Το DeltaFosB στο Nucleus Accumbens είναι κρίσιμο για την ενίσχυση των επιπτώσεων της σεξουαλικής ανταμοιβής. (2010)

ΠΑΡΑΤΗΡΗΣΕΙΣ: Το Delta FosB είναι δείκτης για όλους τους εθισμούς, τόσο συμπεριφορικής όσο και χημικής. Καθώς αυτό το μόριο αυξάνεται στο κύκλωμα ανταμοιβής, το ίδιο κάνουν και οι εθιστικές συμπεριφορές. Είναι ένα από τα μόρια που εμπλέκονται στις νευροπλαστικές αλλαγές. Αυτό το πείραμα δείχνει ότι αυξάνεται με τη σεξουαλική εμπειρία, όπως και με τους εθισμούς στα ναρκωτικά. Στο πείραμα χρησιμοποίησαν τη γενετική μηχανική για να αυξήσουν τα επίπεδα πέρα ​​από το «φυσιολογικό». Αυτό είχε ως αποτέλεσμα βελτιωμένη διευκόλυνση της σεξουαλικής δραστηριότητας. Πιστεύουμε ότι αυτό συμβαίνει με τον εθισμό στην πορνογραφία.

ΠΛΗΡΗΣ ΜΕΛΕΤΗ

Pitchers ΚΚ, Frohmader Κδ, Vialou V, Mouzon Ε, Nestler EJ, Lehman MN, Coolen LM.

Genes Brain Behav. 2010 Οκτ · 9 (7): 831-40 δύο: 10.1111 / j.1601-183X.2010.00621.x. Epub 2010 Αυγ 16.

Τμήμα Ανατομίας και Βιολογίας Κυττάρων, Σχολή Ιατρικής και Οδοντιατρικής Schulich, Πανεπιστήμιο του Δυτικού Οντάριο, Λονδίνο, Οντάριο, Καναδάς.

ΠΕΡΙΛΗΨΗ

Η σεξουαλική συμπεριφορά σε αρσενικούς αρουραίους επιβραβεύει και ενισχύει. Ωστόσο, λίγα είναι γνωστά για τους συγκεκριμένους κυτταρικούς και μοριακούς μηχανισμούς που μεσολαβούν στη σεξουαλική επιβράβευση ή τα ενισχυτικά αποτελέσματα της ανταμοιβής για την επακόλουθη έκφραση της σεξουαλικής συμπεριφοράς. Αυτή η μελέτη ελέγχει την υπόθεση ότι το ΔFosB, η σταθερά εκφρασμένη κολοβωμένη μορφή FosB, διαδραματίζει κρίσιμο ρόλο στην ενίσχυση της σεξουαλικής συμπεριφοράς και της επαγόμενης από την εμπειρία διευκόλυνσης των σεξουαλικών κινήτρων και επιδόσεων.

Η σεξουαλική εμπειρία έχει αποδειχθεί ότι προκαλεί συσσώρευση ΔFosB σε αρκετές περιοχές περιοχών του εγκεφάλου, συμπεριλαμβανομένων των πυρήνων accumbens (NAc), του μεσαίου προμετωπιαίου φλοιού, της κοιλιακής τεκτονικής περιοχής και του caudate putamen αλλά όχι του μέσου προοπτικού πυρήνα.

Στη συνέχεια, η επαγωγή του c-Fos, ενός κατάντη (κατασταλμένου) στόχου του ΔFosB, μετρήθηκε σε σεξουαλικά έμπειρα και αφελείς ζώα. Ο αριθμός των επαγόμενων από ζευγαρώματα c-Fos ανοσοαντιδραστικών κυττάρων μειώθηκε σημαντικά σε σεξουαλικά έμπειρα ζώα σε σύγκριση με τα σεξουαλικά μη-ελεγχόμενα ζώα.

Τέλος, τα επίπεδα ΔFosB και η δραστηριότητά του στο NAc χειρίστηκαν χρησιμοποιώντας ιική γονιδιακή μεταφορά για να μελετηθεί ο πιθανός ρόλος του στη διαμεσολάβηση της σεξουαλικής εμπειρίας και της διευκόλυνσης της σεξουαλικής απόδοσης που προκαλείται από την εμπειρία. Τα ζώα με υπερέκφραση ΔFosB εμφάνισαν αυξημένη διευκόλυνση της σεξουαλικής απόδοσης με τη σεξουαλική εμπειρία σε σχέση με τους μάρτυρες. Αντίθετα, η έκφραση του ΔJunD, ενός κυρίαρχου αρνητικού συνεργάτη σύνδεσης του ΔFosB, εξασθένησε τη διευκόλυνση της σεξουαλικής απόδοσης που προκαλείται από τη σεξουαλική εμπειρία και μείωσε τη μακροπρόθεσμη διατήρηση της διευκόλυνσης σε σύγκριση με την πράσινη πρωτεΐνη φθορισμού και τις ομάδες που υπερεκφράζουν ΔFosB.

Μαζί, αυτά τα ευρήματα υποστηρίζουν έναν κρίσιμο ρόλο για την έκφραση του ΔFosB στο NAc για τις ενισχυτικές επιπτώσεις της σεξουαλικής συμπεριφοράς και της επαγόμενης από τη σεξουαλική εμπειρία διευκόλυνσης της σεξουαλικής απόδοσης.

ΕΙΣΑΓΩΓΗ

Η σεξουαλική συμπεριφορά είναι ιδιαίτερα ικανοποιητική και ενισχυτική για τα αρσενικά τρωκτικά (Coolen et αϊ. 2004; Pfaus et αϊ. 2001). Επιπλέον, η σεξουαλική εμπειρία μεταβάλλει τη σεξουαλική συμπεριφορά και την ανταμοιβή (Tenk et αϊ. 2009). Με την επανειλημμένη εμπειρία ζευγαρώματος, η σεξουαλική συμπεριφορά διευκολύνεται ή «ενισχύεται», αποδεικνύεται από μειωμένες λανθάνουσες περιόδους για την έναρξη του ζευγαρώματος και τη διευκόλυνση της σεξουαλικής απόδοσης (Balfour et αϊ. 2004; Pfaus et αϊ. 2001). Ωστόσο, οι υποκείμενοι κυτταρικοί και μοριακοί μηχανισμοί της σεξουαλικής ανταμοιβής και ενίσχυσης δεν είναι καλά κατανοητοί. Η σεξουαλική συμπεριφορά και τα κλινικά χαρακτηριστικά που προβλέπουν το ζευγάρωμα έχουν αποδειχθεί ότι προκαλούν παροδικά την έκφραση του άμεσου πρώιμου γονιδίου c-fos στο μεσολομυϊκό σύστημα των αρσενικών αρουραίων (Balfour et αϊ. 2004; Pfaus et αϊ. 2001). Επιπλέον, αποδείχθηκε πρόσφατα ότι η σεξουαλική εμπειρία προκαλεί μακράς διάρκειας νευροπλαστικότητα στο μεσολόβιδο αρσενικό αρουραίο (Frohmader et αϊ. 2009; Κανάτες et αϊ. 2010). Επιπλέον, σε αρσενικούς αρουραίους, η σεξουαλική εμπειρία έχει αποδειχθεί ότι προκαλεί ΔFosB, α Μέλος της οικογένειας Fos, στον nucleus accumbens (NAc) (Wallace et αϊ. 2008). Το ΔFosB, μια παρατεταμένη παραλλαγή ματίσματος του FosB, είναι ένα μοναδικό μέλος της οικογένειας Fos λόγω της μεγαλύτερης σταθερότητάς του (Carle et αϊ. 2007; Ουλερί-Ρεννόλντς et αϊ. 2008; Ulery et αϊ. 2006) και παίζει ρόλο στην ενίσχυση των κινήτρων και της επιβράβευσης των ναρκωτικών κατάχρησης και της μακροχρόνιας νευρικής πλαστικότητας που προκαλεί εθισμό (Φωλιάζων et αϊ. 2001). Το ΔFosB σχηματίζει ένα σύμπλεγμα ετερόμερου παράγοντα μεταγραφής (πρωτεΐνη ενεργοποιητή-1 (ΑΡ-ΧΝΥΜΧ)) με πρωτεΐνες Jun, κατά προτίμηση JunD (Chen et αϊ. 1995; Χιρόι et αϊ. 1998). Μέσω επαγώγιμης υπερεκφράσεως του ΔFosB, που περιορίζεται αρχικά στο ραβδωτό σώμα χρησιμοποιώντας δι-διαγονιδιακούς ποντικούς, παράγεται ένας φαινοτύπος συμπεριφοράς που εξαρτάται από το φάρμακο παράγεται παρά την απουσία προηγούμενης έκθεσης σε φάρμακο (McClung et αϊ. 2004). Αυτός ο συμπεριφοριστικός φαινότυπος περιλαμβάνει μια ευαισθητοποιημένη κινητική απόκριση στην κοκαΐνη (Kelz et αϊ. 1999), αυξημένη προτίμηση για την κοκαΐνη (Kelz et αϊ. 1999) και μορφίνη (Ζαχαρίου et αϊ. 2006) και αυξημένη αυτοχορήγηση κοκαΐνης (Colby et αϊ. 2003).

Όπως και με την ανταμοιβή από φάρμακα, το ΔFosB ρυθμίζεται προς τα πάνω από φυσικές συμπεριφορές ανταμοιβής και μεσολαβεί στην έκφραση αυτών των συμπεριφορών. Η υπερέκφραση του ΔFosB στο NAc χρησιμοποιώντας μοντέλα τρωκτικών αυξάνει την εκούσια κίνηση του τροχού ( Werme et al . 2002 ), την οργανική ανταπόκριση για τροφή ( Olausson et al . 2006 ), την πρόσληψη σακχαρόζης ( Wallace et al . 2008 ) και διευκολύνει την ανδρική ( Wallace et al . 2008 ) και γυναικεία ( Bradley et al . 2005 ) σεξουαλική συμπεριφορά. Έτσι, το ΔFosB μπορεί να εμπλέκεται στη διαμεσολάβηση των επιδράσεων των φυσικών εμπειριών ανταμοιβής . Η παρούσα μελέτη επεκτείνει προηγούμενες μελέτες διερευνώντας συγκεκριμένα τον ρόλο του ΔFosB στο NAc στα μακροπρόθεσμα αποτελέσματα της σεξουαλικής εμπειρίας στην επακόλουθη συμπεριφορά ζευγαρώματος και την νευρωνική ενεργοποίηση στο μεσολιμβικό σύστημα.

  • Πρώτον, διαπιστώθηκε ποιες περιοχές του εγκεφάλου που εμπλέκονται στο κύκλωμα ανταμοιβής και τη σεξουαλική συμπεριφορά εκφράζουν ΔFosB που προκαλείται από την εμπειρία του σεξουαλικού επαγγέλματος.
  • Στη συνέχεια, η επίδραση επαγόμενου από την σεξουαλική επαφή ΔFosB στην προκαλούμενη από ζευγαρώματα έκφραση c-Fos, ένας κατάντη στόχος καταπιεσμένος από ΔFosB (Renthal et αϊ. 2008), διερευνήθηκε.
  • Τέλος, προσδιορίστηκε η επίδραση του χειρισμού της δραστικότητας του ΔFosB στο NAc (υπερβολική έκφραση γονιδίου και έκφραση δεσπόζοντος εταίρου αρνητικής δέσμευσης) στη σεξουαλική συμπεριφορά και την επαγόμενη από την εμπειρία διευκόλυνση της σεξουαλικής κινητοποίησης και της απόδοσης με χρήση τεχνολογίας παράδοσης ιικών φορέων.

