Rialóidh DeltaFosB gníomhaíocht tionscnóra Cck go hindíreach (2010)

Res Brain. 2010 Bealtaine 6; 1329: 10 – 20.

Foilsithe ar líne 2010 March 11. doi: 10.1016 / j.brainres.2010.02.081

PMCID: PMC2876727

John F. Enwright, III,¹ Megan Wald,¹ Madison Paddock,¹ Elizabeth Hoffman,¹ Rachel Arey,² Scott Edwards,² Sade Spencer,² Eric J. Nestler,³ agus Colleen A. McClung^{2, *}

Faisnéis údar ► Faisnéis chóipchirt agus ceadúnais ►

Tá leagan críochnaitheach eagarthóra an ailt seo den alt seo ar fáil ag Brain Res

Féach ailt eile sa PMC sin cite an t-alt foilsithe.

Téigh go dtí:

Abstract

Is cosúil go bhfuil cuid de na hathruithe tábhachtacha bithcheimiceacha, struchtúracha agus iompraíochta a d'eascair as nochtadh ainsealach ar dhrugaí mí-úsáide á idirghabháil ag an bhfachtóir trasghearrtha ΔFosB. Léirigh obair a rinneadh roimhe seo go dtiocfaidh méadú ar an léiriú ar ghéinte iomadúla i striatum mar thoradh ar róshaothrú iceFosB i lucha seachtainí 2, a ndéantar an chuid is mó díobh a chur síos arís ina dhiaidh sin i ndiaidh 8 seachtain de léiriú ΔFosB. Suimiúil go leor, rinneadh líon mór de na géinte seo a ghéilleadh i lucha róshaothrú ar an bhfachtóir trascríobh CREB. Ní raibh sé soiléir ón staidéar seo, áfach, an ndéanann BFosB gearrthéarmach rialáil ar na géinte seo trí CREB. Anseo feicimid go méadaíonn 2 seachtainí de ressionFosB overexpression slonn CREB i striatum, éifeacht a eascraíonn as 8 seachtaine. Baineann an luath-ionduchtú le méadú ar cheangal CREB le spriocthionscnóirí géine áirithe sa réigiún inchinne seo. Ionadh, géine amháin a raibh amhras ann gur sprioc CREB é bunaithe ar thuarascálacha roimhe seo, cholecystokinin (Cck), ní raibh sé faoi rialú CREB in striatum. Chun imscrúdú breise a dhéanamh ar rialáil Cck tar éis ressionFosB overexpression, dheimhníomar go méadaíonn ró-ró-mhoilliú ΔFosB araon Cck gníomhaíocht tionscnóra agus léiriú géine. Méadaíonn sé freisin an ghníomhaíocht cheangailteach ar shuíomh ceangailteach CREB (CRE) torthúil sa Cck tionscnóir. Mar sin féin, cé go bhfuil suíomh CRE riachtanach chun gnáthléiriú a dhéanamh ar Cck, níl sé ag teastáil le haghaidh inductionFosB ionduchtúcháin Cck. Le chéile, molann na torthaí seo cé go méadaíonn ionduchtú termFosB gearrthéarmach léiriú agus gníomhaíocht CREB ag tionscnóirí géine áirithe, ní hé seo an t-aon mheicníocht trína ndéantar géinte a rialáil faoi na coinníollacha seo.

Keywords: núicléas accumbens, trascríobh, andúil

Téigh go dtí:

RÉAMHRÁ

Fágann nochtadh ainsealach ar dhrugaí mí-úsáide athruithe bithcheimiceacha agus struchtúracha i roinnt réigiún inchinne. Meastar go mbaineann athruithe ar phróifílí léiriú géine sa chóras mesolimbic. Tá an córas seo comhdhéanta de néaróin dopaminergic a thionscnaíonn ón gceantar ionchasach ventral (VTA) sa mheánbhrain go néaróin spíonach meánach sa núicléas accumbens (NAc) (ventral striatum) chomh maith le roinnt réigiún inchinn eile. Moladh athruithe i ngníomhaíocht dhá fhachtóir trascríobh, próitéin eilimint fhreagrach cPP (CREB) agus ΔFosB (próitéin le haghaidh teaghlach fos), chun go leor de na hathruithe bithcheimiceacha, struchtúracha agus iompraíochta a fheictear le nochtadh ainsealach ar dhrugaí mí-úsáide a idirghabháil athbhreithnithe ag Nestler, 2005).

Is fachtóir trascríofa é CREB a léirítear go hiomlán agus atá ina bhall den teaghlach CREB / ATF. Déanann homodimeoirí CREB ceangal le héagsúlachtaí de shraith CRE (comhthoil: TGACGTCA) a fhaightear i dtionscnóirí go leor géinte. Is féidir le roinnt ráigeanna comharthaíochta, lena n-áirítear iad siúd le sruth ó ghabhdóirí dopamine, spreagadh a dhéanamh le fosfáitiú CREB (go príomha ag serine 133, cé gur aithníodh suíomhanna eile)Cole et al., 1995). Nuair a dhéantar fosfathú ag serine 133, earcaíonn CREB próitéin ceangailteach CREB (CBP) nó próitéiní gaolmhara as a dtiocfaidh léiriú géine méadaithe (athbhreithnithe ag Johannessen et al., 2004). Le nochtadh ainsealach ar dhrugaí codlaidíneach nó síceaspaoinithe mí-úsáid, méadaítear méaduithe díomuana i ngníomhaíocht CREB sa nuumbens accumbens (Barrot et al., 2002; Shaw-Lutchman et al., 2002, 2003), oiriúnú a mheastar a laghdódh airíonna luachmhara na ndrugaí seo agus a chuirfeadh le staid mhothúchánach dhiúltach tarraingt siar drugaí (Nestler, 2005).

Lceaptar go bhfuil ationsFosB, athraitheach spíosraí an-chobhsaí de FosB i gceist le hoiriúnuithe leanúnacha ar dhrugaí mí-úsáide. (Nestler et al., 1999; McClung et al., 2004; Nestler, 2008). Téann baill den teaghlach altrama le baill den teaghlach Jun chun coimpléasc próitéine gníomhaire 1 (AP-1) a dhéanamh. Bíonn coimpléisc AP-1 ina gceangal ar athruithe ar an eilimint freagartha AP-1 (comhaontú: TGACTCA) chun trascríobh a rialáil (arna athbhreithniú ag Chinenov agus Kerppola, 2001). Cé go mbíonn ionduchtú gearrthréimhseach (hrs) baill Fos-teaghlaigh mar thoradh ar dhroch-nochtadh do dhrugaí mí-úsáide (mar aon le gníomhaíocht CREB mhéadaithe), tagann carnadh stableFosB an-chobhsaí mar thoradh ar nochtadh drugaí arís agus arís eile (Hope et al., 1994; Perrotti et al., 2008), a leanann an abairt ar feadh seachtainí.

Lucha dé-ghéinmhodhnaithe go ró-mhaolú ar iblyFosB nó CREB sa striatum aosach taispeáin go leor de na feinitíopaí bithcheimiceacha agus iompraíochta a fheictear in ainmhithe a nochtar arís agus arís eile do shíceapóntóirí nó do dhrugaí mí-úsáide eile. AD'aithin nalysis na n-athruithe géine sna hainmhithe tras-aiceanta seo go leor géinte a raibh an róshaothrú ΔFosB orthu gearrthéarmach (seachtainí 2) changesFosB, athruithe a bhaineann le laghdú comhchéimneach ar luaíocht drugaí. Bhí na hathruithe ar léiriú géine agus ar fhreagairt iompraíochta le ΔFosB gearrthéarmach thar a bheith cosúil leo siúd a fheictear in ainmhithe a dhéanann róshaothrú ar CREB le haghaidh 2 nó 8 seachtaine (McClung agus Nestler, 2003). I gcodarsnacht ar leith, laghdaigh an ró-mhaolú fadtéarmach (seachtainí 8) de ΔFosB léiriú cuid mhaith de na géinte céanna agus mar thoradh air sin tháinig méadú ar luaíocht drugaí (Kelz et al., 1999; McClung agus Nestler, 2003).

Géine amháin atá aitheanta sna staidéir seo is ea cholecystokinin (Cck), neuropeptide a tháirgtear i roinnt réigiún inchinne, lena n-áirítear an striatum (Hokfelt et al., 1980). Is féidir le CCK tarchur dopaminergic a mhodhnú (Vaccarino, 1992), tá baint aige le luach saothair agus le treisiú drugaí (Josselyn et al., 1996; Josselyn et al., 1997; Hamilton, et al., 2000; Beinfeld et al., 2002; Rotzinger et al., 2002), agus tá cóicín ainsealach spreagtha sa striatumDing agus Mocchetti, 1992). Anuas air sin Cck tá sé léirithe go bhfuil an tionscnóir sofhreagrach do choimpléisc CREB agus AP-1 araon (Haun agus Dixon, 1990; Deavall, et al., 2000; Hansen, 2001). Ós rud é go bhfuil go leor de na géinte (lena n-áirítear Cck(a) inar léiríodh slonn méadaithe tar éis CREB agus gearrthéarmach expressionFosB léiriú araon gur géinte sprioc CREB agus amhrasta iad (McClung agus Nestler, 2003), theastaigh uainn a chinneadh an dtiocfadh le rialáil termFosB gearrthéarmach rialáil a dhéanamh ar na géinte seo (le fócas ar Cck(b) trí rialáil CREB nó trí mheicníochtaí níos casta maidir le rialáil géine.

