθμιση της νευρωνικής μορφολογίας ( 50 ). Ωστόσο, οι συγκεκριμένοι μοριακοί μηχανισμοί που εμπλέκονται στον χρόνιο σχηματισμό σπονδυλικής στήλης που προκαλείται από την κοκαΐνη δεν είναι προς το παρόν γνωστοί. Προηγούμενες μελέτες μας έχουν δείξει ότι η ενδοσυσσωρευτική έγχυση του αναστολέα Cdk5 ροσκοβιτίνης εξασθένησε τις αυξήσεις στην πυκνότητα της σπονδυλικής στήλης που προκαλούνται από την κοκαΐνη ( 51 ). Επιπλέον, το Cdk5 είναι ένα κατάντη γονίδιο-στόχος για το ΔFosB και έχει εμπλακεί σε αντισταθμιστικές προσαρμοστικές αλλαγές που σχετίζονται με τη χρόνια θεραπεία κοκαΐνης ( 52 ). Επομένως, η μεταβολή στην εξαρτώμενη από Cdk5 φωσφορυλίωση είναι ένας εύλογος μηχανισμός που διέπει τον σχηματισμό σπονδυλικής στήλης που προκαλείται από την κοκαΐνη και/ή τη σταθερότητα της σπονδυλικής στήλης. Η PAK ( 53 ), η β-κατενίνη ( 54 ), η PSD-95 ( 55 ) και η σπινοφιλίνη ( 56 ) είναι υποστρώματα για την Cdk5 και όλα εμπλέκονται στη ρύθμιση της μορφογένεσης της σπονδυλικής στήλης ( 57-60 ). Ο περαιτέρω χαρακτηρισμός αυτών και άλλων υποστρωμάτων Cdk5 στις σπονδυλικές στήλες ελπίζουμε ότι θα ρίξει φως στους μηχανισμούς που εμπλέκονται στη ρύθμιση του σχηματισμού της σπονδυλικής στήλης από ψυχοδιεγερτικά.

Μέθοδοι

Των ζώων.

Ποντίκια που έφεραν ένα τρανσγονίδιο EGFP υπό τον έλεγχο είτε των υποδοχέων ντοπαμίνης D1 είτε των D2 δημιουργήθηκαν από το διαγονιδιακό έργο Gensat BAC ( 36 ). Τα διαγονιδιακά ποντίκια που χρησιμοποιήθηκαν σε αυτή τη μελέτη ήταν ηλικίας 4-5 εβδομάδων και βρίσκονταν σε υπόβαθρο Swiss-Webster. Τα ποντίκια διατηρήθηκαν σε κύκλο φωτός/σκότους 12:12 ωρών και στεγάστηκαν σε ομάδες των 2-5 με διαθέσιμη τροφή και νερό ad libitum. Όλα τα πρωτόκολλα των ζώων ήταν σύμφωνα με τον Οδηγό των Εθνικών Ινστιτούτων Υγείας για τη Φροντίδα και Χρήση Ζώων Εργαστηριακής Ζωής και εγκρίθηκαν από την Επιτροπή Φροντίδας και Χρήσης Θεσμικών Ζώων του Πανεπιστημίου Rockefeller.

Φαρμακευτική αγωγή.

Η χρόνια θεραπεία με κοκαΐνη (30 mg/kg, ημερησίως) αναφέρθηκε ότι προκάλεσε ισχυρή αύξηση στην πυκνότητα της σπονδυλικής στήλης των MSN τόσο στον πυρήνα όσο και στο κέλυφος του NAcc σε αρουραίους, αλλά μια χαμηλότερη δόση (15 mg/kg) αύξησε την πυκνότητα της σπονδυλικής στήλης μόνο στο κέλυφος ( 61 ). Ως εκ τούτου, χρησιμοποιήσαμε την υψηλότερη δόση κοκαΐνης για να προκαλέσουμε δομική τροποποίηση και στα δύο μέρη του NAcc. Τα ποντίκια έλαβαν μία ένεση (ip) 30 mg/kg κοκαΐνης-HCl (ή φυσιολογικού ορού) κάθε μέρα για 5 συνεχόμενες ημέρες, ακολουθούμενη από 2 ημέρες χωρίς ένεση, και αυτή η διαδικασία επαναλήφθηκε για 4 συνεχόμενες εβδομάδες. Οι ενέσεις πραγματοποιήθηκαν στο κλουβί. Εγκεφάλοι ποντικών 2WD ή 30WD υποβλήθηκαν σε επεξεργασία για σήμανση DiI ή/και ανοσοϊστοχημεία.