ΜΕΘΟΔΟΙ

Animal

Ενήλικοι αρσενικοί αρουραίοι Sprague Dawley (200-225 γραμμάρια) ελήφθησαν από τα Charles River Laboratories (Senneville, QC, Καναδάς). Τα ζώα στεγάστηκαν σε κλουβιά από πλεξιγκλάς με σωλήνα σήραγγας σε ζεύγη του ίδιου φύλου καθ' όλη τη διάρκεια των πειραμάτων. Ο χώρος της αποικίας ρυθμιζόταν από τη θερμοκρασία και διατηρούνταν σε κύκλο φωτός-σκότους 12/12 ωρών με τροφή και νερό διαθέσιμα ad libitum εκτός από τις δοκιμές συμπεριφοράς. Τα θηλυκά ερεθίσματα (210-220 γραμμάρια) για τις συνεδρίες ζευγαρώματος έλαβαν υποδόριο εμφύτευμα που περιείχε 5% βενζοϊκή οιστραδιόλη και 95% χοληστερόλη μετά από αμφοτερόπλευρη ωοθηκεκτομή υπό βαθιά αναισθησία (0.35 g κεταμίνη/0.052 g ξυλαζίνη). Η σεξουαλική δεκτικότητα προκλήθηκε με χορήγηση 500 μg προγεστερόνης σε 0.1 mL σησαμέλαιου περίπου 4 ώρες πριν από τη δοκιμή. Όλες οι διαδικασίες εγκρίθηκαν από τις Επιτροπές Φροντίδας και Χρήσης Ζώων του Πανεπιστημίου του Δυτικού Οντάριο και συμμορφώθηκαν με τις οδηγίες της CCAC που αφορούν σπονδυλωτά ζώα στην έρευνα.

Σεξουαλική Συμπεριφορά

Οι συνεδρίες ζευγαρώματος πραγματοποιήθηκαν κατά την πρώιμη σκοτεινή φάση (μεταξύ 2-6 ωρών μετά την έναρξη της σκοτεινής περιόδου) υπό αμυδρό κόκκινο φωτισμό. Πριν από την έναρξη του πειράματος, τα ζώα χωρίστηκαν τυχαία σε ομάδες. Κατά τη διάρκεια των συνεδριών ζευγαρώματος, οι αρσενικοί αρουραίοι αφέθηκαν να συνουσιαστούν μέχρι την εκσπερμάτιση για 1 ώρα και καταγράφηκαν παράμετροι για τη σεξουαλική συμπεριφορά, όπως: λανθάνουσα κατάσταση εμφάνισης (ML, χρόνος από την εισαγωγή του θηλυκού μέχρι την πρώτη εμφάνιση), λανθάνουσα κατάσταση εναλλαγής (IL, χρόνος από την εισαγωγή του θηλυκού μέχρι την πρώτη εμφάνιση με κολπική διείσδυση), λανθάνουσα κατάσταση εκσπερμάτισης (EL, χρόνος από την πρώτη εμφάνιση έως την εκσπερμάτιση), διάστημα μετά την εκσπερμάτιση (PEI, χρόνος από την εκσπερμάτιση έως την πρώτη επακόλουθη εμφάνιση), αριθμός συνευρεύσεων (M, πυελική ώθηση χωρίς κολπική διείσδυση), αριθμός συνευρεύσεων (IM, εμφάνιση συμπεριλαμβανομένης της κολπικής διείσδυσης) και αποτελεσματικότητα συνουσίας (CE = IM/(M+IM)) ( Agmo 1997 ). Ο αριθμός των συνευρεύσεων και των συνευρεύσεων δεν συμπεριλήφθηκε στην ανάλυση για τα ζώα που δεν εμφάνισαν εκσπερμάτιση. Οι λανθάνουσες στιγμές εκσπερμάτισης και συνουσίας είναι παράμετροι που υποδεικνύουν το σεξουαλικό κίνητρο, ενώ η λανθάνουσα στιγμή εκσπερμάτισης, ο αριθμός των σεξ και η αποτελεσματικότητα της συνουσίας αντικατοπτρίζουν τη σεξουαλική απόδοση ( Hull 2002 ).

Πείραμα 1: Έκφραση ΔFosB

Αρσενικοί αρουραίοι που δεν είχαν σεξουαλική επαφή αφέθηκαν να ζευγαρώσουν σε καθαρά δοκιμαστικά κλουβιά (60 × 45 × 50 cm) για 5 συνεχόμενες, καθημερινές συνεδρίες ζευγαρώματος ή παρέμειναν σεξουαλικά αφελείς. Ο Συμπληρωματικός Πίνακας 1 περιγράφει το συμπεριφορικό παράδειγμα για τις πειραματικές ομάδες: αφελείς χωρίς σεξουαλική επαφή (NNS; n=5), αφελείς χωρίς σεξουαλική επαφή (NS; n=5), χωρίς σεξουαλική επαφή (ENS; n=5) και έμπειρο σεξ (ES; n=4). Τα ζώα NS και ES θυσιάστηκαν 1 ώρα μετά την εκσπερμάτιση την τελευταία ημέρα του ζευγαρώματος για να διερευνηθεί η έκφραση c-Fos που προκαλείται από τη ζευγαρώση. Τα ζώα NNS θυσιάστηκαν ταυτόχρονα με τα ζώα ENS 24 ώρες μετά την τελική συνεδρία ζευγαρώματος για να εξεταστεί το ΔFosB που προκαλείται από σεξουαλική εμπειρία. Οι ομάδες με σεξουαλική εμπειρία αντιστοιχίστηκαν για σεξουαλική συμπεριφορά πριν από τις επόμενες δοκιμές. Δεν ανιχνεύθηκαν σημαντικές διαφορές μεταξύ των ομάδων για τυχόν μετρήσεις συμπεριφοράς εντός της κατάλληλης συνεδρίας ζευγαρώματος και η διευκόλυνση της σεξουαλικής συμπεριφοράς που προκαλείται από σεξουαλική εμπειρία εμφανίστηκε και από τις δύο έμπειρες ομάδες ( Συμπληρωματικός Πίνακας 2 ). Οι έλεγχοι περιελάμβαναν σεξουαλικά αφελή αρσενικά που τα χειρίζονταν ταυτόχρονα με ζώα που ζευγαρώνονταν, διασφαλίζοντας την έκθεση σε θηλυκές οσμές και φωνές χωρίς άμεση επαφή με τα θηλυκά.

Για τη θυσία, τα ζώα αναισθητοποιήθηκαν βαθιά χρησιμοποιώντας πεντοβαρβιτάλη νατρίου (270mg/kg· ip) και εγχύθηκαν ενδοκαρδιακά με 50 mL φυσιολογικού ορού 0.9%, ακολουθούμενα από 500 mL παραφορμαλδεΰδης 4% σε ρυθμιστικό διάλυμα φωσφορικών 0.1 M (PB). Οι εγκέφαλοι αφαιρέθηκαν και σταθεροποιήθηκαν για 1 ώρα σε θερμοκρασία δωματίου στο ίδιο στερεωτικό, στη συνέχεια βυθίστηκαν σε 20% σακχαρόζη και 0.01% αζίδιο του νατρίου σε 0.1 M PB και αποθηκεύτηκαν στους 4°C. Οι στεφανιαίες τομές (35 µm) κόπηκαν με μικροτόμο κατάψυξης (H400R, Micron, Γερμανία), συλλέχθηκαν σε τέσσερις παράλληλες σειρές σε κρυοπροστατευτικό διάλυμα (30% σακχαρόζη και 30% αιθυλενογλυκόλη σε 0.1 M PB) και αποθηκεύτηκαν στους -20°C. Οι ελεύθερα επιπλέουσες τομές πλύθηκαν εκτενώς με φυσιολογικό ορό ρυθμισμένο με φωσφορικά 0.1 M (PBS· pH 7.3–7.4) μεταξύ των επωάσεων. Οι τομές εκτέθηκαν σε 1% H2O2 για 10 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου για την καταστροφή των ενδογενών υπεροξειδασών και στη συνέχεια μπλοκαρίστηκαν σε διάλυμα επώασης PBS+, το οποίο είναι PBS που περιέχει 0.1% αλβουμίνη ορού βοοειδών (στοιχείο καταλόγου 005-000-121· Jackson ImmunoResearch Laboratories, West Grove, PA) και 0.4% Triton X-100 (στοιχείο καταλόγου BP151-500· Sigma-Aldrich) για 1 ώρα. Οι τομές στη συνέχεια επωάστηκαν όλη τη νύχτα στους 4°C σε πολυκλωνικό αντίσωμα κουνελιού pan-FosB (1:5K· sc-48 Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, USA). Το αντίσωμα pan-FosB δημιουργήθηκε έναντι μιας εσωτερικής περιοχής που μοιράζονται το FosB και το ΔFosB. Τα κύτταρα ΔFosB-IR ήταν ειδικά ΔFosB-θετικά επειδή στον χρόνο μετά το ερέθισμα (24 ώρες) όλα τα ανιχνεύσιμα FosB που προκαλούνται από ερέθισμα αποικοδομούνται ( Perrotti et al . 2004 ; Perrotti et al . 2008 ). Επιπλέον, σε αυτό το πείραμα, τα ζώα που ζευγαρώνουν την τελευταία ημέρα (NS, ES) θυσιάστηκαν 1 ώρα μετά το ζευγάρωμα, δηλαδή πριν από την έκφραση FosB. Η ανάλυση Western blot επιβεβαίωσε την ανίχνευση του ΔFosB σε περίπου 37 kD. Μετά την επώαση του πρωτογενούς αντισώματος, οι τομές επωάστηκαν για 1 ώρα σε IgG κατσίκας κατά κουνελιού συζευγμένη με βιοτίνη (1:500 σε PBS+; Vector Laboratories, Burlingame, CA, ΗΠΑ) και στη συνέχεια 1 ώρα σε υπεροξειδάση αβιδίνης-βιοτίνης-ραπανιού (ABC elite; 1:1K σε PBS; Vector Laboratories, Burlingame, CA, ΗΠΑ). Μετά από αυτήν την επώαση, οι τομές υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με έναν από τους ακόλουθους τρόπους:

1. Ενιαία σήμανση υπεροξειδάσης

Τομές ζώων NNS και ENS χρησιμοποιήθηκαν για ανάλυση εγκεφάλου της συσσώρευσης ΔFosB που προκαλείται από σεξουαλική εμπειρία. Μετά την επώαση ABC, το σύμπλοκο υπεροξειδάσης απεικονίστηκε μετά από επεξεργασία για 10 λεπτά σε διάλυμα χρωμογόνου που περιείχε 0.02% τετραϋδροχλωρική 3,3'-διαμινοβενζιδίνη (DAB; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) ενισχυμένη με 0.02% θειικό νικέλιο σε 0.1 M PB με υπεροξείδιο του υδρογόνου (0.015%). Οι τομές πλύθηκαν καλά σε 0.1 M PB για να τερματιστεί η αντίδραση και τοποθετήθηκαν σε κωδικοποιημένες γυάλινες πλάκες Superfrost plus (Fisher, Pittsburgh, PA, ΗΠΑ) με 0.3% ζελατίνη σε ddH2O . Μετά την αφυδάτωση, όλες οι πλάκες καλύφθηκαν με DPX (φθαλικό διβουτύλιο ξυλόλιο).