Téigh go dtí:

TORTHAÍ

RessionForbraíonn róshaothrú BFosB go neamhbhuan leibhéil CRC

D'úsáideamar blotáil an Iarthair chun a fháil amach an méadaíonn ressionFosB róshaothrú leibhéil próitéine CREB i striatum lucha. Maidir leis an staidéar seo, d'úsáideamar lucha dé-chineálacha (líne 11A) a bhfuil Transgene NSE-TTA agus transO TetOp-ΔFosB araon acu. In éagmais doxycycline, taispeánann na lucha seo méadú láidir i léiriú ΔFosB sna néaróin dhearfainníneacha i striatum (Kelz et al., 1999). Rinneadh doiciméadú forleathan ar an modh seo chun róshamhlú a dhéanamh ar BFosB 'agus ceadaítear ró-íogaireacht ar leith don réigiún, rud atá cosúil leis an ionduchtú BFosB a fheictear in ainmhithe atá faoi lé cóicín ainsealach (Hope et al., 1994; Kelz et al., 1999). Fuaireamar amach go raibh leibhéil próitéine CREB tar éis latedRosB a róshamhlú iceFosB in 11A tar éis seachtainí cainte 2 agus gur cuireadh na leibhéil sin ar ais chuig bunlíne tar éis seachtain 8 de léiriú (Figiúr 1A, n = 8). Chun a fháil amach an bhféadfaí na hathruithe ar leibhéil CREB le ró-threoir ghearrthéarmach ΔFosB a mhacasamhlú i gcóras eile, rinneamar ró-iomarcaíocht ar ΔFosB i gcealla PC12 agus fuaireamar amach gur mhéadaigh leibhéil CREB go suntasach (p <0.05) i gcomparáid le rialuithe (Figiúr 1B, n = 4). Léiríonn na torthaí seo go méadaíonn léiriú expressionFosB gearrthéarmach leibhéil próitéine CREB.

Méadaíonn leibhéil CREB le ressionFosB overexpression. Anailís blot an iarthair ar lísí as (A) luch striata ó lucha 11A as dox do sheachtain 2 nó 8 nó (B) Cealla PC12 a dhéanann róshaothrú ar BFosB. Sonraí isteach A mar a thaispeántar an t-athrú faoin gcéad i dox as ...

Ceanglóidh BFB agus CREB araon le tionscnóirí spriocghéinte sainiúla sa striatum tar éis ró-róshamhlú ΔFosB gearrthéarmach

D'úsáideamar tástálacha fíochán striapacha ar imdhíonadh cipíní (chromatin) chun a chinneadh ar tharla BFosB nó CREB ceangailteach ag spriocthionscnóirí géine áirithe agus má méadaíodh an ceangal seo tar éis ró-ró-mhoilliú BFosB. Rinneamar anailís ceangailteach ag an BDNF agus Cck tionscnóirí, ós rud é go bhfuil an dá ghé an-rialaithe go mór i ndiaidh ró-ró-íslithe ΔFosB gearrthéarmacha, róshaothlú CREB, nó cóireáil ainsealach cóicín (McClung agus Nestler, 2003). Rinneamar anailís freisin ar cheangal CDK5 tionscnóir, ós rud é gur sprioc dhíreach e knownFosB (Chen et al., 2000; Bibb et al., 2001; Kumar et al., 2005). Ar deireadh, thomhais muid ceangailteach ag an prodynorphin tionscnóir, ós rud é gur aimsigh staidéir roimhe seo gur féidir leis byBF agus CREB a bheith faoi cheangal ag coinníollacha éagsúla (Andersson et al., 2001; Zachariou et al., 2006).

Rinneadh anailís ar na sliseanna ar striata ó lucha 11A a chuir isteach ar ressFosB do sheachtainí 2 ag baint úsáide as antasubstaintí a aithníonn CREB nó osFosB. Faoi ghnáthchoinníollacha, fuaireamar amach go gceanglaíonn BFosB leis an CDK5 agus prodynorphin tionscnóirí, cé nach bhfuil aon cheangal inbhraite ag an BDNF or Cck tionscnóirí (Tábla 1). Ina theannta sin, chuir ressionFosB overexpression méadú ar cheangal ΔFosB ag an CDK5 tionscnóir, ach ní ag an prodynorphin tionscnóir. Rinneamar an ceangal CREB eile a thomhas ag na tionscnóirí seo agus fuair muid amach go nascann CREB leis CDK5, BDNF agus prodynorphin tionscnóirí, ach ní don tionscnóir Cck tionscnóir, i ngnáth-striatum, agus go méadaíonn róshamhlú BFosB do sheachtainí 2 ar cheangal CREB ag an BDNF agus prodynorphin tionscnóirí, ach ní an tionscnóir CDK5 tionscnóir. Le chéile, léiríonn na torthaí seo gur féidir le BBFB agus CREB ceangal a bheith acu le tionscnóirí géine áirithe mar shampla prodynorphin agus CDK5, áfach, tá ceangal CREB sonrach do thionscnóirí eile ar nós BDNF. Ina theannta sin, mar thoradh ar ressionFosB overexpression, bíonn méaduithe ar BFosB ina gceangal ar thionscnóirí áirithe, mar a bheifí ag súil leis, ach freisin ar CREB atá ceangailteach le tionscnóirí sonracha, ag teacht leis an ionduchtú CREB tedFosB-idirghabhála a breathnaíodh ag an bpointe seo.

Próitéiní rialála toimhdeanacha a cheangal le tionscnóirí éagsúla i ró-róshuaitheadh iceFosB ar feadh dhá sheachtain.

Léirigh obair a rinneadh roimhe seo go bhfuil baint ag athruithe ar léiriú géine a tharlódh de bharr róshaothlú BFosB fadtéarmach le modhnuithe crómatin, go háirithe, aicéiteachú histone H3, ag sainthionscnóirí géin (Kumar et al., 2005). Chun a fháil amach an bhféadfadh sé seo athruithe a dhéanamh ar léiriú géine ar ró-chomhfhogasú ΔFosB gearrthéarmach, thomhais muid ceangal ceangailteach le honeone aicéitilithe H3 (modhnú histone a bhaineann le crómatin atá gníomhach go trascríofa), nó le histeón meitile H3 (Lys9, modhnú histone a bhaineann le trascríobh crómatin neamhghníomhach). Fuaireamar amach nach raibh aon athrú ar ressionFosB le haghaidh 2 seachtaine mar gheall ar ró-ísliú de chuid H3 aicéitilithe ag aon cheann de na tionscnóirí géine a ndearnadh staidéar orthu (Tábla 1). Fuaireamar laghdú suntasach i gceangal H3 an histeóin mheitilithe ag an prodynorphin tionscnóir, ach gan ceangal ag an Cck tionscnóir agus gan aon athrú ar cheangal CDK5 agus BDNF tionscnóirí, ag tabhairt le fios nach meicníocht ghinearálta é seo trína rialaíonn BFosB, sa ghearrthéarma, léiriú géine. Bhí ionadh orainn agus suim againn nár aimsíomar aon difríochtaí inár dtrialacha CTA a d’fhéadfadh a bheith ina gcúis leis an méadú Cck slonn mRNA sa lucha 11A i ndiaidh 2 seachtaine de léiriú ΔFosB agus chinn sé an mheicníocht seo a imscrúdú tuilleadh.

Méadaíonn an gearrthéarmachΔFosB Cck léiriú i gcórais iolracha

Le tréithriú micrea-eireoige lucha dé-chineálach 11A, rinneadh róshamhlú ΔFosB sa striatum go raibh Cck méadaíonn leibhéil na slonnachta tar éis seachtainí 2 de róshaothrú agus ansin laghdaíonn siad de réir a chéile le tréimhsí níos faide ΔFosB expression (Figiúr 2A, n = 3). Dheimhnigh muid an éifeacht seo do Cck ag baint úsáide as PCR fíor-ama ar ghrúpa ainmhithe ar leith ag 2 agus seachtainí 8 agus fuarthas amach go raibh na torthaí ag an dá phointe ama cosúil leis na hanailísí microarray (ní thaispeántar na sonraí).

Méadaíonn róshaothrú gearrthéarmach ΔFosB Cck léiriú géine. (A) Cck abairt mRNA i striatum tar éis ró-mhoilliú ΔFosB i lucha 11A le haghaidh 1, 2, 4, nó seachtainí 8. Rinneadh anailís mhicreafar ar shamplaí striatal agus Cck leibhéil ...

Iniúchadh a dhéanamh ar chumas ofFosB a rialáil Cck abairt, d'úsáid muid cealla PC12 a aistríodh go neamhbhuan le a Cckplasmid tuairisceoir -luciferase agus “plasmid abairt ΔFosB nó méid comhionann pCDNA. Tháinig méadú suntasach ar dhá lá (n = 5-9) agus trí lá (n = 11-13) de ressionFosB overexpression: Cckléiriú -luciferase. Ina theannta sin, bhí i bhfad níos mó i gceist le trí lá de ró-ró-ressionFosB Cck- ionduchtúchán déchomhshóite i gcomparáid le dhá lá den ró-mhoilliú (Figiúr 2B). Níor chuir overexpression de ΔFosB in iúl go raibh léiriú luciferase tionsclaíoch (sonraí nár taispeánadh). Ní raibh laghdú ar bith ar choinníollacha cóireála Ccktá gníomhaíocht -luciferase soiléir. Taispeánann na torthaí seo go méadaíonn léiriú gearrthéarmach expressionFosB expression gníomhaíocht an Cck agus ní fhágann an tionscnóir an mheicníocht trína ndéanann ressionFosB ró-phlúchadh sreabhú Cck slonn.