Βαλλιστική επισήμανση με τη φθορίζουσα βαφή DiI.

Τα ποντίκια αναισθητοποιήθηκαν με 80 mg/kg πεντοβαρβιτάλη νατρίου και εγχύθηκαν διακαρδιακά με 5 ml PBS, ακολουθούμενη από ταχεία έγχυση με 40 ml παραφορμαλδεΰδης 4% σε PBS (20 ml/min). Οι εγκέφαλοι αφαιρέθηκαν γρήγορα από το κρανίο και στερεώθηκαν σε 4% παραφορμαλδεΰδη για 10 λεπτά. Φέτες εγκεφάλου (100 μm) επισημάνθηκαν με βαλλιστική χορήγηση φθορίζουσας χρωστικής DiI (Molecular Probes) όπως περιγράφεται στην παραπομπή 38. Αναπτύχθηκε μια συνδυασμένη μέθοδος επισήμανσης DiI-ανοσοϊστοχημείας με χαμηλή συγκέντρωση απορρυπαντικού. Οι τομές που επισημάνθηκαν με DiI διαπερατοποιήθηκαν με 0.01% Triton X-100 σε PBS για 15 λεπτά και στη συνέχεια επωάστηκαν σε 0.01% Triton X-100 και 10% φυσιολογικό ορό κατσίκας σε PBS για 1 ώρα για την ελαχιστοποίηση της μη ειδικής επισήμανσης. Οι τομές ιστού επωάστηκαν στη συνέχεια με 1% φυσιολογικό ορό κατσίκας/0.01% Triton X-100 και αντίσωμα κατά του GFP (Abcam, Cambridge, MA) για 2 ώρες σε θερμοκρασία δωματίου, πλύθηκαν και επωάστηκαν σε αραίωση 1:1,000 δευτερογενούς αντισώματος συζευγμένου με FITC (Molecular Probes). Οι τομές τοποθετήθηκαν σε αντικειμενοφόρες πλάκες μικροσκοπίου και καλύφθηκαν με μέσο στερέωσης. Η μέθοδος βαλλιστικής σήμανσης επέτρεψε λεπτομερή ανάλυση της δομής της δενδριτικής σπονδυλικής στήλης και τα αποτελέσματα που ελήφθησαν ήταν ποιοτικά και ποσοτικά συγκρίσιμα με προηγούμενες μελέτες που χρησιμοποίησαν τη μέθοδο εμποτισμού Golgi-Cox σε τομές εγκεφάλου αρουραίου ( 34 ). Ωστόσο, σε αντίθεση με προηγούμενες μελέτες, σπάνια παρατηρήσαμε σπονδυλικές στήλες δύο κεφαλών σε νευρώνες που είχαν χρωματιστεί με DiI. Αυτή η διαφορά μπορεί να οφείλεται στην ευαισθησία των μεθόδων χρώσης ή στη μεταβλητότητα του ιστού ποντικού (αυτή η μελέτη) έναντι του ιστού αρουραίου ( 34 ).

Ανοσοϊστοχημεία.