2. Διπλός ανοσοφθορισμός

Για την ανάλυση των ΔFosB και c-Fos χρησιμοποιήθηκαν τομές και από τις τέσσερις πειραματικές ομάδες που περιείχαν NAc και mPFC. Μετά την επώαση με ABC, οι τομές επωάστηκαν για 10 λεπτά με βιοτινυλιωμένη τυραμίδη (BT· 1:250 σε PBS + 0.003% H2O2 Tyramid Signal Amplification Kit, NEN Life Sciences, Boston, MA) και για 30 λεπτά με στρεπαπιδίνη συζευγμένη με Alexa 488 (1:100· Jackson Immunoresearch Laboratories, West Grove, PA). Οι τομές στη συνέχεια επωάστηκαν όλη τη νύχτα με ένα πολυκλωνικό αντίσωμα κουνελιού που αναγνωρίζει ειδικά το c-Fos (1:150· sc-52· Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA), ακολουθούμενη από επώαση 30 λεπτών με δευτερογενές αντίσωμα συζευγμένο με Cy3 κατσίκας κατά κουνελιού (1:200· Jackson Immunoresearch Laboratories, West Grove, PA, USA). Μετά τη χρώση, οι τομές πλύθηκαν σχολαστικά σε διάλυμα PB 0.1 M, τοποθετήθηκαν σε κωδικοποιημένες γυάλινες αντικειμενοφόρες πλάκες με 0.3% ζελατίνη σε ddH2O και καλύφθηκαν με υδατικό μέσο στερέωσης (Gelvatol) που περιείχε τον παράγοντα κατά του ξεθωριάσματος 1,4-διαζαδικυκλο(2,2)οκτάνιο (DABCO· 50 mg/ml, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO). Οι ανοσοϊστοχημικοί έλεγχοι περιελάμβαναν παράλειψη ενός ή και των δύο πρωτογενών αντισωμάτων, με αποτέλεσμα την απουσία σήμανσης στο κατάλληλο μήκος κύματος.

Ανάλυση Δεδομένων

Ανάλυση εγκεφάλου του ΔFosB

Δύο πειραματιστές που δεν γνώριζαν τη θεραπεία πραγματοποίησαν την σάρωση σε ολόκληρο τον εγκέφαλο σε κωδικοποιημένες διαφάνειες. Τα ανοσοαντιδραστικά κύτταρα ΔFosB (-IR) σε όλο τον εγκέφαλο αναλύθηκαν ημιποσοτικά χρησιμοποιώντας μια κλίμακα που αντιπροσωπεύει τον αριθμό των θετικών κυττάρων ΔFosB, όπως περιγράφεται στον Πίνακα 1. Επιπλέον, με βάση τα ημιποσοτικά ευρήματα, ο αριθμός των κυττάρων ΔFosB-IR μετρήθηκε χρησιμοποιώντας τυπικές περιοχές ανάλυσης σε περιοχές του εγκεφάλου που εμπλέκονται στην ανταμοιβή και τη σεξουαλική συμπεριφορά χρησιμοποιώντας έναν σωλήνα σχεδίασης camera lucida συνδεδεμένο σε ένα μικροσκόπιο Leica DMRD (Leica Microsystems GmbH, Wetzlar, Γερμανία): NAc (πυρήνας (C) και κέλυφος (S)· 400×600µm) που αναλύθηκαν σε τρία ρυγχοουραία επίπεδα ( Balfour et al . 2004 ). κοιλιακή καλυπτρική περιοχή (VTA· 1000×800µm) που αναλύθηκε σε τρία ρυγχοουραία επίπεδα ( Balfour et al . 2004 ) και ουρά VTA ( Perrotti et al . 2005 ). προμετωπιαίος φλοιός (πρόσθια περιοχή προσαγωγίου (ACA)· προμεταιχμιακός φλοιός (PL)· υπομεταιχμιακός φλοιός (IL)· 600×800µm έκαστο)· κερκοφόρος πυρήνας (CP· 800×800µm)· και έσω προοπτικός πυρήνας (MPN· 400×600 µm) ( Συμπληρωματικά Σχήματα 1-3 ). Μετρήθηκαν δύο τομές ανά υποπεριοχή και υπολογίστηκε ο μέσος όρος ανά ζώο για τον υπολογισμό του μέσου όρου της ομάδας. Οι μέσοι όροι της ομάδας των κυττάρων ΔFosB-IR χωρίς σεξουαλική επαφή και με εμπειρία συγκρίθηκαν για κάθε υποπεριοχή χρησιμοποιώντας μη ζευγαρωμένες t-δοκιμές.

Πίνακας 1     

Περίληψη της έκφρασης του ΔFosB σε σεξουαλικά αφελώς και έμπειρα ζώα
Ανάλυση ΔFosB και c-Fos

Οι εικόνες καταγράφηκαν χρησιμοποιώντας μια ψυχόμενη κάμερα CCD (Microfire, Optronics) προσαρτημένη σε ένα μικροσκόπιο Leica (DM5000B, Leica Microsystems· Wetzlar, Germany) και λογισμικό Neurolucida (MicroBrightfield Inc) με σταθερές ρυθμίσεις κάμερας για όλα τα υποκείμενα (χρησιμοποιώντας 10x αντικειμενικούς φακούς). Ο αριθμός των κυττάρων που εκφράζουν c-Fos-IR ή ΔFosB-IR σε τυπικές περιοχές ανάλυσης στον πυρήνα και το κέλυφος NAc (400×600µm έκαστο· Συμπληρωματικό Σχήμα 1 ) και ACA του mPFC (600×800µm· Συμπληρωματικό Σχήμα 3 ) μετρήθηκε χειροκίνητα από έναν παρατηρητή που δεν γνώριζε τις πειραματικές ομάδες, σε 2 τομές ανά ζώο χρησιμοποιώντας το λογισμικό Neurolucida (MBF Bioscience, Williston, VT) και υπολογίστηκε ο μέσος όρος ανά ζώο. Οι μέσοι όροι των ομάδων των κυττάρων c-Fos ή ΔFosB συγκρίθηκαν χρησιμοποιώντας αμφίδρομη ANOVA (Παράγοντες: σεξουαλική εμπειρία και σεξουαλική δραστηριότητα) και Fisher LSD για συγκρίσεις post hoc σε επίπεδο σημαντικότητας 0.05.

Πείραμα 2: ΔFosB χειρισμός έκφρασης

Μεταφορά γονιδίου με τη μεσολάβηση του ιού

Αρσενικοί αρουραίοι Sprague Dawley, οι οποίοι δεν είχαν υποστεί σεξουαλική επαφή, χωρίστηκαν τυχαία σε ομάδες πριν από τη στερεοταξική χειρουργική επέμβαση. Όλα τα ζώα έλαβαν αμφοτερόπλευρες μικροεγχύσεις ανασυνδυασμένων φορέων αδενο-σχετιζόμενων ιών (rAAV) που κωδικοποιούν GFP (έλεγχος· n=12), ΔFosB άγριου τύπου (n=11) ή ενός κυρίαρχου-αρνητικού εταίρου σύνδεσης του ΔFosB που ονομάζεται ΔJunD (n=9) στο NAc. Το ΔJunD μειώνει τη μεταγραφή που προκαλείται από ΔFosB μέσω ανταγωνιστικού ετεροδιμερισμού με ΔFosB πριν από τη σύνδεση της περιοχής AP-1 εντός των γονιδιακών υποκινητών ( Winstanley et al . 2007 ). Ο τίτλος του ιού προσδιορίστηκε με qPCR και αξιολογήθηκε in vivo πριν από την έναρξη της μελέτης. Ο τίτλος ήταν 1–2 × 1011 μολυσματικά σωματίδια ανά mL. Οι φορείς rAAV εγχύθηκαν σε όγκο 1.5 µL/πλευρά σε διάστημα 7 λεπτών (συντεταγμένες: AP +1.5, ML +/-1.2 από το Bregma· DV −7.6 από την επιφάνεια του κρανίου σύμφωνα με τους Paxinos και Watson, 1998) χρησιμοποιώντας σύριγγα Hamilton (5µL· Harvard Apparatus, Holliston, MA, ΗΠΑ). Οι φορείς δεν παράγουν τοξικότητα μεγαλύτερη από τις εγχύσεις ελέγχου μόνοι τους ( Winstanley et al, 2007 · για λεπτομέρειες σχετικά με την παρασκευή AAV, βλέπε Hommel et al., 2003 ). Τα πειράματα συμπεριφοράς ξεκίνησαν 3 εβδομάδες μετά τις ενέσεις φορέων, επιτρέποντας τη βέλτιστη και σταθερή ιική μόλυνση ( Wallace et al . 2008 ). Η έκφραση τρανσγονιδίων σε είδη ποντικών κορυφώνεται στις 10 ημέρες και παραμένει αυξημένη για τουλάχιστον 6 μήνες ( Winstanley et al . 2007 ). Στο τέλος του πειράματος, τα ζώα υποβλήθηκαν σε διακαρδιακή έγχυση και οι τομές NAc υποβλήθηκαν σε ανοσοεπεξεργασία για GFP (1:20K· αντίσωμα κουνελιού κατά της GFP· Molecular Probes) χρησιμοποιώντας μια αντίδραση ABC-υπεροξειδάσης-DAB (όπως περιγράφεται παραπάνω) για την ιστολογική επαλήθευση των θέσεων ένεσης χρησιμοποιώντας GFP ως δείκτη ( Συμπληρωματικό Σχήμα 4 ). Οι φορείς ΔFosB και ΔJunD περιέχουν επίσης ένα τμήμα που εκφράζει GFP διαχωριζόμενο από μια εσωτερική θέση ριβοσωμικής εισόδου, επιτρέποντας την επαλήθευση της θέσης ένεσης μέσω οπτικοποίησης GFP σε όλα τα ζώα. Μόνο ζώα με θέσεις ένεσης και εξάπλωση του ιού περιορισμένη στο NAc συμπεριλήφθηκαν στις στατιστικές αναλύσεις. Η εξάπλωση του ιού γενικά περιοριζόταν σε ένα τμήμα του NAc και δεν εξαπλώθηκε ροφικά-ουραία σε όλο τον πυρήνα. Επιπλέον, η εξάπλωση του ιού φάνηκε να περιορίζεται κυρίως είτε στο κέλυφος είτε στον πυρήνα. Ωστόσο, η διακύμανση των θέσεων ένεσης και η εξάπλωση εντός του NAc δεν επηρέασε τις επιδράσεις στη συμπεριφορά. Τέλος, οι ενέσεις GFP δεν επηρέασαν τη σεξουαλική συμπεριφορά ή τη διευκόλυνση της σεξουαλικής συμπεριφοράς που προκαλείται από την εμπειρία σε σύγκριση με ζώα που δεν υποβλήθηκαν σε χειρουργική επέμβαση από προηγούμενες μελέτες ( Balfour et al . 2004 ).