Méadaíonn róshaothrú ressionFosB ceangailteach ar shuíomh ceangailteach CREB ceangailteach sa Cck tionscnóir

Fuair ár n-anailísí sin Cck méadaítear an slonn tar éis léiriú ΔFosB gearrthéarmach, ach, d'aimsigh ár dtástálacha ChIP nach gceanglaíonn CREB ná ΔFosB leis na Cck tionscnóir. Chun a chinneadh an bhfuil aon athruithe ar phróitéin ceangailteach ag an Cck tar éis ressionFosB overexpression, tionscnóidh muid tionscnóirí aistrithe gluaiseachta leictreafóirigh (EMSA) le tóireadóir ina raibh an suíomh a bhí cosúil le CRE atá i láthair laistigh de Cck tionscnóir. Agus sleachta núicléacha á n-úsáid agat ó striata de lucha 11A ró-róshuaitheadh BFosB do sheachtainí 2, fuaireamar méadú i gceangal le suíomh an CRE. Cck tionscnóir (Fíor 3 A, C, n = 4). Is díol spéise é go n-osclaíonn lucha 11A BFosB do sheachtainí 8, a léiríonn laghdú i Cck Léirigh an abairt seo freisin go raibh ceangal níos mó ag an suíomh seo (Fíor 3B, C, n = 4). Mar chomparáid, scrúdaíomar ceangailteach le suíomh comhchoiteann CRE i lucha róshamhlú ΔFosB do sheachtainí 2 agus chonacthas dúinn go raibh ceangal láidir ag CRE i sleachta striatal, ach ní raibh aon mhéadú ar an méid seo a leanas ina gceangal osFosB (Figiúr 3F, n = 4). Dá bhrí sin, d'ainneoin méadú cedFosB-spreagtha ar na leibhéil CREB iomlána a fheictear ag an bpointe ama seo, tá na torthaí seo ag teacht lenár dtástálacha ChIP a thugann le fios go bhfuil níos mó ceangailteach CREB ag tionscnóirí tar éis ressionFosB overexpression ach go sonrach le géinte áirithe agus nach feiniméan domhanda é. . Chun a chinneadh an bhfuil CREB ceangailte leis an Cck tionscnóir inár n-anailís EMSA, rinneamar measúnuithe supershift le antasubstaint sonrach CREB. I gcomhaontú lenár dtástálacha ChIP, níor aimsíomar aon cheangal ar CREB go Cck tóraíocht a dhéanamh ar a bhfuil suíomh tabharthach an CRE i dtrialacha EMSA, agus rinne CREB ceangal mór agus ionad comhghleacaithe CRE (Fíor 3D, E, n = 4). An ghníomhaíocht ceangailteach DNA ag an Cck ní raibh tionchar ag antasubstaint ar ΔFosB (sonraí nár taispeánadh) ar thionscnóir, faoi choinníollacha a thaispeántar i roinnt réamhstaidéir chun BFosB a cheangal ar shuímh bona fide AP-1 (Hope et al., 1994a, 1994b; Chen et al., 1995, Hiroi et al., 1998). Chomh maith leis sin rinneamar measúnachtaí ChIP ar striata na n-ainmhithe 11A a lean 8 seachtainí de expressionFosB abairt agus gan aon cheangal ar CREB ná ΔFosB fós ag an Cck tionscnóir (ní thaispeántar na sonraí). Dá bhrí sin, mar thoradh ar léiriú ΔFosB, méadaítear próitéin atá ceangailteach ag an Cck tionscnóir tar éis seachtainí cainte 2 agus 8; mar sin féin, ní fios céannacht na bhfachtóirí seo.

Próitéin ceangailteach ag an Cck tionscnóir. (A, B(B) Measúnacht ar shoghluaisteacht leictreictheictheachta ag baint úsáide as an Cck Láithreán atá cosúil le CRE le fíochán striatal ó ainmhithe ag róshaothrú ΔFosB do sheachtainí 2 (A) nó 8 seachtaine (B). In (A), iomaíocht le hiomaitheoir iomarcach gan lipéad ...

Láithreán tairbhiúil CRE sa Ghaeltacht Cck níl tionscnóir freagrach as gníomhaíocht mhéadaithe tionscnóra

Ón uair a fuaireamar méadú i gceangal próitéine ag úsáid blúire den Cck an tionscnóir, ina bhfuil suíomh tairbhiúil CRE, tar éis ressionFosB overexpression, bhíomar ag iarraidh a fháil amach an bhfuil an láithreán seo riachtanach le haghaidh méadaithe Cck slonn tar éis ressionFosB overexpression. Chun an fhéidearthacht seo a thástáil, aistríomar cealla PC12 le a Cck-luciferase plasmid ina bhfuil a shuíomh slán cosúil le CRE nó ceann ina bhfuil sóchán ar an suíomh a chuirfeadh deireadh le haon idirghníomhaíocht le CREB. Is díol spéise é gur laghdaigh claochlú an láithreáin cosúil le CRE an bonn Cck gníomhaíocht tionscnóra ag 32% (Figiúr 4A, n = 9), ach níor chuir sé isteach ar an Cck ionduchtú tionscnóra trí overexpression ΔFosB (Figiúr 4B, n = 11-13). Tugann sé seo le fios, cé go bhfuil Cck Éilíonn an tionscnóir go bhfuil suíomh slán atá cosúil le CRE ann do ghníomhaíocht bhunúsach, ní gá go mbeadh an t-ord CRE-mhaith ag gníomhaíocht mhéadaithe tionscnóra a spreagann ressionFosB overexpression.

An Cckní cosúil le suíomh CRE do Cck ionduchtú ag ΔFosB. (A) Ccktomhaiseadh gníomhaíocht -luciferase 2 lá tar éis an aistrithe le ceachtar gnáthriocht Cck-luciferase nó ceann inar sáraíodh an suíomh cosúil le CRE. * p <0.05 (B) Cck-luciferase ...

cFos a cheanglaíonn leis Cck tionscnóir

Fuair staidéir roimhe seo amach cFos méadaíonn mRNA le léiriú expressionFosB gearrthéarmach, áfach, tar éis léiriú ΔFosB fada, laghdaítear cumas cóireála cóicín chun cFos in striatum a aslú (McClung agus Nestler, 2003; Renthal et al., 2008). Dá bhrí sin, d’fhéadfadh sé gur féidir le cFos cur leis an méadú Cck slonn tar éis léiriú ΔFosB gearrthéarmach. Rinneamar measúnachtaí ChIP le antasubstaint a bhí sonrach do cFos agus a thomhais cFos ceangailteach ag an Cck tionscnóir le léiriú ΔFosB gearrthéarmach agus gan é. Cé go bhfuaireamar amach go gcuireann cFos ceangal leis an Cck tionscnóir, níor mhéadaigh an ceangal seo go mór i ndiaidh ressionFosB overexpression (Figiúr 5, n = 5). Tugann sé seo le tuiscint gur ó cFos a cheanglaíonn Cck an tionscnóir, féadfaidh sé rannchuidiú le rialáil ghinearálta Cck slonn, ach is dócha nach bhfuil baint aige le rialáil na Cck tionscnóir ag ΔFosB.

cFos a cheanglaíonn leis Cck tionscnóir. Rinneadh measúnachtaí imdhíonachta Chromatin le sain-antasubstaint le haghaidh cFos ag baint úsáide as fíochán striatal ó iceFosB lucha ró-ró-fhormhéadú ar dox, nó tar éis seachtainí 2 de bhaint dox. Rinneadh anailís PCR fíor-ama ...

Téigh go dtí:

Plé

Deimhníonn agus leathnaíonn an staidéar seo ar thorthaí roimhe seo a léiríonn go rialaíonn BFosB léiriú géine sa striatum agus feicimid go ndéanann sé amhlaidh trí mheicníochtaí iomadúla tar éis léiriú gearrthéarmach. Léiríonn muid, tar éis seachtainí 2 den ró-mhoilliú, go gcuireann BBF isteach go díreach leis na tionscnóirí i ngéinte áirithe as a dtiocfaidh athruithe ar an slonn (ie CDK5). Ina theannta sin, méadaíonn sé leibhéil próitéine CREB, éifeacht a bhreathnaítear i gcealla saothraithe agus i striatum, as a dtiocfaidh méadú ar cheangal CREB ag tionscnóirí géin eile (ie dinorphin agus BDNF). I staidéar roimhe seo, fuaireamar amach go dtiocfadh go leor de na hathruithe céanna ar an sloinneadh géine a fhaightear nuair a dhéantar róshaothrú ar CREB agus go mbíonn freagairtí iompraíochta cosúla i mbearta rogha cóicínMcClung agus Nestler, 2003). Dá bhrí sin, de réir an lae inniu tá inductionFosB mar thoradh ar ionduchtú CREB, chomh maith le ceangal CREB le tionscnóirí géine áirithe, cuidíonn sé leis an gcúis go raibh an oiread sin d’athruithe géine léirithe ag an dá fhachtóir trascríobh seo.

Tá ionduchtú CREB ag BFosB suimiúil, ós rud é gur léiríodh go spreagann drugaí mí-úsáide athruithe i leibhéil CRB serine 133-phosphorylated (Mattson et al., 2005) agus trascríobh arna idirghabháil ag CRE a mhéadú (Barrot et al., 2002; Shaw-Lutchman et al., 2002, 2003), gan leibhéil fhoriomlána CREB a athrú. Is féidir go mbeidh athruithe ar leibhéil CREB neamhbhuan, agus, dá bhrí sin, caillte go héasca i staidéir eile. Inár lámha féin, chonaiceamar méaduithe ar an gcóicín a spreagtha i mRNA CREB i dturgnaimh áirithe, ach tá an éifeacht seo an-athraitheach (breathnóireacht neamhfhoilsithe). Ós rud é go dtaispeánann na lucha transgenacha 11A agus na cealla PC-12 ionduchtú CREB tar éis ró-ró-mhaolú ΔFosB gearrthéarmach, molann sé seo go bhfuil CREB spreagtha go deimhin ag BFosB (nó sprioc de ΔFosB), ag soláthar meicníocht eile chun athruithe i ngéin a spreagann drugaí slonn.