Τα ζώα αναισθητοποιήθηκαν και αιματώθηκαν όπως περιγράφεται παραπάνω. Οι εγκέφαλοι αφαιρέθηκαν και αποθηκεύτηκαν όλη τη νύχτα σε 4% παραφορμαλδεΰδη στους 4°C. Οι εγκέφαλοι μεταφέρθηκαν σε διάλυμα σακχαρόζης 30% σε PBS για κρυοπροστασία. Οι στεφανιαίες τομές (12 μm) κόπηκαν σε μικροτόμο κατάψυξης (Leica) και στη συνέχεια υποβλήθηκαν σε ανοσοϊστοχημεία. Οι τομές εγκεφάλου στη συνέχεια διαπερατοποιήθηκαν σε 0.3% Triton X-100 σε PBS για 15 λεπτά και ξεπλύθηκαν δύο φορές σε PBS. Οι τομές προεπωάστηκαν σε 10% φυσιολογικό ορό κατσίκας σε PBS για 1 ώρα στους 37°C, εκτέθηκαν σε πρωτογενή αντισώματα (αραιωμένα σε 1% φυσιολογικό ορό κατσίκας σε PBS) όλη τη νύχτα στους 4°C και στη συνέχεια ξεπλύθηκαν σε PBS και επωάστηκαν με δευτερογενή αντισώματα για 1 ώρα στους 37°C. Χρησιμοποιήθηκαν τα ακόλουθα αντισώματα: κουνελιού αντι-pan-FosB (SC-48, 1:500; Santa Cruz Biotechnology), ποντικού αντι-NeuN (Chemicon), κουνελιού αντι-GFP, συζευγμένη με FITC αντι-IgG κουνελιού και συζευγμένη με ροδαμίνη αντι-IgG ποντικού (Molecular Probes). Για τριπλή σήμανση (ΔFosB, NeuN και GFP), οι τομές εγκεφάλου αρχικά ανοσοχρωματίστηκαν με αντίσωμα αντι-pan FosB και αντίσωμα αντι-NeuN και στη συνέχεια επωάστηκαν με δευτερογενή αντισώματα (συζευγμένη με ροδαμίνη αντι-IgG κουνελιού και συζευγμένη με κυάνιο αντι-IgG ποντικού). Οι διπλά χρωματισμένες τομές εγκεφάλου υποβλήθηκαν περαιτέρω σε ανοσοχρωματισμό GFP χρησιμοποιώντας τεχνολογία σήμανσης Zenon (Zenon Alexa Fluor 488, Molecular Probes). Το αντίσωμα αντι-pan-FosB δημιουργήθηκε στο Ν-τελικό άκρο του FosB και αναγνωρίζει το ΔFosB και το FosB πλήρους μήκους ( 62 ). Με βάση προηγούμενες μελέτες που έδειξαν ότι το ΔFosB, αλλά όχι το FosB ή άλλα αντιγόνα που σχετίζονται με το Fos, εκφράζεται σταθερά μετά από χρόνια θεραπεία με κοκαΐνη, υποθέτουμε ότι οι μακροχρόνιες αυξήσεις στην ανοσοαντιδραστικότητα αντιπροσωπεύουν σταθερή έκφραση του ΔFosB. Ωστόσο, η ταυτότητα του ανοσοαντιδραστικού σήματος FosB που παρατηρήθηκε σε ποντίκια που έλαβαν φυσιολογικό ορό είναι άγνωστη. Η στατιστική ανάλυση στον Πίνακα 1 χρησιμοποίησε το t- test του Student.

Ανάλυση της δενδριτικής σπονδυλικής στήλης.

Μεμονωμένα MSN στο NAcc επιλέχθηκαν για ανάλυση σπονδυλικής στήλης με βάση διάφορα κριτήρια. ( i ) Υπήρχε ελάχιστη ή καθόλου επικάλυψη με άλλα επισημασμένα κύτταρα για να διασφαλιστεί ότι δεν θα συγχέονταν οι αποφύσεις από διαφορετικά κύτταρα. ( ii ) Έπρεπε να είναι ορατοί τουλάχιστον τρεις πρωτογενείς δενδρίτες για να χρησιμοποιηθούν τα κύτταρα για ανάλυση. ( iii ) Εξετάστηκαν οι περιφερειακοί δενδρίτες (τελικοί δενδρίτες ή κοντά στον τελικό δενδρίτη). Αναλύθηκαν οι δενδρίτες και από τα δύο MSN στον πυρήνα και στο κέλυφος του NAcc. Αν και παρατηρήσαμε MSN με αραιή σπονδυλική στήλη (ακανθώδης τύπος II), αναλύσαμε μόνο MSN με πυκνή σπονδυλική στήλη (ακανθώδης τύπος I). Για τον υπολογισμό της πυκνότητας της σπονδυλικής στήλης, εντοπίστηκε ένα μήκος δενδρίτη (μήκους >20 μm) χρησιμοποιώντας ένα ομοεστιακό μικροσκόπιο (Zeiss LSM 510) με φακό εμβάπτισης σε λάδι (×40). Όλες οι εικόνες των δενδριτών λήφθηκαν σε διαφορετικά επίπεδα z (διαστήματα βάθους 0.5–1 μm) για να εξεταστεί η μορφολογία των δενδριτικών σπονδύλων. Όλες οι μετρήσεις έγιναν με λογισμικό ανάλυσης εικόνας μεταμόρφωσης (Universal Imaging, Downingtown, PA). Για τη στατιστική ανάλυση χρησιμοποιήθηκε το τεστ Kolmogorov-Smirnov.