Σεξουαλική Συμπεριφορά

Τρεις εβδομάδες μετά την παράδοση του ιικού φορέα, τα ζώα ζευγαρώθηκαν σε μία εκσπερμάτιση (ή για 1 ώρα) για διαδοχικές, καθημερινές συνεδρίες ζευγαρώματος 4 για να αποκτήσουν σεξουαλική εμπειρία (σεμινάρια εμπειρίας) και στη συνέχεια δοκιμάστηκαν για μακροχρόνια έκφραση εμπειρίας που προκάλεσε τη διευκόλυνση της σεξουαλικής συμπεριφοράς 1 και εβδομάδες 2 (δοκιμαστικές συνεδρίες 1 και 2) μετά την τελική περίοδο λειτουργίας. Οι παράμετροι σεξουαλικής συμπεριφοράς καταγράφηκαν κατά τη διάρκεια όλων των συνόδων ζευγαρώματος όπως περιγράφηκε παραπάνω. Οι στατιστικές διαφορές για όλες τις παραμέτρους κατά τη διάρκεια κάθε περιόδου ζευγαρώματος συγκρίθηκαν εντός και μεταξύ των ομάδων με τη χρήση αμφίδρομων επαναλαμβανόμενων μετρήσεων ANOVAs (παράγοντες: θεραπεία και σύζευξη) ή μονόδρομων ANOVA (λανθάνουσα εκσπερμάτωση, αριθμός αναρτήσεων και intromissions, Παράγοντας: συνεδρία) ακολουθούμενη από δοκιμές Fisher LSD ή Newman-Keuls για μετα-hoc συγκρίσεις σε επίπεδο σημαντικότητας του 0.05. Συγκεκριμένα, οι διευκολυντικές επιδράσεις της σεξουαλικής εμπειρίας σε παράμετροι ζευγαρώματος συγκρίθηκαν μεταξύ της συνεδρίας εμπειρίας 1 (πρωτότυπη) και των περιόδων εμπειρίας 2, 3 ή 4 η καθεμία, καθώς και μεταξύ πειραματικών ομάδων σε κάθε περίοδο εμπειρίας. Επιπλέον, για να αναλυθούν οι επιδράσεις της θεραπείας (φορέας) στη μακροπρόθεσμη διευκόλυνση της σεξουαλικής συμπεριφοράς, οι παράμετροι ζευγαρώματος συγκρίθηκαν μεταξύ της συνεδρίας εμπειρίας 4 και της δοκιμαστικής συνόδου 1 και 2 σε κάθε ομάδα θεραπείας και συγκρίθηκαν μεταξύ των πειραματικών ομάδων σε κάθε δοκιμαστική περίοδο.

ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ

Η σεξουαλική εμπειρία προκαλεί συσσώρευση ΔFosB

Αρχικά, διεξήχθη μια ημι-ποσοτική διερεύνηση της συσσώρευσης ΔFosB σε όλο τον εγκέφαλο σε άνδρες με σεξουαλική εμπειρία σε σύγκριση με άτομα ελέγχου που δεν είχαν σεξουαλική επαφή. Μια σύνοψη των συνολικών ευρημάτων παρέχεται στον Πίνακα 1. Η ανάλυση ΔFosB-IR βελτιώθηκε περαιτέρω με τον προσδιορισμό του αριθμού των κυττάρων ΔFosB-IR σε διάφορες περιοχές του εγκεφάλου που σχετίζονται με το μεταιχμιακό σύστημα χρησιμοποιώντας τυπικές περιοχές ανάλυσης. Το Σχήμα 1 δείχνει αντιπροσωπευτικές εικόνες χρώσης DAB-Ni του NAc ζώων που δεν είχαν σεξουαλική επαφή και ζώων με σεξουαλική εμπειρία. Σημαντική ανοδική ρύθμιση ΔFosB βρέθηκε στις υποπεριοχές mPFC ( Σχήμα 2Α ), στον πυρήνα και το κέλυφος του NAc (2Β), στο κερκοφόρο κέλυφος (2Β) και στο VTA (2C). Στο NAc, υπήρχαν σημαντικές διαφορές σε όλα τα ρυγχοουραία επίπεδα στον πυρήνα και το κέλυφος του NAc, και τα δεδομένα που φαίνονται στο Σχήμα 2 είναι ο μέσος όρος σε όλα τα ρυγχοουραία επίπεδα. Αντίθετα, δεν υπήρξε σημαντική αύξηση στο ΔFosB-IR στον υποθαλαμικό έσω προοπτικό πυρήνα (NNS: Μέσος όρος 1.8 +/- 0.26; ENS: Μέσος όρος 6.0 +/- 1.86).

Εικόνα 1    

 

Αντιπροσωπευτικές εικόνες που δείχνουν ΔFosB-IR κύτταρα (μαύρο) στο ΝΑc του naïve χωρίς φύλο (Α) και δεν βιώνουν ομάδες σεξ (Β). aco: πρόσοψη της γραμμής κλίμακας δείχνει 100 μm.
Εικόνα 2      

Αριθμός ΔFosB-IR κυττάρων σε: Α. Απεριόριστες (IL), προκλιμικές (PL) και πρόσθιες περιοχές του φλοιού του κερατοειδούς (ACA) του μέσου προμετωπιαίου φλοιού. Β. Πυρήνας και κέλυφος του πυρήνα πυρήνα, και φλυτζάνι καρυδιού (CP). C. Rostral, μέση, ουρά και ουρά ...

Η σεξουαλική εμπειρία εξασθενεί την προκαλούμενη από ζευγαρώματα c-Fos

Η επίδραση της σεξουαλικής εμπειρίας στα επίπεδα του ΔFosB στο NAc επιβεβαιώθηκε χρησιμοποιώντας τεχνικές χρώσης φθορισμού. Επιπλέον, αναλύθηκαν τα αποτελέσματα της σεξουαλικής εμπειρίας στην έκφραση του c-Fos. Εικόνα 3 παρουσιάζει αντιπροσωπευτικές εικόνες των ΔFosB- (πράσινων) και c-Fos (κόκκινων) -IR κυττάρων σε όλες τις πειραματικές ομάδες (A, NNS, B, NS, C, ENS, D, ES). Η σεξουαλική εμπειρία αύξησε σημαντικά την έκφραση του ΔFosB στον πυρήνα NAc (Σχήμα 4A: F1,15 = 12.0; p = 0.003) και το κέλυφος (Σχήμα 4C: F1,15 = 9.3; p = 0.008). Αντιθέτως, το ζευγάρωμα της 1 ώρα πριν από τη διάχυση, δεν είχε επίδραση στην έκφραση του ΔFosB (Σχήμα 4A, C) και δεν ανιχνεύθηκε καμία αλληλεπίδραση μεταξύ σεξουαλικής εμπειρίας και ζευγαρώματος αμέσως πριν από τη διάχυση. Υπήρχε μια συνολική επίδραση του ζευγαρώματος πριν από την έγχυση στην έκφραση c-Fos και στον πυρήνα NAc (Σχήμα 4B: F1,15 = 27.4; p <0.001) και κέλυφος (Σχήμα 4D: F1,15 = 39.4; ρ <0.001). Επιπλέον, μια γενική επίδραση της σεξουαλικής εμπειρίας εντοπίστηκε στον πυρήνα NAc (Σχήμα 4B: F1,15 = 6.1; p = 0.026) και το κέλυφος (Σχήμα 4D: F1,15 = 1.7; p = 0.211) και ανιχνεύθηκε αλληλεπίδραση μεταξύ της σεξουαλικής εμπειρίας και του ζευγαρώματος πριν από τη διάχυση στον πυρήνα NAc (F1,15 = 6.5; p = 0.022), με τάση στο κέλυφος (F1,15 = 1.7; p = 0.211. φά1,15 = 3.4; p = 0.084). Οι αναλύσεις post hoc κατέδειξαν την επαγόμενη από ζευγαρώματα έκφραση c-Fos στον πυρήνα και το κέλυφος των σεξουαλικά αγενούς αρσενικών (Σχήμα 4B, D). Ωστόσο, σε σεξουαλικά έμπειρους άνδρες, το c-Fos δεν αυξήθηκε σημαντικά σε πυρήνα NAc (Σχήμα 4B) και σημαντικά εξασθενημένο στο κέλυφος (Σχήμα 4D). Έτσι, η σεξουαλική εμπειρία προκάλεσε μείωση της επαγόμενης από ζευγαρώματα έκφρασης c-Fos. Οι τιμές P για συγκεκριμένες συγκρίσεις με ζευγάρια είναι οι μύθοι του σχήματος.

Εικόνα 3      

Αντιπροσωπευτικές εικόνες που δείχνουν ΔFosB (πράσινο) και c-Fos (κόκκινο) σε NAc για κάθε πειραματική ομάδα. Η γραμμή κλίμακας υποδεικνύει το 100 μm.
Εικόνα 4      

Διεγειρόμενη από εμπειρία σε σεξουαλική επαφή ΔFosB και επαγόμενη από ζευγαρώματα c-Fos. Οι αριθμοί των ανοσοαντιδραστικών κυττάρων ΔFosB (πυρήνας, Α, Shell, C, ACA, E) ή c-Fos (Core, Β, Shell, D; ACA, F) για κάθε ομάδα: NNS (n = 5) 5), ENS (n = 5) ή ES (n = 4). Τα δεδομένα εκφράζονται ...

Η επίδραση της σεξουαλικής εμπειρίας στα επίπεδα c-Fos που προκαλούνται από το ζευγάρωμα δεν περιορίστηκε στο NAc. Μια παρόμοια εξασθένηση της έκφρασης c-Fos παρατηρήθηκε στο ACA σε ζώα με σεξουαλική εμπειρία σε σύγκριση με ζώα ελέγχου που δεν είχαν σεξουαλική επαφή. Η σεξουαλική εμπειρία είχε σημαντική επίδραση στην έκφραση ΔFosB στο ACA ( Σχήμα 4Ε : F 1,15 = 154.2; p < 0.001). Το ζευγάρωμα πριν από την έγχυση δεν είχε επίδραση στην έκφραση ΔFosB ( Σχήμα 4C ), αλλά αύξησε σημαντικά το c-Fos ( Σχήμα 4F : F 1,15 = 203.4; p < 0.001) στο ACA. Επιπλέον, η έκφραση c-Fos που προκαλείται από το ζευγάρωμα στο ACA μειώθηκε σημαντικά από τη σεξουαλική εμπειρία ( Σχήμα 4F : F 1,15 = 15.8; p = 0.001). Μια αμφίδρομη αλληλεπίδραση μεταξύ της σεξουαλικής εμπειρίας και του ζευγαρώματος πριν από την έγχυση ανιχνεύθηκε για την έκφραση c-Fos ( Σχήμα 4F : F 1,15 = 15.1; p < 0.001). Οι τιμές P για συγκεκριμένες συγκρίσεις ανά ζεύγη βρίσκονται στις λεζάντες των σχημάτων. Τέλος, δεν υπήρξε σημαντική μείωση στην έκφραση c-Fos που προκαλείται από το ζευγάρωμα στον έσω προοπτική πυρήνα (NS: Μέσος όρος 63.5 +/- 4.0; ES: Μέσος όρος 41.4 +/- 10.09), μια περιοχή όπου η εμπειρία ζευγαρώματος δεν προκάλεσε σημαντική αύξηση στην έκφραση ΔFosB, υποδεικνύοντας ότι η έκφραση c-Fos που προκαλείται από το ζευγάρωμα δεν επηρεάστηκε σε όλες τις περιοχές του εγκεφάλου.