Go hiontach, chonaiceamar nár cheangail CREB ná ΔFosB leis an Cck tionscnóir cé Cck cuirtear an abairt in iúl go soiléir tar éis léiriú ΔFosB gearrthéarmach. Is neuropeptide flúirseach é Cck arna shloinneadh sa VTA agus sa NAc (Hokfelt et al., 1980agus is dócha go bhfuil baint aige le freagairtí iompraíochta ar dhrugaí mí-úsáide (Josselyn et al., 1996; Josselyn et al., 1997; Hamilton, et al., 2000; Beinfeld et al., 2002; Rotzinger et al., 2002). I dtástálacha cultúr na gceall, tá Cck Tá tréithrithe ag an tionscnóir go forleathan agus léiríodh go bhfuil sé sofhreagrach do bhaill teaghlaigh CREB agus AP-1 (arna athbhreithniú ag Hansen, 2001). Haun and Dixon (1990) léirigh gur féidir le coimpléisc AP-1 ceangal a dhéanamh leis Cck Suíomh cosúil le CRE in vitro, agus taispeánadh ina dhiaidh sin é, ag baint úsáide as cealla neuroblastoma SK-N-MC, gur laghdaigh sóchán an láithreáin cosúil leis an CRE freagrúlacht an tionscnóra i leith róshabhlaithe cFos / cJun (Rourke et al., 1999). Go deimhin, tá méadú tagtha freisin Cck gníomhaíocht tionscnóra (Figiúr 2) agus ceangailteach ag an eilimint cosúil le CRE nó timpeall uirthi (\ tFigiúr 3) ar ró-mhoilliú ΔFosB, ball eile den teaghlach AP-1, ach ní fheicimid aon cheangal díreach ΔFosB leis na Cck tionscnóir in vivo or in vitro, fiú ar a ró-mhoilliú.

Léirigh a lán oibre ról do CREB i rialáil Cck gníomhaíocht tionscnóra. An Cck Caomhnaítear suíomh cosúil le CRE thar veirteabraigh (Hansen, 2001agus, i roinnt measúnachtaí i gcultúr na gceall, ceangalann coimpléisc CREB agus AP-1 araon leis an láithreán seo agus tá siad riachtanach do Cck gníomhaíocht tionscnóra (Haun agus Dixon, 1990; Deavall, et al., 2000; Hansen, 2001). Ina theannta sin, tá go leor gníomhaithe aitheanta ar Cck léiríodh go bhfuil an abairt (lena n-áirítear bFGF, PACAP, peptones, agus dílárú) ag gníomhú trí CREB (Hansen, et al., 1999; Deavall, et al, 2000; Bernard, et al., 2001; Gevrey, et al., 2002; Hansen, et al., 2004). Ár gcuid CckTacaíonn sonraí géine tuairisceora-chúlaitheacha le ról riachtanach do láithreán cosúil le CRE i rialáil Cck gníomhaíocht an tionscnóra, ós rud é go laghdaíonn sóchán an láithreáin seo basal Cck gníomhaíocht tionscnóra agus Cckcailltear an focal -luciferase a spreagann VP16-CREB, foirm CREB atá gníomhach go bunúsach, nuair a bhíonn an láithreán seo mutated (breathnóireacht neamhfhoilsithe). Dá bhrí sin, bhí ionadh orainn a fháil amach go bhfuil an chuma ar an scéal nach bhfuil CREB ina cheangal ar an Cck tionscnóir i sleachta striatal ag bunlíne nó ar ró-ró-ísliú BFosB gearrthéarmach nuair a mhéadaítear leibhéil CREB. Áitíonn sé seo go bhfuil leibhéil CREB per se nach é an t-aon fhachtóir é chun méid an cheangailteach a chinneadh ag an láithreán seo, agus tacaíonn obair daoine eile leis seo (Cha-Molstad, et al., 2004). Ós rud é gur shainaithin tionscnóirí eile géin-sprioc CREB roimhe seo, mar shampla BDNF agus prodynorphin, chuir sé ceangal ar CREB, táimid muiníneach inár dtuairim nach bhfuil CREB ceangailteach don Cck tionscnóir i eastóscáin núicléacha striatal. Ina theannta sin, ionduchtú Cckní raibh gníomhaíocht luFosfása ag seFosB ag brath ar an suíomh slán cosúil le CRE, ag tabhairt le tuiscint nach ndéanann BFosB rialáil Cck abairt trí cheangal díreach CREB a rialáil don Cck tionscnóir.

An neamhábaltacht atá againn CREB a bhrath ag idirghníomhú leis Cck tacaíonn an tionscnóir leis an tionscnóir Renthal et al. (2009), a bhain úsáid as cur chuige sliseanna-chip chun breathnú ar athruithe domhanda i CREB fosfaictrithe (pCREB) agus ΔFosB atá ceangailteach i striatum tar éis nochtadh ainsealach cóicín. Sna turgnaimh seo, rinneadh frith-imdhíonadh ar choimpléisc DNA-próitéine le hantasubstaintí BFosB nó pCREB agus rinneadh an DNA deasctha, tar éis an lipéadaithe, a hibridiú le micrea-ealaíontóir tionscnóra. Cé gur aithníodh go leor de ghéinte sprice CREB leis an gcur chuige seo roimhe seo (m.sh. BDNF, prodynorphin), Cck nár aithníodh. Ina theannta sin, léiríodh go n-athraíonn ceangal CREB le suíomh comhchoiteann CRE go mór idir línte ceilte saothraithe (Cha-Molstad, et al., 2004). Gach ceann de na staidéir roimhe seo a fuair idirghníomhaíochtaí CREB leis an Cck rinneadh tionscnóir i gcultúr na gceall (ní inchinn as ar díríodh samplaí EMSA agus ChIP) agus úsáideadh measúnachtaí athrú glóthach chun idirghníomhaíochtaí próitéine-DNA a imscrúdú. Cé gur féidir le EMSA measúnú a dhéanamh ar chumas fachtóra chun ceangal le seicheamh DNA, soláthraíonn measúnachtaí ChIP léargas nua ar na hidirghníomhaíochtaí seo. in vivo. Ina theannta sin, léiríonn cuid mhór de na sonraí ceachtar acu ionduchtú Cck gníomhaíocht tionscnóra nó CREB ceangailteach don Cck fuarthas tionscnóir ó chealla a bhí spreagtha ag tosca amhail peptones (Bernard et al., 2001), dí-áitiú (Hansen, et al., 2004), nó éagsúlacht gníomhaígh a bhaineann le ráigeanna comharthaíochta intracellular lena n-áirítear cAMP agus ERK (Hansen et al., 1999). In ár dturgnaimh, ba é an t-aon “spreagadh” a úsáideadh ná an róshaothrú ofFosB, atá leordhóthanach chun aslú Cck slonn. Le chéile, tugann sé seo le tuiscint go bhfuil cumas CREB ceangal a dhéanamh le (agus rialú a dhéanamh) Cck tá tionscnóir ag brath go mór ar chineál cille agus gníomhachtú cosán comharthaíochta ar leith. Ina theannta sin, an Cck Is sprioc dhíreach de chuid CREB nó ΔFosB é eilimint tionscnóra an CRE (ar a laghad i gcealla PC12 nár daingníodh agus i striatum luch). Is díol spéise é go ndéantar rialáil FosB tá an léiriú ag CREB sonrach freisin don chineál cille agus don chineál spreagtha. Staidéar le Andersson et al. Fuair sé amach gur chuir instealladh de oligonucleotides frith-chontrála CREB isteach i striatum luch isteach go páirteach ar ionduchtú FosB tar éis riarachán cóicín (Andersson et al., 2001). Mar sin féin, fuair siad freisin go raibh cumas L-Dopa ag mealladh FosB ní raibh tionchar ag láithreacht oligonucleotides frith-dhlúise CREB ar láithreacht 6-OHDA-lesioned striatum.