Οι προεξοχές από τους δενδρίτες ταξινομήθηκαν σε τέσσερις τύπους με βάση το μήκος τους, όπως περιγράφεται στις αναφορές 63 και 64. Οι προεξοχές κατηγορίας 1, που ονομάζονται επίσης κοντές προεξοχές, είχαν μήκος <0.5 μm, δεν είχαν μεγάλη κεφαλή σπονδυλικής στήλης και δεν φαινόταν να έχουν λαιμό. Οι προεξοχές κατηγορίας 2, ή μανιταρένιες, είχαν μήκος μεταξύ 0.5 και 1.25 μm και χαρακτηρίζονταν από κοντό λαιμό και μεγάλη κεφαλή σπονδυλικής στήλης. Οι προεξοχές κατηγορίας 3, ή λεπτές σπονδυλικές στήλες, κυμαίνονταν μεταξύ 1.25 και 3.0 μm και είχαν επιμήκεις λαιμούς σπονδυλικής στήλης με μικρές κεφαλές. Οι προεξοχές κατηγορίας 4, ή φιλοπόδιες προεκτάσεις, ήταν μακριές νηματώδεις προεξοχές που δεν είχαν διακριτή κεφαλή σπονδυλικής στήλης.

Ευχαριστίες

Το έργο αυτό υποστηρίχθηκε από το Grant DA10044 της Παγκόσμιας Υπηρεσίας Δημόσιας Υγείας (PG και ACN) και από το Ίδρυμα The Simons, το Ίδρυμα Peter J. Sharp, το Ίδρυμα Picower και το Ίδρυμα FM Kirby.

Συντομογραφίες

  • NAcc
  • nucleus accumbens
  • MSN
  • μεσαίου μεγέθους ακανθώδους νευρώνα
  • ΠΑ
  • βακτηριακό τεχνητό χρωμόσωμα
  • Drd1
  • υποδοχέα ντοπαμίνης D1 υπό τον προωθητή
  • Drd2
  • υποδοχέα ντοπαμίνης D2 υπό τον προωθητή
  • DiI
  • 1,1'-διωταδεκυλ-3,3,3 ', ΧΝΜΧΧ'-τετραμεθυλοϊνδοκαρβοκυανίνη υπερχλωρικό
  • 2WD
  • 2 ημέρες μετά την τελευταία θεραπεία με φάρμακα
  • 30WD
  • 30 ημέρες μετά την τελευταία θεραπεία με φάρμακα.

Υποσημειώσεις

 

Δήλωση σύγκρουσης συμφερόντων: Δεν έχουν δηλωθεί συγκρούσεις.