Το ΔFosB στο NAc μεσολαβεί στην ενίσχυση της σεξουαλικής συμπεριφοράς

Για να διερευνηθεί ένας δυνητικός μοριακός μηχανισμός για την ενίσχυση της σεξουαλικής συμπεριφοράς, όπως αποδεικνύεται από την επαγόμενη από την εμπειρία διευκόλυνση της σεξουαλικής συμπεριφοράς, προσδιορίστηκαν οι επιδράσεις του τοπικού χειρισμού των επιπέδων του ΔFosB και της μεταγραφικής του δράσης. Η σεξουαλική εμπειρία κατά τη διάρκεια των τεσσάρων διαδοχικών περιόδων εμπειρίας είχε σημαντική επίδραση στην λανθάνουσα κατάσταση εγκατάστασης (Σχήμα 5A: F1,23 = 13.8; p = 0.001), λανθάνουσα καθυστέρηση (Σχήμα 5B: F1,23 = 18.1; p <0.001) και καθυστέρηση εκσπερμάτωσης (Σχήμα 5C: GFP, F11,45 = 3.8; p = 0.006). Τα ζώα ελέγχου GFP εμφάνισαν την αναμενόμενη εμπειρία που προκάλεσε τη διευκόλυνση της σεξουαλικής συμπεριφοράς και εμφάνισαν σημαντικά χαμηλότερες λανθάνουσες περιόδους πρώτης τοποθέτησης, πρώτης εισόδου και εκσπερμάτωσης κατά τη διάρκεια της συνεδρίας εμπειρίας 4 σε σύγκριση με την εμπειρία 1Σχήμα 5A-C. βλ. σχήμα μύθου για p τιμές). Αυτή η επαγόμενη από την εμπειρία διευκόλυνση της σεξουαλικής συμπεριφοράς παρατηρήθηκε επίσης στην ομάδα ΔFosB για λανθάνουσες περιόδους σύνδεσης και εισόδου, αλλά δεν διαπιστώθηκε σημαντική διαφορά στην λανθάνουσα κατάσταση εκσπερμάτωσης (Σχήμα 5A-C). Αντίθετα, τα ζώα ΔJunD εμφάνιζαν μια απροσδόκητη διευκόλυνση. παρόλο που οι λανθάνουσες περιόδους για αναρτήσεις, intromissions και εκσπερμάτιση μειώθηκαν με επαναλαμβανόμενες συνεδρίες ζευγαρώματος, καμία από αυτές τις παραμέτρους δεν έφθασε στατιστική σημασία όταν συγκρίθηκε μεταξύ των συνόδων εμπειρίας 1 και 4 (Σχήμα 5A-C). Μεταξύ των συγκρίσεων των ομάδων για κάθε περίοδο εμπειρίας προκύπτει ότι το ΔJunD είχε σημαντικά μεγαλύτερες λανθάνουσες περιόδους για την προσπέλαση, την είσοδο και την εκσπερμάτωση κατά τη διάρκεια των συνεδριών εμπειρίας σε σύγκριση με το ΔFosB και το GFPΣχήμα 5A-C). Επιπλέον, τόσο η σεξουαλική εμπειρία όσο και η θεραπευτική αγωγή είχαν σημαντικές επιπτώσεις στην αποτελεσματικότητα του συνδυασμού (Σχήμα 5F: σεξουαλική εμπειρία, F1,12 = 22.5; ρ <0.001; θεραπεία, F1,12 = 3.3; p = 0.049). Τα αρσενικά ΔFosB είχαν αυξημένη αποτελεσματικότητα συσσώρευσης κατά τη διάρκεια της συνεδρίας εμπειρίας 4 σε σύγκριση με την εμπειρία 1 (Σχήμα 5F). Επιπλέον, τα ζώα ΔFosB είχαν σημαντικά λιγότερες αναρτήσεις πριν από την εκσπερμάτωση κατά τη διάρκεια της συνεδρίας της ημέρας 4, σε σύγκριση με την εμπειρία 1 (Σχήμα 5D: F10,43 = 4.1; p = 0.004), και ότι τα αρσενικά ΔJunD είχαν σημαντικά περισσότερες αναρτήσεις πριν από την εκσπερμάτωση, μειώνοντας έτσι σημαντικά την αποτελεσματικότητα της συσσώρευσης, σε σχέση με τις δύο άλλες ομάδες (Σχήμα 5D και F). Έτσι, τα ζώα GFP και ΔFosB εμφάνισαν την επαγόμενη από την εμπειρία διευκόλυνση της έναρξης της σεξουαλικής συμπεριφοράς και της σεξουαλικής απόδοσης, ενώ τα ζώα ΔJunD δεν το έκαναν.

Εικόνα 5      

Σεξουαλική συμπεριφορά των ζώων GFP (n = 12), ΔFosB (n = 11) και ΔJunD (n = 9): λανθάνουσα κατάσταση εγκατάστασης (A), λανθάνουσα δόση (Β) ο αριθμός των intromissions (E) και η αποτελεσματικότητα συσσώρευσης (F). Τα δεδομένα εκφράζονται ...

Για να ελεγχθεί η υπόθεση ότι η έκφραση ΔFosB είναι κρίσιμη για τη μακροπρόθεσμη έκφραση της διευκόλυνσης της σεξουαλικής συμπεριφοράς που προκαλείται από την εμπειρία, τα ζώα εξετάστηκαν 1 εβδομάδα (δοκιμαστική συνεδρία 1) και 2 εβδομάδες (δοκιμαστική συνεδρία 2) μετά την τελική συνεδρία εμπειρίας. Πράγματι, η διευκολυνόμενη σεξουαλική συμπεριφορά διατηρήθηκε τόσο στις ομάδες GFP όσο και ΔFosB, καθώς καμία από τις παραμέτρους συμπεριφοράς δεν διέφερε μεταξύ των συνεδριών δοκιμής 1 ή 2 και της τελικής συνεδρίας εμπειρίας 4, εντός των ομάδων GFP και ΔFosB ( Σχήμα 5Α-Γ · εκτός από την καθυστέρηση εκσπερμάτισης και την αποτελεσματικότητα της συνουσίας στη δοκιμαστική συνεδρία 1 για τα ζώα ΔFosB). Σημαντικές διαφορές μεταξύ των ζώων ΔJunD και των ομάδων GFP ή ΔFosB ανιχνεύθηκαν και στις δύο δοκιμαστικές συνεδρίες για όλες τις παραμέτρους σεξουαλικής συμπεριφοράς ( Σχήμα 5Α-ΣΤ ). Δεν εντοπίστηκαν διαφορές μεταξύ ή εντός των ομάδων κατά τη σύγκριση του αριθμού των ενδομυϊκών επαφών, του PEI ή των ποσοστών των ζώων που εκσπερμάτισαν (100% των αρσενικών σε όλες τις ομάδες εκσπερμάτισαν κατά τη διάρκεια των τελευταίων τεσσάρων συνεδριών ζευγαρώματος).

ΣΥΖΗΤΗΣΗ

Η τρέχουσα μελέτη κατέδειξε ότι η σεξουαλική εμπειρία προκαλεί συσσώρευση ΔFosB σε διάφορες περιοχές του εγκεφάλου που σχετίζονται με το μεταιχμιακό τμήμα, συμπεριλαμβανομένου του πυρήνα και του κελύφους του NAc, του mPFC, του VTA και του κερκοφόρου κέλυφους. Επιπλέον, η σεξουαλική εμπειρία εξασθένησε την έκφραση του c-Fos που προκαλείται από το ζευγάρωμα στο NAc και το ACA. Τέλος, το ΔFosB στο NAc αποδείχθηκε κρίσιμο στη μεσολάβηση της διευκόλυνσης του ζευγαρώματος κατά την απόκτηση σεξουαλικής εμπειρίας και της μακροπρόθεσμης έκφρασης της διευκόλυνσης της σεξουαλικής συμπεριφοράς που προκαλείται από την εμπειρία . Συγκεκριμένα, η μείωση της μεταγραφής που προκαλείται από ΔFosB εξασθένησε τη διευκόλυνση του σεξουαλικού κινήτρου και της απόδοσης που προκαλείται από την εμπειρία, ενώ η υπερέκφραση του ΔFosB στο NAc προκάλεσε ενισχυμένη διευκόλυνση της σεξουαλικής συμπεριφοράς, όσον αφορά την αυξημένη σεξουαλική απόδοση με λιγότερη εμπειρία. Συνολικά, τα τρέχοντα ευρήματα υποστηρίζουν την υπόθεση ότι το ΔFosB είναι ένας κρίσιμος μοριακός μεσολαβητής για τη μακροπρόθεσμη νευρωνική και συμπεριφορική πλαστικότητα που προκαλείται από τη σεξουαλική εμπειρία.

Τα τρέχοντα ευρήματα επεκτείνουν προηγούμενες μελέτες που έδειξαν ΔFosB που προκαλείται από σεξουαλική εμπειρία στο NAc σε αρσενικούς αρουραίους ( Wallace et al . 2008 ) και θηλυκά χάμστερ ( Hedges et al . 2009 ). Οι Wallace et al. (2008) έδειξαν ότι η υπερέκφραση rAAV-ΔFosB στο NAc ενίσχυσε τη σεξουαλική συμπεριφορά σε σεξουαλικά άγευστα ζώα κατά την πρώτη συνεδρία ζευγαρώματος, όπως αποδεικνύεται από λιγότερες παρεμβολές στην εκσπερμάτιση και μικρότερα διαστήματα μετά την εκσπερμάτιση, αλλά δεν είχε καμία επίδραση σε αρσενικά με σεξουαλικά εμπειρία ( Wallace et al . 2008 ).

Αντίθετα, η παρούσα μελέτη δεν κατέδειξε επιδράσεις της υπερέκφρασης ΔFosB σε σεξουαλικά αφελείς άνδρες κατά την πρώτη δοκιμή, αλλά μάλλον κατά τη διάρκεια και μετά την απόκτηση σεξουαλικής εμπειρίας. Τα ζώα με υπερέκφραση ΔFosB επέδειξαν αυξημένη σεξουαλική απόδοση (αυξημένη αποτελεσματικότητα συνουσίας) σε σύγκριση με τα ζώα GFP.

Επιπλέον, η παρούσα μελέτη εξέτασε τον ρόλο του ΔFosB μπλοκάροντας την μεταγραφή που προκαλείται από ΔFosB χρησιμοποιώντας έναν ιικό φορέα που εκφράζει ΔJunD. Η πρόληψη της αύξησης της έκφρασης ΔFosB που προκαλείται από την εμπειρία ανέστειλε την διευκόλυνση του σεξουαλικού κινήτρου που προκαλείται από την εμπειρία (αυξημένες καθυστερήσεις εκσπερμάτισης και ενδομητρίωσης), καθώς και τη σεξουαλική απόδοση (αυξημένη καθυστέρηση εκσπερμάτισης και αριθμός εκσπερματώσεων) και την επακόλουθη μακροχρόνια έκφραση της διευκολυνόμενης σεξουαλικής συμπεριφοράς.

Ως εκ τούτου, αυτά τα δεδομένα είναι τα πρώτα που υποδεικνύουν έναν υποχρεωτικό ρόλο για το ΔFosB στην απόκτηση της διευκόλυνσης της σεξουαλικής συμπεριφοράς που προκαλείται από την εμπειρία. Επιπλέον, αυτά τα δεδομένα δείχνουν ότι το ΔFosB εμπλέκεται επίσης κρίσιμα στη μακροπρόθεσμη έκφραση της διευκολυνόμενης συμπεριφοράς που προκαλείται από την εμπειρία. Προτείνουμε ότι αυτή η μακροπρόθεσμη έκφραση της διευκολυνόμενης συμπεριφοράς αντιπροσωπεύει μια μορφή μνήμης για φυσική ανταμοιβή, επομένως το ΔFosB στο NAc είναι ένας μεσολαβητής της μνήμης ανταμοιβής. Η σεξουαλική εμπειρία αύξησε επίσης τα επίπεδα ΔFosB στο VTA και το mPFC, περιοχές που εμπλέκονται στην ανταμοιβή και τη μνήμη ( Balfour et al . 2004 ; Phillips et al . 2008 ). Απαιτούνται μελλοντικές μελέτες για να διευκρινιστεί μια πιθανή σημασία της ανοδικής ρύθμισης του ΔFosB σε αυτές τις περιοχές για τη μνήμη ανταμοιβής.