Ós rud é go ndealraíonn CREB agus osFosB an rud go hindíreach Cck tá an tionscnóir, agus athruithe i struchtúr crómatin doiciméadaithe mar fhreagra ar spreagthaí éagsúla a spreagann BFosB (Tsankova et al., 2004; Kumar et al., 2005; Renthal et al., 2008), réasúnaíomar go bhféadfadh BFosB gníomhaíocht an tionscnóra a mhodhnú go hindíreach trí struchtúr crómatin a athrú. Mar sin féin, i lucha róshamhlú BFosB do sheachtainí 2, ní raibh athrú ar bith ar aicéiteach honeNUMX ag an Cck tionscnóir (Tábla 1). Tacaíonn na sonraí sliseanna sliseanna le Renthal et al. (2009), a thuairiscigh nach raibh aon athrú i H3 aicéitilithe ina gceangal ag an Cck tionscnóir i lucha a nochtar do chóicín ainsealach. Ón Cck tá an tionscnóir gníomhach sa striatum, ní raibhtear ag súil le ceangal ceangailteach ar bith histeam meitil meitil nó breathnaíodh é. Is díol spéise é nach bhfaca muid aon athrú freisin mar gheall ar ressionFosB róshaothlú i H3 aicéitilithe ina gceangal ag an BDNF tionscnóir (a thaispeáin ceangal méadaithe CREB) nó ag an CDK5 agus prodynorphin tionscnóirí (a léirigh ceangal ΔFosB méadaithe). Ós rud é go bhfuil go leor modhnuithe histone ann a bhaineann le hathruithe ar ghníomhaíocht tionscnóirí (athbhreithnigh an Comhdháil Náisiúnta na Gaeilge) Rando agus Chang, 2009), is dócha go bhfuil modhnuithe crómatin eile ann a bhaineann le hionduchtú na ngéinte seo. Ní féidir le haon mhodhnú crómatin aonair, cé gur minic a thuar leibhéal na gníomhaíochta tionscnóra, athrú le linn géine áirithe a ghníomhachtú. In obair amach anseo, bheadh sé spéisiúil breathnú ar athruithe féideartha eile i struchtúr crómatin timpeall an Cck tionscnóir tar éis ressionFosB overexpression. Suimiúil, cóicín ainsealach (is dócha via Tá sé léirithe go spreagann ionduchtú inductionFosB) sirtuin 1 agus 2, aicéiciléisí histone aicme III a dhealraíonn go n-athraíonn siad fiseolaíocht néaróin, comharthaíocht ERK, agus freagairtí iompraíochta ar chóicín (Renthal et al., 2009). Bheadh sé de chumas ag ionduchtú de dhé-aicéitil histone léiriú líon mór géinte a rialáil go comhuaineach. via athruithe domhanda i struchtúr crómatin.

Iarrthóir féideartha amháin a bhfuil baint aige leis Cck i ndiaidh rialachán ressionFosB bhí cFos ball teaghlaigh AP-1. Rialaíonn CREB cFos (Sheng et al., 1990; Impey et al., 2004), agus méadaíonn róshamhlú cFos (i gcomhcheangal le ró-mhoilliú a pháirtí ceangailteach cJun) Cck gníomhaíocht tionscnóra (Rourke et al., 1999). Dá bhrí sin, d’fhéadfadh leibhéil mhéadaithe CREB mar gheall ar ró-ró-ísliú BFosB gearrthéarmach leibhéil cFos a mhéadú agus dá bharr sin ceangal níos mó a dhéanamh ar Cck Suíomh cosúil le CRE. cfos Tarlaíonn mRNA i lucha tar éis róshamhlú ΔFosB (McClung agus Nestler, 2003agus agus laghdaíodh i lucha a bhí neamhchosanta ar chóicín ainsealach nó ró-róshaothrú BFosB (Renthal et al., 2008). Anseo feicimid go nascann cFos go díreach leis an Cck tionscnóir i bhfíochán striatal, áfach, ní chuireann ressionFosB overexpression méadú suntasach ar cheangal. Tugann sé seo le tuiscint, cé go bhféadfadh baint a bheith ag cFos le rialáil Cck léiriú go ginearálta, ní dócha gurb é an t-athrú i gceangal cFos amháin an mheicníocht trína rialaíonn BFosB Cck slonn. Is féidir, áfach, go bhféadfadh BFosB athruithe a aistriú i ndiaidh cFos (m.sh. fosfaireachas athraithe) nó léiriú comhpháirtí ceangailteach (mar cJun) nó próitéin comhghníomhachtaithe a aslú. Mar sin féin, ós rud é go bhfeictear an suíomh slán atá cosúil le CRE (a léiríodh roimhe seo mar shuíomh ceangailteach do choimpléisc AP-1, féach Haun agus Dixon, 1990) nach bhfuil ag teastáil le haghaidh an mhéadaithe Cck gníomhaíocht an tionscnóra le ressionFosB overexpression (mar a rinneadh measúnú uirthi inár dturgnaimh ghéin tuairisceoirí), is é is cúis leis ná go rialaíonn ΔFosB fachtóirí trasghníomhacha eile.

An Cck tá suíomh ceangailteach Sp1 agus E-bhosca (athbhreithnithe ag Hansen, 2002) ag blúire an tionscnóra a úsáidtear inár dturgnaimh géine tuairisceoirí luciferase. Go háirithe, léiríodh go bhfuil sraitheanna E-bhosca ina gceangal ar fhachtóirí trascríobh iomadúla (athbhreithnithe ag Forrest agus McNamara, 2004). Agus cealla PC12 á n-úsáid agat, chonaiceamar go laghdaítear sóchán an bhosca E Cck gníomhaíocht tionscnóra, ach ní athraíonn sé freagra an tionscnóra go ΔFosB (ní thaispeántar na sonraí). Suimiúil, a Cck- níl aon ghníomhaíocht bhrath inbhraite ag tuairisceoir a bhfuil sócháin air i suíomh CRE agus E-bhosca araon agus tá sé neamhfhreagrach do ró-mhoilliú BFosB (breathnóireacht neamhfhoilsithe). Idirghabhálaí féideartha eile de ghníomhaíocht BFosB ar an Cck is ATFanna an tionscnóir, agus is eol go bhfuil cineálacha áirithe díobh spreagtha i striatum ag nochtadh síceasmíntí ainsealach (Green et al., 2008). Mar sin féin, ní bhfuaireamar aon fhianaise ar inductionFosB ionduchtú na ATFanna seo (ní thaispeántar na sonraí), agus ní bheifí ag súil go gceanglódh ATFanna leis an suíomh atá cosúil leis an CRE ar an Cck tionscnóir.

Is éard atá i gceist le caveat amháin sa staidéar seo ná go bhfuilimid ag baint úsáide as córas dé-thrasghiniúnach chun róshaothrú a dhéanamh ar BFosB agus dá bhrí sin ní mór ceann a bheith coimeádach maidir le comhthreomhar a tharraingt idir an paraidím seo agus riarachán cóicín ainsealach. Mar sin féin, tugann na lucha transgenic 11A an deis uathúil chun breathnú ar na héifeachtaí sonracha a bhaineann le osFosB sa striatum, ós rud é go bhfuil ró-mhaolú teoranta don réigiún inchinne seo (Chen et al., 1998), cé go spreagann riarachán cóicín athruithe i réimse leathan réigiún inchinn eile a d’fhéadfadh difear a dhéanamh ansin go hindíreach don striatum. Ina theannta sin, dhoiciméadaigh roinnt staidéar feinitíopaí iompraíochta agus móilíneacha den chineál céanna sa lucha 11A i gcomparáid le hainmhithe neamh-thrasghineacha a ndéileáiltear leo le cóicín ainsealach (Kelz et al., 1999; McClung agus Nestler, 2003; Renthal et al., 2009). Chomh maith, Bibb et al. (2001) tuairiscíodh leibhéil chomhchosúla striatal Cdk5 mRNA agus ionduchtú próitéine sa bhrú 11A céanna seo i gcomparáid le coimeádaithe cóireáil cóicín, neamh-transgenic, chomh maith le hathruithe cosúla i spriocanna CDK5, p35 agus DARPP-32.

Mar fhocal scoir, feicimid go dtéann ionchur ΔFosB gearrthéarmach le hionduchtú géinte sa striatum trí mheicníochtaí iomadúla. Ina measc seo tá ceangal díreach tionscnóra, ionduchtú próitéine agus gníomhaíocht CREB, modhnú crómatin, chomh maith le conairí nach bhfuil le cinneadh fós.

Téigh go dtí:

NÓSANNA IMEACHTA SAORÁLA

ainmhithe

Úsáideadh ainmhithe 11A dé-chineálacha fireann (NSE-tTA x TetOP-ΔFosB) sa staidéar seo agus tá siad sainithe i Kelz et al., 1999. Chun rexFosB a róshaothrú, baineadh lucha ó doxycycline idir seachtainí 3 agus 6, agus coinníodh lucha rialaithe ar doxycycline. Bhí gach lucha grúpáilte agus coinnithe ar thimthriall éadrom / dorcha 12: 12, soilse ar 7 am agus soilse amach ag 7 pm, le ad lib rochtain ar bhia agus ar uisce. Bhí gach turgnamh luch ag teacht le prótacail a cheadaigh an coiste um chúram ainmhithe agus úsáid in Ollscoil Texas Ionad Leighis Southwestern ag Dallas.

Plasmids tuairisceora agus léirithe

An fiáine (WT) Cck ullmhaíodh tuairisceoir tionscnóir-luciferase trí dhlúthú PCR thart ar 200 a chur isteach sa veicteoir pGL3-luc (Promega). Fuarthas an blúire seo ó DNA géanómaíochta na luiche (primers: 5 'TATCCTCATTCACTGGGACGC 3' suas an sruth, agus 5 'TACCTTTGGATGGGGAAATCG 3' síos an sruth) agus cuireadh isteach i veicteora pGEM-T Easy é (Promega, #A1360). Clónáladh blúire an tionscnóra ina dhiaidh sin isteach i suíomhanna einsím srian Kpn1 / Xho1 de pGL3-luc.

Chun treisiú an phointe CRE a chruthú sa Cck tionscnóir, primer só-ghineach a díríodh ar shuíomh cosúil le CRE a tuairiscíodh roimhe seo (ciall primer: 5'CGTGTCCTGCTGGACTGAGCTCGCACTGGGTAAACA 3 ', primer antisense: 5'CTGTTTACCCAGTGCGCGCTGAGTCCAGCAGGACACG 3'). . Athraíonn sé seo an suíomh tuairiscithe cosúil le CRE (ACTGCGTCAGC) go ACTGAGCTCC. Deimhníodh seicheamhú DNA ar gach plasimíd tuairisceora. Tá seicheamh ΔFosB lánfhada a cuireadh isteach i suíomh ilchlónála pCDNA 3.1 sa plasmid slonn ΔFosB agus rinneadh cur síos air roimhe seo (Ulery agus Nestler, 2007).