Αναφορές

1. Totterdell S., Smith ADJ Chem. Neuroanat. 1989, 2: 285-298. [PubMed]
2. Smith Υ., Bevan MD, Shink Ε., Bolam JP Neuroscience. 1998, 86: 353-387. [PubMed]
3. Heikkila RE, Orlansky Η., Cohen G. Biochem. Pharmacol. 1975, 24: 847-852. [PubMed]
4. Ritz MC, Lamb RJ, Goldberg SR, Kuhar MJ Science. 1987, 237: 1219-1223. [PubMed]
5. Nestler EJ Trends Pharmacol. Sci. 2004, 25: 210-218. [PubMed]
6. Kalivas PW, Stewart J. Brain Res. Αναθ. 1991, 16: 223-244. [PubMed]
7. Pierce RC, Kalivas Ρν Brain Res. Αναθ. 1997, 25: 192-216. [PubMed]
8. Robinson TE, Berridge KC Annu. Rev. Psychol. 2003, 54: 25-53. [PubMed]
9. Wolf ME, Khansa MR Brain Res. 1991, 562: 164-168. [PubMed]
10. Vanderschuren LJ, Kalivas PW Psychopharmacology. 2000, 151: 99-120. [PubMed]
11. Sesack SR, Pickel VMJ Comp. Neurol. 1992, 320: 145-160. [PubMed]
12. Smith AD, Bolam JP Trends Neurosci. 1990, 13: 259-265. [PubMed]
13. Sibley DR, Monsma FJ, Jr. Trends Pharmacol. Sci. 1992, 13: 61-69. [PubMed]
14. Beckstead RM, Cruz CJ Neuroscience. 1986, 19: 147-158. [PubMed]
16. Gerfen CR, Young WS, ΙΙΙ Brain Res. 1988, 460: 161-167. [PubMed]
16. Gerfen CR Trends Neurosci. 2000: 23: S64-S70. [PubMed]
17. Gerfen CR, Engber ΤΜ, Mahan LC, Susel Ζ., Chase TN, Monsma FJ, Jr., Sibley DR Science. 1990, 250: 1429-1432. [PubMed]
18. Zahm DS Neurosci. Biobehav. Αναθ. 2000, 24: 85-105. [PubMed]
19. Lu X.-Y., Ghasemzadeh ΜΒ, Kalivas PW Neuroscience. 1998, 82: 767-780. [PubMed]
20. Koob GF, Le HT, Creese Ι. Neurosci. Κάτοικος της Λατβίας. 1987, 79: 315-320. [PubMed]
21. Woolverton WL, Virus RM Pharmacol. Biochem. Behav. 1989, 32: 691-697. [PubMed]
22. Bergman J., Kamien JB, Spealman RD Behav. Pharmacol. 1990, 1: 355-363. [PubMed]
23. Epping-Jordan MP, Markou Α., Koob GF Brain Res. 1998, 784: 105-115. [PubMed]
24. Caine SB, Negus SS, Mello ΝΚ, Bergman JJ Pharmacol. Exp. Ther. 1999, 291: 353-360. [PubMed]
25. De Vries TJ, Cools AR, Shippenberg TS NeuroReport. 1998, 9: 1763-1768. [PubMed]
26. Self DW, Barnhart WJ, Lehman DA, Nestler EJ Science. 1996, 271: 1586-1589. [PubMed]
27. Khroyan TV, Barrett-Larimore RL, Rowlett JK, Spealman RDJ Pharmacol. Exp. Ther. 2000, 294: 680-687. [PubMed]
28. Alleweireldt ΑΤ, Weber SM, Kirschner KF, Bullock BL, Neisewander JL Psychopharmacology. 2002, 159: 284-293. [PubMed]
29. Nestler EJ Nat. Rev. Neurosci. 2001, 2: 119-128. [PubMed]
30. Robinson ΤΕ, Kolb Β. Neuropharmacology. 2004, 47: 33-46. [PubMed]
31. Kalivas PW Curr. Opin. Pharmacol. 2004, 4: 23-29. [PubMed]
32. Hyman SE, Malenka RC Nat. Rev. Neurosci. 2001, 2: 695-703. [PubMed]
33. Robinson ΤΕ, Kolb BJ Neurosci. 1997, 17: 8491-8497. [PubMed]
34. Robinson ΤΕ, Kolb Β. Eur. J. Neurosci. 1999, 11: 1598-1604. [PubMed]
35. Li Υ., Kolb Β., Robinson ΤΕ Neuropsychopharmacology. 2003, 28: 1082-1085. [PubMed]
36. Gong S., Zheng C., Doughty ML, Losos Κ., Didkovsky Ν., Schambra UB, Nowak NJ, Joyner Α., Leblanc G., Hatten ME, et αϊ. Φύση. 2003, 425: 917-925. [PubMed]
37. Zhou FM, Wilson CJ, Dani JAJ Neurobiol. 2002, 53: 590-605. [PubMed]