Η έκφραση του ΔFosB είναι άκρως σταθερή και συνεπώς έχει μεγάλο δυναμικό ως μοριακό μεσολαβητή επίμονων προσαρμογών του εγκεφάλου μετά από χρόνιες διαταραχές (Φωλιάζων et αϊ. 2001). Έχει αποδειχθεί ότι το ΔFosB αυξάνει σταδιακά το NAc έναντι πολλαπλών ενέσεων κοκαΐνης και παραμένει για αρκετές εβδομάδες (Ελπίζω et αϊ. 1992; Ελπίζω et αϊ. 1994). Αυτές οι μεταβολές στην έκφραση NAc ΔFosB συνδέονται με την ευαισθητοποίηση και την εξάρτηση ανταμοιβής φαρμάκων (Chao & Nestler 2004; McClung & Nestler 2003; McClung et αϊ. 2004; Nestler 2004, 2005, 2008; Φωλιάζων et αϊ. 2001; Ζαχαρίου et αϊ. 2006). Αντίθετα, ο ρόλος του ΔFosB στη διαμεσολάβηση της φυσικής ανταμοιβής έχει μελετηθεί. Πρόσφατα στοιχεία προέκυψαν υποδηλώνοντας ότι η επαγωγή του ΔFosB στο NAc εμπλέκεται στη φυσική ανταμοιβή. Τα επίπεδα ΔFosB αυξάνονται παρομοίως στο ΝΑο μετά την πρόσληψη σακχαρόζης και τη λειτουργία του τροχού. Η υπερ-έκφραση του ΔFosB στο ραβδωτό σώμα χρησιμοποιώντας δυρανδενικούς ποντικούς ή ιικούς φορείς σε αρουραίους προκαλεί αύξηση της πρόσληψης σακχαρόζης, βελτιωμένο κίνητρο για τροφή και αυξημένη αυθόρμητη λειτουργία τροχού (Olausson et αϊ. 2006; Wallace et αϊ. 2008; Werme et αϊ. 2002). Τα σημερινά δεδομένα προσθέτουν ουσιαστικά σε αυτές τις αναφορές και υποστηρίζουν περαιτέρω την ιδέα ότι το ΔFosB είναι ένας κρίσιμος μεσολαβητής για την ενίσχυση της ανταμοιβής και τη φυσική μνήμη ανταμοιβής.

Το ΔFosB μπορεί να μεσολαβεί στην ενίσχυση της σεξουαλικής συμπεριφοράς που προκαλείται από την εμπειρία μέσω της επαγωγής πλαστικότητας στο μεσολομυϊκό σύστημα. Πράγματι, η σεξουαλική εμπειρία προκαλεί μια σειρά από μακροχρόνιες αλλαγές στο μεσολομυϊκό σύστημα ( Bradley & Meisel 2001 ; Frohmader et al . 2009 ; Pitchers et al . 2010 ). Σε επίπεδο συμπεριφοράς, έχει παρατηρηθεί ευαισθητοποιημένη κινητική απόκριση στην αμφεταμίνη και αυξημένη ανταμοιβή από αμφεταμίνη σε αρσενικούς αρουραίους με σεξουαλική εμπειρία ( Pitchers et al . 2010 ). Έχει επίσης παρατηρηθεί αλλοιωμένη κινητική απόκριση στην αμφεταμίνη σε θηλυκά χάμστερ ( Bradley & Meisel 2001 ). Επιπλέον, έχουν βρεθεί αυξήσεις στον αριθμό των δενδριτικών άκανθων και στην πολυπλοκότητα των δενδριτικών άξονων μετά από μια περίοδο αποχής από τη σεξουαλική εμπειρία σε αρσενικούς αρουραίους ( Pitchers et al . 2010 ) . Η τρέχουσα μελέτη υποδηλώνει ότι το ΔFosB μπορεί να είναι ένας ειδικός μοριακός μεσολαβητής των μακροπρόθεσμων αποτελεσμάτων της σεξουαλικής εμπειρίας. Σε συμφωνία, πρόσφατα αποδείχθηκε ότι το ΔFosB είναι σημαντικό για την πρόκληση αλλαγών στη δενδριτική σπονδυλική στήλη ως απόκριση στη χρόνια χορήγηση κοκαΐνης ( Dietz et al . 2009 ; Maze et al . 2010 ).

Δεν είναι σαφές ποιος/ποιοι ανοδικοί νευροδιαβιβαστές είναι υπεύθυνοι για την επαγωγή ΔFosB στο NAc, αλλά η DA έχει προταθεί ως υποψήφιος ( Nye et al . 1995 ). Σχεδόν όλα τα ναρκωτικά κατάχρησης, συμπεριλαμβανομένης της κοκαΐνης, της αμφεταμίνης, των οπιοειδών, των κανναβινοειδών και της αιθανόλης, καθώς και οι φυσικές ανταμοιβές, αυξάνουν τη ΔFosB στο NAc ( Perrotti et al . 2005 ; Wallace et al . 2008 ; Werme et al . 2002 ). Τόσο τα ναρκωτικά κατάχρησης όσο και οι φυσικές ανταμοιβές αυξάνουν τη συναπτική συγκέντρωση DA στο NAc ( Damsma et al . 1992 ; Hernandez & Hoebel 1988a , b ; Jenkins & Becker 2003 ). Η επαγωγή ΔFosB από ναρκωτικά κατάχρησης έχει αποδειχθεί σε κύτταρα που περιέχουν υποδοχέα DA και το ΔFosB που προκαλείται από κοκαΐνη μπλοκάρεται από έναν ανταγωνιστή υποδοχέα D1 DA ( Nye et al . 1995 ). Ως εκ τούτου, η απελευθέρωση DA υποτίθεται ότι διεγείρει την έκφραση ΔFosB και έτσι μεσολαβεί στη νευροπλαστικότητα που σχετίζεται με την ανταμοιβή . Περαιτέρω υποστήριξη της ιδέας ότι τα επίπεδα ΔFosB εξαρτώνται από την DA είναι το εύρημα ότι οι περιοχές του εγκεφάλου όπου η σεξουαλική εμπειρία άλλαξε τα επίπεδα ΔFosB λαμβάνουν ισχυρή ντοπαμινεργική εισροή από το VTA, συμπεριλαμβανομένου του μέσου προμετωπιαίου φλοιού και της βασοπλευρικής αμυγδαλής.

Ωστόσο, αντίθετα, η ΔFosB δεν αυξάνεται στην έσω προοπτική περιοχή, παρόλο που αυτή η περιοχή λαμβάνει ντοπαμινεργική ώθηση, αν και από υποθαλαμικές πηγές ( Miller & Lonstein 2009 ). Απαιτούνται μελλοντικές μελέτες για να ελεγχθεί εάν η έκφραση ΔFosB που προκαλείται από το ζευγάρωμα και οι επιδράσεις της σεξουαλικής εμπειρίας στο σεξουαλικό κίνητρο και την απόδοση εξαρτώνται από τη δράση της DA. Ο ρόλος της DA στη σεξουαλική ανταμοιβή σε αρσενικούς αρουραίους δεν είναι προς το παρόν απολύτως σαφής ( Agmo & Berenfeld 1990 ; Pfaus 2009 ). Υπάρχουν άφθονα στοιχεία ότι η DA απελευθερώνεται στο NAc κατά την έκθεση σε ένα θηλυκό ή κατά το ζευγάρωμα ( Damsma et al . 1992 ) και οι νευρώνες DA ενεργοποιούνται κατά τη διάρκεια της σεξουαλικής συμπεριφοράς ( Balfour et al . 2004 ). Ωστόσο, οι συστηματικές ενέσεις ανταγωνιστή υποδοχέα DA δεν εμποδίζουν την εξαρτημένη προτίμηση θέσης που προκαλείται από τη σεξουαλική ανταμοιβή ( Agmo & Berenfeld 1990 ) και η υπόθεση ότι η DA είναι κρίσιμη για την ενίσχυση του ζευγαρώματος που προκαλείται από την εμπειρία δεν έχει δοκιμαστεί.

Επίσης, δεν είναι σαφές ποιοι είναι οι κατάντη μεσολαβητές των δράσεων του ΔFosB στη σεξουαλική συμπεριφορά. Το ΔFosB έχει αποδειχθεί ότι δρα ως μεταγραφικός ενεργοποιητής και καταστολέας μέσω ενός εξαρτώμενου από ΑΡ-ΧΝΙΜΧ μηχανισμού (McClung & Nestler 2003; Peakman et αϊ. 2003). Έχουν ταυτοποιηθεί πολυάριθμα γονίδια-στόχοι, συμπεριλαμβανομένου του άμεσου πρώιμου γονιδίου c-fos (Ελπίζω et αϊ. 1992; Ελπίζω et αϊ. 1994; Morgan & Curran 1989; Renthal et αϊ. 2008; Zhang et αϊ. 2006), cdk5 (Bibb et αϊ. 2001), δινορφίνη (Ζαχαρίου et αϊ. 2006), sirtuin-1 (Renthal et αϊ. 2009), Υπομονάδες ΝΡκΒ (Ang et αϊ. 2001) Τουκαι την υπομονάδα GluR2 υποδοχέα γλουταμινικού ΑΜΡΑ (Kelz et αϊ. 1999). Τα τρέχοντα αποτελέσματα καταδεικνύουν ότι τα επαγόμενα από ζευγαρώματα επίπεδα c-Fos μειώθηκαν από τη σεξουαλική εμπειρία στις περιοχές του εγκεφάλου με αυξημένο ΔFosB (NAc και ACA). Η καταστολή του c-Fos φαίνεται να εξαρτάται από την περίοδο από την τελευταία ζευγαρώματα και τις επανειλημμένες συνεδρίες ζευγαρώματος, όπως σε προηγούμενες μελέτες, μια τέτοια μείωση του c-Fos δεν ανιχνεύθηκε σε αρσενικούς αρουραίους που ελέγχθηκαν εβδομάδα 1 μετά την τελική συνεδρία ζευγαρώματοςBalfour et αϊ. 2004) ή μετά από σεξουαλική εμπειρία αποτελούμενη από μία μόνο συνεδρία ζευγαρώματος (Lopez & Ettenberg 2002). Επιπλέον, το σημερινό εύρημα είναι συνεπές με τα στοιχεία ότι το ΔFosB καταστέλλει το γονίδιο c-fos μετά από χρόνια έκθεση σε αμφεταμίνη (Renthal et αϊ. 2008). Σύμφωνα με αυτά τα ευρήματα, η επαγωγή αρκετών άμεσων πρώιμων γονιδίων mRNAs (c-fos, fosB, c-jun, junB και zif268) μειώθηκε μετά από επανειλημμένες ενέσεις κοκαΐνης σε σύγκριση με οξείες ενέσεις φαρμάκουΕλπίζω et αϊ. 1992; Ελπίζω et αϊ. 1994) και η επαγόμενη από αμφεταμίνη c-fos καταστέλλεται μετά από απομάκρυνση από τη χορήγηση χρόνιας αμφεταμίνης (Jaber et αϊ. 1995; Renthal et αϊ. 2008). Η λειτουργική συνάφεια της προς τα κάτω ρύθμισης της έκφρασης c-Fos μετά από χρόνια φαρμακευτική αγωγή ή σεξουαλική εμπειρία παραμένει ασαφής και έχει προταθεί ότι είναι ένας σημαντικός ομοιοστατικός μηχανισμός που ρυθμίζει την ευαισθησία ενός ζώου σε επαναλαμβανόμενη έκθεση ανταμοιβής (Renthal et αϊ. 2008).