Cultúr cealla agus aistrithe DNA

Coinníodh cealla francach pheochromocytoma (PC12) i meán modhnaithe Eagle F-12 modhnaithe Dulbecco, arna fhorlíonadh le serum capall 10%, serum bólachta féatais 5%, agus 1% peinicillin / streptomycin ag 37 ° C agus 5% CO₂. Aistríodh cealla trí leictrealú ag baint úsáide as leictreaphlátálaí BTX 360 (350V, 0 ohms, agus 850 μF) i saline maolánaithe fosfáit 800 μL Dulbecco i cuvettes bearna 4 mm le 10 μg den tuairisceoir agus 5 μg den abairt a thógáil. Baineadh úsáid as plasmid veicteora folamh (pCDNA) chun méideanna iomlána DNA a normalú. Tar éis iad a aistriú, fásadh na cealla ar miasa atá brataithe le collagen 35 mm ar feadh na méideanna ama a luaitear.

Tástálacha Luciferase

Dhá nó trí lá tar éis iad a aistriú, nitear cealla 3 huaire i sáile maolánaithe fosfáit Dulbecco, lysed (ag baint úsáide as glycylglycine 25 mM, 15 mM MgSO₄, 4 mM EGTA, 1 Triton X-100, pH 7.8, 1 mM DTT), bailithe, agus glanta trí lártheifneoiriú. Rinneadh 30 μL de lysate a chomhcheangal le maolán measúnachta luciferase 140 μL (25 mly glycylglycine, 15 mM MgSO₄, 4 mM EGTA, 1 mM DTT, 1 mM ATP, 1 fosfáit photaisiam mM, 1 mM coenzyme A, pH 7.8). Tomhaiseadh gníomhaíocht luminescence ag baint úsáide as léitheoir fluaraiseachta FLx-800 microplate tar éis instealladh uathoibrithe de 40 μL 1 mc luciferin an tobar. Rinneadh gníomhaíocht Luciferase a normalú go dtí an méid iomlán próitéine mar a chinntigh measúnacht próitéine BioRad é.

Measúnacht ar shoghluaisteacht shoghluaiste leictreafóirigh

Eastóscanna núicléacha ó slisní déthaobhacha striatum ó lucha dé-chineálacha 11A (nuair a choinnítear iad ar doxycycline nó as do sheachtain 2 nó 8) (McClung agus Nestler, 2003(a) de réir Huang agus Walters (1996). ³²Ullmhaíodh tóireadóirí oligonucleotide déshnáithe P-lipéadaithe ag baint úsáide as prótacal chóras Assay Assay Promega Gelting (#E3300) agus íonaíodh tóireadóirí ag baint úsáide as Colúin Spin Thapa Roche. Ba as Promega (#E1A agus E328B, faoi seach) na comhleanúnacha comhchoiteanna CRE agus AP-320, agus Cck Ba iad seichimh CRE (ciall Cck-CRE: CTAGCGAGCTCTGGACTGCGTCAGCACTGGGTGCA; antisense Cck-CRE: CCCAGTGCTGACGCAGAGCCCCGGCTAGCTTT).

Rinneadh frithghníomhartha ceangaileacha agus leictreafóiréis le modhnuithe ar nós imeachta chóras Measúnachta Shift Promega (#E3300). Cuireadh 50,000 CPM de thóireadóir lipéadaithe le sliocht núicléach striatal 10 μg. Cuireadh DNA iomaitheora fhuar nó antasubstaintí isteach sular tugadh isteach na tóireadóirí radaolalaithe. Maidir le turgnaimh forshift, úsáideadh 2 odyg de antasubstaint CREB (Biteicneolaíocht Upstate # 06-083). Rinneadh leictrea-leictriú ar fhrithghníomhartha ar ghlóthacha polyacrylamide 4, triomaithe, agus nochta do scannán (ag baint úsáide as scáileáin threisithe le haghaidh 1 uair go 2 lá).

Imdhíonadh

I gcás cealla PC12, nitear plátaí 35 mm de chealla aistrithe i seile maolánaithe fosfáite Dulbecco fuar oighir agus ullmhaíodh lisáití i maolán lysis RIPA fuar oighir (50 mM Tris pH 7.4, 5 mM NaCl, 5 mM EDTA, 1% deoxycholate, 1 % Triton X-100, sulfáit dodecyl sóidiam 0.1%) ina bhfuil coscairí protease. Tar éis sonication, imréitigh, agus measúnacht próitéine Bradford, rinneadh lysates a dhínádúrú go hiomlán agus rinneadh leictreafóiriú ar 50 μg de gach sampla ar glóthacha polyacrylamide 10% SDS. Aistríodh próitéiní go dtí membrane PVDF, cuireadh bac orthu ar feadh 1 uair i mbainne tirim neamh-saill 3% i saline maolánaithe Tris ina raibh 0.1% Tween-20 (bainne TBS-T), agus promhadh thar oíche ag 4 ° C le antasubstaintí bunscoile (CREB- Biteicneolaíocht Upstate # 06-083, a úsáidtear ag 1: 1,000; GAPDH- Sigma # G8795, a úsáidtear ag 1: 80,000) arna chaolú i mbainne TBS-T. Tar éis níocháin iolracha i TBS-T, rinneadh blotáil ar uair an chloig ag teocht an tseomra ag baint úsáide as antasubstaintí tánaisteacha alcaileach fosfatáis-chomhchuingithe (Sigma) caolaithe 1: 5,000 i mbainne TBS-T. Tar éis washes iolrach i saline maolánaithe Tris, rinneadh an t-imoibriú datha de réir threoracha BioRad (# 170-6432). Triomaíodh méadair thar oíche, rinneadh scanadh orthu ar scanóir leaba cothrom agus rinneadh dénsitiméadracht trí úsáid a bhaint as ImageJ (féach thíos).

Maidir le sleachta striatal, rinneadh measúnachtaí Western blot mar a foilsíodh roimhe seo (Hope et al., 1994). Baineadh fíochán as lucha dí-éalaithe, a cuireadh ar oighear agus a cuireadh i gceangal ar mhaitrís inchinn ag tiús 1 mm. Tógadh puinseanna fíocháin ansin agus reoite iad ag -80 ° C go dtí gur úsáideadh iad. Cuireadh fíocháin ar oighir i maolán modhnaithe glantach modhnaithe ina raibh coscairí phosphatase agus protease (Roche, Sigma). Tar éis dó a bheith cráite, rinneadh dínádúrú ar shamplaí i bhfiuchphointe uisce agus rinneadh iad a lártheifneoiriú ag 15,000xg ar feadh X nóiméad. bailíodh agus próiseáladh supernatant ina dhiaidh sin; rinneadh méideanna tiúchana próitéine a chainníochtú ansin le measúnacht Bradford (Bio-Rad). Reáchtáladh samplaí ar fhoirmiú aicrilídíd / bisacrylamide 15, aistríodh go scannán PVDF iad, ba bhac iad i mbainne 10% agus rinneadh iad a ghoradh le príomh-antasubstaintí (Frith-CREB, Upstate, Lake Placid, NY). Rinneadh na blotaí a shamhlú ina dhiaidh sin ag baint úsáide as córas chemiluminescence (Pierce). Rinneadh na samplaí uile a normalú go GAPDH (Fitzgerald, Concord, MA). Reáchtáladh cuair chaighdeánacha chun a chinntiú go bhfuil muid i raon líneach an mheasúnaithe.

Anailís densitiméadrachta

Maidir le himdhíontaí PC12, rinneadh anailís densitometry ag úsáid ImageJ le calabrú an tslat slaite. Baineadh an meánchomhartha cúlra as gach tomhas agus ríomhadh cóimheas CREB go comhartha GAPDH do gach sampla. Le haghaidh imdhíonachta striatal agus anailís EMSA, baineadh úsáid as Scion Image 1.62c le dealú cúlra.

Frith-imdhíonadh Chromatin

Rinneadh measúnachtaí CIP de réir na modhanna Tsankova et al. (2004) agus Kumar et al. (2005). Go hachomair, rinneadh samplaí déthaobhacha striatal ó lucha 11A a coinníodh ar doxycycline nó lasmuigh díobh a nascadh le formaildéad 1% agus múchadh croslin le glicín (tiúchan deiridh 0.125 M). Tháinig na samplaí seo ó shlisní iomlána na hinchinne a tógadh ar leibhéal na núicléas accumbens agus an cortex bainte. Caitheadh crómatin go dtí blúirí 0.2 go 1 kb trí sonication, glanta le coirníní Próitéin G (Thermo Scientific # 22852), agus reoitear samplaí ionchuir ag -80 ° C. Úsáideadh idir 60 agus 100 μg de chromatin le haghaidh gach deascadh. Baineadh úsáid as 5-10 μg de gach antashubstaint phríomha (CREB: Biteicneolaíocht Upstate # 06-863, ΔFosB: Biteicneolaíocht Santa Cruz # SC-48x, aicéitilithe H3: Biteicneolaíocht Upstate # 06-599, H3 meitileáite (LYS9): Teicneolaíocht Comharthaíochta Cealla, cFos: Biteicneolaíocht Santa Cruz # SC-7202x). Rinneadh coimpléisc antashubstaintí-crómatin a imdhíon-luacháil le coirníní Próitéin G móide de réir threoracha an mhonaróra (Thermo Scientific # 22852). Tar éis trasnascadh droim ar ais na n-ionchur agus na samplaí réamhtheáite, cuireadh PCR cainníochtúil (qPCR) ar gach sampla. Tá bailíochtú fairsing déanta ar úsáid na n-antasubstaintí seo go léir le haghaidh ChIP (Tsankova et al., 2004; Kumar et al., 2005; Renthal et al., 2009).