38. Grutzendler J., Tsai J., Gan WB Methods. 2003, 30: 79-85. [PubMed]
39. Kelz ΜΒ, Chen J., Carlezon WA, Jr., Whisler Κ., Gilden L., Beckmann ΑΜ, Steffen C., Zhang YJ, Marotti L., Self DW, et αϊ. Φύση. 1999, 401: 272-276. [PubMed]
40. Nestler EJ Neuropharmacology. 2004, 47: 24-32. [PubMed]
41. Le Moine C., Bloch BJ Comp. Neurol. 1995, 355: 418-426. [PubMed]
42. Surmeier DJ, τραγούδι WJ, Yan ZJ Neurosci. 1996, 16: 6579-6591. [PubMed]
43. Nye ΗΕ, Hope ΒΤ, Kelz ΜΒ, Iadarola Μ., Nestler EJJ Pharmacol. Exp. Ther. 1995, 275: 1671-1680. [PubMed]
44. Gerfen CR, Keefe ΚΑ, Gauda EBJ Neurosci. 1995, 15: 8167-8176. [PubMed]
45. Moratalla R., Elibol Β., Vallejo Μ., Graybiel ΑΜ Neuron. 1996, 17: 147-156. [PubMed]
46. Badiani Α., Oates ΜΜ, Ημέρα HE, Watson SJ, Akil Η., Robinson TE Behav. Εγκέφαλος. Res. 1999, 103: 203-209. [PubMed]
47. Uslaner J., Badiani Α., Norton CS, Ημέρα HE, Watson SJ, Akil Η., Robinson TE Eur. J. Neurosci. 2001, 13: 1977-1983. [PubMed]
48. Huff RM, Chio CL, Lajiness ΜΕ, Goodman LV Adv. Pharmacol. 1998, 42: 454-457. [PubMed]
49. Zachariou V., Sgambato-Faure V., Sasaki Τ., Svenningsson Ρ., Berton Ο., Fienberg ΑΑ, Nairn AC, Greengard Ρ., Nestler EJ Neuropsychopharmacology. 2005 Aug 3; 10.1038 / sj.npp.1300832.
50. McClung CA, Nestler EJ Nat. Neurosci. 2003, 6: 1208-1215. [PubMed]
51. Norrholm SD, Bibb JA, Nestler EJ, Ouimet CC, Taylor JR, Greengard Ρ. Neuroscience. 2003, 116: 19-22. [PubMed]
52. Bibb JA, Chen J., Taylor JR, Svenningsson Ρ., Nishi Α., Snyder GL, Yan Z., Sagawa ZK, Ouimet CC, Nairn AC, et αϊ. Φύση. 2001, 410: 376-380. [PubMed]
53. Nikolic Μ., Chou MM, Lu W., Mayer BJ, Tsai LH Nature. 1998, 395: 194-198. [PubMed]
54. Kesavapany S., Lau ΚΡ, McLoughlin DM, Brownlees J., Ackerley S., Leigh ΡΝ, Shaw CE, Miller CC Eur. J. Neurosci. 2001, 13: 241-247. [PubMed]
55. Morabito ΜΑ, Sheng Μ., Tsai LHJ Neurosci. 2004, 24: 865-876. [PubMed]
56. Futter Μ., Uematsu Κ., Bullock SA, Kim Υ., Hemmings HC, Jr., Nishi Α., Greengard Ρ., Nairn AC Proc. Natl. Acad. Sci. ΗΠΑ. 2005, 102: 3489-3494. [PMC δωρεάν άρθρο] [PubMed]
57. Hayashi ML, Choi SY, Rao BS, Jung ΗΥ, Lee ΗΚ, Zhang D., Chattarji S., Kirkwood Α., Tonegawa S. Neuron. 2004, 42: 773-787. [PubMed]
58. Murase S., Mosser Ε., Schuman ΕΜ Neuron. 2002, 35: 91-105. [PubMed]
59. Prange Ο., Murphy ΤΗΕ Neurosci. 2001, 21: 9325-9333. [PubMed]
60. Feng J., Yan Z., Ferreira Α., Tomizawa Κ., Liauw JA, Zhuo Μ., Allen PB, Ouimet CC, Greengard Ρ. Proc. Natl. Acad. Sci. ΗΠΑ. 2000, 97: 9287-9292. [PMC δωρεάν άρθρο] [PubMed]
61. Li Υ., Acerbo MJ, Robinson TE Eur. J. Neurosci. 2004, 20: 1647-1654. [PubMed]
62. Perrotti LI, Bolanos CA, Choi ΚΗ, Russo SJ, Edwards S., Ulery PG, Wallace DL, Self DW, Nestler EJ, Barrot Μ. Eur. J. Neurosci. 2005, 21: 2817-2824. [PubMed]
63. Harris KM, Jensen FE, Τσαο ΒΙ. Neurosci. 1992, 12: 2685-2705. [PubMed]
64. Vanderklish Ρνν, Edelman GM Proc. Natl. Acad. Sci. ΗΠΑ. 2002, 99: 1639-1644. [PMC δωρεάν άρθρο] [PubMed]