Συμπερασματικά, η παρούσα μελέτη καταδεικνύει ότι το ΔFosB στο NAc παίζει αναπόσπαστο ρόλο στη μνήμη σεξουαλικής ανταμοιβής, υποστηρίζοντας την πιθανότητα ότι το ΔFosB είναι σημαντικό για τη γενική ενίσχυση της ανταμοιβής και τη μνήμη . Τα ευρήματα της παρούσας μελέτης διευκρινίζουν περαιτέρω την κατανόησή μας για τους κυτταρικούς και μοριακούς μηχανισμούς που μεσολαβούν στη σεξουαλική ανταμοιβή και το κίνητρο και προσθέτουν σε ένα σύνολο βιβλιογραφίας που δείχνει ότι το ΔFosB είναι ένας σημαντικός παράγοντας στην ανάπτυξη του εθισμού, καταδεικνύοντας έναν ρόλο για το ΔFosB στην ενίσχυση της φυσικής ανταμοιβής.

Συμπληρωματικό υλικό

Supp Εικ. S1-S4 & Πίνακας S1-S2

Ευχαριστίες

Η έρευνα αυτή υποστηρίχθηκε από επιχορηγήσεις από τα Καναδικά Ινστιτούτα Έρευνας Υγείας στην LMC, το Εθνικό Ινστιτούτο Ψυχικής Υγείας στο EJN και το Συμβούλιο Ερευνών Φυσικών Επιστημών και Τεχνολογίας του Καναδά στην KKP και την LMC.