Socraíodh leibhéil na gceangal próitéine ag gach tionscnóir géine spéise trí mhéid an DNA ghaolmhar a thomhas trí qPCR (Priosma Feidhmchláir (ABI) Prism 7700, Foster City, CA). Rinneadh ionchur nó DNA iomlán (nonimmunoprecipitated) agus DNA immunoprecipitated a mhéadú trí chóip i láthair SYBR Green (Fheidhmeach Bithchórais, CA). Fuarthas luachanna CT ó gach sampla trí bhogearraí Sequence Detector 1.1 a úsáid. Rinneadh an cainníochtú coibhneasta ar DNA teimpléid trí úsáid a bhaint as an modh ΔΔCt (Tsankova et al., 2004). Primers a úsáideadh: BDNF tionscnóir 4: CTTCTGTGTGCGTGAATTTGCT; AGTCCACGAGAGGGCTCCA tionscnóir CDK5: GCTGAAGCTGTCAGGAGGTC; GTGCCCCGCTCTTGTTATTA CTC tionscnóir: CTTGGGCTAGCCTCATTCACTG; TTAAATAGCTCCTCCCGGTTCG Tionscnóir Prodynorphin: GGCTTCCTTGTGCTTCAGAC; GCGCTGTTTGTCACTTTCAA.

Anailís staitistiúil

Cuirtear na sonraí go léir i láthair mar acmhainn ± earráid chaighdeánach an mheáin. Rinneadh an difríocht staitistiúil a chinneadh ag dhá thástáil t eireaball an Mhic Léinn (p <0.05). Nuair a rinneadh ilchomórtais, rinneadh p-luachanna a choigeartú trí cheartú Bonferroni a úsáid.

Téigh go dtí:

Admhálacha

Ba mhaith linn buíochas a ghabháil le Will Renthal agus Arvind Kumar as plé cabhrach. Ba mhaith linn buíochas a ghabháil freisin le NIDA as na turgnaimh seo a mhaoiniú.

Téigh go dtí:

Nótaí nótaí

Séanadh an Fhoilsitheora: Is comhad PDF é seo de lámhscríbhinn aonaidithe a glacadh le foilsiú. Mar sheirbhís dár gcustaiméirí táimid ag soláthar an leagan luath seo den lámhscríbhinn. Déanfar an lámhscríbhinn a chóipeáil, a chineáiliú, agus athbhreithniú a dhéanamh ar an gcruthúnas mar thoradh air sin sula bhfoilseofar é ina fhoirm cite deiridh. Tabhair faoi deara gur féidir earráidí a phróiseáil le linn an phróisis táirgthe a d'fhéadfadh tionchar a bheith acu ar an ábhar, agus go mbaineann gach séanadh dlíthiúil a bhaineann leis an iris.

Téarmaí aicmithe:

Roinn: #1 Bitheolaíocht Cheallach agus Mhóilíneach na gcóras néarógach

Téigh go dtí:

tagairtí

Andersson M, Konradi C, Cenci MA. Tá gá le freagra cAMP próitéin ceangailteach eilimint le haghaidh léiriú géine dopamine-spleách san slán, ach ní i ndroimiam dopamine-dínite. J Neurosci. 2001; 21 – 9930. [PubMed]
Barrot M, Olivier JD, LI Perrotti, DiLeone RJ, Berton O, Eisch AJ, Impey S, Storm DR, Neve RL, Ceann JC, Zachariou V, Nestler EJ. Déanann gníomhaíocht CREB sa bhlaosc núicléas accumbens giaráil ar fhreagraí iompraíochta ar spreagthaí mothúchánacha. Proc Natl Acad Sci US A. 2002; 99: 11435 – 40. [Airteagal saor in aisce PMC] [PubMed]
Beinfeld MC, Connolly KJ, Pierce RC. Méadaíonn cóireáil chóicín cholecystokinin (CCK) eisléire (CCK) sa bhlaosc núicléas accumbens de fhrancaigh dhúiseacht, atá ag gluaiseacht go saor, éifeacht a fheabhsaítear i bhfrancaigh atá íograithe go iompraíochta go cóicín. J Neurochem. 2002; 81 – 1021. [PubMed]
Bernard C, Sutter A, Vinson C, Ratineau C, Chayvialle J, Cordier-Bussat M. Spreagann Peptones trascríobh géin cholecystokinin stéigeach trí fhachtóirí ceangailteach eilimint freagartha monophosphate cioglach adenosine. Inchríneolaíocht. 2001; 142 – 721. [PubMed]
Bibb JA, Chen J, Taylor JR, Svenningsson P, Nishi A, Snyder GL, Yan Z, Sagawa ZK, Ouimet CC, Nairn AC, Nestler EJ, Greengard P. Rialaíonn an próitéin neuronal Cdk5 éifeachtaí nochta ainsealaí ar chóicín. Dúlra. 2001; 410 – 376. [PubMed]
Cha-Molstad H, Keller DM, Yochum GS, Impey S, Goodman RH. Ceangail a bhaineann go sonrach le cineál cealla an fhachtóra trascríobh CREB leis an eilimint freagartha cAMP. Proc Natl Acad Sci US A. 2004; 101: 13572 – 7. [Airteagal saor in aisce PMC] [PubMed]
Chen J, Nye HE, Kelz MB, Hiroi N, Nakabeppu Y, Hope BT, Nestler EJ. Rialáil deilt FosB agus próitéiní cosúil le FosB trí urghabháil leictreacólaigh agus cóireálacha cóicín. Mol Pharmacol. 1995; 48 – 880. [PubMed]
Chen J, Kelz MB, Zeng G, Sakai N, Steffen C, Corpoideachas Shockett, Picciotto MR, Duman RS, Nestler EJ. Ainmhithe transgenic le léiriú géine inbhraite, spriocdhírithe san inchinn. Mol Pharmacol. 1998; 54 – 495. [PubMed]
Chen J, Zhang Y, Kelz MB, Steffen C, Ang ES, Zeng L, Nestler EJ. Ionduchtú kinase spleách ar chiclin sa hippocampus trí urghabhálacha ainsealacha electroconvulsive: ról ΔFosB. J Neurosci. 5; 2000 – 20. [PubMed]
Chinenov Y, Kerppola TK. Dlúthchaidreamh le go leor cineálacha: Idirghníomhaíochtaí Fos-Jun a dhéanann idirghabháil ar shainiúlacht rialála trascríobh. Oncogene. 2001; 20 – 2438. [PubMed]
Cole RL, Konradi C, Douglass J, Hyman SE. Oiriúnú neuronal ar amfataimín agus dopamine: meicníochtaí móilíneacha maidir le rialachán géine prodynorphin i striatum francach. Neuron. 1995; 14 – 813. [PubMed]
Deavall DG, Raychowdhury R, Dockray GJ, Dimaline R. Rialú trascríobh géine CCK ag PACAP i gcealla STC-1. Am J Physiol Gastrointest ae Fisil. 2000; 279: G605 – 12. [PubMed]
Ding XZ, Mocchetti I. Rialú dopaminergic ar ábhar mRNA cholecystokinin i striatum francach. Brain Res Mol Brain Res. 1992; 12 – 77. [PubMed]
Forrest S, teaghlach C. Id C. McNamara fachtóirí trascríobh agus foirmiú loit soithíoch. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2004; 24 – 2014. [PubMed]
Gevrey JC, Cordier-Bussat M, Némoz-Gaillard E, Chayvialle JA, Abello J. Comhcheanglas na kinases próitéine AMP-agus cailciam-spleách ar géine le haghaidh gníomhachtú trascríobh géine cholecystokinin ag hidrealú próitéine. J Biol Chem. 2002; 277 – 22407. [PubMed]
Green TA, Alibhai IN, Unterberg S, Neve RL, Gose S, CA Tamminga, Nestler EJ. Ionduchtú tosca trascríobh gníomhachtaithe (ATF) ATF2, ATF3, agus ATF4 sa núicléas accumbens agus a rialáil ar iompar mothúchánach. J Neurosci. 2008; 28 – 2025. [PubMed]
Hamilton ME, Redondo JL, Freeman AS. Ró-shreabhadh dopamine agus cholecystokinin i núicléis accumbens francach mar fhreagairt ar ghéar-riaradh drugaí. Synapse. 2000; 38 – 238. [PubMed]
Hansen TV, Rehfeld JF, Nielsen FC. Próitéin kinase-ghníomhachtaithe ag Mitogen agus próitéin kinase Spreagann bealaí comharthaíochta trascríobh cholecystokinin trí phróitéin eiliminteach freagartha adenosine 3 ′, 5’-monafosfáit a ghníomhachtú. Mol Endocrinol. 1999; 13: 466–75. [PubMed]
Hansen TV, Nielsen FC. Rialachán maidir le trascríobh géine cholecystokinin neuronal. Scand J Clin Lab Invest Suppl. 2001; 234 – 61. [PubMed]
Hansen TV. Trascríobh géine chícystokinin: eilimintí tionscnóra, tosca trascríobh agus conairí comharthaíochta. Peiptídí. 2001; 22 – 1201. [PubMed]
Hansen TV, Rehfeld JF, Nielsen FC. Déanann KCl agus forskolin uas-rialáil ar léiriú géine cholecystokinin trí ghníomhachtú comhordaithe an CREB agus an comhghníomhaire CBP. J Neurochem. 2004; 89 – 15. [PubMed]
Haun RS, Dixon JE. Tá seicheamh atá comhionann leis an ngné -296 den ghéin c-chíoch daonna mar chuid de mhéadaitheoir trascríobh atá riachtanach chun an géine cholecystokinin francach a léiriú. J Biol Chem. 1990; 265 – 15455. [PubMed]
Hiroi N, Marek GJ, Brown JR, Ye H, Saudou F, VA Váya, Duman RS, Greenberg ME, Nestler EJ. Ról riachtanach na géine altrama i ngníomhartha móilíneacha, ceallacha, agus iompraíochta na n-urghabhálacha ainsealacha leictreoinvulsive. J Neurosci 1998. 1998; 18 – 6952. [PubMed]
Tigh Fiach, Rehfeld JF, Skirboll L, Ivemark B, Goldstein M, Markey K. Fianaise ar chómhaireachtála dopamine agus CCK i néaróin meso-limbic. Dúlra. 1980; 285 – 476. [PubMed]
Hope BT, Kelz MB, Duman RS, Nestler EJ. Mar thoradh ar chóireáil cóireáil ainsealach leictrea-ocsaileach (ECS) cuirtear coimpléasc fadtréimhseach AP-1 in iúl san inchinn le comhdhéanamh agus tréithe athraithe. J Neurosci. 1994; 14 – 4318. [PubMed]
Dóchas BT, Nye HE, Kelz MB, Self DW, Iadarola MJ, Nakabeppu Y, Duman RS, Nestler EJ. Ionduchtú coimpléasc fadtréimhseach AP-1 ina bhfuil próitéiní comhchosúla athraithe san inchinn trí chóicín ainsealach agus cóireálacha ainsealacha eile. Neuron. 1994; 13 – 1235. [PubMed]
Huang KX, Walters JR. Rialú dopaminergic ar fhachtóir trascríobh AP-1 DNA atá ceangailteach i striatum francach. Néareolaíocht. 1996; 75 – 757. [PubMed]
Impey S, McCorkle SR, Cha-Molstad H, Dwyer JM, Yochum GS, Boss JM, McWeeney S, Dunn JJ, Mandel G, Goodman RH. Sainmhíniú a dhéanamh ar an regulon CREB; Cill. 2004; 119 – 1041. [PubMed]
Johannessen M, Delghandi MP, Moens U. Cad é a iompraíonn CREB? Comhartha Cell. 2004; 16 – 1211. [PubMed]
Josselyn SA, Vaccarino FJ. Éifeachtaí freasúracha freasaitheoirí CCK (A) agus CCK (B) ar ghníomhaíocht choinníollaithe a fhorbairt i bhfrancaigh. Behav Pharmacol. 1996; 7 – 505. [PubMed]
Josselyn SA, De Cristofaro A, Vaccarino FJ. Fianaise do rannpháirtíocht gabhdóra CCK (A) i bhfáil gníomhaíochta coinníollaithe arna tháirgeadh ag cóicín i bhfrancaigh. Res Brain. 1997; 763 – 93. [PubMed]
Kelz MB, Chen J, Carlezon WA, Jr, Whisler K, Gilden L, Beckmann AM, Steffen C, Zhang YJ, Marotti L, Féin DW, Tkatch T, Baranauskas G, DJ Surmeier, Neve RL, RS Duman, Picciotto MR , Nestler EJ. Léiriú ar an bhfachtóir trascríobh deltaFosB san inchinn a rialaíonn íogaireacht cóicín. Dúlra. 1999; 401 – 272. [PubMed]
Kumar A, Choi KH, Renthal W, Tsankova NM, Theobald DE, Truong HT, Russo SJ, Laplant Q, Sasaki TS, Whistler KN, Neve RL, Self DW, Nestler EJ. Is príomh-mheicníocht é athmhúnlú crómatin atá mar bhunús le plasticity a spreagann cóicín i striatum. Neuron. 2005; 48 – 303. [PubMed]
Mattson BJ, Bossert JM, Simmons DE, Nozaki N, Nagarkar D, Kreuter JD, Hope BT. Cumasaítear fosfathúchán CREB a spreagann cóicín i núicléis accumbens na bhfrancaigh íograithe le cóicín trí ghníomhachtú feabhsaithe kinase a bhaineann le comhartha eachtardhíonach, ach nach bhfuil kinase próitéine A. J Neurochem. 2005; 95 – 1481. [PubMed]
McClung CA, Nestler EJ. Rialáil léiriú géinteiripe agus cóicín ag CREB agus DeltaFosB. Nat Neurosci. 2003; 6 – 1208. [PubMed]
McClung CA, Ulery PG, LI Perrotti, Zachariou V, Berton O, Nestler EJ. DeltaFosB: athrú móilíneach d’oiriúnú fadtéarmach san inchinn. Brain Res Mol Brain Res. 2004; 132 – 146. [PubMed]
Nestler EJ, Kelz MB, Chen JS. BFosB: Idirghabhálaí móilíneach maidir le plasticity fadtéarmach nóral agus iompraíochta. Res Brain. 1999; 835 – 10. [PubMed]
Nestler EJ. An bhfuil conair mhóilíneach choiteann ann don andúil? Nat Neurosci. 2005; 8 – 1445. [PubMed]
Nestler EJ. Meicníochtaí trasnaitheacha andúile: ról DeltaFosB. Lond Tras-Socraigh Philos B Biol Sci. 2008; 363 – 3245. [Airteagal saor in aisce PMC] [PubMed]
Perrotti LI, Weaver RR, Robison B, Renthal W, Maze I, Yazdani S, Elmore RG, DJ Knapp, Selley DE, Martin BR, Sim-Selley L, Bachtell RK, Self DW, Nestler EJ. Patrúin ar leith de ionduchtú DeltaFosB san inchinn ag drugaí mí-úsáide. Synapse. 2008; 62 – 358. [Airteagal saor in aisce PMC] [PubMed]
Rando OJ, Chang HY. Tuairimí ar fud an géanóim maidir le struchtúr crómatin. Annu Rev Biochem. 2009; 78 – 245. [Airteagal saor in aisce PMC] [PubMed]
Renthal W, Carle TL, Maze I, Covington HE, 3rd, Truong HT, Alibhai I, Kumar A, Montgomery RL, Olson EN, Nestler EJ. Déanann Delta FosB idirghabháil desensitization epigenetic an c-fos tar éis nochtadh amphetamine ainsealach. J Neurosci. 2008; 28 – 7344. [Airteagal saor in aisce PMC] [PubMed]
Renthal W, Kumar A, Xiao G, Wilkinson M, Covington HE, 3rd, Maze I, Sikder D, Robison AJ, LaPlant Q, Dietz DM, Russo SJ, Vialou V, Chakravarty S, Kodadek TJ, Stack A, Kabbaj M, Nestler EJ. Nochtann anailís ar fud na géineó ar rialachán crómatin ag cóicín ról do sirtuins. Neuron. 2009; 62 – 335. [Airteagal saor in aisce PMC] [PubMed]
Rotzinger S, Bush DE, Vaccarino FJ. Modhnú colecystokinin d'fheidhm dopamine mesolimbic: iompar spreagtha a rialú. Pharmacol Toxicol. 2002; 91 – 404. [PubMed]
Rourke IJ, TV Hansen, Nerlov C, Rehfeld JF, Nielsen FC. Comhoibríocht dhiúltach idir eilimintí sofhreagracha E-bhosca agus cAMP / TPA sa tionscnóir géine cholecystokinin. FEBS Lett. 1999; 448 – 15. [PubMed]
TZ Shaw-Lutchman, Barrot M, T Wallace, Gilden L, Zachariou V, Impey S, Duman RS, Storm D, Nestler EJ. Mapáil réigiúnach agus mapáil cheallach de thras-idirghabháil CRE le linn aistarraingt moirfín naltrexone-deasctha. J Neurosci. 2002; 22 – 3663. [PubMed]
Shaw-Lutchman TZ, Impey S, Storm D, Nestler EJ. Rialáil trascríobh CRE-idirghabhála in inchinn na luiche trí amfataimín. Synapse. 2003; 48 – 10. [PubMed]
Sheng M, McFadden G, Greenberg ME. Tarlaíonn dí-ísliú scannán agus cailciam trascríobh c-fos trí phosphorylation an fhachtóra trascríobh CREB. Neuron. 1990; 4 – 571. [PubMed]
Tsankova NM, Kumar A, Nestler EJ. Modhnuithe staire ag réigiúin tionscnóra géine i hippocampus francach tar éis taomanna géara agus ainsealacha leictrimhevulsive. J Neurosci. 2004; 24 – 5603. [PubMed]
Ulery PG, Nestler EJ. Gníomhaíocht trascríofa DeltaFosB a rialáil le Ser27 phosphorylation. Eur J Neurosci. 2007; 25 – 224. [PubMed]
Vaccarino FJ. Cuireann núicléas idirghníomhaíochtaí dopamine-CCK i gcuntas i luaíocht síceaspaitheach agus in iompar gaolmhar. Neurosci Biobehav Rev. 1992; 18: 207 – 14. [PubMed]
Zachariou V, Bolanos CA, Selley RO, Theobald D, Cassidy MP, Kelz MB, Shaw-Lutchmann T, Berton O, Sim-Selley LJ, DiLeone RJ, Kumar A, Nestler EJ. BFosB: Ról riachtanach do BFosB sa núicléas accumbens i ngníomh moirfín. Cineál Neurosci. 2006; 9 – 205. [PubMed]