Αναφορές

  1. Agmo A. Αρσενική σεξουαλική συμπεριφορά αρουραίων. Brain Res Brain Res Protoc. 1997, 1: 203-209. [PubMed]
  2. Agmo A, Berenfeld R. Ενισχυτικές ιδιότητες της εκσπερμάτισης στον αρσενικό αρουραίο: ρόλος των οπιοειδών και της ντοπαμίνης. Behav Neurosci. 1990, 104: 177-182. [PubMed]
  3. Ang E, Chen J, Ζαγκούρας Ρ, Magna Η, ΟΙ Holland J, Schaeffer Ε, Nestler EJ. Επαγωγή του πυρηνικού παράγοντα-kappaB στον πυρήνα accumbens με χρόνια χορήγηση κοκαΐνης. J Neurochem. 2001, 79: 221-224. [PubMed]
  4. Balfour ME, Yu L, Coolen LM. Η σεξουαλική συμπεριφορά και τα περιβαλλοντικά συναισθήματα που σχετίζονται με το φύλο ενεργοποιούν το μεσολομυϊκό σύστημα σε αρσενικούς αρουραίους. Νευροψυχοφαρμακολογία. 2004, 29: 718-730. [PubMed]
  5. Οι επιδράσεις της χρόνιας έκθεσης στην κοκαΐνη ρυθμίζονται από τη νευρωνική πρωτεΐνη Cdk5. Τα αποτελέσματα της χρόνιας έκθεσης στην κοκαΐνη ρυθμίζονται από την πρωτεΐνη Cdk2001 της νευρωνικής πρωτεΐνης Cdk410. Φύση. 376, 380: XNUMX-XNUMX. [PubMed]
  6. Bradley ΚΟ, Haas AR, Meisel RL. Οι αλλοιώσεις του 6-Hydroxydopamine σε θηλυκά χάμστερ (Mesocricetus auratus) καταργούν τις ευαισθητοποιημένες επιδράσεις της σεξουαλικής εμπειρίας στις αλληλεπιδράσεις αλληλεπίδρασης με τους άνδρες. Behav Neurosci. 2005, 119: 224-232. [PubMed]
  7. Bradley ΚΟ, Meisel RL. Η επαγωγή σεξουαλικής συμπεριφοράς του c-Fos στο nucleus accumbens και η κινητική ενεργοποίηση που προκαλείται από αμφεταμίνη ευαισθητοποιούνται από προηγούμενη σεξουαλική εμπειρία σε θηλυκούς συριακούς χάμστερς. J Neurosci. 2001, 21: 2123-2130. [PubMed]
  8. Carle TL, Ohnishi YN, Ohnishi ΥΗ, Alibhai ΙΝ, Wilkinson ΜΒ, Kumar Α, Nestler EJ. Μηχανισμοί εξαρτώμενοι από πρωτεάσωμα και ανεξάρτητοι για την αποσταθεροποίηση FosB: ταυτοποίηση των περιοχών FosB degron και επιπτώσεις για τη σταθερότητα του DeltaFosB. Eur J Neurosci. 2007, 25: 3009-3019. [PubMed]
  9. Chao J, Nestler EJ. Μοριακή νευροβιολογία του εθισμού στα ναρκωτικά. Annu Rev Med. 2004, 55: 113-132. [PubMed]
  10. Chen J, Nye ΗΕ, Kelz ΜΒ, Hiroi Ν, Nakabeppu Υ, Hope ΒΤ, Nestler EJ. Ρύθμιση των πρωτεϊνών τύπου delta FosB και FosB με ηλεκτροσπασμολυτικές επιληπτικές κρίσεις και θεραπείες κοκαΐνης. Μοριακή φαρμακολογία. 1995, 48: 880-889. [PubMed]
  11. Colby CR, Whisler Κ, Steffen C, Nestler EJ, Self DW. Η υπερέκφραση του DeltaFosB για το συγκεκριμένο κυτταρικό τύπο κυττάρων ενισχύει τα κίνητρα για την κοκαΐνη. J Neurosci. 2003, 23: 2488-2493. [PubMed]
  12. Coolen LM, Allard J, Truitt WA, Mckenna ΚΕ. Κεντρική ρύθμιση της εκσπερμάτωσης. Physiol Behav. 2004, 83: 203-215. [PubMed]
  13. Damsma G, Pfaus JG, Wenkstern D, Phillips AG, Fibiger HC. Η σεξουαλική συμπεριφορά αυξάνει τη μετάδοση ντοπαμίνης στον πυρήνα accumbens και το striatum αρσενικών αρουραίων: σύγκριση με την καινοτομία και τη μετακίνηση. Behav Neurosci. 1992, 106: 181-191. [PubMed]
  14. Dietz DM, Maze Ι, Mechanic Μ, Vialou V, Dietz KC, Iniguez SD, Laplant Q, Russo SJ, Ferguson D, Nestler EJ. Βασικός ρόλος για τη ΔFosB στη ρύθμιση της κοκαΐνης των δενδριτικών αγκώνων των νευρώνων nucleus accumbens. Εταιρεία για τη Νευροεπιστήμη Περίληψη. 2009
  15. Frohmader KS, Pitchers ΚΚ, Balfour ME, Coolen LM. Συλλογές ευχαρίστησης: Ανασκόπηση των επιπτώσεων των ναρκωτικών στη σεξουαλική συμπεριφορά στους ανθρώπους και τα ζωικά μοντέλα. Ο ορνός Behav. 2009 Πατήστε το.
  16. Hedges VL, Chakravarty S, Nestler EJ, Meisel RL. Η υπερέκφραση του Delta FosB στο nucleus accumbens ενισχύει τη σεξουαλική ανταμοιβή των θηλυκών συριακών χάμστερ. Genes Brain Behav. 2009, 8: 442-449. [PMC δωρεάν άρθρο] [PubMed]
  17. Hernandez L., Hoebel BG. Η τροφοδοσία και η υποθάλαμος διέγερση αυξάνουν τον κύκλο εργασιών της ντοπαμίνης στους ασθενείς. Physiol Behav. 1988a · 44: 599-606. [PubMed]
  18. Hernandez L., Hoebel BG. Η ανταμοιβή των τροφίμων και η κοκαΐνη αυξάνουν την εξωκυτταρική ντοπαμίνη στον πυρήνα accumbens όπως μετράται με μικροδιαστολή. Life Sci. 1988b · 42: 1705-1712. [PubMed]
  19. Hiroi Ν, Marek GJ, Brown JR, Ye H, Saudou F, Vaidya VA, Duman RS, Greenberg ΜΕ, Nestler EJ. Βασικός ρόλος του γονιδίου fosB σε μοριακές, κυτταρικές και συμπεριφορικές δράσεις χρόνιων ηλεκτροσπασμολογικών κρίσεων. J Neurosci. 1998, 18: 6952-6962. [PubMed]
  20. Hommel JD, Sears RM, Georgescu D, Simmons DL, DiLeone RJ. Τοπικό γονιδιακό κτύπημα στον εγκέφαλο με χρήση παρεμβολών RNA που προκαλείται από ιό. Nat Med. 2003, 9: 1539-1544. [PubMed]
  21. Ελπίδα Β, Kosofsky Β, Hyman SE, Nestler EJ. Ρύθμιση της άμεσης πρώιμης γονιδιακής έκφρασης και δέσμευση ΑΡ-ΧΝΥΜΧ στον πυρήνα πυρήνων αρουραίου από χρόνια κοκαΐνη. Proc Natl Acad Sci US Α. 1, 1992: 89-5764. [PMC δωρεάν άρθρο] [PubMed]
  22. Hope BT, Nye ΗΕ, Kelz ΜΒ, Self DW, Iadarola MJ, Nakabeppu Υ, Duman RS, Nestler EJ. Η επαγωγή ενός μακροχρόνιου συμπλέγματος AP-1 που αποτελείται από τροποποιημένες πρωτεΐνες τύπου Fos στον εγκέφαλο με χρόνια κοκαΐνη και άλλες χρόνιες θεραπείες. Νευρώνας. 1994, 13: 1235-1244. [PubMed]
  23. Hull ΕΜ, Meisel RL, Sachs BD. Αρσενική Σεξουαλική Συμπεριφορά. Ο ορνός Behav. 2002, 1: 1-139.
  24. Jaber M, Cador Μ, Dumartin Β, Normand Ε, Stinus L, Bloch Β. Οι οξείες και χρόνιες θεραπείες αμφεταμίνης ρυθμίζουν διαφορετικά τα επίπεδα RNA αγγελιοφόρου νευροπεπτιδίου και την ανοσοδραστικότητα Fos σε νευρώνες ραβδωτού αρουραίου. Νευροεπιστήμες. 1995, 65: 1041-1050. [PubMed]
  25. Jenkins WJ, Becker JB. Δυναμικές αυξήσεις της ντοπαμίνης κατά τη διάρκεια της συντήρησης με βηματοδότηση στον θηλυκό αρουραίο. Eur J Neurosci. 2003, 18: 1997-2001. [PubMed]
  26. Kelz MB, Chen J, Carlezon WA, Jr, Whisler Κ, Gilden L, Beckmann ΑΜ, Steffen C, Zhang YJ, Marotti L, Self DW, Tkatch Τ, Baranauskas G, Surmeier DJ, Neve RL, Duman RS, Picciotto MR, Nestler EJ. Η έκφραση του μεταγραφικού παράγοντα deltaFosB στον εγκέφαλο ελέγχει ευαισθησία στην κοκαΐνη. Φύση. 1999, 401: 272-276. [PubMed]
  27. Lopez ΗΗ, Ettenberg Α. Η έκθεση σε θηλυκούς αρουραίους προκαλεί διαφορές στην επαγωγή του c-fos μεταξύ σεξουαλικά-αφελών και έμπειρων αρσενικών αρουραίων. Brain Res. 2002, 947: 57-66. [PubMed]
  28. Οι Mazer I, Covington ΗΕ, 3rd, Dietz DM, LaPlant Q, Renthal W, Russo SJ, Mechanic Μ, Mouzon Ε, Neve RL, Haggarty SJ, Ren Y, Sampath SC, Hurd YL, Greengard Ρ, Tarakhovsky Α, Schaefer Α, Nestler EJ. Βασικός ρόλος της μεθυλοτρανσφεράσης ιστόνης G9a στην πλαστικότητα που προκαλείται από την κοκαΐνη. Επιστήμη. 2010, 327: 213-216. [PMC δωρεάν άρθρο] [PubMed]
  29. McClung CA, Nestler EJ. Ρύθμιση έκφρασης γονιδίων και ανταμοιβής κοκαΐνης από την CREB και την DeltaFosB. Nat Νευροσκι. 2003, 6: 1208-1215. [PubMed]
  30. McClung CA, Ulery PG, Perrotti LI, Zachariou V, Berton Ο, Nestler EJ. DeltaFosB: ένας μοριακός διακόπτης για μακροπρόθεσμη προσαρμογή στον εγκέφαλο. Brain Res Mol Brain Res. 2004, 132: 146-154. [PubMed]
  31. Miller SM, Lonstein JS. Ντοπαμινεργικές προβολές στη μεσαία περιοχή προοπτικής των αρουραίων μετά τον τοκετό. Νευροεπιστήμες. 2009, 159: 1384-1396. [PMC δωρεάν άρθρο] [PubMed]
  32. Morgan JI, Curran Τ. Σύζευξη διεγέρτης-μεταγραφής σε νευρώνες: ρόλος των κυτταρικών άμεσων πρώιμων γονιδίων. Τάσεις Neurosci. 1989, 12: 459-462. [PubMed]
  33. Nestler EJ. Μοριακοί μηχανισμοί εθισμού στα ναρκωτικά. Νευροφαρμακολογία. 2004 · 47 Suppl 1: 24-32. [PubMed]
  34. Nestler EJ. Η νευροβιολογία του εθισμού στην κοκαΐνη. Sci. 2005, 3: 4-10. [PMC δωρεάν άρθρο] [PubMed]
  35. Nestler EJ. Ανασκόπηση. Μεταγραφικοί μηχανισμοί εθισμού: ο ρόλος της DeltaFosB. Philos Trans R. Soc. London Β Biol Sci. 2008, 363: 3245-3255. [PMC δωρεάν άρθρο] [PubMed]
  36. Nestler EJ, Barrot Μ, Self DW. DeltaFosB: ένας παρατεταμένος μοριακός διακόπτης για τον εθισμό. Proc Natl Acad Sci US Α. 2001, 98: 11042-11046. [PMC δωρεάν άρθρο] [PubMed]
  37. Nye ΗΕ, Ελπίδα ΒΤ, Kelz MB, Iadarola Μ, Nestler EJ. Φαρμακολογικές μελέτες της ρύθμισης της χρόνιας επαγωγής του αντιγόνου που σχετίζεται με το FOS από την κοκαΐνη στο ραβδωτό σώμα και στον πυρήνα του πυρήνα. J Pharmacol Εχρ Ther. 1995, 275: 1671-1680. [PubMed]
  38. Olausson Ρ, Jentsch JD, Tronson Ν, Neve RL, Nestler EJ, Taylor JR. Το DeltaFosB στο nucleus accumbens ρυθμίζει την οργανική συμπεριφορά και τα κίνητρα που ενισχύονται από την τροφή. J Neurosci. 2006, 26: 9196-9204. [PubMed]
  39. Οι Peakman MC, Colby C, Perrotti LI, Tekumalla Ρ, Carle Τ, Ulery Ρ, Chao J, Duman C, Steffen C, Monteggia L, Allen MR, Stock JL, Duman RS, McNeish JD, Barrot Μ, Self DW, Nestler EJ , Schaeffer Ε. Επαγωγική, εξειδικευμένη ως προς την περιοχή του εγκεφάλου έκφραση ενός κυρίαρχου αρνητικού μεταλλάκτη του c-Jun σε διαγονιδιακά ποντίκια μειώνει την ευαισθησία στην κοκαΐνη. Brain Res. 2003, 970: 73-86. [PubMed]
  40. Ο Pertroti LI, ο Bolanos CA, ο Choi ΚΗ, ο Russo SJ, ο Edwards S, ο Ulery PG, ο Wallace DL, ο Self DW, ο Nestler EJ, ο Barrot Μ. Ο DeltaFosB συσσωρεύεται σε έναν πληθυσμό κυττάρων GABAergic στην οπίσθια ουρά της κοιλιακής τμηματικής περιοχής μετά από ψυχοδιεγερτική θεραπεία. Eur J Neurosci. 2005, 21: 2817-2824. [PubMed]
  41. Perrotti LI, Hadeishi Υ, Ulery PG, Barrot Μ, Monteggia L, Duman RS, Nestler EJ. Επαγωγή του deltaFosB σε δομές εγκεφάλου σχετιζόμενες με ανταμοιβή μετά από χρόνιο στρες. J Neurosci. 2004, 24: 10594-10602. [PubMed]
  42. Perrotti LI, Weaver RR, Robison Β, Rental W, Maze Ι, Yazdani S, Elmore RG, Knapp DJ, Selley DE, Martin BR, Sim-Selley L, Bachtell RK, Self DW, Nestler EJ. Διακριτά πρότυπα επαγωγής του DeltaFosB στον εγκέφαλο με φάρμακα κατάχρησης. Σύναψη. 2008, 62: 358-369. [PMC δωρεάν άρθρο] [PubMed]
  43. Pfaus JG. Μονοπάτια της σεξουαλικής επιθυμίας. J Sex Med. 2009, 6: 1506-1533. [PubMed]
  44. Pfaus JG, Kippin TE, Centeno S. Προετοιμασία και σεξουαλική συμπεριφορά: μια ανασκόπηση. Ο ορνός Behav. 2001, 40: 291-321. [PubMed]
  45. Phillips AG, Vacca G, Ahn S. Μια προοπτική από την κορυφή προς τα κάτω για την ντοπαμίνη, τα κίνητρα και τη μνήμη. Pharmacol Biochem Behav. 2008, 90: 236-249. [PubMed]
  46. Pitchers KK, Balfour ME, Lehman ΜΝ, Richtand ΝΜ, Yu L, Coolen LM. Νευροπλαστικότητα στο μεσολομυϊκό σύστημα που προκαλείται από τη φυσική ανταμοιβή και την επακόλουθη αποζημίωση ανταμοιβής. Biol Ψυχιατρική. 2010, 67: 872-879. [PMC δωρεάν άρθρο] [PubMed]
  47. Renthal W, Carle TL, Maze Ι, Covington ΗΕ, 3rd, Truong ΗΤ, Alibhai Ι, Kumar Α, Montgomery RL, Olson ΕΝ, Nestler EJ. Το Delta FosB προκαλεί επιγενετική απευαισθητοποίηση του γονιδίου c-fos μετά από χρόνια έκθεση σε αμφεταμίνη. J Neurosci. 2008, 28: 7344-7349. [PMC δωρεάν άρθρο] [PubMed]
  48. ΡΗαηαΐν W, Kumar Α, Xiao G, Wilkinson Μ, Covington ΗΕ, 3rd, Maze Ι, Sikder D, Robison AJ, LaPlant Q, Dietz DM, Russo SJ, Vialou V, Chakravarty S, Kodadek TJ, Stack Α, Nestler EJ. Η γενική ανάλυση της ρύθμισης της χρωματίνης από την κοκαΐνη αποκαλύπτει ένα ρόλο για τις σιριντίνες. Νευρώνας. 2009, 62: 335-348. [PMC δωρεάν άρθρο] [PubMed]
  49. Tenk CM, Wilson Η, Zhang Ο, Pitchers ΚΚ, Coolen LM. Σεξουαλική ανταμοιβή σε αρσενικούς αρουραίους: επιπτώσεις της σεξουαλικής εμπειρίας στις προτιμησιακές προτιμήσεις που σχετίζονται με την εκσπερμάτωση και τις εισβολές. Ο ορνός Behav. 2009, 55: 93-97. [PMC δωρεάν άρθρο] [PubMed]
  50. Ulery-Reynolds PG, Castillo ΜΑ, Vialou V, Russo SJ, Nestler EJ. Η φωσφορυλίωση του DeltaFosB προκαλεί τη σταθερότητά του in vivo. Νευροεπιστήμες. 2008
  51. Ulery PG, Rudenko Ο, Nestler EJ. Ρύθμιση της σταθερότητας του DeltaFosB με φωσφορυλίωση. J Neurosci. 2006, 26: 5131-5142. [PubMed]
  52. Wallace DL, Vialou V, Rios L, Carle-Florence TL, Chakravarty S, Kumar Α, Graham DL, Green TA, Kirk Α, Iniguez SD, Perrotti LI, Barrot Μ, DiLeone RJ, Nestler EJ, Bolanos-Guzman CA. Η επίδραση του DeltaFosB στον πυρήνα accumbens στη φυσική συμπεριφορά που σχετίζεται με τη ανταμοιβή. J Neurosci. 2008, 28: 10272-10277. [PMC δωρεάν άρθρο] [PubMed]
  53. Werme M, Messer C, Olson L, Gilden L, Thoren Ρ, Nestler EJ, Brene S. Delta FosB ρυθμίζει τον τροχό. J Neurosci. 2002, 22: 8133-8138. [PubMed]
  54. Winstanley CA, LaPlant Ο, Theobald ΟΕ, Green ΤΑ, Bachtell RK, Perrotti LI, DiLeone RJ, Russo SJ, Garth WJ, Self DW, Nestler EJ. Η επαγωγή του DeltaFosB στο φλοιό του ορνιθώνος προκαλεί ανοχή στη γνωστική δυσλειτουργία που προκαλείται από την κοκαΐνη. J Neurosci. 2007, 27: 10497-10507. [PubMed]
  55. Zachariou V, Bolanos CA, Selley DE, Theobald D, Cassidy MP, Kelz ΜΒ, Shaw-Lutchman Τ, Berton Ο, Sim-Selley LJ, Dileone RJ, Kumar Α, Nestler EJ. Ένας βασικός ρόλος του DeltaFosB στον πυρήνα accumbens στη δράση της μορφίνης. Nat Νευροσκι. 2006, 9: 205-211. [PubMed]
  56. Οι Zhang J, Zhang L, Jiao H, Zhang Q, Zhang D, Lou D, Katz JL, Xu Μ. C-Fos διευκολύνουν την απόκτηση και εξαφάνιση των συνεχών αλλαγών που προκαλούνται από την κοκαΐνη. J Neurosci. 2006, 26: 13287-13296. [PubMed]